Реакция на пероксидазу положительная. Сущность постановки реакции на пероксидазу в рассоле и солонине. Повышение внутричерепного давления
Принцип реакции на пероксидазу по методу Грахама-Кнолля . Клеточные пероксидазы разлагают перекись водорода; высвобождаемый при этом кислород окисляет бензидин. Последний представляется в виде желто-коричневого осадка на уровне пероксидазополо-жительной зернистости.
Реагенты для реакции на пероксидазу
:
1) Закрепитель: винный спирт 96° (9 частей) +40% формалин (1 часть).
2) Спиртный раствор бензидина с перекисью водорода, содержащий: несколько кристаллов бензидина, 10 мл спирта 40° и 0,02 мл 3% перекиси водорода.
После растворения бензидина в спирте профильтровать раствор и добавить перекись водорода с помощью градуированной до 0,02 мл пипетки для гемоглобина.
3) 10% разбавленный раствор Гимза.
Техника реакции на пероксидаху
Закрепление мазков
в смеси спирт-формалин, 30 сек.; промывание дистилированной водой; окраска раствором бензидина и перекиси водорода - 5 мин; промывание дистилированной водой; контрастная окраска разведенным раствором Гимза - 25 мин.; в заключении промывание проточной водой.
Рекомендуется
работать лишь со свежеприготовленными мазками.
Результаты реакции на пероксидаху . Желто-коричневая зернистость говорит о наличии активности клеточных пероксидаз. Реакция положительная в клетках нормального гранулоцитного ряда, начиная с промиелоцита. Миелобласт содержит пероксидазы на более развитой стадии, приближающейся к промиелоциту.
Лимфоидные клетки отрицательные . Реакция моноцитов отрицательная или слабо положительная.
Практическое значение реакции на пероксидаху . Дифференциация цитологического вида : в лимфобластах отрицательная, в то время как в миелобластах активность ферментов разной интенсивности. Тела Ауера перокси дазоположительные. Значимость метода ограничена: положительная реакция составляет ценное сведение, в то время как отрицательная - не убедительна; результат следует сопоставить с другими цитохимическими исследованиями.
При отдельных тяжелых инфекциях, хронических миелопролиферациях , равно как и в процессе некоторых миелодиспластических сдвигов (предлейкемическое состояние) в зрелых нейтрофильных гранулоцитах отмечаются частично или полностью пероксидазоотрицательные зоны. Отмеченные изменения наряду с подобным поведением пероксидазы представляют ценность для раннего диагностирования предлейкемического состояния.
В пробирку наливают 2 мл фильтрата, 5 капель 0,2%-ного спиртового раствора бензидина и 2 капли 1%-ного раствора перекиси водорода.
Вытяжка из свежего мяса здоровых животных приобретает зелено-синий цвет, переходящий через несколько минут в бурый. В вытяжках из мяса больных, переутомленных и убитых в агонии животных цвет не изменяется, но иногда зелено-синий цвет появляется, с большой задержкой и быстро переходит в бурый.
Реакцию на пероксидазу можно ставить и без приготовления вытяжки: на свежий разрез мяса наносят 2 капли 1%-ного р-ра перекиси водорода и 5 капель 0,2%-ного р-ра бензидина. Появление сине-зелёного пятна с последующим переходом в бурое расценивают как положительную реакцию, отсутствие цветного пятна считают за отрицательную реакцию.
ФОРМОЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ
Мясо животных, убитых после длительной агонии или тяжёлого патологического состояния, можно распознать по показателям формольной реакции..
Пробу мяса освобождают от жира и соединительной ткани. Навеску в 10 г помещают в ступку, тщательно измельчают ножницами, приливают 10 мл физ. р-ра и 10 капель 0,1 н едкого натрия. Мясо растирают пестиком. Полученную кашицу переносят стеклянной палочкой в колбу и нагревают до кипения для осаждения белков. Колбу охлаждают водопроводной водой, после чего содержимое её нейтрализуют добавлением 5 капель 5%-ного р-ра щавелевой кислоты и пропускают в пробирку через фильтровальную бумагу. Мутную вытяжку фильтруют вторично или центрифугируют.
