Pruebas de laboratorio de detección y confirmación del VIH. Pruebas para la infección por VIH: características del procedimiento e interpretación de los resultados. Realización de un inmunoblot

Diagnósticos infección por VIH esencial para un tratamiento eficaz. Para diagnosticar el SIDA, procedimiento estándar examen del paciente. Consta de 2 etapas:

• poner en pantalla;
• inmunotransferencia.

Para hacer un diagnóstico, también se prescribe PCR, prueba rápida.

ELISA

El diagnóstico inicial de SIDA se basa en el uso de proteínas del VIH de laboratorio que atrapan anticuerpos específicos. Después de su contacto con las enzimas del sistema de prueba, el color del indicador cambia. Luego, el esquema de color modificado se procesa con un equipo especial, que determina el resultado de la prueba.

Similar diagnóstico de laboratorio La infección por VIH muestra un resultado 21 días después de la infección. Con la ayuda de ELISA es imposible determinar la presencia del virus. Este método El diagnóstico ayuda a detectar la producción de anticuerpos contra el virus. Se puede observar un proceso similar de 2 a 6 semanas después de la infección.

Los especialistas distinguen 4 generaciones de sistemas ELISA con diferentes sensibilidades. Los médicos suelen utilizar pruebas de tercera y cuarta generación. Estos sistemas se basan en proteínas recombinantes o péptidos de origen sintético, que tienen una precisión y especificidad significativas. ELISA se utiliza para detectar, monitorear la propagación del virus, lo que garantiza la seguridad al verificar la sangre donada. La precisión de dichos sistemas oscila entre el 93 y el 99 %. Pruebas publicadas en Europa Oriental. Para realizar el diagnóstico, el asistente de laboratorio toma sangre venosa (5 ml). Durante 8 horas antes del estudio, se recomienda negarse a comer. El estudio se lleva a cabo más a menudo por la mañana.

Descifrado de datos

Tomará 10 días para recibir los resultados de la prueba. Si el resultado es negativo, entonces el paciente no está infectado. En este caso, el tratamiento no está prescrito. Se detecta un resultado falso negativo:

• hasta 3 semanas después de la infección;
• en la última etapa del SIDA con un sistema inmunológico bajo;
• con una preparación de sangre inadecuada.

Si el resultado es positivo, entonces el paciente está infectado. En este caso, se lleva a cabo IB. Un resultado falso positivo indica la presencia enfermedades concomitantes y preparación inadecuada de la sangre. Si la prueba está indicada para mujeres embarazadas, entonces, en el material recolectado, el médico puede detectar anticuerpos no específicos, cuya producción no está asociada con el virus. El material recolectado se examina en un laboratorio de referencia o de arbitraje. Si el resultado de la nueva prueba es negativo, entonces el primer resultado es falso. En este caso, IB no se lleva a cabo.

Realización de un inmunoblot

El tratamiento para el SIDA se administra cuando se obtiene un resultado positivo en la inmunotransferencia. Este método de diagnóstico se realiza mediante una tira de nitrocelulosa sobre la que se aplican proteínas virales. Para uso del BI sangre venosa, que luego se procesa. Las proteínas que se encuentran en el suero se dividen en grupos según su carga y peso molecular. Para llevar a cabo este proceso, se utilizan equipos especiales.

Si hay anticuerpos contra el virus en el material de prueba, aparecen las líneas correspondientes en la tira. Un IB positivo indica que el paciente es VIH positivo. El resultado dudoso se revela en primeras etapas infección, con tuberculosis y oncología, en mujeres embarazadas. En tales casos, se recomienda repetir el IB.

Un resultado de IB indeterminado indica la presencia de una o más proteínas del virus en la inmunotransferencia. Un cuadro similar se observa con una infección reciente, cuando hay una pequeña cantidad de anticuerpos contra la infección en la sangre. En este caso, el IB será positivo después de un tiempo. resultado incierto este estudio puede estar asociado con la ausencia de infección por VIH en hepatitis, enfermedades metabólicas crónicas, durante el embarazo. En este caso, el IB se volverá negativo o los especialistas identificarán la causa del resultado incierto en el paciente.

estudio PCR

El sistema de defensa se ve afectado en el contexto de la introducción del virus en cuerpo humano. Para periodo de incubación período característico de 3 meses. Por lo tanto, después del contacto sexual con una pareja infectada por el VIH, se recomienda someterse a un diagnóstico de PCR. Le permitirá determinar el ARN del virus. El período durante el cual se recomienda someterse a dicho estudio es de 8 a 24 meses.

Para el diagnóstico final está indicada la donación periódica de sangre para el VIH (1 vez en 3 meses). Debido a la alta sensibilidad esta encuesta permite detectar el virus 10 días después de la infección. También se puede obtener un resultado de PCR falso positivo si hay otra infección presente en el cuerpo del paciente. La investigación por PCR se considera un procedimiento costoso, ya que requiere un equipo especial.

La PCR se prescribe para detectar el virus en las siguientes personas:

• un recién nacido nacido de una madre infectada por el VIH;
• pacientes con IB cuestionable.

Asimismo, esta técnica está demostrada para el control de la concentración del virus en sangre y el estudio de sangre de donantes.

Métodos rápidos de investigación

A métodos modernos Los especialistas en diagnóstico del SIDA derivan pruebas rápidas. Tomará de 10 a 15 minutos descifrarlos. Las pruebas inmunocromatográficas basadas en el flujo capilar proporcionan resultados precisos. Dichos sistemas de prueba se presentan en forma de tiras especiales en las que se aplica sangre o saliva. En presencia de un virus, aparecen 2 tiras en la prueba después de 10 minutos:

• control;
• de colores.

En este caso, el resultado de la prueba es caracter positivo. Un resultado negativo se indica por la aparición de una tira de control. Para confirmar el resultado obtenido, se realiza una IB. Sobre la base de los datos generales, el médico realiza un diagnóstico y prescribe un tratamiento.

Puedes detectar el virus en casa. Para esto, se utilizan kits express especiales. OraSure Technologies1 es un sistema desarrollado en EE.UU. Si se encuentra un resultado positivo después de la prueba, se recomienda al paciente que se someta a examen completo en el centro médico.

Examen del niño

Los bebés recién nacidos que nacieron de madres infectadas se examinan con urgencia. Con la ayuda de métodos serológicos, es imposible detectar con precisión el virus en niños de 5 a 18 meses. Pero el resultado de una encuesta de este tipo es importante al realizar IB.

Puede detectar la infección en niños usando PCR. El ADN del virus es detectado por un especialista en niños del primer mes de vida. Para determinar la concentración de ARN del patógeno, los expertos determinan el provirus de la inmunodeficiencia. Para la investigación, el médico utiliza Sangre pura o su mancha seca. El material se coloca en un tubo de ensayo con conservante EDTA (proporción 1:20). La muestra debe almacenarse a una temperatura que no supere los 8°C (durante 2 días). No se permite la congelación de materiales.

Para obtener una muestra de sangre seca, todo el líquido se aplica a un papel especial. La muestra se puede almacenar por debajo de 8°C. Las tarjetas se utilizan durante 8 meses. Un niño recién nacido debe ser examinado, tomando material para investigación, dentro de los siguientes períodos:

• 48 horas después del nacimiento;
• a la edad de 2 meses después del nacimiento;
• 3-6 meses después del nacimiento.

Si el médico detectó el gen del provirus del VIH unas horas después del nacimiento del bebé, entonces el bebé se infectó intrauterinamente. El virus también se puede contraer durante el parto o durante amamantamiento. Los resultados, que indican la presencia de ADN del virus en 2 muestras, indican el desarrollo de SIDA en el niño. observación dispensario no se requiere si los resultados de la PCR son negativos 4 meses después del nacimiento del bebé.

Si el resultado de la prueba es negativo, pero los síntomas del SIDA están presentes, se recomienda consultar a un médico. Tal clínica puede ser desencadenada por otras enfermedades. La prueba se considera el único y 100% método para diagnosticar un virus. Incluso los profesionales calificados y experimentados no pueden identificar el virus por los síntomas que presenta.

Si después de un tiempo los resultados del paciente son negativos, entonces no hay VIH en el cuerpo.

No tiene en cuenta los síntomas. Pero tal cuadro clinico puede estar asociado con la fobia al SIDA. En este caso, se requiere la ayuda de un psicólogo. Si es necesario, al niño o adulto se le prescribe el tratamiento adecuado.

Los primeros están diseñados para identificar a todas las personas infectadas por el VIH, los últimos están diseñados para identificar a las personas que no están infectadas por el VIH, pero que han dado reacción positiva en las pruebas de tamizaje. Por lo tanto, las pruebas de detección son muy sensibles, es decir, casi no hay falsos negativos, y las pruebas de confirmación son muy específicas, es decir, casi no hay falsos positivos. Juntas, estas pruebas brindan resultados precisos y confiables que pueden detectar productos sanguíneos contaminados y diagnosticar la infección por VIH. Sin embargo, existen factores biológicos que reducen la precisión de estas pruebas; los errores de laboratorio también son posibles. Por lo tanto, todo laboratorio que realice pruebas de anticuerpos contra el VIH debe tener un programa de control de calidad impecable para estas pruebas. No debemos olvidar que la fiabilidad investigación de laboratorio nunca es del 100% y que sus resultados deben considerarse siempre como un complemento al diagnóstico clínico.

Período de ventana y detección temprana de la infección por VIH:

Los anticuerpos contra el VIH comienzan a producirse poco después de la infección, pero el momento de su aparición depende de muchos factores, en particular, de la condición. sistema inmunitario paciente y las propiedades del virus. Es importante tener en cuenta que los anticuerpos pueden estar presentes en la sangre tan pronto como fechas tempranas después de la infección, pero su concentración está por debajo del límite de sensibilidad de algunos métodos (período de ventana). Los primeros sistemas de prueba detectaron anticuerpos en casi todas las personas infectadas por el VIH entre 6 y 12 semanas después de la infección. Los últimos sistemas de prueba, incluido el ELISA de trampa de tercera generación, detectan anticuerpos 3-4 semanas después de la infección. El tiempo entre la infección y el diagnóstico de la infección por el VIH se puede acortar unos días con los métodos de detección del antígeno del VIH y unos días más con los métodos de detección del ARN del VIH. Si se utilizan todos los métodos descritos, el diagnóstico de infección por VIH en la mayoría de los pacientes puede establecerse tan pronto como 2 o 3 semanas después de la infección. Los sistemas de prueba disponibles comercialmente para la detección de anticuerpos contra el VIH tienen una sensibilidad muy alta y aproximadamente la misma, suficiente para detectar a la mayoría de las personas infectadas por el VIH (la llamada sensibilidad epidemiológica). Sin embargo, los diferentes sistemas de prueba difieren en la sensibilidad analítica, es decir, en la capacidad de detectar niveles bajos anticuerpos que se producen antes de que se complete la seroconversión.

Existen sistemas de prueba diseñados para detectar anticuerpos IgM contra el VIH, pero no se usan mucho en diagnostico temprano Infección por VIH, ya que los anticuerpos IgM no siempre se producen inmediatamente después de la infección. Algunos sistemas de prueba de tercera generación detectan simultáneamente anticuerpos IgM e IgG contra el VIH y tienen una mayor sensibilidad analítica.

Ver también: Divulgación del estado serológico respecto al VIH sin remordimientos, Desviación del tabique, Aneurisma vascular: una amenaza oculta para la salud, Detección prenatal; Anomalías cromosómicas, Estrabismo latente (Strabismus latenta, Heterophoria), Riesgo oculto: mujeres y enfermedades del corazón, Sífilis latente (Syphilis latens), Protocolo de polimerasa reacción en cadena con transcripción inversa en tiempo real (RT-PCR, Realtime RT-PCR) CDC para la detección e investigación del virus de la influenza A(H1N1), Rechinar los dientes (bruxismo), Precaución: alérgenos ocultos

… diagnóstico de cualquier enfermedad infecciosa se basa en una comparación de datos epidemiológicos, clínicos y de laboratorio, y la exageración del valor de uno de los grupos de estos datos puede conducir a errores de diagnóstico. El diagnóstico de la infección por el VIH incluye dos etapas: yo escenario - establecer el hecho real de la infección por el VIH; Yo escenario - determinación del estadio de la enfermedad. ESTABLECIENDO EL HECHO DE LA INFECCIÓN POR EL VIH Establecer el hecho de la infección por el VIH en sí (es decir, identificar a las personas infectadas por el VIH), a su vez, también incluye dos etapas: yo escenifico— ensayo inmunoabsorbente ligado(ELISA): el método ELISA es cribado (selectivo) - la selección de individuos presuntamente infectados, es decir, su objetivo es identificar individuos sospechosos y descartar individuos sanos; los anticuerpos contra el VIH se detectan utilizando otros anticuerpos contra los anticuerpos deseados (anticuerpos contra otros anticuerpos). Estos anticuerpos "auxiliares" están marcados con una enzima. Todas las pruebas de detección deben ser muy sensibles para no perder al paciente. Por ello, su especificidad no es muy alta, es decir, ELISA puede dar una respuesta positiva (“probablemente enferma”) en personas no infectadas (por ejemplo, en pacientes Enfermedades autoinmunes: reumatismo, lupus eritematoso sistémico, etc.). La frecuencia de resultados falsos positivos cuando se utilizan varios sistemas de prueba oscila entre el 0,02 y el 0,5 %. Si el ELISA de una persona dio un resultado positivo, entonces para confirmar el hecho de la infección por VIH, es necesario seguir examinándolo. Al realizar ELISA en el 3-5% de los casos, es posible obtener resultados falsos negativos, si la infección ha ocurrido hace relativamente poco tiempo y el nivel de anticuerpos aún es muy bajo, o en la etapa terminal de la enfermedad, caracterizada por daño severo a la sistema inmunológico con violación profunda el proceso de producción de anticuerpos. Por lo tanto, si hay evidencia de contacto con personas infectadas por el VIH, los estudios repetidos generalmente se realizan después de 2 a 3 meses. II etapa — inmunotransferencia(en la modificación de Western Blot, Western blot): es más método complejo y sirve para confirmar el hecho de la infección. Este método no detecta anticuerpos complejos contra el VIH, sino anticuerpos contra sus proteínas estructurales individuales (p24, gp120, gp41, etc.). Los resultados de la inmunotransferencia se consideran positivos si se detectan anticuerpos contra al menos tres proteínas, una de las cuales está codificada por los genes env, la otra por los genes gag y la tercera por los genes pol. Si se detectan anticuerpos contra una o dos proteínas, el resultado se considera dudoso y requiere confirmación. En la mayoría de los laboratorios, el diagnóstico de infección por VIH se realiza si se detectan simultáneamente anticuerpos contra las proteínas p24, p31, gp4l y gpl20/gp160. La esencia del método: el virus se destruye en componentes (antígenos), que consisten en residuos de aminoácidos ionizados y, por lo tanto, todos los componentes tienen un amanecer que difiere entre sí; luego por electroforesis ( corriente eléctrica) los antígenos se distribuyen en la superficie de la tira: si hay anticuerpos contra el VIH en el suero de prueba, interactuarán con todos los grupos de antígenos y esto se puede detectar. debe ser recordado que los anticuerpos contra el VIH aparecen en el 90-95% de las personas infectadas dentro de los 3 meses posteriores a la infección, en el 5-9% de las personas infectadas los anticuerpos contra el VIH aparecen después de 6 meses y en el 0,5-1% de las personas infectadas los anticuerpos contra el VIH aparecen más tarde. En la etapa de SIDA, el número de anticuerpos puede disminuir, hasta su completa desaparición. En inmunología, existe tal cosa como "ventana serológica"- el período desde la infección hasta la aparición de tal número de anticuerpos que se pueden detectar. Para el VIH, este período suele durar de 2 a 12 semanas, en casos excepcionales más tiempo. Durante la “ventana serológica”, una persona está sana según las pruebas, pero en realidad está infectada por el VIH. Se ha establecido que el ADN del VIH puede estar en el genoma humano durante al menos tres años sin signos de actividad y no aparecen anticuerpos contra el VIH (marcadores de infección por VIH). Durante este período ("ventana serológica"), es posible identificar a una persona infectada por el VIH e incluso 1-2 semanas después de la infección usando reacción en cadena de la polimerasa(PCR). Este es un método extremadamente sensible: en teoría, se puede detectar 1 ADN por 10 ml de medio. La esencia del método es la siguiente: utilizando una reacción en cadena de la polimerasa, se obtienen muchas copias de un ácido nucleico (un virus es un ácido nucleico, ADN o ARN, en una cubierta de proteína), que luego se detectan utilizando enzimas o isótopos marcados. , así como por una estructura característica. La PCR es un método de diagnóstico costoso, por lo que no se usa para la detección y de forma rutinaria. DETERMINACIÓN DEL ETAPA DE LA ENFERMEDAD El desarrollo del SIDA se basa, en primer lugar, en la destrucción de los linfocitos T-auxiliares, marcados por anticuerpos monoclonales, grupos de diferenciación, como CD4. En este sentido, el diagnóstico y seguimiento de la progresión de la enfermedad es imposible sin el control de la subpoblación de T-helper, que se lleva a cabo más convenientemente utilizando un clasificador de células láser. Para la infección leve por VIH el número de linfocitos T es un indicador extremadamente variable. En general, se encuentra una disminución en el número de células CD4 (absolutas y relativas) en individuos cuya infección por VIH ocurrió hace al menos un año. Por otro lado, en primeras etapas la infección a menudo resulta ser un número muy elevado de supresores T (CD8) como en Sangre periférica y ganglios linfáticos agrandados. Con SIDA severo la gran mayoría de los pacientes tienen un número total reducido de linfocitos T (menos de 1000 por 1 μl de sangre, incluidos los linfocitos CD4, menos de 22 por 1 μl, mientras que el valor absoluto del contenido de CD8 permanece dentro del rango normal). En consecuencia, la relación CD4/CD8 se reduce drásticamente. La respuesta de los linfocitos T in vitro a los antígenos y mitógenos estándar se reduce estrictamente de acuerdo con el recuento de CD4 relativamente reducido. Para el SIDA avanzado caracterizado por linfopenia general, neutropenia, trombocitopenia (respectivamente, una disminución en el número de linfocitos, neutrófilos y plaquetas), anemia. Estos cambios pueden ser el resultado de la inhibición central de la hematopoyesis debido a lesiones órganos hematopoyéticos virus, así como la destrucción autoinmune de subpoblaciones celulares en la periferia. Además, el SIDA se caracteriza por un aumento moderado en la cantidad de gammaglobulinas con un aumento dominante en el contenido de IgG. Pacientes con síntomas severos El SIDA es a menudo nivel elevado IgA. En algunas etapas de la enfermedad, el nivel de marcadores de SIDA tales como 1-microglobulina, interferón ácido estable, 1-timosina aumenta significativamente. Lo mismo sucede con la secreción de neopterina libre, un metabolito de los macrófagos. Todavía no es posible evaluar la importancia relativa de cada una de las pruebas enumeradas, cuyo número aumenta constantemente. Por lo tanto, deben considerarse en interacción con marcadores de infección por VIH, tanto inmunovirológicos como citológicos. Un análisis de sangre clínico se caracteriza por leucopenia, linfopenia (respectivamente, una disminución en el número de leucocitos y linfocitos). Nivel 1 - " etapa de incubación» - aún no se detectan anticuerpos contra el VIH; el diagnóstico de infección por VIH en esta etapa se realiza sobre la base de datos epidemiológicos y debe confirmarse mediante la detección en laboratorio del virus de la inmunodeficiencia humana, sus antígenos, en el suero sanguíneo del paciente, ácidos nucleicos VIH; Etapa 2 - " etapa de manifestaciones iniciales»- en este período ya existe la producción de anticuerpos:; Etapa 2A - " asintomático» - La infección por VIH se manifiesta únicamente por la producción de anticuerpos; Etapa 2B - " infección aguda por VIH sin enfermedades secundarias "- en la sangre de los pacientes, se pueden detectar linfocitos de plasma ancho - "células mononucleares" y, a menudo, se observa una disminución transitoria en el nivel de linfocitos CD4 (agudo infección clínica observado en 50-90% de las personas infectadas en los primeros 3 meses después de la infección; comienzo del periodo infección aguda, por regla general, antes de la seroconversión, es decir, la aparición de anticuerpos contra el VIH); Etapa 2B - " infección aguda por VIH con enfermedades secundarias» - en el contexto de una disminución en el nivel de linfocitos CD4 y la inmunodeficiencia resultante, aparecen enfermedades secundarias diversas etiologías(amigdalitis, neumonía bacteriana y pneumocystis, candidiasis, infección herpética, etc.); Etapa 3 - " latente» - en respuesta a la progresión de la inmunodeficiencia, la respuesta inmune se modifica en forma de reproducción excesiva de células CD4, seguida de disminución gradual el nivel de linfocitos CD4, en promedio a razón de 0,05-0,07×109/l por año; se encuentran anticuerpos contra el VIH en la sangre; Etapa 4 - " etapa de enfermedades secundarias» - agotamiento de los linfocitos CD4, la concentración de anticuerpos contra el virus se reduce significativamente (dependiendo de la gravedad de las enfermedades secundarias, se distinguen las etapas 4A, 4B, 4C); Etapa 5 - " etapa terminal » - típicamente una disminución en el número de células CD4 por debajo de 0,05 × 109 / l; la concentración de anticuerpos contra el virus se reduce significativamente o es posible que no se detecten anticuerpos.

Diagnóstico de laboratorio de la infección por VIH

Al diagnosticar la infección por VIH, se utilizan 4 grupos de métodos:

1. Determinación de la presencia de un virus, sus antígenos o copias de ARN en materiales de un paciente o infectado por el VIH

Diagnóstico serológico basado en la detección de anticuerpos específicos frente a proteínas de superficie (gp 120 y gp 41) e internas (p 18 y p 24) del VIH.

3. Identificación de cambios patognomónicos (específicos) para la infección por VIH en el sistema inmunitario.

Diagnóstico de laboratorio de infecciones oportunistas (enfermedades asociadas al SIDA).

1. Diagnóstico virológico. El material para el aislamiento del VIH son linfocitos T sanguíneos, leucocitos médula ósea, Los ganglios linfáticos tejido cerebral, saliva, esperma, fluido cerebroespinal, plasma sanguíneo.

El material obtenido se utiliza para infectar un cultivo continuo de linfocitos T (H9). La indicación de VIH en cultivo celular se lleva a cabo por CPP (formación de simplastos), así como por inmunofluorescencia, microscopía electrónica, por actividad pronunciada de transcriptasa inversa.

Los métodos de investigación modernos permiten detectar un linfocito infectado por cada 1000 células.

La detección de antígenos virales en linfocitos T infectados se realiza mediante anticuerpos monoclonales.

A últimos años De importancia decisiva para determinar el pronóstico y la gravedad de la infección por VIH es la determinación del número de copias del ARN del VIH en el plasma sanguíneo mediante el método de reacción en cadena de la polimerasa (TTCR), la llamada carga viral.

Si en pacientes que no reciben terapia, la carga viral está por debajo del límite de detección (menos de 5000 copias de ARN del VIH en 1 ml de plasma), esto indica que no hay progresión o que la progresión es lenta. El grado de infección es mínimo. Una carga viral alta (más de 10.000 copias de ARN en 1 ml de plasma) en pacientes con menos de 300 linfocitos CO4 en 1 µl siempre indica la progresión de la enfermedad.

Diagnóstico serológico. En la actualidad, ha recibido la mayor distribución.

Material a explorar: 5 ml. sangre heparinizada, que se puede mantener refrigerada durante 6-8 horas antes de enviarla al laboratorio, pero no congelada.

Con el objetivo de diagnóstico serológico El SIDA se usa principalmente por métodos inmunoensayo enzimático con inmunoensayos enzimáticos estándar (ELISA).

Este es un método de detección. El principio de funcionamiento se basa en el principio clásico de ELISA directo. Los inmunoabsorbentes son comprimidos de poliestireno con antígeno específico del virus inactivado inmovilizado obtenido a partir del VIH o de forma sintética.

Luego se agrega el suero probado en dilución. La incubación se lleva a cabo en pocillos con antígeno. Después de la unión de AG a AT, las proteínas no unidas se lavan tres veces y luego se agrega a los pocillos un conjugado de anticuerpos contra inmunoglobulinas humanas con un marcador enzimático.

La formación de un complejo AG + AT específico se detecta introduciendo un sustrato para la enzima (una solución de ortofenilendiamina y peróxido de hidrógeno).

Como resultado, el color del medio cambia en proporción a la cantidad de anticuerpos. Los resultados del estudio se tienen en cuenta en un espectrofotómetro.

Los sueros sanguíneos que tienen anticuerpos específicos de virus según ELISA deben investigarse más a fondo mediante inmunotransferencia.

La inmunotransferencia es una prueba de confirmación, ya que detecta anticuerpos contra varias proteinas VIH.

Se basa en el fraccionamiento preliminar por peso molecular (separación) de las proteínas del VIH mediante electroforesis en gel de poliacrilamida seguida de la transferencia de antígenos a una membrana de nitrocelulosa. Luego se aplica el suero de prueba a la membrana. En este caso, los anticuerpos específicos forman un complejo con un antígeno específico (gp.120, gp.41, p.24, p.18). La etapa final del estudio es la detección de anticuerpos contra varias proteínas del VIH.

Para ello, se añaden al sistema anticuerpos contra proteínas humanas marcadas con una enzima o un radioisótopo.

Por lo tanto, en el suero del paciente se detectan (o no se detectan) anticuerpos específicos de virus contra todos o la mayoría de los antígenos del VIH.

3. Estudios del estado inmunológico. Dirigido a identificar:

1) disminución en la proporción de células CD4 / CD8 (en N 2 y >, con SIDA - 0.5 y<);

2) disminución en el contenido de células CD4 (<200 клеток/мл.);

3) la presencia de uno de los signos de laboratorio, que incluyen anemia, leucopenia, trombocitopenia, linfopenia;

4) aumento de la concentración de Ig A e Ig G en el suero sanguíneo;

5) disminución de la respuesta de granulación blástica de linfocitos a mitógenos;

6) ausencia de reacción cutánea GTZ a varios antígenos;

7) aumento en el nivel de complejos inmunes circulantes.

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Anticuerpos contra el VIH 1/2- componentes del plasma sanguíneo, de naturaleza proteica, que impiden la reproducción de la infección por el VIH y neutralizan por completo su impacto negativo.

¿Qué es una prueba de anticuerpos contra el VIH 1/2 (detección)

Análisis de detección de anticuerpos contra el VIH 1,2: un sistema de pruebas que le permite identificar a las personas infectadas con el virus de la inmunodeficiencia. Además de estos, existen las llamadas pruebas de confirmación (auxiliares), cuya tarea es identificar a las personas que no están infectadas con el virus, pero que tienen una reacción positiva al virus durante la detección.

La esencia del estudio de detección de la infección por VIH es determinar los anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia.

Su característica distintiva es una mayor sensibilidad: más del 99,5%. La especificidad de la prueba es que la detección puede dar un resultado falso positivo si el cuerpo del paciente contiene autoanticuerpos.

Idéntico resultado puede detectarse en el caso de un paciente con enfermedad hepática, vacunación antigripal o presencia de alguna enfermedad vírica aguda. En base a esto, para obtener resultados precisos, junto con la detección, generalmente se acostumbra realizar la prueba de confirmación mencionada anteriormente.

Indicaciones de análisis

En la práctica médica, existe una gama bastante amplia de indicaciones para la detección.

El paciente puede ponerse en contacto con el laboratorio si:

• sospecha de infección (si hubo contacto cercano con un portador de infección por VIH);
• con pérdida de peso, fiebre;
• neumonía, que no responde a la terapia convencional;
• enfermedades de naturaleza crónica que surgieron por razones desconocidas;
• en preparación para la cirugía;
• transfusiones de sangre;
• embarazo y planificación familiar;
• Con ganglios linfáticos inflamados;
• Sexo casual.

Personas pertenecientes a un grupo de especial riesgo: drogodependientes y personas que llevan una vida sexual promiscua.

¿Cómo se realiza la detección de anticuerpos contra el VIH? 1/2

El procedimiento implica el cumplimiento de una serie de reglas necesarias:

• el paciente debe donar sangre exclusivamente en ayunas (se permite beber agua);
• deben haber pasado al menos ocho horas desde la última comida;
• el médico debe estar informado sobre qué medicamentos está tomando el paciente y conocer la dosis (si no hay posibilidad de cancelación incluso a corto plazo);
• si el paciente puede retrasar el uso de medicamentos, se recomienda hacerlo 10-15 días antes del día de la manipulación;
• el día antes del inicio de la prueba, es aconsejable que el paciente se niegue a tomar alimentos fritos o grasos, también está prohibido beber bebidas alcohólicas, fumar y limitar el esfuerzo físico intenso.

Cabe señalar que las pruebas de laboratorio para detectar la presencia de infección en niños nacidos de madres portadoras del virus de la inmunodeficiencia tienen sus propios detalles.

Dado que en los primeros meses de vida de un niño, los anticuerpos maternos contra el VIH pueden estar presentes en su sangre, es imposible obtener una imagen objetiva del estado de salud del recién nacido en función de los resultados del análisis, e incluso un resultado negativo. no significa en absoluto que el virus no pueda penetrar la barrera placentaria.

Para obtener datos precisos, las pruebas deben realizarse dentro de los 36 meses posteriores al nacimiento del niño.

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Hay dos objetivos amplios pero muy bien definidos para la prueba o detección de anticuerpos contra el VIH: detección de casos y vigilancia. A la hora de identificar casos, el primer paso es aclarar el estado serológico respecto al VIH de cada individuo para iniciar el tratamiento adecuado o el seguimiento con las medidas apropiadas.

El propósito de la vigilancia epidemiológica es evaluar la prevalencia del VIH, la distribución de los casos de infección y sus tendencias en un grupo o en toda una población.

La sensibilidad de una prueba de anticuerpos contra el VIH es una medida de su capacidad para detectar con precisión estos anticuerpos en una muestra, mientras que la especificidad de una prueba es una medida de su capacidad para confirmar con precisión la ausencia de anticuerpos cuando ninguno está presente en la muestra.

Idealmente, la sensibilidad y especificidad de la prueba debería alcanzar el 100%. En la práctica, ninguna prueba biológica satisface este requisito y, sin embargo, las pruebas de anticuerpos contra el VIH que se utilizan se encuentran entre las pruebas más sensibles y específicas disponibles en la actualidad.

El diagnóstico de laboratorio del SIDA consiste en realizar estudios virológicos, serológicos e inmunológicos de material de pacientes con sospecha de SIDA.

En los estudios virológicos, se pueden utilizar cultivos primarios de células mononucleares sanguíneas para aislar el virus.

El aislamiento e identificación del virus es metódicamente difícil y puede realizarse en laboratorios especializados. El método de diagnóstico más efectivo utilizado actualmente para los exámenes masivos de rutina es la detección de anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana. Los anticuerpos contra el VIH pueden aparecer al final del primer mes de la infección. Presentado por varios autores, el desarrollo de la seroconversión requiere de 4-7 semanas a 6 meses o más. La presencia de anticuerpos es diagnóstica de SIDA o indica un riesgo de desarrollarlo.

Los anticuerpos no son sólo un marcador serológico del SIDA. Revelados en la fase preclínica de la enfermedad, permiten su diagnóstico precoz. Su presencia adquiere especial significado para la detección de portadores.

Los anticuerpos se detectan durante muchos años, casi toda la vida. Los investigadores han establecido un paralelismo en la detección del virus y los anticuerpos contra el mismo, es decir, la presencia de anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia indica una alta probabilidad de que una persona sea portadora del virus.

Los anticuerpos contra el antígeno del VIH, que aparecieron en el período de incubación, continúan produciéndose intensamente con el desarrollo de la enfermedad, ya que la irritación antigénica es estimulada tanto por los viriones liberados de los linfocitos infectados como por los componentes del subvirión que ingresan al torrente sanguíneo durante la descomposición de células infectadas y por linfocitos infectados.

Al mismo tiempo, el provirus integrado en el genoma de las células infectadas permanece inaccesible a los anticuerpos específicos. Esto explica el hecho aparentemente paradójico: cuantos más anticuerpos contra el virus de la inmunodeficiencia humana hay en el suero sanguíneo, más fácil es aislar el virus del paciente.

Esto sucede porque los anticuerpos producidos en respuesta a una infección por virus no son neutralizantes y, por lo tanto, no tienen un efecto notable sobre el virus, sino que simplemente están presentes en el cuerpo con él. Para la detección de anticuerpos (AT) frente al virus del SIDA se han desarrollado una serie de pruebas que permiten realizar investigaciones con un nivel de especificidad y sensibilidad suficientemente alto. Estos son métodos de radioinmunoensayo en fase sólida, radioinmunoprecipitación, inmunofluorescencia, inmunoensayo enzimático e inmunotransferencia.

Los métodos de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), que se caracterizan por una alta sensibilidad, la posibilidad de registro cuantitativo y visual de los resultados de la reacción, han encontrado la aplicación más amplia en la práctica, lo que hace que el método sea accesible para laboratorios de cualquier nivel.

El ELISA utiliza sistemas de prueba nacionales y extranjeros.

Curso clínico de la infección por VIH y SIDA

Se debe tener cuidado con los niños nacidos de madres infectadas. En ausencia de una clínica, un niño se considera infectado si la AT al VIH persiste después de un año. Al recibir un resultado positivo en ELISA, es necesario analizar los sueros que dieron un solo resultado positivo tres veces y confirmar el resultado positivo en un sistema independiente: inmunotransferencia.

La detección de AT en la reacción de ELISA no proporciona información suficiente, ya que no indica el estado del sujeto, sino que solo indica incubación, enfermedad o la presencia de una infección asintomática.

El inmunoblot proporciona más información, ya que la presencia de AT frente a muchos antígenos del VIH es característica de una enfermedad grave, mientras que una reacción con 1-2 antígenos es más característica de un proceso infeccioso leve.

Informativo es el cálculo del número de T (ayudantes) y la proporción de T4 a Te (supresores) de linfocitos, determinados utilizando anticuerpos mono-kponal.

Un criterio importante para la enfermedad puede ser un fuerte aumento en el número de inmunoglobulinas, especialmente A y V. En el análisis clínico general de la sangre, la enfermedad puede estar indicada por linfopenia, leucopenia, eritropenia, trombocitopenia, eosinofilia.

Las pruebas de VIH utilizadas para la vigilancia epidemiológica no tienen que ser tan precisas como las requeridas para fines clínicos.

Sin embargo, cuando la prevalencia del VIH en la población es muy baja, todas las muestras positivas deben volver a analizarse en pruebas adicionales.

La recolección de sangre para una prueba o tamizaje de anticuerpos contra el VIH puede ir acompañada del registro de los nombres de los sujetos (recolección de nombres), o realizarse sin registro de apellidos o información de identificación individual (recolección anónima) (Tabla 1).

La detección anónima sin información de identificación se caracteriza por los siguientes puntos: se utilizan muestras de sangre recolectadas para otros fines; se garantiza el anonimato debido a que no se recogen ni se tienen en cuenta datos de identificación; no se requiere obtener el consentimiento de los sujetos; no se requiere contacto con servicios sociales y de asesoramiento; finalmente, y lo más importante, se minimizan los errores en las estimaciones estadísticas, dependiendo del nivel de participación de la población.

Aunque se pueden obtener datos más precisos de las pruebas anónimas del VIH, este método tiene las siguientes desventajas: no puede eliminar el posible sesgo de selección; los datos sobre el comportamiento de alto riesgo y otras variables importantes no están disponibles y no pueden recopilarse retrospectivamente; no es posible establecer contacto con personas afectadas por el VIH para informarles sobre su condición; el examen sólo puede realizarse en grupos de personas cuya sangre se extrae para otros fines.

En áreas donde se considera que la prevalencia del VIH es muy baja, la vigilancia de la salud pública debe centrarse principalmente en las personas o poblaciones con los comportamientos de mayor riesgo.

La sangre para la prueba del VIH en este grupo de riesgo es más fácil de obtener en centros que se especializan en el tratamiento de enfermedades de transmisión sexual o instalaciones similares.

Si el uso de drogas por vía intravenosa también es común, se deben tomar muestras de sangre de los usuarios de drogas en instalaciones especializadas.

La extracción de sangre una vez cada 3 o 6 meses en los grupos de mayor riesgo de las áreas geográficas donde dichos grupos son más abundantes suele ser suficiente. Una excepción pueden ser los grupos de riesgo, como los usuarios de drogas intravenosas, que pueden requerir exámenes más frecuentes.

La OMS está desarrollando actualmente un sistema de clasificación (estadificación) de enfermedades para la investigación clínica, que también se puede utilizar en ensayos de tratamiento, que también pueden tener valor predictivo.

Sin embargo, dicho sistema no pretende reemplazar las definiciones existentes de SIDA utilizadas en la vigilancia de la atención de la salud.

Actualmente, se están desarrollando en todas partes sistemas de vigilancia planificada (de rutina) del VIH.

Estos sistemas deben adaptarse a la situación epidemiológica actual; por lo tanto, los métodos de muestreo en poblaciones con muy baja prevalencia del virus necesariamente deben ser diferentes a los utilizados donde la prevalencia es moderada o alta.

Tal vigilancia involucra encuestas de rutina de poblaciones bien definidas y accesibles.

En primer lugar, debe incluir aquellos grupos que corren mayor riesgo de infección, y en cada uno de estos grupos debe seleccionarse un número predeterminado constante de individuos para el examen.

En los últimos años, la detección anónima en grupos observables sin tener en cuenta los datos de identificación se ha vuelto cada vez más común como una forma precisa y rentable de vigilancia epidemiológica de la infección por el VIH en el sistema de atención de la salud.

Métodos para el diagnóstico de laboratorio del VIH

En un laboratorio altamente especializado se llevan a cabo:

a) determinación de anticuerpos, antígenos y complejos inmunes circulantes en la sangre; cultivo del virus, detección de su material genómico y enzimas;

b) valoración de las funciones del enlace celular del sistema inmunitario.

El papel principal pertenece a los métodos de diagnóstico serológico destinados a la determinación de anticuerpos, así como antígenos patógenos en la sangre y otros fluidos corporales.

La prueba de anticuerpos contra el VIH se lleva a cabo para:

a) seguridad de las transfusiones y trasplantes de sangre;

b) vigilancia, pruebas para monitorear la prevalencia de la infección por el VIH y estudiar la dinámica de su prevalencia en una población particular;

c) diagnóstico de infección por VIH, es decir,

e) Pruebas voluntarias de suero sanguíneo de personas aparentemente sanas o pacientes con diversos signos y síntomas clínicos similares a la infección por VIH o SIDA.

El sistema para el diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH se basa en un principio de tres etapas.

La primera etapa es la detección, diseñada para realizar análisis de sangre primarios para detectar la presencia de anticuerpos contra las proteínas del VIH. La segunda etapa es referencial: permite utilizar técnicas metodológicas especiales para aclarar (confirmar) el resultado positivo primario obtenido en la etapa de detección. La tercera etapa, experta, está destinada a la verificación final de la presencia y especificidad de los marcadores de infección por VIH identificados en las etapas anteriores de diagnóstico de laboratorio.

La necesidad de varias etapas de diagnóstico de laboratorio se debe principalmente a consideraciones económicas.

En la práctica, se utilizan varias pruebas para identificar a las personas infectadas por el VIH con suficiente grado de certeza:

La prueba ELISA (ELISA) (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) para detectar el primer nivel se caracteriza por una alta sensibilidad, aunque menos especificidad que las siguientes;

Immune blot (Western-blot), una prueba muy específica y más utilizada para diferenciar entre el VIH-1 y el VIH-2;

Prueba de antigenemia p25, eficaz en las etapas iniciales de la infección;

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

En los casos de cribado masivo de muestras de sangre, se recomienda ensayar mezclas de sueros de un grupo de sujetos, recopilados de forma que la dilución final de cada muestra no supere 1:100.

Si la mezcla de sueros es positiva, se analiza cada suero de la mezcla positiva. Este método no conduce a la pérdida de sensibilidad tanto en ELISA como en el inmunoblot, pero reduce los costos de mano de obra y el costo del examen inicial en un 60-80%.

Métodos inmunológicos

el número de ayudantes T,

2. la relación de T4 y T8,

3. estado de hipersensibilidad,

4. función compensatoria del sistema de células T.

Se manifiesta por hiperproducción de inmunoglobulinas, tienen baja afinidad y se consume aún más la materia del organismo.

Inconvenientes: aparecen tardíamente, algunos indicadores inmunológicos pueden estar con otras infecciones.

Métodos clínicos - tal vez. Al igual que en otras enfermedades, las manifestaciones más típicas se registran en etapas posteriores, por lo que el diagnóstico clínico no es muy efectivo.

El método principal, serológico, se implementa en 2 etapas:

1 - examen de detección - muestreo de anticuerpos totales para todas las proteínas del análisis inmunológico.

Esta etapa da un 95% de resultados verdaderos y un 5% de falsos positivos.

2 - método de confirmación - todas las muestras se examinan utilizando un método de confirmación. Esta técnica le permite detectar anticuerpos contra la proteína viral.

Un resultado positivo, cuando se detectan anticuerpos contra al menos 3 proteínas virales, si contra 1 o 2 el resultado es dudoso y requiere un examen adicional.

En el serodiagnóstico primario de la infección por VIH, los anticuerpos totales se determinan mediante pruebas de detección selectiva: ELISA y reacciones de aglutinación.

En la segunda etapa (arbitraje), se usa una prueba más compleja: una inmunotransferencia, que permite no solo confirmar o rechazar la conclusión inicial, sino también hacerlo a nivel de determinación de anticuerpos contra proteínas individuales del virus.

Interpretación de los resultados de la prueba de anticuerpos contra el VIH

Una cantidad bastante grande de factores diferentes afectan el resultado de un análisis de anticuerpos contra el VIH, y entre ellos es importante el tiempo de análisis después de una posible infección.

En la mayoría de los casos, los anticuerpos contra el VIH se pueden detectar de 6 a 12 semanas después de la infección.

Este período desde la entrada del virus en el organismo hasta la aparición de una cantidad detectable de anticuerpos se denomina período de seroconversión positiva o período de “ventana”. Hay casos raros de anticuerpos que aparecen 6 meses después de la infección, y los informes de detección de anticuerpos solo después de 1 año no tienen evidencia. Actualmente, el servicio de diagnóstico utiliza nuevas generaciones de métodos ELISA que pueden detectar anticuerpos contra el VIH 3-4 semanas después de la infección, y ciertas combinaciones de estos métodos, las llamadas estrategias de prueba, reducen el período de "ventana" a 2-3 semanas. es decir .

permiten detectar anticuerpos contra el VIH tan pronto como comienzan a producirse en el cuerpo.

Un resultado negativo significa que no se encontraron anticuerpos contra el VIH en la sangre del sujeto.

Esta condición se llama seronegatividad y generalmente significa que la persona no está infectada.

Un resultado negativo no da ninguna garantía para el futuro. Sólo indica el estado en el momento del examen. Existe una pequeña posibilidad de que la encuesta se haya realizado durante el período de ventana. Por lo tanto, si una persona ha estado previamente en riesgo de contraer el VIH y ha dado negativo, debe volver a hacerse la prueba al menos 6 meses después del evento de riesgo.

Un resultado positivo significa que se encontraron anticuerpos contra el VIH en la sangre del sujeto.

Esta condición se llama seropositividad: una persona está infectada con el VIH. Es importante entender que un resultado positivo solo indica infección por VIH y no SIDA.

Sin embargo, es sumamente importante consultar a un médico para recibir asesoramiento y, si es necesario, asistencia médica para mantener una buena calidad de vida durante mucho tiempo después de recibir un resultado positivo.

Resultado indeterminado. En raras ocasiones, el resultado de una prueba de anticuerpos contra el VIH no está claro.

El laboratorio no puede decir si la persona es seropositiva o seronegativa. En tales circunstancias, es necesario consultar a un médico y hacerse la prueba nuevamente.

El papel decisivo en el diagnóstico de la infección por VIH lo desempeña el diagnóstico de laboratorio, que consiste en la detección de anticuerpos contra el VIH en la sangre por ELISA, seguida de la confirmación de resultados positivos por IB. Este método de diagnóstico de la infección por el VIH permite identificar a las personas infectadas por el VIH con una eficacia del 99%.

Indicaciones para el uso de diversas pruebas de laboratorio y características de la interpretación de los resultados.

Actualmente, para la etapa de tamizaje del diagnóstico de infección por VIH se utilizan kits de reactivos de tercera y cuarta generación basados ​​en el método ELISA. Una característica distintiva de las pruebas de cuarta generación es la capacidad de detectar simultáneamente AH (p24) y AT total, mientras que las pruebas de tercera generación permiten determinar solo AT. Siempre que sea posible, se deben preferir las pruebas de cuarta generación debido a su mayor sensibilidad diagnóstica y la capacidad de detectar infecciones en individuos durante la ventana serológica.

Un resultado negativo en la detección de anticuerpos contra el VIH por ELISA no siempre indica ausencia de infección. Un problema grave son aquellos casos en los que la prueba se realiza durante la ventana serológica, es decir, en las primeras semanas después de la infección, cuando los anticuerpos contra el VIH aún no se han desarrollado en cantidades suficientes. En algunas personas, la ventana serológica puede extenderse por varios meses, por lo que si hay evidencia de exposición a personas infectadas por el VIH, las pruebas se vuelven a realizar después de 2 a 3 meses. Los resultados falsos negativos de la detección de anticuerpos contra el VIH mediante ELISA se pueden obtener en la etapa terminal de la enfermedad, caracterizada por un daño severo al sistema inmunológico con un profundo deterioro de la formación de anticuerpos.

Un resultado positivo de la detección de anticuerpos por ELISA indica la probabilidad de contraer la infección por VIH, pero a veces este resultado puede ser un falso positivo, por ejemplo, si una persona tiene tumores, enfermedades alérgicas, durante el embarazo, con enfermedades autoinmunes, cambios significativos en análisis de sangre bioquímicos, una serie de enfermedades crónicas. En tales casos, se requiere investigación adicional en un laboratorio experto.

Si se obtiene un resultado positivo de detección de anticuerpos contra el VIH por ELISA, se requiere su confirmación. En la primera etapa de confirmación, el análisis se repite en el mismo sistema de prueba en dos pozos, lo que elimina los errores técnicos. Si se confirma el resultado, se repite la determinación de anticuerpos por ELISA en el suero del paciente utilizando dos juegos de reactivos de referencia. Si se obtiene un resultado positivo en al menos uno de estos estudios, se lleva a cabo la tercera etapa de confirmación: un estudio por el método IB, que permite la detección de anticuerpos contra las proteínas individuales del antígeno del VIH.

Los resultados obtenidos por el método IB se interpretan como positivos, dudosos y negativos. Los resultados se consideran negativos (negativos) si no se encuentran anticuerpos contra ninguno de los antígenos del VIH en el suero de prueba o si hay una reacción débil con la proteína p17. La razón más convincente para una reacción positiva es la detección de anticuerpos contra las proteínas de la cubierta del VIH (glucoproteínas gp41, gp120, gp160). El resultado se considera positivo si se detectan anticuerpos contra cualquiera de las dos glicoproteínas del VIH. Si hay una reacción con una sola de las proteínas de la envoltura, en combinación con una reacción con otras proteínas o sin ella, el resultado se considera dudoso, en este caso se recomienda realizar pruebas para detectar el antígeno p24 o el ADN / ARN del VIH. Si se detecta hipertensión p24 o ADN/ARN del VIH, se realiza una nueva prueba con IB 2 semanas después del primer resultado indeterminado y cada 2 semanas a partir de entonces hasta que se obtenga un resultado positivo en la prueba de confirmación. Si a los 6 meses de la primera exploración se obtienen de nuevo resultados indeterminados, y el paciente no presenta factores de riesgo de infección y clínica de infección por VIH, el resultado se considera falso positivo.

A menudo, después de 1-3-6 meses desde el momento de obtener un resultado dudoso, los anticuerpos contra todos los antígenos del VIH aparecen uno tras otro en el suero sanguíneo. En este caso, un resultado dudoso es evidencia de la etapa inicial de la infección por VIH. En algunos casos, se observan resultados dudosos de IB en personas no infectadas que tienen anticuerpos en sus cuerpos que son similares a los verdaderos anticuerpos contra el VIH.

Uno de los signos indirectos de la infección por VIH es una disminución selectiva de las células T colaboradoras CD4+ debido al hecho de que el VIH tiene un tropismo por el receptor de células CD4. Sin embargo, estos cambios pueden estar ausentes en ciertas etapas de la infección por VIH, variar de un paciente a otro y ocurrir en otras enfermedades. Así, en pacientes adultos que se encuentran en la fase latente de la enfermedad, el número de linfocitos CD4+ suele superar los 0,5. 109/l, que corresponde a los valores en personas sanas.

Para el diagnóstico precoz, se utiliza la prueba de infección por VIH. Los métodos para diagnosticar una infección se mejoran constantemente, ya que los síntomas principales de la enfermedad no aparecen de inmediato, haciéndose pasar por otras patologías. Además, en los estudios de laboratorio, el porcentaje de resultados tanto falsos positivos como falsos negativos es alto.

Los sistemas de prueba usan sangre para determinar el VIH, con menos frecuencia usan orina y raspado de la mucosa oral.

Etapas del diagnóstico de la infección por VIH en adultos:

Preliminar: detección que selecciona candidatos en riesgo (presuntamente infectados);

Referencia

Confirmación - etapa de experto.

De etapa en etapa, la complejidad, la intensidad del trabajo y el costo de los métodos de investigación están creciendo.

Términos utilizados en el curso del diagnóstico de VIH:

Antígeno - VIH o sus partes (cápsula, enzimas, lípidos, proteínas).

Un anticuerpo es una célula del sistema inmunológico producida por el cuerpo contra la introducción de una infección viral.

La seroconversión es una respuesta inmunitaria del sistema de defensa frente a la reproducción activa del virus. Inmediatamente después de ingresar al cuerpo, las células del VIH comienzan a dividirse activamente. En respuesta, la concentración de anticuerpos aumenta durante varias semanas. Cuando alcanzan un cierto nivel (seroconversión), los sistemas de prueba están disponibles para el diagnóstico. A medida que cae la concentración del virus, cae el nivel de anticuerpos.

"Período de ventana": el intervalo de tiempo desde el momento de la infección hasta la aparición de la seroconversión, toma de 1,5 a 3 meses. Una persona infectada durante este período es especialmente peligrosa como portadora de la infección, ya que una prueba de VIH arroja un resultado falso negativo, aunque el riesgo de transmitir la enfermedad es extremadamente alto.

Durante la selección, se realiza un inmunoensayo enzimático (ELISA) para determinar los anticuerpos totales contra el VIH-1 y el VIH-2. Muestra resultados precisos no antes de 3 a 6 meses después de la infección, aunque hay excepciones: puede detectar anticuerpos contra el VIH de 3 a 5 semanas después de un contacto peligroso.

Los sistemas de prueba de cuarta generación son los más precisos. Además de los anticuerpos contra el virus, son capaces de determinar también el antígeno del VIH (p-24-capsid), lo que permite detectar el virus incluso en el “período ventana”, antes de la aparición de anticuerpos.

El alto costo de tales sistemas de prueba obliga en muchos países a utilizar sistemas de tercera e incluso segunda generación, que determinan solo la presencia de anticuerpos.

Tales sistemas dan resultados falsos positivos bajo las siguientes condiciones:

Infección durante el embarazo;

Con un resultado positivo del inmunoensayo enzimático, pasan a la siguiente etapa de diagnóstico.

Paso de referencia en el diagnóstico del VIH

Se utiliza un diagnóstico doble con sistemas de prueba más sensibles. Dos resultados positivos son una razón para pasar al siguiente nivel de diagnóstico.

Etapa experta - inmunotransferencia

En esta etapa, se determinan los anticuerpos contra proteínas individuales del virus de la inmunodeficiencia humana.

Etapas de la etapa de experto:

Destrucción del virus en antígenos individuales por electroforesis.

Transferencia de antígenos utilizando el método de transferencia en tiras especiales con proteínas específicas del VIH aplicadas previamente.

Arreglando la reacción que ocurre si la sangre del paciente contiene anticuerpos contra antígenos.

Existe un pequeño riesgo de error: un resultado falso negativo. Es posible si el estudio ocurre en la etapa terminal de la enfermedad o en el "período ventana".

En combinación con otras pruebas, se utiliza el método PCR (reacción en cadena de la polimerasa). Se caracteriza por una mayor sensibilidad al virus, lo que puede conducir a una alta proporción de resultados falsos positivos.

Diagnóstico en niños cuyas madres están infectadas por el VIH

La prueba de tales niños tiene sus propias características: los anticuerpos de la madre contra el VIH pueden estar presentes en la sangre del niño, que atravesó la placenta durante el parto. Pueden durar hasta 15-18 meses desde el nacimiento del bebé. si no hay tales anticuerpos, esto no es una prueba del cien por cien de que el niño no está infectado con el virus.

El diagnóstico de la infección por el VIH en una etapa temprana es esencial. De esto depende la complejidad de la terapia y el desarrollo de complicaciones patológicas. Hasta la fecha, existen muchos métodos de investigación innovadores para identificar un diagnóstico tan terrible. Esto es lo que se discutirá más adelante.

¿Qué métodos están disponibles para diagnosticar la infección por VIH?

De hecho, hay muchos métodos para diagnosticar el VIH. En promedio, se dividen en subgrupos: investigación de laboratorio, examen diferencial y hardware. Además, es necesario tener en cuenta las etapas de las medidas de diagnóstico. De todo esto y otros aspectos hablaremos con más detalle más adelante.

Diagnóstico de laboratorio

El método de diagnóstico en consideración requiere un laboratorio altamente especializado. En tales condiciones, se pueden identificar las siguientes indicaciones:

• Se determinan anticuerpos, antígenos de patógenos y complejos inmunes.
• Cuando se detecta un virus, se cultiva y se detecta material genómico y enzimas.
• Se evalúa la funcionalidad del sistema inmunológico.
• Se realiza vigilancia epidemiológica y seguimiento de la prevalencia del virus de la inmunodeficiencia humana.
• Se estudia la dinámica de distribución y se determina la población.
• Es posible determinar el grado de seguridad del trasplante y la transfusión de sangre.

Si se detecta un patógeno de VIH apropiado, se remite al paciente para un examen adicional. Después de eso, se registra a la persona para controlar aún más la progresión de la enfermedad.

Diagnóstico diferencial

La enfermedad se diferencia por varias razones:

• Ante los primeros síntomas de la infección por VIH, que se encuentra en la fase aguda, especialmente si existe un síndrome similar a la mononucleosis. El diagnóstico se basa en patologías como mononucleosis infecciosa, sífilis, rubéola, adenovirus, leucemia aguda, yersiniosis, hiperqueratosis.
• Si el VIH pasa a la etapa de linfadenopatía generalizada de naturaleza persistente, se diferencian las enfermedades en las que aumentan los ganglios linfáticos. Por ejemplo, leucemia linfocítica, sífilis, toxoplasmosis, linfogranulomatosis. En esta fase, los síntomas del paciente se vuelven más pronunciados.
• Si se detectan patologías secundarias, se diferencia la inmunodeficiencia, que ha surgido en el contexto de tomar ciertos grupos de medicamentos: radioterapia, el uso de medicamentos glucocorticosteroides y medicamentos citostáticos. La inmunidad también se reduce significativamente en enfermedades como el mieloma, la leucemia linfoide, las neoplasias oncológicas, etc.
• Si el VIH se localiza en la cavidad oral, se diferencian las enfermedades de la mucosa oral.

Express Diagnóstico

Hasta la fecha, incluso se han desarrollado pruebas rápidas, gracias a las cuales, después de 15 minutos, es posible determinar la presencia de infección por VIH. Hay varios especies:

• La prueba más precisa es la inmunocromatográfica. La prueba consta de tiras especiales sobre las que se aplica sangre capilar, orina o saliva. Si se detectan anticuerpos contra el VIH, la tira tiene un color y una línea de control. Si la respuesta es no, solo se ve la línea.
• Kits de uso doméstico de OraSure Technologies1. Desarrollador - América. Esta prueba ha sido aprobada por la FDA.
• Existen otras pruebas rápidas, pero no cuentan con la aprobación de especialistas, por lo que no son deseables para la prueba.

Si se revela una reacción positiva al virus de la inmunodeficiencia humana, es necesario realizar adicionalmente un examen apropiado en un entorno clínico.

Diagnostico temprano

El diagnóstico temprano del VIH existe para determinar oportunamente los riesgos de daño inmunológico. Debido a esto, la enfermedad se detiene en las etapas iniciales, como resultado de lo cual la infección de otros órganos internos se reduce al mínimo.

Para diagnosticar de forma independiente la patología en las primeras etapas, preste atención a los síntomas que existen en este caso:

reacción en cadena de la polimerasa

La PCR o reacción en cadena de la polimerasa se utiliza para determinar cualquier agente infeccioso, incluido el virus del VIH. En este caso, se detecta su ARN y el patógeno se puede detectar en etapas muy tempranas (deben pasar al menos 10 días después de la infección).

Este es un diagnóstico bastante costoso, pero en algunos casos puede dar un resultado falso. Por lo tanto, cuando se realiza la detección del VIH, se utilizan adicionalmente otros métodos.

Se necesita la expresión cuantitativa de la reacción en cadena de la polimerasa para determinar la tasa de desarrollo del VIH y las complicaciones, como el SIDA. Esto le permite determinar oportunamente el pronóstico de la esperanza de vida de un paciente infectado por el VIH.

inmunotransferencia

La inmunotransferencia es el último método para examinar a un paciente antes de un diagnóstico preciso. La técnica se basa en el uso de una tira especializada (nitrocelulosa) con proteínas virales. El médico recolecta sangre venosa y luego la envía para su procesamiento. Después de este proceso, las proteínas del suero se separan en una sustancia similar a un gel según el peso molecular y la carga. Para ello se utilizan equipos con campo eléctrico activo. Luego, la tira anterior se coloca en este gel y se seca, es decir, se somete a transferencia. Esto se lleva a cabo en una cámara especializada.

El resultado está determinado por la unión de las proteínas de la sangre a las proteínas aplicadas a la tira de nitrocelulosa. Si el VIH está presente en el cuerpo del paciente, las líneas simples son translúcidas. Hay ciertos indicadores de líneas de identificación que señalan la presencia del VIH. Pero también hay números bajos. En este caso, existe el riesgo de desarrollar la etapa inicial del virus de la inmunodeficiencia humana, la formación de tumores oncológicos, tuberculosis y transfusión de sangre.

prueba ELISA

La prueba ELISA se refiere al método de examen de detección de sospecha de VIH. El estudio se lleva a cabo en el laboratorio. Es allí donde se crean proteínas de enfermedades específicas que pueden atrapar proteínas producidas por el cuerpo humano. Al interactuar con los reactivos, el color del indicador cambia. Por lo tanto, no se detecta el patógeno en sí, sino los anticuerpos contra el virus. Esta prueba puede detectar el virus de la inmunodeficiencia humana en las primeras etapas de desarrollo.

Hay varios tipos de pruebas ELISA, pero solo se utilizan los últimos desarrollos: la tercera y cuarta generación. La técnica se basa en la recolección de líquido sanguíneo de una vena. Hay cierta preparación: el paciente no debe comer durante 8 horas antes de la prueba. Por lo tanto, la sangre se recolecta con el estómago vacío por la mañana.

¿Cómo se realiza el diagnóstico durante el período de incubación?

El período de incubación del virus del VIH es de 90 días. Durante este intervalo, es difícil identificar la presencia de patología, pero esto se puede hacer a través de PCR.

Después de eso, durante todo el año, la persona está bajo la atenta atención de los médicos y se somete a múltiples exámenes. Solo después de este período es posible establecer con precisión el diagnóstico: VIH.

Características del diagnóstico en niños.

Si nace un niño de una mujer diagnosticada con el virus de la inmunodeficiencia humana, se examina al bebé durante los primeros 3 años de vida. El hecho es que los anticuerpos de la madre pueden estar en el fluido sanguíneo del bebé durante este período. Pero al mismo tiempo, incluso los análisis de sangre no confirman la infección. Por supuesto, hay muchos casos en los que la enfermedad se establece inmediatamente después del nacimiento. Obtenga más información sobre el embarazo con la infección por el VIH.

Las primeras pruebas de VIH en un niño se realizan el segundo día después del nacimiento. Luego, después de llegar a los 2 meses, luego cada 4 meses.

Para detectar patología en la infancia, se utilizan métodos de examen serológico, PCR. Es este último tipo de diagnóstico de la enfermedad el que permite identificar el ADN y el ARN del virus en los primeros meses de vida del bebé. Para ello, se extrae sangre del bebé, que posteriormente se introduce en un tubo de ensayo que contiene el conservante EDTA. Además, el material se almacena durante 2 días a una temperatura que no exceda los 8 grados. Pero la sangre congelada no es aceptable. También se puede utilizar fluido de sangre seca, que se obtiene de sangre entera y se seca.

Etapas de diagnóstico

Las medidas de diagnóstico para la detección del virus de la inmunodeficiencia humana se llevan a cabo en tres etapas principales:

• Clasificación previa, también conocida como selección.
• Diagnósticos de referencia.
• Etapa confirmatoria o diagnóstico de expertos.

Cribado - clasificación previa

La etapa preliminar del examen le permite determinar los anticuerpos totales a través de inmunoensayo enzimático, es decir, ELISA. Puede obtener información sobre la presencia del virus tan pronto como 3 meses después de la infección. Pero hubo casos de detección del patógeno en etapas anteriores, después de 3 semanas.

Debe saber que ELISA puede, bajo ciertas condiciones, dar un resultado falso positivo. Esto puede ser durante el período de tener un hijo, con enfermedades autoinmunes (psoriasis, reumatismo, lupus, etc.), enfermedad de Epstein-Bar y otras patologías.

Diagnósticos de referencia

En esta etapa, se utilizan varias pruebas al menos dos veces, como máximo tres veces. Si en dos casos el resultado es positivo, se requiere un paso de confirmación.

Etapa de confirmación - experto

En esta etapa, el diagnóstico se realiza mediante inmunotransferencia. Los anticuerpos se determinan de acuerdo con ciertas proteínas del patógeno. El resultado suele ser exacto, pero hay casos de respuesta falsa positiva. Esto es posible con la etapa terminal del desarrollo del SIDA y durante la pausa de la enfermedad del VIH. Por lo tanto, es importante someterse a un procedimiento adicional después de cierto tiempo.

Errores durante el diagnóstico

Por paradójico que parezca, existe la posibilidad de obtener un resultado falso positivo. Esto suele suceder durante las pruebas en el hogar, especialmente en los casos en que se utilizan pruebas rápidas. En un entorno clínico, esto solo es posible con ciertas enfermedades o condiciones:

• período de embarazo;
• reacción cruzada del cuerpo;
• trastornos patológicos autoinmunitarios;
• resfriados en la etapa aguda;
• neoplasias oncológicas;
• tuberculosis;
• esclerosis.

Característica: si una persona está infectada con virus y hongos, el resultado de la prueba también puede ser falso. Esto es especialmente cierto en condiciones alérgicas.

Preparación para la prueba

Es muy importante seguir las reglas para prepararse para la prueba del VIH, porque la precisión de obtener el resultado depende de ello:

• En primer lugar, debe visitar al especialista adecuado para que pueda darle instrucciones precisas sobre las actividades de preparación.
• Los análisis de sangre siempre se obtienen con el estómago vacío. Por lo tanto, antes de ir a la clínica, no puede comer nada. Su última comida debe ser a más tardar a las 21:00.
• Está prohibido fumar el día de la prueba.
• No beba alcohol la noche anterior.
• Si está tomando algún medicamento, asegúrese de consultar a su médico de antemano. Porque muchas drogas están prohibidas antes de hacerse la prueba del VIH.
• No se recomienda realizar un examen de ultrasonido unos días antes de la recolección del análisis.
• No es recomendable comer alimentos excesivamente grasos y consumir muchos dulces uno o dos días antes del procedimiento.

Diagnóstico de infección por VIH (video)

Puede obtener más información sobre los diversos métodos de diagnóstico del VIH de manos de profesionales calificados. Para ello, mira el siguiente vídeo.