У дома » Козметология » Серологични тестове, използвани за диагностициране на вирусни инфекции. Серологичен метод за диагностика на вирусни инфекции Серологични методи за диагностика на вирусни инфекции

Серологични тестове, използвани за диагностициране на вирусни инфекции. Серологичен метод за диагностика на вирусни инфекции Серологични методи за диагностика на вирусни инфекции

Основава се на определянето на антивирусни антитела в кръвта на пациента в серологични реакции с помощта на специфични вирусни антигени - диагностикуми или специални тестови системи. Серологичните реакции при вирусни инфекции се поставят в течна среда (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), в гел (RPG, RRG, RVIEF) или върху твърдофазен носител (например по стените на ямка от полистиролова плака с фиксиране на един от компонентите на имунния отговор - антиген или антитяло). Известни са такива твърдофазни методи като ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.

Често, поради наличието в кръвта на мнозинството здрави хораестествени антивирусни антитела, серологичната диагноза на вирусни инфекции се основава на изследването сдвоени серуми,взети в началото и в разгара на заболяването или по време на периода на възстановяване, за да се определи повишаването на титъра на антителата. Увеличаването на титъра на антителата четири пъти или повече се счита за диагностично значимо.

Повишаването на чувствителността на серологичните методи се постига чрез адсорбция на антигени или антитела върху еритроцити (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), маркирани с ензими (ELISA), радиоактивни изотопи (RIA, RPG) или флуорохроми (RIF), Принципът на лизис на еритроцити също се използва (като индикаторни системи) по време на взаимодействието на антигени и антитела в присъствието на комплемент (RSK, RRG).

Реакция на свързване на комплемента (CFR)под формата на фиксиране на комплемента на студено (през нощта при температура от +4 0 C) често се използва във вирусологията за ретроспективна диагностика на редица вирусни инфекции и за определяне на вирус-специфични антигени в материали от пациенти .

Реакция на радиална хемолиза (RRH)в агарозен гел се основава на феномена на хемолиза на еритроцити, сенсибилизирани от антиген под въздействието на вирус-специфични антитела в присъствието на комплемент и се използва за серологична диагностика на грип, SARS, рубеола, паротит и тогавирусни инфекции.

За да се постави реакцията, 0,1 ml неразреден вирусен антиген се добавя към овчи еритроцити (0,3 ml 10% суспензия) и сместа се инкубира в продължение на 10 минути при стайна температура. 0,3 ml сенсибилизирани еритроцити и 0,1 ml комплемент се добавят към 1,2% агароза при температура 42 0 С, сместа се излива върху предметни стъкла или в ямки на полистиренови плаки, дупки се изрязват в замразения агарозен гел с пробийте и напълнете с изследваните и контролни серуми. Чашите или панелите се затварят с капак и се поставят във влажна камера за 16-18 часа в термостат. Отчитането на реакцията се извършва според диаметъра на зоната на хемолиза около дупките, пълни със серум. В контролата няма хемолиза.

Използва се за диагностика на вирусни заболявания следните методи:

1) Вироскопски.

2) Имуноелектронна микроскопия.

3) Вирусологични.

4) Серологични.

5) Имунофлуоресцентен.

6) Биологичен.

7) Използване на ДНК (РНК) проби.

8) Полимеразна верижна реакция.

Възпроизвеждането (възпроизвеждането) на вируси в клетъчната култура се съди по цитопатичния ефект (CPE), който може да бъде открит микроскопски и се характеризира морфологични промениклетки.

Естеството на CPD на вирусите се използва както за тяхното откриване (индикация), така и за предварителна идентификация, т.е. определяне на техния вид.

Методи за откриване на вируси:

1) Реакция на хемадсорбция - базира се на способността на повърхността на клетките, в които се възпроизвеждат, да адсорбират еритроцитите - реакцията на хемадсорбция. За да се постави в култура от клетки, заразени с вируси, се добавя суспензия от еритроцити и след известно време на контакт клетките се промиват с изотоничен разтвор на натриев хлорид. Полепналите еритроцити остават на повърхността на засегнатите от вируса клетки.

2) Реакция на хемаглутинация (RG). Използва се за откриване на вируси в културална течност на клетъчна култура или хорионалантоична или амниотична течност на пилешки ембрион.

Серологичните методи могат да се използват за откриване както на специфични антитела, така и на вирусни антигени в тестовия материал. За тези цели могат да се използват всички известни серологични реакции:

1) Реакция на свързване на комплемента.

2) Реакцията на пасивна хемаглутинация и нейните варианти (PHAg, PHAt).

3) Реакция на инхибиране на хемаглутинацията.

4) Реакцията на хемаглутинация на имунната адхезия (комплексът антиген + антитяло в присъствието на комплемент се адсорбира върху еритроцитите).

5) Реакции на утаяване на гел.

6) Реакции на неутрализиране на вируса.

7) Радиоимунен метод.

8) Методи ензимен имуноанализ.

От тези методи все по-популярни стават методите за имуноензимен анализ, които се отличават с висока специфичност и лекота на използване.

7. Реакция на хемаглутинация, нейният механизъм при грипни вируси. Реакция на инхибиране на хемаглутинацията, нейното практическо приложение.

Реакция на хемаглутинация (RG). Използва се за откриване на вируси в културална течност на клетъчна култура или хорионалантоична или амниотична течност на пилешки ембрион.

8. Характеристики на антивирусния имунитет. Ролята на фагоцитозата и хуморалните фактори в имунитета. Интерферони, характеристики на основните свойства, класификация. Характеристики на действието на интерфероните върху вирусите .

Всички имунни системи участват в защитата на организма от вируси, но антивирусният имунитет има значителни специфични характеристики. Те се определят от факта, че на първо място не системите на комплемента и макрофагите реагират на проникването на вируса в тялото, а системите на интерфероните и Т-клетките-убийци. Друга особеност на формирането на имунитета се дължи на факта, че вирусите имат слаб антигенен ефект върху В-лимфоцитите и за тяхното активиране, пролиферация и диференциация участието на Т-хелперите и съответно представянето на обработения вирусен антиген (пептидни фрагменти) с участието на клас II МНС молекули е необходимо. Следователно ролята на макрофагите и другите антиген-представящи клетки не е толкова в самата фагоцитоза, а в обработката и представянето на антигена.

Системата от интерферони, които потискат вътреклетъчното възпроизвеждане на вируси, реагира преди всичко на проникването на вируса. В допълнение, a- и b-инхибиторите в кръвния серум имат антивирусен ефект. Алфа-инхибиторът е термостабилен субстрат, влиза в състава на а-глобулините, предотвратява адсорбцията на вируси върху клетката, разрушава се от невраминидазата на орто- и парамиксовирусите. Бета-инхибитор - термолабилен мукопептид, е част от b-глобулините, инхибира размножаването на орто- и парамиксовируси.

Интерфероните и инхибиторите обаче не бяха достатъчни за защита срещу вируси, така че природата създаде друг, много мощен защитен механизъм на ниво тяло срещу вируси. Представено е основно Т-цитотоксични лимфоцитии други клетки убийци. Тези клетки разпознават всички чужди антигени, включително вирусни, представени от МНС молекули от клас I. Основното биологично значение на Т-клетките убийци се състои в откриването и унищожаването на всякакви клетки, заразени с чужди антигени.

Интерферонът е семейство гликопротеини, които се синтезират от клетките имунна системаи съединителната тъкан. В зависимост от това кои клетки синтезират интерферон, има три вида: ?, ? и а-интерферони.

Алфа-интерферонът се произвежда от левкоцитите и се нарича левкоцит; бета-интерферонът се нарича фибробластен, тъй като се синтезира от фибробласти - клетки на съединителната тъкан, а гама-интерферонът се нарича имунен, тъй като се произвежда от активирани Т-лимфоцити, макрофаги, естествени убийци, т.е. имунни клетки.

Производството на интерферон се увеличава рязко при заразяване с вируси, в допълнение към антивирусния ефект, интерферонът има противотуморна защита, тъй като забавя пролиферацията (възпроизводството) на туморните клетки, както и имуномодулираща активност, стимулираща фагоцитоза, естествени убийци, регулиращи образуването на антитела от В клетки, активирайки експресията на основния комплекс за хистосъвместимост.

Механизъм на действие. Интерферонът не действа директно върху вируса извън клетката, но се свързва със специални клетъчни рецептори и засяга процеса на възпроизвеждане на вируса вътре в клетката на етапа на протеиновия синтез.

Вирусология частна

1. Вируси, причиняващи остри респираторни инфекции (ОРИ). Класификация. основни характеристикиортомиксовируси. Структурата на грипния вирион. Характеристики на неговия геном и внедряване на съдържащата се в него информация. Вирионна РНК репликация.

1. Вируси - причинители на остри респираторни инфекции. класификация.

Причинителите на ARI са следните вируси:

1. Грипни вируси A, B, C (Orthomyxoviridae)

2. Парамиксовируси (Paramyxoviridae) - това семейство включва три рода: парамиксовирус - човешки параинфлуенца вируси (HPV) типове 1, 2, 3, 4, нюкасълска болест, параинфлуенца по птиците и заушка; Пневмовирус - респираторно-синцитиален вирус (RS-вирус); Morbillivirus е вирусът на морбили.

3. Респираторни коронавируси (Coronaviridae).

4. Респираторни реовируси (Reoviridae).

5. Пикорнавируси (Picornaviridae).

Вирус на грип А

Вирионът има сферична форма и диаметър 80-120 nm. Геномът на вируса е представен от едноверижна фрагментирана (8 фрагмента) отрицателна РНК с обща MW от 5 MD. Видът на симетрия на нуклеокапсида е спирален. Вирион Има суперкапсид (мембрана), съдържащ два гликопротеина - хемаглутинин и невраминидаза, които изпъкват над мембраната под формата на различни шипове.

Вирусите са причинители на остри респираторни заболявания. Характеристики на проявата на заболявания, причинени от грипни вируси, параинфлуенца, риновируси, респираторен синцитиален вирус и аденовируси. Лабораторни методи за тяхната диагностика.

Вирионът има сферична форма и диаметър 80-120 nm. Геномът на вируса е представен от едноверижна фрагментирана (8 фрагмента) отрицателна РНК с обща MW от 5 MD. Видът на симетрия на нуклеокапсида е спирален. Вирионът има суперкапсид (мембрана), съдържащ два гликопротеина - хемаглутинин и невраминидаза, които изпъкват над мембраната под формата на различни шипове.

При вируси на грип А при хора, бозайници и птици са открити 13 вида хемаглутинин, различни по антиген, на които е присвоена непрекъсната номерация (от H1 до H13).

Невраминидазата (N) е тетрамер с MW 200-250 kD, всеки мономер има MW 50-60 kD.

Вирусът на грип А има 10 различни варианта на невраминидаза

Лабораторна диагностика. Материалът за изследването е изхвърлянето на назофаринкса, което се получава чрез промиване или използване на памучно-марлеви тампони и кръв. Използват се следните диагностични методи:

1. Вирусологични - инфекция на пилешки ембриони, клетъчни култури от бъбреци на зелени маймуни (Vero) и кучета (MDSC). Клетъчните култури са особено ефективни за изолиране на A (H3N2) и B вируси.

2. Серологични - откриване на специфични антитела и повишаване на техния титър (в сдвоени серуми) с помощта на RTGA, RSK, ензимен имуноанализ.

3. Като ускорена диагностика се използва имунофлуоресцентен метод, който дава възможност за бързо откриване на вирусния антиген в петна-отпечатъци от носната лигавица или в тампони от назофаринкса на пациенти.

4. За откриване и идентифициране на вируса (вирусни антигени) са предложени РНК сонда и PCR методи.

Специфична профилактика

1) живи от атенюиран вирус; 2) убит цял вирион; 3) субвирионна ваксина (от разделени вириони); 4) субединична ваксина, съдържаща само хемаглутинин и невраминидаза.

Грипни вируси (ортомиксовируси). Основни характеристики. Суперкапсидни протеини, техните функции, значение на вариабилността (изместване и дрейф) за епидемиологията на грипа. Методи за лабораторна диагностика. Ваксини, използвани за предотвратяване на грип.

Остро инфекциозно заболяване, с треска, увреждане на черния дроб. Антропоноза.

Таксономия, морфология, антигенна структура: семейство Picornaviridae, род Hepatovirus. Типовият вид има един серотип. Това е РНК-съдържащ вирус, просто организиран, има един вирус-специфичен антиген.

Култивиране: Вирусът се отглежда в клетъчни култури. Цикълът на възпроизвеждане е по-дълъг от този на ентеровирусите, цитопатичен ефектне се изразява.

Устойчивост: Устойчив на топлина; инактивира се чрез кипене в продължение на 5 минути. Относително стабилен в околната среда (вода).

Епидемиология. Източникът са пациентите. Механизмът на заразяване е фекално-орален. Вирусите се отделят с изпражненията в началото на клиничните прояви. С появата на жълтеница интензивността на изолиране на вируса намалява. Вирусите се предават чрез вода, хранителни продукти, ръце.

Боледуват предимно деца на възраст от 4 до 15 години.

Микробиологична диагностика. Материалът за изследването е серум и изпражнения. Диагнозата се основава главно на определянето на IgM в кръвта с помощта на ELISA, RIA и имунна електронна микроскопия. Същите методи могат да открият вирусен антиген в изпражненията. Вирусологично изследванене изпълнявайте.

3. Вирусологична диагностика на грипа. Изолиране на вируса, определяне на неговия тип. Серологични методи за диагностициране на грип: RSK, RTGA. Ускорен диагностичен метод с използване на флуоресцентни антитела.

Микробиологична диагностика. Диагнозата "грип" се основава на (1) изолирането и идентифицирането на вируса, (2) определянето на вирусни антигени в клетките на пациента, (3) търсенето на вирус-специфични антитела в серума на пациента. При избора на материал за изследване е важно да се получат клетки, засегнати от вируси, тъй като именно в тях се случва репликацията на вируса. Материал за изследване - назофарингеален секрет. За да се определят антителата, се изследват сдвоени кръвни серуми на пациента.

Експресна диагностика. Вирусните антигени се откриват в тестовия материал с помощта на RIF (директни и индиректни опции) и ELISA. Геномът на вирусите може да бъде открит в материала с помощта на PCR.

Вирусологичен метод. Оптималният лабораторен модел за култивиране на щамове е пилешкият ембрион. Индикацията на вирусите се извършва в зависимост от лабораторния модел (чрез смърт, чрез клинични и патоморфологични промени, CPP, образуване на "плаки", "цветна проба", RHA и хемадсорбция). Вирусите се идентифицират по тяхната антигенна структура. Използват се RSK, RTGA, ELISA, RBN (реакция на биологична неутрализация) на вируси и др. Обикновено типът на грипните вируси се определя в RSK, подтипът в RTGA.

Серологичен метод. Диагнозата се поставя с четирикратно увеличение на титъра на антителата в двойки серуми от пациента, получени на интервали от 10 дни. Приложете вируси RTGA, RSK, ELISA, RBN.

Аденовируси, характеристики на свойствата, състав на групата. Аденовируси, патогенни за хората. Характеристики на патогенезата на аденовирусните инфекции, методи за култивиране на аденовируси. Диагностика на аденовирусни заболявания.

Семейство Adenoviridae е разделено на два рода: Mastadenovirus - аденовируси на бозайници, включва човешки аденовируси (41 сероварианта), маймуни (24 сероварианта), както и говеда, коне, овце, свине, кучета, мишки, земноводни; и Aviadenovirus - птичи аденовируси (9 серотипа).

Аденовирусите нямат суперкапсид. Вирионът има формата на икосаедър - кубичен тип симетрия, диаметърът му е 70-90 nm. Капсидът се състои от 252 капсомера с диаметър 7-9 nm.

Вирионът съдържа поне 7 антигена. Инкубационен период 6-9 дни. Вирусът се репликира в епителни клеткигорните дихателни пътища, лигавиците на очите. Може да проникне в белите дробове, да засегне бронхите и алвеолите, да причини тежка пневмония; характерно биологично свойство на аденовирусите е тропизъм към лимфоидната тъкан.

Аденовирусните заболявания могат да се характеризират като фебрилни с катарално възпалениелигавицата на дихателните пътища и очите, придружено от увеличаване на субмукозната лимфоидна тъкан и регионалната лимфни възли.

Лабораторна диагностика. 1. Откриване на вирусни антигени в засегнатите клетки чрез имунофлуоресценция или IFM методи. 2. Изолиране на вируса. Материалът за изследването е изхвърлянето на назофаринкса и конюнктивата, кръвта, изпражненията (вирусът може да бъде изолиран не само в началото на заболяването, но и на 7-14-ия ден от него). За изолиране на вируса се използват първични трипсинизирани клетъчни култури (включително диплоидни) на човешки ембрион, които са чувствителни към всички сероварианти на аденовируси. Вирусите се откриват чрез техния цитопатичен ефект и чрез CSC, тъй като всички те споделят общ комплемент-фиксиращ антиген. Идентифицирането се извършва чрез типоспецифични антигени с помощта на RTGA и pH в клетъчна култура. 3. Откриване на повишаване на титъра на антитялото в двойки серуми на пациент, използващ RSC. Определянето на повишаването на титъра на типоспецифичните антитела се извършва с референтни серощамове на аденовируси в RTGA или RN в клетъчна култура.

5. Coxsackie и ECHO вируси. Характеристика на свойствата им. Съставът на групите. Методи за микробиологична диагностика на заболявания, причинени от Coxsackie и ECHO вируси.

Coxsackie са най-кардиотропните от всички ентеровируси. При 20-40% от пациентите под 20-годишна възраст инфекцията с Coxsackie се усложнява от миокардит. Вирусите Coxsackie са представени от две групи: групата Coxsackie A включва 23 сероварианти (A1-A22, 24); групата Coxsackie B включва 6 сероварианта (B1-B6).

Вирусите Coxsackie A и B могат да причинят при хората, в допълнение към полиомиелитни заболявания, понякога придружени от парализа, и различни други заболявания с особена клиника: асептичен менингит, епидемична миалгия (болест на Борнхолм), херпангина, леко заболяване, гастроентерит, остри респираторни инфекции, миокардит

ECHO, което означава: Е - чревно; С - цитопатогенен; H - човек; O - orphan - сирак. съдържа 32 серотипа.

Източникът на Coxsackie- и ECHO-инфекции е човек. Инфекцията с вируси се осъществява по фекално-орален път.

Патогенезата на заболяванията, причинени от вирусите Coxsackie и ECHO, е подобна на патогенезата на полиомиелита. Входните врати са лигавицата на носа, фаринкса, тънките черва, в чиито епителни клетки, както и в лимфоидната тъкан, тези вируси се размножават.

Афинитетът към лимфоидната тъкан е една от характерните черти на тези вируси. След размножаването си вирусите проникват в лимфата и след това в кръвта, причинявайки виремия и генерализиране на инфекцията.

Веднъж попаднали в кръвния поток, вирусите се разпространяват хематогенно в тялото, избирателно се установяват в онези органи и тъкани, към които имат тропизъм.

Методи за диагностициране на ентеровирусни заболявания. използвайте вирусологичен метод и различни серологични тестове. изследването трябва да се проведе върху цялата група ентеровируси. За тяхното изолиране се използва чревно съдържимо, промивка и намазки от фаринкса, по-рядко цереброспинална течност или кръв, а в случай на смърт на пациента се изследват парчета тъкан от различни органи. С тестовия материал се заразяват клетъчни култури (полиовируси, ECHO, Coxsackie B и някои серовари на Coxsackie A), както и новородени мишки (Coxsackie A).

Типизирането на изолираните вируси се извършва в реакции на неутрализация, RTGA, RSK, реакции на утаяване, като се използват референтни смеси от серуми от различни комбинации. За откриване на антитела в серума на хора с ентеровирусни инфекции се използват същите серологични тестове (RN, цветни тестове, RTGA, RSK, реакции на утаяване), но за тези цели е необходимо да има сдвоени серуми от всеки пациент (при остър период и след 2-3 седмици.от началото на заболяването). Реакциите се считат за положителни, когато титърът на антителата се увеличи най-малко 4 пъти. Тези два метода също използват IFM (за откриване на антитела или антиген).

Хепатит В. Структура и характеристики на основните свойства на вириона. Повърхностен антиген, неговото значение. Характеристики на взаимодействието на вируса с клетката. Начини на заразяване. Методи за лабораторна диагностика. специфична профилактика.

Вирус на хепатит B, HBV Вирионът съдържа три основни антигена

1. HBsAg - повърхностен (повърхностен), или разтворим (разтворим), или австралийски антиген.

2. HBcAg - core антиген (cog-антиген).

3. HBeAg - антиген е, локализиран в ядрото на вириона

Действителният вирион - частицата на Дейн - има сферична форма и диаметър 42 nm. Суперкапсидът на вириона се състои от три протеина: основен (основен), голям и среден (фиг. 88.1). Геномът е затворен в капсид и е представен от двойноверижна кръгова ДНК с m.m. от 1,6 MD. ДНК се състои от приблизително 3200 нуклеотида, но нейната "плюс" верига е 20-50% по-къса от "минус" веригата.

Повърхностният антиген - HBsAg - съществува под формата на три морфологично различни варианта: 1) представлява суперкапсид на целия вирион; 2) в в големи количествасреща се под формата на частици с диаметър 20 nm, имащи сферична форма; 3) под формата на нишки с дължина 230 nm. Химически те са идентични. HBsAg съдържа един общ антиген a и две двойки взаимно изключващи се типоспецифични детерминанти: d/y и w/r, така че има четири основни подтипа на HBsAg (и, съответно, HBV): adw, adr, ayw и ayr. Антиген а осигурява образуването на общ кръстосан имунитет към всички подтипове на вируса.

Протеините, които образуват повърхностния антиген, съществуват в гликозилирани (gp) и негликозилирани форми. Gp27, gp33, gp36 и gp42 са гликозилирани (числата показват m.m. в CD). HBV суперкапсидът се състои от основния или основния S-протеин (92%); среден М-протеин (4%) и голям или дълъг L-протеин (1%).

Основен протеин - p24/gp27, Голям протеин - p39/gp42, Среден протеин - gp33/gp36.

взаимодействие с клетката.

1. Адсорбция върху клетката.

2. Проникване в клетката по механизма на рецептор-медиирана ендоцитоза (покрита ямка -> оградена везикула -> лизозома -> освобождаване на нуклеокапсида и проникване на вирусния геном в ядрото на хепатоцита).

3. Вътреклетъчно размножаване.

Източникът на инфекция с вируса на хепатит В е само човек. Заразяването става не само парентерално, но и по полов и вертикален път (от майката към плода)

Понастоящем основният метод за диагностициране на хепатит B е използването на обратна пасивна хемаглутинация (RPHA) за откриване на вируса или неговия повърхностен антиген, HBsAg. Както вече беше отбелязано, кръвта съдържа много пъти повече повърхностен антиген от самия вирус (100-1000 пъти). За реакцията ROPHA се използват еритроцити, сенсибилизирани с антитела срещу вируса на хепатит В. При наличие на антиген в кръвта възниква реакция на хемаглутинация. За откриване на антитела срещу вирусния антиген HBsAg, различни имунологични методи(RSK, RPGA, IFM, RIM и др.)

Специфична профилактика

Ваксинациите срещу хепатит B са задължителни и трябва да се правят през първата година от живота. За ваксиниране са предложени два вида ваксини. За приготвянето на един от тях като суровина се използва плазмата на вирусоносителите, тъй като съдържа вирусен антиген в количества, достатъчни за приготвяне на ваксина. Основното условие за приготвянето на този тип ваксини е тяхната пълна безопасност.За производството на друг вид ваксина се използват методи генното инженерствоПо-специално, за получаване на антигенен материал се използва рекомбинантен клон на дрожди, който произвежда повърхностния антиген на вируса на хепатит В.

В Русия са създадени ваксини както за възрастни, така и за новородени и деца ранна възраст. Пълният курс на ваксинация се състои от три инжекции:

I доза - веднага след раждането; II доза - след 1-2 месеца; III доза - до края на 1-вата година от живота.

Серологичната диагностика, базирана на реакцията антиген-антитяло, може да се използва за определяне и на двете, и играе роля при определяне на етиологията на вирусна инфекция дори при отрицателни резултати от изолирането на вируса.

Успех серологична диагностиказависи от спецификата на реакцията и спазването на временните условия за вземане на кръв, необходими за синтеза на антитела от организма.

В повечето случаи се използват сдвоени кръвни серуми, взети на интервали от 2-3 седмици. За положителна реакция се счита най-малко 4-кратно увеличение на титъра на антителата. Известно е, че повечето специфични антитела принадлежат към класовете IgG и IgM, които се синтезират по различно време. инфекциозен процес. В същото време IgM антителата са ранни и тестовете, използвани за определянето им, са свикнали ранна диагностика(достатъчно е да се изследва един серум). Антителата от клас IgG се синтезират по-късно и се съхраняват дълго време.

RN се използва за типизиране на вируси, за специфична за група диагностика, например, аденовирусна инфекция, използвайте реакция на фиксиране на комплемента(RSK). Най-използваните са реакция на инхибиране на хемаглутинацията(RTGA), RSK, RIF, пасивни реакциии обратна пасивна хемаглутинация(RPGA, ROPGA), различни варианти на ELISA, които почти навсякъде заменят RIA, равни по чувствителност към него.

RTGAизползвани за диагностициране на заболявания, причинени от хемаглутиниращи вируси. Основава се на свързването на антитела към серума на пациента на добавения стандартен вирус. Индикаторът на реакцията е еритроцитите, аглутинирани от вируса (образуване на характерен "чадър") при липса на специфични антитела и утаяване на дъното, неаглутинирани, ако има такива.

RSKе един от традиционните серологични тестове и се използва за диагностициране на много вирусни инфекции. В реакцията участват две системи: антитела на серума на пациента + стандартен вирус и овчи еритроцити + антитела към тях, както и титриран комплемент. Ако антителата и вирусът съвпадат, този комплекс свързва комплемента и не настъпва лизис на овчи еритроцити ( положителна реакция). При отрицателен RSC комплементът допринася за лизирането на еритроцитите. Недостатък на метода е неговата недостатъчно висока чувствителност и трудността при стандартизиране на реактивите.

За да се вземе предвид значението на RSK, както и на RTGA, е необходимо да се титруват сдвоени серуми, т.е. взети в началото на заболяването и по време на възстановяване.

RPGA- аглутинация на еритроцити (или полистиренови перли), сенсибилизирани от вирусни антигени в присъствието на антитела. Всички вируси могат да бъдат сорбирани върху еритроцитите, независимо от наличието или отсъствието на хемаглутинираща активност в тях. Поради наличието на неспецифични реакции, серумите се изследват в разреждане 1:10 или повече.

RNGA- аглутинация на еритроцити, сенсибилизирани от специфични антитела в присъствието на вирусни антигени. ROPHA получи най-голямо разпространение при откриването на HBs антигена както при пациенти, така и при кръводарители.

АКОметод също ELISAизползвани за откриване на антитела в серума. ELISA за диагностични цели става все по-важен и широко разпространен. Вирусният антиген се сорбира върху твърдата фаза (дъното на ямките на полистиренови плаки или полистиренови перли). Когато се добавят съответните антитела в серума, те се свързват с адсорбираните антигени. Наличието на желаните антитела се открива с помощта на анти-антитела (например човешки), конюгирани с ензим (пероксидаза). Добавянето на субстрат и реакцията субстрат-ензим дават цвят. ELISA може да се използва и за определяне на антигени. В този случай антителата се адсорбират върху твърдата фаза.

моноклонални антитела. Голям напредък в диагностиката на вирусните инфекции беше постигнат през последното десетилетие, когато с развитието на генно инженерните изследвания беше разработена система за получаване на моноклонални антитела. По този начин специфичността и чувствителността на диагностичните методи за определяне на вирусни антигени рязко се повишават. Тясната специфичност на моноклоните, представляващи малка част от вирусни протеини, които може да не присъстват в клиничния материал, се преодолява успешно чрез използване на няколко моноклонални антитела към различни вирусни детерминанти.

имунни реакцииизползвани при диагностични и имунологични изследвания при болни и здрави хора. За целта нанесете серологични методи , т.е. методи за изследване на антитела и антигени, като се използват реакции антиген-антитяло, определени в кръвен серум и други течности, както и телесни тъкани.

Откриване в кръвен серумантителата на пациента срещу антигените на патогена ви позволява да поставите диагноза на заболяването. Серологичните изследвания се използват и за идентифициране на микробни антигени, различни биологично активни вещества, кръвни групи, тъканни и туморни антигени, имунни комплекси, клетъчни рецептори и др.

При изолиране на микробот пациента, патогенът се идентифицира чрез изследване на неговите антигенни свойства с помощта на имунни диагностични серуми, т.е. кръвни серуми на хиперимунизирани животни, съдържащи специфични антитела. Този т.нар серологична идентификациямикроорганизми.

Широко използван в микробиологията и имунологиятааглутинация, преципитация, реакции на неутрализация, реакции с участието на комплемента, с използване на белязани антитела и антигени (радиоимунологични, ензимен имуноанализ, имунофлуоресцентни методи). Изброените реакции се различават по регистриран ефект и техника на стадиране, но всички те се основават на реакцията на взаимодействие на антигена с антитялото и се използват за откриване както на антитела, така и на антигени. Реакциите на имунитета се характеризират с висока чувствителност и специфичност.

Характеристики на взаимодействието на антитяло с антигенса основата диагностични реакциив лаборатории. реакция инвитромежду антиген и антитяло се състои от специфична и неспецифична фаза. AT специфична фазаима бързо специфично свързване на активния център на антитялото с детерминантата на антигена. Тогава идва неспецифична фаза -по-бавно, което се проявява с видими физични явления, например, образуването на люспи (феномен на аглутинация) или утайка под формата на мътност. Тази фаза изисква определени условия (електролити, оптимално pH на средата).

Свързването на антигенна детерминанта (епитоп) към активното място на Fab фрагмент на антитяло се дължи на ван дер Ваалсови сили, водородни връзки и хидрофобни взаимодействия. Силата и количеството на антигена, свързан с антитела, зависи от афинитета, авидността на антителата и тяхната валентност.

Имунодефицити, както първични, така и особено вторичниса широко разпространени сред хората. Те са причина за проявата на много заболявания и патологични състояния, поради което изискват профилактика и лечение с имунотропни лекарства.

34. Инактивирани (корпускулярни) ваксини. Разписка. Приложение. Предимства. Недостатъци.

Инактивирани (убити, частици или молекулярни) ваксини- препарати, като активно вещество, включително тези, убити от химически или по физически начинкултури от патогенни вируси или бактерии (клетъчни, вирионни) или комплекси от антигени, извлечени от патогенни микроби, съдържащи защитни антигени (субклетъчни, субвирионни ваксини).

За изолиране на антигенни комплекси (гликопротеини, LPS, протеини) от бактерии и вируси се използват трихлороцетна киселина, фенол, ензими и изоелектрично утаяване.

Получават се чрез отглеждане на патогенни бактерии и вируси върху изкуствени хранителни среди, инактивирани, изолирани антигенни комплекси, пречистени, конструирани под формата на течен или лиофилен препарат.

Предимството на този тип ваксина е относителната лекота на получаване (не е необходимо дългосрочно изследване и изолиране на щамове). Недостатъците включват ниска имуногенност, необходимост от трикратна употреба и висока реактогенност на формализираните ваксини. Освен това, в сравнение с живите ваксини, имунитетът, който те предизвикват, е краткотраен.

В момента се използват следните убити ваксини: коремен тиф, обогатена с Vi антиген; ваксина срещу холера, ваксина срещу коклюш.

№ 1 Серологични тестове, използвани за диагностика вирусни инфекции.

имунни реакцииизползвани при диагностични и имунологични изследвания при болни и здрави хора. За целта нанесете серологични методи, т.е. методи за изследване на антитела и антигени, като се използват реакции антиген-антитяло, определени в кръвен серум и други течности, както и телесни тъкани.

Откриването на антитела срещу антигените на патогена в кръвния серум на пациента прави възможно диагностицирането на заболяването. Серологичните изследвания се използват и за идентифициране на микробни антигени, различни биологично активни вещества, кръвни групи, тъканни и туморни антигени, имунни комплекси, клетъчни рецептори и др.

Когато микроб се изолира от пациент, патогенът се идентифицира чрез изследване на неговите антигенни свойства с помощта на имунни диагностични серуми, т.е. кръвни серуми на хиперимунизирани животни, съдържащи специфични антитела. Това е така наречената серологична идентификация на микроорганизми.

В микробиологията и имунологията широко се използват реакции на аглутинация, преципитация, неутрализация, реакции с участието на комплемент, с използване на белязани антитела и антигени (радиоимунологични, ензимни имуноанализа, имунофлуоресцентни методи). Изброените реакции се различават по регистриран ефект и техника на стадиране, но всички те се основават на реакцията на взаимодействие на антигена с антитялото и се използват за откриване както на антитела, така и на антигени. Реакциите на имунитета се характеризират с висока чувствителност и специфичност.

Характеристиките на взаимодействието на антитяло с антиген са в основата на диагностичните реакции в лабораториите. Реакцията in vitro между антиген и антитяло се състои от специфична и неспецифична фаза. В специфичната фаза има бързо специфично свързване на активния център на антитялото с детерминантата на антигена. След това идва неспецифичната фаза - по-бавна, която се проявява с видими физични явления, като образуване на люспи (феномен на аглутинация) или утайка под формата на мътност. Тази фаза изисква определени условия (електролити, оптимално pH на средата).

No2 Причинителите на лейшманиозата. Таксономия. Отличителен белег. Микробиологична диагностика. Лечение.

Таксономия:тип Sarcomastigophorae, подтип Mastigophora - камшичести, клас Zoomastigophora, разред Kinetoplastida, род Leishmania.

отглеждане: NNN хранителна среда, съдържаща дефибриниран заешки кръвен агар. Leishmania също расте върху хорион-алантоисната мембрана на пилешкия ембрион и в клетъчни култури.

Епидемиология: в страни с топъл климат. Механизмът на предаване на патогените е трансмисивен, чрез ухапване от преносители – комари. Основните източници на патогени: при кожна антропонозна лайшманиоза - хора; с кожна зоонозна лайшманиоза - гризачи; с висцерална лайшманиоза - хора; с мукокутанна лайшманиоза - гризачи, диви и домашни животни.

Патогенеза и клиника.Има два причинителя на кожната лайшманиоза: L. tropica, причинителят на антропонозната лайшманиоза, и L. major, причинителят на зоонозната кожна лайшманиоза.

Антропонозната кожна лайшманиоза се характеризира с дълъг инкубационен период - няколко месеца. На мястото на ухапване от комар се появява туберкулоза, която се увеличава и се разязвява след 3 месеца. Язвите са по-често локализирани по лицето и горните крайници, белези до края на годината. Зоонотичната кожна лайшманиоза (ранна улцеративна лайшманиоза, язва на Пендински, селска форма) е по-остра. Инкубационният период е 2-4 седмици. Мъкнещите язви по-често се локализират върху долните крайници. Кожно-лигавичната лайшманиоза се причинява от лайшманията на комплекса L. braziliensis; развива грануломатозни и язвени лезии на кожата на носа, лигавиците на устата и ларинкса. Антрапонозната висцерална лайшманиоза се причинява от лайшманията на комплекса L. donovani; при пациентите се засягат черния дроб, далака, лимфните възли, костния мозък и храносмилателния тракт.

Имунитет:устойчиви през целия живот

В петна (от туберкули, съдържание на язви, точки от органи), оцветени по Romanovsky-Giemsa, се откриват вътреклетъчно разположени малки лайшмании с овална форма (амастиготи). За да се изолира чиста култура на патогена, инокулацията се извършва върху среда NNN: инкубиране за 3 седмици. Серологичните методи не са достатъчно специфични. Възможно е да се използва RIF, ELISA.

Тестът за кожна алергия за ХЗТ към лейшманин се използва в епидемиологични изследвания на лайшманиоза.

Лечение:При висцерална лайшманиоза се използват препарати от антимон и диамидини (пентамидин). При кожна лайшманиоза - квинакрин, амфотерицин.

Предотвратяване:унищожават болни животни, провеждат борба с гризачи и комари. Имунопрофилактиката на кожната лайшманиоза се извършва чрез инокулация на жива култура от L. major.

БИЛЕТ №28

№ 1 Имуноглобулини, структура и функции.

природата на имуноглобулините. В отговор на въвеждането на антиген имунната система произвежда антитела - протеини, които могат специфично да се комбинират с антигена, причинил тяхното образуване, и по този начин да участват в имунологични реакции. Антителата принадлежат към β-глобулините, т.е. фракцията от кръвни серумни протеини, която е най-малко подвижна в електрическо поле. В тялото β-глобулините се произвеждат от специални клетки - плазмени клетки. α-глобулините, които изпълняват функциите на антитела, се наричат имуноглобулини и се означават със символа Ig. Следователно антителата са имуноглобулини, произведени в отговор на въвеждането на антиген и способни специфично да взаимодействат със същия антиген.

Функции. Основната функция е взаимодействието на техните активни центрове с комплементарни детерминанти на антигени. Вторична функция е способността им да:

Свързват антигена, за да го неутрализират и елиминират от тялото, т.е. участват в образуването на защита срещу антигена;

Участват в разпознаването на "чужд" антиген;

Осигурете сътрудничество имунокомпетентни клетки(макрофаги, Т- и В-лимфоцити);

Участват в различни формиимунен отговор (фагоцитоза, килерна функция, GNT, ХЗТ, имунологична толерантност, имунологична памет).

Структура на антителата. Протеини на имуноглобулини химичен съставпринадлежат към гликопротеините, тъй като се състоят от протеини и захари; изграден от 18 аминокиселини. Те имат видови различия, свързани главно с набор от аминокиселини. Молекулите им са с цилиндрична форма, виждат се в електронен микроскоп. До 80% от имуноглобулините имат седиментационна константа 7S; устойчив на слаби киселини, основи, нагряване до 60 °C. Възможно е да се изолират имуноглобулини от кръвния серум чрез физични и химични методи (електрофореза, изоелектрично утаяване с алкохол и киселини, изсолване, афинитетна хроматография и др.). Тези методи се използват в производството при получаването на имунобиологични препарати.

Имуноглобулините се делят на пет класа според тяхната структура, антигенни и имунобиологични свойства: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Имуноглобулините M, G, A имат подкласове. Например, IgG има четири подкласа (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Всички класове и подкласове се различават по аминокиселинна последователност.

Молекулите на имуноглобулините от всичките пет класа се състоят от полипептидни вериги: две идентични тежки вериги Н и две идентични леки вериги - L, свързани с дисулфидни мостове. Според всеки клас имуноглобулини, т.е. M, G, A, E, D, разграничават пет типа тежки вериги: ? (mu), ? (гама), ? (алфа), ? (епсилон) и? (делта), различаващи се по антигенност. Леките вериги от всичките пет класа са общи и се предлагат в два вида: ? (капа) и? (ламбда); L-вериги на имуноглобулини от различни класове могат да се присъединят (рекомбинират) както с хомоложни, така и с хетероложни Н-вериги. Въпреки това, в една и съща молекула може да има само идентични L-вериги (? или?). Както Н-, така и L-веригите имат променлива - V област, в която аминокиселинната последователност е нестабилна, и постоянна - С област с постоянен набор от аминокиселини. В леките и тежките вериги се разграничават NH2- и COOH-крайни групи.

По време на обработка? -глобулин меркаптоетанол разрушава дисулфидните връзки и молекулата на имуноглобулина се разпада на отделни вериги от полипептиди. Когато е изложен на протеолитичния ензим папаин, имуноглобулинът се разцепва на три фрагмента: два некристализиращи фрагмента, съдържащи детерминантни групи към антигена и наречени Fab фрагменти I и II, и един кристализиращ Fc фрагмент. FabI и FabII фрагментите са сходни по свойства и аминокиселинен състав и се различават от Fc фрагмента; Fab- и Fc-фрагментите са компактни образувания, свързани помежду си с гъвкави участъци на Н-веригата, поради което имуноглобулиновите молекули имат гъвкава структура.

Както H-вериги, така и L-вериги имат отделни, линейно свързани компактни области, наречени домейни; има 4 от тях в Н-веригата и 2 в L-веригата.

Активните места или детерминантите, които се образуват във V-регионите, заемат приблизително 2% от повърхността на имуноглобулиновата молекула. Всяка молекула има две детерминанти, свързани с хиперпроменливи региони H- и L-вериги, т.е. всяка имуноглобулинова молекула може да свърже две антигенни молекули. Следователно антителата са двувалентни.

Типичната структура на имуноглобулинова молекула е IgG. Останалите класове имуноглобулини се различават от IgG в допълнителни елементи от организацията на техните молекули.

В отговор на въвеждането на всеки антиген могат да бъдат произведени антитела от всичките пет класа. Обикновено първо се произвежда IgM, след това IgG, останалите - малко по-късно.

No2 Причинителят на хламидиите. Таксономия. Отличителен белег. Микробиологична диагностика. Лечение.

Таксономия:разред Chlamydiales, семейство Chlamydaceae, род Chlamydia. Родът е представен от видовете C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.

Болестите, причинени от хламидия, се наричат хламидия. Болестите, причинени от C. trachomatis и C. pneumoniae са антропонози. Орнитозата, чийто причинител е C. psittaci, е зооантропонозна инфекция.

Морфология на хламидиите: малки, грам "-" бактерии, сферична форма. Не образуват спори, няма флагели и капсули. Клетъчна стена: 2-слойна мембрана. Имат гликолипиди. Грама е червена. Основният метод на оцветяване е по Романовски-Гимза.

2 форми на съществуване: елементарни тела (неактивни инфекциозни частици, извън клетката); ретикуларни тела (вътре в клетките, вегетативна форма).

Култивиране:Може да се размножава само в живи клетки. AT жълтъчна торбичкаразвиващи се пилешки ембриони, податливи животни и в клетъчна култура

Ензимна активност: малък. Те ферментират пирогроздена киселина и синтезират липиди. Не е в състояние да синтезира високоенергийни съединения.

Антигенна структура: Антигени от три вида: специфичен за рода термостабилен липополизахарид (в клетъчната стена). Идентифициран с помощта на RSK; видово-специфичен антиген с протеинова природа (във външната мембрана). Откриване с помощта на RIF; вариант-специфичен антиген с протеинова природа.

фактори на патогенност.Протеините на външната мембрана на хламидиите са свързани с техните адхезивни свойства. Тези адхезини се намират само в елементарни тела. Хламидията произвежда ендотоксин. Установено е, че някои хламидии имат протеин от топлинен шок, който може да причини автоимунни реакции.

съпротива. Висок до различни фактори външна среда. Устойчив на ниски температури, изсушаване. Чувствителен към топлина.

C. trachomatis е причинител на заболявания на пикочно-половата система, очите и дихателните пътища при човека.

Трахома е хронично инфекциозно заболяване, характеризиращо се с увреждане на конюнктивата и роговицата на очите. Антропоноза. Предава се по контактно-битов път.

Патогенеза:засяга лигавицата на очите. Той прониква в епитела на конюнктивата и роговицата, където се размножава, разрушавайки клетките. Развива се фоликуларен кератоконюнктивит.

Диагностика:изследване на изстъргвания от конюнктивата. В засегнатите клетки, когато се оцветяват по Romanovsky-Giemsa, се откриват цитоплазмени включвания с лилав цвят, разположени в близост до ядрото - тялото на Provachek. RIF и ELISA също се използват за откриване на специфичен хламидиен антиген в засегнатите клетки. Понякога те прибягват до култивиране на хламидия трахома върху пилешки ембриони или клетъчна култура.

Лечение:антибиотици (тетрациклин) и имуностимуланти (интерферон).

Предотвратяване:Неспецифични.

Урогениталната хламидия е болест, предавана по полов път. Това е остро / хронично инфекциозно заболяване, което се характеризира с преобладаващо увреждане на пикочно-половата система.

Човешката инфекция става през лигавиците на гениталния тракт. Основният механизъм на заразяване е контактът, начинът на предаване е полов.

Имунитет: клетъчен, със серума на инфектирани - специфични антитела. След прехвърленото заболяване - не се образува.

Диагностика: При заболявания на очите се използва бактериоскопски метод - вътреклетъчни включвания се откриват в изстъргвания от епитела на конюнктивата. RIF се използва за откриване на хламидиен антиген в засегнатите клетки. В случай на увреждане на пикочно-половия тракт може да се приложи биологичен метод, базиран на инфекция с тестовия материал (остъргвания от епител от уретрата, вагината) от клетъчна култура.

Изявление RIF, ELISA ви позволяват да откриете антигени на хламидия в тестовия материал. Серологичен метод - за доказване на IgM срещу C. trachomatis при диагностика на пневмония при новородени.

Лечение.антибиотици (азитромицин от групата на макролидите), имуномодулатори, еубиотици.

Предотвратяване. Само неспецифични (лечение на пациенти), лична хигиена.

Венеричният лимфогранулом е полово предавана болест, характеризираща се с лезии на гениталните органи и регионалните лимфни възли. Механизмът на заразяване е контактен, пътят на предаване е полов.

Имунитет:персистиращ, клетъчен и хуморален имунитет.

Диагностика:Материалът за изследването е гной, биопсия от засегнатите лимфни възли, кръвен серум. Бактериоскопски метод, биологични (култивиране в жълтъчната торбичка на пилешки ембрион), серологични (RCC със сдвоени серуми е положителен) и алергологични (интрадермален тест с хламидиен алерген) методи.

Лечение. Антибиотици - макролиди и тетрациклини.

Предотвратяване: Неспецифично.

C. pneumoniae - причинителят на респираторната хламидия, причинява остри и хроничен бронхити пневмония. Антропоноза. Заразяването става по въздушно-капков път. Те навлизат в белите дробове през горните дихателни пътища. Причинява възпаление.

Диагностика:настройка RSK за откриване на специфични антитела (серологичен метод). При първична инфекция се взема предвид откриването на IgM. RIF се използва и за откриване на хламидиен антиген и PCR.

Лечение:Провежда се с помощта на антибиотици (тетрациклини и макролиди).

Предотвратяване: Неспецифично.

C. psittaci - причинител на орнитоза - остра заразна болест, което се характеризира с увреждане на белите дробове, нервната система и паренхимните органи (черен дроб, далак) и интоксикация.

Зооантропоноза. Източници на инфекция - птици. Механизмът на заразяване е аерогенен, пътят на предаване е въздушно-капков. Причинителят е чрез слузта. черупките дишат. пътища, в епитела на бронхите, алвеолите, размножава се, възпаление.

Диагностика:Материалът за изследването е кръв, храчка на пациента, кръвен серум за серологично изследване.

Използва се биологичен метод - култивиране на хламидия в жълтъчната торбичка на пилешки ембрион, в клетъчна култура. Серологичен метод. Приложете RSK, RPHA, ELISA, като използвате сдвоен кръвен серум на пациента. Интрадермален алергичен тест с орнитин.

Лечение: антибиотици (тетрациклини, макролиди).

БИЛЕТ №29

№ 1 Причинителят на дифтерия. Таксономия и характеристики. Условно патогенни коринебактерии. Микробиологична диагностика. Откриване на анатоксичен имунитет. Специфична профилактика и лечение.

Дифтерията е остро инфекциозно заболяване, характеризиращо се с фибринозно възпаление на фаринкса, ларинкса, по-рядко на други органи и интоксикация. Неговият причинител е Corynebacterium diphtheriae.

Таксономия. Corynebacterium принадлежи към отдел Firmicutes, род Corynebacterium.

Морфологични и тинкториални свойства.Причинителят на дифтерията се характеризира с полиморфизъм: откриват се тънки, леко извити пръчици (най-често), кокоидни и разклонени форми. Бактериите често са разположени под ъгъл една спрямо друга. Те не образуват спори, нямат флагели, много щамове имат микрокапсула. Отличителен белег- наличието на волютинови зърна в краищата на пръчката (обуславя клубовидната форма). Причинителят на дифтерия се оцветява положително по Грам.

културни ценности.Факултативен анаероб, опт. температура. Микробът расте върху специални хранителни среди, например върху среда на Клауберг (кръвно-телуритен агар), върху която дифтерийният бацил дава колонии от 3 вида: а) големи, сиви, с назъбени ръбове, радиални ивици, наподобяващи маргаритки; б) малки, черни, изпъкнали, с гладки ръбове; в) подобни на първия и втория.

В зависимост от културните и ензимните свойства се разграничават 3 биологични варианта на C. diphtheriae: gravis, mitis и intermediate intermedius.

ензимна активност.Високо. Те ферментират глюкозата и малтозата при образуването на киселина, не разграждат захарозата, лактозата и манитола. Те не произвеждат уреаза и не образуват индол. Произвежда ензима цистиназа, който разцепва цистеина до H 2 S. Образува каталаза, сукцинат дехидрогеназа.

антигенни свойства.О-антигените са термостабилни полизахариди, разположени дълбоко в клетъчната стена. К-антигени - повърхностни, термолабилни, сивкавоспецифични. С помощта на серуми към К-антигена C.diph. разделени на серовари (58).

фактори на патогенност.Екзотоксин, който нарушава протеиновия синтез и в резултат на това засяга клетките на миокарда, надбъбречните жлези, бъбреците и нервните ганглии. Способността да произвежда екзотоксин се дължи на наличието в клетката на профаг, носещ гена tox, отговорен за образуването на токсина. Ензими на агресията - хиалуронидаза, невраминидаза. Микрокапсулата също принадлежи към факторите на патогенност.

съпротива.Устойчив на изсушаване, действие ниски температури, следователно, в продължение на няколко дни може да се съхранява върху предмети във вода.

Епидемиология.Източникът на дифтерия - болни хора Инфекцията става по-често през дихателните пътища. Основният път на предаване е въздушно-капков, възможно е и начин за контакт- през бельо, съдове.

Патогенеза.Входната врата на инфекцията е лигавицата на фаринкса, носа, дихателните пътища, очите, гениталиите, повърхността на раната. На мястото на входната врата се наблюдава фибринозно възпаление, образува се характерен филм, който трудно се отделя от подлежащите тъкани. Бактериите отделят екзотоксин, който попада в кръвта - развива се токсинемия. Токсинът засяга миокарда, бъбреците, надбъбречните жлези и нервната система.

Клиника.Има различни локализационни форми на дифтерия: дифтерия на фаринкса, която се наблюдава в 85-90% от случаите, дифтерия на носа, ларинкса, очите, вулвата, кожата, раните. Инкубационният период е от 2 до 10 дни. Заболяването започва с висока температура, болка при преглъщане, поява на филм върху сливиците, подути лимфни възли. Развива се подуване на ларинкса, дифтериен круп, което може да доведе до асфиксия и смърт. Други тежки усложнения, които също могат да причинят смърт, са токсичен миокардит, парализа на дихателната мускулатура.

Имунитет.След преболедуване - устойчив, интензивен антитоксичен имунитет. От особено значение е образуването на антитела към фрагмент В. Те неутрализират дифтерийния хистотоксин, предотвратявайки прикрепването на последния към клетката. Антибактериален имунитет - ненатоварен, сивкавоспецифичен

Микробиологична диагностика. С помощта на тампон от пациента се вземат филм и слуз от гърлото и носа. За да се направи предварителна диагноза, е възможно да се използва бактериоскопски метод. Основният диагностичен метод е бактериологичен: инокулация върху среда Klauber II (кръвно-телуритен агар), върху среда с плътен серум за откриване на продукцията на цистиназа, върху среда на Hiss, върху среда за определяне на токсигенността на патогена. Вътрешновидовата идентификация се състои в определяне на био- и серовара. За ускорено откриване на дифтериен токсин се използват: RIGA (реакция на непряка хемаглутинация) с антитяло еритроцитна диагностика, реакция на неутрализация на антитела (наличието на токсин се оценява по ефекта на предотвратяване на хемаглутинацията); RIA (радиоимунен) и ELISA (ензимен имуноанализ).

Лечение.Основният метод на лечение е незабавното приложение на специфичен антитоксичен антидифтериен конски течен серум. Човешки имуноглобулин антидифтериен за интравенозно приложение.

Свързани ваксини: DTP (абсорбирана ваксина срещу коклюш-тетанус), DTP (абсорбиран дифтериен-тетаничен токсоид).

№ 2 Класове имуноглобулини, техните характеристики.

Имуноглобулините се делят на пет класа според тяхната структура, антигенни и имунобиологични свойства: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Имуноглобулин клас G. Изотип G е по-голямата част от Ig серум. Той представлява 70-80% от всички серумни Ig, докато 50% се намират в тъканната течност. Средното съдържание на IgG в кръвния серум на здрав възрастен човек е 12 g/l. Полуживотът на IgG е 21 дни.

IgG е мономер, който има 2 антиген-свързващи центъра (може едновременно да свърже 2 антигенни молекули, следователно неговата валентност е 2), молекулно тегло от около 160 kDa и константа на утаяване 7S. Има подтипове Gl, G2, G3 и G4. Синтезира се от зрели В-лимфоцити и плазмени клетки. Той се определя добре в кръвния серум в пика на първичния и вторичния имунен отговор.

Има висок афинитет. IgGl и IgG3 свързват комплемента и G3 е по-активен от Gl. IgG4, подобно на IgE, има цитофилност (тропизъм или афинитет към мастоцитите и базофилите) и участва в развитието алергична реакцияаз пиша. При имунодиагностични реакции IgG може да се прояви като непълно антитяло.

Лесно преминава през плацентарната бариера и осигурява хуморален имунитет на новороденото през първите 3-4 месеца от живота. Може също да се секретира в тайната на лигавиците, включително млякото чрез дифузия.

IgG осигурява неутрализация, опсонизация и маркиране на антигена, задейства комплемент-медиирана цитолиза и антитяло-зависима клетъчно-медиирана цитотоксичност.

Имуноглобулин клас М. Най-голямата молекула от всички Ig. Това е пентамер, който има 10 антиген-свързващи центъра, т.е. валентността му е 10. Молекулното му тегло е около 900 kDa, константата на утаяване е 19S. Има подтипове Ml и M2. Тежките вериги на молекулата на IgM, за разлика от други изотипове, са изградени от 5 домена. Полуживотът на IgM е 5 дни.

Той представлява около 5-10% от всички серумни Ig. Средното съдържание на IgM в кръвния серум на здрав възрастен човек е около 1 g/l. Това ниво при хората се достига на възраст 2-4 години.

IgM е филогенетично най-древният имуноглобулин. Синтезира се от прекурсори и зрели В-лимфоцити. Той се образува в началото на първичния имунен отговор, той е и първият, който се синтезира в тялото на новороденото - определя се още на 20-та седмица от вътрематочното развитие.

Има висока авидност и е най-ефективният активатор на комплемента в класическия път. Участва в образуването на серума и секретора хуморален имунитет. Като полимерна молекула, съдържаща J-верига, тя може да образува секреторна форма и да се секретира в секрета на лигавиците, включително млякото. Повечето отнормални антитела и изоаглутинини се отнася до IgM.

Не преминава през плацентата. Откриването на специфични изотип М антитела в кръвния серум на новородено показва бивша вътрематочна инфекция или дефект на плацентата.

IgM осигурява неутрализация, опсонизация и маркиране на антигена, задейства комплемент-медиирана цитолиза и антитяло-зависима клетъчно-медиирана цитотоксичност.

Имуноглобулин клас А. Съществува в серумни и секреторни форми. Около 60% от всички IgA се намират в мукозните секрети.

Серумен IgA:Той представлява около 10-15% от всички серумни Ig. Кръвният серум на здрав възрастен съдържа около 2,5 g / l IgA, максимумът се достига до 10-годишна възраст. Полуживотът на IgA е 6 дни.

IgA е мономер, има 2 антиген-свързващи центъра (т.е. 2-валентни), молекулно тегло около 170 kDa и седиментационна константа 7S. Има подтипове А1 и А2. Синтезира се от зрели В-лимфоцити и плазмени клетки. Той се определя добре в кръвния серум в пика на първичния и вторичния имунен отговор.

Има висок афинитет. Може би непълно антитяло. Не свързва комплемента. Не преминава през плацентарната бариера.

IgA осигурява неутрализация, опсонизация и маркиране на антигена, задейства антитяло-зависима клетъчно-медиирана цитотоксичност.

Секреторен IgA:За разлика от серума, секреторният sIgA съществува в полимерна форма като ди- или тример (4- или 6-валентен) и съдържа J- и S-пептиди. Молекулно тегло 350 kDa и повече, константа на утаяване 13S и повече.

Той се синтезира от зрели В-лимфоцити и техните потомци - плазмени клетки със съответната специализация само в лигавиците и се освобождава в техните секрети. Обемът на продукцията може да достигне 5 g на ден. Пулът slgA се счита за най-многобройният в тялото - неговият брой надвишава общото съдържание на IgM и IgG. Не се открива в кръвния серум.

Секреторната форма на IgA е основният фактор за специфичния хуморален локален имунитет на лигавиците на стомашно-чревния тракт, пикочно-половата система и дихателните пътища. Благодарение на S-веригата е устойчив на протеази. slgA не активира комплемента, но ефективно се свързва с антигените и ги неутрализира. Предотвратява адхезията на микроби върху епителните клетки и генерализирането на инфекцията в лигавиците.

Имуноглобулин клас Е. Нарича се още реагин. Съдържанието в кръвния серум е изключително ниско - приблизително 0,00025 g / l. Откриването изисква използването на специални високочувствителни диагностични методи. Молекулно тегло - около 190 kDa, седиментационна константа - около 8S, мономер. Той представлява около 0,002% от всички циркулиращи Ig. Това ниво се достига до 10-15 годишна възраст.

Синтезира се от зрели В-лимфоцити и плазмени клетки главно в лимфоидната тъкан на бронхопулмоналното дърво и стомашно-чревния тракт.

Не свързва комплемента. Не преминава през плацентарната бариера. Има изразена цитофилност - тропност към мастоцитите и базофилите. Участва в развитието на свръхчувствителност незабавен тип- реакция тип I.

Имуноглобулин клас D. Няма много информация за Ig от този изотип. Почти напълно се съдържа в кръвния серум в концентрация около 0,03 g / l (около 0,2% от общия брой циркулиращи Ig). IgD има молекулно тегло 160 kDa и седиментационна константа 7S, мономер.

Не свързва комплемента. Не преминава през плацентарната бариера. Той е рецептор за прекурсори на В-лимфоцити.

БИЛЕТ №30

№ 1 Причинителят на амебиазата. Таксономия. Характеристика. Микробиологична диагностика. специфично лечение.

Таксономия:тип Sarcomastigophorae, подтип Sarcodina, клас Lobosia, разред Amoebida.

Морфология:Има два етапа на развитие на патогена: вегетативен и кистозен. Вегетативният стадий има няколко форми: голям вегетативен (тъкан), малък вегетативен; прекистозна форма, подобна на полупрозрачната, образуваща кисти.

Кистата (стадий на покой) има овална форма. Една зряла киста съдържа 4 ядра. Полупрозрачната форма е неактивна, живее в лумена горна дивизиядебелото черво като безвреден комменсал, хранещ се с бактерии и детрит.

Голяма вегетативна форма се образува при определени условия от малка вегетативна форма. Тя е най-голяма, образува псевдоподии и има движение. Може да фагоцитира еритроцитите. Открива се в пресни изпражнения при амебиаза.

отглеждане: На хранителни средибогати на хранителни вещества.

Съпротивление:Извън тялото, вегетативните форми на патогена бързо (в рамките на 30 минути) умират. Кистите са устойчиви на заобикаляща средасе запазват във фекалиите и водата. В хранителните продукти, върху зеленчуците и плодовете кистите се задържат няколко дни. Умират при варене.

Епидемиология: Амебиаза - антропонозна болест; източникът на нашествието е човекът. Механизмът на предаване е фекално-орален. Инфекцията възниква, когато кистите се въвеждат с храна, вода, чрез предмети от бита.

Патогенеза и клиника:Кисти, които са влезли в червата и след това са се образували от тях, луминални форми на амеби могат да живеят в дебелото черво, без да причиняват заболяване. С намаляване на съпротивителните сили на организма, амебата прониква в чревната стена и се размножава. Развива се чревна амебиаза.

Трофозоитите на тъканната форма са подвижни поради образуването на псевдоподии. Те проникват през стената на дебелото черво, причинявайки некроза; способни да фагоцитират еритроцитите; може да се намери в човешките изпражнения. При некроза се образуват язви. Клинично чревната амебиаза се проявява под формата на чести течни изпражнения с кръв, придружени от треска и дехидратация. В изпражненията се откриват гной и слуз, понякога с кръв.

Амебата с кръвен поток може да навлезе в черния дроб, белите дробове, мозъка, което води до развитие на екстраинтестинална амебиаза.

Имунитет:Нестабилна, основно клетъчната връзка е активирана.

Микробиологична диагностика.Основният метод е микроскопско изследване на изпражненията на пациента, както и съдържанието на абсцеси. вътрешни органи. Намазките се оцветяват с разтвор на Лугол или хематоксилин. Серологични изследвания (RNGA, ELISA, RSK): най-високият титър на антитела в кръвния серум се открива при екстраинтестинална амебиаза.

Лечение:Нанесете метронидазол, фурамид.

Предотвратяване:идентифициране и лечение на кистозни екскретори и амебоносители, общи санитарни мерки.

№ 2 Интерферони. Същност, методи за получаване. Приложение.

Интерфероните са гликопротеини, произведени от клетките в отговор на вирусна инфекция и други стимули. Те блокират възпроизвеждането на вируса в други клетки и участват във взаимодействието на клетките на имунната система. Има две серологични групи интерферони: тип I - IFN-? и IFN -?; II тип - IFN-.? Интерфероните тип I имат антивирусен и противотуморен ефект, докато интерфероните тип II регулират специфичния имунен отговор и неспецифичната резистентност.

Интерферон (левкоцитен) се произвежда от левкоцити, третирани с вируси и други агенти. α-интерферон (фибробласт) се произвежда от третирани с вирус фибробласти.

Тип I IFN се свързва със здрави клетки и ги предпазва от вируси. Антивирусният ефект на тип I IFN може също да се дължи на факта, че той е способен да инхибира клетъчната пролиферация чрез намеса в синтеза на аминокиселини.

IFN-? произведени от Т-лимфоцити и NK. Стимулира активността на Т- и В-лимфоцитите, моноцитите/макрофагите и неутрофилите. Индуцира апоптоза на активирани макрофаги, кератиноцити, хепатоцити, клетки костен мозък, ендотелиоцити и потиска апоптозата на периферните моноцити и инфектираните с херпес неврони.

Генно модифицираният левкоцитен интерферон се произвежда в прокариотни системи (E. coli). Биотехнология за производство на левкоцитен интерферонвключва следните етапи: 1) лечение на левкоцитна маса с индуктори на интерферон; 2) изолиране на иРНК сместа от третираните клетки; 3) получаване на пълна комплементарна ДНК с помощта на обратна транскриптаза; 4) вмъкване на cDNA в плазмида на Escherichia coli и неговото клониране; 5) селекция на клонове, съдържащи интерферонови гени; 6) включване в плазмида на силен промотор за успешна транскрипция на гена; 7) експресия на интерфероновия ген, т.е. синтез на съответния протеин; 8) разрушаване на прокариотни клетки и пречистване на интерферон с помощта на афинитетна хроматография.

Интерферони Приложиза профилактика и лечение на редица вирусни инфекции. Техният ефект обаче се определя от дозата на лекарството високи дозирендер на интерферон токсичен ефект. Интерфероните се използват широко при грип и други остри респираторни заболявания. Лекарството е ефективно в ранните стадии на заболяването, прилага се локално. Интерфероните имат терапевтичен ефект при хепатит В, херпес, както и при злокачествени новообразувания.

Дял: