Диагностични методи. Серологични тестове в диагностиката на инфекциозни заболявания Серологични тестове, използвани за диагностициране на вирусни инфекции

имунни реакцииизползвани при диагностични и имунологични изследвания при болни и здрави хора. За целта нанесете серологични методи , т.е. методи за изследване на антитела и антигени, като се използват реакции антиген-антитяло, определени в кръвен серум и други течности, както и телесни тъкани.

Откриване в кръвен серумантителата на пациента срещу антигените на патогена ви позволява да поставите диагноза на заболяването. Серологичните изследвания се използват и за идентифициране на микробни антигени, различни биологично активни вещества, кръвни групи, тъканни и туморни антигени, имунни комплекси, клетъчни рецептори и др.

При изолиране на микробот пациента, патогенът се идентифицира чрез изследване на неговите антигенни свойства с помощта на имунни диагностични серуми, т.е. кръвни серуми на хиперимунизирани животни, съдържащи специфични антитела. Този т.нар серологична идентификациямикроорганизми.

Широко използван в микробиологията и имунологиятааглутинация, преципитация, реакции на неутрализация, реакции с участието на комплемента, с използване на белязани антитела и антигени (радиоимунологични, ензимен имуноанализ, имунофлуоресцентни методи). Изброените реакции се различават по регистриран ефект и техника на стадиране, но всички те се основават на реакцията на взаимодействие на антигена с антитялото и се използват за откриване както на антитела, така и на антигени. Реакциите на имунитета се характеризират с висока чувствителност и специфичност.

Характеристики на взаимодействието на антитяло с антигенса в основата на диагностичните реакции в лабораториите. реакция инвитромежду антиген и антитяло се състои от специфична и неспецифична фаза. AT специфична фазаима бързо специфично свързване на активния център на антитялото с детерминантата на антигена. Тогава идва неспецифична фаза -по-бавно, което се проявява с видими физични явления, например, образуването на люспи (феномен на аглутинация) или утайка под формата на мътност. Тази фаза изисква определени условия (електролити, оптимално pH на средата).

Свързването на антигенна детерминанта (епитоп) към активното място на Fab фрагмент на антитяло се дължи на ван дер Ваалсови сили, водородни връзки и хидрофобни взаимодействия. Силата и количеството на антигена, свързан с антитела, зависи от афинитета, авидността на антителата и тяхната валентност.

Имунодефицити, както първични, така и особено вторичниса широко разпространени сред хората. Те са причина за проявата на много заболявания и патологични състояния, поради което изискват профилактика и лечение с имунотропни лекарства.

34. Инактивирани (корпускулярни) ваксини. Разписка. Приложение. Предимства. Недостатъци.

Инактивирани (убити, частици или молекулярни) ваксини- препарати, като активно вещество, включително тези, убити от химически или по физически начинкултури от патогенни вируси или бактерии (клетъчни, вирионни) или комплекси от антигени, извлечени от патогенни микроби, съдържащи защитни антигени (субклетъчни, субвирионни ваксини).

За изолиране на антигенни комплекси (гликопротеини, LPS, протеини) от бактерии и вируси се използват трихлороцетна киселина, фенол, ензими и изоелектрично утаяване.

Получават се чрез отглеждане на патогенни бактерии и вируси върху изкуствени хранителни среди, инактивирани, изолирани антигенни комплекси, пречистени, конструирани под формата на течен или лиофилен препарат.

Предимството на този тип ваксина е относителната лекота на получаване (не е необходимо дългосрочно изследване и изолиране на щамове). Недостатъците включват ниска имуногенност, необходимост от трикратна употреба и висока реактогенност на формализираните ваксини. Освен това, в сравнение с живите ваксини, имунитетът, който те предизвикват, е краткотраен.

В момента се използват следните убити ваксини: коремен тиф, обогатена с Vi антиген; ваксина срещу холера, ваксина срещу коклюш.

  • 13. Спирохети, тяхната морфология и биологични свойства. видове, патогенни за човека.
  • 14. Рикетсии, тяхната морфология и биологични свойства. Ролята на рикетсиите в инфекциозната патология.
  • 15. Морфология и ултраструктура на микоплазмите. Патогенни за човека видове.
  • 16. Хламидия, морфология и други биологични свойства. роля в патологията.
  • 17. Гъби, тяхната морфология и особености на биологията. Принципи на систематиката. Заболявания, причинени от гъбички при хората.
  • 18. Протозои, тяхната морфология и особености на биологията. Принципи на систематиката. Заболявания, причинени от протозои при хората.
  • 19. Морфология, ултраструктура и химичен състав на вирусите. Принципи на класификация.
  • 20. Взаимодействие на вирус с клетка. Фази на жизнения цикъл. Концепцията за устойчивост на вируси и персистиращи инфекции.
  • 21. Принципи и методи за лабораторна диагностика на вирусни инфекции. Методи за култивиране на вируси.
  • 24. Структурата на бактериалния геном. Подвижни генетични елементи, тяхната роля в еволюцията на бактериите. Концепцията за генотип и фенотип. Видове изменчивост: фенотипна и генотипна.
  • 25. Бактериални плазмиди, техните функции и свойства. Използването на плазмиди в генното инженерство.
  • 26. Генетични рекомбинации: трансформация, трансдукция, конюгация.
  • 27. Генно инженерство. Използването на методи на генно инженерство за получаване на диагностични, превантивни и терапевтични лекарства.
  • 28. Разпространение на микроби в природата. Микрофлора на почвата, водата, въздуха, методи за нейното изследване. Характеристика на санитарно-показателните микроорганизми.
  • 29. Нормална микрофлора на човешкото тяло, нейната роля във физиологичните процеси и патологията. Концепцията за дисбактериоза. Препарати за възстановяване на нормалната микрофлора: еубиотици (пробиотици).
  • 31. Форми на проявление на инфекцията. Устойчивост на бактерии и вируси. Концепцията за рецидив, реинфекция, суперинфекция.
  • 32. Динамиката на развитието на инфекциозния процес, неговите периоди.
  • 33. Ролята на микроорганизма в инфекциозния процес. патогенност и вирулентност. Вирулентни единици. Концепцията за фактори на патогенност.
  • 34. Класификация на факторите на патогенност според O.V. Бухарин. Характеристика на факторите на патогенност.
  • 35. Понятието имунитет. Видове имунитет.
  • 36. Неспецифични защитни фактори на организма срещу инфекции. Ролята на I.I. Мечников във формирането на клетъчната теория на имунитета.
  • 39. Имуноглобулини, тяхната молекулна структура и свойства. Класове имуноглобулини. Първичен и вторичен имунен отговор.
  • 40. Класификация на свръхчувствителността по Jale и Coombs. Етапи на алергична реакция.
  • 41. Свръхчувствителност от незабавен тип. Механизми на възникване, клинично значение.
  • 42. Анафилактичен шок и серумна болест. Причини за възникване. Механизъм. Тяхното предупреждение.
  • 43. Свръхчувствителност от забавен тип. Кожно-алергични тестове и тяхното приложение в диагностиката на някои инфекциозни заболявания.
  • 44. Характеристики на антивирусен, противогъбичен, противотуморен, трансплантационен имунитет.
  • 45. Понятие за клинична имунология. Имунен статус на човек и фактори, влияещи върху него. Оценка на имунния статус: основни показатели и методи за тяхното определяне.
  • 46. ​​​​Първични и вторични имунодефицити.
  • 47. Взаимодействие на антиген с антитяло in vitro. Теория на мрежовите структури.
  • 48. Реакция на аглутинация. Компоненти, механизъм, начини на настройка. Приложение.
  • 49. Реакция на Кумбс. Механизъм. Компоненти. Приложение.
  • 50. Реакция на пасивна хемаглутинация. Механизъм. Компоненти. Приложение.
  • 51. Реакция на инхибиране на хемаглутинацията. Механизъм. Компоненти. Приложение.
  • 52. Реакция на утаяване. Механизъм. Компоненти. Начини на настройка. Приложение.
  • 53. Реакция на свързване на комплемента. Механизъм. Компоненти. Приложение.
  • 54. Реакция на неутрализация на токсина от антитоксин, неутрализиране на вируси в клетъчна култура и в тялото на лабораторни животни. Механизъм. Компоненти. Начини на настройка. Приложение.
  • 55. Реакция на имунофлуоресценция. Механизъм. Компоненти. Приложение.
  • 56. Имуноензимен анализ. Имуноблотинг. Механизми. Компоненти. Приложение.
  • 57. Ваксини. Определение. Съвременна класификация на ваксините. Изисквания към ваксиналните препарати.
  • 59. Ваксиниране. Ваксини от убити бактерии и вируси. Принципи на готвене. Примери за убити ваксини. свързани ваксини. Предимства и недостатъци на убитите ваксини.
  • 60. Молекулярни ваксини: токсоиди. Разписка. Използването на токсоиди за профилактика на инфекциозни заболявания. примери за ваксини.
  • 61. Генно модифицирани ваксини. Разписка. Приложение. Предимства и недостатъци.
  • 62. Ваксинотерапия. Концепцията за терапевтичните ваксини. Разписка. Приложение. Механизъм на действие.
  • 63. Диагностични антигенни препарати: диагностикуми, алергени, токсини. Разписка. Приложение.
  • 67. Понятието имуномодулатори. Принцип на действие. Приложение.
  • 69. Химиотерапевтични лекарства. Концепцията за химиотерапевтичен индекс. Основните групи химиотерапевтични лекарства, механизмът на тяхното антибактериално действие.
  • 71. Методи за определяне на чувствителността към антибиотици
  • 71. Лекарствена резистентност на микроорганизмите и механизмът на нейното възникване. Концепцията за болнични щамове на микроорганизми. Начини за преодоляване на лекарствената резистентност.
  • 72. Методи за микробиологична диагностика на инфекциозни заболявания.
  • 73. Причинители на коремен тиф и паратиф. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 74. Причинители на ешерихиоза. Таксономия. Характеристика. Ролята на Escherichia coli в нормални и патологични състояния. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 75. Патогени на шигелоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 76. Причинители на салмонелоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 77. Причинители на холерата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 78. Стафилококи. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 79. Стрептококи. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 80. Менингококи. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 81. Гонококи. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 82. Причинител на туларемия. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 83. Причинителят на антракс. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 84. Причинителят на бруцелозата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 85. Причинителят на чумата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 86. Причинители на анаеробна газова инфекция. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 87. Причинителят на ботулизма. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 88. Причинителят на тетанус. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 89. Неспорови анаероби. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 91. Причинители на магарешка кашлица и паракоклюш. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 92. Причинители на туберкулозата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 93. Актиномицети. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 94. Причинители на рикетсиоза. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 95. Причинители на хламидия. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 96. Причинител на сифилис. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 97. Причинителят на лептоспирозата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 98. Причинителят на иксодовата борелиоза, пренасяна от кърлежи (лаймска болест). Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. Лечение.
  • 100. Класификация на гъбите. Характеристика. роля в човешката патология. Лабораторна диагностика. Лечение.
  • 101. Класификация на микозите. Повърхностни и дълбоки микози. Дрожди-подобни гъбички от рода Candida. роля в човешката патология.
  • 102. Причинителят на грипа. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 103. Причинител на полиомиелит. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 104. Причинители на хепатит а и е. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 105. Причинителят на енцефалит, пренасян от кърлежи. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 106. Причинител на бяс. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 107. Причинителят на рубеола. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 108. Причинителят на морбили. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 109. Причинителят на заушката. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 110. Херпесна инфекция. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 111. Причинителят на варицела. Таксономия. Характеристика. Лабораторна диагностика. Лечение.
  • 112. Причинители на хепатит b, c, е. Таксономия. Характеристика. Носене. Лабораторна диагностика. специфична профилактика.
  • 113. HIV инфекция. Таксономия. характеристики на патогените. Лабораторна диагностика. Специфична профилактика и лечение.
  • 114. Медицинска биотехнология, нейните задачи и постижения.
  • 118. Характеристики на антивирусен, антибактериален, противогъбичен, противотуморен, трансплантационен имунитет.
  • 119. Серологични тестове за диагностициране на вирусни инфекции.
  • 119. Серологични тестове за диагностициране на вирусни инфекции.

    Откриване в кръвен серумантителата на пациента срещу антигените на патогена ви позволява да поставите диагноза на заболяването. Серологичните изследвания се използват и за идентифициране на микробни антигени, различни биологично активни вещества, кръвни групи, тъканни и туморни антигени, имунни комплекси, клетъчни рецептори и др.

    При изолиране на микробот пациента, патогенът се идентифицира чрез изследване на неговите антигенни свойства с помощта на имунни диагностични серуми, т.е. кръвни серуми на хиперимунизирани животни, съдържащи специфични антитела. Този т.нар серологична идентификациямикроорганизми.

    Широко използван в микробиологията и имунологиятааглутинация, преципитация, реакции на неутрализация, реакции с участието на комплемента, с използване на белязани антитела и антигени (радиоимунологични, ензимен имуноанализ, имунофлуоресцентни методи). Изброените реакции се различават по регистриран ефект и техника на стадиране, но всички те се основават на реакцията на взаимодействие на антигена с антитялото и се използват за откриване както на антитела, така и на антигени. Реакциите на имунитета се характеризират с висока чувствителност и специфичност.

    Характеристики на взаимодействието на антитяло с антигенса в основата на диагностичните реакции в лабораториите. реакция инвитромежду антиген и антитяло се състои от специфична и неспецифична фаза. AT специфична фазаима бързо специфично свързване на активния център на антитялото с детерминантата на антигена. Тогава идва неспецифична фаза -по-бавно, което се проявява чрез видими физически явления, например образуване на люспи (феномен на аглутинация) или утайка под формата на мътност. Тази фаза изисква определени условия (електролити, оптимално pH на средата).

    Свързването на антигенна детерминанта (епитоп) към активното място на Fab фрагмент на антитяло се дължи на ван дер Ваалсови сили, водородни връзки и хидрофобни взаимодействия. Силата и количеството на антигена, свързан с антитела, зависи от афинитета, авидността на антителата и тяхната валентност.

    На въпроса за експресната диагностика:

    1. Култура, изолирана в чист вид, може да бъде диагностицирана. 2. В специално оборудвани лаборатории (трябва да има разрешение) 3. Спазване на строги правила като: изолирана стая, необходими са специални защитни костюми, задължителна пълна хигиенизация на помещенията след работа с патогена, хигиенизиране на изследователите след работа. Методи за експресна диагностика. 1. Бактериология - комбинирани политропни хранителни среди за бързо изследване на морфи, тинктори, биохим. Имоти. Използване на ензимна индикаторна лента, електрофизичен метод, метод на хартиени дискове, импрегнирани с различни вещества (глюказо, лактоза и др.) 2. Фагова диагностика. 3. Серодиагностика - метод на Манчини, реакция на утаяване в гела по Ascoli, RA, RPGA. 4. Бактериоскопия - директна и индиректна РИФ. Експресни методи за диагностика на: Холера - MZ Ermolyeva, район на имобилизация с холерен диагностичен серум, RIF. Туларемия - RA върху стъкло, RPHA Chume - фаго типизиране, методът на въглехидратните хартиени дискове, RPHA. Антракс - метод на Асколи, RIF, RPGA. Естеството на растеж: има три дифузни (факултативни анаероби), близки до дъното (задължителни анаероби) и повърхност (задължителни анаероби).

    Изолиране на чиста култура от анаеробни бактерии

    В лабораторната практика често се налага да се работи с анаеробни микроорганизми. Те са по-взискателни към хранителните среди от аеробите, често се нуждаят от специални добавки за растеж, изискват спиране на подаването на кислород по време на отглеждането им, периодът им на растеж е по-дълъг. Следователно работата с тях е по-сложна и изисква значително внимание на бактериолозите и лаборантите.

    Важно е да се защити материалът, който съдържа анаеробни патогени от токсичните ефекти на атмосферния кислород. Поради това се препоръчва да се вземе материал от огнищата на гнойна инфекция по време на пункцията им със спринцовка, времето между вземането на материала и засяването му върху хранителна средатрябва да бъде възможно най-кратък.

    Тъй като за култивиране на анаеробни бактерии се използват специални хранителни среди, които не трябва да съдържат кислород и имат нисък редокс потенциал (-20 -150 mV), в състава им се въвеждат индикатори - резазурин, метиленово синьо и други подобни, които реагират на промяна в този потенциал. С нарастването си безцветните форми на индикаторите се възобновяват и променят цвета си: резазуринът оцветява средата в розов цвят, а метиленово синьо - в синьо. Такива промени показват невъзможността за използване на среда за култивиране на анаеробни микроби.

    Помага за намаляване на редокс потенциала чрез въвеждане в средата на поне 0,05% агар, който чрез увеличаване на вискозитета спомага за намаляване на подаването на кислород. Това от своя страна също се постига чрез използване на пресни (не по-късно от два часа след производството) и намалени хранителни среди.

    Трябва да се отбележи, че поради особеностите на ферментативния тип метаболизъм на анаеробните бактерии, те изискват среда, по-богата на хранителни вещества и витамини. Най-често се използват сърдечно-мозъчни и чернодробни инфузии, екстракти от соя и дрожди, казеинов хидролитичен дигестив, пептон, триптон. Задължително е добавянето на растежни фактори като tween-80, hemin, menadione, цяла или хемолизирана кръв.

    Изолирането на чиста култура от аеробни микроорганизми се състои от няколко стъпки. На първия ден (етап 1 от изследването) патологичният материал се взема в стерилен контейнер (епруветка, колба, флакон). Изследва се външен вид, консистенция, цвят, миризма и други признаци, приготвя се намазка, боядисва се и се изследва под микроскоп. В някои случаи (остра гонорея, чума) на този етап е възможно да се постави предишна диагноза и освен това да се избере средата, върху която ще се засява материалът. Взех го с бактериологична бримка (използвана най-често), с шпатула по метода на Дригалски, с памучно-марлен тампон. Чашите се затварят, обръщат се с главата надолу, подписват се със специален молив и се поставят в термостат при оптимална температура (37 ° C) за 18-48 години. Целта на етапа е да се получат изолирани колонии от микроорганизми. Въпреки това, понякога, за да се натрупа материалът, той се засява върху течни хранителни среди.

    Приготвят се петна от подозрителни колонии, оцветени по метода на Грам, за да се изследват морфологичните и тинкториалните свойства на патогените, а подвижните бактерии се изследват в „висяща“ или „натрошена“ капка. Тези признаци имат изключително голяма диагностична стойност при характеризирането на някои видове микроорганизми. Останките от изследваните колонии се отстраняват внимателно от повърхността на средата, без да се докосват останалите, и се инокулират върху наклонен агар или върху сектори от петриево блюдо с хранителна среда, за да се получи чиста култура. Епруветки или съдове с култури се поставят в термостат при оптимална температура за 18-24 часа.

    На течни хранителни среди бактериите също могат да растат по различен начин, въпреки че характеристиките на растежните прояви са по-бедни, отколкото на твърдите.

    Бактериите са способни да причинят дифузна мътност на средата, докато цветът й може да не се промени или да придобие цвета на пигмента. Този модел на растеж най-често се наблюдава при повечето факултативни анаеробни микроорганизми.

    Понякога на дъното на тръбата се образува утайка. Тя може да бъде ронлива, хомогенна, вискозна, лигава и др. Средата над нея може да остане прозрачна или да стане мътна. Ако микробите не образуват пигмент, утайката има ливиден или жълтеникав цвят. По правило анаеробните бактерии растат в подобен ранг.

    Растежът на стените се проявява чрез образуване на люспи, зърна, прикрепени към вътрешните стени на епруветката. Средата остава прозрачна.

    Аеробните бактерии са склонни да растат на повърхността. Често върху повърхността се образува деликатен безцветен или синкав филм под формата на едва забележимо покритие, което изчезва при изтръскване или разклащане на средата. Филмът може да бъде влажен, дебел, да има плетена, лигава консистенция и да се придържа към примката, като се разтяга за нея. Има обаче и плътен, сух, чуплив филм, чийто цвят зависи от пигмента, който се произвежда от микроорганизмите.

    Ако е необходимо, се прави намазка, оцветява се, изследва се под микроскоп и микроорганизмите се засяват с бримка върху повърхността на плътна хранителна среда, за да се получат изолирани колонии.

    На третия ден (етап 3 от изследването) се изследва естеството на растежа на чиста култура от микроорганизми и се извършва нейната идентификация.

    Първо се обръща внимание на характеристиките на растежа на микроорганизмите върху средата и се прави петно, което се оцветява по метода на Грам, за да се провери чистотата на културата. Ако под микроскоп се наблюдават бактерии с еднакъв тип морфология, размер и тинкториални (способност за боядисване) свойства, се заключава, че културата е чиста. В някои случаи, вече по външния вид и характеристиките на техния растеж, може да се направи заключение за вида на изолираните патогени. Определянето на видовете бактерии по техните морфологични признаци се нарича морфологична идентификация. Определянето на вида на патогените по техните културни характеристики се нарича културна идентификация.

    Тези изследвания обаче не са достатъчни, за да се направи окончателно заключение за вида на изолираните микроби. Затова те изучават биохимичните свойства на бактериите. Те са доста разнообразни.

    Най-често се изследват захаролитични, протеолитични, пептолитични, хемолитични свойства, образуването на ензими декарбоксилаза, оксидаза, каталаза, плазмокоагулаза, ДНКаза, фибринолизин, редукцията на нитрати до нитрити и др. За това има специални хранителни среди, които са инокулирани с микроорганизми (пъстра серия Hiss, MPB, пресечена суроватка, мляко и др.).

    Определянето на вида на патогена чрез неговите биохимични свойства се нарича биохимична идентификация.

    МЕТОДИ ЗА КУЛТИВИРАНЕ И ИЗОЛИРАНЕ НА ЧИСТА БАКТЕРИАЛНА КУЛТУРА За успешното култивиране, освен правилно подбрана среда и правилно извършена инокулация, са необходими оптимални условия: температура, влажност, аерация (подаване на въздух). Култивирането на анаероби е по-трудно от аероби; използват се различни методи за отстраняване на въздуха от хранителната среда. Изолирането на определени видове бактерии (чиста култура) от тестовия материал, който обикновено съдържа смес от различни микроорганизми, е един от етапите на всяко бактериологично изследване. От изолирана микробна колония се получава чиста микробна култура. При изолиране на чиста култура от кръв (хемокултура) това е предварително "отглеждане" в течна среда: 10-15 ml стерилна кръв се инокулират в 100-150 ml течна среда. Съотношението засята кръв и хранителна среда 1:10 не е случайно - така се постига разреждане на кръвта (неразредената кръв действа пагубно на микроорганизмите). Етапи на изолиране на чиста култура от бактерии Етап I (нативен материал) Микроскопия (приблизителна представа за микрофлората). Засяване върху плътни хранителни среди (получаване на колонии). Етап II (изолирани колонии) Изследване на колонии (културни свойства на бактерии). Микроскопско изследване на микроби в оцветена намазка (морфологични свойства на бактериите). Инокулация върху наклонен хранителен агар за изолиране на чиста култура. Етап III (чиста култура) Определяне на културни, морфологични, биохимични и други свойства за идентификация на бактериална култура ИДЕНТИФИКАЦИЯ НА БАКТЕРИИ Идентифицирането на изолирани бактериални култури се извършва чрез изследване на морфологията на бактериите, техните културни, биохимични и други характеристики, присъщи на всяка видове.

    Антигени- генетично чужди вещества, които при въвеждане в тялото на животно или човек предизвикват специфичен имунен отговор - синтез на антитела, образуване на сенсибилизирани Т-лимфоцити, имунологична паметили толерантност. Чуждите вещества са химични структури, които не присъстват в тялото. Чужди за човешкото тяло са вируси, микроорганизми, както и клетки, тъкани, органи на животни и други хора. Антигените имат няколко рецептора за свързване с антителата и са в състояние да реагират с тях както в тялото на животното или човека (in vivo), така и извън тялото - in vitro (in vitro).

    Антитела- високомолекулни протеини от глобулиновата фракция на кръвния серум. Антителата се синтезират под въздействието на антиген и са способни специфично да реагират (комбинират) със съответния антиген. Всички антитела имат характерна имуноглобулинова структура; се различават по имунологични, биологични и физични свойства; и се делят на 5 класа - IgG, IgA, IgM, IgD и IgE.

    Серологични реакции

    В лабораторната практика те използват серологични реакции- лабораторни реакции между антигени и антитела, които водят до регистрирани промени в изследваната система. Тези реакции се наричат ​​серологични, тъй като за тяхното производство се използва серум (серум), съдържащ антитела.

    Серологични тестове, извършвани за откриване на специфични антитела и патогенен антиген при инфекциозни заболявания - повече от налични методилабораторна диагностика, отколкото бактериологично откриване на патогена. В някои случаи серологичните изследвания остават единственият диагностичен метод инфекциозни заболявания.

    Някои методи за откриване на антитела, използвани в лабораторната практика

    Всички серологични реакции се основават на взаимодействието на антиген и антитяло с образуването на имунни комплекси, които могат да бъдат открити при in vitro тестове (т.е. "in vitro" - извън жив организъм). Реакциите антиген-антитяло в системата in vitro могат да бъдат придружени от няколко явления - аглутинация, преципитация, лизис и др. Външни проявиреакциите зависят от физикохимичните свойства на антигена (размер на частиците, физическото състояние), клас и тип антитела, както и условия на експеримента (консистенция на средата, концентрация на сол, pH, температура).

    1. Реакция на свързване на комплемента

    Допълнениее система от протеини на кръвната плазма, която включва 9 компонента, обозначени с буквата C (C1, C2, C3, ... C9), фактор B, фактор D и редица регулаторни протеини. Някои от тези компоненти се състоят от 2-3 протеина, например C1 е комплекс от три протеина. Тези протеини циркулират в кръвния поток и присъстват на клетъчните мембрани. Допълнението е основна системакакто вроден, така и придобит имунитет. Тази система е предназначена да предпазва тялото от действието на чужди агенти и участва в осъществяването на имунния отговор на организма. Комплементът е открит в края на 19 век от белгийския учен Ж. Борде.

    Реакция на свързване на комплемента (CFR)- серологичен тест, използван за количествено определяне на комплемент-фиксиращите антитела и антигени. Описан за първи път от Борде и Джангу (Борде - Генгоу) през 1901 г. RSK се основава на факта, че комплексът антиген-антитяло е в състояние да абсорбира комплемента, който се добавя към реакционната смес. Когато антигените и антителата съответстват едно на друго, те образуват имунен комплекс, към който е прикрепен комплемент. Специфичният имунен комплекс адсорбира добавения в системата комплемент, т.е. свързване на комплемента от комплекса антиген-антитяло. Колкото повече антитела, толкова повече комплемент е фиксиран. Ако комплексът антиген-антитяло не се образува, тогава комплементът остава свободен.

    Сложността на CSC е, че реакцията на образуване на комплекса "антиген - антитяло - комплемент" е невидима. За идентифициране на компонентите на реакцията се използва допълнителна индикаторна хемолитична система. С помощта на реакцията на хемолиза, количествено определянекомплементен остатък след края на реакцията на антигена с антисерума.

    Тестът за фиксиране на комплемента (RCT) се използва за откриване на антитела срещу специфичен антиген или определяне на вида на антигена чрез известно антитяло. Тази сложна серологична реакция включва две системи и комплемент. Първата система - бактериологична (основна), се състои от антиген и антитяло. Втората система е хемолитична (индикаторна). Той включва овчи еритроцити (антиген) и съответния им хемолитичен серум (антитела).

    RSK се поставя на две стъпки: първо антигенът се комбинира с тестовия кръвен серум, в който се търсят антитела, след което се добавя комплемент. Ако антигенът и антитялото съвпадат, тогава се образува имунен комплекс, който свързва комплемента. При липса на антитела в серума имунният комплекс не се образува и комплементът остава свободен. Тъй като процесът на адсорбция на комплемента от комплекса е визуално невидим, се добавя хем система, за да разкрие този процес.

    Поради високата си чувствителност реакцията на свързване на комплемента (CFR) се използва както за серологична диагностикабактериални и вирусни инфекции, алергични състояния и за идентифициране на антигени (изолирана бактериална култура).

    Реакция на утаяване (RP)(от латински praecipitatio - утаяване, падане) се основава на утаяването на специфичен имунен комплекс, състоящ се от разтворим антиген и специфично антитяло в присъствието на електролит. В резултат на реакцията се образува мътен пръстен или рохкава утайка - утайка. Възниква реакция на утаяване между водоразтворим антиген и антитяло, което води до големи комплекси, които се утаяват

    3. Реакция на флокулация

    Реакция на флокулация (според Ramon)(от латински floccus - вълнени люспи, flocculi - парчета, люспи; флокулация - образуването на рохкави флокулиращи агрегати (флокули) от малки частици на дисперсната фаза) - появата на опалесценция или флокулентна маса (имунопреципитация) в епруветка по време на реакция на токсин - антитоксин или анатоксин - антитоксин. Използва се за определяне на активността на антитоксичен серум или токсоид.

    Реакцията на флокулация се основава на откриването на "първоначална" флокулация - помътняване по време на образуването на комплекс от екзотоксин (анатоксин) + антитоксин в оптимални количествени съотношения на съставките.

    4. Реакция на аглутинация

    Аглутинация(от латински agglutinatio - свързване) е реакцията на взаимодействие на антиген със специфично антитяло, което се проявява под формата на свързване. В този случай антигените под формата на частици-корпускули (микробни клетки, еритроцити и др.) се слепват от антитела и се утаяват (аглутинират) под формата на люспи. Аглутинатите обикновено се виждат с просто око. За протичане на реакцията е необходимо наличието на електролити (например изотоничен разтвор на натриев хлорид), което ускорява процеса на аглутинация.

    С помощта на теста за аглутинация (RA), reactio agglutinationis (английски тест за аглутинация), се откриват антитела или корпускулярни антигени. В зависимост от вида на използвания имунодиагностик има реакции на микробна аглутинация, хемаглутинация, латексна аглутинация, коаглутинация и др.

    5. Име на антителата, участващи в реакциите на утаяване

    Антителата, участващи в седиментни реакции, получиха традиционното име за тяхното взаимодействие с антигена:

    аглутинини - предизвикват аглутинация на корпускулния антиген - аглутиноген и утаяване на комплекса антиген-антитяло (аглутинат);

    преципитини - образуват утайка с разтворим антиген - преципитоген.

    Бактериолизини (причиняват лизис на бактерии) и хемолизини (причиняват лизис на червени кръвни клетки) участват в литичните реакции.

    Съдържание на темата "Методи за откриване на вируси. Методи за диагностика на микози (гъбични заболявания). Методи за откриване на протозои.":










    Серологични методи за диагностика на вирусни инфекции. Инхибиране на хемаглутинацията. Инхибиране на цитопатичния ефект чрез намеса на вируса. Директна имунофлуоресценция. Имуноелектронна микроскопия.

    С мнозинството вирусни инфекцииразвиват се имунни реакцииприложен към диагностика. Клетъчните отговори обикновено се оценяват в тестове за цитотоксичност на лимфоцити срещу инфекциозни агенти или таргетни клетки, заразени от тях, или способността на лимфоцитите да реагират на различни антигени и митогени. В работата на практическите лаборатории рядко се определя тежестта на клетъчните реакции. Методите за идентифициране на антивирусни АТ са станали по-широко разпространени.

    RN се основава на потискане на цитопатогенния ефектслед смесване на вируса със специфичен AT. Неизвестният вирус се смесва с известни търговски антисеруми и след подходяща инкубация се въвежда в клетъчния монослой. Липсата на клетъчна смърт показва несъответствие между инфекциозния агент и известните антитела.

    Инхибиране на хемаглутинацията

    RTGA се използва за идентифициране на вирусиспособни да аглутинират различни еритроцити. За да направите това, културалната среда, съдържаща патогена, се смесва с известен търговски антисерум и се въвежда в клетъчната култура. След инкубацията се определя способността на културата за хемаглутинация и при нейно отсъствие се прави заключение за несъответствието на вируса с антисерума.

    Инхибиране на цитопатичния ефект чрез намеса на вируса

    Реакцията на инхибиране на цитопатичния ефект поради намесата на вирусиизползвани за идентифициране на патоген, който пречи на известен цитопатогенен вирус в култура от чувствителни клетки. За да направите това, търговският серум (например за вируса на рубеола, ако има съмнение) се въвежда в културалната среда, съдържаща изследвания вирус, инкубира се и се заразява втората култура; след 1-2 дни в него се въвежда известен цитопатогенен вирус (например всеки ECHO вирус). При наличие на цитопатогенен ефект се прави извод, че първата култура е заразена с вирус, съответстващ на приложеното АТ.

    Директна имунофлуоресценция

    Сред другите тестове, най-широко използваните реакция на директна имунофлуоресценция(най-бързият, най-чувствителният и възпроизводим). Например, идентифицирането на CMV чрез неговия цитопатогенен ефект изисква най-малко 2-3 седмици, а при използване на белязани моноклонални антитела идентификацията е възможна след 24 часа, изследвайте с помощта на флуоресцентна микроскопия (позволява ви да откриете наличието на флуоресценция на заразени клетки) .

    Имуноелектронна микроскопия

    Имуноелектронна микроскопия(подобно на предишния метод) ви позволява да идентифицирате различни видовевируси, открити чрез електронна микроскопия (например различни видове херпесвируси), което не може да се направи въз основа на морфологични характеристики. Вместо антисеруми за идентификация се използват белязани антисеруми. различни начини AT, но сложността и високата цена на метода ограничават приложението му.

    Дял: