Pruebas serológicas utilizadas para diagnosticar infecciones virales. Método serológico para el diagnóstico de infecciones virales Método serológico para el diagnóstico de infecciones virales
Se basa en la determinación de anticuerpos antivirales en la sangre del paciente en reacciones serológicas utilizando antígenos virales específicos: diagnósticos o sistemas de prueba especiales. Las reacciones serológicas en infecciones virales se ponen en un medio líquido (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), en un gel (RPG, RRG, RVIEF) o en un soporte de fase sólida (por ejemplo, en las paredes de un pozo de una placa de poliestireno con fijación de uno de los componentes de la respuesta inmune: antígeno o anticuerpo). Se conocen métodos en fase sólida como ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
A menudo, debido a la presencia en la sangre de la mayoría gente sana anticuerpos antivirales naturales, el diagnóstico serológico de infecciones virales se basa en el estudio sueros emparejados, tomado al comienzo y en el apogeo de la enfermedad o durante el período de convalecencia para determinar el aumento en el título de anticuerpos. Un aumento en el título de anticuerpos de cuatro veces o más se considera significativo desde el punto de vista diagnóstico.
El aumento de la sensibilidad de los métodos serológicos se logra mediante la adsorción de antígenos o anticuerpos en eritrocitos (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), marcados con enzimas (ELISA), isótopos radiactivos (RIA, RPG) o fluorocromos (RIF), El principio de lisis de eritrocitos también se utiliza (como un sistema indicador) durante la interacción de antígenos y anticuerpos en presencia de complemento (RSK, RRG).
Reacción de fijación del complemento (CFR) en forma de fijación del complemento en frío (durante la noche a una temperatura de +4 0 C) se usa a menudo en virología para el diagnóstico retrospectivo de varias infecciones virales y para la determinación de antígenos específicos de virus en materiales de pacientes .
Reacción de hemólisis radial (RRH) en gel de agarosa se basa en el fenómeno de hemólisis de los eritrocitos sensibilizados por un antígeno bajo la influencia de anticuerpos específicos del virus en presencia de complemento y se utiliza para el diagnóstico serológico de infecciones por influenza, SARS, rubéola, paperas y togavirus.
Para preparar la reacción, se añaden 0,1 ml de antígeno viral sin diluir a eritrocitos de oveja (0,3 ml de una suspensión al 10%) y la mezcla se incuba durante 10 minutos a temperatura ambiente. Se añaden 0,3 ml de eritrocitos sensibilizados y 0,1 ml de complemento a agarosa al 1,2% a una temperatura de 42 0 C, se vierte la mezcla en portaobjetos de vidrio o en pocillos de placas de poliestireno, se cortan agujeros en el gel de agarosa congelado con un perforar y rellenar con los sueros estudiados y de control. Los vasos o paneles se cierran con una tapa y se colocan en una cámara húmeda durante 16-18 horas en un termostato. La contabilidad de la reacción se lleva a cabo de acuerdo con el diámetro de la zona de hemólisis alrededor de los orificios llenos de suero. No hay hemólisis en el control.
Se utiliza para diagnosticar enfermedades virales. siguientes métodos:
1) Viroscópico.
2) Microscopía inmunoelectrónica.
3) Virológico.
4) Serológico.
5) Inmunofluorescente.
6) Biológico.
7) Uso de sondas de ADN (ARN).
8) Reacción en cadena de la polimerasa.
La reproducción (reproducción) de virus en cultivo celular se juzga por el efecto citopático (CPE), que se puede detectar microscópicamente y se caracteriza cambios morfológicos células.
La naturaleza del CPD de los virus se utiliza tanto para su detección (indicación) como para su identificación tentativa, es decir, determinar su especie.
Métodos de detección de virus:
1) Reacción de hemadsorción - basada en la capacidad de la superficie de las células en las que se reproducen para adsorber eritrocitos - la reacción de hemadsorción. Para ponerlo en un cultivo de células infectadas con virus, se agrega una suspensión de eritrocitos y después de un tiempo de contacto, las células se lavan con solución isotónica de cloruro de sodio. Los eritrocitos adheridos permanecen en la superficie de las células afectadas por el virus.
2) Reacción de hemaglutinación (RG). Se utiliza para detectar virus en el líquido de cultivo de cultivos celulares o líquido corionallantoico o amniótico de un embrión de pollo.
Los métodos serológicos se pueden utilizar para detectar tanto anticuerpos específicos como antígenos virales en el material de prueba. Para estos fines, se pueden utilizar todas las reacciones serológicas conocidas:
1) Reacción de unión del complemento.
2) La reacción de hemaglutinación pasiva y sus variantes (PHAg, PHAt).
3) Reacción de inhibición de la hemaglutinación.
4) La reacción de hemaglutinación de adhesión inmune (el complejo antígeno + anticuerpo en presencia de complemento se adsorbe sobre los eritrocitos).
5) Reacciones de precipitación en gel.
6) Reacciones de neutralización de virus.
7) Método radioinmune.
8) Métodos inmunoensayo enzimático.
De estos métodos, los métodos de inmunoensayo enzimático, que se distinguen por su alta especificidad y facilidad de uso, son cada vez más populares.
7. Reacción de hemaglutinación, su mecanismo en virus gripales. Reacción de inhibición de la hemaglutinación, su aplicación práctica.
Reacción de hemaglutinación (RG). Se utiliza para detectar virus en el líquido de cultivo de cultivos celulares o líquido corionallantoico o amniótico de un embrión de pollo.
8. Características de la inmunidad antiviral. El papel de la fagocitosis y los factores humorales en la inmunidad. Interferones, características de las principales propiedades, clasificación. Características de la acción de los interferones sobre los virus. .
Todos los sistemas inmunológicos están involucrados en la protección del cuerpo contra los virus, pero la inmunidad antiviral tiene características específicas significativas. Están determinados por el hecho de que, en primer lugar, no son los sistemas del complemento y los macrófagos los que reaccionan a la penetración del virus en el cuerpo, sino los sistemas de interferones y células T-killer. Otra característica de la formación de la inmunidad se debe al hecho de que los virus tienen un efecto antigénico débil sobre los linfocitos B, y para su activación, proliferación y diferenciación, la participación de los ayudantes T y, en consecuencia, la presentación del antígeno viral procesado. (fragmentos peptídicos) con la participación de moléculas MHC de clase II. Por tanto, el papel de los macrófagos y otras células presentadoras de antígenos no es tanto en la fagocitosis en sí, sino en el procesamiento y presentación del antígeno.
El sistema de los interferones, que suprimen la reproducción intracelular de los virus, reacciona ante todo a la penetración del virus. Además, los inhibidores a y b en el suero sanguíneo tienen un efecto antiviral. Inhibidor alfa: un sustrato termoestable, forma parte de las a-globulinas, evita la adsorción de virus en la célula, es destruido por la neuraminidasa de orto y paramixovirus. Inhibidor beta: mucopéptido termolábil, forma parte de las globulinas b, inhibe la multiplicación de orto y paramixovirus.
Sin embargo, los interferones y los inhibidores no fueron suficientes para proteger contra los virus, por lo que la naturaleza creó otro mecanismo de defensa muy poderoso a nivel corporal contra los virus. Se presenta principalmente Linfocitos T-citotóxicos y otras células asesinas. Estas células reconocen todos los antígenos extraños, incluidos los virales, representados por moléculas MHC de clase I. La principal importancia biológica de las células T asesinas radica en la detección y destrucción de cualquier célula infectada con antígenos extraños.
El interferón es una familia de glicoproteínas que son sintetizadas por las células sistema inmunitario Y tejido conectivo. Según qué células sintetizan interferón, hay tres tipos: ?, ? y?-interferones.
El interferón alfa es producido por los leucocitos y se llama leucocito; el interferón beta se llama fibroblástico, ya que es sintetizado por fibroblastos, células del tejido conectivo, y el interferón gamma se llama inmune, ya que es producido por linfocitos T activados, macrófagos, asesinos naturales, es decir, células inmunes.
La producción de interferón aumenta considerablemente cuando se infecta con virus, además del efecto antiviral, el interferón tiene protección antitumoral, ya que retrasa la proliferación (reproducción) de células tumorales, así como la actividad inmunomoduladora, estimulando la fagocitosis, asesinos naturales, regulando la formación de anticuerpos por las células B, activando la expresión del complejo mayor de histocompatibilidad.
Mecanismo de acción. El interferón no actúa directamente sobre el virus fuera de la célula, sino que se une a receptores celulares especiales y afecta el proceso de reproducción del virus dentro de la célula en la etapa de síntesis de proteínas.
Virología privada
1. Virus que causan infecciones respiratorias agudas (IRA). Clasificación. características generales ortomixovirus. La estructura del virión de influenza. Características de su genoma y la puesta en práctica de la información contenida en él. Replicación del ARN del virión.
1. Virus: agentes causantes de infecciones respiratorias agudas. clasificación.
Los agentes causantes de las IRA son los siguientes virus:
1. Virus de la influenza A, B, C (Orthomyxoviridae)
2. Paramixovirus (Paramyxoviridae): esta familia incluye tres géneros: paramixovirus: virus de parainfluenza humana (VPH) tipos 1, 2, 3, 4, enfermedad de Newcastle, parainfluenza aviar y paperas; Neumovirus - virus respiratorio sincitial (RS-virus); El morbillivirus es el virus del sarampión.
3. Coronavirus respiratorios (Coronaviridae).
4. Reovirus respiratorios (Reoviridae).
5. Picornavirus (Picornaviridae).
virus de la gripe A
El virión tiene forma esférica y un diámetro de 80-120 nm. El genoma del virus está representado por un ARN negativo fragmentado (8 fragmentos) monocatenario con un PM total de 5 MD. El tipo de simetría de la nucleocápside es helicoidal. Virion Tiene una supercápside (membrana) que contiene dos glicoproteínas: hemaglutinina y neuraminidasa, que sobresalen por encima de la membrana en forma de varios picos.
Los virus son los agentes causantes de las enfermedades respiratorias agudas. Características de la manifestación de enfermedades causadas por virus influenza, parainfluenza, rinovirus, virus respiratorio sincitial y adenovirus. Métodos de laboratorio para su diagnóstico.
El virión tiene forma esférica y un diámetro de 80-120 nm. El genoma del virus está representado por un ARN negativo fragmentado (8 fragmentos) monocatenario con un PM total de 5 MD. El tipo de simetría de la nucleocápside es helicoidal. El virión tiene una supercápside (membrana) que contiene dos glicoproteínas, hemaglutinina y neuraminidasa, que sobresalen por encima de la membrana en forma de varios picos.
En los virus de influenza A de humanos, mamíferos y aves, se encontraron 13 tipos de hemaglutinina que difieren en el antígeno, a los que se les asignó una numeración continua (de H1 a H13).
La neuraminidasa (N) es un tetrámero con un peso molecular de 200-250 kD, cada monómero tiene un peso molecular de 50-60 kD.
El virus de la influenza A tiene 10 variantes diferentes de neuraminidasa
Diagnóstico de laboratorio. El material para el estudio es la descarga de la nasofaringe, que se obtiene por lavado o usando hisopos de gasa de algodón, y sangre. Se utilizan los siguientes métodos de diagnóstico:
1. Virológica: infección de embriones de pollo, cultivos de células renales de monos verdes (Vero) y perros (MDSC). Los cultivos celulares son particularmente efectivos para el aislamiento de virus A (H3N2) y B.
2. Serológico: detección de anticuerpos específicos y aumento de su título (en sueros pareados) mediante RTGA, RSK, inmunoensayo enzimático.
3. Como diagnóstico acelerado, se utiliza un método inmunofluorescente, que permite detectar rápidamente el antígeno viral en frotis-improntas de la mucosa nasal o en hisopos de la nasofaringe de los pacientes.
4. Para la detección e identificación del virus (antígenos virales), se han propuesto métodos de sonda de ARN y PCR.
Profilaxis específica
1) vivir del virus atenuado; 2) mataron todo el virión; 3) vacuna de subvirión (a partir de viriones divididos); 4) vacuna de subunidades que contiene solo hemaglutinina y neuraminidasa.
Virus de la influenza (ortomixovirus). Características generales. Proteínas de la supercápside, sus funciones, importancia de la variabilidad (cambio y deriva) para la epidemiología de la influenza. Métodos de diagnóstico de laboratorio. Vacunas utilizadas para prevenir la influenza.
Enfermedad infecciosa aguda, con fiebre, daño hepático. antroponosis.
Taxonomía, morfología, estructura antigénica: Familia Picornaviridae, género Hepatovirus. La especie tipo tiene un serotipo. Es un virus que contiene ARN, simplemente organizado, tiene un antígeno específico del virus.
Cultivo: El virus se cultiva en cultivos celulares. El ciclo de reproducción es más largo que el de los enterovirus, efecto citopático no expresado.
Resistencia: Resistente al calor; inactivado por ebullición durante 5 min. Relativamente estable en el medio ambiente (agua).
Epidemiología. La fuente son los pacientes. El mecanismo de infección es fecal-oral. Los virus se excretan en las heces al inicio de las manifestaciones clínicas. Con la aparición de la ictericia, la intensidad del aislamiento del virus disminuye. Los virus se transmiten a través del agua, productos alimenticios, manos.
La mayoría de los niños de 4 a 15 años están enfermos.
Diagnóstico microbiológico. El material para el estudio es suero y heces. El diagnóstico se basa principalmente en la determinación de IgM en sangre mediante ELISA, RIA e inmunomicroscopía electrónica. Los mismos métodos pueden detectar el antígeno viral en las heces. Estudio virológico no llevar a cabo.
3. Diagnóstico virológico de influenza. Aislamiento del virus, determinación de su tipo. Métodos serológicos para el diagnóstico de influenza: RSK, RTGA. Un método de diagnóstico acelerado que utiliza anticuerpos fluorescentes.
Diagnóstico microbiológico. El diagnóstico de "influenza" se basa en (1) el aislamiento e identificación del virus, (2) la determinación de antígenos virales en las células del paciente, (3) la búsqueda de anticuerpos específicos del virus en el suero del paciente. Al seleccionar material para la investigación, es importante obtener células afectadas por virus, ya que es en ellas donde se produce la replicación del virus. Material para la investigación - secreción nasofaríngea. Para determinar los anticuerpos, se examinan los sueros sanguíneos emparejados del paciente.
Diagnóstico exprés. Los antígenos virales se detectan en el material de prueba mediante RIF (opciones directas e indirectas) y ELISA. El genoma de los virus se puede detectar en el material mediante PCR.
Método virológico. El modelo de laboratorio óptimo para el cultivo de cepas es el embrión de pollo. La indicación de virus se realiza en función del modelo de laboratorio (por muerte, por cambios clínicos y patomorfológicos, CPP, formación de "placas", "muestra de color", RHA y hemadsorción). Los virus se identifican por su estructura antigénica. Se utilizan RSK, RTGA, ELISA, RBN (reacción de neutralización biológica) de virus, etc. Por lo general, el tipo de virus de influenza se determina en RSK, el subtipo en RTGA.
Método serológico. El diagnóstico se realiza con un aumento de cuatro veces en el título de anticuerpos en sueros pareados del paciente, obtenidos a intervalos de 10 días. Aplicar virus RTGA, RSK, ELISA, RBN.
Adenovirus, características de propiedades, composición del grupo. Adenovirus patógenos para humanos. Características de la patogénesis de las infecciones por adenovirus, métodos de cultivo de adenovirus. Diagnóstico de enfermedades por adenovirus.
La familia Adenoviridae se divide en dos géneros: Mastadenovirus - adenovirus de mamíferos, incluye adenovirus humanos (41 serovariantes), monos (24 serovariantes), así como bovinos, equinos, ovinos, porcinos, perros, ratones, anfibios; y Aviadenovirus - adenovirus aviares (9 serotipos).
Los adenovirus carecen de supercápside. El virión tiene la forma de un icosaedro, un tipo de simetría cúbica, su diámetro es de 70-90 nm. La cápside consta de 252 capsómeros con un diámetro de 7-9 nm.
El virión contiene al menos 7 antígenos. Período de incubación 6-9 días. El virus se replica en células epiteliales tracto respiratorio superior, membranas mucosas de los ojos. Puede penetrar en los pulmones, afectar los bronquios y los alvéolos, causar neumonía grave; una propiedad biológica característica de los adenovirus es el tropismo por el tejido linfoide.
Las enfermedades por adenovirus pueden caracterizarse como febriles con inflamación catarral membrana mucosa de las vías respiratorias y los ojos, acompañada de un aumento en el tejido linfoide submucoso y regional ganglios linfáticos.