Ход реакции. В пробирку наливают 2 мл вытяжки и добавляют 1 мл нейтрального формалина.
Вытяжка из мяса животного, убитого в агонии, тяжело больного или разделанного после падежа, превращается в плотный сгусток; в вытяжке из мяса больного животного выпадают хлопья, вытяжка из мяса здорового животного остается жидкой и прозрачной, иногда появляется слабое помутнение.
Формалин предварительно нейтрализуют 0,1 н едким натрием по индикатору, состоящему из равной смеси 0,2%-ных водных растворов нейтральрота и метиленового голубого до перехода цвета из фиолетового в зеленый.
Санитарная оценка мяса
Проводится по результатам исследования и заносится в рабочую тетрадь.
При выявлении признаков, свидетельствующих о том, что животное убито во время агонии (гипостазы, плохое обескровливание, отсутствие реакции на месте зареза), туши и органы подлежат технической утилизации.
В мясе от здорового животного отсутствуют патогенные микроорганизмы, рН в пределах 5,7-6,2, реакция на пероксидазу положительная.
Подозрительным в происхождении от больного или вынужденно убитого животного считается мясо при рН 6,3 и выше и отрицательной реакции на пероксидазу.
ВИДОВАЯ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ МЯСА
Попытка выдать мясо одного вида животного за мясо другого вида животного, как правило, более ценного называется видовой фальсификацией и может иметь место на рынках в торговой сети и учреждениях общественного питания. Поэтому ветеринарный врач обязан уметь определять видовую принадлежность мяса. Обычно при видовой фальсификации используют туши животных, схожих по размеру, форме и другим показателям. Так конину обычно пытаются выдать за говядину и наоборот (в некоторых странах где конина ценится выше), туши крупных собак выдают за бараньи, кошек пытаются выдать за кроликов и нутрий. Для определения видовой принадлежности мяса используют объективные и субъективные методы.
Субъективные методы определения видовой принадлежности мяса. К субъективным методам относят такие как конфигурация, морфологические и органолептические показатели мяса и др.
Органолептические показатели
Определение по цвету мяса
Цвет мяса и структура мышечной ткани зависят от возраста, пола, упитанности животных и других причин.
Мясо крупного рогатого скота может быть от светло красного до темно красного, на поперечном разрезе крупнозернистое.
Мясо лошадей темно красного
После варки мясо свиней и телят приобретает белый или светло-серый цвет, мясо крупного рогатого скота, овец и лошадей - темно-серый цвет.
-острый миелолейкоз
+недифференцируемый лейкоз
-острый лимфолейкоз
-хронический миелолейкоз
/\173. В патогенезе нарушения коагуляционного механизма гемостаза имеет значение
-уменьшение количества тромбоцитов
-нарушение функции тромбоцитов
-вазопатия
+дефицит фактора VIII
-дефект тромбоцитарных рецепторов IIb-IIIa
/\174. Для тромбоцитопении характерно
-дефицит плазменных факторов свертывания
-удлинение времени свертывания крови
-гематомный тип кровоточивости
+петехиальный тип кровоточивости
-время кровотечения в норме
/\175. Адгезия и агрегация тромбоцитов снижается при
-избытке кальция и магния
-дефиците VIII ф свертывания крови
-повышении в крови концентрации АДФ
-избытке тромбоксана А2
+дефиците фактора Виллебранда
/\176. Наследственный дефицит прокоагулянтов имеет место при
+гемофилиях
-дефиците витамина К
-образовании антител к прокоагулянтам
-нарушении карбоксилирования факторов протромбинового комплекса
/\177. Для гемофилии А характерно
-аутосомно-рецессивный тип наследования
-дефицит IX ф свертывания крови
-петехии, экхимозы
+гемартрозы
-удлинение времени кровотечения
/\178. Для болезни Виллебранда характерно
-уменьшение длительности капиллярного кровотечения
-укорочение времени свертывания крови
-повышенная агрегационная способность тромбоцитов
-нарушение синтеза фактора VIII
+снижение прокоагулянтной активности фактора VIII
/\179.В патогенезе гиперкоагуляции при ДВС - синдроме имеет значение
+активацией "внешнего" и "внутреннего" механизмов свертывания крови
-гипофибриногенемия
-активацией фибринолитической системы крови
-избыток антитромбина III
-тромбоцитопатия
/\180. В патогенезе гипокоагуляции при ДВС - синдроме имеет значение
+коагулопатия и тромбоцитопения потребления
-избыток прокоагулянтов
-поступление в кровь большого количества тканевого тромбопластина
-активация ингибиторов фибринолиза
-дефицит антитромбина III
/\181. Наиболее выраженная стадия ДВС-синдрома у новорожденных
+гипокоагуляции
-гиперкоагуляции
-переходная
-восстановления
-терминальная
/\181. К клиническим проявлениям геморрагической болезни новорожденных относятся
+мелена, кровотечение из пупочной ранки
-желтушность кожи и слизистых
-ядерная желтуха
-гипербилирубинемия
-отеки
/\182. При гемофилии А нарушается
+Образование активной протромбиназы
-Переход протромбина в тромбин
-Переход фибриногена в фибрин
-Вторая фаза свертывания крови
-Третья фаза свертывания крови
/\183. Гиперкоагуляция крови наблюдается при
-Избытке протеина С
-Избытке протеина S
-Избытке антитромбина-III
+Резистентности фактора V к протеину С
-афибриногенемии
/\184. Этиологические факторы экзогенного происхождения, вызывающие поражение нервной системы
+алкогольная интоксикация
-повреждение нейронов при печеночной коме
-ишемия мозга
-гипогликемия
-повреждение нейронов при уремии
/\185. По нервным проводникам в нервную систему поступают
-стрептококковый экзотоксин
-менингококки
-пневмококки
-кишечная палочка
+вирус бешенства
/\186. Причина спонгиозной трансмиссивной энцефалопатии
-Цитомегаловирусы
-Энтеровирусы
-Вирусы бешенства
-Вирус герпеса
+Прионы
/\187. Вирусы, которые образуют внутриклеточные включения в нейронах
-Цитомегаловирусы
-Энтеровирусы
+Вирусы бешенства
-Вирус герпеса
-Вирус полимиелита
/\188. Дефицит торможения - это
+выход нижележащих отделов ЦНС из-под контроля вышележащих отделов
-снижение нервных влияний на постсинаптические структуры
/\189. Денервационный синдром - это
-нарушение транспорта трофогенов и образование патотрофогенов
-снижение афферентной импульсации в нейрон
-выход нижележащих отделов ЦНС из-под контроля вышележащих отделов
+снижение нервных влияний на постсинаптические структуры
-группа гиперактивных нейронов
/\190. Первичный дефицит торможения развивается вследствие
-чрезмерной стимуляции нервной системы
+нарушения структуры и функции тормозных нейронов
-повышения синтеза возбуждающих медиаторов
/\191. Вторичный дефицит торможения развивается вследствие
+действия деполяризующих агентов возбуждающих аминокислот, приводящих к чрезмерной активности нейронов
-нарушения структуры и функции тормозных нейронов
-нарушения структуры и функции возбуждающих синапсов
-снижения синтеза возбуждающих медиаторов
-избытка нисходящих тормозных влияний при разрушении участков нервной системы
/\192. Последствием синдрома растормаживания может быть
-развитие дистрофических изменений в нейронах и иннервируемых структурах
+образование ГПУВ (генератора патологически усиленного возбуждения)
-развитие синдрома денервации
-развитие атрофии органа
-развитие синдрома деафферентации
/\193. Генератор патологически усиленного возбуждения (ГПУВ) – это
+агрегат гиперактивных взаимодействующих нейронов, продуцирующих неконтролируемый поток импульсов
-совокупность каскадных мембранных и внутриклеточных процессов
-комплекс изменений в синаптических структурах
-нарушение трофики, обусловленное выпадением или изменением нервных влияний
Комплекс изменений, возникающих в постсинаптических нейронах, органах и тканях после выпадения нервных влияний на эти структуры
/\194. Значение образования ГПУВ
-способствует образованию разлитого торможения
+является детерминантой патологической системы и способствует образованию патологической системы
-способствует образованию физиологической системы
-усиливает трофическое влияние нейрона на иннервируемые структуры
-тормозит развитие нейропатологических процессов
/\195. К медленным гиперкинезам относится
-судороги
+атетоз
-тики
-хорея
-тремор
/\196. Неврозы могут привести к развитию
+язвенной болезни двенадцатиперстной кишки
-менингита
-спонгиозной трансмиссивной энцефалопатии
-энцефалита
-болезни Альцгеймера
/\197. Для центральных параличей характерно:
-сохранение произвольных движений
-ослабление сухожильных рефлексов
+усиление сухожильных рефлексов
-отсутствие патологических рефлексов
-понижение тонуса мышц
/\198. Для периферических параличей характерно
-усиление спинальных рефлексов
-появление патологических рефлексов
-гипертрофия мышц
-гипертонус мышц
/\203. К медиаторам боли относится
-физиологические концентрации адреналина
-энкефалины
-эндорфины
+брадикинин
-динорфин
/\204.Ощущение боли формируется в
-ноцицепторах
-нервных стволах
-спинном мозге
-ретикулярной формации
+нейронах таламуса и коры больших полушарий
/\205. Наиболее восприимчивы к боли
+кожа и слизистые
-печень
-головной мозг
-спинной мозг
-миокард
/\206. Фантомная боль – это боль
-в левой руке и левой лопатке при приступе стенокардии
-над ключицей при остром гепатите или раздражении париетальной брюшины
-при заболеваниях головного мозга
+в отсутсвующей части тела, чаще всего после ампутации конечностей
-опоясывающая боль при панкреатите
/\207.В патогенезе фантомной боли имеют важное значение
-повышение чувствительности ноцицепторов
-увеличение проводимости нервных стволов
-повышение возбудимости коры головного мозга
Образование ампутационной невромы и формирование генератора патологически усиленного возбуждения в спинном мозге
-угнетение возбудимости ствола мозга
/\208.К антиноцицептивной системе относится
-брадикинин
+желатинозная субстанция
-ионы Н, К
-гистамин
-субстанция Р
/\209.Снижение болевой чувствительности при растирании кожи и массаже обусловлено
-снижением чувствительности ноцицепторов
-блокадой нервных проводников
-снижением возбудимости нейронов ретикулярной формации
-угнетением возбудимости нейронов таламуса
+активацией желатинозной субстанции спинного мозга
/\211. Ведущим звеном патогенеза диабетической гиперосмоляльной комы является
+гипергликемия
-кетоз
-лактатацидемия
-гипоксия
-гиперазотемия
/\212. Причиной ишемического инсульта может быть
+тромбоз или эмболия сосудов мозга
-разрыв аневризмы сосудов мозга
-дистония сосудов мозга
-артериальная гиперемия мозга
-снижение свертываемости крови
/\213. Причиной геморрагического инсульта может быть
-стенозирующий атеросклероз сосудов мозга
-тромбоз и эмболия сосудов мозга
-ангиоспазм сосудов мозга
-повышение гематокрита
/\214. При ишемическом инсульте в отличие от геморрагического в клинической картине чаще преобладает
-Отек мозга
+Очаговая симптоматика
-Кровь в спинномозговой жидкости
-Сдавление ткани мозга
-Повышение внутричерепного давления
/\215. Мозжечковая атаксия, расстройства памяти на текущие события, нистагм, дизартрия, дисфагия, икота, головокружение характерны для повреждения
+Позвоночной артерии (задняя нижняя мозжечковая артерия)
-Передней мозговой артерии
-Средней мозговой артерии
-Задней мозговой артерий
-Пиальных артерий
/\216. Парез или спастический паралич конечностей (проксимального отдела руки и дистального отдела ноги), потеря чувствительности на противоположной поражению стороне наблюдается при повреждении
-Позвоночной артерии (задняя нижняя мозжечковая артерия)
+Передней мозговой артерии
-Средней мозговой артерии
-Задней мозговой артерии
-Пиальных артерий
/\217. У больного М., 64 лет, диагноз «ишемический инсульт», выявлено: положительный рефлекс «Бабинского» слева, потеря чувствительности на левой стороне тела.
Органолептические методы предусматривают определение: внешнего вида и цвета; состояния мышц на разрезе; консистенции; запаха; прозрачности и аромата бульона.
Каждый отобранный образе и анализируют отдельно.
Аппаратура и материалы
- · Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104--2001 4 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, допускаемая погрешность 20 мг.
- · Скальпель медицинский по ГОСТ 21240--89.
- · Пинцет медицинский по ГОСТ 21241--89.
- · Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025--95 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469--95. Колба коническая Кн-100 по ГОСТ 25336--82.
- · Баня водяная электрическая
- · Ножницы медицинские по ГОСТ 21239--93.
- · Нож.
- · Воронки по ГОСТ 25336--82, тип ВФ
- · Цилиндры мерные по ГОСТ 1770--74. вместимостью 25, 100 см 3 .
- · Стаканы по ГОСТ 25336--82, тип В или Н. вместимостью 50 см-".
- · Стекло часовое.
- · Палочки стеклянные.
- · Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026--76.
- · Марля бытовая по ГОСТ 11109-90.
- · Вода дистиллированная по ГОСТ 6709--72.
Определение внешнего вида и нвста поверхности тушки, покровной и внутренней жировой ткани и брюшной серозной оболочки проводят путем внешнего осмотра.
Определение состояния мышц на разрезе
Бедренные мышцы разрезают поперек мышечных волокон. Для определения атажностн мышц фильгровальную бумагу прикладывают к поверхности мышечного разреза на 2 с.
Дня определения липкости мышц прикасаются пальцем к поверхности мышечного среза. Цвет мышц определяют визуально при дневном рассеянном свете.
Определение консистенции
На поверхности тушки кролика в области бедренных мышц легким образуют ямку и следят за временем ее выравнивания.
Определение запаха
Подготовка к испытанию
Для определения запаха жира берут внутреннюю жировую ткань от каждого образца не менее 20 г. Каждую пробу измельчают ножницами, вытапливают в химических стаканах на водяной бане и охлаждают до температуры 20 1 С.
На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228--2(ГОСТ 20235.0-74 С. 3)
Проведение испытания
Запах внутреннего жира определяют органолептически при помешивании его чистой стеклянной палочкой.
Запах поверхности тушки и брюшной полости определяют органолептически.
Для определения запаха глубинных слоев чистым ножом делают разрез мыши. Особое внимание обращают на запах слоев мышечной ткани, прилегающих к костям.
Определение прозрачности и аромата бульона
Подготовка к анализу
От каждого образца (тушки) вырезают скальпелем куски мышц массой по 25 г из области бедра, лопатки, спины, зареза и дважды измельчают их на мясорубке.
Фарш тщательно перемешивают и берут навеску.
Для приготовления мясного бульона взвешивают 20 г фарша на лабораторных весах, помещают в коническую колбу вместимостью 100 см- и заливают 60 см 3 дистиллированной поды. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Колбу закрывают часовым стеклом и ставят на кипящую водяную баню на 10 мин.
Проведение анализа
Запах мясного бульона определяют в процессе нагревания до 80 "С -- 85 "С в момент появления паров, выходящих из приоткрытой колбы, путем ощущения их аромата. Прозрачность бульона устанавливают визуально путем осмотра 20 см 3 бульона, налитого в мерный цилиндр вместимостью 25 см 3 и диаметром 20 мм.
Органолептический метод
Мясо кролика (домашний) весом 2 кг хорошее, кровоподтеков не наблюдалось, без посторонних запохов, без кровяных сгустков, без пятен от желчи. Запах свойственный данному виду мяса, цвет бело розовый. Бульен получился прозрачный, без характерного запаха из чего следует, что мясо свежее.
Реакция на пероксидазу
Сущность реакции заключается в том, что перекись водорода в присутствии фермента пероксидазы окисляет бензидин, образуя при этом парахинондиимид, который с недоокисленным бензидином дает соединение сине-зеленого цвета, переходящего в бурый (цветная реакция). Активность пероксидазы, как и всякого фермента зависит от рН среды. В пробирку наливают 2 мл фильтрата вытяжки(1:4), добавляют 5 капель0,2%-ного спиртового раствора бензидина, содержимое взбалтывают, после чего добавляют2 капли1%-ного раствора перекиси водорода. Реакцию читают в течение1-2 минут.
