Серологические методы исследования крови для диагностики заболеваний. Серологические методы исследования в диагностике паразитарных заболеваний Серологическая лаборатория анализ чего

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — . При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после , через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления . Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, . Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с , в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Что показывает серологический анализ крови? Диагностические мероприятия - это важнейший этап в терапии любого заболевания. Успех лечения зависит не только от назначенных препаратов, но и во многом от того, насколько правильно был поставлен диагноз.

Кроме того, диагностика позволяет предотвратить осложнения и сопутствующие заболевания. С помощью серологического анализа крови пациента выявляют наличие антител и антигенов. Исследование помогает найти множество заболеваний, определить их фазу и контролировать прохождение лечения.

Что такое серология?

Серологией называется отрасль иммунологии, изучающая реакции антигенов на антитела. Данный раздел медицины занимается изучением плазмы крови и ее иммунологических характеристик.

На сегодняшний день серологический анализ крови на антитела - это надежный способ выявления вируса иммунодефицита человека, гепатита, бруцеллеза, ЗППП и других опасных для жизни заболеваний. Разберемся, в каких случаях его назначают.

Показания к назначению

Серологический анализ крови необходим для выявления возбудителя болезни при затруднениях в постановке диагноза.

Для проведения этой реакции в плазму вводят антигены возбудителей, а затем протекающий процесс изучает лаборант. Либо осуществляют обратную реакцию: в инфицированную кровь вводят антитела для определения конкретной принадлежности возбудителя.

Сфера применения

Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, вырабатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.

Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.

Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.

У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.

Выявление венерических заболеваний

Для венерологов это тестирование поистине незаменимо и позволяет поставить диагноз очень точно.

При смазанной клинической картине серологический анализ крови на сифилис, лямблиоз, уреаплазмоз, хламидиоз, герпес и другие заболевания позволяет быстро выявить наличие антител.

Вирусные и инфекционные заболевания

Серологический анализ активно используется гастроэнтерологами, гепатологами и инфекционистами для диагностики вирусного гепатита.

Расшифровка серологического анализа крови дает возможность определить стадию протекания заболевания и ответить на вопрос, насколько необходима госпитализация в данный момент. Как правильно подготовиться?

Подготовка к сдаче анализа

Серологический анализ крови делают и в государственных, и в коммерческих клиниках. Предпочтение стоит отдать лаборатории, располагающей современным оборудованием и квалифицированным персоналом.

Биологическими образцами для исследования могут быть слюна и кал, но в большинстве случаев используется венозная кровь больного. Кровь для серологического теста берут из локтевой вены в условиях лаборатории. Перед тем как сдавать анализ, следует проконсультироваться с врачом по поводу подготовки к этой процедуре.

Для подготовки к сдаче анализа на серологическое исследование нужно соблюсти несколько несложных правил.

Кровь сдают в спокойном состоянии до приема пищи, то есть натощак. Перед этим не следует проходить другие исследования, например делать рентген, УЗИ и т. д.

Нужно исключить прием антибактериальных и некоторых других препаратов за несколько недель до сдачи крови. Определенные рекомендации в этом случае зависят от того заболевания, на которое делается тест. К примеру, исследование на гепатит предполагает исключение жирной пищи и алкоголя за 48 часов до процедуры.

Реакция флюоресценции

Среди разновидностей серологических реакций существует реакция флюоресценции. По этой методике используется реагент, подсвечивающий антитела в сыворотке крови.

Постановка серологической реакции прямого типа предполагает маркировку специфических антител флюоресцирующим веществом. Такая реакция является самой быстрой и проводится одноэтапно.

Другой вариант проведения такого анализа имеет название непрямого, или РНИФ. Проводится он в два этапа. На первом этапе антитела не маркируются флюоресцирующими метками, а на втором применяются соответственно отмеченные антитела для определения антигенов и антител. Свечение возникает только после того, как происходит связывание со специфическим антителом.

Что же показывает серологический анализ крови? Итог всей процедуры оценивает специальный прибор, который анализирует силу излучения, выявляет форму и размер исследуемого объекта. Возбудители инфекционных заболеваний выявляются с результатом, достоверность которого составляет 90-95 %, в зависимости от вида и стадии патологии.

Иммуноферментный анализ

В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.

Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.

Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.

Особенности данного теста

Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.

Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.

При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.

Плюсы серологического анализа крови

Диагностические методики с использованием серологических реакций обширно используются в современной медицинской практике. Особенно часто это делается при определении вирусных и инфекционных патологий.

Эти же анализы применяются при проведении географического скрининга и медицинского обследования с целью предупреждения эпидемиологического распространения инфекции.

К достоинствам метода можно отнести:

• Высокий уровень достоверности.
• Быстрое проведение реакции и получение результатов. Результаты РСК известны уже через 24 часа. При особой ситуации, в условиях стационара, анализ будет готов через несколько часов.
• Осуществление контроля развития болезни и эффективности проводимой терапии.
• Невысокая стоимость и доступность для пациентов.

Минусы метода

Однако серологические исследования имеют и свои недостатки.

К ним относится тот факт, что при проведении анализа следует учитывать инкубационный период заболевания, для того чтобы получить более достоверную картину.

К примеру, определение простого герпеса первого или второго типа возможно лишь спустя 14 дней с момента заражения. Анализ на наличие вируса иммунодефицита проводят через 30 дней, через 90 дней и спустя полгода после контакта с инфицированным человеком.

Безусловно, на достоверность результатов может оказывать влияние и человеческий фактор: пренебрежение правилами подготовки к забору крови или ошибка, допущенная лаборантом при проведении реакции.

По статистике, ошибочный результат может быть получен в 5 % случаев. Опытный врач при обследовании пациента, изучив клиническую картину, в большинстве случаев может вычислить допущенную ошибку.

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Серологический анализ крови представляет собой способ лабораторного исследования определенных антигенов или антител (специфических белков ) в сыворотке крови пациента, основанный на иммунных реакциях организма. Данный метод применяется при диагностике инфекционных заболеваний для выявления наличия антител в крови больного к определенному виду вирусов или бактерий , а также для определения групповой принадлежности крови.

Исследуемый материал

В первую очередь для проведения серологического анализа используют биологический материал, собранный от пациента:

• сыворотка крови
• слюна
• фекальные массы

В некоторых случаях исследуется материал, выделенный из определённых объектов окружающей среды:

• почва

Методика проведения анализа или забора крови

Данный анализ не требует специальной подготовки пациента. Забор крови проводится утром натощак и, производится в процедурных кабинетах лечебных учреждений, согласно общепринятым гематологическим методикам. Для серологического исследования забор крови производится двумя методами: венозную кровь забирают из локтевой вены пациента, а капиллярную кровь – из безымянного пальца. Кровь помещают в стерильные герметичные пробирки.

Особенности транспортировки крови и хранения сыворотки

Сразу же после забора крови её транспортируют в специальную лабораторию, где в тот же день производится подготовка сыворотки. Хранение сыворотки допускается не более 4 – 6 дней в холодильной камере при температуре 2 – 4 градусов. При необходимости более длительного хранения, сыворотка замораживается. Во избежание нарушения качества сыворотки допускается однократное её замораживание и, соответственно, размораживание. При длительном хранении антитела теряют свои свойства и становятся частично неактивными, наиболее чувствительными к замораживанию являются иммуноглобулины класса М . После размораживания сыворотки необходимо тщательное перемешивание её до однородной массы, что способствует восстановлению концентрации антител, содержащихся в данной сыворотке.

Для чего используют серологические исследования?

Серологические методы лабораторной диагностики используются для выявления таких заболеваний как эхинококкоз, трихинеллёз, токсокароз, описторхоз, цистицеркоз, токсоплазмоз , амебиаз, лямблиоз , для определения эффективности проведённого курса лечения и, наконец, для обнаружения повторного заболевания после полного выздоровления пациента.

Основные методы серологической диагностики

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Данная реакция является непрямым вариантом серологического исследования, то есть, производится она в два этапа. На первом этапе производят выявление необходимого антитела в циркулирующем комплексе антиген – антитело с помощью антиглобулина, схожего по своей структуре с белками иммунной сыворотки. Выявление искомого антитела возможно также при изучении заранее приготовленного антигенного препарата под люминесцентным микроскопом, без использования антиглобулинов.

Иммунофлюоресцентная реакция – очень трудоёмкий процесс, требующий от специалиста немало времени и ответственности. Начинается реакция с подготовки растворов, затем сыворотки и их контрольные образцы подвергаются титрованию (процесс, позволяющий определить содержание определённого вещества путём постепенного смешивания исследуемого раствора с контролируемым количеством реагента ). Подготовленные ранее разведения и их контрольные образцы аккуратно наносятся на предметные стёкла с антигеном. Потом препараты подвергаются инкубации, затем следует их отмывание и высушивание на воздухе. На стёкла с антигеном тонким слоем наносится антисыворотка, после этого производится вторичная инкубация препаратов и, вся предыдущая цепь действий повторяется, завершаясь высушиванием препарата. В результате препарат на предметном стекле подвергается обработке глицерином и исследуется в люминесцентном микроскопе.

Результаты проведённой реакции оцениваются по четырёх бальной шкале, которая характеризуется интенсивностью поверхностного жёлто-зелёного свечения клеток антигенов:
+ очень слабое свечение клетки, заметное только на её периферии
++ слабое свечение периферии клетки, но с явно заметным зелёным оттенком
+++/++++ яркое свечение зелёного цвета периферии клетки
Титром реакции считается такое разведение сыворотки, где не менее 50 % клеток антигена проявляют чёткое поверхностное свечение, то есть результат реакции +++ или ++++ . Значение тира реакции от 1/80 до 1/100.

Интенсивность реакции зависит от количества осаждённых эритроцитов на дне образованных лунок:
– отрицательная реакция, которая характеризуется осаждением эритроцитов на дно лунок в виде небольшого колечка с гладкими краями или «пуговки»
+ слабая интенсивность, для данной реакции характерны небольшие одиночные отложения на дне лунки. Неагглютинированные эритроциты образовывают «маленькое колечко» в центре лунки
++ средняя интенсивность, ей свойственно образование на дне лунки «широкого плотного кольца» из неагглютинированных эритроцитов
+++ интенсивная реакция, агглютинированные эритроциты образуют так называемые «зонтики», в центре которых, явно видны кольца, образованные осевшими неагглютинированными эритроцитами
++++ резко интенсивная реакция, в которой агглютинируются все эритроциты и, образуя «зонтики», выстилают дно лунок.
Титром данной реакции считают последнее разведение сыворотки, при котором выявляется явная агглютинация эритроцитов не менее +++ , то есть при интенсивной или резко интенсивной реакции.

Достоверность и качество методов серологической диагностики зависят от организации проведённого внутреннего и внешнего лабораторного контроля, состоящих из нескольких независимых процедур, предназначенных для оценки качества результатов проведённого анализа.

Серология (от лат. serum — «сыворотка», logos — «наука») представляет собой раздел иммунологии, который изучает специфику взаимодействия сывороточных антител с антигенами.

Основа диагностики — обнаружение специфических антител, которые образуются в качестве реакции на инфицирование организма определенным антигеном. В зависимости от того, какие антитела обнаружены в крови, делается вывод о характере инфекции, а количество этих антител говорит о степени активности инфекционного заболевания.

Материал, взятый на исследование в рамках серологического анализа крови, изучается на предмет , и других опасных заболеваний — герпеса, кишечных инфекций, краснухи, токсоплазмоза, хламидиоза, кори, хламидиоза. Кроме того, это исследование позволяет утвердить группу крови, определить специфичность белков.

Итак, серологические исследования проводят:

• если поставлен предварительный диагноз и теперь требуется его подтверждение. Исследование основывается на добавлении соответствующего антигена в сыворотку крови. Ответная реакция позволяет сделать вывод о налиии или отсутствии заболевания;
• если диагноз поставить не удается. В рамках исследования в кровь добавляют антитела и определяют вид антигенов, что позволяет определить конкретное заболевание;
• если необходимо .

Таким образом серологический анализ крови помогает поставить диагноз или назначить наиболее эффективное лечение — при минимальных временных и финансовых затратах.

К достоинствам серологических исследований можно отнести:

• возможность выявления патологических микроорганизмов на ранних стадиях инфекции;
• контроль развития заболевания и уровень эффективности проводимой терапии;
• отсутствие необходимости специальной подготовки перед взятием биоматериала;
• оперативность. Результат будет доступен через два-три часа, что в условиях стационарного лечения очень важно;
• финансовую доступность реагента, что позволяет проводить пробы так часто, как это нужно;
• отсутствие противопоказаний.

Как проводится серологическое исследование

Забор крови проводится из локтевой вены. Важный момент — кровь берется не шприцом, а самотеком — в вену вводится игла без шприца и собирается в пробирку до пяти мл крови. Проводится процедура с утра .

В зависимости от реакций, которые лежат в основе исследования, выделяют несколько видов процедур:

1. реакция нейтрализации . Основывается на свойстве антител иммунной сыворотки реагировать как нейтрализующее средство на микроорганизмы или токсины, предупреждая их негативное воздействие на организм;
2. реакция агглютинации . Может быть прямой или непрямой. В первом случае речь идет об изучении сыворотки крови на предмет присутствия антител (осуществляется вброс убитых микробов в материал, и оценивается реакция — если есть осадок в виде хлопьев, реакция положительная), непрямая реакция основана на введении в материал эритроцитов с адсорбированными на них антигенами (фестончатый осадок говорит о положительной реакции);
3. реакция преципитации . Раствор антигена наслаивается на иммунную сыворотку (выполняет роль жидкой среды). Используется растворимый антиген. Если комплекс антиген-антитело выпадает в осадок, реакция считается положительной;
4. реакция с участием комплемента. Область применение — обнаружение инфекционных заболеваний. Активируется комплемент и исследуются реакции;
5. реакция с мечеными антигенами и антителами . Основывается на том, что антигены тканей или микробы, обработанные особым образом, начинают излучать свет под воздействием УФ-лучей. Метод широко применяется не только при диагностике антигенов, но также для определения гормонов, ферментов, лекарственных средств.

К сдаче анализа необходимо подготовиться: за четыре дня пациент должен отказаться от приема сердечных препаратов, нужно также исключить алкоголь в любом его проявлении, острую и жирную еду, сладости, ограничить физические усилия, избегать стрессов.

Если не соблюдать эти правила, повышается риск ложноположительного результата. Перед назначением повторной сдачи анализов врач обязательно должен выяснить, что делал пациент за день до процедуры, и дать рекомендации по правильной подготовке к обследованию.

Серологический анализ: расшифровка

Серологическое исследование крови — анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.

После того, как процедура сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу — расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций — результат анализа в таком случае положительный.

Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.

Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.

Серологическое исследование на гепатит, ВИЧ, сифилис: особенности

Сифилис . При проведении анализа на сифилис специалисты ищут белки, отвечающие за поступление в человеческий организм возбудителя инфекции — речь идет о трепонеме бледной. В качестве биологического материала в этом случае выступает сыворотка крови.

. Вирусные гепатиты — серьезные инфекционные заболевания, опасность которых заключается в том, что они достаточно долгое время могут жить в организме, никак себя не проявляя. Выявить заболевание в ранней фазе, когда оно лучше поддается лечению, можно проведя анализ на маркеры — маркеры появляются в крови после перенесенного заболевания или введения вакцины.

Нужно понимать , что выявление возбудителя возможно только через 1,5-2 месяца после инфицирования. Если анализ сдает беременная женщина, возможен ложноположительный результат.

Рекомендуем к просмотру медицинский сайт https://tabletix.ru/ . На сайте найдете полезную информацию, врачебные мнения.
Если вы наблюдаете один или несколько из симптомов, указанных ниже, стоит задуматься о сдаче серологического анализа:

• рвота;
• плохой аппетит или его отсутствие;
• беспричинное бессилие организма, переутомление;
• желтоватый цвет лица;
• изменения цвета кала и мочи.

ВИЧ. Если показал положительный результат, это не говорит о том, что пациент инфицирован СПИДом. Если заражение произошло недавно (не более двух месяцев назад), наличие антител не позволяет определить факт развития заболевания. Назначается повторное исследование.

Серологический анализ крови — важнейший метод исследования, основное назначение которого заключается в оперативном выявлении вирусов, инфекций, микробов в организме.

Этот уникальный лабораторный «инструмент» позволяет определить любое заболевание, которое является следствием угнетения иммунитета, поэтому не ленитесь, а регулярно сдавайте анализ, чтобы иметь возможность вовремя выявить болезнь и быстро от нее избавиться.

8 057

Серологический метод диагностики предусматривает применение 2 направлений исследований: серодиагностики (выявление специфических антител в сыворотке крови обследуемых) и сероидентификация (определение антигенных свойств выделенного возбудителя с целью установления его вида и типа).

При серодиагностике применяются реакции агглютинации, преципитации, лизиса, РСК, реакции с использованием меченых антигенов или антител. Компонентами этих реакций являются: сыворотки крови обследуемых больных и стандартные антигенные препараты. Целью исследований являются определение титров антител к возбудителям инфекционных заболеваний в исследуемых сыворотках.

Выявление высоких титров специфических антител особенно если они достигают уровня так называемых «диагностических» титров, подтверждает предполагаемый диагноз. Большое значение придается исследование парных сывороток, когда одновременно титруются сыворотки взятые в самом начале заболевания (3-4ый день) и сыворотки, полученные на 7-й - 10-й день заболевания. Диагностическое значение имеет 4-кратное нарастание титров антител.

При сероидентификации чаще других используется реакция агглютинации на стекле. Компоненты реакции: выращенная чистая культура возбудителя заболевания (антиген) и стандартные диагностические иммунные кроличьи сыворотки (антитела).

Достоинство серологического метода - простота, доступность, высокая чувствительность, специфичность, экспрессность.

Недостатки: необходимость дорогостоящих стандартных препаратов и аппаратуры.

Аллергологический метод

Данный метод предусматривает выявление сенсибилизации организма к тому или иному инфекционному агенту, что имеет большое диагностическое значение. Известно, что течение некоторых инфекционных заболеваний сопровождается формированием гиперчувствительности замедленного типа. В связи с этим внутрикожное введение таким больным малых доз аллергена вызывает соответствующую реакцию со стороны организма, вызванную повторной встречей с аллергеном. Реакция протекает по замедленному типу, и на месте введения аллергена через 48-72 часа появляется покраснение, припухлость, иногда - инфильтрат (положительная реакция). Если организм не сенсибилизирован, внутрикожное введение не вызовет никакой реакции со стороны организма (отрицательная реакция). Промышленностью выпускаются специальные препараты для проведения кожно-аллергических проб: туберкулин, дизентерин, бруцеллин, тулярин и др.

Аллергологический метод имеет особенно большое значение в тех случаях, когда выявление возбудителя инфекционного заболевания затруднено или же невозможно (например, при лепре) или когда для этого требуется много времени (например, при бруцеллезе). Проба с туберкулином используется на практике не только с диагностической целью, но и для определения сроков ревакцинации детей вакциной БЦЖ, а также для изучения коллективного противотуберкулезного иммунитета.

Достоинства аллергологического метода - его простота, достоверность, экспрессность.

Недостаток - ограниченность применения, так как далеко не при всех инфекционных заболеваниях формируется гиперчувствительность замедленного типа.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ДИАГНОСТИКЕ

ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

В настоящее время иммунологические методы исследования широко применяются для лабораторной диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Реакции взаимодействия между антигенами и антителами называются серологическими (serum – сыворотка, logos – учение).

Суть всех серологических реакций состоит в специфическом соединении антигенов и соответствующих им антител с образованием комплекса. Серологическая реакция возможна, если имеется иммунологическое соответствие (гомологичность) – главных компонентов – антигенов и антител. В основе иммунологической специфичности лежит структурная комплементарность антигена и антитела.

Процесс взаимодействия антигенов и антител протекает в две фазы – специфическую и неспецифическую. Первая фаза развивается быстро. Она состоит из специфического соединения активного центра антитела с детерминантными группами соответствующего (гомологичного) антигена. Более медленно развивается последующая фаза, неспецифическая – это внешнее проявление реакции антиген-антитело (выпадение хлопьев, помутнение среды и т. д.)

Серологические реакции применяются с двумя целями:

1) для выявления антител в исследуемой сыворотке с помощью известных антигенов (серодиагностика);

2) для установления неизвестного антигена с помощью известных сывороток (сероидентификация).

Определение неизвестного антигена при микробиологических исследованиях проводится с целью установления родовой, видовой, типовой принадлежности возбудителей, выделенных у обследуемого. В таких случаях из двух основных компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является антиген, реакция должна проводиться с заведомо известными антителами. При этом антигеном является чистая культура выделенных из исследуемого материала микроорганизмов. В качестве заведомо известных антител применяются иммунные диагностические сыворотки. Последние получают из крови животных (чаще всего кроликов), предварительно иммунизированных соответствующими бактериальными антигенами. Иммунные сыворотки должны содержать высокий уровень специфических антител.

Помимо этого, серологические реакции могут использоваться для определения различных небактериальных антигенов: для установления групп крови, тканевых антигенов, опухолей, для подбора пар донор – реципиент при трансплантации органов и тканей и т. д.

Серологические реакции могут применяться и для обнаружения антител в сыворотке крови. В таких случаях требуется заведомо известный антиген (диагностикум). В качестве антигенов могут быть использованы взвеси живых или убитых микробов, экстракты или изолированные химические фракции из них.

Многочисленные серологические реакции, применяемые в настоящее время в практике здравоохранения, различаются по феномену, выявляющему связь антигена и антитела. Видимое проявление реакции будет различным в зависимости от того, какая методика используется, в каком физическом состоянии применяется антиген или иммунная сыворотка, участвует ли в реакции комплемент. Например, если используется корпускулярный антиген, имеет место феномен агглютинации – склеивание частиц (реакция агглютинации). Поскольку корпускулярные антигены состоят из частиц относительно крупного размера, выпадает видимый хлопьевидный осадок. Если же в реакции применяется растворимый антиген, наблюдается выпадение мелко зернистого осадка – преципитата (реакция преципитации). В случае, если в реакцию взаимодействия бактериальных антигенов и иммунной сыворотки вводится и комплемент, происходит бактериолиз (растворении бактериальных антигенов) или лизис эритроцитов (когда они используются в качестве антигена). Применение в серологических реакциях иммунных сывороток, меченых флюорохромами, ферментами или радиоизотопами, позволяет установить специфическое связывание антигенов с антителами по соответствующему феномену (свечение, изменение цвета или активности радиоизотопной метки).

Для оценки серологических реакций применяются такие критерии, как специфичность и чувствительность. Специфичность – это способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами. Чувствительность – способность к специфическому взаимодействию при минимальных количествах антигенов и антител.

Реакция агглютинации

Реакция агглютинации (РА) – специфическое взаимодействие антигенов с антителами, выражающееся в склеивании антигенов под воздействием антител сыворотки и выпадении их в осадок в присутствии электролита. Была первой из предложенных серологических реакций.

Особенность реакции агглютинации состоит в том, что в качестве антигенов при её постановке используются клетки или другие корпускулярные частицы. Реакция основана на способности корпускулярных антигенов специфически соединяться, с гомологичными антителами иммунных сывороток с образованием осадка в виде зерен, хлопьев, комочков. Реакция проходит только в присутствии электролитов. Антигены, применяемые в реакции, называются агглютиногенами, антитела – агглютининами, а образующийся осадок – агглютинатом.

В качестве антигена в реакции агглютинации можно применять взвесь живых культур в изотоническом растворе хлорида натрия или микробы, убитые формалином, спиртом или прогреванием, а также эритроциты, лейкоциты или другие клетки.

Источником антител служит известная агглютинирующая сыворотка, полученная путем иммунизации животных соответствующими антигенами, или сыворотка обследуемого больного.

Существуют разные способы постановки реакции агглютинации. Из них наиболее часто применяются: ориентировочная реакция на стекле, развернутая агглютинация в пробирках, реакции гемагглютинации и непрямой гемагглютинации (РНГА).

Похожая информация.