Teşhis yöntemleri. Bulaşıcı hastalıkların tanısında serolojik testler Viral enfeksiyonların tanısında kullanılan serolojik testler
bağışıklık reaksiyonları hasta ve sağlıklı kişilerde teşhis ve immünolojik çalışmalarda kullanılır. Bu amaçla başvurunuz serolojik yöntemler yani kan serumunda ve diğer sıvılarda ve ayrıca vücut dokularında belirlenen antijen-antikor reaksiyonlarını kullanarak antikorları ve antijenleri inceleme yöntemleri.
Kan serumunda tespit hastanın patojenin antijenlerine karşı antikorları, hastalığın teşhisini yapmanızı sağlar. Serolojik çalışmalar ayrıca mikrobiyal antijenleri, çeşitli biyolojik olarak aktif maddeleri, kan gruplarını, doku ve tümör antijenlerini, bağışıklık komplekslerini, hücre reseptörlerini vb. tanımlamak için kullanılır.
Bir mikropu izole ederken hastadan, patojen, immün tanısal serumlar, yani spesifik antikorlar içeren hiperimmünize hayvanların kan serumları kullanılarak antijenik özellikleri incelenerek tanımlanır. Bu sözde serolojik tanımlama mikroorganizmalar.
Mikrobiyoloji ve immünolojide yaygın olarak kullanılır aglütinasyon, çökelme, nötralizasyon reaksiyonları, etiketli antikorlar ve antijenler kullanılarak kompleman içeren reaksiyonlar (radyoimmünolojik, enzim immünoassay, immünofloresan yöntemler). Listelenen reaksiyonlar kayıtlı etki ve evreleme tekniğinde farklılık gösterir, ancak hepsi antijenin antikor ile etkileşiminin reaksiyonuna dayanır ve hem antikorları hem de antijenleri tespit etmek için kullanılır. Bağışıklık reaksiyonları, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile karakterize edilir.
Bir antikorun bir antijen ile etkileşiminin özellikleri laboratuvarlardaki tanı reaksiyonlarının temelidir. Reaksiyon laboratuvar ortamında antijen ve antikor arasındaki spesifik ve spesifik olmayan bir fazdan oluşur. AT belirli aşama antikorun aktif bölgesinin antijenin determinantına hızlı bir spesifik bağlanması vardır. Sonra gelir spesifik olmayan aşama - görünür fiziksel fenomenlerle kendini gösteren daha yavaş, örneğin pul oluşumu (aglütinasyon fenomeni) veya bulanıklık şeklinde çökelti. Bu aşama belirli koşullar (elektrolitler, ortamın optimal pH'ı) gerektirir.
Bir antijen determinantının (epitop) bir antikor Fab fragmanının aktif bölgesine bağlanması, van der Waals kuvvetleri, hidrojen bağları ve hidrofobik etkileşimlerden kaynaklanır. Antikorlar tarafından bağlanan antijenin gücü ve miktarı, antikorların afinitesine, aviditesine ve değerlerine bağlıdır.
Hem birincil hem de özellikle ikincil immün yetmezlikler insanlar arasında yaygındır. Birçok hastalığın ve patolojik durumun tezahürünün nedenidirler, bu nedenle immünotropik ilaçlarla korunma ve tedavi gerektirirler.
34. İnaktive (korpüsküler) aşılar. Fiş. Başvuru. Avantajlar Kusurlar.
İnaktive (öldürülmüş, partikül veya moleküler) aşılar- aktif bir prensip olarak, kimyasal veya fiziksel bir yöntemle öldürülen patojenik virüs veya bakteri kültürlerini (hücresel, virion) veya koruyucu antijenler içeren patojenik mikroplardan ekstrakte edilen antijen komplekslerini (hücre altı, subvirion aşıları) içeren müstahzarlar.
Antijenik kompleksleri (glikoproteinler, LPS, proteinler) bakteri ve virüslerden izole etmek için trikloroasetik asit, fenol, enzimler ve izoelektrik çökeltme kullanılır.
Yapay besin ortamlarında patojenik bakteri ve virüslerin büyütülmesi, inaktive edilmiş, izole edilmiş antijenik kompleksler, saflaştırılmış, sıvı veya liyofilik bir preparasyon şeklinde inşa edilerek elde edilirler.
Bu tip aşının avantajı, göreli elde etme kolaylığıdır (uzun süreli çalışma ve suşların izolasyonu gerekli değildir). Dezavantajları arasında düşük immünojenisite, üçlü kullanım ihtiyacı ve formalize aşıların yüksek reaktojenitesi sayılabilir. Ayrıca canlı aşılarla karşılaştırıldığında, sağladıkları bağışıklık kısa ömürlüdür.
Şu anda, aşağıdaki ölü aşılar kullanılmaktadır: Vi antijeni ile zenginleştirilmiş tifo; kolera aşısı, boğmaca aşısı.
119. Viral enfeksiyonları teşhis etmek için kullanılan serolojik testler.
Kan serumunda tespit hastanın patojenin antijenlerine karşı antikorları, hastalığın teşhisini yapmanızı sağlar. Serolojik çalışmalar ayrıca mikrobiyal antijenleri, çeşitli biyolojik olarak aktif maddeleri, kan gruplarını, doku ve tümör antijenlerini, bağışıklık komplekslerini, hücre reseptörlerini vb. tanımlamak için kullanılır.
Bir mikropu izole ederken hastadan, patojen, immün tanısal serumlar, yani spesifik antikorlar içeren hiperimmünize hayvanların kan serumları kullanılarak antijenik özellikleri incelenerek tanımlanır. Bu sözde serolojik tanımlama mikroorganizmalar.
Mikrobiyoloji ve immünolojide yaygın olarak kullanılır aglütinasyon, çökelme, nötralizasyon reaksiyonları, etiketli antikorlar ve antijenler kullanılarak kompleman içeren reaksiyonlar (radyoimmünolojik, enzim immünoassay, immünofloresan yöntemler). Listelenen reaksiyonlar kayıtlı etki ve evreleme tekniğinde farklılık gösterir, ancak hepsi antijenin antikor ile etkileşiminin reaksiyonuna dayanır ve hem antikorları hem de antijenleri tespit etmek için kullanılır. Bağışıklık reaksiyonları, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile karakterize edilir.
Bir antikorun bir antijen ile etkileşiminin özellikleri laboratuvarlardaki tanı reaksiyonlarının temelidir. Reaksiyon laboratuvar ortamında antijen ve antikor arasındaki spesifik ve spesifik olmayan bir fazdan oluşur. AT belirli aşama antikorun aktif bölgesinin antijenin determinantına hızlı bir spesifik bağlanması vardır. Sonra gelir spesifik olmayan aşama - görünür fiziksel fenomenlerle kendini gösteren daha yavaş, örneğin pul oluşumu (aglütinasyon fenomeni) veya bulanıklık şeklinde çökelti. Bu aşama belirli koşullar (elektrolitler, ortamın optimal pH'ı) gerektirir.
Bir antijen determinantının (epitop) bir antikor Fab fragmanının aktif bölgesine bağlanması, van der Waals kuvvetleri, hidrojen bağları ve hidrofobik etkileşimlerden kaynaklanır. Antikorlar tarafından bağlanan antijenin gücü ve miktarı, antikorların afinitesine, aviditesine ve değerlerine bağlıdır.
