Metodi diagnostici. Test sierologici nella diagnosi delle malattie infettive Test sierologici utilizzati per diagnosticare le infezioni virali
reazioni immunitarie utilizzato in studi diagnostici e immunologici su persone malate e sane. A tale scopo, applicare metodi sierologici , cioè metodi per studiare anticorpi e antigeni utilizzando reazioni antigene-anticorpo determinate nel siero del sangue e in altri fluidi, nonché nei tessuti corporei.
Rilevazione nel siero del sangue gli anticorpi del paziente contro gli antigeni dell'agente patogeno consentono di effettuare una diagnosi della malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni microbici, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando si isola un microbo dal paziente, l'agente patogeno viene identificato studiandone le proprietà antigeniche utilizzando sieri immunodiagnostici, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questo cosiddetto identificazione sierologica microrganismi.
Ampiamente usato in microbiologia e immunologia agglutinazione, precipitazione, reazioni di neutralizzazione, reazioni che coinvolgono il complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (metodo radioimmunologico, immunoenzimatico, immunofluorescenza). Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione dell'interazione dell'antigene con l'anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Caratteristiche dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori. Reazione in vitro tra antigene e anticorpo consiste in una fase specifica e non specifica. IN fase specifica c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. Poi arriva fase non specifica - più lento, che si manifesta con visibile fenomeni fisici, ad esempio, la formazione di scaglie (fenomeno di agglutinazione) o di precipitato sotto forma di torbidità. Questa fase richiede determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale del mezzo).
Il legame di un determinante dell'antigene (epitopo) al sito attivo di un frammento Fab di anticorpo è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e alle interazioni idrofobiche. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
Immunodeficienze, sia primarie che soprattutto secondarie sono diffusi tra la gente. Sono la causa della manifestazione di molte malattie e condizioni patologiche, pertanto richiedono prevenzione e trattamento con farmaci immunotropi.
34. Vaccini inattivati (corpuscolari). Ricevuta. Applicazione. Vantaggi. Screpolatura.
Vaccini inattivati (uccisi, particolati o molecolari).- preparati, come principio attivo, compresi quelli uccisi per via chimica o in modo fisico colture di virus o batteri patogeni (cellulari, virioni) o complessi di antigeni estratti da microbi patogeni contenenti antigeni protettivi (vaccini subcellulari, subvirionici).
Per isolare i complessi antigenici (glicoproteine, LPS, proteine) da batteri e virus, vengono utilizzati acido tricloroacetico, fenolo, enzimi e precipitazione isoelettrica.
Sono ottenuti coltivando batteri e virus patogeni su mezzi nutritivi artificiali, complessi antigenici inattivati, isolati, purificati, costruiti sotto forma di una preparazione liquida o liofila.
Il vantaggio di questo tipo di vaccino è la relativa facilità di ottenimento (non è richiesto uno studio a lungo termine e l'isolamento dei ceppi). Gli svantaggi includono la bassa immunogenicità, la necessità di un triplo uso e l'elevata reattogenicità dei vaccini formalizzati. Inoltre, rispetto ai vaccini vivi, l'immunità che suscitano è di breve durata.
Attualmente vengono utilizzati i seguenti vaccini uccisi: tifo, arricchito con l'antigene Vi; vaccino contro il colera, vaccino contro la pertosse.
119. Test sierologici utilizzati per diagnosticare le infezioni virali.
Rilevazione nel siero del sangue gli anticorpi del paziente contro gli antigeni dell'agente patogeno consentono di effettuare una diagnosi della malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni microbici, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando si isola un microbo dal paziente, l'agente patogeno viene identificato studiandone le proprietà antigeniche utilizzando sieri immunodiagnostici, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questo cosiddetto identificazione sierologica microrganismi.
Ampiamente usato in microbiologia e immunologia agglutinazione, precipitazione, reazioni di neutralizzazione, reazioni che coinvolgono il complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (metodo radioimmunologico, immunoenzimatico, immunofluorescenza). Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione dell'interazione dell'antigene con l'anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Caratteristiche dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori. Reazione in vitro tra antigene e anticorpo consiste in una fase specifica e non specifica. IN fase specifica c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. Poi arriva fase non specifica - più lento, che si manifesta con fenomeni fisici visibili, ad esempio la formazione di scaglie (fenomeno di agglutinazione) o precipitato sotto forma di torbidità. Questa fase richiede determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale del mezzo).
Il legame di un determinante dell'antigene (epitopo) al sito attivo di un frammento Fab di anticorpo è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e alle interazioni idrofobiche. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
Alla domanda sulla diagnostica espressa:
1. Una coltura isolata nella sua forma pura può essere diagnosticata. 2. In laboratori appositamente attrezzati (devono avere il permesso) 3. Rispetto di regole rigorose come: stanza isolata, tute protettive speciali richieste, sanificazione completa obbligatoria dei locali dopo aver lavorato con l'agente patogeno, sanificazione dei ricercatori dopo il lavoro. Metodi di diagnostica rapida. 1. Batteriologia: mezzi nutritivi politropici combinati per uno studio rapido di morph, tintori, biochimica. proprietà. Uso del nastro indicatore enzimatico, metodo elettrofisico, metodo dei dischi di carta impregnati di varie sostanze (glucaso, lattosio, ecc.) 2. Diagnostica fagica. 3. Sierodiagnosi - Metodo di Mancini, reazione di precipitazione nel gel secondo Ascoli, RA, RPGA. 4. Batterioscopia - RIF diretta e indiretta. Metodi diagnostici espressi per: Colera - MZ Ermolyeva, distretto di immobilizzazione con siero diagnostico colera, RIF. Tularemia - RA su vetro, RPHA Chume - tipizzazione dei fagi, metodo dei dischi di carta con carboidrati, RPHA. Antrace - Metodo Ascoli, RIF, RPGA. La natura della crescita: ci sono tre diffusi (anaerobi facoltativi), vicino al fondo (anaerobi obbligati) e superficie (aerobi obbligati).
Isolamento di coltura pura di batteri anaerobi
Nella pratica di laboratorio, è spesso necessario lavorare con microrganismi anaerobici. Sono più esigenti nei confronti dei mezzi nutritivi rispetto agli aerobi, spesso necessitano di speciali integratori per la crescita, richiedono la cessazione dell'apporto di ossigeno durante la loro coltivazione, il loro periodo di crescita è più lungo. Pertanto, lavorare con loro è più complicato e richiede una notevole attenzione da parte di batteriologi e assistenti di laboratorio.
È importante proteggere il materiale che contiene agenti patogeni anaerobici dagli effetti tossici dell'ossigeno atmosferico. Pertanto, si consiglia di prelevare il materiale dai focolai di infezione purulenta durante la loro puntura con una siringa, il tempo che intercorre tra il prelievo del materiale e la semina mezzo nutritivo dovrebbe essere il più breve possibile.
Poiché vengono utilizzati speciali mezzi nutritivi per la coltivazione di batteri anaerobici, che non devono contenere ossigeno e avere un basso potenziale redox (-20 -150 mV), nella loro composizione vengono introdotti indicatori: resazurina, blu di metilene e simili, che reagiscono a un cambiamento in questo potenziale. Con la sua crescita, le forme incolori degli indicatori vengono riprese e cambiano colore: la resazurina colora il mezzo colore rosa e blu di metilene - in blu. Tali cambiamenti indicano l'impossibilità di utilizzare i terreni per la coltivazione di microbi anaerobici.
Aiuta a ridurre il potenziale redox introducendo nel terreno almeno lo 0,05% di agar, che, aumentandone la viscosità, aiuta a ridurre l'apporto di ossigeno. Questo, a sua volta, si ottiene anche utilizzando terreni di coltura freschi (non oltre due ore dopo la produzione) e ridotti.
