Серологични методи за изследване на кръвта за диагностика на заболявания. Серологични методи за изследване в диагностиката на паразитни заболявания Серологичен лабораторен анализ на какво

Анализът за сифилис е един от най-разпространените сред лабораторните изследвания. Тестовете за сифилис се използват широко при профилактични прегледи. С помощта на микроскопия се открива причинителят на сифилис -. С помощта на серологични реакции се потвърждава диагнозата сифилис, установява се диагнозата латентен сифилис, проследява се ефективността на лечението и се определя степента на излекуване на пациентите.

Диагнозата на сифилис се установява въз основа на клинични данни, откриване на причинители на сифилис в материални проби и потвърждаване на диагнозата чрез серологични методи на изследване. Проявите на сифилис са многобройни и разнообразни, поради което заболяването се открива от лекари с различни специалности. Диференциалната диагноза на първичния сифилис се извършва с редица заболявания.

Ориз. 1. На снимката основната проява на сифилис е твърд шанкър.

Антитела срещу бледа трепонема и серологична диагностика

При заразяване със сифилис в тялото на пациента се образуват антитела. Серологичната диагностика помага на лекаря да проучи динамиката на образуването на антитела в тялото на пациент със сифилис в начални етапизаболяване, по време на периода на лечение и след неговото завършване, за решаване на въпроса за рецидив на заболяването при пациент или повторна инфекция (повторна инфекция), за диагностициране на сифилис при масови медицински условия.

Антитела срещу бледа трепонема IgM

IgM антителата са първите, които се произвеждат след инфекцията. Те започват да се откриват с помощта на серологични реакции от втората седмица след инфекцията. На 6-9 седмица от заболяването броят им става максимален. Ако пациентът не е бил лекуван, тогава антителата изчезват след шест месеца. IgM антителаизчезват след 1-2 месеца. след, след 3 - 6 месеца. - след лечение на късен сифилис. Ако растежът им е записан, това служи или показва повторна инфекция. Молекулите IgM са големи и не преминават през плацентата до плода.

Антитела срещу бледа трепонема IgG

Антитела имуноглобулини IgG се появяват в края на първия месец (на 4-та седмица) от момента на инфекцията. Техният титър е по-висок от титъра на IgM. IgG се запазват след лечението доста дълго време.

Неспецифични антитела

Има много серологични реакции. Това се дължи на антигенната множественост на бледа трепонема. В кръвния серум на болен човек, различни етаписифилис, освен специфични, се образуват и някои неспецифични антитела - аглутинини, комплемент-фиксиращи, имобилизини, антитела, които причиняват имунна флуоресценция, преципитини и др. Серологичните реакции за откриване на неспецифични антитела имат относителна специфичност; реакции (CSR ).

Фалшиви положителни тестове за сифилис

Отличителна чертанетрепонемните тестове получават фалшиво положителни реакции. Реагиновите антитела, които се произвеждат в човешката кръв срещу кардиолипиновия антиген, се регистрират не само при сифилис, но и при други заболявания: колагенози, хепатит, бъбречни заболявания, тиреотоксикоза, онкологични заболявания, инфекциозни заболявания(проказа, туберкулоза, бруцелоза, малария, петнист тиф, скарлатина), по време на бременност и менструация, при прием на мазни храни и алкохол. Отбелязва се, че с възрастта броят на фалшивите положителни реакции се увеличава.

Ориз. 2. Снимката показва първичен сифилис при жени.

Лабораторна диагностика на сифилис с помощта на серологични тестове

Серологичните тестове за сифилис са разделени на трепонемни и нетрепонемни.

1. Нетрепонемни тестове

Кардиолипиновият антиген се използва като антиген в тази група тестове. Липидните антигени на причинителите на сифилис са най-многобройни. Те съставляват 1/3 от сухата маса на клетката. С помощта на нетрепонемни тестове се откриват реагинови антитела, които се произвеждат срещу кардиолипиновия антиген. Тази група включва реакцията на фиксиране на комплемента (RSKcard), реакцията на микропреципитация (RMP), бързото определяне на плазмените реагини (RPR) и др. Използвайки нетрепонемни тестове, се извършва първичен скрининг за сифилис (изследване на популационни групи), и възможността за получаване на резултати в количествен вариант ви позволява да използвате тези тестове за наблюдение на ефективността на лечението. Положителните резултати от нетрепонемни тестове трябва да бъдат потвърдени с трепонемни тестове. Отличителна черта на нетрепонемните тестове е производството на фалшиво положителни реакции.

2. Трепонемни тестове

Трепонемните тестове използват антигени от трепонемален произход, изолирани от култура на трепонема палидум. С тяхна помощ се потвърждават положителните резултати от нетрепонемните тестове. Групата включва: RSKtrep - реакция на фиксиране на комплемента, RIF - реакция на имунофлуоресценция и нейните модификации, RIT, RIBT - реакция на имобилизация на бледа трепонема, RPHA - реакция на пасивна хемаглутинация, ELISA - ензимен имуноанализ.

3. Тестове за сифилис с използване на рекомбинантни антигени

Антигените за тази група тестове се получават чрез генно инженерство и се използват в реакции - TPHA и ELISA, в имуноблотинг (IB) анализи и имунохроматографски анализ.

Ориз. 3. За диагностициране на сифилис се използва набор от серологични тестове.

Диагностика на сифилис с помощта на нетрепонемни тестове

За откриване на сифилис се използват нетрепонемни тестове или комплекс от серологични реакции (CSR). Серологичната диагностика ще се прилага от 5-та седмица от момента на инфекцията или от 2-3 седмици след началото. Антителата се откриват при почти всички пациенти с пресни първични. Серологичните реакции са положителни при 70-80% от пациентите с, в 50-60% от случаите при пациентите с третичен латентен сифилис.

Серологичните реакции, използващи нетрепонемни тестове, могат да дадат фалшиво положителни резултати.

Ориз. 4. Вземане на кръв за изследване за сифилис.

Реакция на фиксиране на комплемента (RSK карта, KSK с KA, реакция на Васерман)

Реакцията на Васерман (RW, РВ), изобретена от А. Васерман преди повече от 100 години, днес е претърпяла много промени, но като почит към традицията е запазила името си до днес. Тестът за фиксиране на комплемента с помощта на кардиолипиновия антиген е предназначен не само за откриване на антитела, но се извършва и в количествена версия - с различни разреждания на серум, което позволява да се използва за проследяване на ефективността на лечението. Ниската чувствителност и специфичност, получаването на фалшиво положителни резултати са отрицателните страни на този вид изследване.

Същността на реакцията на Васерман е следната: антигените, които се използват при формулирането на реакцията на Васерман, в случай на наличие на антитела срещу причинителите на сифилис в човешката кръв, чрез комплимент, се свързват с тях и утайка. Интензивността на реакцията се обозначава със знака (+). Реакцията може да бъде отрицателна (-) - без утайка, съмнителна (малка утайка или +), слабо положителна (++), положителна (+++) и рязко положителна (++++).

По-чувствителна е модифицираната реакция на Васерман - реакцията на Колмер. С негова помощ се откриват антитела в серуми, където реакцията на Васерман дава отрицателен резултат.

При рязко положителни реакции се извършва количествено определяне на реагини, за които се използва серум в разреждания от 1:10 до 1: 320, което позволява използването този видизследвания за проследяване на ефективността на лечението. Например, намаляването на титъра на антителата и последващата им серонегативност (получаване на отрицателни резултати) показва успешно излекуване на болестта.

Ориз. 5. Кръвен тест за сифилис - реакция на Васерман.

Микрореакция на утаяване (MPR)

Микрореакцията на утаяване се използва за масови изследвания отделни групинаселение, диагностициране на сифилис и проследяване на ефективността на лечението. За провеждане на този вид изследване е необходимо малко количество от изследвания материал. Микрореакцията на утаяването се основава на имунологичната реакция антиген-антитяло. В случай на наличие на антитела в кръвния серум на субекта, комплексът антиген-антитяло се утаява с образуването на люспи. Реакцията се провежда в ямките на специална стъклена плака. Оценява се по интензитета на утаената утайка и размера на люспите в (+) като реакция на Васерман. При изследване на бременни жени, донори и за наблюдение на ефективността на лечението не се използва. VDRL и RPR са видове микрореакции.

Ориз. 6. Изглед на реакцията на утаяване в капка върху стъкло.

Ориз. 7. Кръвен тест за сифилис - реакция на микропреципитация.

Ориз. 8. Комплект за бързо определяне на плазмени реагини (Тест за сифилис RPR).

Всички положителни тестове, получени по време на неспецифични серологични реакции, изискват потвърждение чрез специфични реакции - трепонемни тестове.

Диагностика на сифилис чрез трепонемни тестове

При провеждане на трепонемни тестове се използват антигени от трепонемален произход. Техен отрицателна странае невъзможността да се използва за контрол на ефективността на лечението, получаване на положителни резултати при спирохетоза и невенерически трепонематози и получаване на фалшиво положителни резултати при онкологични заболявания, проказа, някои ендокринни патологии. Тестове като RPHA, ELISA и RIF остават положителни много години след излекуване на сифилис, а в някои случаи и цял живот.

RIBT и RIF са най-специфичните от всички серологични тестове, използвани за диагностициране на сифилис. Те ви позволяват да разграничите фалшивите положителни реакции, да идентифицирате късните форми на сифилис, които се появяват с отрицателни реакции. С помощта на RIBT се разпознават фалшиво положителни реакции при бременни жени, когато е необходимо да се реши проблемът с инфекцията на детето.

Реакция на имобилизация на Treponema pallidum (RIBT, RIT)

Същността на реакцията е, че антителата в кръвния серум на пациента обездвижват бледа трепонема. Реакция с обездвижване на до 20% от патогените се счита за отрицателна, слабо положителна - 21 - 50%, положителна - 50 - 100%. RIBT понякога дава фалшиво положителни резултати. Тестът е сложен и отнема време, но е незаменим при провеждането му диференциална диагнозалатентни форми на заболяването и фалшиво положителни резултати от серологични реакции, включително при бременни жени. RIBT дава 100% положителен резултат при вторичен, ранен и късен сифилис, в 94 - 100% от случаите - при други форми на сифилис.

Имунофлуоресцентна реакция (RIF)

Същността на реакцията е, че бледите трепонеми (антигени), комбинирани с антитела, маркирани с флуорохроми, излъчват жълто-зелено сияние във флуоресцентен микроскоп. Резултатът се оценява със знак (+). С помощта на RIF се откриват имуноглобулини от клас А. Имунофлуоресцентната реакция става положителна по-рано от реакцията на Васерман. Винаги е положителен при вторичен и латентен сифилис, в 95-100% от случаите е положителен при третичен и вроден сифилис. Техниката за провеждане на този тип изследване е по-проста от тази на RIBT, но е невъзможно да се замени RIF с RIBT, тъй като тази реакция е по-ниска от RIBT по специфичност. RIF-10 (RIF модификация) е по-чувствителен, RIF-200 и RIF-abs са по-специфични.

Ориз. 9. Кръвен тест за сифилис - имунофлуоресцентна реакция (РИФ).

Тест за имунна адхезия на Treponema pallidum (TRIPBT)

Същността на реакцията е, че бледите трепонеми, сенсибилизирани от серума на пациента в присъствието на комплемент, се придържат към повърхността на еритроцитите. Получените комплекси се утаяват по време на центрофугиране. Чувствителност този тести специфичност са близки до RIF и RIBT.

Ензимно-свързан имуносорбентен анализ за сифилис (ELISA)

С помощта на ELISA се определят имуноглобулини от клас M и G. Методът IgM - ELISA може да се използва като скринингов и потвърдителен тест. Чувствителността и специфичността на ELISA са подобни на RIF. При сифилис ELISA дава положителни резултати от третия месец на инфекцията и остава положителен за доста дълго време (понякога за цял живот).

Ориз. 10. ELISA анализатор.

Реакцията на пасивна (индиректна) хемаглутинация (RPHA)

TPHA се основава на способността на еритроцитите, върху които са адсорбирани антигените на treponema pallidum, да се слепват (хемаглутинация) в присъствието на серум на пациента. RPHA се използва за диагностициране на всички форми на сифилис, включително латентен. При прилагане Високо качествоантиген, този тип серологична реакция превъзхожда всички други тестове по специфичност и чувствителност.

Ориз. 11. RPHA се използва за диагностициране на всички форми на сифилис.

Ориз. 12. Анализ за сифилис - реакция на пасивна (индиректна) хемаглутинация (схема).

Ориз. 13. Появата на обърнат чадър, заемащ цялото дъно на епруветката, показва положителна реакция. В случай, че еритроцитите се установяват в колона ("бутон") в центъра на дъното на епруветката, те говорят за отрицателна реакция.

Ориз. 14. RPGA тест в лабораторни условия.

Микробиологична диагностика

Наред със серологичната диагностика, методът за откриване на бледи трепонеми ( микробиологична диагностика) играе важна роля, особено в периода на серонегативен сифилис, когато все още няма антитела в кръвта, но вече има първите прояви на пресен първичен сифилис (твърд шанкър).

Биологичният материал за изследването е изхвърлянето от повърхността на твърди язви (шанкри), съдържанието на пустуларни сифилиди, плачещи и ерозивни папули, точки на заразени лимфни възли, цереброспинална течност и амниотична течност и кръв за PCR.

Най-добрият метод за откриване на причинители на сифилис е изследването на биологичен материал в тъмното поле на микроскопа. Тази техника ви позволява да видите бледа трепонема в живо състояние, да проучите нейните характеристики на структура и движение, да разграничите патогенни агентиот сапрофити.

Ориз. 15. Анализ за сифилис - микроскопия в тъмно поле.

Ориз. 16. При изследване на сухи петна се използва оцветяване по Романовски-Гимза. Бледите трепонеми се оцветяват в същото време розов цвят, всички други видове спирохети - в лилаво.

Откриването на бледи трепонеми чрез микроскопия в тъмно поле е абсолютен критерий за окончателната диагноза на сифилис.

Ориз. 17. За откриване на бактерии се използва имунофлуоресцентна реакция (RIF) - трепонемален тест. Специфичен комплекс антиген – антитялокогато се комбинира със специфичен серум, белязан с флуорохром, в светлината на флуоресцентен микроскоп, той придава на бактериите зеленикав блясък.

Ориз. 18. Причинителите на сифилис са ясно видими в намазки, приготвени по метода Levaditi (импрегниране със сребро). Бледо тъмни трепонеми на фона на жълто оцветяване на клетките на заразените тъкани.

Ориз. 20. Снимката показва колония от бледа трепонема. Получаването на бактериална култура е трудно. Те практически не растат върху изкуствени хранителни среди. Върху среди, съдържащи конски и заешки серум, колониите се появяват на 3-9-ия ден.

PCR за сифилис

Ефективна и обещаваща днес е техниката за провеждане на полимераза верижна реакция. PCR за сифилис ви позволява да получите резултат в рамките на няколко часа и в материала, събран за диагностика, може да има поне няколко патогена.

Ориз. 21. PCR за сифилис ви позволява да откриете ДНК или нейните фрагменти от бледа трепонема.

Чувствителността на този метод на изследване зависи от наличието на бледи трепонеми в биологичния материал и достига 98,6%. Специфичността на този тест зависи до голяма степен от правилен изборцели за усилване по време на диагностиката и достига 100%.

В същото време, поради недостатъчно проучени сравнителни характеристики на чувствителността и специфичността на директните методи за диагностика на сифилис и PCR, този метод на изследване в Руската федерация за диагностициране на заболяването все още не е одобрен.

PCR за сифилис е разрешен само в някои случаи, като напр допълнителен методдиагностика на вроден сифилис, невросифилис, с трудности при диагностицирането на сифилис с помощта на серологични методи за изследване при пациенти с ХИВ.

Ориз. 22. Откриването на ДНК на treponema pallidum с помощта на PCR показва или наличието на жизнеспособни бактерии, или останките от мъртви бактерии, но съдържащи допълнителни копия на отделни участъци от хромозомна ДНК, способни да образуват допълнителни копия.

Какво показва серологичен анализкръв? Диагностични меркиТова е най-важната стъпка в лечението на всяко заболяване. Успехът на лечението зависи не само от предписаните лекарства, но и до голяма степен от това колко правилно е поставена диагнозата.

