Métodos de diagnóstico. Pruebas serológicas en el diagnóstico de enfermedades infecciosas Pruebas serológicas utilizadas para diagnosticar infecciones virales
reacciones inmunitarias utilizado en estudios diagnósticos e inmunológicos en personas enfermas y sanas. Para ello, aplica métodos serológicos , es decir, métodos para estudiar anticuerpos y antígenos utilizando reacciones antígeno-anticuerpo determinadas en suero sanguíneo y otros fluidos, así como en tejidos corporales.
Detección en suero sanguíneo los anticuerpos del paciente contra los antígenos del patógeno le permiten hacer un diagnóstico de la enfermedad. Los estudios serológicos también se utilizan para identificar antígenos microbianos, diversas sustancias biológicamente activas, grupos sanguíneos, antígenos tisulares y tumorales, inmunocomplejos, receptores celulares, etc.
Al aislar un microbio del paciente, el patógeno se identifica estudiando sus propiedades antigénicas utilizando sueros de inmunodiagnóstico, es decir, sueros sanguíneos de animales hiperinmunizados que contienen anticuerpos específicos. Este llamado identificación serológica microorganismos
Ampliamente utilizado en microbiología e inmunología. aglutinación, precipitación, reacciones de neutralización, reacciones en las que interviene el complemento, utilizando anticuerpos y antígenos marcados (métodos radioinmunológicos, inmunoensayo enzimático, inmunofluorescente). Las reacciones enumeradas difieren en el efecto registrado y la técnica de estadificación, sin embargo, todas se basan en la reacción de la interacción del antígeno con el anticuerpo y se utilizan para detectar tanto anticuerpos como antígenos. Las reacciones de inmunidad se caracterizan por una alta sensibilidad y especificidad.
Características de la interacción de un anticuerpo con un antígeno. son la base de las reacciones diagnósticas en los laboratorios. Reacción in vitro entre antígeno y anticuerpo consta de una fase específica y otra no específica. EN fase específica hay una rápida unión específica del sitio activo del anticuerpo al determinante del antígeno. luego viene fase no específica - más lento, que se manifiesta por visible fenomeno fisico, por ejemplo, la formación de escamas (fenómeno de aglutinación) o precipitado en forma de turbidez. Esta fase requiere ciertas condiciones (electrolitos, pH óptimo del medio).
La unión de un determinante de antígeno (epítopo) al sitio activo de un fragmento Fab de anticuerpo se debe a las fuerzas de van der Waals, los enlaces de hidrógeno y las interacciones hidrofóbicas. La fuerza y la cantidad de antígeno unido por los anticuerpos dependen de la afinidad, la avidez de los anticuerpos y su valencia.
Inmunodeficiencias, tanto primarias como especialmente secundarias están muy extendidas entre las personas. Son la causa de la manifestación de muchas enfermedades y condiciones patológicas, por lo tanto, requieren prevención y tratamiento con medicamentos inmunotrópicos.
34. Vacunas inactivadas (corpusculares). Recibo. Solicitud. Ventajas. Defectos.
Vacunas inactivadas (muertas, de partículas o moleculares)- preparados, como principio activo, incluidos los que mueren por acción química o de forma física cultivos de virus o bacterias patógenos (celulares, viriones) o complejos de antígenos extraídos de microbios patógenos que contienen antígenos protectores (vacunas subcelulares, subviriones).
Para aislar complejos antigénicos (glucoproteínas, LPS, proteínas) de bacterias y virus, se utilizan ácido tricloroacético, fenol, enzimas y precipitación isoeléctrica.
Se obtienen mediante el cultivo de bacterias y virus patógenos en medios nutritivos artificiales, complejos antigénicos aislados inactivados, purificados, construidos en forma de preparación líquida o liófila.
La ventaja de este tipo de vacuna es la relativa facilidad de obtención (no se requiere estudio a largo plazo ni aislamiento de cepas). Las desventajas incluyen baja inmunogenicidad, la necesidad de triple uso y alta reactogenicidad de las vacunas formalizadas. Además, en comparación con las vacunas vivas, la inmunidad que provocan es de corta duración.
Actualmente, se utilizan las siguientes vacunas muertas: tifoidea, enriquecida con antígeno Vi; vacuna contra el cólera, vacuna contra la tos ferina.
119. Pruebas serológicas utilizadas para diagnosticar infecciones virales.
Detección en suero sanguíneo los anticuerpos del paciente contra los antígenos del patógeno le permiten hacer un diagnóstico de la enfermedad. Los estudios serológicos también se utilizan para identificar antígenos microbianos, diversas sustancias biológicamente activas, grupos sanguíneos, antígenos tisulares y tumorales, inmunocomplejos, receptores celulares, etc.
Al aislar un microbio del paciente, el patógeno se identifica estudiando sus propiedades antigénicas utilizando sueros de inmunodiagnóstico, es decir, sueros sanguíneos de animales hiperinmunizados que contienen anticuerpos específicos. Este llamado identificación serológica microorganismos
Ampliamente utilizado en microbiología e inmunología. aglutinación, precipitación, reacciones de neutralización, reacciones en las que interviene el complemento, utilizando anticuerpos y antígenos marcados (métodos radioinmunológicos, inmunoensayo enzimático, inmunofluorescente). Las reacciones enumeradas difieren en el efecto registrado y la técnica de estadificación, sin embargo, todas se basan en la reacción de la interacción del antígeno con el anticuerpo y se utilizan para detectar tanto anticuerpos como antígenos. Las reacciones de inmunidad se caracterizan por una alta sensibilidad y especificidad.
Características de la interacción de un anticuerpo con un antígeno. son la base de las reacciones diagnósticas en los laboratorios. Reacción in vitro entre antígeno y anticuerpo consta de una fase específica y otra no específica. EN fase específica hay una rápida unión específica del sitio activo del anticuerpo al determinante del antígeno. luego viene fase no específica - más lento, lo que se manifiesta por fenómenos físicos visibles, por ejemplo, la formación de escamas (fenómeno de aglutinación) o precipitado en forma de turbidez. Esta fase requiere ciertas condiciones (electrolitos, pH óptimo del medio).
La unión de un determinante de antígeno (epítopo) al sitio activo de un fragmento Fab de anticuerpo se debe a las fuerzas de van der Waals, los enlaces de hidrógeno y las interacciones hidrofóbicas. La fuerza y la cantidad de antígeno unido por los anticuerpos dependen de la afinidad, la avidez de los anticuerpos y su valencia.
A la pregunta sobre el diagnóstico express:
1. Se puede diagnosticar un cultivo aislado en su forma pura. 2. En laboratorios especialmente equipados (debe tener permiso) 3. Cumplimiento de reglas estrictas tales como: sala aislada, se requieren trajes de protección especiales, desinfección completa obligatoria de las instalaciones después de trabajar con el patógeno, desinfección de los investigadores después del trabajo. Métodos de diagnóstico rápido. 1. Bacteriología: medios de nutrientes politrópicos combinados para un estudio rápido de morfos, tintes, bioquímica. propiedades. Uso de cinta indicadora de enzimas, método electrofísico, método de discos de papel impregnados con diversas sustancias (glucaso, lactosa, etc.) 2. Diagnóstico de fagos. 3. Serodiagnóstico - Método de Mancini, reacción de precipitación en el gel según Ascoli, RA, RPHA. 4. Bacterioscopia - RIF directa e indirecta. Express métodos de diagnóstico para: Cólera - MZ Ermolyeva, distrito de inmovilización con suero de diagnóstico de cólera, RIF. Tularemia - RA en vidrio, RPHA Chume - tipificación de fagos, el método de discos de papel de carbohidratos, RPHA. Ántrax - Método Ascoli, RIF, RPGA. La naturaleza del crecimiento: hay tres difusos (anaerobios facultativos), cerca del fondo (anaerobios obligados) y superficiales (aerobios obligados).
Aislamiento de cultivo puro de bacterias anaerobias
En la práctica de laboratorio, a menudo es necesario trabajar con microorganismos anaerobios. Son más exigentes con los medios nutritivos que los aerobios, a menudo necesitan suplementos de crecimiento especiales, requieren el cese del suministro de oxígeno durante su cultivo, su período de crecimiento es más largo. Por lo tanto, trabajar con ellos es más complicado y requiere una atención considerable por parte de bacteriólogos y auxiliares de laboratorio.
Es importante proteger el material que contiene patógenos anaerobios de los efectos tóxicos del oxígeno atmosférico. Por lo tanto, se recomienda tomar el material de los focos de infección purulenta durante su punción con una jeringa, el tiempo entre tomar el material y sembrarlo medio nutritivo debe ser lo más breve posible.
Dado que se utilizan medios nutrientes especiales para el cultivo de bacterias anaeróbicas, que no deben contener oxígeno y tener un potencial redox bajo (-20 -150 mV), se introducen indicadores en su composición: resazurina, azul de metileno y similares, que reaccionan a un cambio en este potencial. Con su crecimiento, las formas incoloras de los indicadores se reanudan y cambian de color: la resazurina tiñe el medio en color rosa, y azul de metileno - en azul. Tales cambios indican la imposibilidad de usar medios para el cultivo de microbios anaerobios.
Ayuda a reducir el potencial redox de introducir en el medio al menos un 0,05% de agar, que al aumentar su viscosidad ayuda a reducir el aporte de oxígeno. Esto, a su vez, también se logra mediante el uso de medios de cultivo frescos (a más tardar dos horas después de la producción) y reducidos.
Cabe señalar que debido a las peculiaridades del tipo de metabolismo fermentativo de las bacterias anaerobias, requieren medios más ricos en nutrientes y vitaminas. Los más utilizados son las infusiones de cardio-cerebro e hígado, extractos de soja y levadura, digerido hidrolítico de caseína, peptona, triptona. Es obligatorio agregar factores de crecimiento como tween-80, hemina, menadiona, sangre entera o hemolizada.
El aislamiento de un cultivo puro de microorganismos aerobios consta de varios pasos. El primer día (etapa 1 del estudio), el material patológico se introduce en un recipiente estéril (tubo de ensayo, matraz, vial). Se estudia su apariencia, consistencia, color, olor y otros signos, se prepara un frotis, se pinta y se examina al microscopio. En algunos casos (gonorrea aguda, peste), en esta etapa es posible realizar un diagnóstico previo, y además, seleccionar el medio sobre el cual se sembrará el material. Lo tomé con un asa bacteriológica (que se usa con mayor frecuencia), con una espátula siguiendo el método Drygalsky, con un hisopo de gasa de algodón. Las copas se cierran, se dan la vuelta, se firman con un lápiz especial y se colocan en un termostato a la temperatura óptima (37 °C) durante 18-48 años. El objetivo de la etapa es obtener colonias aisladas de microorganismos. Sin embargo, a veces, para amontonar el material, se siembra en medios nutritivos líquidos.
Los frotis se preparan a partir de colonias sospechosas, se tiñen con el método de Gram para estudiar las propiedades morfológicas y tintóreas de los patógenos, y las bacterias móviles se examinan en una gota "colgante" o "aplastada". Estos signos tienen un valor diagnóstico extremadamente grande en la caracterización de ciertos tipos de microorganismos. Los restos de las colonias estudiadas se retiran cuidadosamente de la superficie del medio sin tocar las demás y se inoculan en agar inclinado o en sectores de una placa de Petri con un medio nutritivo para obtener un cultivo puro. Los tubos de ensayo o los platos con cultivos se colocan en un termostato a la temperatura óptima durante 18 a 24 horas.
En medios nutritivos líquidos, las bacterias también pueden crecer de manera diferente, aunque las características de las manifestaciones de crecimiento son más pobres que en los sólidos.
Las bacterias son capaces de provocar una turbidez difusa del medio, mientras que su color puede no cambiar o adquirir el color del pigmento. Este patrón de crecimiento se observa con mayor frecuencia en la mayoría de los microorganismos anaerobios facultativos.
A veces se forma un precipitado en el fondo del tubo. Puede ser desmenuzable, homogéneo, viscoso, fangoso, etc. El medio que se encuentra encima puede permanecer transparente o volverse turbio. Si los microbios no forman pigmento, el precipitado tiene un color lívido o amarillento. Como regla general, las bacterias anaerobias crecen en un rango similar.
El crecimiento de la pared se manifiesta por la formación de escamas, granos adheridos a las paredes internas del tubo de ensayo. El medio permanece transparente.
Las bacterias aeróbicas tienden a crecer en la superficie. A menudo se forma una delicada película incolora o azulada en forma de una capa apenas perceptible en la superficie, que desaparece cuando se sacude o agita el medio. La película puede ser húmeda, gruesa, tener una consistencia tejida y viscosa y adherirse al bucle, estirándose. Sin embargo, también existe una película densa, seca y quebradiza, cuyo color depende del pigmento, que es producido por microorganismos.
Si es necesario, se hace un frotis, se tiñe, se examina al microscopio y los microorganismos se siembran con un asa en la superficie de un medio nutritivo denso para obtener colonias aisladas.
Al tercer día (etapa 3 del estudio), se estudia la naturaleza del crecimiento de un cultivo puro de microorganismos y se lleva a cabo su identificación.
En primer lugar, se presta atención a las características del crecimiento de los microorganismos en el medio y se realiza un frotis, tiñéndolo con el método de Gram, para comprobar la pureza del cultivo. Si al microscopio se observan bacterias del mismo tipo de morfología, tamaño y propiedades tintóreas (capacidad de teñir), se concluye que el cultivo es puro. En algunos casos, ya por la apariencia y características de su crecimiento, se puede sacar una conclusión sobre el tipo de patógenos aislados. La determinación de las especies de bacterias por sus características morfológicas se denomina identificación morfológica. La determinación del tipo de patógenos por sus características culturales se denomina identificación cultural.
Sin embargo, estos estudios no son suficientes para llegar a una conclusión final sobre el tipo de microbios aislados. Por lo tanto, estudian las propiedades bioquímicas de las bacterias. Son bastante variados.
Muy a menudo, se estudian las propiedades sacarolíticas, proteolíticas, peptolíticas, hemolíticas, la formación de descarboxilasa, oxidasa, catalasa, plasmacoagulasa, DNasa, enzimas fibrinolisina, la reducción de nitratos a nitritos y similares. Para ello, existen medios nutrientes especiales que se inoculan con microorganismos (serie Hiss abigarrada, MPB, suero cuajado, leche, etc.).
La determinación del tipo de patógeno por sus propiedades bioquímicas se denomina identificación bioquímica.
MÉTODOS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE CULTIVO DE BACTERIAS PURAS Para un cultivo exitoso, además de los medios correctamente seleccionados y la inoculación correctamente realizada, son necesarias condiciones óptimas: temperatura, humedad, aireación (suministro de aire). El cultivo de anaerobios es más difícil que el de aerobios; se utilizan varios métodos para eliminar el aire del medio nutritivo. El aislamiento de ciertos tipos de bacterias (cultivo puro) del material de prueba, que generalmente contiene una mezcla de varios microorganismos, es una de las etapas de cualquier estudio bacteriológico. Un cultivo microbiano puro se obtiene de una colonia microbiana aislada. Cuando se aísla un cultivo puro de la sangre (hemocultivo), es un "crecimiento" preliminar en un medio líquido: se inoculan 10–15 ml de sangre estéril en 100–150 ml de un medio líquido. La proporción de sangre sembrada y medio nutritivo 1:10 no es accidental: así es como se logra la dilución de la sangre (la sangre sin diluir tiene un efecto perjudicial sobre los microorganismos). Etapas de aislamiento de un cultivo puro de bacterias Etapa I (material nativo) Microscopía (idea aproximada de la microflora). Siembra en medios nutritivos densos (obtención de colonias). Etapa II (colonias aisladas) Estudio de colonias (propiedades de cultivo de bacterias). Estudio microscópico de microbios en un frotis teñido (propiedades morfológicas de las bacterias). Inoculación en agar nutritivo inclinado para aislar un cultivo puro. Etapa III (cultivo puro) Determinación de las propiedades culturales, morfológicas, bioquímicas y de otro tipo para la identificación de un cultivo bacteriano IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS La identificación de cultivos bacterianos aislados se lleva a cabo mediante el estudio de la morfología de las bacterias, sus características culturales, bioquímicas y otras características inherentes a cada especies.
antígenos- sustancias genéticamente extrañas que, cuando se introducen en el organismo de un animal o de un ser humano, provocan una respuesta inmunitaria específica - la síntesis de anticuerpos, la formación de linfocitos T sensibilizados, memoria inmunologica o tolerancia. Las sustancias extrañas son estructuras químicas que no están presentes en el cuerpo. Extraños al cuerpo humano son virus, microorganismos, así como células, tejidos, órganos de animales y otras personas. Los antígenos tienen varios receptores para unirse a los anticuerpos y pueden reaccionar con ellos tanto en el cuerpo animal o humano (in vivo) como fuera del cuerpo, in vitro (in vitro).
anticuerpos- proteínas de alto peso molecular de la fracción de globulina del suero sanguíneo. Los anticuerpos se sintetizan bajo la influencia de un antígeno y pueden reaccionar específicamente (combinarse) con el antígeno correspondiente. Todos los anticuerpos tienen una estructura de inmunoglobulina característica; difieren en aspectos inmunológicos, biológicos y propiedades físicas; y se dividen en 5 clases: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
Reacciones serológicas
En la práctica de laboratorio, utilizan reacciones serológicas- reacciones de laboratorio entre antígenos y anticuerpos, que conducen a cambios registrados en el sistema en estudio. Estas reacciones se denominan serológicas, ya que para su producción se utiliza suero (suero) que contiene anticuerpos.
Pruebas serológicas realizadas para detectar anticuerpos específicos y antígeno patógeno en enfermedades infecciosas - más de métodos disponibles diagnóstico de laboratorio que la detección bacteriológica del patógeno. En algunos casos, los estudios serológicos siguen siendo el único método de diagnóstico enfermedades infecciosas.
Algunos métodos para la detección de anticuerpos utilizados en la práctica de laboratorio
Todas las reacciones serológicas se basan en la interacción de un antígeno y un anticuerpo con la formación de complejos inmunes que pueden detectarse en pruebas in vitro (es decir, "in vitro" - fuera de un organismo vivo). Las reacciones antígeno-anticuerpo en el sistema in vitro pueden ir acompañadas de varios fenómenos: aglutinación, precipitación, lisis y otros. Manifestaciones externas reacciones dependen de las propiedades fisicoquímicas del antígeno (tamaño de las partículas, estado fisico), clase y tipo de anticuerpos, así como las condiciones experimentales (consistencia del medio, concentración de sal, pH, temperatura).
1. Reacción de unión del complemento
Complementar es un sistema de proteínas del plasma sanguíneo, que incluye 9 componentes indicados por la letra C (C1, C2, C3,... C9), factor B, factor D y una serie de proteínas reguladoras. Algunos de estos componentes consisten en 2-3 proteínas, por ejemplo, C1 es un complejo de tres proteínas. Estas proteínas circulan en el torrente sanguíneo y están presentes en las membranas celulares. el complemento es sistema esencial tanto la inmunidad innata como la adquirida. Este sistema está diseñado para proteger al organismo de la acción de agentes extraños y está involucrado en la ejecución de la respuesta inmunitaria del organismo. El complemento fue descubierto a finales del siglo XIX por el científico belga J. Borde.
Reacción de fijación del complemento (CFR)- una prueba serológica utilizada para cuantificar anticuerpos y antígenos fijadores del complemento. Descrito por primera vez por Bordet y Zhangu (Bordet - Gengou) en 1901. RSK se basa en que el complejo antígeno-anticuerpo es capaz de absorber el complemento que se añade a la mezcla de reacción. Cuando los antígenos y los anticuerpos se corresponden entre sí, forman un complejo inmunitario al que se une el complemento. El complejo inmune específico adsorbe el complemento agregado al sistema, es decir, unión del complemento por el complejo antígeno-anticuerpo. Cuantos más anticuerpos, más complemento se fija. Si no se forma el complejo antígeno-anticuerpo, el complemento permanece libre.
La complejidad de la CSC es que la reacción de formación del complejo "antígeno-anticuerpo-complemento" es invisible. Se utiliza un sistema hemolítico indicador adicional para identificar los componentes de la reacción. Con la ayuda de la reacción de hemólisis, cuantificación Residuo del complemento después del final de la reacción del antígeno con el antisuero.
La prueba de fijación del complemento (ECA) se usa para detectar anticuerpos contra un antígeno específico o determinar el tipo de antígeno por un anticuerpo conocido. Esta compleja reacción serológica involucra dos sistemas y complemento. El primer sistema - bacteriológico (principal), consiste en un antígeno y un anticuerpo. El segundo sistema es hemolítico (indicador). Incluye eritrocitos de oveja (antígeno) y su correspondiente suero hemolítico (anticuerpo).
RSK se coloca en dos pasos: primero, el antígeno se combina con el suero sanguíneo de prueba, en el que se buscan anticuerpos y luego se agrega el complemento. Si el antígeno y el anticuerpo coinciden, se forma un complejo inmunitario que se une al complemento. En ausencia de anticuerpos en el suero, el complejo inmune no se forma y el complemento permanece libre. Dado que el proceso de adsorción del complemento por parte del complejo es visualmente invisible, se agrega un sistema hemo para revelar este proceso.
Debido a su alta sensibilidad, la reacción de fijación del complemento (CFR) se utiliza tanto para diagnóstico serológico infecciones bacterianas y virales, condiciones alérgicas y para la identificación de antígenos (cultivo bacteriano aislado).
Reacción de precipitación (RP)(del latín praecipitatio - precipitación, caída) se basa en la precipitación de un complejo inmunitario específico que consta de un antígeno soluble y un anticuerpo específico en presencia de un electrolito. Como resultado de la reacción, se forma un anillo turbio o un precipitado suelto: un precipitado. Se produce una reacción de precipitación entre un antígeno soluble en agua y un anticuerpo, lo que da lugar a grandes complejos que precipitan
3. Reacción de floculación
Reacción de floculación (según Ramón)(del latín floccus - copos de lana, flóculos - tiras, copos; floculación - la formación de agregados floculantes sueltos (flóculos) a partir de pequeñas partículas de la fase dispersa) - la aparición de opalescencia o masa floculante (inmunoprecipitación) en un tubo de ensayo durante la reacción de toxina - antitoxina o anatoxina - antitoxina. Se utiliza para determinar la actividad del suero antitóxico o toxoide.
La reacción de floculación se basa en la detección de la floculación "inicial": turbidez durante la formación de un complejo de exotoxina (anatoxina) + antitoxina en las proporciones cuantitativas óptimas de los ingredientes.
4. Reacción de aglutinación
Aglutinación(del latín agglutinatio - unión) es la reacción de la interacción de un antígeno con un anticuerpo específico, que se manifiesta en forma de unión. En este caso, los antígenos en forma de partículas-corpúsculos (células microbianas, eritrocitos, etc.) se unen mediante anticuerpos y precipitan (aglutinan) en forma de escamas. Los aglutinados suelen ser visibles a simple vista. Para que se produzca la reacción es necesaria la presencia de electrolitos (por ejemplo, solución isotónica de cloruro de sodio), acelerando el proceso de aglutinación.
Mediante el test de aglutinación (RA), reactio agglutinationis (test de aglutinación en inglés), se detectan anticuerpos o antígenos corpusculares. Dependiendo del tipo de inmunodiagnóstico que se utilice, existen reacciones de aglutinación microbiana, hemaglutinación, aglutinación en látex, coaglutinación, etc.
5. Nombre de los anticuerpos implicados en las reacciones de precipitación
Los anticuerpos involucrados en reacciones sedimentarias recibieron el nombre tradicional por su interacción con el antígeno:
aglutininas - causan la aglutinación del antígeno corpuscular - aglutinógeno y precipitación del complejo antígeno-anticuerpo (aglutinado);
precipitinas - forman un precipitado con un antígeno soluble - precipitinógeno.
Las bacteriolisinas (causan la lisis de las bacterias) y las hemolisinas (causan la lisis de los glóbulos rojos) están involucradas en las reacciones líticas.
Índice de materias de la asignatura "Métodos de detección de virus. Métodos de diagnóstico de micosis (enfermedades fúngicas). Métodos de detección de protozoos.":Métodos serológicos para el diagnóstico de infecciones virales. Inhibición de la hemaglutinación. Inhibición del efecto citopático por interferencia viral. Inmunofluorescencia directa. Microscopía inmunoelectrónica.
con la mayoria infecciones virales desarrollar reacciones inmunitarias aplicado a diagnóstico. Las respuestas celulares suelen evaluarse en pruebas de citotoxicidad de los linfocitos frente a agentes infecciosos o células diana infectadas por ellos, o la capacidad de los linfocitos para responder a diversos antígenos y mitógenos. En el trabajo de los laboratorios prácticos, rara vez se determina la gravedad de las reacciones celulares. Los métodos para identificar los AT antivirales se han generalizado.
RN se basa en supresión del efecto citopatógeno después de mezclar el virus con AT específico. El virus desconocido se mezcla con antisueros comerciales conocidos y, después de una incubación adecuada, se introduce en la monocapa celular. La ausencia de muerte celular indica un desajuste entre el agente infeccioso y los anticuerpos conocidos.
Inhibición de la hemaglutinación
RTGA se utiliza para identificar virus capaz de aglutinar varios eritrocitos. Para ello, el medio de cultivo que contiene el patógeno se mezcla con un antisuero comercial conocido y se introduce en el cultivo celular. Después de la incubación, se determina la capacidad de hemaglutinación del cultivo y, en su ausencia, se llega a una conclusión sobre la falta de coincidencia del virus con el antisuero.
Inhibición del efecto citopático por interferencia del virus.
La reacción de inhibición del efecto citopático debido a la interferencia de virus. Se utiliza para identificar un patógeno que interfiere con un virus citopatogénico conocido en un cultivo de células susceptibles. Para ello, se introduce un suero comercial (por ejemplo, al virus de la rubéola si se sospecha) en el medio de cultivo que contiene el virus en estudio, se incuba e infecta el segundo cultivo; después de 1-2 días, se le introduce un virus citopatogénico conocido (por ejemplo, cualquier virus ECHO). En presencia de un efecto citopatogénico, se concluye que el primer cultivo estaba infectado con un virus correspondiente al AT aplicado.
Inmunofluorescencia directa
Entre otras pruebas, la más utilizada reacción de inmunofluorescencia directa(el más rápido, más sensible y reproducible). Por ejemplo, la identificación de CMV por su efecto citopatogénico requiere al menos 2-3 semanas, y cuando se utilizan anticuerpos monoclonales marcados, la identificación es posible después de 24 horas.Examinar mediante microscopía de fluorescencia (permite detectar la presencia de fluorescencia de las células infectadas) .
Microscopía inmunoelectrónica
Microscopía inmunoelectrónica(similar al método anterior) le permite identificar diferentes tipos virus detectados por microscopía electrónica (por ejemplo, varios tipos de herpesvirus), lo que no se puede hacer en función de las características morfológicas. Se utilizan antisueros marcados en lugar de antisueros para la identificación. diferentes caminos AT, pero la complejidad y el alto costo del método limitan su aplicación.