Métodos serológicos de análisis de sangre para el diagnóstico de enfermedades. Métodos de investigación serológica en el diagnóstico de enfermedades parasitarias Análisis de laboratorio serológico de lo que

El análisis de sífilis es uno de los más comunes entre las pruebas de laboratorio. Las pruebas para la sífilis se usan ampliamente durante los exámenes preventivos. Con la ayuda de la microscopía, se detecta el agente causal de la sífilis. Con la ayuda de reacciones serológicas, se confirma el diagnóstico de sífilis, se establece el diagnóstico de sífilis latente, se controla la eficacia del tratamiento y se determina la tasa de curación de los pacientes.

El diagnóstico de sífilis se establece sobre la base de datos clínicos, la detección de agentes causales de sífilis en muestras de material y la confirmación del diagnóstico mediante métodos de investigación serológica. Las manifestaciones de la sífilis son numerosas y diversas, por lo que la enfermedad es detectada por médicos de diversas especialidades. El diagnóstico diferencial de la sífilis primaria se lleva a cabo con una serie de enfermedades.

Arroz. 1. En la foto, la manifestación principal de la sífilis es un chancro duro.

Anticuerpos contra el treponema pálido y diagnóstico serológico

Cuando se infecta con sífilis, se forman anticuerpos en el cuerpo del paciente. El diagnóstico serológico ayuda al médico a estudiar la dinámica de la formación de anticuerpos en el cuerpo de un paciente con sífilis en fases iniciales enfermedad, durante el período de tratamiento y después de su finalización, para resolver el problema de la recurrencia de la enfermedad en un paciente o la reinfección (reinfección), para diagnosticar la sífilis en condiciones médicas masivas.

Anticuerpos contra el treponema pálido IgM

Los anticuerpos IgM son los primeros que se producen después de la infección. Comienzan a detectarse mediante reacciones serológicas a partir de la segunda semana después de la infección. A las 6-9 semanas de la enfermedad, su número se vuelve máximo. Si el paciente no ha sido tratado, los anticuerpos desaparecen después de seis meses. anticuerpos IgM desaparecer después de 1-2 meses. después, después de 3 - 6 meses. - después del tratamiento de la sífilis tardía. Si se registra su crecimiento, entonces esto sirve o indica una reinfección. Las moléculas de IgM son grandes y no pasan a través de la placenta al feto.

Anticuerpos contra el treponema pálido IgG

Los anticuerpos inmunoglobulinas IgG aparecen al final del primer mes (en la cuarta semana) desde el momento de la infección. Su título es más alto que el título de IgM. IgG persiste después del tratamiento durante bastante tiempo.

anticuerpos no específicos

Hay muchas reacciones serológicas. Esto se debe a la multiplicidad antigénica del treponema pálido. En el suero sanguíneo de una persona enferma, etapas diferentes sífilis, además de específicos, se forman ciertos anticuerpos no específicos: aglutininas, fijadores de complemento, inmovilisinas, anticuerpos que causan inmunofluorescencia, precipitinas, etc. Las reacciones serológicas para la detección de anticuerpos no específicos tienen especificidad relativa; reacciones (CSR ).

Pruebas falsas positivas para sífilis

Rasgo distintivo pruebas no treponémicas está obteniendo reacciones falsas positivas. Los anticuerpos de reagina, que se producen en la sangre humana contra el antígeno cardiolipina, se registran no solo en la sífilis, sino también en otras enfermedades: colagenosis, hepatitis, enfermedad renal, tirotoxicosis, enfermedades oncológicas, enfermedades infecciosas(lepra, tuberculosis, brucelosis, paludismo, tifus, escarlatina), durante el embarazo y la menstruación, al tomar alimentos grasos y alcohol. Se observa que con la edad aumenta el número de reacciones falsas positivas.

Arroz. 2. La foto muestra sífilis primaria en mujeres.

Diagnóstico de laboratorio de la sífilis mediante pruebas serológicas.

Las pruebas serológicas para la sífilis se dividen en treponémicas y no treponémicas.

1. Pruebas no treponémicas

El antígeno cardiolipina se utiliza como antígeno en este grupo de pruebas. Los antígenos lipídicos de los agentes causantes de la sífilis son los más numerosos. Constituyen 1/3 de la masa seca de la célula. Con la ayuda de pruebas no treponémicas, se detectan anticuerpos de reagina que se producen contra el antígeno cardiolipina. En este grupo se incluyen la reacción de fijación del complemento (RSKcard), la reacción de microprecipitación (RMP), la determinación rápida de reaginas plasmáticas (RPR), etc. Mediante pruebas no treponémicas se realiza el cribado primario de sífilis (examen de grupos de población), y la posibilidad de obtener resultados en una variante cuantitativa le permite utilizar estas pruebas para controlar la eficacia del tratamiento. Los resultados positivos en las pruebas no treponémicas deben confirmarse mediante pruebas treponémicas. Una característica distintiva de las pruebas no treponémicas es la producción de reacciones falsas positivas.

2. Pruebas treponémicas

Las pruebas treponémicas utilizan antígenos de origen treponémico aislados de un cultivo de treponema pallidum. Con su ayuda, se confirman los resultados positivos de las pruebas no treponémicas. El grupo incluye: RSKtrep - reacción de fijación del complemento, RIF - reacción de inmunofluorescencia y sus modificaciones, RIT, RIBT - reacción de inmovilización de treponema pálido, RPHA - reacción de hemaglutinación pasiva, ELISA - inmunoensayo enzimático.

3. Pruebas de sífilis con antígenos recombinantes

Los antígenos para este grupo de pruebas se obtienen mediante ingeniería genética y se utilizan en reacciones - TPHA y ELISA, en análisis de inmunotransferencia (IB) y análisis inmunocromatográficos.

Arroz. 3. Se utiliza un conjunto de pruebas serológicas para diagnosticar la sífilis.

Diagnóstico de sífilis mediante pruebas no treponémicas

Para detectar la sífilis, se utilizan pruebas no treponémicas o un complejo de reacciones serológicas (CSR). El diagnóstico serológico se aplicará a partir de la 5ª semana desde el momento de la infección oa partir de las 2-3 semanas desde el inicio. Los anticuerpos se detectan en casi todos los pacientes con primario reciente. Las reacciones serológicas son positivas en el 70 - 80% de los pacientes con sífilis latente terciaria en el 50 - 60% de los casos.

Las reacciones serológicas que utilizan pruebas no treponémicas pueden dar resultados falsos positivos.

Arroz. 4. Muestreo de sangre para pruebas de sífilis.

Reacción de fijación del complemento (tarjeta RSK, KSK con KA, reacción de Wasserman)

La reacción de Wasserman (RW, РВ), inventada por A. Wasserman hace más de 100 años, hoy ha sufrido muchos cambios, sin embargo, como tributo a la tradición, ha conservado su nombre hasta el presente. La prueba de fijación del complemento con el antígeno de cardiolipina está destinada no solo a detectar anticuerpos, sino que también se realiza en una versión cuantitativa, con diferentes diluciones de suero, lo que permite su uso para monitorear la efectividad del tratamiento. La baja sensibilidad y especificidad, la obtención de falsos positivos son los aspectos negativos de este tipo de estudios.

La esencia de la reacción de Wasserman es la siguiente: los antígenos que se utilizan en la formulación de la reacción de Wasserman, en el caso de la presencia de anticuerpos contra los agentes causantes de la sífilis en la sangre humana, mediante un complemento, se unen a ellos. y precipitar. La intensidad de la reacción se indica con el signo (+). La reacción puede ser negativa (-) - sin sedimento, dudosa (pequeño sedimento o +), débilmente positiva (++), positiva (+++) y marcadamente positiva (++++).

Más sensible es la reacción de Wassermann modificada, la reacción de Kolmer. Con su ayuda, los anticuerpos se detectan en los sueros, donde la reacción de Wasserman dio un resultado negativo.

Con reacciones marcadamente positivas, se realiza una determinación cuantitativa de reaginas, para lo cual se utiliza suero en diluciones de 1:10 a 1:320, lo que permite el uso esta especie estudios para monitorear la efectividad del tratamiento. Por ejemplo, una disminución en el título de anticuerpos y su posterior seronegatividad (obteniendo resultados negativos) indica una cura exitosa para la enfermedad.

Arroz. 5. Análisis de sangre para sífilis - Reacción de Wasserman.

Microrreacción de precipitación (MPR)

La microrreacción de precipitación se utiliza para exámenes masivos. grupos individuales población, diagnosticar la sífilis y monitorear la efectividad del tratamiento. Para realizar este tipo de estudio, se requiere una pequeña cantidad del material en estudio. La microrreacción de precipitación se basa en la reacción inmunológica antígeno-anticuerpo. En el caso de la presencia de anticuerpos en el suero sanguíneo del sujeto, el complejo antígeno-anticuerpo precipita con la formación de escamas. La reacción se lleva a cabo en los pocillos de una placa de vidrio especial. Se estima por la intensidad del precipitado precipitado y el tamaño de las escamas en (+) como reacción de Wasserman. Cuando se examina a mujeres embarazadas, no se utilizan donantes y para controlar la eficacia del tratamiento. VDRL y RPR son tipos de microrreacciones.

Arroz. 6. Vista de la reacción de precipitación en una gota sobre vidrio.

Arroz. 7. Análisis de sangre para sífilis - reacción de microprecipitación.

Arroz. 8. Un kit para la determinación rápida de reaginas plasmáticas (Test para sífilis RPR).

Todas las pruebas positivas obtenidas durante reacciones serológicas no específicas requieren confirmación por reacciones específicas: pruebas treponémicas.

Diagnóstico de sífilis mediante pruebas treponémicas.

Al realizar pruebas treponémicas, se utilizan antígenos de origen treponémico. Su lado negativo es la imposibilidad de utilizar para controlar la eficacia del tratamiento, obteniendo resultados positivos en espiroquetosis y treponematosis no venéreas y obteniendo resultados falsos positivos en enfermedades oncológicas, lepra, alguna patología endocrina. Pruebas como RPHA, ELISA y RIF siguen siendo positivas durante muchos años después de la cura de la sífilis y, en algunos casos, de por vida.

RIBT y RIF son las más específicas de todas las pruebas serológicas utilizadas para diagnosticar la sífilis. Le permiten distinguir entre reacciones falsas positivas, para identificar formas tardías de sífilis que ocurren con reacciones negativas. Con la ayuda de RIBT, se reconocen reacciones de falso positivo en mujeres embarazadas cuando es necesario resolver el problema de infección del niño.

Reacción de inmovilización de Treponema pallidum (RIBT, RIT)

La esencia de la reacción es que los anticuerpos en el suero sanguíneo del paciente inmovilizan el treponema pálido. Una reacción con inmovilización de hasta el 20% de los patógenos se considera negativa, débilmente positiva - 21 - 50%, positiva - 50 - 100%. RIBT a veces da resultados falsos positivos. La prueba es compleja y requiere mucho tiempo, sin embargo, es indispensable al realizar diagnóstico diferencial formas latentes de la enfermedad y resultados falsos positivos de reacciones serológicas, incluso en mujeres embarazadas. RIBT da un resultado 100% positivo en sífilis secundaria, temprana y tardía, en 94 - 100% de los casos - en otras formas de sífilis.

Reacción de inmunofluorescencia (RIF)

La esencia de la reacción es que los treponemas pálidos (antígenos), combinados con anticuerpos marcados con fluorocromos, emiten un brillo amarillo verdoso en un microscopio fluorescente. El resultado se evalúa con un signo (+). Con la ayuda de RIF, se detectan inmunoglobulinas de clase A. La reacción de inmunofluorescencia se vuelve positiva antes que la reacción de Wasserman. Siempre es positivo en sífilis secundaria y latente, en el 95-100% de los casos es positivo en sífilis terciaria y congénita. La técnica para realizar este tipo de estudio es más sencilla que la de RIBT, pero es imposible sustituir RIF por RIBT, ya que esta reacción es inferior a RIBT en especificidad. RIF-10 (modificación de RIF) es más sensible, RIF-200 y RIF-abs son más específicos.

Arroz. 9. Análisis de sangre para sífilis - reacción de inmunofluorescencia (RIF).

Prueba de adhesión inmune Treponema pallidum (TRIPBT)

La esencia de la reacción es que los treponemas pálidos sensibilizados por el suero del paciente en presencia de complemento se adhieren a la superficie de los eritrocitos. Los complejos obtenidos precipitan durante la centrifugación. Sensibilidad esta prueba y la especificidad están cerca de RIF y RIBT.

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas para sífilis (ELISA)

Con la ayuda de ELISA, se determinan las inmunoglobulinas de clase M y G. El método IgM - ELISA se puede utilizar como prueba de detección y confirmación. La sensibilidad y especificidad de ELISA son similares a RIF. Con la sífilis, ELISA da resultados positivos a partir del tercer mes de la infección y permanece positivo durante bastante tiempo (a veces de por vida).

Arroz. 10. Analizador ELISA.

La reacción de hemaglutinación pasiva (indirecta) (RPHA)

El TPHA se basa en la capacidad de los eritrocitos, en los que se adsorben los antígenos del treponema pallidum, para adherirse (hemaglutinación) en presencia del suero del paciente. RPHA se utiliza para diagnosticar todas las formas de sífilis, incluso latente. cuando se aplica Alta calidad antígeno, este tipo de reacción serológica supera a todas las demás pruebas en especificidad y sensibilidad.

Arroz. 11. RPHA se usa para diagnosticar todas las formas de sífilis.

Arroz. 12. Análisis de sífilis - reacción de hemaglutinación pasiva (indirecta) (esquema).

Arroz. 13. La aparición de un paraguas invertido, que ocupa todo el fondo del tubo de ensayo, indica una reacción positiva. En el caso de que los eritrocitos se asienten en una columna ("botón") en el centro del fondo del tubo de ensayo, hablan de una reacción negativa.

Arroz. 14. Prueba RPGA en condiciones de laboratorio.

Diagnóstico microbiológico

Junto con el diagnóstico serológico, el método para detectar treponemas pálidos ( diagnóstico microbiológico) juega un papel importante, especialmente durante el período de sífilis seronegativa, cuando todavía no hay anticuerpos en la sangre, pero ya existen las primeras manifestaciones de sífilis primaria fresca (chancro duro).

El material biológico para el estudio es la descarga de la superficie de úlceras duras (chancros), el contenido de sífilis pustular, pápulas supurantes y erosivas, puntos de ganglios linfáticos infectados, líquido cefalorraquídeo y líquido amniótico, y sangre para PCR.

El mejor método para detectar los agentes causales de la sífilis es el estudio del material biológico en el campo oscuro de un microscopio. Esta técnica le permite ver el treponema pálido en estado vivo, estudiar sus características de estructura y movimiento, distinguir agentes patógenos de saprofitos.

Arroz. 15. Análisis de sífilis - microscopía de campo oscuro.

Arroz. 16. Cuando se estudian frotis secos, se usa la tinción de Romanovsky-Giemsa. Treponemas pálidos se tiñen al mismo tiempo en color rosa, todos los demás tipos de espiroquetas - en púrpura.

La detección de treponemas pálidos por microscopía de campo oscuro es un criterio absoluto para el diagnóstico final de sífilis.

Arroz. 17. Para detectar bacterias, se usa una reacción de inmunofluorescencia (RIF), una prueba treponémica. Complejo Específico antígeno - anticuerpo cuando se combina con un suero específico marcado con fluorocromo, a la luz de un microscopio fluorescente, le da a la bacteria un brillo verdoso.

Arroz. 18. Los agentes causantes de la sífilis son claramente visibles en frotis preparados según el método Levaditi (impregnación con plata). Treponemas oscuros pálidos sobre el fondo de la coloración amarilla de las células de los tejidos infectados.

Arroz. 20. La foto muestra una colonia de treponema pálido. La obtención de un cultivo de bacterias es difícil. Prácticamente no crecen en artificial. medios nutritivos. En medios que contienen suero de caballo y conejo, las colonias aparecen entre el 3er y el 9no día.

PCR para sífilis

Eficaz y prometedora hoy en día es la técnica de llevar a cabo la polimerasa. reacción en cadena. La PCR para sífilis le permite obtener un resultado en unas pocas horas, y al menos algunos patógenos pueden estar presentes en el material recolectado para el diagnóstico.

Arroz. 21. PCR para sífilis le permite detectar ADN o sus fragmentos de treponema pálido.

La sensibilidad de este método de investigación depende de la presencia de treponemas pálidos en el material biológico y alcanza el 98,6%. La especificidad de esta prueba depende en gran medida de Buena elección objetivos de amplificación durante el diagnóstico y alcanza el 100 %.

Al mismo tiempo, debido a las características comparativas insuficientemente estudiadas de la sensibilidad y especificidad de los métodos directos para diagnosticar sífilis y PCR, este método de examen en la Federación Rusa para diagnosticar la enfermedad aún no ha sido aprobado.

La PCR para sífilis solo se permite en algunos casos, como método adicional diagnóstico de sífilis congénita, neurosífilis, con dificultades para diagnosticar sífilis utilizando métodos serológicos de investigación en pacientes con VIH.

Arroz. 22. La detección de ADN de treponema pallidum mediante PCR indica la presencia de bacterias viables o restos de bacterias muertas, pero que contienen copias adicionales de secciones individuales de ADN cromosómico capaces de formar copias adicionales.

que muestra análisis serológico¿sangre? Medidas de diagnóstico Este es el paso más importante en el tratamiento de cualquier enfermedad. El éxito del tratamiento depende no solo de los medicamentos prescritos, sino también en gran medida de la precisión con la que se realizó el diagnóstico.

Además, el diagnóstico ayuda a prevenir complicaciones y enfermedades acompañantes. Con la ayuda de un análisis serológico de la sangre del paciente, se detecta la presencia de anticuerpos y antígenos. El estudio ayuda a encontrar muchas enfermedades, determinar su fase y controlar el curso del tratamiento.

¿Qué es la serología?

La serología es la rama de la inmunología que estudia las reacciones de los antígenos a los anticuerpos. Esta sección la medicina se ocupa del estudio del plasma sanguíneo y sus características inmunológicas.

Hoy en día, un análisis de sangre serológico para anticuerpos es una forma confiable de detectar el virus de la inmunodeficiencia humana, la hepatitis, la brucelosis, las ETS y otras enfermedades potencialmente mortales. Veamos en qué casos se prescribe.

Indicaciones para la cita

Es necesario un análisis de sangre serológico para identificar el agente causal de la enfermedad en caso de dificultad para hacer un diagnóstico.

Para llevar a cabo esta reacción, se inyectan antígenos de patógenos en el plasma y luego el asistente de laboratorio estudia el proceso en curso. O realizan una reacción inversa: se inyectan anticuerpos en la sangre infectada para determinar la afiliación específica del patógeno.

Ámbito de aplicación

Este estudio se utiliza en diversas ramas de la medicina. Con la ayuda de esta reacción, se detectan células y anticuerpos específicos producidos por el cuerpo para combatir infecciones y virus.

Además, utilizando el método serológico, se determina el grupo sanguíneo de una persona.

Un análisis de sangre serológico similar se utiliza en ginecología para diagnosticar enfermedades de transmisión sexual. Este método también se utiliza para encuestas completas mujeres embarazadas (detección de toxoplasmosis, VIH, sífilis, etc.). Pasar esta prueba es obligatorio al registrarse en la clínica prenatal.

En los niños, se utiliza una prueba serológica para confirmar el diagnóstico de las llamadas enfermedades "infantiles" (varicela, sarampión, rubéola, etc.) en el caso de que los síntomas no tengan manifestaciones pronunciadas y sea imposible identificar la enfermedad por análisis de indicaciones clínicas.

Detección de enfermedades venéreas

Para los venereólogos, esta prueba es verdaderamente indispensable y le permite hacer un diagnóstico con mucha precisión.

Con un cuadro clínico borroso, un análisis de sangre serológico para sífilis, giardiasis, ureaplasmosis, clamidia, herpes y otras enfermedades le permite identificar rápidamente la presencia de anticuerpos.

Enfermedades virales e infecciosas

Los gastroenterólogos, hepatólogos y especialistas en enfermedades infecciosas utilizan activamente el análisis serológico para diagnosticar la hepatitis viral.

Descifrar un análisis de sangre serológico permite determinar la etapa del curso de la enfermedad y responder a la pregunta de cuánta hospitalización es necesaria en este momento. ¿Cómo prepararse adecuadamente?

Preparación para la entrega del análisis

Los análisis de sangre serológicos se realizan tanto en clínicas públicas como comerciales. Se debe dar preferencia a un laboratorio con equipo moderno y personal calificado.

Las muestras biológicas para investigación pueden ser saliva y heces, pero en la mayoría de los casos se utiliza la sangre venosa del paciente. La sangre para la prueba serológica se toma de vena cubital en condiciones de laboratorio. Antes de realizar la prueba, debe consultar con su médico sobre la preparación para este procedimiento.

Para prepararse para la entrega de un análisis para un estudio serológico, debe seguir algunas reglas simples.

La sangre se toma en un estado de calma antes de las comidas, es decir, con el estómago vacío. Antes de esto, no debe someterse a otros estudios, como radiografías, ecografías, etc.

Es necesario excluir el uso de antibacterianos y algunos otros medicamentos unas semanas antes de donar sangre. Ciertas recomendaciones en este caso dependen de la enfermedad para la cual se realiza la prueba. Por ejemplo, una prueba de hepatitis implica evitar los alimentos grasos y el alcohol 48 horas antes del procedimiento.

reacción de fluorescencia

Entre las variedades de reacciones serológicas hay una reacción de fluorescencia. Esta técnica utiliza un reactivo que resalta los anticuerpos en el suero sanguíneo.

Establecer una reacción serológica de tipo directo implica marcar anticuerpos específicos con una sustancia fluorescente. Esta reacción es la más rápida y se lleva a cabo en un solo paso.

Otra opción para realizar dicho análisis se llama indirecta o RNIF. Se lleva a cabo en dos etapas. En el primer paso, los anticuerpos no se marcan con etiquetas fluorescentes y, en el segundo paso, se utilizan anticuerpos debidamente marcados para detectar antígenos y anticuerpos. La luminiscencia ocurre solo después de que ocurre la unión a un anticuerpo específico.

¿Qué muestra un análisis de sangre serológico? El resultado de todo el procedimiento es evaluado por un dispositivo especial que analiza la fuerza de la radiación, revela la forma y el tamaño del objeto bajo estudio. Los agentes causantes de enfermedades infecciosas se detectan con un resultado, cuya confiabilidad es del 90-95%, según el tipo y la etapa de la patología.

Ensayo inmunoabsorbente ligado

Estos tipos de serología utilizan reactivos únicos y estables. Las sustancias marcadas parecen adherirse a los anticuerpos deseados. Como resultado, obtenemos un resultado cualitativo o cuantitativo.

Si no se encuentran marcadores expresados, el resultado se considerará negativo. Si se detecta la presencia de anticuerpos en muestras biológicas durante un estudio cualitativo, el resultado del análisis se considera positivo. En cuantificación el análisis celular da un resultado más preciso.

Al analizar los indicadores del análisis (por ejemplo, la cantidad de células detectadas), el especialista determina si la enfermedad está en curso. etapa inicial, en la etapa aguda, o se agrava forma crónica patología. Para hacer un diagnóstico, el médico tiene en cuenta no solo los datos del estudio serológico, sino también cuadro clinico enfermedades.

Características de esta prueba

La realización de este análisis no siempre es capaz de dar el 100% de certeza de que se ha detectado una enfermedad en particular. Sucede que los resultados pueden ser ambiguos y se requieren otros procedimientos.

Por ejemplo, durante una prueba de brucelosis, se analiza el suero para determinar la autorretención sin antígeno. Esto aumenta significativamente la fiabilidad de las pruebas. Un análisis para brucelosis puede ser positivo o negativo, y también generar dudas.

Si recibe resultados dudosos que no tienen una interpretación inequívoca, se recomienda retomar el análisis. Además, la brucelosis se puede detectar como resultado de hemocultivos examinando Médula ósea y líquido cefalorraquídeo.

Ventajas de un análisis de sangre serológico

Las técnicas de diagnóstico que utilizan pruebas serológicas son ampliamente utilizadas en los modernos práctica médica. Esto se hace especialmente a menudo cuando se determinan patologías virales e infecciosas.

Las mismas pruebas se utilizan en la detección geográfica y el examen médico para prevenir la propagación epidemiológica de la infección.

Las ventajas del método incluyen:

• Alto nivel de confianza.
• Rapidez de respuesta y resultados. Los resultados de RSC se conocen en 24 horas. En una situación especial, en un entorno hospitalario, el análisis estará listo en unas horas.
• Seguimiento del desarrollo de la enfermedad y la eficacia de la terapia.
• Bajo costo y disponibilidad para los pacientes.

Contras del método

Sin embargo, los estudios serológicos también tienen sus inconvenientes.

Estos incluyen el hecho de que el análisis debe tener en cuenta período de incubación enfermedades para obtener una imagen más fiable.

Por ejemplo, la determinación del herpes simple del primer o segundo tipo es posible solo después de 14 días desde el momento de la infección. Se realiza un análisis de la presencia del virus de la inmunodeficiencia después de 30 días, después de 90 días y seis meses después del contacto con una persona infectada.

Por supuesto, la confiabilidad de los resultados también puede verse influenciada por el factor humano: el incumplimiento de las reglas para preparar la muestra de sangre o un error cometido por el asistente de laboratorio durante la reacción.

Estadísticamente, resultado erroneo se puede obtener en el 5% de los casos. Un médico experimentado, al examinar a un paciente, habiendo estudiado el cuadro clínico, en la mayoría de los casos puede calcular el error cometido.

El sitio proporciona información de contexto sólo con fines informativos. El diagnóstico y tratamiento de enfermedades debe realizarse bajo la supervisión de un especialista. Todos los medicamentos tienen contraindicaciones. ¡Se requiere el consejo de un experto!

serológico análisis de sangre es un método de análisis de laboratorio de ciertos antígenos o anticuerpos ( proteínas específicas) en el suero del paciente, basado en reacciones inmunitarias organismo. Este método se aplica cuando diagnóstico enfermedades infecciosas para detectar la presencia de anticuerpos en la sangre del paciente a un determinado tipo de virus o bacteria, así como para determinar el tipo de sangre.

Material en estudio

En primer lugar, para el análisis serológico se utiliza material biológico recogido del paciente:

• tranfusion de sangre
• saliva
• materia fecal

En algunos casos, se examina el material aislado de ciertos objetos ambientales:

• la tierra

Método de análisis o muestreo de sangre

Este análisis no requiere una preparación especial del paciente. El muestreo de sangre se realiza por la mañana con el estómago vacío y se realiza en salas de tratamiento. instituciones medicas, según métodos hematológicos generalmente aceptados. Para las pruebas serológicas, el muestreo de sangre se realiza mediante dos métodos: sangre venosa se toma de la vena cubital del paciente y se toma sangre capilar de dedo anular. La sangre se coloca en tubos de ensayo sellados estériles.

Características del transporte de sangre y almacenamiento de suero.

Inmediatamente después de la toma de muestras de sangre, se transporta a un laboratorio especial, donde se prepara el suero el mismo día. El almacenamiento de suero no se permite más de 4 a 6 días en un refrigerador a una temperatura de 2 a 4 grados. Si se requiere un almacenamiento más prolongado, el suero se congela. Para evitar violar la calidad del suero, se permite congelarlo una vez y, en consecuencia, descongelarlo. Durante el almacenamiento a largo plazo, los anticuerpos pierden sus propiedades y se vuelven parcialmente inactivos, los más sensibles a la congelación son las inmunoglobulinas de la clase METRO. Después de descongelar el suero, es necesario mezclarlo bien hasta obtener una masa homogénea, lo que ayuda a restaurar la concentración de anticuerpos contenidos en este suero.

¿Para qué sirve la serología?

Métodos serológicos diagnóstico de laboratorio Se utiliza para detectar enfermedades como equinococosis, triquinosis, toxocariasis, opistorquiasis, cisticercosis, toxoplasmosis, amebiasis, giardiasis, para determinar la eficacia del curso de tratamiento y, finalmente, para detectar re-enfermedad después de la recuperación completa del paciente.

Métodos básicos de diagnóstico serológico.

Reacción de inmunofluorescencia (RIF)

Esta reacción es una versión indirecta de un estudio serológico, es decir, se realiza en dos etapas. En la primera etapa, el anticuerpo necesario se detecta en el complejo antígeno-anticuerpo circulante utilizando antiglobulina, que tiene una estructura similar a las proteínas del suero inmunitario. La identificación del anticuerpo deseado también es posible cuando se estudia una preparación antigénica preparada previamente bajo un microscopio fluorescente, sin el uso de antiglobulinas.

La reacción inmunofluorescente es un proceso que requiere mucho tiempo y responsabilidad por parte de un especialista. La reacción comienza con la preparación de soluciones, luego los sueros y sus muestras de control se someten a titulación ( un proceso que permite la determinación del contenido de una sustancia particular mezclando gradualmente una solución de prueba con una cantidad controlada de un reactivo). Las diluciones preparadas previamente y sus muestras de control se aplican cuidadosamente a portaobjetos con antígeno. Luego, las preparaciones se someten a incubación, seguido de su lavado y secado al aire. Se aplica una fina capa de antisuero a los portaobjetos que contienen antígeno, después de lo cual las preparaciones se vuelven a incubar y se repite toda la cadena de acciones anterior, finalizando con el secado de la preparación. Como resultado, la preparación en un portaobjetos de vidrio se trata con glicerol y se examina bajo un microscopio fluorescente.

Los resultados de la reacción se evalúan en una escala de cuatro puntos, que se caracteriza por la intensidad del brillo amarillo verdoso de la superficie de las células del antígeno:
+ brillo muy débil de la celda, perceptible solo en su periferia
++ débil brillo de la periferia de la célula, pero con un tinte verde claramente visible
+++/++++ resplandor brillante Color verde periferia celular
Se considera que el título de la reacción es una dilución de suero en la que al menos el 50 % de las células del antígeno muestran un brillo superficial claro, es decir, el resultado de la reacción. +++ o ++++ . El valor del rango de reacción es de 1/80 a 1/100.

La intensidad de la reacción depende del número de eritrocitos precipitados en el fondo de los pocillos formados:
– una reacción negativa, que se caracteriza por el depósito de eritrocitos en el fondo de los pozos en forma de un pequeño anillo con bordes lisos o "botones"
+ de baja intensidad, esta reacción se caracteriza por pequeños depósitos individuales en el fondo del pozo. Los eritrocitos no aglutinados forman un "pequeño anillo" en el centro del pocillo
++ de intensidad media, se caracteriza por la formación de un "anillo ancho y denso" de eritrocitos no aglutinados en el fondo del orificio
+++ reacción intensa, los eritrocitos aglutinados forman los llamados "paraguas", en el centro de los cuales son claramente visibles anillos formados por eritrocitos sedimentados no aglutinados
++++ una reacción muy intensa en la que todos los eritrocitos se aglutinan y, formando "paraguas", recubren el fondo de los agujeros.
El título de esta reacción se considera la última dilución de suero, en la que se detecta una aglutinación evidente de eritrocitos al menos +++ , es decir, con una reacción intensa o agudamente intensa.

Fiabilidad y calidad de los métodos. diagnóstico serológico dependen de la organización del control de laboratorio interno y externo realizado, que consta de varios procedimientos independientes diseñado para evaluar la calidad de los resultados del análisis.

Serología(del latín suero - "suero", logos - "ciencia") es una rama de la inmunología que estudia los detalles de la interacción de los anticuerpos del suero con los antígenos.

La base del diagnóstico es la detección de anticuerpos específicos que se forman como reacción a la infección del cuerpo con un determinado antígeno. Dependiendo de qué anticuerpos se encuentren en la sangre, se llega a una conclusión sobre la naturaleza de la infección y la cantidad de estos anticuerpos indica el grado de actividad de la enfermedad infecciosa.

Se está estudiando el material tomado para investigación como parte de un análisis de sangre serológico, y otros enfermedades peligrosas- herpes, infecciones intestinales, rubéola, toxoplasmosis, clamidia, sarampión, clamidia. Además, este estudio le permite aprobar el tipo de sangre, determinar la especificidad de las proteínas.

Entonces, los estudios serológicos se llevan a cabo:

• si se ha realizado un diagnóstico preliminar y ahora se requiere su confirmación. El estudio se basa en la adición del antígeno apropiado al suero sanguíneo. La respuesta le permite llegar a una conclusión sobre la presencia o ausencia de la enfermedad;
• si no se puede hacer un diagnóstico. Como parte del estudio, se agregan anticuerpos a la sangre y se determina el tipo de antígenos, lo que permite determinar una enfermedad específica;
• Si es necesario .

Así, un análisis de sangre serológico ayuda a hacer un diagnóstico o prescribir el más tratamiento efectivo- con un mínimo de tiempo y costos financieros.

Las ventajas de los estudios serológicos incluyen:

• la capacidad de detectar microorganismos patológicos en primeras etapas infecciones;
• control del desarrollo de la enfermedad y el nivel de efectividad de la terapia;
• sin necesidad de preparación especial antes de tomar el biomaterial;
• eficiencia. El resultado estará disponible en dos o tres horas, lo que en condiciones tratamiento hospitalario muy importante;
• la asequibilidad del reactivo, que permite tomar muestras con la frecuencia necesaria;
• sin contraindicaciones.

¿Cómo se realiza una prueba serológica?

El muestreo de sangre se realiza a partir de la vena cubital. Punto importante- la sangre no se extrae con una jeringa, sino por gravedad - se inserta una aguja en una vena sin jeringa y se recogen hasta cinco ml de sangre en un tubo de ensayo. El procedimiento se realiza por la mañana.

Dependiendo de las reacciones que subyacen al estudio, existen varios tipos de procedimientos:

1. reacción de neutralización. Basado en la capacidad de los anticuerpos del suero inmunitario para responder como agente neutralizante a los microorganismos o toxinas, previniéndolos. impacto negativo en el cuerpo;
2. reacción de aglutinación. Puede ser directo o indirecto. En el primer caso, estamos hablando del estudio del suero sanguíneo para detectar la presencia de anticuerpos (los microbios muertos se arrojan al material y se evalúa la reacción; si hay un precipitado en forma de escamas, la reacción es positiva) , reacción indirecta basado en la introducción de eritrocitos con antígenos adsorbidos en el material (el sedimento festoneado indica una reacción positiva);
3. reacción de precipitación. La solución de antígeno se coloca en capas sobre el suero inmune (actúa como un medio líquido). Se utiliza antígeno soluble. Si el complejo antígeno-anticuerpo precipita, la reacción se considera positiva;
4. reacción del complemento. Ámbito de aplicación — detección de enfermedades infecciosas. Se activa el complemento y se examinan las reacciones;
5. reacción con antígenos y anticuerpos marcados. Se basa en el hecho de que los antígenos o microbios tisulares, procesados ​​de manera especial, comienzan a emitir luz bajo la influencia de los rayos UV. El método se usa ampliamente no solo en el diagnóstico de antígenos, sino también para la determinación de hormonas, enzimas y fármacos.

Es necesario prepararse para la prueba: en cuatro días el paciente debe negarse a tomar medicamentos para el corazón, también debe excluir el alcohol en cualquiera de sus manifestaciones, los alimentos picantes y grasos, los dulces, limitar el esfuerzo físico y evitar el estrés.

Si no sigue estas reglas, aumenta el riesgo de un resultado falso positivo. Antes de prescribir una segunda prueba, el médico debe averiguar qué hizo el paciente el día anterior al procedimiento y dar recomendaciones sobre preparación adecuada a la encuesta

Análisis serológico: transcripción

Análisis de sangre serológico: un análisis que le permite determinar / confirmar el tipo de agente infeccioso, ayuda al especialista a hacer un diagnóstico. Esta es una ayuda indispensable si el médico no puede encontrar terapia de drogas porque los agentes causales varias enfermedades diferente sensibilidad a la acción de fármacos y antibióticos específicos.

Una vez que se completa el procedimiento para recolectar el material, los asistentes de laboratorio pasan a la siguiente etapa: descifran los indicadores. Entonces, si no se encuentran anticuerpos en la sangre del paciente, se puede concluir que no hay infecciones en el cuerpo; el resultado del análisis en este caso es positivo.

Pero este estado de cosas es más bien una excepción a la regla: si hay síntomas de la enfermedad, los estudios serológicos revelan y prueban la presencia de una patología grave en el cuerpo.

Primero, los patógenos se encuentran en el cuerpo mediante un análisis, luego se estima la cantidad de anticuerpos, sobre la base de los cuales se llega a una conclusión sobre la gravedad de la infección.

Pruebas serológicas para hepatitis, VIH, sífilis: características.

Sífilis . Al realizar la prueba de sífilis, los especialistas buscan proteínas que sean responsables de ingresar cuerpo humano el agente causal de la infección: estamos hablando de treponema pálido. En este caso, el suero sanguíneo actúa como material biológico.

. Hepatitis viral- enfermedades infecciosas graves, cuyo peligro radica en el hecho de que son suficientemente por mucho tiempo puede vivir en el cuerpo sin mostrarse de ninguna manera. Es posible identificar la enfermedad en la fase temprana, cuando es más tratable, mediante el análisis de marcadores: los marcadores aparecen en la sangre después de la enfermedad o la introducción de la vacuna.

necesito entender que la identificación del patógeno es posible solo 1,5-2 meses después de la infección. Si el análisis es realizado por una mujer embarazada, es posible un resultado falso positivo.

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Si observa uno o más de los síntomas enumerados a continuación, debe considerar hacerse una prueba serológica:

• vomitar;
• falta de apetito o falta de él;
• impotencia sin causa del cuerpo, exceso de trabajo;
• tez amarillenta;
• decoloración de heces y orina.

VIH. Si arrojó un resultado positivo, esto no significa que el paciente esté infectado con SIDA. Si la infección ocurrió recientemente (hace no más de dos meses), la presencia de anticuerpos no permite determinar el hecho del desarrollo de la enfermedad. Se programa un nuevo estudio.

Análisis de sangre serológico- el método de investigación más importante, cuyo objetivo principal es la detección rápida de virus, infecciones y microbios en el cuerpo.

Esta "herramienta" de laboratorio única le permite identificar cualquier enfermedad que sea consecuencia de la supresión inmunológica, así que no sea perezoso, pero realice un análisis regularmente para poder identificar la enfermedad a tiempo y deshacerse de ella rápidamente.

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El método de diagnóstico serológico implica el uso de 2 áreas de investigación: serodiagnóstico (detección de anticuerpos específicos en el suero sanguíneo del examinado) y seroidentificación (determinación de las propiedades antigénicas del patógeno aislado para establecer su tipo y tipo).

En el serodiagnóstico, se utilizan aglutinación, precipitación, lisis, RSK, reacciones que utilizan antígenos marcados o anticuerpos. Los componentes de estas reacciones son: suero sanguíneo de los pacientes examinados y preparaciones antigénicas estándar. El objetivo de la investigación es determinar los títulos de anticuerpos contra patógenos de enfermedades infecciosas en los sueros estudiados.

La detección de títulos elevados de anticuerpos específicos, especialmente si alcanzan el nivel de los denominados títulos "diagnósticos", confirma el diagnóstico propuesto. Se otorga gran importancia al estudio de sueros pareados, cuando los sueros tomados al comienzo de la enfermedad (día 3-4) y los sueros obtenidos en el día 7-10 de la enfermedad se titulan simultáneamente. El valor diagnóstico tiene un aumento de 4 veces en los títulos de anticuerpos.

En la seroidentificación, la reacción de aglutinación en vidrio se usa con más frecuencia que otras. Componentes de la reacción: cultivo puro desarrollado del patógeno (antígeno) y sueros inmunes de conejo de diagnóstico estándar (anticuerpos).

La ventaja del método serológico.- simplicidad, accesibilidad, alta sensibilidad, especificidad, rapidez.

Defectos: la necesidad de costoso medicamentos estándar y ferretería.

Método alergológico

Este método consiste en la detección de la sensibilización del cuerpo a un agente infeccioso en particular, lo que tiene un gran valor diagnóstico. Se sabe que el curso de algunas enfermedades infecciosas se acompaña de la formación de hipersensibilidad de tipo retardado. A este respecto, la administración intradérmica de pequeñas dosis del alérgeno a dichos pacientes provoca una reacción correspondiente del cuerpo, provocada por un encuentro repetido con el alérgeno. La reacción procede de un tipo retardado y, después de 48 a 72 horas, aparece enrojecimiento, hinchazón y, a veces, un infiltrado en el lugar de la inyección del alérgeno ( reacción positiva). Si el cuerpo no está sensibilizado, la administración intradérmica no provocará ninguna reacción del cuerpo (reacción negativa). La industria produce preparaciones especiales para pruebas de alergia cutánea: tuberculina, disentería, brucelina, tularina, etc.

El método alergológico tiene especial gran importancia en los casos en que la identificación del agente causal de una enfermedad infecciosa sea difícil o imposible (por ejemplo, con la lepra) o cuando esto lleve mucho tiempo (por ejemplo, con la brucelosis). La prueba de la tuberculina se usa en la práctica no solo con propósito de diagnóstico, sino también para determinar el momento de la revacunación de los niños con la vacuna BCG, así como para estudiar la inmunidad antituberculosa colectiva.

Ventajas del método alergológico - su sencillez, fiabilidad, expresividad.

Defecto - uso limitado, ya que no todas las enfermedades infecciosas forman hipersensibilidad de tipo retardado.

REACCIONES SEROLÓGICAS EN EL DIAGNÓSTICO

ENFERMEDADES INFECCIOSAS

Actualmente métodos inmunológicos Las investigaciones se usan ampliamente para la diagnosis de laboratorio de las enfermedades infecciosas y no infecciosas.

Las reacciones de interacción entre antígenos y anticuerpos se denominan serológicas (suero - suero, logos - enseñanza).

La esencia de todas las reacciones serológicas es la combinación específica de antígenos y sus correspondientes anticuerpos para formar un complejo. Una reacción serológica es posible si existe una correspondencia inmunológica (homología) - los componentes principales - antígenos y anticuerpos. La especificidad inmunológica se basa en la complementariedad estructural del antígeno y el anticuerpo.

El proceso de interacción entre antígenos y anticuerpos se desarrolla en dos fases: específica e inespecífica. La primera fase se desarrolla rápidamente. Consiste en una conexión específica del centro activo del anticuerpo con los grupos determinantes del antígeno correspondiente (homólogo). La fase posterior se desarrolla más lentamente, no específica: esto es manifestación externa reacciones antígeno-anticuerpo (floculación, turbidez del medio, etc.)

Las pruebas serológicas se utilizan con dos propósitos:

1) para detectar anticuerpos en el suero de prueba utilizando antígenos conocidos (serodiagnóstico);

2) establecer un antígeno desconocido utilizando sueros conocidos (seroidentificación).

Determinación de un antígeno desconocido en investigación microbiológica se lleva a cabo con el fin de establecer el género, especie, tipo de patógenos aislados del sujeto. En tales casos, de los dos componentes principales de la reacción (anticuerpo, antígeno), se desconoce el antígeno, la reacción debe realizarse con anticuerpos conocidos. En este caso, el antígeno es un cultivo puro de microorganismos aislados del material de prueba. Los sueros de diagnóstico inmunológico se utilizan como anticuerpos conocidos. Estos últimos se obtienen de la sangre de animales (la mayoría de las veces conejos) previamente inmunizados con los antígenos bacterianos apropiados. Los sueros inmunes deben contener nivel alto anticuerpos específicos.

Además, las pruebas serológicas pueden utilizarse para determinar diversos antígenos no bacterianos: establecer grupos sanguíneos, antígenos tisulares, tumores, seleccionar parejas donante-receptor en trasplante de órganos y tejidos, etc.

Las pruebas serológicas también se pueden utilizar para detectar anticuerpos en el suero sanguíneo. En tales casos, se requiere un antígeno conocido (diagnosticum). Se pueden usar como antígenos suspensiones de microbios vivos o muertos, extractos o fracciones químicas aisladas de ellos.

Numerosas pruebas serológicas utilizadas actualmente en la práctica asistencial difieren en el fenómeno que revela la relación entre un antígeno y un anticuerpo. La manifestación visible de la reacción será diferente dependiendo de qué técnica se utilice, en qué condición física se usa un antígeno o suero inmune, ya sea que el complemento esté involucrado en la reacción. Por ejemplo, si se utiliza un antígeno corpuscular, se produce el fenómeno de la aglutinación, la adhesión de partículas (reacción de aglutinación). Debido a que los antígenos particulados están compuestos por partículas relativamente grandes, se forma un precipitado floculento visible. Si se usa un antígeno soluble en la reacción, se observa un precipitado de grano fino: un precipitado (reacción de precipitación). Si además se introduce complemento en la reacción de interacción entre los antígenos bacterianos y el suero inmune, se produce la bacteriólisis (disolución de los antígenos bacterianos) o la lisis de los eritrocitos (cuando se utilizan como antígeno). El uso de sueros inmunes marcados con fluorocromos, enzimas o radioisótopos en reacciones serológicas permite establecer la unión específica de antígenos a anticuerpos según el fenómeno correspondiente (brillo, cambio de color o actividad del marcador radioisótopo).

Se utilizan criterios como la especificidad y la sensibilidad para evaluar las reacciones serológicas. La especificidad es la capacidad de los antígenos para reaccionar solo con anticuerpos homólogos. Sensibilidad: la capacidad de interacción específica con cantidades mínimas de antígenos y anticuerpos.

Reacción de aglutinación

La reacción de aglutinación (AR) es una interacción específica de antígenos con anticuerpos, expresada en la adhesión de antígenos bajo la influencia de anticuerpos séricos y su precipitación en presencia de un electrolito. Fue la primera de las reacciones serológicas propuestas.

Una característica de la reacción de aglutinación es que en su formulación se utilizan células u otras partículas corpusculares como antígenos. La reacción se basa en la capacidad de los antígenos corpusculares para combinarse específicamente con anticuerpos homólogos de sueros inmunes con la formación de un precipitado en forma de granos, copos, terrones. La reacción tiene lugar solo en presencia de electrolitos. Los antígenos utilizados en la reacción se denominan aglutinógenos, los anticuerpos se denominan aglutininas y el precipitado resultante se denomina aglutinado.

Como antígeno en la reacción de aglutinación, se puede utilizar una suspensión de cultivos vivos en solución isotónica de cloruro de sodio o microbios muertos por formalina, alcohol o calentamiento, así como eritrocitos, leucocitos u otras células.

La fuente de anticuerpos es el suero aglutinante conocido obtenido al inmunizar animales con los antígenos apropiados, o el suero del paciente examinado.

Hay diferentes formas de configurar la reacción de aglutinación. De estas, las más utilizadas son: reacción de orientación sobre vidrio, aglutinación expandida en tubos de ensayo, reacciones de hemaglutinación y hemaglutinación indirecta(RNGA).

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