Muestras de Coombs. Instrucciones de uso del “Conjunto de reactivos para la determinación de antígenos y anticuerpos del sistema Rhesus en sangre humana” (ags para la prueba de Coombs) Suero para la prueba de Coombs

La prueba de Coombs es un análisis de sangre que se realiza para detectar si la sangre contiene ciertos anticuerpos que pueden ser peligrosos. Estos anticuerpos se adhieren a los glóbulos rojos y pueden invadir sistema inmunitario, así como causar daño de otras maneras. En terminología médica, este estudio también se denomina prueba de antiglobulina (AGT).

Tipos de muestras de Coombs

Hay dos tipos de pruebas de Coombs: directas e indirectas.

Prueba de Coombs directa, también conocido como directo (DAT), detecta autoanticuerpos que se adhieren a la superficie de los glóbulos rojos. Estos anticuerpos a veces se producen en el cuerpo debido a determinadas enfermedades o al tomar determinados medicamentos, como la procainamida, la metildopa o la quinidina.

Estos anticuerpos son peligrosos porque a veces causan anemia al destruir los glóbulos rojos.

A veces, esta prueba se solicita para diagnosticar la causa de la ictericia o la anemia.

Normalmente, la reacción de Coombs es negativa.

Positivo para:

• enfermedad hemolítica de los recién nacidos;
• hemólisis autoinmune;
• reacciones de transfusión hemolíticas;
• inmune medicinal anemia hemolítica.

Prueba de Coombs indirecta, también conocido como , se utiliza para detectar anticuerpos contra los glóbulos rojos que se encuentran en el suero sanguíneo (el suero es el líquido amarillo claro de la sangre que queda después de que se han eliminado los glóbulos rojos y el coagulante).

La prueba de Coombs indirecta se utiliza durante la transfusión de sangre para determinar si la sangre del donante coincide con la sangre del receptor. Esto se llama prueba de compatibilidad y ayuda a prevenir cualquier reacción adversa a la sangre del donante. Esta prueba también se recomienda para mujeres embarazadas. Algunas mujeres tienen anticuerpos IgG, que pueden atravesar la placenta hacia la sangre fetal y dañar al recién nacido, provocando una enfermedad hemolítica conocida como anemia hemolítica.

Procedimiento

La sangre se extrae con una jeringa de una vena, generalmente del dorso de la mano o de la curva del codo. Antes de esto, el lugar de la punción se desinfecta completamente y, después de realizar un análisis de sangre, se aplica una gasa o un algodón limpio.

La sangre resultante se purifica en el laboratorio y se separan los glóbulos rojos. Luego, la muestra se analiza secuencialmente utilizando varios sueros y reactivos de Coombs, que se contrastan. Si se produce aglutinación (aglutinación de células de sangre), esto significa un resultado positivo.

Sin embargo, si la prueba es negativa, significa que hay anticuerpos en la sangre que actúan contra los glóbulos rojos. Esto puede indicar varias enfermedades, como anemia (tanto natural como causada por la toma de medicamentos), sífilis o infección por micoplasma. Después de recibir los resultados, el médico tratante le prescribirá el tratamiento adecuado.

Video

Reacción de aglutinación para la determinación de anticuerpos anti-Rhesus (prueba de Coombs indirecta)aplicar en pacientes con hemólisis intravascular. En algunos de estos pacientes se detectan anticuerpos anti-Rhesus, que son incompletos y monovalentes. Interactúan específicamente con los eritrocitos Rh positivos, pero no provocan su aglutinación. La presencia de tales anticuerpos incompletos se determina mediante la prueba de Coombs indirecta. Para ello, se añade suero antiglobulina (anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas) al sistema de anticuerpos anti-Rh + eritrocitos Rh positivos, lo que provoca la aglutinación de los eritrocitos. Utilizando la reacción de Coombs, se diagnostican afecciones patológicas asociadas con la lisis intravascular de eritrocitos de origen inmunológico, por ejemplo, enfermedad hemolítica del recién nacido: los eritrocitos de un feto Rh positivo se combinan con anticuerpos incompletos contra el factor Rh que circula en la sangre, que tienen pasó a través de la placenta de una madre Rh negativa.

Mecanismo. La dificultad para identificar anticuerpos incompletos (monovalentes) se debe a que estos anticuerpos, cuando se unen a los epítopos de un antígeno específico, no forman una estructura reticular y la reacción entre antígenos y anticuerpos no se detecta ni por aglutinación, precipitación, u otras pruebas. Para identificar los complejos antígeno-anticuerpo formados, es necesario utilizar sistemas de prueba adicionales. Para detectar anticuerpos incompletos, por ejemplo contra el antígeno Rh de los eritrocitos en el suero sanguíneo de una mujer embarazada, la reacción se lleva a cabo en dos etapas: 1) se añaden eritrocitos que contienen el antígeno Rh a diluciones dobles del suero problema y se mantienen a 37°C durante una hora; 2) se añade suero antiglobulina antihumana de conejo (en una dilución de trabajo pretitulada) a los eritrocitos bien lavados después de la primera etapa. Después de una incubación de 30 minutos a 37 °C, los resultados se evalúan por la presencia de hemaglutinación (reacción positiva). Es necesario controlar los ingredientes de la reacción: 1) suero de antiglobulina + glóbulos rojos que se sabe que están sensibilizados con anticuerpos específicos; 2) eritrocitos tratados con suero normal + suero antiglobulina; 3) Eritrocitos Rh negativos tratados con suero problema + suero antiglobulina.

50. Reacción de hemaglutinación pasiva. Mecanismo. Componentes. Solicitud.

Reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva)(RNGA, RPGA) se basa en el uso de eritrocitos (o látex) con antígenos o anticuerpos adsorbidos en su superficie, cuya interacción con los correspondientes anticuerpos o antígenos del suero sanguíneo del paciente hace que los eritrocitos se peguen y caigan al fondo del Tubo de ensayo o celda en forma de sedimento festoneado.

Componentes. Para realizar RNGA se pueden utilizar eritrocitos de ovejas, caballos, conejos, pollos, ratones, humanos y otros, los cuales se almacenan para uso futuro tratándolos con formaldehído o glutaraldehído. La capacidad de adsorción de los eritrocitos aumenta cuando se tratan con soluciones de tanino o cloruro de cromo.

Los antígenos en RNGA pueden ser antígenos polisacáridos de microorganismos, extractos de vacunas bacterianas, antígenos de virus y rickettsias, así como otras sustancias.

Los glóbulos rojos sensibilizados por la hipertensión se denominan eritrocitos diagnósticos. Para la preparación de eritrocitos diagnosticum, se utilizan con mayor frecuencia eritrocitos de oveja, que tienen una alta actividad adsorbente.

Solicitud. RNGA se utiliza para diagnosticar enfermedades infecciosas, determinar la hormona gonadotrópica en la orina al establecer el embarazo, para identificar hipersensibilidad a medicamentos, hormonas y en algunos otros casos.

Mecanismo. Reacción hemaglutinación indirecta(RNGA) tiene una sensibilidad y especificidad significativamente mayores que la reacción de aglutinación. Se utiliza para identificar el patógeno por su estructura antigénica o para indicar e identificar productos bacterianos: toxinas en el material patológico que se está estudiando. En consecuencia, se utilizan diagnósticos estándar (comerciales) de anticuerpos contra eritrocitos, obtenidos mediante adsorción de anticuerpos específicos en la superficie de eritrocitos curtidos (tratados con taninos). Se preparan diluciones seriadas del material de prueba en los pocillos de placas de plástico. Luego se añade a cada pocillo un volumen igual de suspensión al 3% de glóbulos rojos cargados con anticuerpos. Si es necesario, la reacción se lleva a cabo en paralelo en varias filas de pocillos con eritrocitos cargados con anticuerpos de diferentes especificidades de grupo.

Después de 2 horas de incubación a 37 °C, se tienen en cuenta los resultados, valorando el aspecto del sedimento de glóbulos rojos (sin agitar): en caso de reacción negativa, aparece un sedimento en forma de disco compacto o anillo en el fondo del pozo; con una reacción positiva, aparece un sedimento de encaje característico de glóbulos rojos, una película delgada con bordes irregulares.

prueba de coombs

La prueba de Coombs directa es una prueba de antiglobulina (aglutinación en gel que permite la detección de anticuerpos divalentes completos), que detecta anticuerpos de clase IgG y el componente C3 del complemento en la superficie de los glóbulos rojos. Normalmente, los anticuerpos detectados mediante la prueba de Coombs directa tienen una especificidad amplia que no está asociada con un antígeno bien establecido. Una prueba de Coombs directa positiva indica claramente que el paciente tiene anemia hemolítica, aunque no todos los pacientes con una prueba de antiglobulina directa positiva padecen esta enfermedad. En aproximadamente el 10% de los pacientes, los anticuerpos o los componentes del complemento en la membrana de los glóbulos rojos no pueden determinarse mediante una prueba de Coombs directa (la prueba es negativa), pero, sin embargo, padecen anemia hemolítica autoinmune. Para aclarar la especificidad de los anticuerpos en tales casos, se utilizan pruebas con su elución. Una prueba de Coombs directa, positiva sólo para el complemento, suele referirse a anticuerpos fríos del tipo IgM. En este caso Anticuerpos IgM no están presentes en los glóbulos rojos a la temperatura corporal basal. Sin embargo, debido al hecho de que los anticuerpos IgM fijan activamente el complemento y el complemento permanece en los glóbulos rojos, en esta forma de anemia hemolítica autoinmune (enfermedad de agutininas frías), la prueba de Coombs será positiva solo para el complemento.

La prueba de Coombs directa es positiva en la anemia hemolítica autoinmune causada por anticuerpos calientes, anemia autoinmune inducida por fármacos (al tomar metildopa, hasta el 20% de los pacientes tienen reacción positiva), anemia hemolítica por adsorción de fármacos, anemia hemolítica de tipo inmunocomplejo (la prueba es positiva solo para C3), con anemia hemolítica autoinmune causada por anticuerpos contra el resfriado: enfermedad de aglutininas frías (la prueba es positiva solo para C3). En la hemoglobinuria fría paroxística, la prueba de Coombs directa es negativa.
En el período agudo de la enfermedad, debido a la destrucción de los glóbulos rojos en los que se encuentra el un gran número de anticuerpos, con crisis hemolítica, así como en caso de cantidad insuficiente de anticuerpos durante curso crónico enfermedad, se puede observar una prueba de Coombs directa negativa.

• Una condición importante para garantizar la calidad. investigación de laboratorio la sangre se extrae con el estómago vacío, por la mañana (antes de las 12:00).
• 12 horas antes de la prueba se debe evitar beber alcohol, fumar, comer y limitar la actividad física.
• La mañana del análisis de sangre, puede beber agua.
• Evite tomar medicamentos; Si no es posible suspender la toma del medicamento, se debe informar al laboratorio.
• Es recomendable tomar el material antes de realizar cualquier procedimiento de diagnóstico médico.
• Al evaluar los niveles hormonales en las mujeres, es importante considerar el día. ciclo menstrual¿Cuándo es el mejor momento para determinar determinadas hormonas? Puede obtener esta información de su médico.

Prueba de Coombs directa. Esta prueba se utiliza para comprobar la presencia de anticuerpos bloqueantes fijados en los glóbulos rojos del niño. Una prueba directa positiva indica sensibilización y sirve como un signo convincente de enfermedad hemolítica del recién nacido incluso antes de que aparezcan otros. signos clínicos. Como excepción y sólo en casos muy graves, una prueba de Coombs directa puede resultar negativa debido a la hemólisis casi completa de los glóbulos rojos sensibilizados.

Una prueba de Coombs directa se realiza de la siguiente manera: se colocan 5 gotas de sangre extraídas del talón del niño en un tubo de ensayo y se añaden 5 ml. solución salina. Revuelva bien y centrifugue durante 10 minutos. Se separa el líquido transparente sobre el sedimento de glóbulos rojos. Luego agregue nuevamente 5 ml de solución salina, mezcle y centrifugue. Después de mezclar con solución salina tres veces, los glóbulos rojos se lavan bien. Después de la última separación del sobrenadante, se mezcla el sedimento de eritrocitos en una cantidad de 0,1 ml con 0,9 ml de solución fisiológica. Aplique 2-3 gotas de esta mezcla a un portaobjetos de vidrio y agregue una gota de suero Coombs. La presencia de aglutinación indica que la reacción es positiva (prueba de Coombs directa positiva). El estudio debe realizarse a temperatura ambiente superior a 16° para evitar el efecto de las aglutininas frías.

Prueba de Coombs indirecta sirve como evidencia de la presencia de anticuerpos libres en el suero materno y se realiza con suero materno.

La enfermedad hemolítica en un recién nacido con incompatibilidad Rh suele manifestarse después del segundo embarazo. El primer niño nace sano, el segundo con signos de anemia leve y solo después del tercer embarazo nacen niños con signos evidentes de enfermedad hemolítica. Sólo las mujeres presensibilizadas pueden dar a luz a un niño con síntomas de enfermedad hemolítica durante su primer embarazo. En algunos casos, la inmunización provoca abortos y muertes fetales. Para el inicio y la gravedad de la enfermedad, son importantes el estado de la placenta y la duración de la exposición de las aglutininas maternas al feto. Cuando las aglutininas aparecen entre 10 y 14 semanas antes del nacimiento, el niño suele experimentar formas subclínicas. La aparición temprana de aglutininas, entre 15 y 26 semanas antes del nacimiento, provoca formas graves de la enfermedad. En todas las formas de la enfermedad, el proceso principal es la hemólisis. La consecuencia de la reacción antígeno-anticuerpo es la hemólisis, daño al hígado y a los capilares cerebrales. Dependiendo de qué lesión predomine, también hay varias formas enfermedades. Algunos fenómenos anafilácticos también son peligrosos. Conducen a la formación de sustancias similares a la histamina, causando graves daños a las células del hígado y especialmente a las células ganglionares de los ganglios basales, el cuerno de amón, Medula oblonga e incluso la corteza cerebral. Cuando las células del hígado están dañadas, la ictericia hepática se suma a la ictericia extrahepática. Los niños mueren debido a síntomas graves de kernicterus. Si sobreviven, los síntomas de las lesiones permanecen. sistema nervioso(trastornos del sistema extrapiramidal con movimientos coreoatetósicos, una especie de marcha de baile, movimientos forzados de la cabeza, a veces un trastorno de la coordinación de los movimientos voluntarios con caídas frecuentes, aumento del tono muscular, retraso mental, es decir con signos de los llamados. encefalopatía posticteria infantil).

Hay una gran cantidad de antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Dependiendo del tipo de estos antígenos se distinguen grupos sanguíneos; los grupos más estudiados son ABO, Rh, Kell, Duffy y muchos otros...

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Descripción del estudio

Preparándose para el estudio: Se extrae sangre de una vena y luego se obtiene suero (plasma sanguíneo sin fibrinógeno) mediante coagulación natural o precipitación de fibrinógeno. Material de exámen: tomando sangre

Hay una gran cantidad de antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Dependiendo del tipo de estos antígenos se distinguen los grupos sanguíneos, los grupos más estudiados son ABO, Rh, Kell, Duffy y muchos otros sistemas. Normalmente, en la sangre hay anticuerpos contra antígenos de otro grupo, pero durante las transfusiones de sangre, el embarazo, Enfermedades autoinmunes etc. Se detectan anticuerpos contra sus antígenos. Anticuerpos incompletos contra los eritrocitos.

Método

La reacción de Coombs indirecta se basa en la detección de la aglutinación (unión) de los glóbulos rojos que tienen anticuerpos incompletos, que aparece cuando se añade suero antiglobulina.

En la primera etapa, se añaden en un tubo de ensayo glóbulos rojos del donante (grupo O(I), Rh+) ​​y el suero problema. Si hay anticuerpos incompletos contra los glóbulos rojos en el suero de prueba, se fijan en la superficie de los glóbulos rojos del donante.

En la segunda etapa, se aplican al vidrio glóbulos rojos de un donante con anticuerpos (si los hay) y suero antiglobulina estándar con anticuerpos contra las inmunoglobulinas humanas. Si en la primera etapa los anticuerpos contra los eritrocitos se fijan en la superficie de los eritrocitos, al agregar suero estándar Los glóbulos rojos se unen debido a la interacción de los anticuerpos.

Valores de referencia - norma
(Prueba de Coombs indirecta (prueba de antiglobulina, detección de anticuerpos antieritrocitos incompletos), sangre)

La información sobre los valores de referencia de los indicadores, así como la composición de los indicadores incluidos en el análisis, pueden diferir ligeramente según el laboratorio.

Norma:

Normalmente no debería haber anticuerpos contra los propios glóbulos rojos; cuando se realiza la prueba de Coombs, no se produce agregación de glóbulos rojos.

Indicaciones

Estudio de la inmunidad humoral específica en casos de sospecha de reacciones autoinmunes en el organismo, conflicto de Rh entre madre y feto, determinación de la compatibilidad sanguínea entre donante y receptor.

Valores crecientes (resultado positivo)

Los anticuerpos contra los glóbulos rojos se detectan cuando:

1. Anemia hemolítica autoinmune

2. enfermedad hemolítica recién nacidos

3. Enfermedades sistémicas tejido conectivo

4. Hepatitis crónica activa, etc.