Декодиране на резултатите от теста за кръвен серум Ifa vpg. Свързан имуносорбентен анализ

Методика ензимен имуноанализизползвани в различни отрасли на медицината. Но в повечето случаи този метод диагностицира широк спектър от инфекциозни заболяваниякато човешки имунодефицитен вирус, хепатит, херпес и други генитални инфекции. Също така, ензимно-свързаният имуносорбентен анализ се използва за откриване на туморни маркери от различен произход, определяне на хормони и при диагностика репродуктивна функцияорганизъм. Материалът за ензимен имуноанализ е човешка кръв.

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ е лабораторно имунологично изследване, при което се извършват качествени и количествени измервания на антитела (антигени), както и на хормони. Този метод осигурява до 90% точност при установяване на диагнозата на заболяването.

Медицинските лаборатории използват няколко варианта за неговото прилагане, което се отразява на времето за получаване на резултатите. Но средно резултатите от изследването се издават в рамките на 1-10 дни след кръводаряването.

ELISA кръвен тест и тълкуване на резултатите от него

При този вид кръвен тест се установяват антитела от различен тип - това са имуноглобулини от клас M, A, G (JgM, JgA, JgG). Натрупването им става през различни интервали от време. Първи започват да се появяват имуноглобулини от клас М (петия ден от началото на заболяването). Такива имуноглобулини остават в тялото в продължение на пет до шест седмици, след което започват да изчезват от кръвта на тялото. През този период от време се откриват антитела от клас М.

Имуноглобулините от клас G се появяват на второ място (след три до четири седмици). Те остават в тялото няколко месеца или години. По време на ензимния имуноанализ и интерпретацията на неговия резултат може да се установи повишаване на антителата от клас G. Това показва наличието на инфекция или реинфекция.

Антителата от клас А се появяват в кръвта в рамките на две до четири седмици. Но само 20% от тях присъстват в кръвния серум. Останалите са част от секрета на лигавиците. Имуноглобулините от клас А започват да изчезват за период от две седмици до два месеца. Този процесе доказателство за унищожаването на инфекцията в тялото. Ако след възстановяването на човек е извършен повторен ензимен имуноанализ и декодирането на резултата показва наличието на антитела от клас А, това е доказателство за хронична инфекция.

При ензимен имуноанализ декодирането на резултатите може да приеме следните стойности:

• JgM (-), JgG (-), JgA (-) - липса на имунитет към инфекция;
• JgM (-), JgG (+), JgA (-) - наличие на имунитет след ваксинация или след инфекция;
• JgM (+), JgG (-/+), JgA (-/+) - наличие на остра инфекция;
• JgM (+), JgG (+), JgA (+) - наличие на обостряне на хронична инфекция;
• JgM (-), JgG (+/-), JgA (+/-) - наличие на хронична инфекция;
• JgM (-) - възстановяване.

Трябва да се помни, че при ензимно-свързан имуносорбентен анализ при декодиране (+) е положителен резултат, а (-) е отрицателен резултат.

В допълнение към изясняването на класовете антитела в ензимния имуноанализ, техните количествени показатели се намират при декодирането. Но само лекуващият лекар може да даде подробно обяснение за тях.

Кръвният серум е бистра течност с жълт оттенък. След съсирването на кръвта, тя се отделя от кръвния съсирек. Не съдържа фибрин и формени елементи. Кръвният серум се използва при ензимен имуноанализ.

Ензимният имуноанализ на кръвния серум се основава на взаимодействието на антиген с антитяло, едно от които съдържа ензим в структурата си. Когато два компонента взаимодействат, съдържанието на епруветката трябва да промени цвета си. Резултатите се сравняват със стандартна цветна скала и след това се определя наличието на антиген в материала. С други думи, принципът на ензимния имуноанализ на кръвния серум може да се обясни по следния начин:

• приготвят се набори от антигени (например патогени на инфекциозни заболявания, алергени или хормони);
• пациентът дарява кръв за анализ, от който се изолира серум в лабораторията;
• материалът за изследване се добавя към ямките на готови комплекти, след което настъпва реакция антиген-антитяло;
• останалият кръвен серум се отстранява и откритите антитела се разпознават с помощта на индикатори.

ELISA анализът на кръвния серум се счита за надежден. Но в случаите, когато е взета неправилна кръвна проба за анализ или е нарушена техниката на изследване, или лицето се е скрило системни заболявания, резултатите от ензимния имуноанализ на кръвния серум може да са неверни.

Резултатът от имуноензимния анализ е нормален

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ на кръвния серум изследва почти всички хормони щитовидната жлеза, туморни маркери и различни видовеинфекции.

Хормоните на щитовидната жлеза включват тиреоглобулин (TG), тироксин (Т4), трийодтиронин (Т3), свободен тироксин (Т4), свободен трийодтиронин (Т3).

Обикновено се обмисля ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ако е такъв допустими нормихормони на щитовидната жлеза:

• тиреоглобулин (TG) - допустими граници 70 IU / ml;
• тироксин (Т4) - 64-146 nmol / l (50-113 ng / ml);
• трийодтиронин (Т3) - 1,8-2,8 nmol / l (0,8-2,0 ng / ml);
• свободен тироксин (Т4) - 11-25 pmol / l (10-27 pg / ml);
• свободен трийодтиронин (Т3) - 4,49-9,3 pmol / l (2,5-5,8 pg / ml).

В случай на изследване на половите хормони, ензимно-свързаният имуносорбентен анализ се счита за нормален за жените, ако лутеинизиращият хормон (LH) се секретира в тялото в следните граници:

• фоликуларна фаза на цикъла (от първия ден на менструацията до дванадесетия-четиринадесетия) - 2-14 mU / l;
• фаза на овулация на цикъла (от дванадесетия ден до четиринадесетия ден) - 24-150 mU / l;
• лутеална фаза на цикъла (от петнадесетия до шестнадесетия ден до началото на следващата менструация) - 2-17 mU / l.

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ обикновено се приема за мъже, ако половият хормон се произвежда в диапазона от 0,5-10 mU / l.

При изследването на хроничния гонадотропин (CG) референтните стойности зависят от пола на лицето. При възрастни мъже и небременни жени ензимно-свързаният имуносорбентен анализ се счита за нормално ниво на hCG под 5 mU / ml. При бременни жени резултатът зависи от продължителността на бременността и може да варира от 25-49000 mU / ml.

Имуноензимният анализ на кръвта изследва много онкологични показатели. Те включват наличието на пролактин, естрадиол, прогестерон, тестостерон, стероид-свързващ глобулин (SSG) и други маркери. Но тълкуването на резултата от имуноензимния анализ и нормите на тези показатели трябва да се извършват само от лекуващия лекар.

Освен това, този методдиагностицира инфекциозни (например рубеола, морбили, туберкулоза, херпес, сифилис, хепатит, псевдотуберкулоза) и автоимунни заболявания различен вида също и комплекти имунен статусчовек. Но всички показатели и получените резултати трябва да бъдат дешифрирани от квалифициран специалист.

Имунният анализ се основава на взаимодействието на антиген (AG) и антитяло (AT), като се използват различни опции за маркиране на един от компонентите (ензим, радионуклид, флуоресцентно багрило и други). Оценката на реакцията се извършва автоматично на специално оборудване, което прави възможно стандартизирането на тези методи.
В зависимост от вида на използвания етикет и условията за настройка на теста, имуноанализът се нарича имуноензимен (ELISA), радиоимуноанализ (RIA), имунофлуоресцентен и др. Когато реакциите се организират в един или повече етапи, те се означават като директни или косвени. Средата, в която протича реакцията, има значение. Ако реакцията се извършва с реагенти, фиксирани на повърхността, тогава тестът се обозначава като тест с твърда фаза, например ELISA (ензимен имуносорбентен анализ).
В тази статия ще бъде разгледан само ензимен имуноанализ - метод, широко използван в биологията и медицината, както практически, така и фундаментален.