Diagnóstico de laboratorio. 1. Detección de antígenos virales en células afectadas mediante métodos de inmunofluorescencia o IFM. 2. Aislamiento del virus. El material para el estudio es la descarga de la nasofaringe y la conjuntiva, sangre, heces (el virus se puede aislar no solo al comienzo de la enfermedad, sino también entre los días 7 y 14). Para aislar el virus se utilizan cultivos primarios de células tripsinizadas (incluso diploides) de embrión humano, que son sensibles a todas las serovariantes de adenovirus. Los virus se detectan por su efecto citopático y por CSC, ya que todos comparten un antígeno fijador de complemento común. La identificación se lleva a cabo mediante antígenos específicos de tipo utilizando RTGA y pH en cultivo celular. 3. Detección de un aumento en el título de anticuerpos en sueros emparejados de un paciente usando RSC. La determinación del aumento del título de anticuerpos específicos de tipo se realiza con serocepas de referencia de adenovirus en RTGA o RN en cultivo celular.
5. Virus Coxsackie y ECHO. Caracterización de sus propiedades. La composición de los grupos. Métodos de diagnóstico microbiológico de enfermedades causadas por los virus Coxsackie y ECHO.
Coxsackie es el más cardiotrópico de todos los enterovirus. En el 20-40% de los pacientes menores de 20 años, la infección por Coxsackie se complica con miocarditis. Los virus Coxsackie están representados por dos grupos: el grupo Coxsackie A incluye 23 serovariantes (A1-A22, 24); el grupo Coxsackie B incluye 6 serovariantes (B1-B6).
Los virus Coxsackie A y B pueden causar en humanos, además de enfermedades similares a la poliomielitis, a veces acompañadas de parálisis, y otras enfermedades diversas con una clínica peculiar: meningitis aséptica, mialgia epidémica (enfermedad de Bornholm), herpangina, enfermedad menor, gastroenteritis, infecciones respiratorias agudas, miocarditis
ECHO, que significa: E - entérico; C - citopatógeno; H - humano; O - huérfano - un huérfano. contiene 32 serotipos.
La fuente de las infecciones Coxsackie y ECHO es una persona. La infección por virus se produce por vía fecal-oral.
La patogénesis de las enfermedades causadas por los virus Coxsackie y ECHO es similar a la patogenia de la poliomielitis. Las puertas de entrada son la membrana mucosa de la nariz, la faringe, el intestino delgado, en cuyas células epiteliales, así como en el tejido linfoide, se multiplican estos virus.
La afinidad por el tejido linfoide es uno de los rasgos característicos de estos virus. Después de la reproducción, los virus penetran en la linfa y luego en la sangre, causando viremia y generalización de la infección.
Una vez en el torrente sanguíneo, los virus se diseminan por vía hematógena por todo el cuerpo, asentándose selectivamente en aquellos órganos y tejidos por los que tienen tropismo.
Métodos para el diagnóstico de enfermedades por enterovirus. utilizar el método virológico y diversas pruebas serológicas. el estudio debe realizarse en todo el grupo de enterovirus. Para su aislamiento, se utilizan contenidos intestinales, lavados y frotis de la faringe, con menos frecuencia líquido cefalorraquídeo o sangre, y en caso de muerte del paciente, se examinan trozos de tejido de diferentes órganos. Los cultivos celulares (poliovirus, ECHO, Coxsackie B y algunos serovares de Coxsackie A), así como ratones recién nacidos (Coxsackie A) se infectan con el material de prueba.
La tipificación de los virus aislados se lleva a cabo en reacciones de neutralización, RTGA, RSK, reacciones de precipitación, utilizando mezclas de referencia de sueros de varias combinaciones. Para la detección de anticuerpos en los sueros de personas con infecciones por enterovirus se utilizan las mismas pruebas serológicas (RN, pruebas de color, RTGA, RSK, reacciones de precipitación), pero para estos fines es necesario contar con sueros pareados de cada paciente (en el agudo período y después de 2-3 semanas desde el inicio de la enfermedad). Las reacciones se consideran positivas cuando el título de anticuerpos aumenta al menos 4 veces. Estos dos métodos también usan IFM (para detectar anticuerpos o antígenos).
Hepatitis B. Estructura y características de las principales propiedades del virión. Antígeno de superficie, su significado. Características de la interacción del virus con la célula. Formas de infección. Métodos de diagnóstico de laboratorio. profilaxis específica.
Virus de la hepatitis B, VHB El virión contiene tres antígenos principales
1. HBsAg - superficial (superficial), o soluble (soluble), o antígeno australiano.
2. HBcAg - antígeno central (cog-antígeno).
3. HBeAg - antígeno e, localizado en el núcleo del virión
El virión real, la partícula de Dane, tiene una forma esférica y un diámetro de 42 nm. La supercápside del virión consta de tres proteínas: la principal (principal), grande y mediana (Fig. 88.1). El genoma está encerrado en una cápside y está representado por ADN circular de doble cadena con un m.m. de 1,6 MD. El ADN consta de aproximadamente 3200 nucleótidos, pero su cadena "más" es un 20-50% más corta que la cadena "menos".
El antígeno de superficie - HBsAg - existe en forma de tres variantes morfológicamente diferentes: 1) representa la supercápside de todo el virión; 2) en en numeros grandes se presenta en forma de partículas con un diámetro de 20 nm, que tienen forma esférica; 3) en forma de hilos de 230 nm de largo. Químicamente son idénticos. HBsAg contiene un antígeno común a y dos pares de determinantes específicos de tipo mutuamente excluyentes: d/y y w/r, por lo que hay cuatro subtipos principales de HBsAg (y, en consecuencia, HBV): adw, adr, ayw y ayr. El antígeno a proporciona la formación de inmunidad cruzada general a todos los subtipos del virus.
Las proteínas que forman el antígeno de superficie existen en formas glicosiladas (gp) y no glicosiladas. Gp27, gp33, gp36 y gp42 están glicosilados (los números indican m.m. en CD). La supercápside del VHB consta de la proteína S principal o principal (92%); proteína M mediana (4%) y proteína L grande o larga (1%).
Proteína mayor - p24/gp27, Proteína grande - p39/gp42, Proteína mediana - gp33/gp36.
interacción con la célula.
1. Adsorción en la célula.
2. Penetración en la célula utilizando el mecanismo de endocitosis mediada por receptor (fosa cubierta -> vesícula bordeada -> lisosoma -> liberación de la nucleocápside y penetración del genoma viral en el núcleo del hepatocito).
3. Reproducción intracelular.
La fuente de infección con el virus de la hepatitis B es solo una persona. La infección ocurre no solo por vía parenteral, sino también sexual y verticalmente (de la madre al feto)
Actualmente, el método principal para el diagnóstico de la hepatitis B es el uso de la hemaglutinación pasiva inversa (RPHA) para detectar el virus o su antígeno de superficie, HBsAg. Como ya se señaló, la sangre contiene muchas veces más antígeno de superficie que el propio virus (100-1000 veces). Para la reacción de ROPHA se utilizan eritrocitos sensibilizados con anticuerpos contra el virus de la hepatitis B. En presencia de un antígeno en la sangre, se produce una reacción de hemaglutinación. Para detectar anticuerpos contra el antígeno viral HBsAg, varios métodos inmunológicos(RSK, RPGA, IFM, RIM, etc.)
Profilaxis específica
Las vacunas contra la hepatitis B son obligatorias y deben administrarse en el primer año de vida. Se han propuesto dos tipos de vacunas para la vacunación. Para la preparación de uno de ellos se utiliza como materia prima el plasma de portadores de virus, ya que contiene el antígeno viral en cantidades suficientes para preparar una vacuna. La principal condición para la preparación de este tipo de vacunas es su total seguridad.Para la fabricación de otro tipo de vacunas se utilizan métodos Ingeniería genética En particular, para obtener material antigénico se utiliza un clon de levadura recombinante que produce el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B.
En Rusia se han creado vacunas tanto para adultos como para recién nacidos y niños temprana edad. El ciclo completo de vacunación consta de tres inyecciones:
Dosis - inmediatamente después del nacimiento; II dosis - después de 1-2 meses; III dosis - hasta el final del 1er año de vida.
El diagnóstico serológico basado en la reacción antígeno-anticuerpo se puede utilizar para determinar ambos y desempeña un papel en la determinación de la etiología de una infección viral incluso con resultados negativos de aislamiento del virus.
Éxito diagnóstico serológico depende de la especificidad de la reacción y el cumplimiento de las condiciones temporales para la toma de sangre necesaria para la síntesis de anticuerpos por parte del cuerpo.
En la mayoría de los casos, se utilizan sueros sanguíneos emparejados, tomados a intervalos de 2 a 3 semanas. Una reacción positiva se considera al menos un aumento de 4 veces en el título de anticuerpos. Se sabe que la mayoría de los anticuerpos específicos pertenecen a las clases IgG e IgM, que se sintetizan en diferentes momentos. proceso infeccioso. Al mismo tiempo, los anticuerpos IgM son precoces y las pruebas que se utilizan para determinarlos sirven para diagnostico temprano(es suficiente examinar un suero). Los anticuerpos de la clase IgG se sintetizan más tarde y se almacenan durante mucho tiempo.