В допълнение, диагнозата помага за предотвратяване на усложнения и придружаващи заболявания. С помощта на серологичен анализ на кръвта на пациента се открива наличието на антитела и антигени. Проучването помага да се открият много заболявания, да се определи тяхната фаза и да се контролира хода на лечението.

Какво е серология?

Серологията е клон на имунологията, който изучава реакциите на антигени към антитела. Този разделмедицината се занимава с изследване на кръвната плазма и нейните имунологични характеристики.

Днес серологичният кръвен тест за антитела е надежден начин за откриване на човешки имунодефицитен вирус, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и други животозастрашаващи заболявания. Нека да разберем в какви случаи се предписва.

Индикации за назначаване

Необходим е серологичен кръвен тест за идентифициране на причинителя на заболяването в случай на трудност при поставяне на диагноза.

За да се извърши тази реакция, антигените на патогените се инжектират в плазмата и след това лаборантът изучава протичащия процес. Или извършват обратна реакция: антитела се инжектират в заразената кръв, за да се определи специфичната принадлежност на патогена.

Обхват на приложение

Това изследване се използва в различни отрасли на медицината. С помощта на тази реакция се откриват специфични клетки и антитела, произведени от тялото, за да се борят с инфекциите и вирусите.

Освен това, използвайки серологичен метод, се определя кръвната група на човек.

Подобен серологичен кръвен тест се използва в гинекологията за диагностициране на полово предавани болести. Този метод се използва и за изчерпателни проучваниябременни жени (откриване на токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). Преминаването на този тест е задължително при регистрация в предродилната клиника.

При деца се използва серологичен тест за потвърждаване на диагнозата на така наречените "детски" заболявания (варицела, морбили, рубеола и др.), В случай че симптомите нямат изразени прояви и е невъзможно да се идентифицира заболяването чрез анализ на клиничните показания.

Откриване на венерически болести

За венеролозите това изследване е наистина незаменимо и ви позволява да поставите диагноза много точно.

При замъглена клинична картина, серологичен кръвен тест за сифилис, лямблиоза, уреаплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания ви позволява бързо да идентифицирате наличието на антитела.

Вирусни и инфекциозни заболявания

Серологичният анализ се използва активно от гастроентеролози, хепатолози и специалисти по инфекциозни заболявания за диагностициране на вирусен хепатит.

Дешифрирането на серологичен кръвен тест дава възможност да се определи етапът на хода на заболяването и да се отговори на въпроса колко е необходима хоспитализация при този момент. Как да се подготвим правилно?

Подготовка за предаване на анализа

Серологичните кръвни тестове се правят както в обществени, така и в търговски клиники. Предпочитание трябва да се даде на лаборатория с модерно оборудване и квалифициран персонал.

Биологичните проби за изследване могат да бъдат слюнка и изпражнения, но в повечето случаи се използва венозна кръв на пациента. Кръвта за серологичния тест се взема от кубитална венав лабораторни условия. Преди да вземете теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар относно подготовката за тази процедура.

За да се подготвите за предоставяне на анализ за серологично изследване, трябва да следвате няколко прости правила.

Кръвта се взема в спокойно състояние преди хранене, тоест на празен стомах. Преди това не трябва да се подлагате на други изследвания, като рентгенови лъчи, ултразвук и др.

Необходимо е да се изключи употребата на антибактериални и някои други лекарства няколко седмици преди кръводаряването. Определени препоръки в този случай зависят от заболяването, за което се прави изследването. Например, тестът за хепатит включва избягване на мазни храни и алкохол 48 часа преди процедурата.

Реакция на флуоресценция

Сред разновидностите на серологичните реакции има флуоресцентна реакция. Тази техника използва реагент, който подчертава антителата в кръвния серум.

Поставянето на серологична реакция от директен тип включва маркиране на специфични антитела с флуоресцентно вещество. Тази реакция е най-бързата и се извършва в един етап.

Друг вариант за провеждане на такъв анализ се нарича индиректен или RNIF. Провежда се на два етапа. В първия етап антителата не се маркират с флуоресцентни етикети, а във втория етап се използват подходящо белязани антитела за откриване на антигени и антитела. Луминесценцията възниква само след свързване със специфично антитяло.

Какво показва серологичният кръвен тест? Резултатът от цялата процедура се оценява от специално устройство, което анализира силата на излъчване, разкрива формата и размера на обекта, който се изследва. Причинителите на инфекциозните заболявания се откриват с резултат, чиято достоверност е 90-95%, в зависимост от вида и стадия на патологията.

Свързан имуносорбентен анализ

Тези типове серология използват уникални, стабилни реагенти. Маркираните вещества изглежда се придържат към желаните антитела. В резултат на това получаваме качествен или количествен резултат.

Ако не се открият изразени маркери, резултатът ще се счита за отрицателен. Ако се установи наличието на антитела в биологични проби по време на качествено изследване, тогава резултатът от анализа се счита за положителен. При количествено определянеклетъчният анализ дава по-точен резултат.

Анализирайки показателите на анализа (например количеството открити клетки), специалистът определя дали заболяването е на начална фаза, в остър стадий или е влошено хронична формапатология. За да постави диагноза, лекарят взема предвид не само данните от серологичното изследване, но и клинична картиназаболявания.

Характеристики на този тест

Провеждането на този анализ не винаги е в състояние да даде 100% сигурност, че определено заболяване е открито. Случва се резултатите да са двусмислени и да са необходими други процедури.

Например, по време на тест за бруцелоза, серумът се тества за самозадържане без антиген. Това значително повишава надеждността на тестването. Анализът за бруцелоза може да бъде положителен или отрицателен и също така да предизвика съмнение.

Ако получите съмнителни резултати, които нямат недвусмислено тълкуване, препоръчително е да повторите анализа. В допълнение, бруцелозата може да бъде открита в резултат на кръвни култури чрез изследване Костен мозъки цереброспинална течност.

Предимства на серологичния кръвен тест

Диагностичните техники, използващи серологични тестове, се използват широко в съвременния свят медицинска практика. Това се прави особено често при определяне на вирусни и инфекциозни патологии.

Същите тестове се използват при географски скрининг и медицински прегледи за предотвратяване на епидемиологичното разпространение на инфекцията.

Предимствата на метода включват:

  • Високо ниво на увереност.
  • Бърза реакция и резултати. Резултатите от RSC са известни до 24 часа. В специална ситуация, в болнична обстановка, анализът ще бъде готов след няколко часа.
  • Проследяване на развитието на заболяването и ефективността на терапията.
  • Ниска цена и достъпност за пациентите.

Минуси на метода

Въпреки това, серологичните изследвания също имат своите недостатъци.

Те включват факта, че анализът трябва да вземе предвид инкубационен периодзаболявания, за да се получи по-достоверна картина.

Например, определянето на херпес симплекс от първи или втори тип е възможно само след 14 дни от момента на заразяването. Анализът за наличие на вируса на имунната недостатъчност се извършва след 30 дни, след 90 дни и шест месеца след контакт със заразен човек.

Разбира се, надеждността на резултатите може да бъде повлияна и от човешкия фактор: пренебрегване на правилата за подготовка за вземане на кръв или грешка, допусната от лабораторния асистент по време на реакцията.

статистически, грешен резултатможе да се получи в 5% от случаите. Опитен лекар, когато преглежда пациент, след като е проучил клиничната картина, в повечето случаи може да изчисли допуснатата грешка.

Сайтът предоставя обща информациясамо за информационни цели. Диагностиката и лечението на заболяванията трябва да се извършват под наблюдението на специалист. Всички лекарства имат противопоказания. Необходим е експертен съвет!

Серологични кръвен анализе метод за лабораторно изследване на определени антигени или антитела ( специфични протеини) в серума на пациента, въз основа на имунни реакцииорганизъм. Този методсе прилага, когато диагностикаинфекциозни заболявания за установяване наличието на антитела в кръвта на пациента към определен вид вирус или бактерия, както и за определяне на кръвната група.

Проучван материал

На първо място, за серологичен анализ се използва биологичен материал, събран от пациента:
  • кръвен серум
  • слюнка
  • фекална материя
В някои случаи се изследва материалът, изолиран от определени обекти на околната среда:
  • почвата

Метод за анализ или вземане на кръвна проба

Този анализ не изисква специална подготовка на пациента. Вземането на кръв се извършва сутрин на празен стомах и се извършва в лечебни зали лечебни заведения, по общоприетите хематологични методи. За серологично изследване кръвната проба се извършва по два метода: венозна кръвсе взема от кубиталната вена на пациента и от капилярна кръв безименен пръст. Кръвта се поставя в стерилни запечатани епруветки.

Характеристики на кръвния транспорт и съхранението на серума

Веднага след вземането на кръвта тя се транспортира в специална лаборатория, където на същия ден се приготвя серумът. Серумът се съхранява не повече от 4-6 дни в хладилник при температура 2-4 градуса. Ако е необходимо по-дълго съхранение, серумът се замразява. За да се избегне нарушаване на качеството на серума, е разрешено да се замрази веднъж и съответно да се размрази. При дългосрочно съхранение антителата губят свойствата си и стават частично неактивни, най-чувствителни към замразяване са имуноглобулините от класа М. След размразяване на серума е необходимо да се разбърка старателно до хомогенна маса, която помага да се възстанови концентрацията на антитела, съдържащи се в този серум.


За какво се използва серологията?

Серологични методи лабораторна диагностикаизползвани за откриване на заболявания като ехинококоза, трихинелоза, токсокароза, описторхоза, цистицеркоза, токсоплазмоза, амебиаза, ламблиоза, за да се определи ефективността на курса на лечение и накрая да се открие повторно заболяванеслед пълно възстановяване на пациента.

Основни методи за серологична диагностика

Имунофлуоресцентна реакция (RIF)

Тази реакция е индиректна версия на серологично изследване, т.е. извършва се на два етапа. На първия етап необходимото антитяло се открива в циркулиращия комплекс антиген-антитяло с помощта на антиглобулин, който е подобен по структура на имунните серумни протеини. Идентифицирането на желаното антитяло е възможно и при изследване на предварително приготвен антигенен препарат под флуоресцентен микроскоп, без използване на антиглобулини.

Имунофлуоресцентната реакция е много времеемък процес, който изисква много време и отговорност от специалист. Реакцията започва с приготвянето на разтвори, след което серумите и техните контролни проби се подлагат на титруване ( процес, който позволява определянето на съдържанието на определено вещество чрез постепенно смесване на тестов разтвор с контролирано количество реагент). Предварително приготвените разреждания и техните контролни проби се нанасят внимателно върху предметни стъкла с антиген. След това препаратите се подлагат на инкубиране, последвано от измиване и сушене на въздух. Тънък слой антисерум се нанася върху предметните стъкла, съдържащи антиген, след което препаратите се инкубират повторно и се повтаря цялата предишна верига от действия, завършваща със сушенето на препарата. В резултат препаратът върху предметно стъкло се обработва с глицерол и се изследва под флуоресцентен микроскоп.

Резултатите от реакцията се оценяват по четиристепенна скала, която се характеризира с интензитета на повърхностния жълто-зелен блясък на антигенните клетки:
+ много слаб блясък на клетката, забележим само по нейната периферия
++ слаб блясък на клетъчната периферия, но с ясно видим зелен оттенък
+++/++++ ярък блясък Зелен цвятклетъчна периферия
Реакционният титър се счита за такова серумно разреждане, при което най-малко 50% от антигенните клетки показват ясен повърхностен блясък, тоест резултатът от реакцията +++ или ++++ . Стойността на реакционния диапазон е от 1/80 до 1/100.

Интензивността на реакцията зависи от броя на утаените еритроцити на дъното на образуваните ямки:
– отрицателна реакция, която се характеризира с отлагане на еритроцити на дъното на ямките под формата на малък пръстен с гладки ръбове или "копчета"
+ ниска интензивност, тази реакция се характеризира с малки единични отлагания на дъното на отвора. Неаглутинираните еритроцити образуват "малък пръстен" в центъра на ямката
++ средна интензивност, характеризира се с образуването на "широк плътен пръстен" от неаглутинирани еритроцити на дъното на ямката
+++ интензивна реакция, аглутинираните еритроцити образуват така наречените "чадъри", в центъра на които ясно се виждат пръстени, образувани от утаени неаглутинирани еритроцити
++++ рязко интензивна реакция, при която всички еритроцити се аглутинират и, образувайки "чадъри", покриват дъното на дупките.
Титърът на тази реакция се счита за последното разреждане на серума, при което се открива поне очевидна аглутинация на еритроцитите +++ , тоест с интензивна или рязко интензивна реакция.

Надеждност и качество на методите серологична диагностиказависят от организацията на провеждания вътрешен и външен лабораторен контрол, състоящ се от няколко независими процедурипредназначени за оценка на качеството на резултатите от анализа.

Серология(от латински serum - "серум", logos - "наука") е клон на имунологията, който изучава спецификата на взаимодействието на серумните антитела с антигените.

Основата на диагностиката е откриването на специфични антитела, които се образуват като реакция на инфекция на тялото с определен антиген. В зависимост от това кои антитела са открити в кръвта, се прави заключение за естеството на инфекцията, а количеството на тези антитела показва степента на активност на инфекциозното заболяване.

Материалът, взет за изследване като част от серологичен кръвен тест, се изследва за и др опасни заболявания- херпес, чревни инфекции, рубеола, токсоплазмоза, хламидия, морбили, хламидия. В допълнение, това изследване ви позволява да одобрите кръвната група, да определите специфичността на протеините.

Така се извършват серологични изследвания:

  • ако е поставена предварителна диагноза и сега се изисква нейното потвърждение. Изследването се основава на добавянето на подходящ антиген към кръвния серум. Отговорът ви позволява да направите заключение за наличието или отсъствието на заболяването;
  • ако не може да се постави диагноза. Като част от изследването се добавят антитела към кръвта и се определя вида на антигените, което позволява да се определи конкретно заболяване;
  • ако е необходимо.

По този начин серологичният кръвен тест помага най-много да се постави диагноза или да се предпише ефективно лечение- с минимални времеви и финансови разходи.

Предимствата на серологичните изследвания включват:

  • способността за откриване на патологични микроорганизми в ранни стадииинфекции;
  • контрол на развитието на заболяването и нивото на ефективност на терапията;
  • няма нужда от специална подготовка преди вземане на биоматериал;
  • ефективност. Резултатът ще бъде наличен след два до три часа, което при условия стационарно лечениемного важно;
  • достъпността на реагента, което позволява вземане на проби толкова често, колкото е необходимо;
  • няма противопоказания.

Как се извършва серологичен тест?

Вземането на кръв се извършва от кубиталната вена. Важен момент- кръвта се взема не със спринцовка, а гравитачно - във вената се вкарва игла без спринцовка и в епруветка се събират до пет мл кръв. Процедурата се провежда сутрин.

В зависимост от реакциите, които са в основата на изследването, има няколко вида процедури:

  1. реакция на неутрализация. Въз основа на способността на имунните серумни антитела да реагират като неутрализиращ агент на микроорганизми или токсини, предотвратявайки ги отрицателно въздействиевърху тялото;
  2. реакция на аглутинация. Може да бъде пряко или косвено. В първия случай говорим за изследване на кръвен серум за наличие на антитела (убитите микроби се хвърлят в материала и реакцията се оценява - ако има утайка под формата на люспи, реакцията е положителна) , индиректна реакциявъз основа на въвеждането на еритроцити с адсорбирани върху тях антигени в материала (назъбената утайка показва положителна реакция);
  3. реакция на утаяване. Разтворът на антигена се наслоява върху имунния серум (действа като течна среда). Използва се разтворим антиген. Ако комплексът антиген-антитяло се утаи, реакцията се счита за положителна;
  4. реакция на комплемента. Обхват - откриване на инфекциозни заболявания. Активира се комплементът и се изследват реакциите;
  5. реакция с маркирани антигени и антитела. Тя се основава на факта, че тъканните антигени или микроби, обработени по специален начин, започват да излъчват светлина под въздействието на UV лъчи. Методът намира широко приложение не само в диагностиката на антигени, но и за определяне на хормони, ензими и лекарства.

Необходимо е да се подготвите за изследването: в рамките на четири дни пациентът трябва да откаже да приема сърдечни лекарства, също трябва да изключи алкохола във всяко от неговите прояви, пикантни и мазни храни, сладкиши, да ограничи физическите усилия и да избягва стреса.

Ако не спазвате тези правила, рискът от фалшив положителен резултат се увеличава. Преди да предпише втори тест, лекарят трябва да разбере какво е правил пациентът в деня преди процедурата и да даде препоръки относно правилна подготовкакъм анкетата.

Серологичен анализ: препис

Серологичен кръвен тест - анализ, който ви позволява да определите / потвърдите вида на инфекциозния агент, помага на специалиста да постави диагноза. Това е незаменима помощ, ако лекарят не може да намери лекарствена терапиятъй като причинителите различни заболяванияразлична чувствителност към действието на специфични лекарства и антибиотици.

След като приключи процедурата по събиране на материала, лаборантите преминават към следващия етап - дешифрират индикаторите. Така че, ако в кръвта на пациента не се открият антитела, може да се заключи, че в тялото няма инфекции - резултатът от анализа в този случай е положителен.

Но това състояние на нещата е по-скоро изключение от правилото: ако има симптоми на заболяването, серологичните изследвания разкриват и доказват наличието на сериозна патология в тялото.

Първо, чрез анализ се откриват патогени в тялото, след което се оценява количеството на антителата, въз основа на което се прави заключение за това колко сериозно е развита инфекцията.

Серологично изследване за хепатит, ХИВ, сифилис: характеристики

Сифилис . При изследване за сифилис специалистите търсят протеини, които са отговорни за навлизането човешкото тялопричинителят на инфекцията - говорим за трепонема бледа. В този случай кръвният серум действа като биологичен материал.

. Вирусен хепатит- сериозни инфекциозни заболявания, опасността от които се крие във факта, че те са достатъчно за дълго времеможе да живее в тялото, без да се проявява по никакъв начин. Възможно е заболяването да се идентифицира в ранна фаза, когато е по-лечимо, чрез анализ за маркери - маркерите се появяват в кръвта след боледуването или поставянето на ваксината.

Трябва да се разберече идентифицирането на патогена е възможно само 1,5-2 месеца след заразяването. Ако анализът е направен от бременна жена, е възможен фалшив положителен резултат.

Препоръчваме да разгледате медицинския сайт https://tabletix.ru/. В сайта ще намерите полезна информация, медицински становища.
Ако наблюдавате един или повече от изброените по-долу симптоми, трябва да помислите за серологичен тест:

  • повръщане;
  • лош апетит или липса на такъв;
  • безпричинна импотентност на тялото, преумора;
  • жълтеникав тен;
  • обезцветяване на изпражненията и урината.

ХИВ. Ако е показал положителен резултат, това не означава, че пациентът е заразен със СПИН. Ако инфекцията е настъпила наскоро (преди не повече от два месеца), наличието на антитела не позволява да се определи фактът на развитие на заболяването. Предстои повторно изследване.

Серологичен кръвен тест- най-важният изследователски метод, чиято основна цел е бързото откриване на вируси, инфекции, микроби в тялото.

Този уникален лабораторен „инструмент“ ви позволява да идентифицирате всяко заболяване, което е следствие от потискане на имунната система, така че не бъдете мързеливи, а редовно правете анализ, за ​​да можете да идентифицирате болестта навреме и бързо да се отървете от нея.

8 057

Серологичният диагностичен метод включва използването на 2 области на изследване: серодиагностика (откриване на специфични антитела в кръвния серум на изследваното лице) и сероидидентификация (определяне на антигенните свойства на изолирания патоген, за да се установи неговия тип и тип).

При серодиагностика се използват аглутинация, преципитация, лизис, RSK, реакции с използване на маркирани антигени или антитела. Компонентите на тези реакции са: кръвен серум на изследваните пациенти и стандартни антигенни препарати. Целта на изследването е да се определят титрите на антитела срещу патогени на инфекциозни заболявания в изследваните серуми.

Откриването на високи титри на специфични антитела, особено ако достигнат нивото на така наречените "диагностични" титри, потвърждава предложената диагноза. Голямо значение се придава на изследването на сдвоени серуми, когато серуми, взети в самото начало на заболяването (3-4-ти ден) и серуми, получени на 7-10-ия ден от заболяването, се титруват едновременно. Диагностична стойност има 4-кратно увеличение на титрите на антителата.

При сероидидентификация реакцията на аглутинация върху стъкло се използва по-често от други. Компоненти на реакцията: отгледана чиста култура на патогена (антиген) и стандартни диагностични заешки имунни серуми (антитела).

Предимството на серологичния метод- простота, достъпност, висока чувствителност, конкретност, бързина.

недостатъци:необходимостта от скъпи стандартни лекарстваи хардуер.

Алергологичен метод

Този метод включва откриване на сенсибилизация на тялото към определен инфекциозен агент, което има голяма диагностична стойност. Известно е, че протичането на някои инфекциозни заболявания е придружено от образуването на свръхчувствителност от забавен тип. В тази връзка интрадермалното приложение на малки дози от алергена на такива пациенти предизвиква съответна реакция от страна на тялото, причинена от многократна среща с алергена. Реакцията протича по забавен тип и след 48-72 часа се появява зачервяване, подуване и понякога инфилтрат на мястото на инжектиране на алергена ( положителна реакция). Ако тялото не е сенсибилизирано, интрадермалното приложение няма да предизвика реакция от страна на тялото (отрицателна реакция). Промишлеността произвежда специални препарати за кожно-алергични тестове: туберкулин, дизентерия, бруцелин, туларин и др.