Ekspres teşhis hakkındaki soruya:
1. Saf haliyle izole edilmiş bir kültür teşhis edilebilir. 2. Özel donanımlı laboratuvarlarda (izne sahip olmalıdır) 3. İzole oda, özel koruyucu giysiler gerekli, patojenle çalıştıktan sonra tesislerin zorunlu olarak tamamen dezenfekte edilmesi, araştırmacıların işten sonra sterilize edilmesi gibi katı kurallara uygunluk. Ekspres teşhis yöntemleri. 1. Bakteriyoloji - morfların, tentürlerin, biyokimyanın hızlı çalışması için kombine politropik besin ortamı. özellikleri. Enzim indikatör bandının kullanımı, elektrofiziksel yöntem, çeşitli maddelerle (glukaso, laktoz vb.) emprenye edilmiş kağıt disklerin yöntemi 2. Faj teşhisi. 3. Serodiagnoz - Mancini yöntemi, Ascoli, RA, RPGA'ya göre jelde çökelme reaksiyonu. 4. Bakteriyoskopi - doğrudan ve dolaylı RIF. Şunlar için ekspres teşhis yöntemleri: Kolera - MZ Ermolyeva, kolera teşhis serumu ile immobilizasyon bölgesi, RIF. Tularemi - Cam üzerinde RA, RPHA Chume - faj tiplemesi, karbonhidrat kağıt diskleri yöntemi, RPHA. Şarbon - Ascoli yöntemi, RIF, RPGA. Büyümenin doğası: üç yaygın (fakültatif anaerob), dibe yakın (zorunlu anaeroblar) ve yüzey (zorunlu aeroblar) vardır.
Anaerobik bakterilerin saf kültürünün izolasyonu
Laboratuvar pratiğinde genellikle anaerobik mikroorganizmalarla çalışmak gerekir. Besin maddelerine karşı aeroblardan daha titizdirler, genellikle özel büyüme takviyelerine ihtiyaç duyarlar, ekimleri sırasında oksijen beslemesinin kesilmesini gerektirirler ve büyüme süreleri daha uzundur. Bu nedenle, onlarla çalışmak daha karmaşıktır ve bakteriyologların ve laboratuvar asistanlarının önemli ölçüde dikkatini gerektirir.
Anaerobik patojenler içeren materyali atmosferik oksijenin toksik etkilerinden korumak önemlidir. Bu nedenle, materyalin bir şırınga ile delinmeleri sırasında pürülan enfeksiyon odaklarından alınması tavsiye edilir, materyalin alınması ile bir besin ortamına ekilmesi arasındaki süre mümkün olduğunca kısa olmalıdır.
Oksijen içermemesi ve düşük redoks potansiyeline (-20 -150 mV) sahip olması gereken anaerobik bakterilerin yetiştirilmesi için özel besin ortamları kullanıldığından, bileşimlerine göstergeler eklenir - resazurin, metilen mavisi ve benzerleri, reaksiyona girer. bu potansiyelde bir değişiklik. Büyümesi ile göstergelerin renksiz formları yenilenir ve renklerini değiştirir: resazurin orta pembeyi ve metilen mavisi - maviyi boyar. Bu tür değişiklikler, anaerobik mikropların yetiştirilmesi için ortam kullanmanın imkansızlığını göstermektedir.
Ortama en az %0.05 agar eklemenin redoks potansiyelini azaltmaya yardımcı olur, bu da viskozitesini artırarak oksijen tedarikini azaltmaya yardımcı olur. Bu da taze (üretimden en geç iki saat sonra) ve azaltılmış kültür ortamı kullanılarak elde edilir.
Anaerobik bakterilerin fermentatif metabolizmasının özellikleri nedeniyle, besin ve vitaminler açısından daha zengin ortamlara ihtiyaç duyduklarına dikkat edilmelidir. En yaygın olarak kullanılanlar, kardiyo-beyin ve karaciğer infüzyonları, soya ve maya özleri, kazein hidrolitik sindirimi, pepton, triptondur. Tween-80, hemin, menadion, tam veya hemolizli kan gibi büyüme faktörlerinin eklenmesi zorunludur.
Saf bir aerobik mikroorganizma kültürünün izolasyonu birkaç adımdan oluşur. İlk gün (çalışmanın 1. aşaması) patolojik materyal steril bir kaba (test tüpü, şişe, flakon) alınır. Görünüm, kıvam, renk, koku ve diğer belirtiler için incelenir, smear hazırlanır, boyanır ve mikroskopta incelenir. Bazı durumlarda (akut bel soğukluğu, veba), bu aşamada önceden tanı koymak ve ayrıca materyalin ekileceği ortamı seçmek mümkündür. Drygalsky yöntemini izleyerek bir pamuklu gazlı bezle bir spatula ile bakteriyolojik bir döngü (en sık kullanılan) ile aldım. Bardaklar kapatılır, ters çevrilir, özel kalemle imzalanır ve 18-48 yıl boyunca optimum sıcaklıkta (37°C) bir termostata yerleştirilir. Aşamanın amacı, izole edilmiş mikroorganizma kolonileri elde etmektir. Ancak bazen malzemeyi yığmak için sıvı besin ortamına ekilir.
Smearler şüpheli kolonilerden hazırlanır, patojenlerin morfolojik ve tentür özelliklerini incelemek için Gram yöntemiyle boyanır ve hareketli bakteriler "asılı" veya "ezilmiş" bir damlada incelenir. Bu işaretler, belirli mikroorganizma türlerinin karakterizasyonunda son derece büyük tanısal değere sahiptir. Çalışılan kolonilerin kalıntıları, diğerlerine dokunmadan besiyerinin yüzeyinden dikkatlice çıkarılır ve saf bir kültür elde etmek için slant agar veya bir Petri kabının sektörleri üzerinde bir besleyici besiyeri ile aşılanır. Test tüpleri veya ekin içeren kaplar, 18-24 saat boyunca optimum sıcaklıkta bir termostata yerleştirilir.
Büyüme belirtilerinin özellikleri katı olanlardan daha zayıf olmasına rağmen, sıvı besin ortamında bakteriler de farklı şekilde büyüyebilir.
Bakteriler, ortamın dağınık bulanıklığına neden olabilir, ancak rengi değişmeyebilir veya pigmentin rengini almayabilir. Bu büyüme paterni en sık olarak çoğu fakültatif anaerobik mikroorganizmada gözlenir.
Bazen tüpün dibinde bir çökelti oluşur. Ufalanan, homojen, viskoz, sümüksü vb. olabilir. Üzerindeki ortam şeffaf kalabilir veya bulanıklaşabilir. Mikroplar bir pigment oluşturmuyorsa, çökelti canlı veya sarımsı bir renge sahiptir. Kural olarak, anaerobik bakteriler benzer bir sırada büyür.
Duvar büyümesi, test tüpünün iç duvarlarına bağlı pullar, taneler oluşumu ile kendini gösterir. Ortam şeffaf kalır.
Aerobik bakteriler yüzeyde büyüme eğilimindedir. Genellikle yüzeyde, ortam çalkalandığında veya çalkalandığında kaybolan, zar zor fark edilen bir kaplama şeklinde hassas, renksiz veya mavimsi bir film oluşur. Film nemli, kalın olabilir, örülmüş, sümüksü bir kıvama sahip olabilir ve bunun için gererek ilmeğe yapışabilir. Bununla birlikte, rengi mikroorganizmalar tarafından üretilen pigmente bağlı olan yoğun, kuru, kırılgan bir film de vardır.
Gerekirse, bir yayma yapılır, boyanır, mikroskop altında incelenir ve izole koloniler elde etmek için yoğun bir besin ortamının yüzeyinde bir öze ile mikroorganizmalar aşılanır.
Üçüncü gün (çalışmanın 3. aşaması), saf bir mikroorganizma kültürünün büyümesinin doğası incelenir ve tanımlanması gerçekleştirilir.
İlk olarak, ortamın üzerindeki mikroorganizmaların üreme özelliklerine dikkat edilir ve kültürün saflığını kontrol etmek için Gram yöntemi kullanılarak lekelenerek bir yayma yapılır. Mikroskop altında aynı tür morfoloji, boyut ve tentür (boyama yeteneği) özelliklerine sahip bakteriler gözlenirse kültürün saf olduğu sonucuna varılır. Bazı durumlarda, zaten büyümelerinin görünümü ve özellikleri ile, izole edilmiş patojenlerin türü hakkında bir sonuç çıkarılabilir. Bakteri türlerinin morfolojik özelliklerine göre belirlenmesine morfolojik tanımlama denir. Patojenlerin türünü kültürel özelliklerine göre belirlemeye kültürel tanımlama denir.
Ancak bu çalışmalar, izole edilen mikropların türü hakkında nihai bir sonuca varmak için yeterli değildir. Bu nedenle, bakterilerin biyokimyasal özelliklerini incelerler. Oldukça çeşitlidirler.
Çoğu zaman sakkarolitik, proteolitik, peptolitik, hemolitik özellikler, dekarboksilaz, oksidaz, katalaz, plazmakoagülaz, DNaz, fibrinolizin enzimlerinin oluşumu, nitratların nitritlere indirgenmesi ve benzerleri incelenir. Bunun için mikroorganizmalarla aşılanmış özel besin ortamları vardır (alacalı Hiss serisi, MPB, kesilmiş peynir altı suyu, süt vb.).
Patojenin türünü biyokimyasal özelliklerine göre belirlemeye biyokimyasal tanımlama denir.
YETİŞTİRME YÖNTEMLERİ VE SAF BAKTERİ KÜLTÜRÜNÜN İZOLASYONU Başarılı yetiştirme için, uygun şekilde seçilmiş ve uygun şekilde aşılanmış ortama ek olarak, optimum koşullar gereklidir: sıcaklık, nem, havalandırma (hava beslemesi). Anaerobların yetiştirilmesi aeroblardan daha zordur; besin ortamından havayı çıkarmak için çeşitli yöntemler kullanılır. Genellikle çeşitli mikroorganizmaların bir karışımını içeren test materyalinden belirli bakteri türlerinin (saf kültür) izolasyonu, herhangi bir bakteriyolojik çalışmanın aşamalarından biridir. İzole edilmiş bir mikrobiyal koloniden saf bir mikrobiyal kültür elde edilir. Saf bir kültürü kandan izole ederken (hemokültür), ilk olarak sıvı bir ortamda "yetiştirilir": 10-15 ml steril kan, 100-150 ml sıvı ortama aşılanır. Ekilen kan ve besin ortamının 1:10 oranı tesadüfi değildir - kan seyreltme bu şekilde sağlanır (seyreltilmemiş kan mikroorganizmalar üzerinde zararlı bir etkiye sahiptir). Saf bir bakteri kültürünü izole etme aşamaları Aşama I (yerli materyal) Mikroskopi (mikroflora hakkında kabaca fikir). Yoğun besleyici ortamlara ekim (koloni elde etme). Aşama II (izole koloniler) Kolonilerin incelenmesi (bakterilerin kültürel özellikleri). Lekeli bir yaymada mikropların mikroskobik çalışması (bakterilerin morfolojik özellikleri). Saf kültürü izole etmek için eğimli besleyici agar üzerine aşılama. Aşama III (saf kültür) Bir bakteri kültürünün tanımlanması için kültürel, morfolojik, biyokimyasal ve diğer özelliklerin belirlenmesi BAKTERİLERİN TANIMI İzole edilmiş bakteri kültürlerinin tanımlanması, bakterilerin morfolojisi, bunların kültürel, biyokimyasal ve her birinde bulunan diğer özellikleri incelenerek gerçekleştirilir. Türler.
antijenler- Bir hayvanın veya insanın vücuduna girdiğinde spesifik bir bağışıklık tepkisine neden olan genetik olarak yabancı maddeler - antikorların sentezi, duyarlılaştırılmış T-lenfositlerin oluşumu, immünolojik hafıza veya tolerans. Yabancı maddeler vücutta bulunmayan kimyasal yapılardır. İnsan vücuduna yabancı olan virüsler, mikroorganizmaların yanı sıra hücreler, dokular, hayvanların ve diğer insanların organlarıdır. Antijenler, antikorlara bağlanmak için birkaç reseptöre sahiptir ve onlarla hem hayvan hem de insan vücudunda (in vivo) ve vücut dışında - in vitro (in vitro) reaksiyona girebilir.
antikorlar- kan serumunun globulin fraksiyonunun yüksek moleküler ağırlıklı proteinleri. Antikorlar, bir antijenin etkisi altında sentezlenir ve karşılık gelen antijen ile spesifik olarak reaksiyona girebilir (birleşebilir). Tüm antikorların karakteristik bir immünoglobulin yapısı vardır; immünolojik, biyolojik ve fiziksel özelliklerde farklılık gösterir; ve 5 sınıfa ayrılır - IgG, IgA, IgM, IgD ve IgE.
serolojik reaksiyonlar
Laboratuvar uygulamasında kullandıkları serolojik reaksiyonlar- çalışılan sistemde kayıtlı değişikliklere yol açan antijenler ve antikorlar arasındaki laboratuvar reaksiyonları. Bu reaksiyonlar, üretimleri için antikor içeren serum (serum) kullanıldığından serolojik olarak adlandırılır.
Bulaşıcı hastalıklarda spesifik antikorları ve patojen antijeni tespit etmek için yapılan serolojik çalışmalar, patojenin bakteriyolojik tespitinden daha erişilebilir laboratuvar tanı yöntemleridir. Bazı durumlarda, bulaşıcı hastalıkların teşhisi için tek yöntem serolojik çalışmalar olmaya devam etmektedir.
Laboratuvar uygulamalarında kullanılan antikorların tespiti için bazı yöntemler
Tüm serolojik reaksiyonlar, bir antijen ve bir antikorun, in vitro testlerde (yani "in vitro" - canlı bir organizmanın dışında) saptanabilen bağışıklık komplekslerinin oluşumu ile etkileşimine dayanır. İn vitro sistemdeki antijen-antikor reaksiyonlarına çeşitli fenomenler eşlik edebilir - aglütinasyon, çökelme, lizis ve diğerleri. Reaksiyonun dış belirtileri, antijenin fizikokimyasal özelliklerine (parçacık boyutu, fiziksel durum), antikorların sınıfına ve tipine ve ayrıca deney koşullarına (orta tutarlılık, tuz konsantrasyonu, pH, sıcaklık) bağlıdır.
1. Kompleman bağlama reaksiyonu
Tamamlayıcı C harfi (C1, C2, C3, ... C9), faktör B, faktör D ve bir dizi düzenleyici protein ile gösterilen 9 bileşen içeren bir kan plazma proteinleri sistemidir. Bu bileşenlerin bazıları 2-3 proteinden oluşur, örneğin C1 üç proteinden oluşan bir komplekstir. Bu proteinler kan dolaşımında dolaşırlar ve hücre zarlarında bulunurlar. Kompleman, hem doğuştan gelen hem de kazanılmış bağışıklığın en önemli sistemidir. Bu sistem, vücudu yabancı maddelerin etkisinden korumak için tasarlanmıştır ve vücudun bağışıklık tepkisinin uygulanmasında rol oynar. Tamamlayıcı 19. yüzyılın sonunda Belçikalı bilim adamı J. Borde tarafından keşfedildi.
Kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR)- kompleman sabitleyici antikorları ve antijenleri ölçmek için kullanılan bir serolojik test. İlk olarak 1901 yılında Bordet ve Zhangu (Bordet - Gengou) tarafından tanımlanmıştır. RSK, antijen-antikor kompleksinin reaksiyon karışımına eklenen tamamlayıcıyı absorbe edebilmesi gerçeğine dayanmaktadır. Antijenler ve antikorlar birbirine karşılık geldiğinde, tamamlayıcının eklendiği bir bağışıklık kompleksi oluştururlar. Spesifik immün kompleks, sisteme eklenen tamamlayıcıyı adsorbe eder, yani. komplemanın antijen-antikor kompleksi tarafından bağlanması. Daha fazla antikor, daha fazla tamamlayıcı sabitlenir. Antijen-antikor kompleksi oluşmazsa kompleman serbest kalır.
CSC'nin karmaşıklığı, "antijen - antikor - tamamlayıcı" kompleksinin oluşum reaksiyonunun görünmez olmasıdır. Reaksiyonun bileşenlerini tanımlamak için ek bir gösterge hemolitik sistemi kullanılır. Hemoliz reaksiyonu kullanılarak, antijenin antiserum ile reaksiyonunun sona ermesinden sonra kompleman kalıntısının nicel bir tespiti gerçekleştirilir.
Kompleman fiksasyon testi (RCT), belirli bir antijene karşı antikorları tespit etmek veya bilinen bir antikor tarafından antijen tipini belirlemek için kullanılır. Bu karmaşık serolojik reaksiyon, iki sistem ve tamamlayıcı içerir. İlk sistem - bakteriyolojik (ana), bir antijen ve bir antikordan oluşur. İkinci sistem hemolitiktir (gösterge). Koyun eritrositlerini (antijen) ve bunlara karşılık gelen hemolitik serumu (antikor) içerir.
RSK iki adımda uygulanır: önce antijen, antikorların arandığı test kan serumu ile birleştirilir ve ardından tamamlayıcı eklenir. Antijen ve antikor eşleşirse, tamamlayıcıyı bağlayan bir bağışıklık kompleksi oluşur. Serumda antikor yokluğunda immün kompleks oluşmaz ve kompleman serbest kalır. Kompleman tarafından kompleman adsorpsiyon süreci görsel olarak görünmez olduğundan, bu süreci ortaya çıkarmak için bir heme sistemi eklenir.
Kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR), yüksek duyarlılığı nedeniyle hem bakteriyel ve viral enfeksiyonların serolojik teşhisinde, hem de alerjik durumlarda antijenlerin tanımlanmasında (izole bakteri kültürü) kullanılır.
Yağış reaksiyonu (RP)(Latince praecipitatio'dan - çökelme, düşme), bir elektrolit varlığında çözünür bir antijen ve spesifik bir antikordan oluşan spesifik bir bağışıklık kompleksinin çökelmesine dayanır. Reaksiyonun bir sonucu olarak, bulutlu bir halka veya gevşek bir çökelti oluşur - bir çökelti. Suda çözünür bir antijen ve bir antikor arasında bir çökelme reaksiyonu meydana gelir, bu da çökeltilen büyük komplekslerle sonuçlanır.
3. Flokülasyon reaksiyonu
Flokülasyon reaksiyonu (Ramon'a göre)(Latin topaklarından - yün pulları, topaklar - parçalar, pullar; topaklanma - dağılmış fazın küçük parçacıklarından gevşek pulsu agregaların (flocculi) oluşumu) - sırasında bir test tüpünde opaklık veya topaklanma kütlesinin (immünopresipitasyon) görünümü toksin - antitoksin veya anatoksin - antitoksin reaksiyonu. Antitoksik serum veya toksoidin aktivitesini belirlemek için kullanılır.
Flokülasyon reaksiyonu, bileşenlerin optimal kantitatif oranlarında bir ekzotoksin (anatoksin) + antitoksin kompleksinin oluşumu sırasında "ilk" flokülasyon - bulanıklığın saptanmasına dayanır.
4. Aglütinasyon reaksiyonu
aglütinasyon(Latince aglutinatio - bağlanmadan), bir antijenin, bağlanma şeklinde kendini gösteren spesifik bir antikor ile etkileşiminin reaksiyonudur. Bu durumda, parçacıklar-korpüsküller (mikrobiyal hücreler, eritrositler, vb.) şeklindeki antijenler, antikorlar tarafından birbirine yapıştırılır ve pul şeklinde çökelir (aglütinat). Aglütinatlar genellikle çıplak gözle görülebilir. Reaksiyonun gerçekleşmesi için, aglütinasyon sürecini hızlandıran elektrolitlerin (örneğin, izotonik sodyum klorür çözeltisi) varlığı gereklidir.
Aglütinasyon testi (RA), reactio aglütinationis (İngiliz aglütinasyon testi), antikorlar veya korpüsküler antijenler tespit edilir. Kullanılan immunodiagnosticum tipine bağlı olarak, mikrobiyal aglütinasyon, hemaglütinasyon, lateks aglütinasyon, koaglütinasyon vb. reaksiyonlar vardır.
5. Çökelme reaksiyonlarında yer alan antikorların adı
Sedimanter reaksiyonlarda yer alan antikorlar, antijenle etkileşimleri için geleneksel adı aldı:
aglutininler - korpüsküler antijenin aglütinasyonuna neden olur - aglutinojen ve antijen-antikor kompleksinin (aglütinat) çökelmesine neden olur;
çökeltiler - çözünür bir antijen - çökelti ile bir çökelti oluşturur.
Bakteriyolizinler (bakterilerin parçalanmasına neden olur) ve hemolizinler (kırmızı kan hücrelerinin parçalanmasına neden olur) litik reaksiyonlarda yer alır.
"Virüs Tespit Yöntemleri. Mikoz (Mantar Hastalıkları) Teşhisi Yöntemleri. Protozoa Tespit Yöntemleri" konusunun içindekiler tablosu:Viral enfeksiyonların teşhisi için serolojik yöntemler. Hemaglütinasyonun inhibisyonu. Virüs müdahalesi ile sitopatik etkinin inhibisyonu. Doğrudan immünofloresan. İmmünoelektron mikroskopisi.
çoğunluk ile viral enfeksiyonlar kullanılan bağışıklık tepkileri geliştirmek teşhis. Hücresel tepkiler genellikle enfeksiyöz ajanlara veya bunlar tarafından enfekte edilen hedef hücrelere karşı lenfosit sitotoksisite testlerinde veya lenfositlerin çeşitli antijenlere ve mitojenlere yanıt verme yeteneğinde değerlendirilir. Pratik laboratuvarların çalışmasında, hücresel reaksiyonların şiddeti nadiren belirlenir. Antiviral AT'leri tanımlama yöntemleri daha yaygın hale geldi.
RN dayanmaktadır sitopatojenik etkinin baskılanması virüsü belirli AT ile karıştırdıktan sonra. Bilinmeyen virüs bilinen ticari antiserumlarla karıştırılır ve uygun inkübasyondan sonra hücre tek tabakasına verilir. Hücre ölümünün olmaması, enfeksiyöz ajan ve bilinen antikorlar arasında bir uyumsuzluğu gösterir.
Hemaglütinasyonun inhibisyonu
RTGA virüsleri tanımlamak için kullanılırçeşitli eritrositleri aglütinasyon yeteneğine sahiptir. Bunu yapmak için patojeni içeren kültür ortamı bilinen bir ticari antiserum ile karıştırılır ve hücre kültürü içine verilir. İnkübasyondan sonra kültürün hemaglütinasyon kabiliyeti belirlenir ve yokluğunda virüsün antiserum ile uyumsuzluğu hakkında bir sonuca varılır.
Virüs müdahalesi ile sitopatik etkinin inhibisyonu
Virüslerin müdahalesi nedeniyle sitopatik etkinin inhibisyon reaksiyonu duyarlı hücrelerden oluşan bir kültürde bilinen bir sitopatojenik virüse müdahale eden bir patojeni tanımlamak için kullanılır. Bunu yapmak için, incelenen virüsü içeren kültür ortamına ticari bir serum (örneğin, şüpheleniliyorsa kızamıkçık virüsüne) eklenir, inkübe edilir ve ikinci kültürü enfekte eder; 1-2 gün sonra, içine bilinen bir sitopatojenik virüs (örneğin, herhangi bir ECHO virüsü) eklenir. Bir sitopatojenik etkinin varlığında, ilk kültürün uygulanan AT'ye karşılık gelen bir virüs ile enfekte olduğu sonucuna varılır.
Doğrudan immünofloresan
Diğer testler arasında en yaygın olarak kullanılan direkt immünofloresan reaksiyonu(en hızlı, en hassas ve tekrarlanabilir). Örneğin, CMV'nin sitopatojenik etki ile tanımlanması en az 2-3 hafta gerektirir ve etiketli monoklonal antikorlar kullanıldığında, tanımlama 24 saat sonra mümkündür.
immünoelektron mikroskopisi
immünoelektron mikroskopisi(önceki yönteme benzer şekilde), elektron mikroskobu tarafından tespit edilen farklı virüs türlerini (örneğin, farklı tipte herpes virüsleri) tanımlamanıza olanak tanır ve bu, morfolojik özelliklere dayalı olarak yapılamaz. Tanımlama için antiserum yerine AT etiketli çeşitli şekillerde kullanılır, ancak yöntemin karmaşıklığı ve yüksek maliyeti, uygulamasını sınırlar.