Твърда фаза ELISA- вариант на теста, когато един от компонентите на имунната реакция (антиген или антитяло) се сорбира върху твърд носител, например в ямките на полистиролови плаки. Компонентите се откриват чрез добавяне на белязани антитела или антигени. При положителен резултат цветът на хромогена се променя. Всеки път след добавяне на следващия компонент, несвързаните реагенти се отстраняват от ямките чрез промиване,

I. При определяне на антитела (лява фигура), кръвният серум на пациента, антиглобулиновият серум, белязан с ензима, и субстратът/хромогенът за ензима се добавят последователно към ямките на плочите с адсорбирания антиген.

II. При определяне на антигена (дясна фигура), антигенът (например кръвен серум с желания антиген) се въвежда в ямките с адсорбирани антитела, диагностичен серум срещу него и се добавят вторични антитела (срещу диагностичен серум), маркирани с ензима, и след това субстрата/хромогена за ензима.

Конкурентна ELISAза откриване на антиген: целевият антиген и белязаният с ензим антиген се конкурират помежду си за свързване на ограничено количество имунни серумни антитела.

ELISA се появява в средата на 60-те години и първоначално е разработен като метод за идентифициране на антиген в хистологичен препарат, както и за визуализиране на преципитационни линии в тест за имунодифузия и имуноелектрофореза, а след това започва да се използва за количествено определянеантигени и антитела в биологични течности. В разработването на метода участват E. Engvall и R. Pelman, както и независимо от тях W. Van Veeman и R. Schurs.

Фигура 1. Основен принцип на ELISA.

1) За откриване на антигени.
2) За откриване на антитела.

Методът се основава на специфичното свързване на антитяло с антиген, докато един от компонентите се конюгира с ензим; в резултат на реакцията със съответния хромогенен субстрат се образува оцветен продукт, чието количество може да бъде определени спектрофотометрично (фиг. 1).

Откриването на възможността за имобилизиране на антигени и антитела върху различни носители при запазване на тяхната свързваща активност направи възможно разширяването на употребата на ELISA в различни областибиология и медицина.
Появата на моноклонални антитела послужи като по-нататъшно развитие на ELISA, което направи възможно повишаването на неговата чувствителност, специфичност и възпроизводимост на резултатите.
Теоретично ELISA се основава на данните от съвременната имунохимия и химическата ензимология, познаването на физикохимичните закономерности на реакцията антиген-антитяло, както и на основните принципи на аналитичната химия. Чувствителността на ELISA и неговата продължителност се определят от няколко основни фактора: кинетичните и термодинамичните характеристики на реакцията антиген-антитяло, съотношението на реагентите, ензимната активност и разделителната способност на методите за нейното откриване. IN общ изгледРеакцията антиген-антитяло може да се опише по прост начин:

+[AG]↔[ATAG]

Разнообразието от обекти на изследване от съединения с ниско молекулно тегло до вируси и бактерии, както и необичайно широк спектър от задачи, свързани с различни условия за използване на ELISA, определят развитието на изключително голям брой варианти на този метод .
Всеки вариант на ELISA съдържа 3 задължителни етапа:
1. етапът на разпознаване на тестваното съединение от антитяло, специфично за него, което води до образуването на имунен комплекс;
2. етапът на образуване на връзката на конюгата с имунния комплекс или свободните места на свързване;
3. етапът на превръщане на ензимния етикет в регистриран сигнал.

ELISA класификация

Класификацията на методите ELISA се основава на няколко подхода:

1. Според вида на реагентите, налични в първия етап на ELISA, се разграничават конкурентни и неконкурентни методи.

А) При конкурентен ELISA на първия етап системата съдържа както анализираното съединение, така и неговия аналог, белязан с ензима и конкуриращ се за специфични места на свързване с него.
Б) За неконкурентни методи е характерно присъствието в системата на първия етап само на анализираното съединение и специфични за него свързващи центрове.

2. Всички ELISA методи са разделени на хомогенни и хетерогенни.

Ако и трите етапа на ELISA се провеждат в разтвор и между основните етапи няма допълнителни етапи на разделяне на образуваните имунни комплекси от нереагирали компоненти, методът принадлежи към групата на хомогенните.
Основата на хомогенния ELISA, който обикновено се използва за определяне на вещества с ниско молекулно тегло, е инхибирането на ензимната активност, когато се комбинира с антиген или антитяло. Ензимната активност се възстановява в резултат на реакцията антиген-антитяло.
Когато едно антитяло се свърже с антиген, съдържащ ензимен етикет, ензимната активност се инхибира с 95% по отношение на субстрат с високо молекулно тегло, което се дължи на пространственото изключване на субстрата от активния център на ензима. Тъй като концентрацията на антигена се увеличава, повече антитела се свързват и се запазват повече свободни антиген-ензимни конюгати, които могат да хидролизират субстрата с високо молекулно тегло. Анализът се извършва много бързо, за едно определяне е необходима 1 минута. Чувствителността на метода е доста висока. С него можете да определите веществото на ниво пикомоли.
За хетерогенните методи е типично да се извършва анализ в двуфазна система с участието на твърда фаза - носител и задължителен етап на отделяне на имунни комплекси от нереагирали компоненти (промиване), които са в различни фази (образуват се). имунните комплекси са в твърда фаза, а нереагиралите комплекси са в разтвор). Хетерогенните методи, при които образуването на имунни комплекси на първия етап протича върху твърдата фаза, се наричат ​​твърдофазни методи.
Методите се класифицират като хомогенни-хетерогенни, ако 1-вият етап - образуването на специфични комплекси се извършва в разтвор и след това се използва твърда фаза с имобилизиран реагент за разделяне на компонентите.

3. Според принципа на определяне на тестваното вещество:

а) Директно определениеконцентрация на вещество (антиген или антитяло) според броя на свързващите центрове, взаимодействащи с него. В този случай ензимният етикет ще бъде в получения специфичен AG-AT комплекс. Концентрацията на аналита ще бъде право пропорционална на регистрирания сигнал.
Б) Определяне на концентрацията на дадено вещество чрез разликата между общия брой на местата на свързване и останалите свободни места на свързване. В този случай концентрацията на аналита ще се увеличи и записаният сигнал ще намалее, следователно в този случай има обратна зависимост от големината на записания сигнал.
Характеристики на компонентите, използвани в ELISA.

Ензими

Ензимните етикети имат изключително мощен каталитичен ефект, с който може да реагира една ензимна молекула голяма сумасубстратни молекули. По този начин ензим, присъстващ в незначителни количества, може да бъде открит и количествено определен чрез образуването на продукти, реакцията, която катализира. Друго предимство на използването на ензими като етикети се дължи на наличието в молекулата на множество функционални групи (сулфхидрилни, карбоксилни, тиразинови остатъци и др.), Чрез които молекулите на лигандите могат да бъдат ковалентно свързани.
Ензимните маркери, използвани в ELISA, трябва да имат следните свойства:
– висока активност и стабилност на ензима при условията на анализ, по време на модификация и в конюгат с антитела или други протеини;
– наличието на чувствителни субстрати и простотата на метода за определяне на продукти или субстрати ензимна реакция;
– възможност за адаптиране на субстратните системи към по-нататъшно укрепване;
- липсата на ензима и неговите инхибитори в изследваната биологична течност.
ELISA може да използва поне 15 различни ензима. Най-голямо приложение, в съответствие с горните изисквания, намери пероксидаза от хрян (HRP), алкална фосфатаза (AP) и β-D-галактозидаза (таблица 1). И трите са стабилни и катализират силно чувствителни реакции. В допълнение, продуктите, получени в резултат на реакциите, катализирани от тези ензими, в зависимост от използвания субстрат, могат да бъдат открити не само чрез колориметрични методи, но и чрез флуоресцентни методи. Други ензими се използват много по-рядко. Това се обяснява с по-ниската им специфична активност в сравнение с HRP и AP.

субстрати

Изборът на субстрат се определя основно от ензима, използван като етикет, тъй като реакцията ензим-субстрат е силно специфична.

Основни изисквания към основата:
– осигуряване на висока чувствителност на метода при откриване на ензима в конюгата;
– образуване на добре дефинирани (например оцветени) продукти от реакцията ензим-субстрат;
– субстратът трябва да е безопасен, евтин, достъпен и удобен за използване.

На този моментна много пациенти се предлага един тест - свързан имуносорбентен анализ.

ELISA и неговите приложения

ELISA е специализиран анализ, който се извършва в лаборатория. Процедурата се основава на проявата на реакция на организма, наречена "антиген-антитяло". Този анализ е най-точен - повече от 99%. По време на цялата тренировка практически нямаше грешки.

Анализът се използва широко за диагностициране на различни заболявания. И което е особено ценно, това изследване точно диагностицира заболявания, които протичат в тялото скрито, без симптоми.

Може да се използва за идентифициране на:

• инфекциозни заболявания, предавани по полов път (хламидия, уреаплазмоза, микоплазмоза, сифилис, херпес, ХИВ и др.);
• токсоплазмоза, туберкулоза, хепатит, морбили и др.;
• автоимунни проблеми;
• онкология;
• полови хормони;
• хормони на щитовидната жлеза;
• алергии и непоносимост към храни.

На какво се основава ензимният имуноанализ?

Провеждането на такъв анализ помага да се идентифицират:

• основи на протеиновата природа;
• наличието на вируси, бактерии;
• чужди тела;
• хелминти и др.

Ензимният имуноанализ се състои от 2 различни компонента:

1. имунен отговор;
2. ензимна реакция.

Принцип "антиген-антитяло"заключават, че "антигенът", т.е. чуждо тялоили патогенът навлиза в тялото дозирано заедно с елемента на инфекцията. Тази процедура стимулира проявата на имунен отговор, който предпазва организма от чужда инвазия.

Естеството на тази защита се определя от самия антиген и от самите заболявания, симптоми и т.н. Тази верижна реакция се нарича антиген-антитяло.

За точността на диагностиката всички дейности се извършват в стените на лаборатории и медицински центрове, използват се различни антитела и антигени, които взаимодействат с кръвна проба.

Такъв анализ е насочен към обекти:

Какво е имунен отговор и как да се определи разпознаването на антиген?

Имунната реакция установява биологична връзка между молекулите на клетките на микроорганизмите, които те се опитват да открият. Ирис интегрирана програма, само един от компонентите на цялото изследване, втората част е ензимната реакция.

Процесът на разпознаване на антиген се извършва на ниво свързване на клетката на имунната система с подозрителна чужда клетка. Имунната системаопитва се да разпознае "нас" и "тях" според характеристиките на отделните антигени на тялото. Когато се установи потенциално опасен антиген, чужда клетка в тялото, системата реагира, за да го унищожи.

Антитела и техните видове

Антитяло:

• е проста молекула, намираща се на повърхността на клетка на имунната система;
• е свързващият елемент, който се използва за разпознаване на клетката "приятел или враг".

След получаване необходимата информация, то се предава на клетъчно ниво. Ако е имунна клетка, връзката с антигена се разрушава, иначе защитни функциитялото се активира.

В природата са идентифицирани пет класа антитела, наричани още протеинови структури или имуноглобулини.

Антителата се наричат ​​признаци латиница- A, M, G, D и E и в тестовите анализи се означават със следните буквени символи:

Как се извършва ELISA тестът?

За диагностика се изготвят специализирани полистиренови плаки с 96 клетки. Преди това върху стените на ямките се прилага антиген с адсорбиращи свойства.

Към ямките се добавя серум и в този процес хомоложните антигени на антитялото създават силна верига. Тези малки тела, които не са прикрепени, се измиват. След антителата в клетките се въвеждат имуноглобулинови антитела и специално маркирани ензимни елементи.

Белязаният реагент се инжектира, за да се открият антитела в изследваната кръвна проба. След измиване се въвежда багрило или елемент от хромогенен тип, който насърчава развитието на реакцията и оцветява клетките с материал.

Нивото на оцветяване по отношение на изследвания ензим дава част от количеството антиген в серума.

След това лаборантът, използващ оптичната течност:

• измерва концентрацията на антитела в клетките;
• сравнява ги с контролна проба, която е еталон.
• по специална скала изчислява концентрацията на антитела.

Анализът за хелминти има собствена тестова система, с показатели за изчисляване на нормата на резултатите и отклоненията.

Как да се подготвим за анализа?

При вземане на материала се използва кръвен серум, който се взема само в лабораторни условия. Кръвта се взема от вена, отстранява се от нея профилирани елементи, което може допълнително да навреди на процедурата или да изкриви резултата от анализа. Необходимо е да се направи анализ на празен стомах.

Интерпретация и описание на резултатите от ELISA

Нивото и концентрацията на антитела помага да се определи наличието на чужди вредни микроорганизми в човешкото тяло, а тези показатели също определят наличието на възпалителен процес.

Препис от анализа:

Количественият анализ на ELISA не позволява да се определи точно диагнозата на заболяването, курса и дозировката на лечението.

Недостатъци и предимства на метода

Всеки метод на изследване, дори и толкова модерен и високоточен, има предимства и недостатъци.

Предимствата на ELISA анализа включват:

• Висока чувствителност на теста;
• Специфика на диагностичната техника;
• Висока технология.

Поради високата чувствителност в процеса на диагностика, можете определено да определите желания елемент, дори и с минимално количество антитела.

Недостатъците на изследването включват:

1. той е предразположен да определи характера на заболяването. Следователно в този случай е изключена възможността за "отгатване" на диагнозата;
2. това е скъп метод за изследване.

Кой от анализите е по-добър: ензимен имуноанализ или дуоденален?

Свързан имуносорбентен анализе директен метод, който използва метода на антителата за откриване на антиген чрез свързване с етикети. Това се счита индустриален начинполучаване на резултата и отнема не повече от 60 минути.

След ферментацията се разкрива специфичен етикет-субстрат. Нивото на антителата е подобно на концентрацията на антигени в материала.

Непряк ензимен имуноанализ или дуоденален анализ протича на два етапа:

1. Първоначално се използват белязани антитела, които съответстват на антигените, които трябва да бъдат открити.
2. Приложете белязани антитела към небелязани антитела, идентифицирани в първата стъпка.

Този метод се дължи на двойния контрол на антигена и антитялото.

С дванадесетопръстника лабораторни изследванияантигенът се фиксира върху повърхността на клетката и се свързва с небелязания елемент на антитялото.

Предимството на индиректния анализ е:

• в двойния контрол на тестовия материал и в резултат на това резултата от анализа;
• в подобряване на точността и специфичността на изследователския метод.

Този метод има голяма продължителност във времето и включва няколко допълнителни стъпки. Въпреки загубата на време, точността на резултата надминава всички очаквания. Поради това повечето лекари насърчават индиректния дуоденален анализ.

Къде да даря и колко?

Ако лабораторията разполага с всички необходими реактиви и оборудване, анализът ще бъде готов след 2 дни. Ако се нуждаете от експресен тест, материалът ще бъде обработен след 3-5 часа.

Можете да вземете анализа:

• частна клиника;
• в държавните клиники.

Цената зависи пряко от избраната клиника и нейната ценова политика, средната цена на изследването от 4000 рубли.

Получената информация прави такъв анализ безценен принос към медицината, но плащайки висока цена на изследването, по-добре е да поверите анализа на надеждна клиника с дългогодишен опит.

В крайна сметка държавните клиники и болници не винаги разполагат с всичко необходимо за висококачествено вземане на проби и обработка на кръвен серум. Избор медицински центърза да проведете проучване, трябва да се уверите, че имате съответните международни сертификати.

Благодарение на кръвния тест ELISA:

• може да се определи наличието на хелминти ранни стадииинфекция на тялото;
• може да се планира навреме ефективна схемалечение;
• възможно е да се проведе изследване при възрастни и деца с еднаква точност, поради стабилността на методите.