Алергологичният метод има особено голямо значениев случаите, когато идентифицирането на причинителя на инфекциозно заболяване е трудно или невъзможно (например при проказа) или когато това отнема много време (например при бруцелоза). Туберкулиновият тест се използва на практика не само с диагностична цел, но и за определяне на времето за реваксинация на деца с BCG ваксина, както и за изследване на колективния противотуберкулозен имунитет.

Предимства на алергологичния метод - неговата простота, надеждност, експресивност.

недостатък - ограничена употреба, тъй като не всички инфекциозни заболявания формират свръхчувствителност от забавен тип.

СЕРОЛОГИЧНИ РЕАКЦИИ В ДИАГНОСТИКАТА

ИНФЕКЦИОЗНИ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Понастоящем имунологични методиИзследванията се използват широко за лабораторна диагностика на инфекциозни и неинфекциозни заболявания.

Реакциите на взаимодействие между антигени и антитела се наричат ​​серологични (серум - серум, логос - преподаване).

Същността на всички серологични реакции е специфичната комбинация от антигени и съответните им антитела за образуване на комплекс. Серологична реакция е възможна, ако има имунологично съответствие (хомология) - основните компоненти - антигени и антитела. Имунологичната специфичност се основава на структурната комплементарност на антигена и антитялото.

Процесът на взаимодействие между антигени и антитела протича в две фази - специфична и неспецифична. Първата фаза се развива бързо. Състои се от специфична връзка на активния център на антитялото с детерминантните групи на съответния (хомоложен) антиген. Следващата фаза се развива по-бавно, неспецифична - това е външно проявлениереакции антиген-антитяло (флокулация, помътняване на средата и др.)

Серологичните тестове се използват за две цели:

1) за откриване на антитела в тестовия серум с помощта на известни антигени (серодиагностика);

2) за установяване на неизвестен антиген с помощта на известни серуми (сероидидентификация).

Определяне на неизвестен антиген при микробиологични изследваниясе провежда с цел установяване на генеричния, видовия, вида на патогените, изолирани от субекта. В такива случаи, от двата основни компонента на реакцията (антитяло, антиген), антигенът е неизвестен, реакцията трябва да се проведе с известни антитела. В този случай антигенът е чиста култура от микроорганизми, изолирани от изследвания материал. Имунните диагностични серуми се използват като известни антитела. Последните се получават от кръвта на животни (най-често зайци), предварително имунизирани със съответните бактериални антигени. Имунните серуми трябва да съдържат високо нивоспецифични антитела.

В допълнение, серологичните тестове могат да се използват за определяне на различни небактериални антигени: за установяване на кръвни групи, тъканни антигени, тумори, за избор на двойки донор-реципиент при трансплантация на органи и тъкани и др.

Серологичните тестове също могат да се използват за откриване на антитела в кръвния серум. В такива случаи е необходим известен антиген (диагностикум). Като антигени могат да се използват суспензии от живи или убити микроби, екстракти или изолирани химични фракции от тях.

Многобройни серологични тестове, използвани в момента в здравната практика, се различават по феномена, който разкрива връзката между антиген и антитяло. Видимата проява на реакцията ще бъде различна в зависимост от това коя техника се използва, в коя физическо състояниеизползва се антиген или имунен серум, независимо дали в реакцията участва комплемент. Например, ако се използва корпускуларен антиген, се получава явлението аглутинация - слепване на частици (реакция на аглутинация). Тъй като частичните антигени са съставени от относително големи частици, се образува видима флокулентна утайка. Ако в реакцията се използва разтворим антиген, се наблюдава финозърнеста утайка - преципитат (реакция на утаяване). Ако в реакцията на взаимодействие между бактериални антигени и имунен серум се въведе и комплемент, възниква бактериолиза (разтваряне на бактериални антигени) или лизис на еритроцити (когато се използват като антиген). Използването на имунни серуми, маркирани с флуорохроми, ензими или радиоизотопи в серологични реакции, позволява да се установи специфичното свързване на антигени с антитела според съответното явление (блясък, промяна на цвета или активност на радиоизотопния етикет).

Критерии като специфичност и чувствителност се използват за оценка на серологичните реакции. Специфичността е способността на антигените да реагират само с хомоложни антитела. Чувствителност - способност за специфично взаимодействие с минимални количества антигени и антитела.

Реакция на аглутинация

Реакцията на аглутинация (RA) е специфично взаимодействие на антигени с антитела, изразяващо се в адхезия на антигени под въздействието на серумни антитела и тяхното утаяване в присъствието на електролит. Това беше първата от предложените серологични реакции.

Характеристика на реакцията на аглутинация е, че клетки или други корпускулярни частици се използват като антигени в нейната формулировка. Реакцията се основава на способността на корпускулярните антигени да се свързват специфично с хомоложни антитела на имунните серуми с образуването на утайка под формата на зърна, люспи, бучки. Реакцията протича само в присъствието на електролити. Антигените, използвани в реакцията, се наричат ​​аглутиногени, антителата се наричат ​​аглутинини, а получената утайка се нарича аглутинат.

Като антиген в реакцията на аглутинация може да се използва суспензия от живи култури в изотоничен разтвор на натриев хлорид или микроби, убити чрез формалин, алкохол или нагряване, както и еритроцити, левкоцити или други клетки.

Източникът на антитела е известният аглутиниращ серум, получен чрез имунизиране на животни с подходящи антигени, или серумът на пациента, който се изследва.

Има различни начини за настройка на реакцията на аглутинация. От тях най-често използваните са: ориентировъчна реакция върху стъкло, разширена аглутинация в епруветки, реакции на хемаглутинация и индиректна хемаглутинация(RNGA).


Подобна информация.


Дял: