Trasduzione. tipi. Meccanismo di trasduzione aspecifica. Ricombinazione genetica durante la trasformazione. trasduzione nei batteri. Trasduzione generale e specifica. Uso della trasformazione e della trasduzione per la mappatura genica La trasduzione viene eseguita con

In un altro batteriofago. La trasduzione generale viene utilizzata nella genetica batterica per la mappatura del genoma. Sia i fagi temperati che quelli virulenti sono in grado di trasduzione, questi ultimi, tuttavia, distruggono la popolazione batterica, quindi la trasduzione con il loro aiuto non ha di grande importanza sia in natura che nella ricerca.

La trasduzione è stata descritta Norton Zinder e Joshua Lederberg nel 1952 Salmonella. Hanno osservato il ripristino dei fenotipi normali nei ceppi auxotrofi e hanno dimostrato che solo un virus può trasferire materiale genetico.

Meccanismo

Schema generale di trasduzione

La trasduzione è il trasferimento di DNA mediato dai fagi tra le cellule batteriche. Il passaggio chiave in questo processo è il confezionamento del DNA trasferito nella testa del fago durante la fase litica del suo ciclo vitale, cioè quando la cellula muore, rilasciando particelle virali verso l'esterno. Di norma, durante l'assemblaggio delle particelle virali, il proprio DNA entra nella testa del fago, ma occasionalmente si verificano errori quando frammenti di DNA batterico entrano nella testa del fago, che potrebbe formarsi, ad esempio, durante la distruzione del cromosoma batterico causato dal fago. Le particelle fagiche contenenti frammenti di DNA batterico sono chiamate particelle trasducenti. Possono infettare le cellule come i normali fagi, poiché hanno tutti i geni necessari per questo. Quando, dopo essersi attaccato a una cellula, un fago vi inietta il suo DNA genomico, inietta anche il DNA batterico contenuto nella sua testa. Curiosamente, la trasduzione è possibile anche durante il ciclo litico.

Non tutti i fagi sono in grado di trasduzione. Solo quei fagi che causano la frammentazione del DNA genomico batterico in frammenti ne sono capaci. misura giusta per adattarsi al capside. A volte non è il DNA genomico del batterio che entra nel virione, ma il plasmide, che, dopo essere entrato nella successiva cellula infetta, continuerà a raddoppiare. I frammenti del genoma trasportati dai fagi, invece, non sono in grado di replicarsi; il loro raddoppio è possibile solo se possono integrarsi nel cromosoma del batterio ricevente. Se un frammento del genoma batterico rimane libero, per diverse generazioni cadrà in una delle cellule figlie durante la divisione; tale trasduzione è chiamata abortiva.

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Mappatura di trasduzione

La trasduzione è stata utilizzata per mappare i geni dei cromosomi batterici. Il metodo si basa sul fatto che i frammenti di DNA batterico trasferiti durante la trasduzione sono piuttosto grandi e possono contenere un numero di geni, quindi i geni localizzati vicini possono essere trasferiti simultaneamente durante la trasduzione (cotrasduzione). Meno geni


La trasduzione è il trasferimento di materiale genetico da una cellula batterica all'altra da parte di un batteriofago. La trasduzione è stata scoperta nel 1952 da N. Zinder ed E. Lederberg su due mutanti auxotrofici di Salmonella typhimurium. L'esperimento è stato condotto in un tubo a forma di (, separato da un filtro poroso ultrasottile di vetro. In una parte è stato posto il ceppo 2A dipendente dall'istidina, nell'altra è stato posto il ceppo 22A dipendente dal triptofano. Dopo qualche tempo, i prototrofi sintetizzando il triptofano è apparso nella coltura del ceppo 22A. È stato riscontrato che il ceppo 22A conteneva un fago (P22) in grado di lisare le cellule del ceppo 2A. Penetrando attraverso un filtro di vetro, il fago P22 ha lisato le cellule del ceppo 2A. Pertanto, quando la coltura 22A è stato seminato su un terreno che non conteneva triptofano, è apparsa la crescita di questa coltura.
Lo studio del valore (dalla dimensione dei pori del filtro), della velocità di sedimentazione, della sensibilità al calore di questo agente filtrante ha mostrato che è identico a quelli del fago P22. Sulla base di ciò, si è concluso che il fago contenuto nella coltura 22A è passato attraverso il filtro, ha infettato le cellule del ceppo 2A che erano sensibili ad esso e durante la riproduzione includeva un frammento del cromosoma batterico di questo ceppo nel suo genoma. Dopo essere stato rilasciato dalle cellule lisate, il fago è tornato al ginocchio del tubo, dove c'erano cellule del ceppo 22A. Quando queste cellule sono state infettate, il fago ha trasferito loro il frammento portato del cromosoma delle cellule del ceppo 2A, che erano indipendenti dal triptofano. Come risultato dell'integrazione di questo frammento nel cromosoma delle cellule del ceppo 22A, si sono formati ricombinanti prototrofici. Nella coltura del ceppo 2A, i prototrofi non sono comparsi, poiché le cellule sono state lisate.
Il fago può portare geni responsabili di varie proprietà della cellula: resistenza agli antibiotici, produzione di tossine, prototrofia. Durante la trasduzione, così come durante la trasformazione, vengono trasferiti solo piccoli frammenti di DNA, non più di 1/100 della lunghezza del cromosoma batterico.
Solo alcuni fagi temperati hanno proprietà di trasduzione, vale a dire, fagi che portano un frammento del cromosoma batterico come parte del loro genoma. Questi fagi sono difettosi: non contengono l'intero set dei propri geni. Alcuni dei loro geni rimangono nel cromosoma batterico (invece dei geni cromosomici presi).
Esistono tre tipi di trasduzione: generale o non specifica, specifica e abortiva.
Il tipo di trasduzione è determinato dalle condizioni per la formazione dei fagi trasduttori.
La trasduzione generale viene effettuata dai fagi che si formano durante il ciclo litico. Durante la riproduzione intracellulare del fago, il cromosoma batterico viene distrutto e i suoi singoli frammenti casuali vengono inclusi nelle particelle fagiche in maturazione. La dimensione del frammento incluso è determinata dalla capacità della testa del fago. Ad esempio, il fago trasduttore P1 include il 2,3% del cromosoma E. coli, il fago P22, il cui genoma è 2,3 volte più piccolo di quello di P1 (quindi anche la capacità della testa è inferiore), include l'1% del cromosoma Salmonella. Nei singoli fagi trasduttori, tutto il loro DNA può essere sostituito con DNA batterico. Pertanto, tali fagi possono trasportare qualsiasi geni cromosomici ed essere incluso in qualsiasi regione del cromosoma del ricevente. I fagi che forniscono tale trasduzione possono trasportare geni che controllano i requisiti nutrizionali dei batteri, le proprietà enzimatiche e la resistenza a medicinali, proprietà sierologiche e virulente, ovvero qualsiasi proprietà della cellula donatrice.
La trasduzione specifica viene effettuata dai fagi formati a seguito dell'induzione di batteri lisogenici (ad esempio irradiandoli con UV) o dal rilascio spontaneo del profago dal cromosoma. In casi generali, il fago emergente, quando escluso dal cromosoma, può includere nel suo genoma solo un segmento vicino del cromosoma, lasciando una parte del suo genoma nel cromosoma. A differenza dei fagi di trasduzione generali, il cui genoma è dominato dal DNA batterico, nei fagi di trasduzione specifici, la parte principale del genoma è il DNA dei fagi. Durante la lisogenizzazione di batteri sensibili, il genoma di uno specifico fago di trasduzione è collegato solo a determinate regioni del cromosoma batterico i, cioè il fago ha uno specifico punto di attacco sul cromosoma. Pertanto, al momento del rilascio, un tale fago cattura solo una regione vicina rigorosamente definita del cromosoma batterico e la trasferisce alla cellula ricevente. Questa capacità di trasduzione specifica è stata stabilita in E. coli phage X, che, durante la lisogenizzazione cellulare, si fissa sempre sul cromosoma batterico accanto ai geni che controllano la fermentazione del galattosio (galattochinasi e galattosiltransferasi) e li trasduce nella cellula ricevente gal-. Con una trasduzione specifica, la cellula ricevente riceve geni rigorosamente definiti.
La trasduzione abortiva si verifica allo stesso modo della trasduzione aspecifica, ma il frammento del cromosoma donatore introdotto dal fago nella cellula ricevente non è incluso nel cromosoma e non si replica, ma si trova nel citoplasma cellulare. Questo frammento durante la divisione cellulare viene trasferito a una sola cellula figlia e solo questa cellula porta una nuova proprietà controllata dal gene introdotto della cellula donatrice.
La trasduzione deve essere distinta dalla conversione dei fagi. Durante la trasduzione di qualsiasi tipo, i cambiamenti si verificano solo in quelle cellule infettate dai fagi in cui è stato introdotto il DNA dei batteri donatori, cioè che sono state infettate con i fagi trasduttori. Questa è una quantità molto piccola della popolazione batterica. I cambiamenti causati dalla trasduzione dei fagi sono molto persistenti, si trasmettono alla prole e persistono anche quando la cellula perde il fago.
La conversione fagica e lisogenica sono cambiamenti nel fenotipo (proprietà cellulari) causati dall'infezione della cellula con un fago temperato. I cambiamenti qui sono causati dai geni del fago. Possono controllare direttamente la sintesi di un singolo frammento o, interagendo con quelli batterici, portare a un cambiamento nel fenotipo cellulare. Molto spesso, la conversione dei fagi influenza la sintesi o l'attività degli enzimi che controllano la formazione dei componenti cellulari, che è accompagnata da cambiamenti nella morfologia della colonia. Pertanto, la lisogenizzazione di ceppi ruvidi di micobatteri porta alla formazione di colonie lisce. Il cambiamento è sperimentato da tutte le cellule infettate dal fago (singole durante la trasduzione). Durante la conversione dei fagi, i cambiamenti nel fenotipo batterico persistono finché il fago è presente nella cellula.

Il comportamento dei fagi in una cellula batterica

I fagi sono in grado di implementare due modi di sviluppo in una cellula batterica:

  • Litico: dopo che il DNA del fago è entrato nel batterio, inizia immediatamente la sua replicazione, la sintesi proteica e l'assemblaggio di particelle fagiche già pronte, dopo di che si verifica la lisi cellulare. I fagi che si sviluppano solo secondo questo scenario sono detti virulenti.
  • Lisogenico: il DNA fagico che è entrato nella cellula batterica è integrato nel suo cromosoma o esiste in esso come plasmide, replicandosi ad ogni divisione cellulare. Questo stato del batteriofago è chiamato profago. Il sistema della sua replicazione in questo caso è soppresso dai repressori da esso sintetizzati. Con una diminuzione della concentrazione del repressore, il profago viene indotto e passa alla via di sviluppo litica. I batteriofagi che implementano questa strategia sono chiamati temperati. Per alcuni di essi lo stadio del profago è obbligatorio, mentre altri, in alcuni casi, sono in grado di svilupparsi immediatamente lungo il percorso litico.

Trasferimento di frammenti di DNA batterico

Trasduzione generale (non specifica).

È svolto dal fago P1, che esiste nella cellula batterica sotto forma di plasmide, e dai fagi P22 e Mu, che si integrano in qualsiasi parte del cromosoma batterico. Dopo l'induzione del profago, con una probabilità di 10-5 per cellula, un frammento di DNA batterico può essere erroneamente impacchettato nel capside del fago; in questo caso, il fago stesso non contiene DNA. La lunghezza di questo frammento è uguale alla lunghezza del normale DNA fagico; la sua origine può essere qualsiasi: una regione casuale del cromosoma, un plasmide, altri fagi temperati.

Una volta in un'altra cellula batterica, un frammento di DNA può essere incorporato nel suo genoma, di solito mediante ricombinazione omologa. I plasmidi trasferiti dal fago sono in grado di formare un anello e replicarsi in una nuova cellula. In alcuni casi, un frammento di DNA non si integra nel cromosoma del ricevente, non si replica, ma rimane nella cellula e viene trascritto. Questo fenomeno è chiamato trasduzione abortiva.

Trasduzione specifica

La trasduzione specifica è stata studiata al meglio usando il fago λ come esempio. Questo fago è integrato in un solo sito (sito att) del cromosoma E.coli con una certa sequenza nucleotidica (omologa al sito att nel DNA fagico). Durante l'induzione, la sua esclusione può fallire con un errore (probabilità 10 −3 -10 −5 per cellula): un frammento delle stesse dimensioni del DNA fagico viene ritagliato, ma con l'inizio nel posto sbagliato. In questo caso, alcuni dei geni dei fagi vengono persi e alcuni dei geni E.coli viene catturato da lui. La probabilità di trasferimento genico in questo caso diminuisce all'aumentare della distanza da esso al sito att.

Ogni fago temperato che si integra specificamente nel cromosoma ha il proprio sito att e, di conseguenza, i geni posti accanto ad esso, che è in grado di trasmettere. Un certo numero di fagi può integrarsi in qualsiasi punto del cromosoma e trasportare qualsiasi gene mediante il meccanismo della trasduzione specifica. Inoltre, il cromosoma contiene solitamente sequenze che sono parzialmente omologhe alla regione att del DNA fagico. Quando un sito att completamente omologo è danneggiato, è possibile ottenere l'inclusione del fago nel cromosoma secondo queste sequenze e il trasferimento, nel corso di una trasduzione specifica, di geni già adiacenti ad essi.

Quando un fago temperato che trasporta geni batterici viene integrato nel cromosoma di un nuovo batterio ospite, contiene già due geni identici: il proprio e portato dall'esterno. Poiché il fago è privato di alcuni dei propri geni, spesso non può essere indotto e riprodursi. Tuttavia, quando la stessa cellula viene infettata da un fago "ausiliario" della stessa specie, diventa possibile l'induzione di un fago difettoso. Sia il DNA del normale fago "ausiliario" che il DNA del fago difettoso, insieme ai geni batterici che trasportano, escono dal cromosoma e si replicano. Pertanto, circa il 50% delle particelle fagiche risultanti trasporta DNA batterico. Questo fenomeno è chiamato trasduzione ad alta frequenza (HFT). trasmissione ad alta frequenza).

Storia di studio

Esther Lederberg è stata la prima scienziata a isolare il batteriofago lambda, un virus del DNA, da Escherichia coli K-12 nel 1950.

La vera scoperta della trasduzione è associata al nome dello scienziato americano Joshua Lederberg. Nell'anno scoprì, insieme a Norton Zinder, una trasduzione comune. In Lederberg et al., l'esistenza di trasduzione abortiva è stata mostrata, in - specifico.

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In generale, le particelle fagiche contenenti segmenti del DNA della cellula ospite trasferiscono tratti relativamente lunghi di DNA genomico da una cellula batterica all'altra. Le particelle di fagi trasduttori si formano durante alcuni processi infettivi quando il DNA della cellula è effettivamente degradato e i frammenti


DNA cellulare, approssimativamente delle dimensioni del genoma del fago, per caso confezionato in particelle di batteriofago maturo. Come risultato della successiva infezione di cellule batteriche con una popolazione di particelle fagiche, compresi i fagi trasduttori, questi ultimi trasferiscono il DNA delle cellule donatrici a queste cellule infette. La ricombinazione tra i frammenti introdotti del DNA donatore e il DNA della cellula ricevente porta ad un cambiamento nel genotipo di quest'ultima.

Ogni particella fagica trasducente di solito contiene solo un frammento casuale del cromosoma donatore originale. La probabilità di includere qualsiasi parte del genoma del donatore in una tale particella è approssimativamente la stessa. Tuttavia, a causa delle dimensioni piuttosto grandi dei segmenti di DNA trasdotti (per alcuni batteriofagi, è di circa 100 kbp, ovvero il 2,5 percento dell'intero cromosoma di E. coli), la cellula ricevente di solito acquisisce un intero gruppo di geni in un atto di trasduzione. Di conseguenza, i geni che sono strettamente legati tra loro sul cromosoma del donatore vengono co-trasdotti ad alta frequenza, mentre i geni che sono distanti tra loro vengono trasdotti in modo indipendente. Determinare la frequenza della co-trasduzione genica aiuta a perfezionare le mappe genetiche consentendo la stima delle distanze relative tra geni strettamente collegati. 3 Trasduzione specifica (limitata).

La trasduzione del secondo tipo, specifica, è caratteristica dei batteriofagi temperati, il cui ciclo infettivo viene interrotto a seguito dell'incorporazione del genoma del virus in uno specifico locus del DNA cromosomico della cellula infetta. Vengono chiamati i batteri contenenti tali genomi fagici integrati lisogeno. Portano genomi virali come elementi ereditari dei propri cromosomi. In una cellula lisogenica, i genomi virali e cellulari si replicano come una singola unità e sono reciprocamente compatibili. L'integrazione del genoma del fago con il genoma della cellula ospite priva il fago della capacità di indurre la morte cellulare e produrre prole infettiva. Per questo motivo, batteriofago


capace di lisogenesi, a differenza virulento fago, ho il nome moderare.

In determinate condizioni - induzione- lo stato lisogenico viene interrotto e il genoma virale viene asportato dal cromosoma ospite. Si replica per formare molte particelle virali e uccide la cellula. Di solito, l'escissione del genoma virale è molto precisa e il fago risultante contiene un genoma virale che corrisponde pienamente a quello originale.

A volte il genoma fagico viene tagliato in modo errato e i geni cromosomici sono inclusi nelle particelle fagiche figlie, adiacente al genoma virale integrato. Questi geni vengono attivati ​​al posto di alcuni geni virali. Durante il successivo ciclo di infezione, i geni della cellula donatrice passano insieme ai geni fagici alle cellule riceventi. Dopo l'incorporazione del DNA del fago trasduttore nel genoma ricevente, la cellula acquisisce, insieme al genoma del fago, l'informazione genetica del precedente ospite fagico.

Pertanto, nella trasduzione specifica, il fago funge da vettore per il trasferimento genico da una cellula all'altra. Utilizzando questo meccanismo, vengono trasdotti solo quei geni cromosomici della cellula ospite che sono strettamente legati al sito di integrazione del genoma virale.

Poiché diversi fagi temperati si inseriscono in diversi siti cromosomici, tagliarli in modo errato si tradurrà in fagi che trasducono diversi geni cromosomici. quindi fagi lambda trasducono i geni responsabili del metabolismo del galattosio, o geni che controllano la sintesi della biotina, e i fagi f80, un numero diverso di geni che codificano per enzimi per la biosintesi del triptofano.

Il genoma del fago è in grado di trasduzione specifica a condizione che:

1 Deve acquisire un segmento di DNA non virale legato in modo covalente per essere trasdotto. Questo segmento di DNA è solitamente di origine cellulare, ma in linea di principio può provenire da qualsiasi fonte. Può essere incorporato ovunque nel genoma virale, purché


non influisce sulla replicazione del DNA virale in una cellula ospite infetta o sulla sua capacità di essere impacchettato in particelle fagiche mature.

2 Il genoma del fago deve essere in grado di replicarsi dopo che si è verificata l'infezione della cellula ricevente, ad es. Il DNA virale deve conservare l'origine della replicazione (OP) e i geni necessari affinché avvenga la replicazione.

3 I geni fagici che codificano per proteine ​​fagiche strutturali devono essere funzionalmente attivi.

La trasduzione specifica è ampiamente utilizzata nella genetica molecolare. Si consideri un esempio di tale applicazione. questo fenomeno. Il gene Escherichia coli che codifica per la sintesi dell'enzima beta-galattosidasi contiene 3600 bp. ed è un millesimo del genoma di questo microrganismo. Se un frammento di DNA di una cellula batterica codificante la sintesi della beta-galattosidasi viene inserito nel genoma di un batteriofago trasduttore lambda, ne occupa un quindicesimo, cioè il DNA del fago lambda si arricchisce del gene della beta-galattosidasi 100 volte più del DNA di Escherichia coli.

Indice del soggetto "Elementi genetici dei batteri. Mutazioni nei batteri. Trasduzione.":
1. Migrazione degli elementi genetici dei batteri. Trasposoni. I batteriofagi come elementi genetici migratori.
2. Mutazione. mutazioni nei batteri. Mutageni. mutazioni spontanee. Mutazioni posteriori (reversioni).
3. Mutazioni indotte di batteri. mutagenesi chimica. mutagenesi da radiazioni. Tipi di mutazione.
4. Riparazione del DNA dei batteri. Sistemi di riparazione del DNA. Compensazione delle funzioni alterate a causa di mutazioni. Soppressione intragena. Soppressione extragenica.
5. Trasferimento di DNA batterico. coniugazione batterica. Fattore F dei batteri.
6. Trasformazione dei batteri. Fasi della trasformazione batterica. Mappatura dei cromosomi batterici.

8. Proprietà dei batteri. Cambiamenti non ereditari nelle proprietà dei batteri. S - colonie. R - colonie. M - colonie. D - colonie batteriche.

trasduzione- trasferimento da parte di un batteriofago nella cellula infetta di frammenti del materiale genetico della cellula che originariamente conteneva il batteriofago. Batteriofago trasduttore di solito trasferisce solo un piccolo pezzo di DNA ospite da una cellula (donatrice) a un'altra (ricevente).

Assegnato tre tipi di trasduzione: non specifico(generale), specifico e abortivo. In una cellula infetta da un batteriofago, frammenti di DNA batterico o plasmidi possono penetrare nelle teste di alcuni fagi insieme al DNA virale durante l'assemblaggio della popolazione figlia. I virus sono limitati nella quantità di materiale genetico in base al volume della testa. Se il DNA di una cellula batterica viene scisso da un fago in un luogo atipico, per fare spazio a un frammento di DNA cromosomico, alcune sezioni del DNA virale vengono “sacrificate”, il che porta alla perdita di alcune delle loro funzioni . In questo caso, la particella fagica potrebbe diventare difettosa. Il numero di fagi anormali può raggiungere lo 0,3% dell'intera popolazione figlia.

Il fago risultante è la particella che causa trasduzione non specifica (generale).. Con questo modulo trasduzione praticamente qualsiasi gene può essere introdotto nelle cellule riceventi.

In trasduzione aspecifica fago qualsiasi frammento del DNA dell'ospite può essere trasferito, ma con uno specifico possono essere trasferiti solo frammenti di DNA rigorosamente definiti. L'esempio più noto di trasduzione specifica è la trasduzione mediata dai fagi. Poiché questo fago, al momento della transizione allo stato di profago, è incluso nel cromosoma batterico tra i geni che codificano per la sintesi di galattosio e biotina, sono questi geni che può trasferire durante la trasduzione. Durante la trasduzione abortiva, il frammento di DNA del donatore introdotto non è integrato nel genoforo del ricevente, ma rimane nel citoplasma, dove il suo DNA viene trascritto ma non replicato. Ciò porta al fatto che durante la divisione cellulare viene trasmesso solo a una delle cellule figlie (cioè viene ereditato in modo unilineare) e quindi viene perso nella prole.

Proprietà della trasduzione delle particelle fagiche il seguente:

Le particelle portano solo una parte DNA fagico, cioè non sono virus funzionali, ma piuttosto contenitori che trasportano frammenti di DNA batterico.

come gli altri virus difettosi, le particelle non sono in grado di replicarsi.

Fagi trasduttori può contenere una parte del cromosoma ospite con geni che danno al batterio ricevente qualche vantaggio (ad esempio, geni di resistenza agli antibiotici o geni che codificano per la capacità di sintetizzare varie sostanze). Questa acquisizione di nuove proprietà da parte dei batteri è chiamata fenomeno della lisogenia.

Il fenomeno della trasduzione può essere utilizzato per mappare il cromosoma batterico se vengono seguiti gli stessi principi della mappatura utilizzando il fenomeno di trasformazione.

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