Va notato che a causa delle peculiarità del tipo di metabolismo fermentativo dei batteri anaerobici, richiedono terreni più ricchi di nutrienti e vitamine. I più utilizzati sono gli infusi cardio-cerebrali e di fegato, gli estratti di soia e di lievito, il digerito idrolitico di caseina, il peptone, il triptone. È obbligatorio aggiungere fattori di crescita come tween-80, emina, menadione, sangue intero o emolizzato.
L'isolamento di una coltura pura di microrganismi aerobici consiste in una serie di passaggi. Il primo giorno (fase 1 dello studio), il materiale patologico viene prelevato in un contenitore sterile (provetta, flacone, flaconcino). Viene studiato per aspetto, consistenza, colore, odore e altri segni, viene preparato uno striscio, dipinto ed esaminato al microscopio. In alcuni casi (gonorrea acuta, peste), in questa fase è possibile effettuare una diagnosi preventiva e, inoltre, selezionare il supporto su cui verrà seminato il materiale. L'ho preso con un'ansa batteriologica (usata più spesso), con una spatola seguendo il metodo Drygalsky, con un batuffolo di garza di cotone. Le tazze vengono chiuse, capovolte, firmate con una matita speciale e poste in un termostato alla temperatura ottimale (37°C) per 18-48 anni. Lo scopo della fase è quello di ottenere colonie isolate di microrganismi. Tuttavia, a volte per accumulare il materiale, viene seminato su terreni fertilizzanti liquidi.
Gli strisci vengono preparati da colonie sospette, colorate con il metodo Gram per studiare le proprietà morfologiche e tintoriali dei patogeni, e i batteri mobili vengono esaminati in una goccia "appesa" o "schiacciata". Questi segni hanno un valore diagnostico estremamente elevato nella caratterizzazione di alcuni tipi di microrganismi. I resti delle colonie studiate vengono accuratamente rimossi dalla superficie del terreno senza toccare gli altri e inoculati su uno slant agar o su settori di una piastra Petri con un terreno nutritivo per ottenere una coltura pura. Le provette oi piatti con le colture vengono posti in un termostato alla temperatura ottimale per 18-24 ore.
Sui mezzi nutritivi liquidi, i batteri possono anche crescere in modo diverso, sebbene le caratteristiche delle manifestazioni di crescita siano più scarse rispetto a quelle solide.
I batteri sono in grado di provocare una torbidità diffusa del terreno, mentre il suo colore potrebbe non cambiare o acquisire il colore del pigmento. Questo modello di crescita è più spesso osservato nella maggior parte dei microrganismi anaerobi facoltativi.
A volte si forma un precipitato sul fondo del tubo. Può essere friabile, omogeneo, viscoso, viscido, ecc. Il mezzo sopra di esso può rimanere trasparente o diventare torbido. Se i microbi non formano un pigmento, il precipitato ha un colore livido o giallastro. Di norma, i batteri anaerobici crescono in un rango simile.
La crescita delle pareti si manifesta con la formazione di fiocchi, granelli attaccati alle pareti interne della provetta. Il mezzo rimane trasparente.
I batteri aerobici tendono a crescere sulla superficie. Spesso si forma una delicata pellicola incolore o bluastra sotto forma di un rivestimento appena percettibile sulla superficie, che scompare quando il mezzo viene scosso o agitato. Il film può essere umido, spesso, avere una consistenza a maglia, viscida e aderire al cappio, allungandolo. Tuttavia, esiste anche un film denso, secco e fragile, il cui colore dipende dal pigmento prodotto dai microrganismi.
Se necessario, viene effettuato uno striscio, colorato, esaminato al microscopio e i microrganismi vengono seminati con un'ansa sulla superficie di un denso mezzo nutritivo per ottenere colonie isolate.
