Test sierologici utilizzati per diagnosticare le infezioni virali. Metodo sierologico per la diagnosi delle infezioni virali Metodi sierologici per la diagnosi delle infezioni virali
Si basa sulla determinazione degli anticorpi antivirali nel sangue del paziente nelle reazioni sierologiche utilizzando specifici antigeni virali - diagnostici o sistemi di test speciali. Le reazioni sierologiche nelle infezioni virali sono poste in un mezzo liquido (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), in un gel (RPG, RRG, RVIEF) o su un supporto in fase solida (ad esempio, sulle pareti di un pozzetto di una piastra di polistirene con fissazione di uno dei componenti della risposta immunitaria - antigene o anticorpo). Sono noti metodi in fase solida come ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Spesso, a causa della presenza nel sangue della maggioranza persone sane anticorpi antivirali naturali, la diagnosi sierologica delle infezioni virali si basa sullo studio sieri accoppiati, prelevato all'inizio e al culmine della malattia o durante il periodo di convalescenza per determinare l'aumento del titolo anticorpale. Un aumento del titolo anticorpale di quattro volte o più è considerato significativo dal punto di vista diagnostico.
L'aumento della sensibilità dei metodi sierologici si ottiene mediante adsorbimento di antigeni o anticorpi su eritrociti (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), marcati con enzimi (ELISA), isotopi radioattivi (RIA, RPG) o fluorocromi (RIF), Il principio di lisi eritrocitaria viene utilizzato anche (come sistemi indicatori) durante l'interazione di antigeni e anticorpi in presenza di complemento (RSK, RRG).
Reazione di fissazione del complemento (CFR) sotto forma di fissazione del complemento al freddo (durante la notte a una temperatura di +4 0 C) è spesso utilizzato in virologia per la diagnosi retrospettiva di una serie di infezioni virali e per la determinazione di antigeni specifici del virus in materiali di pazienti .
Reazione di emolisi radiale (RRH) in gel di agarosio si basa sul fenomeno dell'emolisi degli eritrociti sensibilizzati da un antigene sotto l'influenza di anticorpi virus-specifici in presenza di complemento ed è utilizzato per la diagnosi sierologica delle infezioni da influenza, SARS, rosolia, parotite e togavirus.
Per avviare la reazione, 0,1 ml di antigene virale non diluito vengono aggiunti agli eritrociti di pecora (0,3 ml di una sospensione al 10%) e la miscela viene incubata per 10 minuti a temperatura ambiente. 0,3 ml di eritrociti sensibilizzati e 0,1 ml di complemento vengono aggiunti all'1,2% di agarosio ad una temperatura di 42 0 C, la miscela viene versata su vetrini o nei pozzetti di piastre di polistirene, i fori vengono ritagliati nel gel di agarosio congelato con un pugno e riempito con i sieri studiati e di controllo. Bicchieri o pannelli vengono chiusi con un coperchio e posti in una camera umida per 16-18 ore in un termostato. La contabilizzazione della reazione viene effettuata in base al diametro della zona di emolisi attorno ai fori riempiti di siero. Non c'è emolisi nel controllo.
Utilizzato per diagnosticare malattie virali seguenti metodi:
1) Viroscopico.
2) Microscopia immunoelettronica.
3) Virologico.
4) Sierologico.
5) Immunofluorescenza.
6) Biologico.
7) Uso di sonde di DNA (RNA).
8) Reazione a catena della polimerasi.
La riproduzione (riproduzione) dei virus nella coltura cellulare è giudicata dall'effetto citopatico (CPE), che può essere rilevato microscopicamente ed è caratterizzato cambiamenti morfologici cellule.
La natura del CPD dei virus viene utilizzata sia per il loro rilevamento (indicazione) che per l'identificazione provvisoria, ovvero per determinarne la specie.
Metodi di rilevamento dei virus:
1) Reazione di emoadsorbimento - basata sulla capacità della superficie delle cellule in cui si riproducono di adsorbire gli eritrociti - la reazione di emoadsorbimento. Per metterlo in una coltura di cellule infette da virus, viene aggiunta una sospensione di eritrociti e, dopo un certo tempo di contatto, le cellule vengono lavate con una soluzione isotonica di cloruro di sodio. Gli eritrociti aderenti rimangono sulla superficie delle cellule colpite dal virus.
2) Reazione di emoagglutinazione (RG). Viene utilizzato per rilevare i virus nel fluido di coltura della coltura cellulare o nel liquido corionallantoico o amniotico di un embrione di pollo.
I metodi sierologici possono essere utilizzati per rilevare sia gli anticorpi specifici che gli antigeni virali nel materiale di prova. Per questi scopi, possono essere utilizzate tutte le reazioni sierologiche conosciute:
1) Reazione di legame del complemento.
2) La reazione di emoagglutinazione passiva e sue varianti (PHAg, PHAt).
3) Reazione di inibizione dell'emoagglutinazione.
4) La reazione di emoagglutinazione dell'adesione immunitaria (il complesso antigene + anticorpo in presenza di complemento viene adsorbito sugli eritrociti).
5) Reazioni di precipitazione su gel.
6) Reazioni di neutralizzazione del virus.
7) Metodo radioimmune.
8) Metodi saggio immunoenzimatico.
Di questi metodi, i metodi di dosaggio immunoenzimatico, che si distinguono per l'elevata specificità e facilità d'uso, stanno diventando sempre più popolari.
7. Reazione di emoagglutinazione, suo meccanismo nei virus dell'influenza. Reazione di inibizione dell'emoagglutinazione, sua applicazione pratica.
Reazione di emoagglutinazione (RG). Viene utilizzato per rilevare i virus nel fluido di coltura della coltura cellulare o nel liquido corionallantoico o amniotico di un embrione di pollo.
8. Caratteristiche dell'immunità antivirale. Il ruolo della fagocitosi e dei fattori umorali nell'immunità. Interferoni, caratteristiche delle principali proprietà, classificazione. Caratteristiche dell'azione degli interferoni sui virus .
Tutti i sistemi immunitari sono coinvolti nella protezione del corpo dai virus, ma l'immunità antivirale ha caratteristiche specifiche significative. Sono determinati dal fatto che, prima di tutto, non sono i sistemi del complemento e dei macrofagi a reagire alla penetrazione del virus nell'organismo, ma i sistemi degli interferoni e delle cellule T-killer. Un'altra caratteristica della formazione dell'immunità è dovuta al fatto che i virus hanno un debole effetto antigenico sui linfociti B, e per la loro attivazione, proliferazione e differenziazione, la partecipazione di T-helper e, di conseguenza, la presentazione dell'antigene virale elaborato (frammenti peptidici) con la partecipazione di molecole MHC di classe II. Pertanto, il ruolo dei macrofagi e di altre cellule presentanti l'antigene non è tanto nella fagocitosi stessa, ma nell'elaborazione e nella presentazione dell'antigene.
Il sistema degli interferoni, che sopprime la riproduzione intracellulare dei virus, reagisce prima di tutto alla penetrazione del virus. Inoltre, gli inibitori a e b nel siero del sangue hanno un effetto antivirale. Alfa-inibitore - un substrato termostabile, fa parte delle a-globuline, impedisce l'adsorbimento dei virus sulla cellula, viene distrutto dalla neuraminidasi degli orto e paramixovirus. Beta-inibitore - mucopeptide termolabile, fa parte delle b-globuline, inibisce la moltiplicazione di orto e paramixovirus.
Tuttavia, gli interferoni e gli inibitori non erano sufficienti per proteggere dai virus, quindi la natura ha creato un altro meccanismo di difesa molto potente a livello corporeo contro i virus. È presentato principalmente Linfociti T-citotossici e altre cellule killer. Queste cellule riconoscono tutti gli antigeni estranei, compresi quelli virali, rappresentati da molecole MHC di classe I. Il principale significato biologico delle cellule T-killer risiede nel rilevamento e nella distruzione di qualsiasi cellula infettata da antigeni estranei.
L'interferone è una famiglia di glicoproteine sintetizzate dalle cellule sistema immunitario e tessuto connettivo. A seconda di quali cellule sintetizzano l'interferone, ne esistono tre tipi: ?, ? e?-interferoni.
L'interferone alfa è prodotto dai leucociti e si chiama leucocita; l'interferone beta è chiamato fibroblastico, poiché è sintetizzato dai fibroblasti - cellule del tessuto connettivo, e l'interferone gamma è chiamato immunitario, poiché è prodotto da linfociti T attivati, macrofagi, killer naturali, cioè cellule immunitarie.
La produzione di interferone aumenta notevolmente quando viene infettata da virus, oltre all'effetto antivirale, l'interferone ha una protezione antitumorale, poiché ritarda la proliferazione (riproduzione) delle cellule tumorali, nonché l'attività immunomodulatoria, stimolando la fagocitosi, i killer naturali, regolando la formazione di anticorpi dai linfociti B, attivando l'espressione del complesso maggiore di istocompatibilità.
Meccanismo di azione. L'interferone non agisce direttamente sul virus all'esterno della cellula, ma si lega a speciali recettori cellulari e influenza il processo di riproduzione del virus all'interno della cellula nella fase di sintesi proteica.
Virologia privata
1. Virus che causano infezioni respiratorie acute (ARI). Classificazione. caratteristiche generali ortomixovirus. La struttura del virione dell'influenza. Caratteristiche del suo genoma e implementazione delle informazioni in esso contenute. Replicazione dell'RNA del virione.
1. Virus - agenti causativi di infezioni respiratorie acute. classificazione.
Gli agenti causali di ARI sono i seguenti virus:
1. Virus influenzali A, B, C (Orthomyxoviridae)
2. Paramyxovirus (Paramyxoviridae) - questa famiglia comprende tre generi: paramyxovirus - virus della parainfluenza umana (HPV) di tipo 1, 2, 3, 4, malattia di Newcastle, parainfluenza aviaria e parotite; Pneumovirus - virus respiratorio sinciziale (virus RS); Il morbillivirus è il virus del morbillo.
3. Coronavirus respiratori (Coronaviridae).
4. Reovirus respiratori (Reoviridae).
5. Picornavirus (Picornaviridae).
Virus dell'influenza A
Il virione ha una forma sferica e un diametro di 80-120 nm. Il genoma del virus è rappresentato da un RNA negativo frammentato a singolo filamento (8 frammenti) con un PM totale di 5 MD. Il tipo di simmetria del nucleocapside è elicoidale. Virion Ha un supercapside (membrana) contenente due glicoproteine: emoagglutinina e neuraminidasi, che sporgono sopra la membrana sotto forma di varie punte.
I virus sono gli agenti causali delle malattie respiratorie acute. Caratteristiche della manifestazione di malattie causate da virus influenzali, parainfluenzali, rinovirus, virus respiratorio sinciziale e adenovirus. Metodi di laboratorio per la loro diagnosi.
Il virione ha una forma sferica e un diametro di 80-120 nm. Il genoma del virus è rappresentato da un RNA negativo frammentato a singolo filamento (8 frammenti) con un PM totale di 5 MD. Il tipo di simmetria del nucleocapside è elicoidale. Il virione ha un supercapside (membrana) contenente due glicoproteine - emoagglutinina e neuraminidasi, che sporgono sopra la membrana sotto forma di varie punte.
Nei virus dell'influenza A di esseri umani, mammiferi e uccelli sono stati trovati 13 tipi di emoagglutinina che differiscono nell'antigene, a cui è stata assegnata una numerazione continua (da H1 a H13).
La neuraminidasi (N) è un tetramero con MW 200-250 kD, ogni monomero ha MW 50-60 kD.
Il virus dell'influenza A ha 10 diverse varianti di neuraminidasi
Diagnostica di laboratorio. Il materiale per lo studio è lo scarico del rinofaringe, che si ottiene mediante lavaggio o utilizzando tamponi di garza di cotone, e sangue. Vengono utilizzati i seguenti metodi diagnostici:
1. Virologico - infezione di embrioni di pollo, colture di cellule renali di scimmie verdi (Vero) e cani (MDSC). Le colture cellulari sono particolarmente efficaci per l'isolamento dei virus A (H3N2) e B.
2. Sierologico: rilevamento di anticorpi specifici e aumento del loro titolo (in sieri accoppiati) mediante RTGA, RSK, dosaggio immunoenzimatico.
3. Come diagnosi accelerata, viene utilizzato un metodo immunofluorescente, che consente di rilevare rapidamente l'antigene virale nelle impronte di strisci dalla mucosa nasale o nei tamponi dal rinofaringe dei pazienti.
4. Per il rilevamento e l'identificazione del virus (antigeni virali), sono stati proposti metodi di sonda a RNA e PCR.
Profilassi specifica
1) vivo da virus attenuato; 2) ha ucciso l'intero virione; 3) vaccino subvirion (da virioni scissi); 4) vaccino a subunità contenente solo emoagglutinina e neuraminidasi.
Virus influenzali (ortomixovirus). Caratteristiche generali. Proteine del supercapside, loro funzioni, significato della variabilità (spostamento e deriva) per l'epidemiologia dell'influenza. Metodi di diagnostica di laboratorio. Vaccini usati per prevenire l'influenza.
Malattia infettiva acuta, con febbre, danni al fegato. Antroponosi.
Tassonomia, morfologia, struttura antigenica: Famiglia Picornaviridae, genere Hepatovirus. La specie tipo ha un sierotipo. È un virus contenente RNA, semplicemente organizzato, ha un antigene specifico del virus.
Coltivazione: il virus viene coltivato in colture cellulari. Il ciclo di riproduzione è più lungo di quello degli enterovirus, effetto citopatico non espresso.
Resistenza: Resistente al calore; inattivato mediante ebollizione per 5 min. Relativamente stabile nell'ambiente (acqua).
Epidemiologia. La fonte sono i pazienti. Il meccanismo di infezione è fecale-orale. I virus vengono eliminati nelle feci all'inizio delle manifestazioni cliniche. Con la comparsa dell'ittero, l'intensità dell'isolamento del virus diminuisce. I virus si trasmettono attraverso l'acqua, prodotti alimentari, mani.
Per lo più i bambini dai 4 ai 15 anni sono malati.
Diagnostica microbiologica. Il materiale per lo studio è siero e feci. La diagnosi si basa principalmente sulla determinazione delle IgM nel sangue mediante ELISA, RIA e immunomicroscopia elettronica. Gli stessi metodi possono rilevare l'antigene virale nelle feci. Studio virologico non eseguire.
3. Diagnosi virologica dell'influenza. Isolamento del virus, determinazione del suo tipo. Metodi sierologici per la diagnosi dell'influenza: RSK, RTGA. Un metodo diagnostico accelerato che utilizza anticorpi fluorescenti.
Diagnostica microbiologica. La diagnosi di "influenza" si basa su (1) l'isolamento e l'identificazione del virus, (2) la determinazione degli antigeni virali nelle cellule del paziente, (3) la ricerca di anticorpi virus-specifici nel siero del paziente. Quando si seleziona il materiale per la ricerca, è importante ottenere cellule affette da virus, poiché è in esse che si verifica la replicazione del virus. Materiale per la ricerca - secrezione nasofaringea. Per determinare gli anticorpi, vengono esaminati i sieri di sangue accoppiati del paziente.
Diagnostica espressa. Gli antigeni virali vengono rilevati nel materiale di prova utilizzando RIF (opzioni dirette e indirette) ed ELISA. Il genoma dei virus può essere rilevato nel materiale mediante PCR.
Metodo virologico. Il modello di laboratorio ottimale per la coltura dei ceppi è l'embrione di pollo. L'indicazione dei virus viene effettuata in base al modello di laboratorio (per morte, per cambiamenti clinici e patomorfologici, CPP, formazione di "placche", "campione di colore", RHA ed emoassorbimento). I virus sono identificati dalla loro struttura antigenica. Vengono utilizzati virus RSK, RTGA, ELISA, RBN (reazione di neutralizzazione biologica), ecc. Di solito, il tipo di virus influenzale è determinato in RSK, il sottotipo in RTGA.
Metodo sierologico. La diagnosi viene posta con un aumento di quattro volte del titolo anticorpale in sieri accoppiati del paziente, ottenuti ad intervalli di 10 giorni. Applicare virus RTGA, RSK, ELISA, RBN.
Adenovirus, caratteristiche delle proprietà, composizione del gruppo. Adenovirus patogeni per l'uomo. Caratteristiche della patogenesi delle infezioni da adenovirus, metodi di coltivazione degli adenovirus. Diagnosi delle malattie da adenovirus.
La famiglia Adenoviridae è divisa in due generi: Mastadenovirus - adenovirus dei mammiferi, comprende adenovirus umani (41 sierovarianti), scimmie (24 sierovarianti), oltre a bovini, cavalli, pecore, maiali, cani, topi, anfibi; e Aviadenovirus - adenovirus aviari (9 sierotipi).
Gli adenovirus mancano di un supercapside. Il virione ha la forma di un icosaedro - un tipo cubico di simmetria, il suo diametro è di 70-90 nm. Il capside è costituito da 252 capsomeri con un diametro di 7-9 nm.
Il virione contiene almeno 7 antigeni. Periodo di incubazione 6-9 giorni. Il virus si replica all'interno cellule epiteliali tratto respiratorio superiore, mucose degli occhi. Può penetrare nei polmoni, colpire i bronchi e gli alveoli, causare gravi polmoniti; una proprietà biologica caratteristica degli adenovirus è il tropismo per il tessuto linfoide.
Le malattie da adenovirus possono essere caratterizzate come febbrili con infiammazione catarrale mucosa delle vie respiratorie e degli occhi, accompagnata da un aumento del tessuto linfoide sottomucoso e regionale linfonodi.
Diagnostica di laboratorio. 1. Rilevazione di antigeni virali nelle cellule colpite mediante immunofluorescenza o metodi IFM. 2. Isolamento del virus. Il materiale per lo studio è lo scarico del rinofaringe e della congiuntiva, sangue, feci (il virus può essere isolato non solo all'inizio della malattia, ma anche il 7-14 ° giorno). Per isolare il virus vengono utilizzate colture cellulari primarie tripsinizzate (comprese quelle diploidi) di un embrione umano, sensibili a tutte le sierovarianti degli adenovirus. I virus vengono rilevati dal loro effetto citopatico e dal CSC, poiché condividono tutti un comune antigene che fissa il complemento. L'identificazione viene effettuata da antigeni tipo-specifici utilizzando RTGA e pH in coltura cellulare. 3. Rilevamento di un aumento del titolo anticorpale in sieri accoppiati di un paziente che utilizza RSC. La determinazione dell'aumento del titolo di anticorpi tipo-specifici viene effettuata con sierotipi di riferimento di adenovirus in RTGA o RN in coltura cellulare.
5. Virus Coxsackie ed ECHO. Caratterizzazione delle loro proprietà. La composizione dei gruppi. Metodi di diagnostica microbiologica delle malattie causate da virus Coxsackie ed ECHO.
I Coxsackie sono i più cardiotropi di tutti gli enterovirus. Nel 20-40% dei pazienti di età inferiore ai 20 anni, l'infezione da Coxsackie è complicata dalla miocardite. I virus Coxsackie sono rappresentati da due gruppi: il gruppo Coxsackie A comprende 23 sierovarianti (A1-A22, 24); il gruppo Coxsackie B comprende 6 sierovarianti (B1-B6).
I virus Coxsackie A e B possono causare nell'uomo, oltre a malattie simili alla poliomielite, a volte accompagnate da paralisi, e varie altre malattie con una clinica peculiare: meningite asettica, mialgia epidemica (malattia di Bornholm), herpangina, malattia minore, gastroenterite, infezioni respiratorie acute, miocardite
ECHO, che significa: E - enterico; C - citopatogeno; H - umano; O - orfano - un orfano. contiene 32 sierotipi.
La fonte delle infezioni da Coxsackie ed ECHO è una persona. Infezione da virus Si verifica per via fecale-orale.
La patogenesi delle malattie causate dai virus Coxsackie ed ECHO è simile alla patogenesi della poliomielite. Le porte d'ingresso sono la mucosa del naso, della faringe, dell'intestino tenue, nelle cui cellule epiteliali, così come nel tessuto linfoide, questi virus si moltiplicano.
L'affinità per il tessuto linfoide è una delle caratteristiche di questi virus. Dopo la riproduzione, i virus penetrano nella linfa e quindi nel sangue, causando viremia e generalizzazione dell'infezione.
Una volta nel flusso sanguigno, i virus si diffondono ematogenamente in tutto il corpo, stabilendosi selettivamente in quegli organi e tessuti per i quali hanno tropismo.
Metodi per la diagnosi delle malattie da enterovirus. utilizzare il metodo virologico e vari test sierologici. lo studio deve essere effettuato sull'intero gruppo di enterovirus. Per il loro isolamento vengono utilizzati contenuti intestinali, lavaggi e strisci dalla faringe, meno spesso liquido cerebrospinale o sangue e, in caso di morte del paziente, vengono esaminati pezzi di tessuto di diversi organi. Le colture cellulari (poliovirus, ECHO, Coxsackie B e alcuni sierotipi di Coxsackie A), così come i topi appena nati (Coxsackie A) vengono infettati dal materiale del test.
La tipizzazione dei virus isolati viene effettuata in reazioni di neutralizzazione, RTGA, RSK, reazioni di precipitazione, utilizzando miscele di riferimento di sieri di varie combinazioni. Per rilevare gli anticorpi nei sieri delle persone con infezioni da enterovirus, vengono utilizzati gli stessi test sierologici (RN, test del colore, RTGA, RSK, reazioni di precipitazione), ma per questi scopi è necessario disporre di sieri accoppiati da ciascun paziente (nella fase acuta periodo e dopo 2-3 settimane dall'inizio della malattia). Le reazioni sono considerate positive quando il titolo anticorpale aumenta di almeno 4 volte. Questi due metodi utilizzano anche l'IFM (per rilevare anticorpi o antigeni).
Epatite B. Struttura e caratteristiche delle principali proprietà del virione. Antigene di superficie, il suo significato. Caratteristiche dell'interazione del virus con la cellula. Modi di infezione. Metodi di diagnostica di laboratorio. profilassi specifica.
Virus dell'epatite B, HBV Il virione contiene tre antigeni principali
1. HBsAg - antigene superficiale (superficiale) o solubile (solubile) o australiano.
2. HBcAg - antigene centrale (cog-antigene).
3. HBeAg - antigene e, localizzato nel nucleo del virione
Il vero virione - la particella Dane - ha una forma sferica e un diametro di 42 nm. Il supercapside del virione è costituito da tre proteine: la principale (principale), grande e media (figura 88.1). Il genoma è racchiuso in un capside ed è rappresentato da DNA circolare a doppio filamento con mm di 1,6 MD. Il DNA consiste di circa 3200 nucleotidi, ma il suo filamento "più" è del 20-50% più corto del filamento "meno".
L'antigene di superficie - HBsAg - esiste sotto forma di tre varianti morfologicamente diverse: 1) rappresenta il supercapside dell'intero virione; 2) dentro in gran numero si presenta sotto forma di particelle con un diametro di 20 nm, aventi forma sferica; 3) sotto forma di fili lunghi 230 nm. Chimicamente sono identici. L'HBsAg contiene un antigene comune a e due coppie di determinanti specifici del tipo che si escludono a vicenda: d/y e w/r, quindi esistono quattro sottotipi principali di HBsAg (e, di conseguenza, HBV): adw, adr, ayw e ayr. L'antigene a fornisce la formazione di un'immunità crociata generale a tutti i sottotipi del virus.
Le proteine che formano l'antigene di superficie esistono in forme glicosilate (gp) e non glicosilate. Gp27, gp33, gp36 e gp42 sono glicosilati (i numeri indicano m.m. in CD). Il supercapside dell'HBV è costituito dalla proteina S principale o principale (92%); proteina M media (4%) e proteina L grande o lunga (1%).
Proteina principale - p24/gp27, Proteina grande - p39/gp42, Proteina media - gp33/gp36.
interazione con la cellula.
1. Adsorbimento sulla cella.
2. Penetrazione nella cellula utilizzando il meccanismo dell'endocitosi mediata dal recettore (fossa rivestita -> vescicola bordata -> lisosoma -> rilascio del nucleocapside e penetrazione del genoma virale nel nucleo dell'epatocita).
3. Riproduzione intracellulare.
La fonte dell'infezione con il virus dell'epatite B è solo una persona. L'infezione si verifica non solo per via parenterale, ma anche sessualmente e verticalmente (dalla madre al feto)
Attualmente, il metodo principale per diagnosticare l'epatite B è l'uso dell'emoagglutinazione passiva inversa (RPHA) per rilevare il virus o il suo antigene di superficie, HBsAg. Come già notato, il sangue contiene molte volte più antigene di superficie del virus stesso (100-1000 volte). Per la reazione ROPHA vengono utilizzati eritrociti sensibilizzati con anticorpi contro il virus dell'epatite B. In presenza di un antigene nel sangue, si verifica una reazione di emoagglutinazione. Per rilevare anticorpi contro l'antigene virale HBsAg, vari metodi immunologici(RSK, RPGA, IFM, RIM, ecc.)
Profilassi specifica
Le vaccinazioni contro l'epatite B sono obbligatorie e dovrebbero essere effettuate nel primo anno di vita. Per la vaccinazione sono stati proposti due tipi di vaccini. Per la preparazione di uno di essi viene utilizzato come materia prima il plasma dei portatori del virus, in quanto contiene l'antigene virale in quantità sufficiente per preparare un vaccino. La condizione principale per la preparazione di questo tipo di vaccino è la loro completa sicurezza, mentre per la produzione di un altro tipo di vaccino vengono utilizzati metodi Ingegneria genetica In particolare, per ottenere materiale antigenico si utilizza un clone di lievito ricombinante che produce l'antigene di superficie del virus dell'epatite B.
I vaccini sono stati creati in Russia sia per adulti che per neonati e bambini tenera età. Il ciclo completo di vaccinazione consiste in tre iniezioni:
Dosaggio - subito dopo la nascita; II dose - dopo 1-2 mesi; III dose - fino alla fine del 1o anno di vita.
La diagnostica sierologica basata sulla reazione antigene-anticorpo può essere utilizzata per determinare entrambi e svolge un ruolo nel determinare l'eziologia di un'infezione virale anche con risultati negativi dell'isolamento del virus.
Successo diagnosi sierologica dipende dalla specificità della reazione e dal rispetto delle condizioni temporanee per il prelievo di sangue necessario per la sintesi di anticorpi da parte dell'organismo.
Nella maggior parte dei casi vengono utilizzati sieri di sangue appaiati, prelevati a intervalli di 2-3 settimane. Una reazione positiva è considerata un aumento di almeno 4 volte del titolo anticorpale. È noto che la maggior parte degli anticorpi specifici appartiene alle classi IgG e IgM, che vengono sintetizzate in tempi diversi. processo infettivo. Allo stesso tempo, gli anticorpi IgM sono precoci e i test utilizzati per determinarli sono abituati diagnosi precoce(è sufficiente esaminare un siero). Gli anticorpi della classe IgG vengono sintetizzati successivamente e conservati a lungo.
RN viene utilizzato per la tipizzazione dei virus, per la diagnostica specifica del gruppo, ad esempio, infezione da adenovirus, utilizzo reazione di fissazione del complemento(RSC). I più usati sono reazione di inibizione dell'emoagglutinazione(RTGA), RSK, RIF, reazioni passive e emoagglutinazione passiva inversa(RPGA, ROPGA), varie varianti di ELISA, che quasi ovunque hanno sostituito RIA, uguale per sensibilità ad esso.
RTGA utilizzato per diagnosticare malattie causate da virus emoagglutinanti. Si basa sul legame degli anticorpi al siero del paziente del virus standard aggiunto. L'indicatore di reazione sono gli eritrociti agglutinati dal virus (formazione di un caratteristico "ombrello") in assenza di anticorpi specifici e che si depositano sul fondo, non agglutinati se presenti.
RSKè uno dei test sierologici tradizionali e viene utilizzato per diagnosticare molte infezioni virali. Due sistemi prendono parte alla reazione: anticorpi del siero del paziente + virus standard ed eritrociti di pecora + anticorpi contro di essi, nonché un complemento titolato. Se gli anticorpi e il virus corrispondono, questo complesso si lega al complemento e la lisi degli eritrociti di pecora non si verifica ( reazione positiva). Con un RSC negativo, il complemento contribuisce alla lisi degli eritrociti. Lo svantaggio del metodo è la sua sensibilità insufficientemente elevata e la difficoltà di standardizzare i reagenti.
Per tener conto del significato di RSK, così come di RTGA, è necessario titolare i sieri appaiati, cioè prelevati all'inizio della malattia e durante la convalescenza.
Gioco di ruolo- agglutinazione di eritrociti (o perle di polistirene) sensibilizzati da antigeni virali in presenza di anticorpi. Qualsiasi virus può essere assorbito dagli eritrociti, indipendentemente dalla presenza o dall'assenza di attività emoagglutinante in essi. A causa della presenza di reazioni non specifiche, i sieri vengono testati a una diluizione di 1:10 o superiore.
RNG- agglutinazione di eritrociti sensibilizzati da anticorpi specifici in presenza di antigeni virali. ROPHA ha ricevuto la maggiore distribuzione nella rilevazione dell'antigene HBs sia nei pazienti che nei donatori di sangue.
SE metodo pure ELISA utilizzato per rilevare gli anticorpi nel siero. L'ELISA a scopo diagnostico sta diventando sempre più importante e diffuso. L'antigene virale viene adsorbito sulla fase solida (il fondo dei pozzetti delle piastre di polistirene o delle sfere di polistirene). Quando vengono aggiunti gli anticorpi corrispondenti nel siero, si legano agli antigeni adsorbiti. La presenza degli anticorpi desiderati viene rilevata utilizzando anti-anticorpi (ad esempio umani) coniugati con un enzima (perossidasi). L'aggiunta di substrato e la reazione substrato-enzima danno colore. ELISA può essere utilizzato anche per determinare gli antigeni. In questo caso, gli anticorpi vengono adsorbiti sulla fase solida.
anticorpi monoclonali. Grandi progressi nella diagnosi delle infezioni virali sono stati compiuti nell'ultimo decennio, quando, con lo sviluppo della ricerca di ingegneria genetica, è stato sviluppato un sistema per ottenere anticorpi monoclonali. Pertanto, la specificità e la sensibilità dei metodi diagnostici per determinare gli antigeni virali sono state notevolmente aumentate. La ristretta specificità dei monocloni, che rappresentano una piccola percentuale di proteine virali che potrebbero non essere presenti nel materiale clinico, viene superata con successo utilizzando diversi anticorpi monoclonali contro vari determinanti virali.
reazioni immunitarie utilizzato in studi diagnostici e immunologici su persone malate e sane. A tale scopo, applicare metodi sierologici , cioè metodi per studiare anticorpi e antigeni utilizzando reazioni antigene-anticorpo determinate nel siero del sangue e in altri fluidi, nonché nei tessuti corporei.
Rilevazione nel siero del sangue gli anticorpi del paziente contro gli antigeni dell'agente patogeno consentono di effettuare una diagnosi della malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni microbici, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando si isola un microbo dal paziente, il patogeno viene identificato studiandone le proprietà antigeniche utilizzando sieri immunodiagnostici, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questo cosiddetto identificazione sierologica microrganismi.
Ampiamente usato in microbiologia e immunologia agglutinazione, precipitazione, reazioni di neutralizzazione, reazioni che coinvolgono il complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (metodo radioimmunologico, immunoenzimatico, immunofluorescenza). Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione dell'interazione dell'antigene con l'anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Caratteristiche dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono la base reazioni diagnostiche nei laboratori. Reazione in vitro tra antigene e anticorpo consiste in una fase specifica e non specifica. IN fase specifica c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. Poi arriva fase non specifica - più lento, che si manifesta con visibile fenomeni fisici, ad esempio, la formazione di scaglie (fenomeno di agglutinazione) o di precipitato sotto forma di torbidità. Questa fase richiede determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale del mezzo).
Il legame di un determinante dell'antigene (epitopo) al sito attivo di un frammento Fab di anticorpo è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e alle interazioni idrofobiche. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
Immunodeficienze, sia primarie che soprattutto secondarie sono diffusi tra la gente. Sono la causa della manifestazione di molte malattie e condizioni patologiche, pertanto richiedono prevenzione e trattamento con farmaci immunotropi.
34. Vaccini inattivati (corpuscolari). Ricevuta. Applicazione. Vantaggi. Svantaggi.
Vaccini inattivati (uccisi, particolati o molecolari).- preparati, come principio attivo, compresi quelli uccisi per via chimica o in modo fisico colture di virus o batteri patogeni (cellulari, virioni) o complessi di antigeni estratti da microbi patogeni contenenti antigeni protettivi (vaccini subcellulari, subvirionici).
Per isolare i complessi antigenici (glicoproteine, LPS, proteine) da batteri e virus, vengono utilizzati acido tricloroacetico, fenolo, enzimi e precipitazione isoelettrica.
Sono ottenuti coltivando batteri e virus patogeni su mezzi nutritivi artificiali, complessi antigenici inattivati, isolati, purificati, costruiti sotto forma di una preparazione liquida o liofila.
Il vantaggio di questo tipo di vaccino è la relativa facilità di ottenimento (non è richiesto uno studio a lungo termine e l'isolamento dei ceppi). Gli svantaggi includono la bassa immunogenicità, la necessità di un triplo uso e l'elevata reattogenicità dei vaccini formalizzati. Inoltre, rispetto ai vaccini vivi, l'immunità che suscitano è di breve durata.
Attualmente vengono utilizzati i seguenti vaccini uccisi: tifo, arricchito con l'antigene Vi; vaccino contro il colera, vaccino contro la pertosse.
N. 1 Test sierologici utilizzati per la diagnosi infezione virale.
reazioni immunitarie utilizzato in studi diagnostici e immunologici su persone malate e sane. A tale scopo, applicare metodi sierologici, cioè metodi per studiare anticorpi e antigeni utilizzando reazioni antigene-anticorpo determinate nel siero del sangue e in altri fluidi, nonché nei tessuti corporei.
La rilevazione di anticorpi contro gli antigeni dell'agente patogeno nel siero del sangue del paziente consente di diagnosticare la malattia. Gli studi sierologici vengono anche utilizzati per identificare antigeni microbici, varie sostanze biologicamente attive, gruppi sanguigni, antigeni tissutali e tumorali, complessi immunitari, recettori cellulari, ecc.
Quando si isola un microbo da un paziente, l'agente patogeno viene identificato studiandone le proprietà antigeniche utilizzando sieri immunodiagnostici, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questa è la cosiddetta identificazione sierologica dei microrganismi.
In microbiologia e immunologia, l'agglutinazione, la precipitazione, le reazioni di neutralizzazione, le reazioni che coinvolgono il complemento, utilizzando anticorpi e antigeni marcati (radioimmunologici, test immunoenzimatici, metodi immunofluorescenti) sono ampiamente utilizzati. Le reazioni elencate differiscono nell'effetto registrato e nella tecnica di stadiazione, tuttavia, sono tutte basate sulla reazione dell'interazione dell'antigene con l'anticorpo e vengono utilizzate per rilevare sia gli anticorpi che gli antigeni. Le reazioni immunitarie sono caratterizzate da elevata sensibilità e specificità.
Le caratteristiche dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori. La reazione in vitro tra un antigene e un anticorpo consiste in una fase specifica e una non specifica. Nella fase specifica, c'è un rapido legame specifico del sito attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene. Poi arriva la fase non specifica - più lenta, che si manifesta con fenomeni fisici visibili, come la formazione di scaglie (fenomeno di agglutinazione) o precipitato sotto forma di torbidità. Questa fase richiede determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale del mezzo).
Il legame di un determinante dell'antigene (epitopo) al sito attivo di un frammento Fab di anticorpo è dovuto alle forze di van der Waals, ai legami idrogeno e alle interazioni idrofobiche. La forza e la quantità di antigene legato dagli anticorpi dipendono dall'affinità, dall'avidità degli anticorpi e dalla loro valenza.
N. 2 Gli agenti causali della leishmaniosi. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. Trattamento.
Tassonomia: tipo Sarcomastigophorae, sottotipo Mastigophora - flagelli, classe Zoomastigophora, ordine Kinetoplastida, genere Leishmania.
coltivazione: Terreno di coltura NNN contenente agar sangue di coniglio defibrinato. La leishmania cresce anche sulla membrana corion-allantoidea dell'embrione di pollo e nelle colture cellulari.
Epidemiologia: nei paesi a clima caldo. Il meccanismo di trasmissione degli agenti patogeni è trasmissibile, attraverso il morso dei vettori: le zanzare. Le principali fonti di agenti patogeni: nella leishmaniosi antroponotica cutanea - persone; con leishmaniosi zoonotica cutanea - roditori; con leishmaniosi viscerale - persone; con leishmaniosi mucocutanea - roditori, animali selvatici e domestici.
Patogenesi e clinica. Esistono due agenti eziologici della leishmaniosi cutanea: L. tropica, l'agente eziologico della leishmaniosi antroponotica, e L. major, l'agente eziologico della leishmaniosi cutanea zoonotica.
La leishmaniosi cutanea antroponotica è caratterizzata da un lungo periodo di incubazione - diversi mesi. Nel sito di una puntura di zanzara appare un tubercolo, che aumenta e si ulcera dopo 3 mesi. Le ulcere sono più spesso localizzate sul viso e sugli arti superiori, cicatrizzate entro la fine dell'anno. La leishmaniosi cutanea zoonotica (leishmaniosi ulcerosa precoce, ulcera di Pendinsky, forma rurale) è più acuta. Il periodo di incubazione è di 2-4 settimane. Le ulcere piangenti sono più spesso localizzate arti inferiori. La leishmaniosi mucocutanea è causata dalla leishmania del complesso L. braziliensis; sviluppa lesioni granulomatose e ulcerative della pelle del naso, delle mucose della bocca e della laringe. La leishmaniosi viscerale antraponosa è causata dalla leishmania del complesso L. donovani; nei pazienti sono colpiti il fegato, la milza, i linfonodi, il midollo osseo e il tratto digestivo.
Immunità: persistente per tutta la vita
Negli strisci (dai tubercoli, dal contenuto delle ulcere, dai punti degli organi), macchiati secondo Romanovsky-Giemsa, si trovano piccole leishmanie di forma ovale (amastigoti) localizzate all'interno delle cellule. Per isolare una coltura pura del patogeno, l'inoculo viene effettuato su terreno NNN: incubazione per 3 settimane. I metodi sierologici non sono abbastanza specifici. È possibile usare RIF, ELISA.
Il test di allergia cutanea per la terapia ormonale sostitutiva alla leishmanina viene utilizzato negli studi epidemiologici sulla leishmaniosi.
Trattamento: Nella leishmaniosi viscerale vengono utilizzati preparati di antimonio e diamidine (pentamidina). Con leishmaniosi cutanea - chinacrina, amfotericina.
Prevenzione: distruggi gli animali malati, combatti roditori e zanzare. L'immunoprofilassi della leishmaniosi cutanea viene effettuata mediante inoculazione di una coltura viva di L. major.
BIGLIETTO#28
№ 1Immunoglobuline, struttura e funzioni.
natura delle immunoglobuline. In risposta all'introduzione di un antigene, il sistema immunitario produce anticorpi, proteine che possono combinarsi in modo specifico con l'antigene che ne ha causato la formazione e quindi partecipare a reazioni immunologiche. Gli anticorpi appartengono alle beta-globuline, cioè la frazione delle proteine del siero del sangue meno mobile in un campo elettrico. Nel corpo, le ?-globuline sono prodotte da cellule speciali: le plasmacellule. Le α-globuline che svolgono le funzioni degli anticorpi sono chiamate immunoglobuline e sono denotate dal simbolo Ig. Pertanto, gli anticorpi sono immunoglobuline prodotte in risposta all'introduzione di un antigene e capaci di interagire specificamente con lo stesso antigene.
Funzioni. La funzione primaria è l'interazione dei loro centri attivi con determinanti complementari degli antigeni. Una funzione secondaria è la loro capacità di:
Legare l'antigene per neutralizzarlo ed eliminarlo dal corpo, cioè partecipare alla formazione della protezione contro l'antigene;
Partecipare al riconoscimento di un antigene "estraneo";
Garantire la cooperazione cellule immunocompetenti(macrofagi, linfociti T e B);
Partecipare a varie forme risposta immunitaria (fagocitosi, funzione killer, GNT, HRT, tolleranza immunologica, memoria immunologica).
Struttura degli anticorpi. Proteine delle immunoglobuline Composizione chimica appartengono alle glicoproteine, in quanto sono costituite da proteine e zuccheri; costruito da 18 amminoacidi. Hanno differenze di specie associate principalmente a un insieme di aminoacidi. Le loro molecole hanno una forma cilindrica, sono visibili in un microscopio elettronico. Fino all'80% delle immunoglobuline ha una costante di sedimentazione di 7S; resistente agli acidi deboli, alcali, riscaldamento fino a 60 °C. È possibile isolare le immunoglobuline dal siero del sangue mediante metodi fisici e chimici (elettroforesi, precipitazione isoelettrica con alcool e acidi, salting out, cromatografia di affinità, ecc.). Questi metodi sono utilizzati nella produzione nella preparazione di preparati immunobiologici.
Le immunoglobuline sono suddivise in cinque classi in base alla loro struttura, proprietà antigeniche e immunobiologiche: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Le immunoglobuline M, G, A hanno sottoclassi. Ad esempio, le IgG hanno quattro sottoclassi (IgG, IgG 2 , IgG 3 , IgG 4). Tutte le classi e sottoclassi differiscono nella sequenza degli amminoacidi.
Le molecole di immunoglobuline di tutte e cinque le classi sono costituite da catene polipeptidiche: due catene pesanti identiche H e due catene leggere identiche - L, collegate da ponti disolfuro. Secondo ciascuna classe di immunoglobuline, ad es. M, G, A, E, D, distinguono cinque tipi di catene pesanti: ? (mu), ? (gamma), ? (alfa), ? (epsilon) e? (delta), che differiscono per l'antigenicità. Le catene leggere di tutte e cinque le classi sono comuni e sono disponibili in due tipi: ? (kappa) e? (lambà); Le catene L delle immunoglobuline di varie classi possono unirsi (ricombinarsi) con catene H sia omologhe che eterologhe. Tuttavia, nella stessa molecola possono esserci solo catene L identiche (? o?). Entrambe le catene H e L hanno una regione variabile -V, in cui la sequenza amminoacidica è instabile, e una regione costante -C con un insieme costante di amminoacidi. Nelle catene leggere e pesanti si distinguono i gruppi terminali NH 2 e COOH.
Durante la lavorazione? -globulina mercaptoetanolo distrugge i legami disolfuro e la molecola di immunoglobulina si decompone in catene separate di polipeptidi. Quando esposta all'enzima proteolitico papaina, l'immunoglobulina viene scissa in tre frammenti: due frammenti non cristallizzanti contenenti gruppi determinanti per l'antigene e chiamati frammenti Fab I e II, e un frammento Fc cristallizzante. I frammenti FabI e FabII sono simili nelle proprietà e nella composizione degli amminoacidi e differiscono dal frammento Fc; I frammenti Fab e Fc sono formazioni compatte interconnesse da sezioni flessibili della catena H, grazie alle quali le molecole di immunoglobuline hanno una struttura flessibile.
Sia le catene H che le catene L hanno regioni compatte separate e connesse linearmente chiamate domini; ce ne sono 4 nella catena H e 2 nella catena L.
I siti attivi, o determinanti, che si formano nelle regioni V occupano circa il 2% della superficie della molecola di immunoglobulina. Ogni molecola ha due determinanti relativi a regioni ipervariabili Catene H e L, cioè, ciascuna molecola di immunoglobulina può legare due molecole di antigene. Pertanto, gli anticorpi sono bivalenti.
La struttura tipica di una molecola di immunoglobulina è l'IgG. Le restanti classi di immunoglobuline differiscono dalle IgG in ulteriori elementi dell'organizzazione delle loro molecole.
In risposta all'introduzione di qualsiasi antigene, possono essere prodotti anticorpi di tutte e cinque le classi. Di solito, prima vengono prodotte le IgM, poi le IgG, il resto - un po 'più tardi.
No. 2 L'agente eziologico della clamidia. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. Trattamento.
Tassonomia: ordine Chlamydiales, famiglia Chlamydaceae, genere Chlamydia. Il genere è rappresentato dalle specie C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Le malattie causate dalla clamidia sono chiamate clamidia. Le malattie causate da C. trachomatis e C. pneumoniae sono antroponosi. L'ornitosi, il cui agente eziologico è C. psittaci, è un'infezione zooantroponotica.
Morfologia della clamidia: batteri piccoli, gram "-", forma sferica. Non formano spore, flagelli e capsule. Parete cellulare: membrana a 2 strati. Hanno glicolipidi. Il grammo è rosso. Il metodo di colorazione principale è secondo Romanovsky-Giemsa.
2 forme di esistenza: corpi elementari (particelle infettive inattive, esterne alla cellula); corpi reticolari (cellule interne, forma vegetativa).
Coltivazione: Può essere propagato solo in cellule viventi. IN sacco vitellino sviluppo di embrioni di pulcino, animali suscettibili e in coltura cellulare
Attività enzimatica: piccolo. Fermentano l'acido piruvico e sintetizzano i lipidi. Non in grado di sintetizzare composti ad alta energia.
Struttura antigenica: Antigeni di tre tipi: lipopolisaccaride termostabile genere-specifico (nella parete cellulare). Identificato con l'aiuto di RSK; antigene specie-specifico di natura proteica (nella membrana esterna). Rileva utilizzando RIF; antigene variante-specifico di natura proteica.
fattori di patogenicità. Le proteine della membrana esterna della clamidia sono associate alle loro proprietà adesive. Queste adesine si trovano solo nei corpi elementari. La clamidia produce endotossina. È stato scoperto che alcune clamidie hanno una proteina da shock termico che può causare reazioni autoimmuni.
resistenza. Alta a vari fattori ambiente esterno. Resistente alle basse temperature, all'essiccazione. Sensibile al calore.
C. trachomatis è l'agente eziologico delle malattie del sistema genito-urinario, degli occhi e delle vie respiratorie nell'uomo.
Il tracoma è una malattia infettiva cronica caratterizzata da danni alla congiuntiva e alla cornea degli occhi. Antroponosi. Trasmesso per via di contatto familiare.
Patogenesi: colpisce la mucosa degli occhi. Penetra nell'epitelio della congiuntiva e della cornea, dove si moltiplica, distruggendo le cellule. Si sviluppa la cheratocongiuntivite follicolare.
Diagnostica: esame dei raschiamenti dalla congiuntiva. Nelle cellule colpite, quando colorate secondo Romanovsky-Giemsa, si trovano inclusioni citoplasmatiche di colore viola, situate vicino al nucleo - il corpo di Provachek. RIF ed ELISA sono utilizzati anche per rilevare uno specifico antigene della clamidia nelle cellule colpite. A volte ricorrono alla coltivazione di chlamydia trachoma su embrioni di pollo o colture cellulari.
Trattamento: antibiotici (tetraciclina) e immunostimolanti (interferone).
Prevenzione: Non specifico.
La clamidia urogenitale è una malattia a trasmissione sessuale. Questa è una malattia infettiva acuta / cronica, caratterizzata da una lesione predominante del tratto genito-urinario.
L'infezione umana avviene attraverso le mucose del tratto genitale. Il principale meccanismo di infezione è il contatto, la modalità di trasmissione è sessuale.
Immunità: cellulare, con il siero di anticorpi specifici infetti. Dopo la malattia trasferita, non si forma.
Diagnostica: Nelle malattie degli occhi viene utilizzato un metodo batterioscopico: le inclusioni intracellulari vengono rilevate nei raschiamenti dall'epitelio della congiuntiva. RIF viene utilizzato per rilevare l'antigene della clamidia nelle cellule colpite. In caso di danno al tratto genito-urinario, può essere applicato un metodo biologico, basato sull'infezione con il materiale di prova (raschiamento dell'epitelio dall'uretra, vagina) della coltura cellulare.
Dichiarazione RIF, ELISA consentono di rilevare gli antigeni della clamidia nel materiale di prova. Metodo sierologico - per la rilevazione di IgM contro C. trachomatis nella diagnosi di polmonite nei neonati.
Trattamento. antibiotici (azitromicina del gruppo dei macrolidi), immunomodulatori, eubiotici.
Prevenzione. Solo non specifico (trattamento dei pazienti), igiene personale.
Il linfogranuloma venereo è una malattia a trasmissione sessuale caratterizzata da lesioni degli organi genitali e dei linfonodi regionali. Il meccanismo di infezione è il contatto, la via di trasmissione è sessuale.
Immunità: immunità persistente, cellulare e umorale.
Diagnostica: Il materiale per lo studio è il pus, la biopsia dei linfonodi colpiti, il siero del sangue. Metodo batterioscopico, biologico (coltivazione nel sacco vitellino di un embrione di pollo), sierologico (RCC con sieri accoppiati è positivo) e allergologico (test intradermico con allergene della clamidia).
Trattamento. Antibiotici - macrolidi e tetracicline.
Prevenzione: Non specifico.
C. pneumoniae - l'agente eziologico della clamidia respiratoria, causa acuta e bronchite cronica e polmonite. Antroponosi. L'infezione è da goccioline trasportate dall'aria. Entrano nei polmoni attraverso il tratto respiratorio superiore. Causa infiammazione.
Diagnostica: impostazione RSK per la rilevazione di anticorpi specifici (metodo sierologico). Nell'infezione primaria, viene preso in considerazione il rilevamento delle IgM. RIF è utilizzato anche per rilevare l'antigene della clamidia e la PCR.
Trattamento: Effettuato con l'aiuto di antibiotici (tetracicline e macrolidi).
Prevenzione: Non specifico.
C. psittaci - l'agente eziologico dell'ornitosi - acuto malattia infettiva, che è caratterizzato da danni ai polmoni, al sistema nervoso e agli organi parenchimali (fegato, milza) e intossicazione.
Zooantroponosi. Fonti di infezione - uccelli. Il meccanismo di infezione è aerogeno, la via di trasmissione è aerea. L'agente eziologico è attraverso il muco. le conchiglie respirano. percorsi, nell'epitelio dei bronchi, alveoli, moltiplica, infiammazione.
Diagnostica: Il materiale per lo studio è il sangue, l'espettorato del paziente, il siero del sangue per i test sierologici.
Viene utilizzato un metodo biologico: la coltivazione della clamidia nel sacco vitellino di un embrione di pollo, in coltura cellulare. Metodo sierologico. Applicare RSK, RPHA, ELISA, utilizzando il siero del sangue appaiato del paziente. Test allergologico intradermico con ornitina.
Trattamento: antibiotici (tetracicline, macrolidi).
BIGLIETTO#29
N. 1 L'agente eziologico della difterite. Tassonomia e caratteristiche. Corinebatteri condizionatamente patogeni. Diagnostica microbiologica. Rilevazione dell'immunità atossica. Prevenzione e cura specifica.
La difterite è una malattia infettiva acuta caratterizzata da infiammazione fibrinosa nella faringe, laringe, meno spesso in altri organi e intossicazione. Il suo agente eziologico è il Corynebacterium diphtheriae.
Tassonomia. Il Corynebacterium appartiene alla divisione Firmicutes, al genere Corynebacterium.
Proprietà morfologiche e tintorie. L'agente eziologico della difterite è caratterizzato dal polimorfismo: si trovano aste sottili, leggermente ricurve (più comuni), coccoidi e ramificate. I batteri si trovano spesso ad angolo l'uno rispetto all'altro. Non formano spore, non hanno flagelli, molti ceppi hanno una microcapsula. Caratteristica- la presenza di granelli di volutina alle estremità del bastoncino (causa la forma a clava). L'agente eziologico della difterite secondo Gram si colora positivamente.
beni culturali. Anaerobio facoltativo, opz. temperatura. Il microbo cresce su speciali terreni nutritivi, ad esempio su terreno di Clauberg (agar sangue-tellurite), su cui il bacillo della difterite dà colonie di 3 tipi: a) grandi, grigie, con bordi frastagliati, striature radiali, simili a margherite; b) piccole, nere, convesse, con bordi lisci; c) simile al primo e al secondo.
A seconda delle proprietà colturali ed enzimatiche si distinguono 3 varianti biologiche di C. diphtheriae: gravis, mitis e intermedius intermedio.
attività enzimatica. Alto. Fermentano glucosio e maltosio nella formazione di acido, non decompongono saccarosio, lattosio e mannitolo. Non producono ureasi e non formano indolo. Produce l'enzima cistinasi, che scinde la cisteina in H 2 S. Forma catalasi, succinato deidrogenasi.
proprietà antigeniche. Gli antigeni O sono polisaccaridi termostabili situati in profondità nella parete cellulare. Antigeni K - superficiali, termolabili, grigiastri specifici. Con l'aiuto di sieri all'antigene K C. diph. suddiviso in sierotipi (58).
fattori di patogenicità. Un'esotossina che interrompe la sintesi proteica e, di conseguenza, colpisce le cellule del miocardio, le ghiandole surrenali, i reni e i gangli nervosi. La capacità di produrre esotossina è dovuta alla presenza nella cellula di un profago che porta il gene tox responsabile della formazione della tossina. Enzimi di aggressione - ialuronidasi, neuraminidasi. La microcapsula appartiene anche ai fattori di patogenicità.
resistenza. Resistente all'essiccazione, all'azione basse temperature, quindi, per diversi giorni può essere conservato su oggetti in acqua.
Epidemiologia. La fonte della difterite - persone malate L'infezione si verifica più spesso attraverso le vie respiratorie. La principale via di trasmissione è aerea, è possibile e modo di contatto- attraverso biancheria, stoviglie.
Patogenesi. La porta d'ingresso dell'infezione sono le mucose della faringe, del naso, delle vie respiratorie, degli occhi, dei genitali, della superficie della ferita. Nel sito del cancello d'ingresso si osserva un'infiammazione fibrinosa, si forma un film caratteristico, che è appena separato dai tessuti sottostanti. I batteri secernono esotossina che entra nel sangue - si sviluppa la tossinemia. La tossina colpisce il miocardio, i reni, le ghiandole surrenali e il sistema nervoso.
Clinica. Esistono diverse forme di localizzazione della difterite: difterite della faringe, che si osserva nell'85-90% dei casi, difterite del naso, laringe, occhi, vulva, pelle, ferite. Il periodo di incubazione va dai 2 ai 10 giorni. La malattia inizia con febbre, dolore durante la deglutizione, comparsa di un film sulle tonsille, linfonodi ingrossati. Gonfiore della laringe, si sviluppa la groppa della difterite, che può portare all'asfissia e alla morte. Altre complicazioni gravi che possono anche causare la morte sono la miocardite tossica, la paralisi dei muscoli respiratori.
Immunità. Dopo la malattia - immunità antitossica persistente e intensa. Di particolare importanza è la formazione di anticorpi contro il frammento B. Neutralizzano l'istotossina difterica, impedendo l'attaccamento di quest'ultima alla cellula. Immunità antibatterica - non stressata, specifica per il grigio
Diagnostica microbiologica. Con l'aiuto di un tampone, vengono prelevati dal paziente un film e il muco dalla gola e dal naso. Per fare una diagnosi preliminare, è possibile utilizzare un metodo batterioscopico. Il principale metodo diagnostico è batteriologico: inoculazione su terreno Klauber II (agar sangue-tellurite), su terreno siero denso per rilevare la produzione di cistinasi, su terreno Hiss, su terreno per determinare la tossigenicità del patogeno. L'identificazione intraspecifica consiste nel determinare il bio- e il serovar. Per il rilevamento accelerato della tossina difterica, vengono utilizzati: RIGA (reazione di emoagglutinazione indiretta) con un anticorpo eritrocitario diagnostico, una reazione di neutralizzazione dell'anticorpo (la presenza di una tossina è giudicata dall'effetto di prevenzione dell'emoagglutinazione); RIA (radioimmune) ed ELISA (saggio immunoenzimatico).
Trattamento. Il principale metodo di terapia è la somministrazione immediata di uno specifico siero liquido antidifterico equino antitossico. Antidifterite immunoglobulinica umana per somministrazione endovenosa.
Vaccini associati: DTP (vaccino pertosse-tetanico assorbito), DTP (tossoide difterico-tetanico assorbito).
№ 2 Classi di immunoglobuline, loro caratteristiche.
Le immunoglobuline sono suddivise in cinque classi in base alla loro struttura, proprietà antigeniche e immunobiologiche: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Immunoglobulina di classe G. L'isotipo G è la maggior parte del siero Ig. Rappresenta il 70-80% di tutte le Ig sieriche, mentre il 50% si trova nel fluido tissutale. Il contenuto medio di IgG nel siero del sangue di un adulto sano è di 12 g/l. L'emivita delle IgG è di 21 giorni.
L'IgG è un monomero che ha 2 centri di legame all'antigene (può legare contemporaneamente 2 molecole di antigene, quindi la sua valenza è 2), un peso molecolare di circa 160 kDa e una costante di sedimentazione di 7S. Esistono sottotipi Gl, G2, G3 e G4. Sintetizzato da linfociti B maturi e plasmacellule. È ben definito nel siero del sangue al picco della risposta immunitaria primaria e secondaria.
Ha un'elevata affinità. IgGl e IgG3 legano il complemento e G3 è più attivo di Gl. IgG4, come IgE, ha citofilia (tropismo, o affinità, per mastociti e basofili) ed è coinvolta nello sviluppo reazione allergica Io digito. Nelle reazioni immunodiagnostiche, l'IgG può manifestarsi come un anticorpo incompleto.
Attraversa facilmente la barriera placentare e fornisce immunità umorale al neonato nei primi 3-4 mesi di vita. Può anche essere secreto nel segreto delle mucose, compreso il latte per diffusione.
Le IgG forniscono neutralizzazione, opsonizzazione e marcatura dell'antigene, attivano la citolisi mediata dal complemento e la citotossicità cellulo-mediata dipendente dall'anticorpo.
Immunoglobulina di classe M. La molecola più grande di tutte le Ig. Questo è un pentamero che ha 10 centri di legame all'antigene, ad es. la sua valenza è 10. Il suo peso molecolare è di circa 900 kDa, la costante di sedimentazione è 19S. Esistono sottotipi Ml e M2. Le catene pesanti della molecola IgM, a differenza di altri isotipi, sono costituite da 5 domini. L'emivita delle IgM è di 5 giorni.
Rappresenta circa il 5-10% di tutte le Ig sieriche. Il contenuto medio di IgM nel siero del sangue di un adulto sano è di circa 1 g/l. Questo livello nell'uomo viene raggiunto all'età di 2-4 anni.
Le IgM sono filogeneticamente le immunoglobuline più antiche. Sintetizzato da precursori e linfociti B maturi. Si forma all'inizio della risposta immunitaria primaria, è anche il primo ad essere sintetizzato nel corpo di un neonato - è determinato già alla 20a settimana di sviluppo intrauterino.
Ha un'elevata avidità ed è l'attivatore del complemento più efficace nella via classica. Partecipa alla formazione di siero e secretoria immunità umorale. Essendo una molecola polimerica contenente una catena J, può formare una forma secretoria ed essere secreta nella secrezione delle mucose, compreso il latte. La maggior parte gli anticorpi normali e le isoagglutinine si riferiscono alle IgM.
Non passa attraverso la placenta. La rilevazione di anticorpi specifici dell'isotipo M nel siero del sangue di un neonato indica una precedente infezione intrauterina o un difetto placentare.
Le IgM forniscono neutralizzazione, opsonizzazione ed etichettatura dell'antigene, attivano la citolisi mediata dal complemento e la citotossicità cellulo-mediata dipendente dall'anticorpo.
Immunoglobulina di classe A. Esiste in forme sieriche e secretorie. Circa il 60% di tutte le IgA si trova nelle secrezioni della mucosa.
IgA sierica: Rappresenta circa il 10-15% di tutte le Ig sieriche. Il siero del sangue di un adulto sano contiene circa 2,5 g/l di IgA, il massimo viene raggiunto all'età di 10 anni. L'emivita delle IgA è di 6 giorni.
L'IgA è un monomero, ha 2 centri leganti l'antigene (cioè 2-valenti), un peso molecolare di circa 170 kDa e una costante di sedimentazione di 7S. Esistono i sottotipi A1 e A2. Sintetizzato da linfociti B maturi e plasmacellule. È ben definito nel siero del sangue al picco della risposta immunitaria primaria e secondaria.
Ha un'elevata affinità. Forse anticorpo incompleto. Non lega il complemento. Non attraversa la barriera placentare.
IgA fornisce la neutralizzazione, l'opsonizzazione e l'etichettatura dell'antigene, innesca la citotossicità cellulo-mediata dipendente dall'anticorpo.
IgA secretoria: A differenza del siero, la sIgA secretoria esiste in forma polimerica come di- o trimero (4- o 6-valente) e contiene peptidi J e S. Peso molecolare 350 kDa e oltre, costante di sedimentazione 13S e oltre.
È sintetizzato dai linfociti B maturi e dai loro discendenti - plasmacellule della corrispondente specializzazione solo all'interno delle mucose e viene rilasciato nei loro segreti. Il volume di produzione può raggiungere i 5 g al giorno. Il pool slgA è considerato il più numeroso nel corpo: il suo numero supera il contenuto totale di IgM e IgG. Non si trova nel siero del sangue.
La forma secretoria di IgA è il fattore principale nell'immunità locale umorale specifica delle mucose del tratto gastrointestinale, del sistema genito-urinario e del tratto respiratorio. A causa della catena S, è resistente alle proteasi. slgA non attiva il complemento ma si lega efficacemente agli antigeni e li neutralizza. Previene l'adesione dei microbi sulle cellule epiteliali e la generalizzazione dell'infezione all'interno delle mucose.
Immunoglobulina di classe E. Chiamata anche reagina. Il contenuto nel siero del sangue è estremamente basso - circa 0,00025 g / l. Il rilevamento richiede l'uso di speciali metodi diagnostici altamente sensibili. Peso molecolare - circa 190 kDa, costante di sedimentazione - circa 8S, monomero. Rappresenta circa lo 0,002% di tutte le Ig circolanti. Questo livello viene raggiunto entro i 10-15 anni.
È sintetizzato dai linfociti B maturi e dalle plasmacellule principalmente nel tessuto linfoide dell'albero broncopolmonare e nel tratto gastrointestinale.
Non lega il complemento. Non attraversa la barriera placentare. Ha una pronunciata citofilia - tropismo per mastociti e basofili. Coinvolto nello sviluppo di ipersensibilità tipo immediato- reazione di tipo I.
Immunoglobulina di classe D. Non ci sono molte informazioni sulle Ig di questo isotipo. Quasi completamente contenuto nel siero del sangue ad una concentrazione di circa 0,03 g/l (circa lo 0,2% del numero totale di Ig circolanti). IgD ha un peso molecolare di 160 kDa e una costante di sedimentazione di 7S, un monomero.
Non lega il complemento. Non attraversa la barriera placentare. È un recettore per i precursori dei linfociti B.
BIGLIETTO#30
N. 1 L'agente eziologico dell'amebiasi. Tassonomia. Caratteristica. Diagnostica microbiologica. trattamento specifico.
Tassonomia: phylum Sarcomastigophorae, subphylum Sarcodina, classe Lobosia, ordine Amoebida.
Morfologia: Esistono due fasi di sviluppo del patogeno: vegetativo e cistico. Lo stadio vegetativo ha diverse forme: grande vegetativo (tessuto), piccolo vegetativo; forma precistica, simile alle cisti traslucide, formanti.
La cisti (fase di riposo) ha una forma ovale. Una cisti matura contiene 4 nuclei. La forma traslucida è inattiva, vive nel lume divisione superiore colon come commensale innocuo, che si nutre di batteri e detriti.
Una grande forma vegetativa si forma, in certe condizioni, da una piccola forma vegetativa. È il più grande, forma pseudopodi e ha movimento. Può fagocitare gli eritrociti. Trovato nelle feci fresche nell'amebiasi.
coltivazione: su mezzi nutritivi ricco di sostanze nutritive.
Resistenza: Fuori dal corpo, le forme vegetative dell'agente patogeno muoiono rapidamente (entro 30 minuti). Le cisti sono resistenti a ambiente si conservano nelle feci e nell'acqua. Negli alimenti, su frutta e verdura, le cisti persistono per diversi giorni. Muoiono quando vengono bolliti.
Epidemiologia: Amebiasi - malattia antroponotica; la fonte dell'invasione è l'uomo. Il meccanismo di trasmissione è fecale-orale. L'infezione si verifica quando le cisti vengono introdotte con cibo, acqua, attraverso oggetti domestici.
Patogenesi e clinica: Le cisti che sono entrate nell'intestino e poi si sono formate da esse, le forme luminali di amebe possono vivere nell'intestino crasso senza causare malattie. Con una diminuzione della resistenza del corpo, l'ameba penetra nella parete intestinale e si moltiplica. Si sviluppa amebiasi intestinale.
I trofozoiti della forma tissutale sono mobili a causa della formazione di pseudopodi. Penetrano nella parete del colon provocandone la necrosi; in grado di fagocitare gli eritrociti; può essere trovato nelle feci umane. Con la necrosi si formano le ulcere. Clinicamente, l'amebiasi intestinale si manifesta sotto forma di frequenti feci liquide con sangue, accompagnate da febbre e disidratazione. Nelle feci si trovano pus e muco, a volte con sangue.
L'ameba con flusso sanguigno può entrare nel fegato, nei polmoni, nel cervello, provocando lo sviluppo di amebiasi extraintestinale.
Immunità: Instabile, principalmente il collegamento cellulare è attivato.
Diagnostica microbiologica. Il metodo principale è l'esame microscopico delle feci del paziente, nonché il contenuto degli ascessi. organi interni. Gli strisci sono colorati con soluzione di Lugol o ematossilina. Studi sierologici (RNGA, ELISA, RSK): il più alto titolo di anticorpi nel siero del sangue viene rilevato con amebiasi extraintestinale.
Trattamento: Applicare metronidazolo, furamid.
Prevenzione: identificazione e trattamento degli escretori cistici e portatori di ameba, misure sanitarie generali.
N. 2 Interferoni. Natura, modalità di ottenimento. Applicazione.
Gli interferoni sono glicoproteine prodotte dalle cellule in risposta all'infezione virale e ad altri stimoli. Bloccano la riproduzione del virus in altre cellule e partecipano all'interazione delle cellule del sistema immunitario. Esistono due gruppi sierologici di interferoni: tipo I - IFN-? e IFN -?; II tipo - IFN-.? Gli interferoni di tipo I hanno effetti antivirali e antitumorali, mentre gli interferoni di tipo II regolano la risposta immunitaria specifica e la resistenza aspecifica.
L'interferone (leucocitico) è prodotto da leucociti trattati con virus e altri agenti. α-interferone (fibroblasto) è prodotto da fibroblasti trattati con virus.
L'IFN di tipo I si lega alle cellule sane e le protegge dai virus. L'effetto antivirale dell'IFN di tipo I potrebbe anche essere dovuto al fatto che è in grado di inibire la proliferazione cellulare interferendo con la sintesi degli amminoacidi.
IFN-? prodotto da linfociti T e NK. Stimola l'attività dei linfociti T e B, dei monociti/macrofagi e dei neutrofili. Induce l'apoptosi di macrofagi attivati, cheratinociti, epatociti, cellule midollo osseo, endoteliociti e sopprime l'apoptosi dei monociti periferici e dei neuroni infetti da herpes.
L'interferone leucocitario geneticamente modificato viene prodotto nei sistemi procariotici (E. coli). Biotecnologie per la produzione di interferone leucocitario comprende le seguenti fasi: 1) trattamento della massa leucocitaria con induttori di interferone; 2) isolamento della miscela di mRNA dalle cellule trattate; 3) ottenere il DNA complementare totale usando la trascrittasi inversa; 4) inserimento di cDNA nel plasmide di Escherichia coli e suo clonaggio; 5) selezione di cloni contenenti geni dell'interferone; 6) inclusione nel plasmide di un forte promotore per la corretta trascrizione del gene; 7) espressione del gene dell'interferone, cioè sintesi della proteina corrispondente; 8) distruzione di cellule procariotiche e purificazione dell'interferone mediante cromatografia di affinità.
Interferoni applicare per la prevenzione e il trattamento di numerose infezioni virali. Tuttavia, il loro effetto è determinato dalla dose del farmaco alte dosi rendering di interferone effetto tossico. Gli interferoni sono ampiamente usati per l'influenza e altri acuti problemi respiratori. Il farmaco è efficace nelle prime fasi della malattia, applicato localmente. Gli interferoni hanno un effetto terapeutico nell'epatite B, nell'herpes e anche nelle neoplasie maligne.