طرق التشخيص. الاختبارات المصلية في تشخيص الأمراض المعدية الاختبارات المصلية المستخدمة لتشخيص الالتهابات الفيروسية
ردود الفعل المناعيةتستخدم في الدراسات التشخيصية والمناعية للمرضى والأصحاء. لهذا الغرض ، تطبيق الطرق المصلية ، أي طرق دراسة الأجسام المضادة والمستضدات باستخدام تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد المحددة في مصل الدم والسوائل الأخرى ، وكذلك أنسجة الجسم.
الكشف في مصل الدمتسمح لك الأجسام المضادة للمريض ضد مستضدات الممرض بتشخيص المرض. تُستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد المستضدات الميكروبية ، والمواد النشطة بيولوجيًا المختلفة ، ومجموعات الدم ، ومستضدات الأنسجة والأورام ، والمجمعات المناعية ، ومستقبلات الخلايا ، وما إلى ذلك.
عند عزل ميكروبمن المريض ، يتم التعرف على العامل الممرض من خلال دراسة خصائصه المستضدية باستخدام الأمصال التشخيصية المناعية ، أي مصل الدم للحيوانات مفرطة المناعة التي تحتوي على أجسام مضادة محددة. هذا ما يسمى ب تحديد المصليالكائنات الدقيقة.
تستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة وعلم المناعةالتراص ، الترسيب ، تفاعلات المعادلة ، التفاعلات التي تنطوي على مكمل ، استخدام الأجسام المضادة والمضادات الموصوفة (المناعية الإشعاعية ، المقايسة المناعية الإنزيمية ، طرق الفلورسنت المناعي). تختلف التفاعلات المدرجة في التأثير المسجل وتقنية التدريج ، ومع ذلك ، فهي كلها تستند إلى تفاعل تفاعل مولد الضد مع الجسم المضاد وتستخدم للكشف عن كل من الأجسام المضادة ومولدات الضد. تتميز تفاعلات المناعة بحساسية وخصوصية عالية.
ملامح تفاعل الجسم المضاد مع مستضدهي أساس التفاعلات التشخيصية في المختبرات. رد فعل في المختبربين المستضد والجسم المضاد يتكون من مرحلة محددة وغير محددة. في مرحلة محددةهناك ارتباط محدد سريع للموقع النشط للجسم المضاد إلى محدد مولد الضد. ثم يأتي مرحلة غير محددة -أبطأ ، والذي يتجلى في الظواهر الفيزيائية المرئية ، على سبيل المثال ، تكوين رقائق (ظاهرة التراص) أو تترسب في شكل عكارة. تتطلب هذه المرحلة شروطًا معينة (الشوارد ، درجة الحموضة المثلى للوسط).
يرجع ارتباط محدد المستضد (epitope) بالموقع النشط لجزء Fab للجسم المضاد إلى قوى van der Waals ، والروابط الهيدروجينية ، والتفاعلات الكارهة للماء. تعتمد قوة وكمية المستضد المرتبط بالأجسام المضادة على تقارب الأجسام المضادة وشغفها وتكافؤها.
نقص المناعة ، الابتدائي والثانوي بشكل خاصمنتشرة بين الناس. هم سبب ظهور العديد من الأمراض والحالات المرضية ، وبالتالي ، فهي تتطلب الوقاية والعلاج بالأدوية المناعية.
34. اللقاحات المعطلة (الجسدية). إيصال. طلب. مزايا. عيوب.
لقاحات معطلة (ميتة أو جزيئية أو جزيئية)- المستحضرات التي ، كمبدأ فعال ، تشمل مزارع من فيروسات أو بكتيريا ممرضة تم قتلها بطريقة كيميائية أو فيزيائية (خلوية ، فيريون) أو معقدات من المستضدات المستخرجة من الميكروبات المسببة للأمراض التي تحتوي على مستضدات واقية (لقاحات تحت خلوية ، لقاحات تخريبية).
لعزل المجمعات المستضدية (البروتينات السكرية ، LPS ، البروتينات) من البكتيريا والفيروسات ، يتم استخدام حمض ثلاثي كلورو أسيتيك ، الفينول ، الإنزيمات ، والترسيب الكهروضوئي.
يتم الحصول عليها عن طريق زراعة البكتيريا المسببة للأمراض والفيروسات على وسائط المغذيات الاصطناعية ، والمجمعات المستضدية المعطلة والمعزولة ، والمنقاة ، والمبنية في شكل سائل أو مستحضر مجفد.
ميزة هذا النوع من اللقاح هي السهولة النسبية في الحصول عليه (دراسة طويلة المدى وعزل السلالات غير مطلوب). تشمل العيوب انخفاض المناعة ، والحاجة إلى الاستخدام الثلاثي والقدرة العالية على التفاعل للقاحات الرسمية. أيضًا ، مقارنةً باللقاحات الحية ، فإن المناعة التي تولدها تكون قصيرة العمر.
حاليًا ، يتم استخدام اللقاحات المقتولة التالية: التيفوئيد ، المخصب بمستضد Vi ؛ لقاح الكوليرا ولقاح السعال الديكي.
119- الاختبارات السيرولوجية لتشخيص الالتهابات الفيروسية.
الكشف في مصل الدمتسمح لك الأجسام المضادة للمريض ضد مستضدات الممرض بتشخيص المرض. تُستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد المستضدات الميكروبية ، والمواد النشطة بيولوجيًا المختلفة ، ومجموعات الدم ، ومستضدات الأنسجة والأورام ، والمجمعات المناعية ، ومستقبلات الخلايا ، وما إلى ذلك.
عند عزل ميكروبمن المريض ، يتم التعرف على العامل الممرض من خلال دراسة خصائصه المستضدية باستخدام الأمصال التشخيصية المناعية ، أي مصل الدم للحيوانات مفرطة المناعة التي تحتوي على أجسام مضادة محددة. هذا ما يسمى ب تحديد المصليالكائنات الدقيقة.
تستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة وعلم المناعةالتراص ، الترسيب ، تفاعلات المعادلة ، التفاعلات التي تنطوي على مكمل ، استخدام الأجسام المضادة والمضادات الموصوفة (المناعية الإشعاعية ، المقايسة المناعية الإنزيمية ، طرق الفلورسنت المناعي). تختلف التفاعلات المدرجة في التأثير المسجل وتقنية التدريج ، ومع ذلك ، فهي كلها تستند إلى تفاعل تفاعل مولد الضد مع الجسم المضاد وتستخدم للكشف عن كل من الأجسام المضادة ومولدات الضد. تتميز تفاعلات المناعة بحساسية وخصوصية عالية.
ملامح تفاعل الجسم المضاد مع مستضدهي أساس التفاعلات التشخيصية في المختبرات. رد فعل في المختبربين المستضد والجسم المضاد يتكون من مرحلة محددة وغير محددة. في مرحلة محددةهناك ارتباط محدد سريع للموقع النشط للجسم المضاد إلى محدد مولد الضد. ثم يأتي مرحلة غير محددة -أبطأ ، والذي يتجلى في الظواهر الفيزيائية المرئية ، على سبيل المثال ، تكوين رقائق (ظاهرة التراص) أو تترسب في شكل عكارة. تتطلب هذه المرحلة شروطًا معينة (الشوارد ، درجة الحموضة المثلى للوسط).
يرجع ارتباط محدد المستضد (epitope) بالموقع النشط لجزء Fab للجسم المضاد إلى قوى van der Waals ، والروابط الهيدروجينية ، والتفاعلات الكارهة للماء. تعتمد قوة وكمية المستضد المرتبط بالأجسام المضادة على تقارب الأجسام المضادة وشغفها وتكافؤها.
على السؤال حول التشخيص السريع:
1. يمكن تشخيص ثقافة معزولة في شكلها النقي. 2. في المختبرات المجهزة خصيصًا (يجب أن يكون لديك تصريح) 3. الامتثال لقواعد صارمة مثل: غرفة معزولة ، بدلات واقية خاصة مطلوبة ، تعقيم كامل إلزامي للمباني بعد العمل مع العامل الممرض ، تعقيم الباحثين بعد العمل. طرق التشخيص السريع. 1. علم الجراثيم - وسائط المغذيات متعددة الاتجاهات المركبة للدراسة السريعة للنقوش ، الصفيح ، الكيمياء الحيوية. الخصائص. استخدام شريط مؤشر الإنزيم ، الطريقة الكهروفيزيائية ، طريقة الأقراص الورقية المشبعة بمواد مختلفة (جلوكاسو ، لاكتوز ، إلخ.) 2. تشخيص العاثيات. 3. التشخيص المصلي - طريقة مانشيني ، تفاعل الترسيب في الهلام وفقًا لـ Ascoli ، RA ، RPGA. 4. Bacterioscopy - RIF المباشر وغير المباشر. طرق التشخيص السريع لـ: الكوليرا - MZ Ermolyeva ، منطقة التجميد بمصل تشخيص الكوليرا ، RIF. Tularemia - RA على الزجاج ، RPGA Chume - كتابة الملتهمة ، طريقة الأقراص الورقية الكربوهيدراتية ، RPGA. الجمرة الخبيثة - طريقة أسكولي ، RIF ، RPGA. طبيعة النمو: هناك ثلاثة منتشر (اللاهوائيات الاختيارية) ، بالقرب من القاع (تلزم اللاهوائية) والسطح (تلزم الأيروبس).
عزل الثقافة النقية للبكتيريا اللاهوائية
في الممارسة المختبرية ، غالبًا ما يكون من الضروري العمل مع الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية. هم أكثر حساسية للوسائط الغذائية من الأيروبس ، وغالبًا ما يحتاجون إلى مكملات نمو خاصة ، ويتطلبون وقف إمداد الأكسجين أثناء زراعتهم ، وفترة نموهم أطول. لذلك ، يعد العمل معهم أكثر تعقيدًا ويتطلب اهتمامًا كبيرًا من علماء البكتيريا ومساعدي المختبرات.
من المهم حماية المواد التي تحتوي على مسببات الأمراض اللاهوائية من التأثيرات السامة للأكسجين الجوي. لذلك ، يوصى بأخذ المادة من بؤر العدوى القيحية أثناء ثقبها بحقنة ، يجب أن يكون الوقت بين أخذ المادة وزرعها على وسط غذائي قصيرًا قدر الإمكان.
نظرًا لاستخدام وسائط مغذية خاصة لزراعة البكتيريا اللاهوائية ، والتي لا ينبغي أن تحتوي على الأكسجين ولها إمكانات منخفضة للاختزال (-20-150 مللي فولت) ، يتم إدخال مؤشرات في تركيبتها - ريسازورين ، ميثيلين الأزرق وما شابه ، والتي تتفاعل مع تغيير في هذه الإمكانية. مع نموها ، يتم تجديد الأشكال عديمة اللون للمؤشرات وتغيير لونها: ريسازورين يلطخ اللون الوردي المتوسط والأزرق الميثيلين - الأزرق. تشير هذه التغييرات إلى استحالة استخدام الوسائط لزراعة الميكروبات اللاهوائية.
إنه يساعد على تقليل إمكانات الأكسدة والاختزال لإدخال ما لا يقل عن 0.05٪ أجار في الوسط ، مما يساعد ، من خلال زيادة لزوجته ، على تقليل إمداد الأكسجين. ويتحقق ذلك بدوره باستخدام وسائط الاستزراع الطازجة (في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد الإنتاج) ووسائل الاستزراع المخففة.
وتجدر الإشارة إلى أنه نظرًا لخصائص النوع التخمري لعملية التمثيل الغذائي للبكتيريا اللاهوائية ، فإنها تتطلب وسائط أكثر ثراءً بالمغذيات والفيتامينات. الأكثر شيوعًا هي الحقن في القلب والكبد ، ومستخلصات الصويا والخميرة ، والهضم المائي الكازين ، والببتون ، والتربتون. من الضروري إضافة عوامل النمو مثل توين -80 ، الهيمين ، ميناديون ، الدم الكامل أو الدم المنحل.
يتكون عزل الثقافة النقية للكائنات الدقيقة الهوائية من عدد من الخطوات. في اليوم الأول (المرحلة الأولى من الدراسة) ، يتم أخذ المادة المرضية في وعاء معقم (أنبوب اختبار ، قارورة ، قنينة). يتم دراستها من أجل المظهر والاتساق واللون والرائحة وغيرها من العلامات ، ويتم تحضير مسحة ودهانها وفحصها تحت المجهر. في بعض الحالات (السيلان الحاد والطاعون) ، يمكن في هذه المرحلة إجراء تشخيص سابق ، بالإضافة إلى تحديد الوسائط التي ستُزرع عليها المادة. لقد تناولته بحلقة بكتريولوجية (تستخدم في أغلب الأحيان) ، مع ملعقة تتبع طريقة Drygalsky ، باستخدام قطعة قطن شاش. الأكواب مغلقة ، مقلوبة ، موقعة بقلم رصاص خاص وتوضع في منظم حرارة عند درجة الحرارة المثلى (37 درجة مئوية) لمدة 18-48 سنة. الغرض من المرحلة هو الحصول على مستعمرات معزولة من الكائنات الحية الدقيقة. ومع ذلك ، في بعض الأحيان من أجل تكديس المواد ، يتم زرعها على وسط مغذي سائل.
يتم تحضير المسحات من مستعمرات مشبوهة ، ملطخة بطريقة الجرام لدراسة الخصائص المورفولوجية والصغيرة لمسببات الأمراض ، ويتم فحص البكتيريا المتنقلة في قطرة "معلقة" أو "مطحونة". هذه العلامات لها قيمة تشخيصية كبيرة للغاية في توصيف أنواع معينة من الكائنات الحية الدقيقة. تتم إزالة بقايا المستعمرات المدروسة بعناية من سطح الوسط دون لمس الآخرين وتلقيحها على أجار مائل أو على قطاعات من طبق بتري مع وسط غذائي للحصول على ثقافة نقية. توضع أنابيب الاختبار أو أطباق المحاصيل في منظم حرارة عند درجة الحرارة المثلى لمدة 18-24 ساعة.
في وسط المغذيات السائلة ، يمكن للبكتيريا أيضًا أن تنمو بشكل مختلف ، على الرغم من أن سمات مظاهر النمو أقل من تلك الموجودة في الصلبة.
يمكن للبكتيريا أن تسبب تعكرًا منتشرًا في الوسط ، في حين أن لونها قد لا يتغير أو يكتسب لون الصباغ. غالبًا ما يتم ملاحظة نمط النمو هذا في معظم الكائنات الحية الدقيقة اللاهوائية الاختيارية.
في بعض الأحيان يتشكل راسب في قاع الأنبوب. يمكن أن يكون متفتتًا ، متجانسًا ، لزجًا ، لزجًا ، إلخ. يمكن أن يظل الوسط الموجود فوقه شفافًا أو يصبح غائمًا. إذا لم تشكل الميكروبات صبغة ، فإن المادة المترسبة لها لون زاهي أو أصفر. كقاعدة عامة ، تنمو البكتيريا اللاهوائية في مرتبة مماثلة.
يتجلى نمو الجدار من خلال تكوين رقائق ، حبيبات متصلة بالجدران الداخلية لأنبوب الاختبار. الوسيط لا يزال شفافا.
تميل البكتيريا الهوائية إلى النمو على السطح. غالبًا ما يتم تشكيل فيلم رقيق عديم اللون أو مزرق على شكل طلاء بالكاد يمكن ملاحظته على السطح ، والذي يختفي عندما يهتز الوسط أو ينفجر. يمكن أن يكون الفيلم رطبًا وسميكًا وله اتساق محبوك ولزج ويلتصق بالحلقة ويمتد من أجله. ومع ذلك ، هناك أيضًا فيلم كثيف وجاف وهش ، يعتمد لونه على الصبغة التي تنتجها الكائنات الحية الدقيقة.
إذا لزم الأمر ، يتم عمل مسحة ، وصبغها ، وفحصها تحت المجهر ، ويتم تلقيح الكائنات الحية الدقيقة بحلقة على سطح وسط غذائي كثيف للحصول على مستعمرات معزولة.
في اليوم الثالث (المرحلة الثالثة من الدراسة) يتم دراسة طبيعة نمو الثقافة النقية للكائنات الدقيقة والتعرف عليها.
أولاً ، يتم الاهتمام بخصائص نمو الكائنات الحية الدقيقة على الوسط ويتم عمل مسحة ، وتلطيخها باستخدام طريقة الجرام ، من أجل فحص الثقافة للتأكد من نقائها. إذا لوحظت بكتيريا من نفس النوع من التشكل والحجم وخصائص الصباغة (القدرة على الصباغة) تحت المجهر ، يُستنتج أن الثقافة نقية. في بعض الحالات ، من خلال مظهر وخصائص نموها ، يمكن للمرء أن يستنتج نوع مسببات الأمراض المعزولة. يسمى تحديد نوع البكتيريا من خلال سماتها المورفولوجية بالتعريف المورفولوجي. يُطلق على تحديد نوع مسببات الأمراض من خلال خصائصها الثقافية تحديد الهوية الثقافية.
ومع ذلك ، فإن هذه الدراسات لا تكفي للتوصل إلى استنتاج نهائي حول نوع الميكروبات المعزولة. لذلك ، يقومون بدراسة الخصائص الكيميائية الحيوية للبكتيريا. هم متنوعون جدا.
في أغلب الأحيان ، يتم دراسة الخواص السكرية ، الحالة للبروتين ، الحالة للدم ، تكوين ديكاربوكسيلاز ، أوكسيديز ، الكاتلاز ، البلازماكاجولاز ، الدناز ، إنزيمات الفيبرينوليسين ، اختزال النترات إلى النتريت ، وما شابه ذلك. لهذا ، هناك وسائط مغذية خاصة يتم تلقيحها بالكائنات الحية الدقيقة (سلسلة Hiss المتنوعة ، MPB ، مصل اللبن الرائب ، الحليب ، إلخ).
يسمى تحديد نوع العامل الممرض من خلال خصائصه البيوكيميائية بالتعريف البيوكيميائي.
طرق زراعة وعزل ثقافة البكتيريا النقية من أجل الزراعة الناجحة ، بالإضافة إلى الوسائط المختارة بشكل صحيح والتلقيح المناسب ، فإن الظروف المثلى ضرورية: درجة الحرارة والرطوبة والتهوية (إمداد الهواء). تعتبر زراعة اللاهوائية أكثر صعوبة من الأيروب ؛ حيث تُستخدم طرق مختلفة لإزالة الهواء من وسط المغذيات. يعد عزل أنواع معينة من البكتيريا (الزراعة النقية) من مادة الاختبار ، والتي تحتوي عادةً على خليط من الكائنات الحية الدقيقة المختلفة ، إحدى مراحل أي دراسة بكتريولوجية. يتم الحصول على مزرعة ميكروبية نقية من مستعمرة ميكروبية معزولة. عند عزل مزرعة نقية من الدم (زراعة الدم) ، يتم "نموها" مبدئيًا في وسط سائل: يتم تلقيح 10-15 مل من الدم المعقم في 100-150 مل من وسط سائل. نسبة الدم المزروع ووسط المغذيات 1:10 ليست مصادفة - هذه هي الطريقة التي يتم بها تخفيف الدم (الدم غير المخفف له تأثير ضار على الكائنات الحية الدقيقة). مراحل عزل الثقافة النقية للبكتيريا المرحلة الأولى (المادة الأصلية) المجهري (فكرة تقريبية عن البكتيريا). البذر على وسط مغذي كثيف (الحصول على مستعمرات). المرحلة الثانية (المستعمرات المعزولة) دراسة المستعمرات (الخصائص الثقافية للبكتيريا). دراسة ميكروسكوبية للميكروبات في مسحة ملطخة (الخصائص المورفولوجية للبكتيريا). التلقيح على أجار المغذيات المائل لعزل ثقافة نقية. المرحلة الثالثة (الثقافة النقية) تحديد الخصائص الثقافية والمورفولوجية والكيميائية الحيوية وغيرها من الخصائص لتحديد الثقافة البكتيرية. محيط.
المستضدات- المواد الغريبة وراثيا التي ، عند إدخالها إلى جسم حيوان أو إنسان ، تسبب استجابة مناعية محددة - تخليق الأجسام المضادة ، تكوين الخلايا اللمفاوية التائية الحساسة ، الذاكرة المناعية أو التحمل. المواد الغريبة هي هياكل كيميائية غير موجودة في الجسم. تعتبر الفيروسات والكائنات الحية الدقيقة والخلايا والأنسجة وأعضاء الحيوانات وغيرها من البشر غريبة عن جسم الإنسان. تحتوي المستضدات على عدة مستقبلات للارتباط بالأجسام المضادة وقادرة على التفاعل معها في كل من الحيوان أو جسم الإنسان (في الجسم الحي) وخارج الجسم - في المختبر (في المختبر).
الأجسام المضادة- بروتينات ذات وزن جزيئي مرتفع لجزء الجلوبيولين من مصل الدم. يتم تصنيع الأجسام المضادة تحت تأثير مستضد وتكون قادرة على التفاعل (تتحد) على وجه التحديد مع المستضد المقابل. جميع الأجسام المضادة لها بنية مميزة من الغلوبولين المناعي. تختلف في الخصائص المناعية والبيولوجية والفيزيائية ؛ وتنقسم إلى 5 فئات - IgG و IgA و IgM و IgD و IgE.
التفاعلات المصلية
في الممارسة المختبرية ، يستخدمون التفاعلات المصلية- التفاعلات المعملية بين المستضدات والأجسام المضادة والتي تؤدي إلى تغيرات مسجلة في النظام قيد الدراسة. تسمى هذه التفاعلات المصلية ، حيث يتم استخدام مصل (مصل) يحتوي على أجسام مضادة لإنتاجها.
تعد الدراسات المصلية التي يتم إجراؤها للكشف عن الأجسام المضادة المحددة ومستضد الممرض في الأمراض المعدية طرق تشخيص مخبرية يسهل الوصول إليها أكثر من الاكتشاف البكتيري للعامل الممرض. في بعض الحالات ، تظل الدراسات المصلية هي الطريقة الوحيدة لتشخيص الأمراض المعدية.
بعض طرق الكشف عن الأجسام المضادة المستخدمة في الممارسة المعملية
تعتمد جميع التفاعلات المصلية على تفاعل المستضد والجسم المضاد مع تكوين المركبات المناعية التي يمكن اكتشافها في الاختبارات المعملية (أي "في المختبر" - خارج كائن حي). قد تكون تفاعلات الجسم المضاد - المستضد في النظام المختبر مصحوبة بظواهر عديدة - التراص ، الترسيب ، التحلل ، وغيرها. تعتمد المظاهر الخارجية للتفاعل على الخصائص الفيزيائية والكيميائية للمستضد (حجم الجسيم ، الحالة الفيزيائية) ، فئة ونوع الأجسام المضادة ، وكذلك الظروف التجريبية (الاتساق المتوسط ، تركيز الملح ، درجة الحموضة ، درجة الحرارة).
1. تكملة رد فعل ملزم
مديحهو نظام لبروتينات بلازما الدم ، والذي يتضمن 9 مكونات يشار إليها بالحرف C (C1 ، C2 ، C3 ، ... C9) والعامل B والعامل D وعدد من البروتينات المنظمة. تتكون بعض هذه المكونات من 2-3 بروتينات ، على سبيل المثال C1 عبارة عن مركب من ثلاثة بروتينات. تدور هذه البروتينات في مجرى الدم وتوجد في أغشية الخلايا. التكميل هو أهم نظام للمناعة الفطرية والمكتسبة. تم تصميم هذا النظام لحماية الجسم من عمل العوامل الأجنبية ويشارك في تنفيذ الاستجابة المناعية للجسم. تم اكتشاف المكمل في نهاية القرن التاسع عشر من قبل العالم البلجيكي جيه بورد.
تفاعل تثبيت المُكملات (CFR)- اختبار مصلي يستخدم لتحديد الأجسام المضادة والمستضدات المثبتة للمكملات. تم وصفه لأول مرة بواسطة Bordet و Zhangu (Bordet - Gengou) في عام 1901. يعتمد RSK على حقيقة أن مركب الجسم المضاد-المستضد قادر على امتصاص المكمل الذي يضاف إلى خليط التفاعل. عندما تتوافق المستضدات والأجسام المضادة مع بعضها البعض ، فإنها تشكل مركبًا مناعيًا يرتبط به المكمل. يمتص المركب المناعي المحدد المكمل المضاف إلى النظام ، أي ارتباط المكمل بمركب الجسم المضاد للمستضد. كلما زاد عدد الأجسام المضادة ، تم إصلاح المزيد من المكمل. إذا لم يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فسيظل المكمل مجانيًا.
يتمثل تعقيد CSC في أن تفاعل تكوين معقد "مستضد - جسم مضاد - مكمل" غير مرئي. يتم استخدام نظام انحلالي مؤشر إضافي لتحديد مكونات التفاعل. باستخدام تفاعل انحلال الدم ، يتم إجراء تحديد كمي للمخلفات التكميلية بعد نهاية تفاعل المستضد مع المصل المضاد.
يستخدم اختبار التثبيت التكميلي (RCT) لاكتشاف الأجسام المضادة لمستضد معين أو تحديد نوع المستضد بواسطة جسم مضاد معروف. يتضمن هذا التفاعل المصلي المعقد نظامين ومكملين. النظام الأول - البكتريولوجي (الرئيسي) ، يتكون من مستضد وجسم مضاد. النظام الثاني هو الانحلالي (مؤشر). ويشمل كريات الدم الحمراء في الأغنام (مستضد) ومصل الدم الانحلالي المقابل (الجسم المضاد).
يتم وضع RSK في خطوتين: أولاً ، يتم دمج المستضد مع مصل دم الاختبار ، حيث يتم البحث عن الأجسام المضادة ، ثم يتم إضافة المكمل. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد ، فسيتم تكوين مركب مناعي يربط المكمل. في حالة عدم وجود أجسام مضادة في المصل ، لا يتشكل المركب المناعي ويبقى المكمل خاليًا. نظرًا لأن عملية الامتصاص التكميلي بواسطة المركب غير مرئية بصريًا ، تتم إضافة نظام الهيم للكشف عن هذه العملية.
نظرًا لحساسيته العالية ، يتم استخدام تفاعل التثبيت التكميلي (CFR) للتشخيص المصلي للعدوى البكتيرية والفيروسية ، وحالات الحساسية ، وللتعرف على المستضدات (الثقافة البكتيرية المعزولة).
تفاعل الترسيب (RP)(من اللاتينية praecipitatio - هطول الأمطار ، السقوط) على أساس ترسيب مركب مناعي محدد يتكون من مستضد قابل للذوبان وجسم مضاد محدد في وجود إلكتروليت. نتيجة للتفاعل ، تتشكل حلقة غائمة أو راسب فضفاض - راسب. يحدث تفاعل الترسيب بين مستضد قابل للذوبان في الماء وجسم مضاد ، مما ينتج عنه معقدات كبيرة تترسب
3. تفاعل التلبد
تفاعل التلبد (حسب رامون)(من الندف اللاتيني - رقائق الصوف ، الندفات - القطع ، الرقائق ؛ التلبد - تكوين الركام الرخو (الندف) من جزيئات صغيرة من الطور المشتت) - ظهور البريق أو الكتلة الندبة (الترسيب المناعي) في أنبوب الاختبار أثناء تفاعل السم - مضاد السموم أو الأناتوكسين - مضاد السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو الذيفان.
يعتمد تفاعل التلبد على الكشف عن التلبد "الأولي" - التعكر أثناء تكوين مركب من السموم الخارجية (anatoxin) + مضاد السموم في النسب الكمية المثلى للمكونات.
4. تفاعل التراص
التلصيق(من الترابط اللاتيني) هو تفاعل تفاعل مستضد مع جسم مضاد محدد ، والذي يتجلى في شكل رابطة. في هذه الحالة ، يتم لصق المستضدات على شكل جزيئات (خلايا ميكروبية ، كريات الدم الحمراء ، إلخ) معًا بواسطة الأجسام المضادة وترسب (تراص) على شكل رقائق. عادة ما تكون التراص مرئية للعين المجردة. لكي يحدث التفاعل ، فإن وجود الإلكتروليتات (على سبيل المثال ، محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر) ضروري ، لتسريع عملية التراص.
باستخدام اختبار التراص (RA) ، يتم الكشف عن تفاعل التراص (اختبار التراص الإنجليزي) ، أو الأجسام المضادة أو المستضدات الجسدية. اعتمادًا على نوع التشخيص المناعي المستخدم ، هناك تفاعلات التراص الميكروبي ، التراص الدموي ، تراص اللاتكس ، التراص الخثاري ، إلخ.
5. اسم الأجسام المضادة المتضمنة في تفاعلات الترسيب
تلقت الأجسام المضادة المشاركة في التفاعلات الرسوبية الاسم التقليدي لتفاعلها مع المستضد:
الراصات - تسبب تراص المستضد الجسدي - الراصات وهطول معقد الأجسام المضادة للمستضد (التراص) ؛
المرسبات - تشكل راسبًا مع مستضد قابل للذوبان - راسباتينوجين.
تشارك البكتريوليزينات (تسبب تحلل البكتيريا) والهيموليزينات (تسبب تحلل خلايا الدم الحمراء) في التفاعلات التحليلية.
جدول محتويات موضوع "طرق الكشف عن الفيروسات. طرق تشخيص الفطريات (الأمراض الفطرية). طرق الكشف عن البروتوزوا.":الطرق المصلية لتشخيص الالتهابات الفيروسية. تثبيط التراص الدموي. تثبيط تأثير الاعتلال الخلوي عن طريق تدخل الفيروس. تألق مناعي مباشر. الفحص المجهري المناعي.
مع الأغلبية اصابات فيروسيةتطوير الاستجابات المناعية التي اعتادت عليها التشخيص. عادة ما يتم تقييم الاستجابات الخلوية في اختبارات السمية الخلوية للخلايا الليمفاوية ضد العوامل المعدية أو الخلايا المستهدفة المصابة بها ، أو قدرة الخلايا الليمفاوية على الاستجابة لمختلف المستضدات والميتوجينات. نادرًا ما يتم تحديد شدة التفاعلات الخلوية في المختبرات العملية. أصبحت طرق تحديد AT المضادة للفيروسات أكثر انتشارًا.
يعتمد RN على قمع التأثير الممرض للخلايابعد خلط الفيروس مع AT محدد. يتم خلط الفيروس المجهول بمضاد مضاد تجاري معروف ، وبعد الحضانة المناسبة ، يتم إدخاله في الخلية أحادية الطبقة. يشير عدم وجود موت الخلية إلى عدم تطابق بين العامل المعدي والأجسام المضادة المعروفة.
تثبيط التراص الدموي
يستخدم RTGA لتحديد الفيروساتقادرة على تراص كرات الدم الحمراء المختلفة. للقيام بذلك ، يتم خلط الوسط المستنبت الذي يحتوي على العامل الممرض بمصل مضاد تجاري معروف ويتم إدخاله في مزرعة الخلية. بعد الحضانة ، يتم تحديد قدرة المزرعة على التراص الدموي ، وفي حالة عدم وجودها ، يتم التوصل إلى استنتاج حول عدم تطابق الفيروس مع المصل المضاد.
تثبيط تأثير الاعتلال الخلوي عن طريق تدخل الفيروس
رد فعل تثبيط تأثير الاعتلال الخلوي بسبب تدخل الفيروساتتستخدم لتحديد العامل الممرض الذي يتداخل مع فيروس معروف ممرض للخلايا في مزرعة من الخلايا الحساسة. للقيام بذلك ، يتم إدخال مصل تجاري (على سبيل المثال ، لفيروس الحصبة الألمانية إذا كان هناك شك) في وسط المزرعة الذي يحتوي على الفيروس قيد الدراسة ، وحضنه وإصابة المزرعة الثانية ؛ بعد يوم أو يومين ، يتم إدخال فيروس معروف ممرض للخلايا (على سبيل المثال ، أي فيروس ECHO). في ظل وجود تأثير ممرض للخلايا ، تم الاستنتاج أن الثقافة الأولى كانت مصابة بفيروس مطابق لـ AT المطبق.
تألق مناعي مباشر
من بين الاختبارات الأخرى ، الأكثر استخدامًا تفاعل مناعي مباشر(الأسرع والأكثر حساسية وقابلية للتكرار). على سبيل المثال ، يتطلب تحديد الفيروس المضخم للخلايا من خلال تأثيره الممرض للخلايا ما لا يقل عن 2-3 أسابيع ، وعند استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المسمى ، يكون التعرف ممكنًا بعد 24 ساعة.فحص باستخدام الفحص المجهري الفلوري (يسمح لك باكتشاف وجود مضان للخلايا المصابة) .
الفحص المجهري المناعي
الفحص المجهري المناعي(على غرار الطريقة السابقة) يسمح لك بتحديد أنواع مختلفة من الفيروسات التي تم الكشف عنها بواسطة المجهر الإلكتروني (على سبيل المثال ، أنواع مختلفة من فيروسات الهربس) ، والتي لا يمكن القيام بها بناءً على السمات المورفولوجية. بدلاً من المضادات المضادة ، تُستخدم ATs الموصوفة بطرق مختلفة لتحديد الهوية ، لكن التعقيد والتكلفة العالية للطريقة تحد من تطبيقها.