Вытяжка сначало преобрела сине-зеленый цвет, потом в течении 1-2 минут переходила в буро-коричневый проведение данного анализа говорит о том что мясо свежее.
Помогите найти фото или картинку где будет показано взаимодействие перекиси водорода с картофелем или мясом. и получил лучший ответ
Ответ от Елена Казакова[гуру]
С помощью опыта выяснить наличие в клубнях картофеля ферментов,
расщепляющих перекись водорода
Оборудование, реактивы. Штатив лабораторный с пробирками, пипетки с метками на 1 мл; кусочки сырого и вареного картофеля (или сырого и вареного мяса) ; пероксид водорода (3%-ый раствор или 0,5%-ый раствор) ; лучинка; спички.
Ход работы. В одну пробирку помещают ломтики сырого картофеля, в другую – вареного (в третью и четвертую пробирки можно положить кусочки сырого и вареного мяса, соответственно) . В каждую пробирку с помощью пипетки приливают 0,5 мл 3%-ного раствора пероксида водорода (Н2О2).
При выделении пузырьков опустить в каждую из этих пробирок тлеющую лучинку.
Наблюдения.
В пробирках с сырым картофелем (или мясом) будет наблюдаться бурное образование пузырьков («вскипание») . Тлеющая лучинка, помещенная в пробирку, вспыхивает.
В пробирках с вареным картофелем и вареным мясом пероксид водорода не расщеплается, пузырьки не выделяются.
Обсуждение результатов. Образование пузырьков в пробирках с сырым картофелем или мясом объясняется присутствием в клетках фермента пероксидазы – у растений (или каталазы – в мышцах) , которые расщепляют перекись водорода до воды и кислорода. Молекулярный кислород выделяется в виде пузырьков. Наличие кислорода можно определить с помощью тлеющей лучинки, которая вспыхивает, если ее внести в пробирку с выделяющимися пузырьками.
В пробирках с вареным картофелем и вареным мясом пероксид водорода не расщепляется, т. к. при варке ферменты (вещества белковой природы) денатурируют – происходит нарушение третичной структуры фермента и утрата его каталитической активности.
Токсичный (ядовитый) пероксид водорода образуется в некоторых растительных и животных клетках в качестве побочного продукта метаболизма (при биологичесом окислении) . Это соединение токсично для клеток и пероксидаза (или каталаза) , содержащиеся в пероксисомах, обеспечивают эффективное его удаление. Под действием ферментов каталазы (мышц, крови) или пероксидазы (картофеля, элодеи) пероксид водорода тотчас расщеплается до молекулярного кислорода и воды, согласно уравнению:
Каталаза (пероксидаза)
2Н2О2 = 2Н2О + О2
Каталаза – один из наиболее быстроработающих ферментов. При 0 градусах С одна молекула каталазы разлагает в 1 с до 40000 молекул пероксида водорода. Одна молекула фермента за 1 минуту расщепляет до 5 миллионов молекул пероксида водорода, защищая клетку от отравления. Локализуется каталаза в микротельцах и пероксисомах. Пероксидаза и каталаза относятся к классу оксидоредуктаз, т. к. реакция расщепления перикиси водорода является окислительно-восстановительной.
Аналогично, если капнуть пероксид водорода на лист элодеи, то будет наблюдаться бурное выделение пузырьков газа – кислорода.
Наиболее сильнодействующая пероксидаза содержится в хрене. Ее специально получают для молекулярно-генетических исследований.
Выводы. В живых клетках содержатся ферменты – вещества белковой природы, ускоряющие ход биохимических реакций за счет снижения энергии активации. В этом опыте можно оп-ределить наличие в сырых продуктах фермента каталазы – в клетках животных (или пероксидазы – в клетках растений) . При термической денатурации происходит необратимая денатурация фермента (разрушение его третичной структуры и утрата каталитической активности) . Утрата каталитической активности каталазы (пероксидазы) после кипячения продуктов подтверждает белковую природу ферментов.