Coombs uzorci. Uputstvo za upotrebu "Seta reagensa za određivanje antigena i antitela rezus sistema u ljudskoj krvi" (ags za Coombs test) Serum za Coombs test

Coombsov test je test krvi koji se radi kako bi se otkrilo da li krv sadrži određena antitijela koja mogu biti nesigurna. Ova antitijela se lijepe za crvena krvna zrnca i mogu napasti imunološki sistem, kao i uzrokovati štetu na druge načine. U medicinskoj terminologiji, ova studija se naziva i antiglobulinski test (AGT).

Vrste Coombsovih uzoraka

Postoje dvije vrste Coombsovih testova - direktni i indirektni.

Direktan Coombsov test, također poznat kao direktni (DAT), otkriva auto-antitijela koja se vezuju za površinu crvenih krvnih zrnaca. Ova antitijela se ponekad stvaraju u tijelu zbog određenih bolesti ili prilikom uzimanja određenih lijekova, kao što su prokainamid, metildopa ili kinidin.

Ova antitijela su opasna jer ponekad uzrokuju anemiju uništavanjem crvenih krvnih stanica.

Ovaj test se ponekad naređuje kako bi se dijagnosticirao uzrok žutice ili anemije.

Normalno, Coombsova reakcija je negativna.

Pozitivno za:

• hemolitička bolest novorođenčadi;
• autoimuna hemoliza;
• hemolitičke transfuzijske reakcije;
• medicinski imuni hemolitička anemija.

Indirektni Coombsov test, također poznat kao , koristi se za otkrivanje antitijela na crvena krvna zrnca koja se nalaze u krvnom serumu (serum je bistra žuta tekućina krvi koja ostaje nakon što su crvena krvna zrnca i koagulant eliminirani).

Indirektni Coombsov test se koristi tokom transfuzije krvi kako bi se utvrdilo da li krv davaoca odgovara krvi primaoca. Ovo se zove test kompatibilnosti i pomaže u sprečavanju bilo kakve štetne reakcije na krv davaoca. Ovaj test se preporučuje i trudnicama. Neke žene imaju IgG antitijela, koja mogu proći kroz placentu u fetalnu krv i oštetiti novorođenče, uzrokujući hemolitičku bolest poznatu kao hemolitička anemija.

Procedura

Krv se vadi štrcaljkom iz vene, obično sa stražnje strane šake ili pregiba lakta. Prije toga, mjesto uboda se temeljito dezinficira, a nakon uzimanja krvi stavlja se čista gaza ili vata.

Dobivena krv se pročišćava u laboratoriju i crvena krvna zrnca se odvajaju. Uzorak se zatim testira uzastopno upotrebom različitih seruma i Coombsovih reagensa, koji se kontrastiraju. Ako je aglutinacija (skupljanje crvene boje krvne ćelije), to znači pozitivan rezultat.

Međutim, ako je test negativan, to znači da u krvi postoje antitijela koja djeluju protiv crvenih krvnih stanica. Ovo može ukazivati razne bolesti, kao što je anemija (i prirodna i uzrokovana uzimanjem lijekova), sifilis ili infekcija mikoplazmama. Nakon dobijanja rezultata, ljekar će propisati odgovarajući tretman.

Video

Reakcija aglutinacije za određivanje anti-Rhesus antitijela (indirektni Coombsov test)primijeniti kod pacijenata sa intravaskularnom hemolizom. Kod nekih od ovih pacijenata detektuju se anti-Rhesus antitijela, koja su nepotpuna i monovalentna. Oni specifično stupaju u interakciju s Rh-pozitivnim eritrocitima, ali ne uzrokuju njihovu aglutinaciju. Prisustvo takvih nekompletnih antitijela utvrđuje se indirektnim Coombsovim testom. Da bi se to postiglo, antiglobulinski serum (antitijela protiv humanih imunoglobulina) se dodaje u sistem anti-Rh antitijela + Rh-pozitivni eritrociti, što uzrokuje aglutinaciju eritrocita. Koristeći Coombsovu reakciju dijagnosticiraju se patološka stanja povezana s intravaskularnom lizom eritrocita imunog porijekla, na primjer, hemolitička bolest novorođenčeta: eritrociti Rh-pozitivnog fetusa kombinuju se s nekompletnim antitijelima na Rh faktor koji cirkuliraju u krvi, a koji imaju prošla kroz placentu od Rh negativne majke.

Mehanizam. Poteškoća u identifikaciji nekompletnih (monovalentnih) antitijela nastaje zbog činjenice da ova antitijela, kada se vežu za epitope specifičnog antigena, ne formiraju rešetkastu strukturu i reakcija između antigena i antitijela nije otkrivena ni aglutinacijom, precipitacijom, ili druge testove. Za identifikaciju formiranih kompleksa antigen-antitijelo potrebno je koristiti dodatne test sisteme. Za otkrivanje nekompletnih antitijela, na primjer na Rh antigen eritrocita u krvnom serumu trudnice, reakcija se provodi u dvije faze: 1) eritrociti koji sadrže Rh antigen dodaju se u dvostruka razrjeđenja test seruma i čuvaju na 37°C sat vremena; 2) zečji anti-humani antiglobulinski serum (u prethodno titriranom radnom razblaženju) dodaje se u eritrocite koji su temeljito isprani nakon prve faze. Nakon inkubacije od 30 minuta na 37 °C, rezultati se procjenjuju prisustvom hemaglutinacije (pozitivna reakcija). Potrebno je kontrolisati sastojke reakcije: 1) antiglobulinski serum + crvena krvna zrnca za koja se zna da su senzibilizirana specifičnim antitelima; 2) eritrociti tretirani normalnim serumom + antiglobulinski serum; 3) Rh-negativni eritrociti tretirani test serumom + antiglobulinski serum.

50. Reakcija pasivne hemaglutinacije. Mehanizam. Komponente. Aplikacija.

Indirektna (pasivna) reakcija hemaglutinacije(RNGA, RPGA) temelji se na upotrebi eritrocita (ili lateksa) s antigenima ili antitijelima adsorbiranim na njihovoj površini, čija interakcija s odgovarajućim antitijelima ili antigenima krvnog seruma pacijenata uzrokuje da se eritrociti zalijepe zajedno i ispadnu na dno epruveta ili ćelija u obliku zupčastog sedimenta.

Komponente. Za izvođenje RNGA mogu se koristiti eritrociti ovaca, konja, zečeva, pilića, miševa, ljudi i drugih, koji se pohranjuju za buduću upotrebu tretiranjem formaldehidom ili glutaraldehidom. Kapacitet adsorpcije eritrocita se povećava kada se tretiraju rastvorima tanina ili hrom-hlorida.

Antigeni u RNGA mogu biti polisaharidni antigeni mikroorganizama, ekstrakti bakterijskih vakcina, antigeni virusa i rikecija, kao i druge supstance.

Crvena krvna zrnca senzibilizirana hipertenzijom nazivaju se eritrocitni dijagnostici. Za pripremu eritrocitnog dijagnostikuma najčešće se koriste ovčji eritrociti koji imaju visoku adsorbirajuću aktivnost.

Aplikacija. RNGA se koristi za dijagnostiku infektivnih bolesti, određivanje gonadotropnog hormona u urinu pri utvrđivanju trudnoće, za identifikaciju preosjetljivosti na lijekove, hormone iu nekim drugim slučajevima.

Mehanizam. Reakcija indirektna hemaglutinacija(RNGA) ima značajno veću osjetljivost i specifičnost od reakcije aglutinacije. Koristi se za identifikaciju patogena prema njegovoj antigenskoj strukturi ili za indikaciju i identifikaciju bakterijskih produkata – toksina u patološkom materijalu koji se proučava. U skladu s tim, koristi se standardna (komercijalna) dijagnostika eritrocitnih antitijela koja se dobijaju adsorpcijom specifičnih antitijela na površini taniziranih (tretiranih taninom) eritrocita. Serijska razblaženja ispitivanog materijala pripremaju se u jamicama plastičnih ploča. Zatim se u svaku jažicu dodaje jednaka zapremina od 3% suspenzije crvenih krvnih zrnaca napunjenih antitijelima. Ako je potrebno, reakcija se izvodi paralelno u nekoliko redova jažica sa eritrocitima napunjenim antitijelima različitih grupnih specifičnosti.

Nakon 2 sata inkubacije na 37 °C, rezultati se uzimaju u obzir, procjenjujući izgled sedimenta crvenih krvnih zrnaca (bez mućkanja): s negativnom reakcijom nastaje sediment u obliku kompaktnog diska ili prstena na dno bunara; uz pozitivnu reakciju, pojavljuje se karakterističan čipkasti sediment crvenih krvnih zrnaca, tanak film s neravnim rubovima.

Coombsov test

Direktni Coombsov test je antiglobulinski test (aglutinacija u gelu koji omogućava detekciju potpunih dvovalentnih antitijela), koji otkriva antitijela IgG klase i C3 komponentu komplementa na površini crvenih krvnih stanica. Tipično, antitijela otkrivena direktnim Coombsovim testom imaju široku specifičnost koja nije povezana s dobro utvrđenim antigenom. Pozitivan direktan Coombsov test jasno ukazuje da pacijent ima hemolitičku anemiju, iako ne pate svi pacijenti s pozitivnim direktnim antiglobulinskim testom od ove bolesti. Kod otprilike 10% pacijenata antitijela ili komponente komplementa na membrani crvenih krvnih zrnaca ne mogu se odrediti direktnim Coombsovim testom (test je negativan), ali, ipak, boluju od autoimune hemolitičke anemije. Da bi se razjasnila specifičnost antitijela u takvim slučajevima, koriste se testovi s njihovim eluiranjem. Direktni Coombsov test, pozitivan samo na komplement, obično se odnosi na hladno antitijela tipa IgM. U ovom slučaju IgM antitela nisu prisutni na crvenim krvnim zrncima na bazalnoj tjelesnoj temperaturi. Međutim, zbog činjenice da IgM antitijela aktivno fiksiraju komplement, a komplement ostaje na crvenim krvnim zrncima, kod ovog oblika autoimune hemolitičke anemije (hladna agutininska bolest), Coombsov test će biti pozitivan samo na komplement.

Direktni Coombsov test je pozitivan na autoimunu hemolitičku anemiju uzrokovanu toplim antitelima, autoimunu anemiju izazvanu lijekovima (prilikom uzimanja metildope, do 20% pacijenata ima pozitivna reakcija), adsorpcioni tip hemolitičke anemije, imunokompleksni tip hemolitičke anemije (test je pozitivan samo na C3), sa autoimunom hemolitičkom anemijom uzrokovanom antitijelima na hladno - bolest hladnog aglutinina (test je pozitivan samo na C3). Kod paroksizmalne hladne hemoglobinurije, direktni Coombsov test je negativan.
U akutnom periodu bolesti, zbog uništavanja crvenih krvnih zrnaca na kojima se veliki broj antitela, sa hemolitička kriza, kao i u slučaju nedovoljne količine antitela tokom hronični tok bolesti, može se uočiti negativan direktni Coombs test.

• Važan uslov za osiguranje kvaliteta laboratorijska istraživanja krv se uzima na prazan želudac, ujutro (prije 12:00).
• 12 sati prije testa treba izbjegavati piti alkohol, pušiti, jesti i ograničiti fizičku aktivnost.
• Ujutro na test krvi možete piti vodu.
• Izbjegavajte uzimanje lijekova; Ako nije moguće prekinuti uzimanje lijeka, morate obavijestiti laboratoriju.
• Preporučljivo je uzeti materijal prije izvođenja bilo kakvih medicinskih dijagnostičkih postupaka.
• Prilikom procjene nivoa hormona kod žena, važno je uzeti u obzir dan menstrualnog ciklusa Kada je najbolje vrijeme za određivanje određenih hormona? Ove informacije možete dobiti od svog ljekara.

Direktan Coombsov test. Ovaj test se koristi za dokazivanje prisutnosti blokirajućih antitijela fiksiranih u crvenim krvnim zrncima djeteta. Pozitivan direktni test ukazuje na senzibilizaciju i služi kao uvjerljiv znak hemolitičke bolesti novorođenčeta i prije pojave drugih kliničkih znakova. Kao izuzetak i samo u vrlo teškim slučajevima, direktni Coombsov test može biti negativan zbog već nastale, gotovo potpune hemolize senzibiliziranih crvenih krvnih stanica.

Direktan Coombsov test se izvodi na sljedeći način: 5 kapi krvi uzete iz pete djeteta stavlja se u epruvetu i dodaje se 5 ml. fiziološki rastvor. Dobro promiješajte i centrifugirajte 10 minuta. Bistra tečnost iznad sedimenta crvenih krvnih zrnaca se odvaja. Zatim ponovo dodajte 5 ml fiziološke otopine, promiješajte i centrifugirajte. Nakon tri puta miješanja sa fiziološkom otopinom, crvena krvna zrnca se dobro isperu. Nakon posljednjeg odvajanja supernatanta, sediment eritrocita u količini od 0,1 ml pomiješa se sa 0,9 ml fiziološkog rastvora. Nanesite 2-3 kapi ove mješavine na stakalce i dodajte jednu kap Coombs seruma. Prisustvo aglutinacije ukazuje da je reakcija pozitivna (pozitivan direktni Coombs test). Ispitivanje treba provesti na sobnoj temperaturi iznad 16° kako bi se izbjegao efekat hladnih aglutinina.

Indirektni Coombsov test služi kao dokaz prisustva slobodnih antitijela u majčinom serumu i izvodi se sa majčinim serumom.

Hemolitička bolest novorođenčeta s Rh inkompatibilnošću obično se manifestira nakon druge trudnoće. Prvo dijete se rađa zdravo, drugo sa znacima blage anemije, a tek nakon treće trudnoće rađaju se djeca sa očiglednim znacima hemolitičke bolesti. Samo presenzibilne žene mogu roditi dijete sa simptomima hemolitičke bolesti tokom prve trudnoće. U nekim slučajevima imunizacija uzrokuje pobačaje i mrtvorođenost. Za početak i težinu bolesti važno je stanje posteljice i trajanje izloženosti aglutininima majke fetusu. Kada se aglutinini pojave 10-14 sedmica prije rođenja, dijete obično doživljava subkliničke oblike. Rana pojava aglutinina, 15-26 sedmica prije rođenja, uzrokuje teške oblike bolesti. U svim oblicima bolesti glavni proces je hemoliza. Posljedica reakcije antigen-antitijelo je hemoliza, oštećenje jetrenih i moždanih kapilara. U zavisnosti od toga koja lezija prevladava, postoje i raznih oblika bolesti. Neki anafilaktički fenomeni su takođe opasni. Dovode do stvaranja supstanci sličnih histaminu, uzrokujući ozbiljna oštećenja ćelija jetre, a posebno ganglijskih ćelija bazalnih ganglija, amonovog roga, oblongata medulla pa čak i cerebralni korteks. Kada su ćelije jetre oštećene, ekstrahepatičnoj žutici se dodaje hepatična žutica. Djeca umiru zbog teških simptoma kernikterusa. Ako prežive, simptomi lezija ostaju nervni sistem(poremećaji ekstrapiramidnog sistema sa koreoatetotičkim pokretima, osebujan plesni hod, usiljeni pokreti glave, ponekad poremećaj koordinacije voljnih pokreta sa čestim padovima, povećan tonus mišića, mentalna retardacija, odnosno sa znakovima tzv. encefalopatija posticteria infantum).

Na površini crvenih krvnih zrnaca nalazi se veliki broj antigena. U zavisnosti od vrste ovih antigena razlikuju se krvne grupe, a najviše proučavane grupe su ABO, Rh, Kell, Duffy i mnoge druge...

Prosječna cijena u vašoj regiji: 2645 od 2645 ... do 2645

1 laboratorija proizvodi ovu analizu u vašem regionu

Opis studije

Priprema za studij: Krv se vadi iz vene, a zatim se serum (krvna plazma bez fibrinogena) dobija prirodnim zgrušavanjem ili precipitacijom fibrinogena. Ispitni materijal: Uzimanje krvi

Na površini crvenih krvnih zrnaca nalazi se veliki broj antigena. U zavisnosti od vrste ovih antigena razlikuju se krvne grupe, a najviše proučavane grupe su ABO, Rh, Kell, Duffy i mnogi drugi sistemi. Normalno u krvi postoje antitela na antigene druge grupe, ali tokom transfuzije krvi, trudnoće, autoimune bolesti itd. otkrivaju se antitela na njihove antigene Nepotpuna antitela na eritrocite

Metoda

Indirektna Coombsova reakcija zasniva se na detekciji aglutinacije (sljepljivanja) crvenih krvnih stanica koje imaju nepotpuna antitela, koji se pojavljuje kada se doda antiglobulinski serum.

U prvoj fazi, crvena krvna zrnca donora (O(I) grupa, Rh+) ​​i test serum se dodaju u jednu epruvetu. Ako su u test serumu prisutna nepotpuna antitijela na crvena krvna zrnca, ona se fiksiraju na površini crvenih krvnih stanica donora.

U drugoj fazi, na staklo se nanose crvena krvna zrnca donora s antitijelima (ako ih ima) i standardni antiglobulinski serum sa antitijelima na humane imunoglobuline. Ako su u prvoj fazi antitijela na eritrocite fiksirana na površini eritrocita, onda kada se dodaju standardni serum crvena krvna zrnca se lijepe zajedno zbog interakcije antitijela.

Referentne vrijednosti - norma
(Indirektni Coombsov test (antiglobulinski test, otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela), krv)

Podaci o referentnim vrijednostima indikatora, kao i sastav indikatora uključenih u analizu, mogu se neznatno razlikovati u zavisnosti od laboratorija!

norma:

Normalno, ne bi trebalo postojati antitijela na vlastita crvena krvna zrnca; kada se radi Coombsov test, ne dolazi do agregacije crvenih krvnih zrnaca.

Indikacije

Studija humoralnog specifičnog imuniteta kod sumnje na autoimune reakcije u organizmu, Rh konflikt između majke i fetusa, utvrđivanje kompatibilnosti krvi između davaoca i primaoca

Povećanje vrijednosti (pozitivan rezultat)

Antitijela na crvena krvna zrnca se otkrivaju kada:

1. Autoimuna hemolitička anemija

2. Hemolitička bolest novorođenčad

3. Sistemske bolesti vezivno tkivo

4. Hronični aktivni hepatitis itd.