Il terzo giorno (fase 3 dello studio), viene studiata la natura della crescita di una coltura pura di microrganismi e viene effettuata la sua identificazione.
Innanzitutto, si presta attenzione alle caratteristiche della crescita dei microrganismi sul terreno e si esegue uno striscio, colorandolo con il metodo Gram, al fine di verificare la purezza della coltura. Se si osservano al microscopio batteri dello stesso tipo di morfologia, dimensione e proprietà tintorie (capacità di tingere), si conclude che la coltura è pura. In alcuni casi, già dall'aspetto e dalle caratteristiche della loro crescita, si può trarre una conclusione sul tipo di agenti patogeni isolati. La determinazione delle specie di batteri in base alle loro caratteristiche morfologiche è chiamata identificazione morfologica. La determinazione del tipo di agenti patogeni in base alle loro caratteristiche culturali è chiamata identificazione culturale.
Tuttavia, questi studi non sono sufficienti per trarre una conclusione definitiva sul tipo di microbi isolati. Pertanto, studiano le proprietà biochimiche dei batteri. Sono abbastanza vari.
Molto spesso vengono studiate le proprietà saccarolitiche, proteolitiche, peptolitiche, emolitiche, la formazione di enzimi decarbossilasi, ossidasi, catalasi, plasmacoagulasi, DNasi, fibrinolisina, la riduzione dei nitrati a nitriti e simili. Per questo, ci sono speciali terreni nutritivi inoculati con microrganismi (serie Hiss variegata, MPB, siero di latte cagliato, latte, ecc.).
La determinazione del tipo di agente patogeno in base alle sue proprietà biochimiche è chiamata identificazione biochimica.
METODI DI COLTIVAZIONE E ISOLAMENTO DELLA COLTURA DI BATTERI PURI Per una coltivazione di successo, oltre ai terreni correttamente selezionati e all'inoculazione eseguita correttamente, sono necessarie condizioni ottimali: temperatura, umidità, aerazione (fornitura d'aria). La coltivazione di anaerobi è più difficile di quella di aerobi, vengono utilizzati vari metodi per rimuovere l'aria dal mezzo nutritivo. L'isolamento di alcuni tipi di batteri (coltura pura) dal materiale di prova, che di solito contiene una miscela di vari microrganismi, è una delle fasi di qualsiasi studio batteriologico. Una coltura microbica pura è ottenuta da una colonia microbica isolata. Quando si isola una coltura pura dal sangue (emocoltura), si tratta preliminarmente di "crescita" in un mezzo liquido: 10-15 ml di sangue sterile vengono inoculati in 100-150 ml di un mezzo liquido. Il rapporto tra sangue seminato e mezzo nutritivo 1:10 non è casuale: è così che si ottiene la diluizione del sangue (il sangue non diluito ha un effetto dannoso sui microrganismi). Fasi di isolamento di una coltura pura di batteri Fase I (materiale nativo) Microscopia (idea approssimativa della microflora). Semina su terreno nutritivo denso (ottenimento di colonie). Stadio II (colonie isolate) Studio delle colonie (proprietà colturali dei batteri). Studio microscopico dei microbi in uno striscio colorato (proprietà morfologiche dei batteri). Inoculo su agar nutriente inclinato per isolare una coltura pura. Fase III (coltura pura) Determinazione delle proprietà culturali, morfologiche, biochimiche e di altro tipo per l'identificazione di una coltura batterica IDENTIFICAZIONE DEI BATTERI L'identificazione delle colture batteriche isolate viene effettuata studiando la morfologia dei batteri, le loro caratteristiche culturali, biochimiche e di altro tipo inerenti a ciascuna specie.
Antigeni- sostanze geneticamente aliene che, se introdotte nel corpo di un animale o di un essere umano, provocano una specifica risposta immunitaria - la sintesi di anticorpi, la formazione di linfociti T sensibilizzati, memoria immunologica o tolleranza. Le sostanze estranee sono strutture chimiche che non sono presenti nel corpo. Sono estranei al corpo umano virus, microrganismi, nonché cellule, tessuti, organi di animali e altre persone. Gli antigeni hanno diversi recettori per legarsi agli anticorpi e sono in grado di reagire con essi sia nel corpo animale o umano (in vivo) che al di fuori del corpo - in vitro (in vitro).
Anticorpi- proteine ad alto peso molecolare della frazione globulinica del siero del sangue. Gli anticorpi sono sintetizzati sotto l'influenza di un antigene e sono in grado di reagire specificamente (combinarsi) con l'antigene corrispondente. Tutti gli anticorpi hanno una caratteristica struttura immunoglobulinica; differiscono in immunologico, biologico e Proprietà fisiche; e sono divisi in 5 classi: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE.
Reazioni sierologiche
Nella pratica di laboratorio, usano reazioni sierologiche- reazioni di laboratorio tra antigeni e anticorpi, che portano a cambiamenti registrati nel sistema in esame. Queste reazioni sono chiamate sierologiche, poiché il siero (siero) contenente anticorpi viene utilizzato per la loro produzione.
Test sierologici eseguiti per rilevare anticorpi specifici e antigene patogeno nelle malattie infettive - più di metodi disponibili diagnosi di laboratorio rispetto alla rilevazione batteriologica dell'agente patogeno. In alcuni casi, gli studi sierologici rimangono l'unico metodo diagnostico malattie infettive.
Alcuni metodi per la rilevazione degli anticorpi utilizzati nella pratica di laboratorio
Tutte le reazioni sierologiche si basano sull'interazione di un antigene e di un anticorpo con la formazione di immunocomplessi che possono essere rilevati nei test in vitro (cioè "in vitro" - al di fuori di un organismo vivente). Le reazioni antigene-anticorpo nel sistema in vitro possono essere accompagnate da diversi fenomeni: agglutinazione, precipitazione, lisi e altri. Manifestazioni esterne Le reazioni dipendono dalle proprietà fisico-chimiche dell'antigene (dimensioni delle particelle, stato fisico), classe e tipo di anticorpi, nonché condizioni sperimentali (coerenza del mezzo, concentrazione salina, pH, temperatura).
1. Reazione di legame del complemento
Complementoè un sistema di proteine del plasma sanguigno, che comprende 9 componenti indicati con la lettera C (C1, C2, C3, ... C9), il fattore B, il fattore D e un numero di proteine regolatrici. Alcuni di questi componenti sono costituiti da 2-3 proteine, ad esempio C1 è un complesso di tre proteine. Queste proteine circolano nel flusso sanguigno e sono presenti sulle membrane cellulari. Il complemento è sistema essenziale immunità sia innata che acquisita. Questo sistema è progettato per proteggere il corpo dall'azione di agenti estranei ed è coinvolto nell'attuazione della risposta immunitaria del corpo. Il complemento fu scoperto alla fine del XIX secolo dallo scienziato belga J. Borde.
Reazione di fissazione del complemento (CFR)- un test sierologico utilizzato per quantificare gli anticorpi e gli antigeni che fissano il complemento. Descritto per la prima volta da Bordet e Zhangu (Bordet - Gengou) nel 1901. RSK si basa sul fatto che il complesso antigene-anticorpo è in grado di assorbire il complemento che viene aggiunto alla miscela di reazione. Quando gli antigeni e gli anticorpi corrispondono tra loro, formano un complesso immunitario, a cui è attaccato il complemento. Il complesso immunitario specifico adsorbe il complemento aggiunto al sistema, cioè legame del complemento con il complesso antigene-anticorpo. Più anticorpi, più complemento è fissato. Se il complesso antigene-anticorpo non si forma, il complemento rimane libero.
La complessità di CSC è che la reazione di formazione del complesso "antigene - anticorpo - complemento" è invisibile. Un sistema emolitico indicatore aggiuntivo viene utilizzato per identificare i componenti della reazione. Con l'aiuto della reazione di emolisi, quantificazione residuo del complemento dopo la fine della reazione dell'antigene con l'antisiero.
Il test di fissazione del complemento (RCT) viene utilizzato per rilevare gli anticorpi contro un antigene specifico o determinare il tipo di antigene mediante un anticorpo noto. Questa complessa reazione sierologica coinvolge due sistemi e il complemento. Il primo sistema - batteriologico (principale), consiste in un antigene e un anticorpo. Il secondo sistema è emolitico (indicatore). Comprende gli eritrociti di pecora (antigene) e il corrispondente siero emolitico (anticorpo).
RSK viene messo in due fasi: prima, l'antigene viene combinato con il siero del sangue del test, in cui vengono cercati gli anticorpi, e quindi viene aggiunto il complemento. Se l'antigene e l'anticorpo corrispondono, si forma un complesso immunitario che lega il complemento. In assenza di anticorpi nel siero, il complesso immunitario non si forma e il complemento rimane libero. Poiché il processo di adsorbimento del complemento da parte del complesso è visivamente invisibile, viene aggiunto un sistema eme per rivelare questo processo.
Grazie alla sua elevata sensibilità, la reazione di fissazione del complemento (CFR) viene utilizzata per entrambi diagnosi sierologica infezioni batteriche e virali, condizioni allergiche e per l'identificazione di antigeni (coltura batterica isolata).
Reazione di precipitazione (RP)(dal latino praecipitatio - precipitazione, caduta) si basa sulla precipitazione di uno specifico complesso immunitario costituito da un antigene solubile e da un anticorpo specifico in presenza di un elettrolita. Come risultato della reazione, si forma un anello torbido o un precipitato sciolto: un precipitato. Si verifica una reazione di precipitazione tra un antigene idrosolubile e un anticorpo, dando luogo a grandi complessi che precipitano
3. Reazione di flocculazione
Reazione di flocculazione (secondo Ramon)(dal latino floccus - fiocchi di lana, flocculi - brandelli, fiocchi; flocculazione - la formazione di aggregati flocculanti sciolti (flocculi) da piccole particelle della fase dispersa) - la comparsa di opalescenza o massa flocculante (immunoprecipitazione) in una provetta durante il reazione di tossina - antitossina o anatossina - antitossina. Viene utilizzato per determinare l'attività del siero antitossico o del tossoide.
La reazione di flocculazione si basa sulla rilevazione della flocculazione "iniziale" - torbidità durante la formazione di un complesso di esotossina (anatossina) + antitossina nei rapporti quantitativi ottimali degli ingredienti.
4. Reazione di agglutinazione
Agglutinazione(dal latino agglutinatio - legame) è la reazione dell'interazione di un antigene con un anticorpo specifico, che si manifesta sotto forma di legame. In questo caso, gli antigeni sotto forma di particelle-corpuscoli (cellule microbiche, eritrociti, ecc.) Sono incollati insieme da anticorpi e precipitati (agglutinati) sotto forma di scaglie. Gli agglutinati sono generalmente visibili ad occhio nudo. Perché avvenga la reazione è necessaria la presenza di elettroliti (ad esempio soluzione isotonica di cloruro di sodio) che accelerino il processo di agglutinazione.
Utilizzando il test di agglutinazione (RA), reactio agglutinationis (test di agglutinazione inglese), vengono rilevati anticorpi o antigeni corpuscolari. A seconda del tipo di immunodiagnostico utilizzato, si hanno reazioni di agglutinazione microbica, emoagglutinazione, agglutinazione al lattice, coagglutinazione, ecc.
5. Nome degli anticorpi coinvolti nelle reazioni di precipitazione
Gli anticorpi coinvolti nelle reazioni sedimentarie hanno ricevuto il nome tradizionale per la loro interazione con l'antigene:
agglutinine - causano agglutinazione dell'antigene corpuscolare - agglutinogeno e precipitazione del complesso antigene-anticorpo (agglutinato);
precipitine - formano un precipitato con un antigene solubile - precipitinogeno.
Le batteriolisine (che causano la lisi dei batteri) e le emolisine (che causano la lisi dei globuli rossi) sono coinvolte nelle reazioni litiche.
Indice del soggetto "Metodi per il rilevamento dei virus. Metodi per la diagnosi delle micosi (malattie fungine). Metodi per il rilevamento dei protozoi.":Metodi sierologici per la diagnosi delle infezioni virali. Inibizione dell'emoagglutinazione. Inibizione dell'effetto citopatico da interferenza del virus. Immunofluorescenza diretta. Microscopia immunoelettronica.
Con la maggioranza infezione virale sviluppare reazioni immunitarie applicata ai diagnostica. Le risposte cellulari vengono solitamente valutate nei test di citotossicità dei linfociti contro agenti infettivi o cellule bersaglio da essi infettate, o la capacità dei linfociti di rispondere a vari antigeni e mitogeni. Nel lavoro dei laboratori pratici, la gravità delle reazioni cellulari è raramente determinata. I metodi per identificare gli AT antivirali sono diventati più diffusi.
RN è basato su soppressione dell'effetto citopatogeno dopo aver mescolato il virus con AT specifico. Il virus sconosciuto viene miscelato con antisieri commerciali noti e, dopo un'incubazione appropriata, introdotto nel monostrato cellulare. L'assenza di morte cellulare indica una discrepanza tra l'agente infettivo e gli anticorpi noti.
Inibizione dell'emoagglutinazione
RTGA viene utilizzato per identificare i virus in grado di agglutinare vari eritrociti. Per fare ciò, il terreno di coltura contenente il patogeno viene miscelato con un noto antisiero commerciale e introdotto nella coltura cellulare. Dopo l'incubazione, viene determinata la capacità della coltura di emoagglutinazione e, in sua assenza, viene fatta una conclusione sulla mancata corrispondenza del virus con l'antisiero.
Inibizione dell'effetto citopatico da interferenza del virus
La reazione di inibizione dell'effetto citopatico dovuta all'interferenza dei virus utilizzato per identificare un agente patogeno che interferisce con un noto virus citopatogeno in una coltura di cellule sensibili. Per fare ciò, un siero commerciale (ad esempio, al virus della rosolia se si sospetta) viene introdotto nel terreno di coltura contenente il virus in esame, incubato e infettato la seconda coltura; dopo 1-2 giorni viene introdotto un noto virus citopatogeno (ad esempio qualsiasi virus ECHO). In presenza di un effetto citopatogeno, si conclude che la prima coltura è stata infettata da un virus corrispondente all'AT applicato.
Immunofluorescenza diretta
Tra gli altri test, il più utilizzato reazione di immunofluorescenza diretta(il più veloce, più sensibile e riproducibile). Ad esempio, l'identificazione di CMV in base al suo effetto citopatogeno richiede almeno 2-3 settimane e, quando si utilizzano anticorpi monoclonali marcati, l'identificazione è possibile dopo 24 ore esaminare mediante microscopia a fluorescenza (consente di rilevare la presenza di fluorescenza di cellule infette) .
Microscopia immunoelettronica
Microscopia immunoelettronica(simile al metodo precedente) consente di identificare diversi tipi virus rilevati mediante microscopia elettronica (ad esempio vari tipi di herpesvirus), che non possono essere eseguiti in base alle caratteristiche morfologiche. Gli antisieri marcati vengono utilizzati al posto degli antisieri per l'identificazione. diversi modi AT, ma la complessità e l'alto costo del metodo ne limitano l'applicazione.