RN se utiliza para la tipificación de virus, para diagnósticos específicos de grupos, por ejemplo, infección por adenovirus, usar reacción de fijación del complemento(RSK). Los más usados son reacción de inhibición de la hemaglutinación(RTGA), RSK, RIF, reacciones pasivas Y hemaglutinación pasiva inversa(RPGA, ROPGA), varias variantes de ELISA, que en casi todas partes reemplazaron a RIA, igual en sensibilidad.
RTGA Se utiliza para diagnosticar enfermedades causadas por virus hemaglutinantes. Se basa en la unión de anticuerpos al suero del paciente del virus estándar agregado. El indicador de reacción son los eritrocitos aglutinados por el virus (formación de un "paraguas" característico) en ausencia de anticuerpos específicos y depositados en el fondo, no aglutinados si los hay.
RSK es una de las pruebas serológicas tradicionales y se utiliza para diagnosticar muchas infecciones virales. En la reacción intervienen dos sistemas: anticuerpos del suero del paciente + virus estándar y eritrocitos de oveja + anticuerpos contra ellos, así como un complemento titulado. Si los anticuerpos y el virus coinciden, este complejo se une al complemento y no se produce la lisis de los eritrocitos de oveja ( reacción positiva). Con un RSC negativo, el complemento contribuye a la lisis de los eritrocitos. La desventaja del método es su sensibilidad insuficientemente alta y la dificultad de estandarizar los reactivos.
Para tener en cuenta la importancia de RSK, así como de RTGA, es necesario titular sueros pareados, es decir, tomados al inicio de la enfermedad y durante la convalecencia.
RPGA- aglutinación de eritrocitos (o perlas de poliestireno) sensibilizados por antígenos virales en presencia de anticuerpos. Cualquier virus puede absorberse en los eritrocitos, independientemente de la presencia o ausencia de actividad hemaglutinante en ellos. Debido a la presencia de reacciones no específicas, los sueros se prueban a una dilución de 1:10 o más.
RNGA- aglutinación de eritrocitos sensibilizados por anticuerpos específicos en presencia de antígenos virales. ROPHA recibió la mayor distribución en la detección del antígeno HBs tanto en pacientes como en donantes de sangre.
SI método también ELISA Se utiliza para detectar anticuerpos en suero. ELISA para fines de diagnóstico es cada vez más importante y generalizado. El antígeno viral se absorbe en la fase sólida (el fondo de los pocillos de las placas de poliestireno o perlas de poliestireno). Cuando se agregan los anticuerpos correspondientes en el suero, se unen a los antígenos adsorbidos. La presencia de los anticuerpos deseados se detecta utilizando anti-anticuerpos (por ejemplo, humanos) conjugados con una enzima (peroxidasa). La adición de sustrato y la reacción sustrato-enzima dan color. ELISA también se puede utilizar para determinar antígenos. En este caso, los anticuerpos se adsorben en la fase sólida.
anticuerpos monoclonicos. Se han producido grandes avances en el diagnóstico de infecciones virales en la última década, cuando con el desarrollo de la investigación en ingeniería genética se desarrolló un sistema para la obtención de anticuerpos monoclonales. Por lo tanto, la especificidad y la sensibilidad de los métodos de diagnóstico para determinar antígenos virales aumentaron considerablemente. La estrecha especificidad de los monoclones, que representan una pequeña proporción de proteínas virales que pueden no estar presentes en el material clínico, se supera con éxito mediante el uso de varios anticuerpos monoclonales contra diversos determinantes virales.
reacciones inmunitarias utilizado en estudios diagnósticos e inmunológicos en personas enfermas y sanas. Para ello, aplica métodos serológicos , es decir, métodos para estudiar anticuerpos y antígenos utilizando reacciones antígeno-anticuerpo determinadas en suero sanguíneo y otros fluidos, así como en tejidos corporales.
Detección en suero sanguíneo los anticuerpos del paciente contra los antígenos del patógeno le permiten hacer un diagnóstico de la enfermedad. Los estudios serológicos también se utilizan para identificar antígenos microbianos, diversas sustancias biológicamente activas, grupos sanguíneos, antígenos tisulares y tumorales, inmunocomplejos, receptores celulares, etc.
Al aislar un microbio del paciente, el patógeno se identifica estudiando sus propiedades antigénicas utilizando sueros de inmunodiagnóstico, es decir, sueros sanguíneos de animales hiperinmunizados que contienen anticuerpos específicos. Este llamado identificación serológica microorganismos
Ampliamente utilizado en microbiología e inmunología. aglutinación, precipitación, reacciones de neutralización, reacciones en las que interviene el complemento, utilizando anticuerpos y antígenos marcados (métodos radioinmunológicos, inmunoensayo enzimático, inmunofluorescente). Las reacciones enumeradas difieren en el efecto registrado y la técnica de estadificación, sin embargo, todas se basan en la reacción de la interacción del antígeno con el anticuerpo y se utilizan para detectar tanto anticuerpos como antígenos. Las reacciones de inmunidad se caracterizan por una alta sensibilidad y especificidad.
Características de la interacción de un anticuerpo con un antígeno. son la base reacciones diagnósticas en laboratorios. Reacción in vitro entre antígeno y anticuerpo consta de una fase específica y otra no específica. EN fase específica hay una rápida unión específica del sitio activo del anticuerpo al determinante del antígeno. luego viene fase no específica - más lento, que se manifiesta por visible fenomeno fisico, por ejemplo, la formación de escamas (fenómeno de aglutinación) o precipitado en forma de turbidez. Esta fase requiere ciertas condiciones (electrolitos, pH óptimo del medio).
La unión de un determinante de antígeno (epítopo) al sitio activo de un fragmento Fab de anticuerpo se debe a las fuerzas de van der Waals, los enlaces de hidrógeno y las interacciones hidrofóbicas. La fuerza y la cantidad de antígeno unido por los anticuerpos dependen de la afinidad, la avidez de los anticuerpos y su valencia.
Inmunodeficiencias, tanto primarias como especialmente secundarias están muy extendidas entre las personas. Son la causa de la manifestación de muchas enfermedades y condiciones patológicas, por lo tanto, requieren prevención y tratamiento con medicamentos inmunotrópicos.
34. Vacunas inactivadas (corpusculares). Recibo. Solicitud. Ventajas. Defectos.
Vacunas inactivadas (muertas, de partículas o moleculares)- preparados, como principio activo, incluidos los que mueren por acción química o de forma física cultivos de virus o bacterias patógenos (celulares, viriones) o complejos de antígenos extraídos de microbios patógenos que contienen antígenos protectores (vacunas subcelulares, subviriones).
Para aislar complejos antigénicos (glucoproteínas, LPS, proteínas) de bacterias y virus, se utilizan ácido tricloroacético, fenol, enzimas y precipitación isoeléctrica.
Se obtienen mediante el cultivo de bacterias y virus patógenos en medios nutritivos artificiales, complejos antigénicos aislados inactivados, purificados, construidos en forma de preparación líquida o liófila.
La ventaja de este tipo de vacuna es la relativa facilidad de obtención (no se requiere estudio a largo plazo ni aislamiento de cepas). Las desventajas incluyen baja inmunogenicidad, la necesidad de triple uso y alta reactogenicidad de las vacunas formalizadas. Además, en comparación con las vacunas vivas, la inmunidad que provocan es de corta duración.
Actualmente, se utilizan las siguientes vacunas muertas: tifoidea, enriquecida con antígeno Vi; vacuna contra el cólera, vacuna contra la tos ferina.
Nº 1 Pruebas serológicas utilizadas para el diagnóstico infecciones virales.
reacciones inmunitarias utilizado en estudios diagnósticos e inmunológicos en personas enfermas y sanas. Para ello, aplica métodos serológicos, es decir, métodos para estudiar anticuerpos y antígenos utilizando reacciones antígeno-anticuerpo determinadas en suero sanguíneo y otros fluidos, así como en tejidos corporales.
La detección de anticuerpos contra los antígenos del patógeno en el suero sanguíneo del paciente permite diagnosticar la enfermedad. Los estudios serológicos también se utilizan para identificar antígenos microbianos, diversas sustancias biológicamente activas, grupos sanguíneos, antígenos tisulares y tumorales, inmunocomplejos, receptores celulares, etc.
Cuando se aísla un microbio de un paciente, el patógeno se identifica estudiando sus propiedades antigénicas utilizando sueros de inmunodiagnóstico, es decir, sueros sanguíneos de animales hiperinmunizados que contienen anticuerpos específicos. Esta es la llamada identificación serológica de microorganismos.
En microbiología e inmunología, las reacciones de aglutinación, precipitación, neutralización, reacciones que involucran complemento, utilizando anticuerpos y antígenos marcados (radioinmunológicos, inmunoensayo enzimático, métodos inmunofluorescentes) son ampliamente utilizados. Las reacciones enumeradas difieren en el efecto registrado y la técnica de estadificación, sin embargo, todas se basan en la reacción de la interacción del antígeno con el anticuerpo y se utilizan para detectar tanto anticuerpos como antígenos. Las reacciones de inmunidad se caracterizan por una alta sensibilidad y especificidad.
Las características de la interacción de un anticuerpo con un antígeno son la base de las reacciones de diagnóstico en los laboratorios. La reacción in vitro entre un antígeno y un anticuerpo consta de una fase específica y otra no específica. En la fase específica, se produce una rápida unión específica del sitio activo del anticuerpo al determinante del antígeno. Luego viene la fase inespecífica - más lenta, que se manifiesta por fenómenos físicos visibles, como la formación de escamas (fenómeno de aglutinación) o precipitado en forma de turbidez. Esta fase requiere ciertas condiciones (electrolitos, pH óptimo del medio).
La unión de un determinante de antígeno (epítopo) al sitio activo de un fragmento Fab de anticuerpo se debe a las fuerzas de van der Waals, los enlaces de hidrógeno y las interacciones hidrofóbicas. La fuerza y la cantidad de antígeno unido por los anticuerpos dependen de la afinidad, la avidez de los anticuerpos y su valencia.
N° 2 Los agentes causales de la leishmaniasis. Taxonomía. Característica. Diagnóstico microbiológico. Tratamiento.
Taxonomía: tipo Sarcomastigophorae, subtipo Mastigophora - flagelos, clase Zoomastigophora, orden Kinetoplastida, género Leishmania.
cultivo: Medio de cultivo NNN que contiene agar sangre de conejo desfibrinado. Leishmania también crece en la membrana corion-alantoidea del embrión de pollo y en cultivos celulares.
Epidemiología: en países con un clima cálido. El mecanismo de transmisión de patógenos es transmisible, a través de la picadura de vectores - mosquitos. Las principales fuentes de patógenos: en la leishmaniasis antroponótica cutánea - personas; con leishmaniasis zoonótica cutánea - roedores; con leishmaniasis visceral - personas; con leishmaniasis mucocutánea - roedores, animales salvajes y domésticos.
Patogénesis y clínica. Hay dos agentes causales de la leishmaniasis cutánea: L. tropica, el agente causal de la leishmaniasis antroponótica, y L. major, el agente causal de la leishmaniasis cutánea zoonótica.
La leishmaniasis cutánea antroponótica se caracteriza por un largo período de incubación, varios meses. En el sitio de la picadura de un mosquito, aparece un tubérculo, que aumenta y se ulcera después de 3 meses. Las úlceras se ubican con mayor frecuencia en la cara y las extremidades superiores, cicatrizadas al final del año. La leishmaniasis cutánea zoonótica (leishmaniasis ulcerativa temprana, úlcera de Pendinsky, forma rural) es más aguda. El período de incubación es de 2 a 4 semanas. Las úlceras exudativas se localizan más a menudo en miembros inferiores. La leishmaniasis mucocutánea es causada por la leishmania del complejo L. braziliensis; desarrolla lesiones granulomatosas y ulcerativas de la piel de la nariz, las membranas mucosas de la boca y la laringe. La leishmaniasis visceral antraponosa es causada por la leishmania del complejo L. donovani; en los pacientes, el hígado, el bazo, los ganglios linfáticos, la médula ósea y el tracto digestivo se ven afectados.
Inmunidad: persistente de por vida
En frotis (de tubérculos, contenido de úlceras, puntos de órganos), teñidos según Romanovsky-Giemsa, se encuentran pequeños leishmanias (amastigotes) de forma ovalada localizados intracelularmente. Para aislar un cultivo puro del patógeno, la inoculación se realiza en medio NNN: incubación durante 3 semanas. Los métodos serológicos no son lo suficientemente específicos. Es posible utilizar RIF, ELISA.
La prueba de alergia cutánea para TRH a leishmanina se utiliza en estudios epidemiológicos de leishmaniasis.
Tratamiento: En la leishmaniasis visceral se utilizan preparados de antimonio y diamidinas (pentamidina). Con leishmaniasis cutánea - quinacrina, anfotericina.
Prevención: destruir animales enfermos, llevar a cabo la lucha contra roedores y mosquitos. La inmunoprofilaxis de la leishmaniasis cutánea se realiza mediante la inoculación de un cultivo vivo de L. major.
BOLETO#28
№ 1Inmunoglobulinas, estructura y funciones.
Naturaleza de las inmunoglobulinas. En respuesta a la introducción de un antígeno, el sistema inmunitario produce anticuerpos, proteínas que pueden combinarse específicamente con el antígeno que provocó su formación y, por lo tanto, participar en reacciones inmunológicas. Los anticuerpos pertenecen a las \beta - globulinas, es decir, la fracción de las proteínas del suero sanguíneo que es la menos móvil en un campo eléctrico. En el cuerpo, las \beta - globulinas son producidas por células especiales: células plasmáticas. Las α-globulinas que realizan las funciones de los anticuerpos se denominan inmunoglobulinas y se indican con el símbolo Ig. Por tanto, los anticuerpos son inmunoglobulinas producidas en respuesta a la introducción de un antígeno y capaces de interaccionar específicamente con el mismo antígeno.
Funciones. La función primaria es la interacción de sus centros activos con determinantes complementarios de antígenos. Una función secundaria es su capacidad para:
Unirse al antígeno para neutralizarlo y eliminarlo del cuerpo, es decir, participar en la formación de protección contra el antígeno;
Participar en el reconocimiento de un antígeno "extraño";
Asegurar la cooperación células inmunocompetentes(macrófagos, linfocitos T y B);
Participar en diversas formas respuesta inmune (fagocitosis, función killer, GNT, HRT, tolerancia inmunológica, memoria inmunológica).
Estructura de los anticuerpos. Proteínas de inmunoglobulinas composición química pertenecen a las glicoproteínas, ya que consisten en proteínas y azúcares; construido a partir de 18 aminoácidos. Tienen diferencias de especies asociadas principalmente con un conjunto de aminoácidos. Sus moléculas tienen forma cilíndrica, son visibles en un microscopio electrónico. Hasta el 80% de las inmunoglobulinas tienen una constante de sedimentación de 7S; resistente a ácidos débiles, álcalis, calentamiento hasta 60 °C. Es posible aislar inmunoglobulinas del suero sanguíneo por métodos físicos y químicos (electroforesis, precipitación isoeléctrica con alcohol y ácidos, salinización, cromatografía de afinidad, etc.). Estos métodos se utilizan en la producción en la preparación de preparados inmunobiológicos.
Las inmunoglobulinas se dividen en cinco clases según su estructura, propiedades antigénicas e inmunobiológicas: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Las inmunoglobulinas M, G, A tienen subclases. Por ejemplo, IgG tiene cuatro subclases (IgG, IgG 2 , IgG 3 , IgG 4). Todas las clases y subclases difieren en la secuencia de aminoácidos.
Las moléculas de inmunoglobulinas de las cinco clases constan de cadenas polipeptídicas: dos cadenas pesadas idénticas H y dos cadenas ligeras idénticas - L, conectadas por puentes disulfuro. Según cada clase de inmunoglobulinas, es decir, M, G, A, E, D, distinguen cinco tipos de cadenas pesadas: ? (mú), ? (gamma), ? (alfa), ? (épsilon) y? (delta), que difieren en antigenicidad. Las cadenas ligeras de las cinco clases son comunes y vienen en dos tipos: ? (kappa) y? (lambda); Las cadenas L de inmunoglobulinas de varias clases pueden unirse (recombinarse) con cadenas H tanto homólogas como heterólogas. Sin embargo, en la misma molécula solo puede haber cadenas L idénticas (? o?). Tanto las cadenas H como las L tienen una región V variable, en la que la secuencia de aminoácidos es inestable, y una región C constante con un conjunto constante de aminoácidos. En cadenas ligeras y pesadas, se distinguen grupos NH 2 - y COOH-terminales.
¿Durante el procesamiento? El mercaptoetanol de globulina destruye los enlaces disulfuro y la molécula de inmunoglobulina se descompone en cadenas separadas de polipéptidos. Cuando se expone a la enzima proteolítica papaína, la inmunoglobulina se escinde en tres fragmentos: dos fragmentos no cristalizantes que contienen grupos determinantes para el antígeno y denominados fragmentos Fab I y II, y un fragmento Fc cristalizante. Los fragmentos FabI y FabII son similares en propiedades y composición de aminoácidos y difieren del fragmento Fc; Los fragmentos Fab y Fc son formaciones compactas interconectadas por secciones flexibles de la cadena H, por lo que las moléculas de inmunoglobulina tienen una estructura flexible.
Tanto las cadenas H como las cadenas L tienen regiones compactas separadas y conectadas linealmente llamadas dominios; hay 4 de ellos en la cadena H y 2 en la cadena L.
Los sitios activos, o determinantes, que se forman en las regiones V ocupan aproximadamente el 2 % de la superficie de la molécula de inmunoglobulina. Cada molécula tiene dos determinantes relacionados con regiones hipervariables Cadenas H y L, es decir, cada molécula de inmunoglobulina puede unirse a dos moléculas de antígeno. Por lo tanto, los anticuerpos son bivalentes.
La estructura típica de una molécula de inmunoglobulina es IgG. Las clases restantes de inmunoglobulinas difieren de las IgG en elementos adicionales de la organización de sus moléculas.
En respuesta a la introducción de cualquier antígeno, se pueden producir anticuerpos de las cinco clases. Por lo general, primero se produce IgM, luego IgG, el resto, un poco más tarde.
No. 2 El agente causante de la clamidia. Taxonomía. Característica. Diagnóstico microbiológico. Tratamiento.
Taxonomía: orden Chlamydiales, familia Chlamydaceae, género Chlamydia. El género está representado por las especies C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Las enfermedades causadas por la clamidia se llaman clamidia. Las enfermedades causadas por C. trachomatis y C. pneumoniae son antroponosis. La ornitosis, cuyo agente causal es C. psittaci, es una infección zooantroponótica.
Morfología de la clamidia: bacterias pequeñas, gram "-", forma esférica. No forman esporas, ni flagelos ni cápsulas. Pared celular: membrana de 2 capas. Tienen glicolípidos. Gram es rojo. El principal método de tinción es según Romanovsky-Giemsa.
2 formas de existencia: cuerpos elementales (partículas infecciosas inactivas, fuera de la célula); cuerpos reticulares (dentro de las células, forma vegetativa).
Cultivo: Solo se puede propagar en células vivas. EN saco vitelino embriones de pollo en desarrollo, animales susceptibles y en cultivo celular
Actividad enzimatica: pequeño. Fermentan ácido pirúvico y sintetizan lípidos. No es capaz de sintetizar compuestos de alta energía.
Estructura antigénica: Antígenos de tres tipos: lipopolisacárido termoestable específico de género (en la pared celular). Identificado con la ayuda de RSK; antígeno específico de especie de naturaleza proteica (en la membrana externa). Detectar usando RIF; antígeno específico de variante de naturaleza proteica.
factores de patogenicidad. Las proteínas de la membrana externa de la clamidia están asociadas con sus propiedades adhesivas. Estas adhesinas se encuentran solo en cuerpos elementales. La clamidia produce endotoxina. Se ha descubierto que algunas clamidias tienen una proteína de choque térmico que puede causar reacciones autoinmunes.
resistencia. Alto a varios factores ambiente externo. Resistente a bajas temperaturas, secado. Sensible al calor.
C. trachomatis es el agente causante de enfermedades del sistema genitourinario, ojos y tracto respiratorio en humanos.
El tracoma es una enfermedad infecciosa crónica caracterizada por daños en la conjuntiva y la córnea de los ojos. antroponosis. Transmitida por vía de contacto domiciliaria.
Patogénesis: afecta la membrana mucosa de los ojos. Penetra en el epitelio de la conjuntiva y la córnea, donde se multiplica, destruyendo las células. Se desarrolla queratoconjuntivitis folicular.
Diagnósticos: examen de raspados de la conjuntiva. En las células afectadas, cuando se tiñen según Romanovsky-Giemsa, se encuentran inclusiones citoplasmáticas de color púrpura, ubicadas cerca del núcleo, el cuerpo de Provachek. RIF y ELISA también se utilizan para detectar un antígeno de clamidia específico en las células afectadas. En ocasiones recurren al cultivo de clamidia tracoma en embriones de pollo o cultivo celular.
Tratamiento: antibióticos (tetraciclina) e inmunoestimulantes (interferón).
Prevención: Inespecífico.
La clamidia urogenital es una enfermedad de transmisión sexual. Esta es una enfermedad infecciosa aguda/crónica, que se caracteriza por una lesión predominante del tracto genitourinario.
La infección humana ocurre a través de las membranas mucosas del tracto genital. El principal mecanismo de infección es el contacto, el modo de transmisión es sexual.
Inmunidad: celular, con el suero de infectados - anticuerpos específicos. Después de la enfermedad transferida, no se forma.
Diagnóstico: En enfermedades de los ojos, se usa un método bacterioscópico: se detectan inclusiones intracelulares en raspados del epitelio de la conjuntiva. RIF se utiliza para detectar el antígeno de clamidia en las células afectadas. En caso de daño del tracto genitourinario, se puede aplicar un método biológico, basado en la infección con el material de prueba (raspados del epitelio de la uretra, vagina) del cultivo celular.
Declaración RIF, ELISA le permite detectar antígenos de clamidia en el material de prueba. Método serológico: para la detección de IgM contra C. trachomatis en el diagnóstico de neumonía en recién nacidos.
Tratamiento. antibióticos (azitromicina del grupo de los macrólidos), inmunomoduladores, eubióticos.
Prevención. Solo no específicos (tratamiento de pacientes), higiene personal.
El linfogranuloma venéreo es una enfermedad de transmisión sexual caracterizada por lesiones de los órganos genitales y los ganglios linfáticos regionales. El mecanismo de infección es el contacto, la vía de transmisión es sexual.
Inmunidad: Inmunidad persistente, celular y humoral.
Diagnósticos: El material para el estudio es pus, biopsia de los ganglios linfáticos afectados, suero sanguíneo. Método bacterioscópico, biológico (cultivo en el saco vitelino de un embrión de pollo), serológico (RCC con sueros apareados es positivo) y alergológico (prueba intradérmica con alérgeno de clamidia).
Tratamiento. Antibióticos - macrólidos y tetraciclinas.
Prevención: Inespecífico.
C. pneumoniae - el agente causante de la clamidia respiratoria, causa enfermedades agudas y bronquitis crónica y neumonía. antroponosis. La infección es por gotitas en el aire. Entran en los pulmones a través del tracto respiratorio superior. Causa inflamación.
Diagnósticos: establecimiento de RSK para la detección de anticuerpos específicos (método serológico). En la infección primaria se tiene en cuenta la detección de IgM. RIF también se usa para detectar antígeno de clamidia y PCR.
Tratamiento: Realizado con la ayuda de antibióticos (tetraciclinas y macrólidos).
Prevención: Inespecífico.
C. psittaci - el agente causante de la ornitosis - aguda enfermedad infecciosa, que se caracteriza por daño a los pulmones, sistema nervioso y órganos parenquimatosos (hígado, bazo) e intoxicación.
Zooantroponosis. Fuentes de infección - pájaros. El mecanismo de infección es aerogénico, la vía de transmisión es aérea. El agente causal es a través de la mucosidad. las conchas respiran. vías, en el epitelio de los bronquios, alvéolos, se multiplica, la inflamación.
Diagnósticos: El material para el estudio es sangre, esputo del paciente, suero sanguíneo para pruebas serológicas.
Se utiliza un método biológico: el cultivo de clamidia en el saco vitelino de un embrión de pollo, en cultivo celular. Método serológico. Aplicar RSK, RPHA, ELISA, utilizando suero sanguíneo pareado del paciente. Prueba de alergia intradérmica con ornitina.
Tratamiento: antibióticos (tetraciclinas, macrólidos).
BOLETO#29
No. 1 El agente causal de la difteria. Taxonomía y características. Corinebacterias condicionalmente patógenas. Diagnóstico microbiológico. Detección de inmunidad anatóxica. Prevención y tratamiento específicos.
La difteria es una enfermedad infecciosa aguda caracterizada por inflamación fibrinosa en la faringe, laringe, con menos frecuencia en otros órganos e intoxicación. Su agente causal es Corynebacterium diphtheriae.
Taxonomía. Corynebacterium pertenece a la división Firmicutes, el género Corynebacterium.
Propiedades morfológicas y tintóreas. El agente causal de la difteria se caracteriza por polimorfismo: se encuentran bastoncillos delgados, ligeramente curvados (los más comunes), formas cocoides y ramificadas. Las bacterias a menudo se encuentran en un ángulo entre sí. No forman esporas, no tienen flagelos, muchas cepas tienen una microcápsula. Característica- la presencia de granos de volutina en los extremos del palo (provoca la forma de maza). El agente causal de la difteria según las tinciones de Gram es positivo.
propiedades culturales. Anaerobia facultativa, opt. temperatura. El microbio crece en medios nutritivos especiales, por ejemplo, en el medio de Clauberg (agar sangre-telurita), en el que el bacilo de la difteria da colonias de 3 tipos: a) grandes, grises, con bordes irregulares, estrías radiales, parecidas a margaritas; b) pequeños, negros, convexos, con bordes lisos; c) similar al primero y segundo.
Dependiendo de las propiedades culturales y enzimáticas, se distinguen 3 variantes biológicas de C. diphtheriae: gravis, mitis e intermedia intermedius.
actividad enzimatica. Alto. Fermentan glucosa y maltosa en la formación de ácido, no descomponen sacarosa, lactosa y manitol. No producen ureasa y no forman indol. Produce la enzima cistinasa, que escinde la cisteína en H 2 S. Forma catalasa, succinato deshidrogenasa.
propiedades antigénicas. Los antígenos O son polisacáridos termoestables ubicados en lo profundo de la pared celular. Antígenos K: superficiales, termolábiles, grisáceos específicos. Con la ayuda de sueros al antígeno K C.diph. dividida en serovares (58).
factores de patogenicidad. Una exotoxina que interrumpe la síntesis de proteínas y, como resultado, afecta las células del miocardio, las glándulas suprarrenales, los riñones y los ganglios nerviosos. La capacidad de producir exotoxina se debe a la presencia en la célula de un profago portador del gen tox responsable de la formación de la toxina. Enzimas de agresión - hialuronidasa, neuraminidasa. La microcápsula también pertenece a los factores de patogenicidad.
resistencia. Resistente a la desecación, acción temperaturas bajas, por lo tanto, durante varios días se puede almacenar en objetos en el agua.
Epidemiología. La fuente de la difteria - personas enfermas La infección ocurre más a menudo a través del tracto respiratorio. La principal vía de transmisión es la aérea, es posible y manera de contacto- a través de ropa de cama, platos.
Patogénesis. La puerta de entrada de la infección son las membranas mucosas de la faringe, la nariz, las vías respiratorias, los ojos, los genitales y la superficie de la herida. En el sitio de la puerta de entrada, se observa una inflamación fibrinosa, se forma una película característica, que apenas se separa de los tejidos subyacentes. Las bacterias secretan exotoxina que ingresa a la sangre: se desarrolla toxinemia. La toxina afecta el miocardio, los riñones, las glándulas suprarrenales y el sistema nervioso.
Clínica. Existen diferentes formas de localización de la difteria: difteria de la faringe, que se observa en el 85-90% de los casos, difteria de la nariz, laringe, ojos, vulva, piel, heridas. El período de incubación es de 2 a 10 días. La enfermedad comienza con fiebre, dolor al tragar, aparición de una película en las amígdalas, ganglios linfáticos inflamados. Hinchazón de la laringe, se desarrolla crup diftérico, que puede conducir a la asfixia y la muerte. Otras complicaciones graves que también pueden causar la muerte son la miocarditis tóxica, la parálisis de los músculos respiratorios.
Inmunidad. Después de la enfermedad: inmunidad antitóxica persistente e intensa. De particular importancia es la formación de anticuerpos contra el fragmento B. Neutralizan la histotoxina diftérica, evitando la unión de esta última a la célula. Inmunidad antibacteriana - no estresada, grisácea específica
Diagnóstico microbiológico. Con la ayuda de un tampón, se extrae del paciente una película y mucosidad de la garganta y la nariz. Para hacer un diagnóstico preliminar, es posible utilizar un método bacterioscópico. El principal método de diagnóstico es bacteriológico: inoculación en medio Klauber II (agar sangre-telurito), en medio de suero denso para detectar la producción de cistinasa, en medio Hiss, en medio para determinar la toxigenicidad del patógeno. La identificación intraespecífica consiste en determinar la bio- y serovar. Para la detección acelerada de la toxina diftérica, se utilizan los siguientes: RIGA (reacción de hemaglutinación indirecta) con un diagnóstico de eritrocitos de anticuerpos, una reacción de neutralización de anticuerpos (la presencia de una toxina se juzga por el efecto de prevenir la hemaglutinación); RIA (radioinmune) y ELISA (inmunoensayo enzimático).
Tratamiento. El método principal de terapia es la administración inmediata de un suero líquido equino antidiftérico antitóxico específico. Inmunoglobulina humana antidifteria para administración intravenosa.
Vacunas asociadas: DTP (vacuna de absorción contra la tos ferina y el tétanos), DTP (vacuna de absorción contra la difteria y el tétanos).
№ 2 Clases de inmunoglobulinas, sus características.
Las inmunoglobulinas se dividen en cinco clases según su estructura, propiedades antigénicas e inmunobiológicas: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Inmunoglobulina clase G. El isotipo G es la mayor parte del suero Ig. Representa el 70-80 % de toda la Ig sérica, mientras que el 50 % se encuentra en el líquido tisular. El contenido medio de IgG en el suero sanguíneo de un adulto sano es de 12 g/l. La vida media de IgG es de 21 días.
La IgG es un monómero que tiene 2 centros de unión a antígeno (puede unir simultáneamente 2 moléculas de antígeno, por lo tanto, su valencia es 2), un peso molecular de alrededor de 160 kDa y una constante de sedimentación de 7S. Hay subtipos Gl, G2, G3 y G4. Sintetizado por linfocitos B maduros y células plasmáticas. Está bien definido en el suero sanguíneo en el pico de la respuesta inmunitaria primaria y secundaria.
Tiene alta afinidad. IgGl e IgG3 se unen al complemento y G3 es más activo que Gl. IgG4, como IgE, tiene citofilicidad (tropismo o afinidad por mastocitos y basófilos) y participa en el desarrollo reacción alérgica Yo tecleo. En las reacciones de inmunodiagnóstico, la IgG puede manifestarse como un anticuerpo incompleto.
Atraviesa fácilmente la barrera placentaria y proporciona inmunidad humoral al recién nacido en los primeros 3-4 meses de vida. También se puede secretar en el secreto de las membranas mucosas, incluida la leche por difusión.
IgG proporciona neutralización, opsonización y marcaje del antígeno, desencadena la citólisis mediada por el complemento y la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos.
Inmunoglobulina clase M. La molécula más grande de todas las Ig. Este es un pentámero que tiene 10 centros de unión a antígeno, es decir, su valencia es 10. Su peso molecular es de aproximadamente 900 kDa, la constante de sedimentación es 19S. Hay subtipos Ml y M2. Las cadenas pesadas de la molécula de IgM, a diferencia de otros isotipos, se construyen a partir de 5 dominios. La vida media de la IgM es de 5 días.
Representa alrededor del 5-10% de todas las Ig séricas. El contenido medio de IgM en el suero sanguíneo de un adulto sano es de aproximadamente 1 g/l. Este nivel en humanos se alcanza a la edad de 2 a 4 años.
La IgM es filogenéticamente la inmunoglobulina más antigua. Sintetizado por precursores y linfocitos B maduros. Se forma al comienzo de la respuesta inmune primaria, también es el primero en sintetizarse en el cuerpo de un recién nacido; ya se determina en la semana 20 del desarrollo intrauterino.
Tiene alta avidez y es el activador del complemento más efectivo en la vía clásica. Participa en la formación de suero y secretoras. inmunidad humoral. Al ser una molécula polimérica que contiene una cadena en J, puede adoptar una forma secretora y secretarse en la secreción de las membranas mucosas, incluida la leche. La mayoría de anticuerpos e isoaglutininas normales se refiere a IgM.
No atraviesa la placenta. La detección de anticuerpos específicos del isotipo M en el suero sanguíneo de un recién nacido indica una infección intrauterina anterior o un defecto placentario.
IgM proporciona neutralización, opsonización y marcaje del antígeno, desencadena la citólisis mediada por el complemento y la citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos.
Inmunoglobulina clase A. Existe en forma sérica y secretora. Alrededor del 60% de toda la IgA se encuentra en las secreciones mucosas.
IgA sérica: Representa alrededor del 10-15% de todas las Ig séricas. El suero sanguíneo de un adulto sano contiene alrededor de 2,5 g/l de IgA, el máximo se alcanza a los 10 años. La vida media de IgA es de 6 días.
La IgA es un monómero, tiene dos centros de unión a antígeno (es decir, bivalente), un peso molecular de alrededor de 170 kDa y una constante de sedimentación de 7S. Hay subtipos A1 y A2. Sintetizado por linfocitos B maduros y células plasmáticas. Está bien definido en el suero sanguíneo en el pico de la respuesta inmunitaria primaria y secundaria.
Tiene alta afinidad. Tal vez anticuerpo incompleto. No se une al complemento. No atraviesa la barrera placentaria.
IgA proporciona neutralización, opsonización y marcaje del antígeno, desencadena citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos.
IgA secretora: A diferencia del suero, la sIgA secretora existe en forma polimérica como di- o trímero (4- o 6-valente) y contiene péptidos J y S. Peso molecular 350 kDa y superior, constante de sedimentación 13S y superior.
Es sintetizado por linfocitos B maduros y sus descendientes, células plasmáticas de la especialización correspondiente solo dentro de las membranas mucosas y se libera en sus secretos. El volumen de producción puede alcanzar los 5 g por día. El grupo de slgA se considera el más numeroso del cuerpo: su número supera el contenido total de IgM e IgG. No se encuentra en el suero sanguíneo.
La forma secretora de IgA es el factor principal en la inmunidad local humoral específica de las membranas mucosas del tracto gastrointestinal, sistema genitourinario y tracto respiratorio. Debido a la cadena S, es resistente a las proteasas. slgA no activa el complemento, pero se une eficazmente a los antígenos y los neutraliza. Previene la adhesión de microbios en las células epiteliales y la generalización de la infección dentro de las membranas mucosas.
Inmunoglobulina clase E. También llamada reagina. El contenido en el suero sanguíneo es extremadamente bajo, aproximadamente 0,00025 g / l. La detección requiere el uso de métodos de diagnóstico especiales de alta sensibilidad. Peso molecular - alrededor de 190 kDa, constante de sedimentación - alrededor de 8S, monómero. Representa alrededor del 0,002% de todas las Ig circulantes. Este nivel se alcanza a los 10-15 años de edad.
Es sintetizado por linfocitos B maduros y células plasmáticas principalmente en el tejido linfoide del árbol broncopulmonar y el tracto gastrointestinal.
No se une al complemento. No atraviesa la barrera placentaria. Tiene una citofilicidad pronunciada: tropismo por mastocitos y basófilos. Participa en el desarrollo de la hipersensibilidad tipo inmediato- Reacción tipo I.
Inmunoglobulina clase D. No hay mucha información sobre Ig de este isotipo. Casi completamente contenido en el suero sanguíneo a una concentración de alrededor de 0,03 g / l (alrededor del 0,2% del número total de Ig circulante). IgD tiene un peso molecular de 160 kDa y una constante de sedimentación de 7S, un monómero.
No se une al complemento. No atraviesa la barrera placentaria. Es un receptor de precursores de linfocitos B.
BOLETO#30
No. 1 El agente causal de la amebiasis. Taxonomía. Característica. Diagnóstico microbiológico. tratamiento específico.
Taxonomía: filo Sarcomastigophorae, subfilo Sarcodina, clase Lobosia, orden Amoebida.
Morfología: Hay dos etapas de desarrollo del patógeno: vegetativo y quístico. La etapa vegetativa tiene varias formas: vegetativa grande (tejido), vegetativa pequeña; forma prequística, similar a la translúcida, formando quistes.
El quiste (etapa de reposo) tiene forma ovalada. Un quiste maduro contiene 4 núcleos. La forma translúcida está inactiva, vive en el lumen. divisón superior colon como un comensal inofensivo, alimentándose de bacterias y detritos.
Una forma vegetativa grande se forma, bajo ciertas condiciones, a partir de una forma vegetativa pequeña. Es el más grande, forma pseudópodos y tiene movimiento. Puede fagocitar eritrocitos. Se encuentra en las heces frescas en la amebiasis.
cultivo: en medios nutritivos rico en nutrientes.
Resistencia: Fuera del cuerpo, las formas vegetativas del patógeno mueren rápidamente (en 30 minutos). Los quistes son resistentes a ambiente se conservan en heces y agua. En los alimentos, en verduras y frutas, los quistes persisten durante varios días. Mueren cuando se hierven.
Epidemiología: Amebiasis - enfermedad antroponótica; la fuente de la invasión es el hombre. El mecanismo de transmisión es fecal-oral. La infección ocurre cuando los quistes se introducen con alimentos, agua, a través de artículos del hogar.
Patogénesis y clínica: Los quistes que ingresaron al intestino y luego se formaron a partir de ellos, las formas luminales de las amebas pueden vivir en el intestino grueso sin causar enfermedades. Con una disminución en la resistencia del cuerpo, la ameba penetra en la pared intestinal y se multiplica. Se desarrolla amebiasis intestinal.
Los trofozoítos de la forma de tejido son móviles debido a la formación de pseudópodos. Penetran en la pared del colon, provocando necrosis; capaz de fagocitar eritrocitos; se puede encontrar en las heces humanas. Con necrosis, se forman úlceras. Clínicamente, la amebiasis intestinal se manifiesta en forma de frecuentes deposiciones líquidas con sangre, acompañadas de fiebre y deshidratación. En las heces se encuentran pus y mucosidad, a veces con sangre.
La ameba con flujo sanguíneo puede ingresar al hígado, los pulmones y el cerebro, lo que resulta en el desarrollo de amebiasis extraintestinal.
Inmunidad: Inestable, principalmente el enlace celular está activado.
Diagnóstico microbiológico. El método principal es el examen microscópico de las heces del paciente, así como el contenido de los abscesos. órganos internos. Los frotis se tiñen con solución de Lugol o hematoxilina. Estudios serológicos (RNGA, ELISA, RSK): el título más alto de anticuerpos en el suero sanguíneo se detecta con amebiasis extraintestinal.
Tratamiento: Aplicar metronidazol, furamida.
Prevención: identificación y tratamiento de excretores quísticos y portadores de amebas, medidas sanitarias generales.
Nº 2Interferones. Naturaleza, métodos de obtención. Solicitud.
Los interferones son glicoproteínas producidas por las células en respuesta a la infección viral y otros estímulos. Bloquean la reproducción del virus en otras células y participan en la interacción de células del sistema inmunitario. Hay dos grupos serológicos de interferones: tipo I - IFN-? e IFN -?; II tipo - IFN-.? Los interferones tipo I tienen efectos antivirales y antitumorales, mientras que los interferones tipo II regulan la respuesta inmunitaria específica y la resistencia inespecífica.
El interferón (leucocítico) es producido por leucocitos tratados con virus y otros agentes. El interferón α (fibroblasto) es producido por fibroblastos tratados con virus.
El IFN tipo I se une a las células sanas y las protege de los virus. El efecto antiviral del IFN tipo I también puede deberse al hecho de que es capaz de inhibir la proliferación celular al interferir con la síntesis de aminoácidos.
IFN-? producido por los linfocitos T y NK. Estimula la actividad de los linfocitos T y B, monocitos/macrófagos y neutrófilos. Induce la apoptosis de macrófagos activados, queratinocitos, hepatocitos, células médula ósea, endoteliocitos y suprime la apoptosis de monocitos periféricos y neuronas infectadas por herpes.
El interferón de leucocitos modificado genéticamente se produce en sistemas procarióticos (E. coli). Biotecnología para la producción de interferón leucocitario incluye los siguientes pasos: 1) tratamiento de la masa de leucocitos con inductores de interferón; 2) aislamiento de la mezcla de ARNm de las células tratadas; 3) obtener ADN complementario total utilizando transcriptasa inversa; 4) inserción de ADNc en el plásmido de Escherichia coli y su clonación; 5) selección de clones que contienen genes de interferón; 6) inclusión en el plásmido de un promotor fuerte para la transcripción satisfactoria del gen; 7) expresión del gen del interferón, es decir síntesis de la proteína correspondiente; 8) destrucción de células procarióticas y purificación de interferón mediante cromatografía de afinidad.
interferones aplicar para la prevención y el tratamiento de una serie de infecciones virales. Su efecto está determinado por la dosis de la droga, sin embargo altas dosis procesamiento de interferón efecto toxico. Los interferones se utilizan ampliamente para la gripe y otras enfermedades agudas. enfermedades respiratorias. El medicamento es efectivo en las primeras etapas de la enfermedad, aplicado tópicamente. Los interferones tienen un efecto terapéutico en la hepatitis B, el herpes y también en las neoplasias malignas.