Dom » Joga » Glavne klase antigena. Savremene metode laboratorijske dijagnostike autoimunih bolesti Vezivanje antigena za antigen-specifična antitijela ili T-ćelije

Glavne klase antigena. Savremene metode laboratorijske dijagnostike autoimunih bolesti Vezivanje antigena za antigen-specifična antitijela ili T-ćelije

1673 0

Nekoliko osnovnih hemijskih porodica mogu biti antigeni.

Ugljikohidrati (polisaharidi). Polisaharidi su imunogeni samo kada su povezani sa proteinima nosačima. Na primjer, polisaharidi koji su dio složenijih molekula (glikoproteina) će izazvati imunološki odgovor, od kojih je neki usmjeren direktno na polisaharidnu komponentu molekula. Imuni odgovor, uglavnom predstavljen antitijelima, može se inducirati protiv mnogih tipova molekula polisaharida, kao što su komponente mikroorganizama i eukariotskih ćelija. Odličan primjer antigenosti polisaharida je imuni odgovor povezan s ABO krvnim grupama. Polisaharidi su u ovom slučaju na površini eritrocita.
Lipidi. Lipidi su rijetko imunogeni, ali imuni odgovor na njih može se izazvati ako se lipidi konjugiraju s proteinima nosačima. Stoga se lipidi mogu smatrati haptenima. Imuni odgovori na glikolipide i sfingolipide su također zabilježeni.
Nukleinske kiseline. Nukleinske kiseline su same po sebi slabi imunogeni, ali postaju imunogene kada se vežu za proteine nosače. Nativna spiralna DNK obično nije imunogena kod životinja. Međutim, u mnogim slučajevima zabilježeni su imuni odgovori na nukleinske kiseline. Jedan važan primjer u kliničkoj medicini je pojava anti-DNK antitijela kod pacijenata sa sistemskim eritematoznim lupusom.
Vjeverice. Gotovo svi proteini su imunogeni. Dakle, najčešće se imunološki odgovor razvija na proteine. Štaviše, što je viši nivo kompleksnosti proteina, to je jači imuni odgovor na taj protein. Veličina i složenost proteinskih molekula određuju prisustvo više epitopa.

Vezivanje antigena za antigen-specifična antitijela ili T ćelije

Vezivanje antigena za antitela, interakcija antigena sa B i T ćelijama i kasniji događaji. U ovoj fazi važno je samo naglasiti da kovalentne veze nisu uključene u vezivanje antigena za antitijelo ili T-ćelijske receptore. Nekovalentna veza može uključivati elektrostatičke interakcije, hidrofobne interakcije, vodonične veze i van der Waalsove sile.

Budući da su ove interakcijske sile relativno slabe, spajanje između antigena i njegovog komplementarnog mjesta na receptoru antigena mora se dogoditi na dovoljno velikoj površini da se sve moguće interakcije sumiraju. Ovo stanje je osnova za izuzetnu specifičnost uočenih imunoloških interakcija.

Unakrsna reaktivnost

Budući da makromolekularni antigeni sadrže nekoliko epitopa odvojenih jedan od drugog, neki od ovih molekula mogu se promijeniti bez potpune promjene njihove imunogenetske i antigenske strukture. Ovo ima važne implikacije prilikom imunizacije protiv visoko patogenih mikroorganizama ili ekstremno toksičnih spojeva. Zaista, nije mudro imunizirati se patogenim toksinom. Međutim, moguće je uništiti biološku aktivnost takvog toksina i niza drugih toksina (npr. bakterijskih toksina ili zmijskih otrova) uz održavanje njihove imunogenosti.

Toksin modificiran do te mjere da više nije toksičan, ali i dalje zadržava neke imunohemijske karakteristike naziva se toksoid. Dakle, možemo reći da toksoid imunološki unakrsno reaguje sa toksinom. Shodno tome, moguće je, imunizacijom pojedinca toksoidom, izazvati imuni odgovor na određene epitope koji su sačuvani na toksoidu u istom obliku kao i na toksinu, budući da nisu uništeni tokom modifikacije.

Iako se molekuli toksina i toksoida razlikuju u mnogim fizičko-hemijskim i biološke karakteristike, oni su imunološki unakrsno reaktivni. Dovoljan broj sličnih epitopa omogućava da se izazove imuni odgovor na toksoid i doprinese efikasnoj zaštiti od samog toksina. Imunološka reakcija u kojoj imunološke komponente, bilo da su stanice ili antitijela, reagiraju s dva molekula koji imaju iste epitope, ali se razlikuju na druge načine naziva se unakrsna reakcija.

Kada su dva spoja imunološki unakrsno reaktivna, dijele jedan ili više epitopa, a imuni odgovor na jedno od jedinjenja će prepoznati jedan ili više istih epitopa na drugom spoju i uključiti ga u reakciju. Drugi oblik unakrsne reaktivnosti javlja se kada se antitijela ili ćelije specifične za jedan epitop vežu, obično slabije, za drugi epitop koji nije potpuno identičan, ali po strukturi podsjeća na prvi epitop.

Izrazi "homologni" i "heterologni" se koriste da naznače da se antigen koji se koristi za imunizaciju razlikuje od onog na koji će proizvedene imunološke komponente kasnije reagirati. Izraz "homologan" znači da su antigen i imunogen isti.

Izraz "heterologan" označava da se supstanca koja se koristi za izazivanje imunološkog odgovora razlikuje od supstance koja se kasnije koristi za reakciju s produktima induciranog odgovora. U potonjem slučaju, heterologni antigen može, ali i ne mora, reagirati s imunološkim komponentama. Kada dođe do reakcije, može se zaključiti da heterologni i homologni antigeni pokazuju imunološku unakrsnu reaktivnost.

Iako je specifičnost glavni kriterijum u imunologiji, imunološka unakrsna reaktivnost se javlja na mnogim nivoima. To ne znači da je uloga imunološke specifičnosti smanjena, već ukazuje na to da spojevi s unakrsnom reaktivnošću imaju iste antigene determinante.

U slučajevima unakrsne reaktivnosti, antigenske determinante unakrsno reaktivnih supstanci mogu imati identične hemijske strukture ili se sastojati od identičnih, ali ne i identičnih, fizičko-hemijskih struktura. U gornjem primjeru, toksin i njegov odgovarajući toksoid predstavljaju dvije molekule: toksin je originalna molekula, a toksoid je modificirani koji je unakrsno reaktivan s originalnim (nativnim) molekulom.

Postoje i drugi primjeri imunološke unakrsne reaktivnosti, u kojoj dvije supstance koje je imaju nisu povezane jedna s drugom osim što dijele jedan ili više epitopa, tačnije jedno ili više mjesta koja imaju iste trodimenzionalne karakteristike. Ove supstance su klasifikovane kao heterofilni antigeni. Na primjer, antigeni ljudske krvne grupe A reagiraju s antiserumom pripremljenim protiv polisaharidne (tip XIV) pneumokokne kapsule. Na isti način, antigeni ljudske krvne grupe B reagiraju s antitijelima na određene sojeve Escherichia coli. U ovim primjerima unakrsne reaktivnosti, mikrobni antigeni se nazivaju heterofilni antigeni (u odnosu na antigene krvne grupe).

Adjuvansi

Da bi se pojačao imunološki odgovor na predstavljeni antigen, često se koriste različiti aditivi i ekscipijenti. Adjuvans (od latinskog adjuvare - pomoći) je supstanca koja, kada se pomeša sa imunogenom, pojačava imuni odgovor na taj imunogen. Važno je napraviti razliku između nosača haptena i adjuvansa. Hapten postaje imunogen nakon kovalentne konjugacije sa nosačem; ne može biti imunogen ako se pomiješa sa pomoćnim sredstvom. Dakle, adjuvans pojačava imuni odgovor na imunogene. ali ne daje imunogenost haptenima.

Adjuvansi se koriste za poboljšanje imunološkog odgovora na antigene više od 70 godina. Trenutno raste interesovanje za identifikaciju novih adjuvansa za upotrebu u vakcinaciji, jer mnogi kandidati za vakcinu nisu dovoljno imunogeni. Ovo je posebno važno za peptidne vakcine.

Mehanizam djelovanja adjuvansa uključuje: 1) povećanje biološkog i imunološkog poluživota antigena vakcine; 2) povećana proizvodnja lokalnih inflamatornih citokina; 3) poboljšanje isporuke, obrade antigena i njihove prezentacije (prezentacije) APC, posebno dendritskim ćelijama. Empirijski je utvrđeno da su adjuvansi koji sadrže mikrobne komponente (npr. ekstrakte mikobakterija) najbolji. Patogene komponente uzrokuju da makrofagi i dendritične ćelije eksprimiraju kostimulatorne molekule i luče citokine.

Nedavno je pokazano da takva indukcija mikrobnim komponentama uključuje molekule koji prepoznaju strukture patogenih mikroorganizama (npr. TLR 2) koje eksprimiraju ove stanice. Dakle, vezivanje mikrobnih komponenti za TLR daje ćelijama signal da eksprimiraju kostimulatorne molekule i luče citokine.

Iako je mnogo različitih adjuvansa testirano u eksperimentima na životinjama (Tabela 3.2) i u eksperimentima na ljudima, samo jedan se počeo koristiti za rutinsku vakcinaciju. Trenutno, jedini adjuvansi odobreni za upotrebu u zaštićenim ljudskim vakcinama u SAD su aluminij hidrat i aluminij fosfat.

kao komponenta neorganska so jon aluminija se veže za proteine, uzrokujući njihovo taloženje, što pojačava upalni odgovor, što nespecifično povećava imunogenost antigena. Nakon injekcije, precipitirani antigen se oslobađa s mjesta injekcije sporije nego što je normalno. Štoviše, ako se veličina antigena poveća kao rezultat precipitacije, to će povećati vjerovatnoću da će makromolekula biti podvrgnuta fagocitozi.

Mnogi adjuvansi se koriste u eksperimentima na životinjama. Jedan od najčešće korišćenih adjuvansa je Freundov kompletan adjuvans (FCA), koji se sastoji od ubijenih Mycobacterium tuberculosis ili M.Butyricum, suspendiranih u ulju. Nakon toga se od njih priprema emulzija s vodeni rastvor antigen. Emulzija voda u ulju koja sadrži pomoćno sredstvo i antigen omogućava da se antigen polako i postepeno oslobađa, produžavajući izloženost imunogena primaocu. Drugi mikroorganizmi koji se koriste kao pomoćna sredstva su Bacillus Calmette-Guerin (BCG) (atenuiran Mycobacterium), Corynebacterium parvum i Bordetella pertusis.

U stvari, mnogi od ovih dodataka iskorištavaju sposobnost molekula koje eksprimiraju mikrobi da aktiviraju imunološke stanice. Takvi molekuli uključuju lipopolisaharide (LPS), bakterijsku DNK koja sadrži nemetilirane CpG dinukleotidne ponavljanja i bakterijske proteine toplotnog šoka. Mnogi od ovih mikrobnih adjuvansa vezuju receptore koji prepoznaju strukture patogena kao što su TLR. Vezivanje ovih receptora, izraženo u mnogim tipovima ćelija urođenog imunog sistema, promoviše stimulaciju adaptivnog odgovora od strane B i T limfocita. Na primjer, dendritske ćelije su važni APC kroz koje

Tabela 3.2. Poznati adjuvansi i njihov mehanizam djelovanja djelovanje mikrobnih adjuvansa. Oni odgovaraju lučenjem citokina i ekspresijom kostimulacijskih molekula, koji zauzvrat stimuliraju aktivaciju i diferencijaciju antigen specifičnih T stanica.

Adjuvans	Compound	Mehanizam djelovanja
Aluminijum hidroksid ili fosfat (stipsa)	Aluminijum hidroksid gel
Aluminij sa dipeptidom izolovanim iz miko-bakterija	Alumina hidratantni gel sa muramil dipeptidom
Aluminijum sa Bordetella pertusis	Omorika glinice hidratiziram ubijenom Bordetella pertusis	Povećano usvajanje APC antigena; usporavanje oslobađanja antigena; indukcija kostimulatornih molekula na APC
Završite Freundov pomoćnik	Emulzija voda-ulje sa ubijenim mikobakterijama	Povećano usvajanje APC antigena; usporavanje oslobađanja antigena; indukcija kostimulatornih molekula na APC
Nepotpun Freundov adjuvans	Emulzija voda-ulje	Povećano usvajanje APC antigena; odgođeno oslobađanje antigena
Imunostimulirajući kompleksi	Otvorene ćelijske strukture koje sadrže holesterol i mješavinu saponina	Oslobađanje antigena u citosol; omogućavaju induciranje citotoksičnih odgovora T-ćelija

R. Koiko, D. Sunshine, E. Benjamini

Imunološki odgovor organizma: definicija, uslovi razvoja. Antigeni: struktura, svojstva, klasifikacija. T-ovisni i T-nezavisni antigeni. Superantigeni.

imuni odgovor- ovo je složena višekomponentna kooperativna reakcija IS organizma, izazvana antigenom i usmjerena na njegovu eliminaciju. Fenomen imunološkog odgovora je u osnovi imuniteta.

Imunološki odgovor zavisi od: 1 Antigena – svojstva, sastav, molekularna težina, doza, učestalost kontakta, trajanje kontakta; 2 Stanja tela - imunološka reaktivnost; 3 Uslovi okoline.

Imuni odgovor karakteriše: 1 Klonalnost - postoje klonovi T- i B-limfocita koji su specifični za određene epitope (njihov totalitet se naziva determinantna grupa); 2 Specifičnost; 3 Raznovrsnost AT i TCR; 4 Formiranje u ćelijama i molekulima efektora i memorijskih ćelija 5 Specifični mehanizmi delovanja su kompatibilni sa nespecifičnim;6 Kontrolisanje genoma;7 Podela na prirodne i veštačke;

Komponente imunološkog odgovora: 1 antigeni; 2 ćelije koje obrađuju antigen i predstavljaju antigen (imakrofagi); 3 ćelije koje prepoznaju antigen (B- i T-limfociti i njihove subpopulacije), 4 molekule koje prepoznaju antigen (VCR, glavni molekuli kompleksa histokompatibilnosti); 5 citokina - hematopoetski, rast, regulator, receptor.

imuni odgovor razvija na periferiji limfoidni organi. Makrofagi, T- i B-limfociti, fibroblasti i retikularne ćelije su uključeni u AI. Razlikovati humoralni, ćelijski mješoviti imunološki odgovor, čiji se razvoj odvija u nekoliko faza.

GMO(formiranje antitijela) - Osnova humoralnog imunološkog odgovora je aktivacija B-limfocita i njihova diferencijacija u plazma ćelije (plazmocite), koje sintetiziraju antitijela (imunoglobuline) specifična za antigen koji je izazvao imuni odgovor.

KIO- složena kooperativna reakcija organizma, indukovana antigenom i realizovana kroz T-sistem imuniteta u saradnji sa APC, koja se završava formiranjem antigen specifičnih T-limfocita koji vrše regulatorne i efektorske funkcije. Zadaci: razvoj i regulacija humoralnog i ćelijskog odgovora, eliminacija antigena iz organizma.

Makrofagi učestvuju u prirodnoj i specifičnoj AI. Zreli makrofagi imaju AG receptore (Fc), C3b receptore, MHC antigene. U ranoj fazi IE, makrofagi obavljaju funkciju predstavljanja AG - kao rezultat fagocitoze, AG se cijepa, a njegov epitop se prenosi na membranu u kombinaciji s MHC2. U završnoj fazi IE, makrofag se aktivira limfokini.

B-limfociti- prepoznaju AH, učestvuju u GMO, imaju receptore za eritrocite miša, Fc, C3b, za MHC AG. Oni nemaju specifične receptore za prepoznavanje antigena. Receptor za prepoznavanje antigena je molekul imunoglobulina.

T-limfociti- podijeljeni su u četiri glavne subpopulacije - T-pomagači, T-supresori, T-ubice i T-efektori. Svi imaju receptore za eritrocite ovaca, za imunoglobuline, proteine sistema komplementa (ali nemaju receptore za C3b), za interferone, za antigene, imaju MHC1 i MHC2 antigene. Subpopulacije T-limfocita su heterogene, pa se T-pomagači dijele u dvije grupe - T-pomagače 1 i T-pomagače 2. Prvi su CIO aktivatori, a drugi su GMO. T-limfociti pružaju ćelijski, antivirusni, antibakterijski imunitet, HNL.

Antigeni- genetski vanzemaljske supstance koje, kada se unesu u organizam, mogu da stimulišu imuni odgovor (ćelijski odgovor, stvaranje antitela, alergija, tolerancija) i specifično reaguju sa formiranim antitelima kako in vivo tako i in vitro.

Strukturni i funkcionalni dijelovi molekule Ag:

1. Stabilizacija (nosač)- 97-99% mase: makromolekule (proteini), ćelije (bilo koje), pod veštačkim uslovima mogu biti korpuskularne čestice. Svojstva nosača: visoka molekularna težina, složena struktura. Funkcija - indukcija imunološkog odgovora.

2. Determinantna grupa (epitop): oligosaharidi , oligopeptidi , NH2 grupa . Osobine: mala molekularna težina , kruta struktura , slaba metabolička aktivnost , strano telu . Funkcija - specifičnost antitijela i efektorskih T-limfocita u imunološkom odgovoru.

Epitopi AG: površinski, skriveni (konformacijski), T-ćelije (TCR se prepoznaju), B-ćelije (RCR se prepoznaju). Epitopska gustina je broj u 1 Ag molekulu.

AG svojstva:

Imunogenost je sposobnost induciranja AI u tijelu.

Antigenost je sposobnost specifične interakcije.

Pun(puna) Ag ima dva svojstva. Hapten(nepotpuno) – Ag, nije imunogena.

klasifikacija:

1. Po imunogenosti: jaka(primjenjuje se velika doza, ali su pokazatelji imuniteta niski), slab(uzrokuje visok nivo imuniteta u malim dozama), superantigeni (Mikrobni antigeni u interakciji sa MHC klase II APC i TKR molekulima T-limfocita, izvan jaza koji se vezuje za antigen, tj. ne u aktivni centri. Oni se pridružuju, takoreći, na strani molekula MHC II i TCR. Blokiraju mogući specifični imunološki odgovor i uzrokuju poliklonalnu aktivaciju limfocita, oslobađanje citokina i potom smrt T-limfocita sa simptomima imunodeficijencije).

2. Po stranosti za organizam - nosilac Ag: hetero- (kseno-) Ag (za ljude to je Ag bakterija, biljaka, virusa, životinja), homo- (alo-) Ag je Ag drugih jedinki ove vrste, Auto-Ag: kasne bjelančevine (sperma, mlijeko), supstance "barijernih" organa, sopstvene ćelije sa modifikovanom površinom, embrionalno tkivo.

3. U zavisnosti od vrste AI: imunogeni, alergeni, tolerogeni, transplantacija.

4. Prema povezanosti imunog odgovora sa timusom: T-ovisni, T-nezavisni.

Antigeni mikroorganizama. Antigenska struktura bakterija. Tipični, vrsta, grupni antigeni. zaštitni antigeni. Unakrsni reagujući antigeni, što znači.

Bakterijski antigeni:

Specifično za grupu (dostupno u različitim vrstama istog roda ili porodice)
Specifične vrste (kod predstavnika jedne vrste)
Specifičan tip (odredite serološku varijantu unutar jedne vrste)
Specifičan soj
Stadiospecific
Unakrsno reaktivni antigeni (slični, isti kod ljudi i mikroba)

Po lokalizaciji:

OAS– somatski (LPS ćelijski zid)

N-Ag- flagela (proteinska priroda)

K-Ag– kapsularni (PS, proteini, polipeptidi)

Ag Piley(fimbrijalni)

Cytoplasmic Ag(membrana, CPU)

Egzotoksini(proteini)

Ektoenzimi

OAS- lipopolisaharid stanične stijenke gram-negativnih bakterija. Sastoji se od polisaharidnog lanca i lipida A. Polisaharid je termostabilan, hemijski stabilan, slabe imunogenosti. Lipid A - sadrži glukozamin i masne kiseline, ima jak adjuvans, nespecifičnu imunostimulirajuću aktivnost i toksičnost. Općenito, LPS je endotoksin. Već u malim dozama izaziva groznicu zbog aktivacije makrofaga i oslobađanja IL1, TNF i drugih citokina, degranulocita i agregacije trombocita.

H-AG dio je bakterijskih flagela, a njegova osnova je protein flagelin. Thermolabile.

K-AG je heterogena grupa površinskih, kapsularnih AG bakterija. U kapsuli su. Sadrže uglavnom kisele polisaharide, koji uključuju galakturonsku, glukuronsku kiselinu.

Zaštitni antigeni- za dobijanje vakcina koriste se epitopi egzogenih antigena (mikroba), antitela protiv kojih imaju najizraženija zaštitna svojstva, koja štite organizam od ponovne infekcije. Prečišćeni zaštitni antigeni mogu biti "idealni" preparati vakcine.

Unakrsno reaktivne antigenske determinante nalazi se u MO i ljudima/životinjama. Mikrobi razne vrste a kod ljudi postoje uobičajene, slične strukture AH. Ove pojave se nazivaju antigenska mimikrija. Često, unakrsno reaktivni antigeni odražavaju filogenetsku zajedništvo ovih predstavnika, ponekad su rezultat nasumične sličnosti u konformaciji i nabojima - AG molekula. Na primjer, Forsmanov AG se nalazi u eritrocitima ovnova, salmoneli i zamorcima. Hemolitički streptokoki grupe A sadrže antigene unakrsne reakcije (posebno M-protein) koji su uobičajeni s antigenima endokarda i glomerula ljudskih bubrega. Takvi bakterijski antigeni uzrokuju stvaranje antitijela koja unakrsno reagiraju s ljudskim stanicama, što dovodi do razvoja reumatizma i poststreptokoknog glomerulonefritisa. Uzročnik sifilisa ima fosfolipide slične strukture onima koji se nalaze u srcu životinja i ljudi. Stoga se kardiolipinski antigen srca životinja koristi za otkrivanje antitijela na spirohetu kod bolesnih ljudi (Wassermannova reakcija).

ODELJENJE ZA ZDRAVLJE ADMINISTRACIJE KRASNOJARSKE REGIJE

Regionalni centar za prevenciju i kontrolu AIDS-a i drugih zaraznih bolesti

Klinički odjel laboratorijska dijagnostika FUV Krasnojarske državne medicinske akademije

"ODOBRI"

Šef odjela za zdravstvo

Uprava Krasnojarskog teritorija

Schneider I.A.

"______" __________ 1999

SAVREMENE METODE LABORATORIJSKE DIJAGNOSTIKE AUTOIMUNSKIH BOLESTI

Krasnojarsk - 1999

Drugo izdanje sa izmenama i dopunama 2002

^ Olhovski Igor Aleksejevič -kandidat med. nauke, glava. laboratorijsko-dijagnostičko odeljenje Regionalnog centra za AIDS, vanredni profesor katedre KLD FUV KrasGMA;

Izyurova Olga Yurievna- Asistent Katedre KLD FUV KrasGMA.

Protopopova Natalija Borisovna- Asistent Katedre KLD FUV KrasGMA;

^ Ševčenko Nailja Minvalejevna - Kandidat biol. nauke, glava. Odjeljenje za AIDS i AIDS marker infekcije Regionalnog centra za AIDS;

______________________________________________________

Potreba za izradom smjernica za laboratorijsku dijagnostiku autoimunih bolesti (AID), posebno u ranim stadijumima bolesti, određena je širokom rasprostranjenošću ove patologije i nezadovoljavajućim metodama liječenja.

Preporuke ukratko daju podatke o etiologiji, glavnim karikama u patogenezi AID-a i daju klasifikaciju AID-a. Ukratko su prikazani i podaci o kliničkim manifestacijama niza difuznih lezija vezivnog tkiva.

Glavni fokus preporuka je na metodama serodijagnostike AIDS-a. Uspješno sastavljene tabele jasno pokazuju prednosti određivanja autoantitijela na određene antigene za rješavanje pitanja verifikacije dijagnoze, predviđanja toka bolesti i identifikacije njenih kliničkih i imunoloških podtipova. Neke metode za određivanje seroloških markera AID-a su ukratko i pristupačne.

^ Profesor Katedre za kliničku

imunologija NMI,

UVOD:

Autoimune bolesti pogađaju 5-7% svjetske populacije, razvijaju se 3-10 puta češće kod žena nego kod muškaraca i smatraju se najčešćim zajednički uzrok hronična ljudska patologija. Postoji više od 40 nozoloških oblika koji se klasifikuju kao ljudske autoimune bolesti.

Trenutno se problem autoimunizacije posmatra kao opšti biološki, usko povezan sa problemima kao što su imuni nedostaci i onkogeneza, a autoimuni procesi se posmatraju ne samo kao patološki, već i kao važna karika u homeostatskim reakcijama organizma. Općenito je poznato da uloga imunog sistema nije samo zaštita organizma od uzročnika zaraznih bolesti i antitumorska zaštita, već i osiguravanje procesa proliferacije i diferencijacije različitih tkiva i organa, eliminacije i korištenja odumirućih struktura tkiva. .

IN savremena književnost Uobičajeno je razlikovati pojmove „autoimuni procesi (autoimunizacija)“ i „autoimune bolesti“.

^ 1. AUTOIMUNI PROCESI

Autoimuni procesi su procesi imunološkog sistema koji reaguju na normalne (nepromijenjene) antigene vlastitog tkiva – autoantigene.

Jedan broj autora smatra da modifikovane antigene sopstvenog tkiva ne treba klasifikovati kao prave autoantigene. Njihova modifikacija može biti rezultat bioloških, hemijskih ili fizičkih faktora. Netačno je klasifikovati kao prave autoantigene takođe integrisane (na primer, zbog integracije virusnog i ćelijskog genoma) ili kompleksne antigene (zbog kombinacije egzo- ili endogenog haptena sa autoantigenom). Budući da su modificirani, integrirani i složeni antigeni, zapravo, strani tijelu. Istovremeno, pod određenim uslovima mogu postati polazna tačka za patološke autoimune promene u organizmu.

Poznate činjenice omogućavaju nam da sve autoimune procese podijelimo na homeostatske (fiziološke) i patološke (šema 1). Prva grupa nema patogenetski značaj u razvoju hronične upale. Titar normalnih autoantitijela na DNK, proteine citoskeleta, hormone, medijatore i njihove receptore povećava se tijekom stresa, trudnoće, starenja i raznih bakterijskih i virusnih infekcija. "Normalna" autoantitijela ne izazivaju citotoksične reakcije i vjerovatno će biti uključena u provedbu regulatornih i "sanitarnih" funkcija.
^

Shema 1. Klasifikacija autoimunih procesa

	Autoimuni procesi

G homeostatski			Patološki

Sanitarije	Regulatorno

			Autoimune bolesti	Bolesti sa autoimunim poremećajima
	imunološki sistem	Imuno-endokrini

^ 2. PODACI O PATOGENEZI:

Patološki autoimuni procesi razvijaju se na bazi fizioloških i nisu suštinski nove reakcije. Očigledno, neadekvatne aktivnosti "sanitarnih" autoimunih procesa uzrokovane organsko nespecifičnim bolestima kao što su SLE, polimiozitis, primarna bilijarna ciroza itd., kao i sekundarne autoimune lezije kod opekotina, postinfarktnog sindroma itd. Regulatorni autoimuni procesi van kontrole očito dovode do razvoja autoimunih bolesti specifičnih za organ: autoimune hemocitopenije, endokrinopatije itd.

Glavne vrste autoimunih procesa mogu biti povezane sa:

odgovor na autoantigene na koje ne postoji prirodna tolerancija (slaba ekspresija, nedostupnost limfocita ili nedostatak njihove prezentacije Ja+ A-ćelijama;
zaobilazeći postojeću samotoleranciju saradnjom T-pomoćnika, reagujući na „strano“, sa B-ćelijama, reagujući na autoantigene;
istinsko ukidanje tolerancije na auto-antigene

Razvoj patoloških autoimunih reakcija može biti posljedica sljedećih mehanizama oštećenja:

Citoliza zavisna od komplementa;
Indukcija ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitijela;
Interakcija sa ćelijskim receptorima za prirodne ligande (aktivacija ili blokada djelovanja endogenih regulatora);
Promjene u funkcionalnoj aktivnosti stanica različitih organa i tkiva;
Indukcija apoptoze (programirana ćelijska smrt);
Imunokompleksne reakcije (poremećeni klirens i taloženje kompleksa u tkivima, prvenstveno u mikrocirkulacijskim žilama).

Mnoge autoimune bolesti karakteriziraju naizmjenične reakcije preosjetljivosti. neposrednog tipa u akutnoj fazi do reakcije preosjetljivosti odgođenog tipa u fazi remisije. Karakteristika autoimunih lezija je česta formacija limfoidni folikuli u ciljnim organima.

Postoji niz koncepata o mehanizmu razvoja patoloških autoimunih procesa, u kojima do izražaja dolaze promjene ili u ciljnim stanicama (organima) ili primarne promjene u samom imunološkom sistemu.

Zagovornici prve grupe koncepata veliku važnost pridaju prekomjernom povećanju koncentracije autoantigena koji cirkuliraju u krvi i koji se nalaze na ćelijskim membranama, kao i demaskiranju intracelularnih antigena. Pretpostavlja se da važnu ulogu igra gubitak tolerancije na antigene tkiva "izvan barijere": antigene mijelina nervnog sistema, prednje očne komore itd. Značajnu ulogu u patogenezi sistemskog eritematoznog lupusa (SLE) pridaju poremećaji u eliminaciji autoantigena i iskorišćavanju imunih kompleksa od strane makrofagnog sistema. Raspravlja se o ulozi poremećaja u ekspresiji autoantigena stanične membrane u patogenezi autoimunih bolesti. štitne žlijezde, dijabetes melitus tipa 1, primarna bilijarna ciroza. Ciljne ćelije kod ovih bolesti nose na membrani antigene II klase HLA sistema, njihova ekspresija se povećava pod uticajem virusa, pa su stoga ove ćelije sposobne da predstave antigen bez učešća makrofaga. Sve više i više potvrde nalazi koncept antigena unakrsne reakcije (tabela 1).
^

Tabela 1. Unakrsno reaktivni antigeni

Heteroantigeni	Autoantigeni	Kliničke manifestacije
- hemolitički streptokok grupe A	Subsarkolema kardiomiocita	Reumatizam
- hemolitički streptokok A 12	bubrežni glomerulus	Glomerulonefritis
Antigeni Escherichia coli O14, O86 itd.	Intestinalni epitel, CNS antigeni	Nespecifični ulcerozni kolitis
Antigeni Yersinia enterocolitica Antigeni Ldu Pneumonia	Epitel štitne žlijezde Skeletni mišići acetilkolinski receptor	grobovi miastenije
Meningokokni antigeni grupe B Mycoplasma pneumoniae Trypanosoma cruze antigeni	CNS antigeni	Encefalitis
Tkivo mozga životinja	CNS antigeni	Postvakcinalni encefalitis

Brojni patogeni mikroorganizmi, kao što su mikoplazme, hemolitički streptokok, stafilokok, neki virusi su u stanju da luče takozvane superantigene – imunogene proteine koji se mogu vezati bez prethodnog hvatanja od strane makrofaga sa molekulama HLA 1 ili 2 klase i stimulisati „autoaktivno zabranjeno“. klonovi T-limfocita.

Ništa manji značaj ne pridaje se disfunkciji samog imunog sistema, sa preteranom reakcijom na antigene koji reaguju auto- i unakrsne reakcije. Izuzetno mjesto pripada konceptu F. Burneta, koji pripisuje ključnu ulogu mutacijama limfocita sa kršenjem eliminacije nastalih autoagresivnih klonova. Trenutno se autoimune bolesti ne posmatraju kao hiperfunkcija imunog sistema, već kao njegova disfunkcija povezana sa nedostatkom regulatornih mehanizama, tj. kao vrsta imunodeficijencije. Bitan je genetski determinisan visok i nizak imuni odgovor na određene antigene. Niskim odgovorom na jedan antigen i visokim odgovorom na druge stvaraju se uslovi za perzistenciju mikroorganizama u tkivima, pojavu kompleksnih i modifikovanih antigena i iscrpljivanje supresorskih mehanizama.

Imunokompetentne ćelije mogu postati meta za virusni napad. Rezultat je kršenje njihove funkcionalne aktivnosti, citotoksični učinak ili poliklonska aktivacija limfocita (na primjer: kada su zaraženi Epstein-Barr virusom), što dovodi do kršenja imunoregulacije i pojave viška autoantitijela.

Značaj pridaje se poremećajima u sistemu regulatornih T-limfocita, posebno apsolutnom ili relativnom manjku T-supresora. U ovom slučaju, uzrok disfunkcije sistema regulatornih T-limfocita mogu biti urođeni ili stečeni poremećaji timusa.

^ 3. AUTOIMUNE BOLESTI

Bolesti u čijoj patogenezi vodeću ulogu imaju patološki autoimuni procesi definiraju se kao autoimune bolesti. Generalno, razvoj autoimunih bolesti uključuje tri glavne grupe faktora: predisponirajući, inicirajući i doprinoseći (Tabela 2).

Među predisponirajućim faktorima, genetske karakteristike su od primarnog značaja (Tabela 3). Sa izuzetkom ankilozantnog spondilitisa i srodnih stanja povezanih sa nošenjem HLA-B27, sve druge autoimune bolesti su povezane sa određenim haplotipovima HLA klase 2 ili molekulima glavnog kompleksa histokompatibilnosti klase 3.
^

Tabela 2. Patogeneza autoimunih bolesti

Dakle, 80 - 90% pacijenata sa reumatoidnim artritisom su nosioci HLA - DR1 ili jedne od varijanti HLA DR4 (DW4, DW14, DW15). Defekt u genu koji kontroliše sintezu C4 komponente komplementa nalazi se kod 50-80% pacijenata sa SLE.

Tabela 3. Uloga genetskih faktora u nastanku autoimunih bolesti.

Faktor	mehanizam predispozicije
Glavni geni kompleksa histokompatibilnosti	Selektivno vezivanje autoantitijela; ekspanzija autoreaktivnih T ćelija; defekti T ćelija uključenih u antiinfektivni imunitet
Geni T-ćelijski receptori	Povećanje broja autoreaktivnih T ćelija; smanjena sposobnost kontrole infekcije
Geni koji kodiraju procesiranje antigena	Nedovoljna ekspresija molekula koji sprečavaju perifernu anergiju; poremećena obrada sopstvenih antigena
Komplementarni geni	Poremećaj klirensa imunoloških kompleksa
Geni povezani sa seksom	imunološki efekti polni hormoni
Citokinski geni	Imunološki efekti citokina

^ 4. KLASIFIKACIJA AUTOIMUNSKIH BOLESTI

Klasifikacija autoimunih bolesti je još uvijek vrlo težak i kontroverzan problem. Većina autora dijeli autoimune bolesti u zavisnosti od prirode autoantigena, mehanizama autoimunizacije, stepena dokaza o njegovoj ulozi u patogenezi bolesti. Uobičajeno je razlikovati bolesti čija je autoimuna priroda nesumnjiva: SLE, reumatoidni artritis, autoimuna hemocitopenija, endokrinopatije, koagulopatije, niz bolesti centralnog nervnog sistema i očiju itd.); najvjerovatnije (primarna bilijarna ciroza, periarteritis nodosa, skleroderma, polimiozitis, itd.); samo pretpostavljene (dislipoproteinemija, epilepsija, šizofrenija, parkinsonizam, itd.). Posebno se izdvajaju bolesti receptora antitijela (tireotoksikoza, dijabetes melitus tip 2, mijastenija gravis, multipla skleroza itd.). Postoje autoimune bolesti sa autoimunizacijom kao glavnim faktorom patogeneze (primarne) i bolesti sa sekundarnim autoimunim poremećajima. Glavna radna klasifikacija je podjela na organsko-specifične i organ-nespecifične autoimune bolesti. Više detaljna klasifikacija(citirano od Shirinsky V.S., 1997) uključuje 5 klasa: A - E (šema 2).

Dovoljno velike poteškoće nastaju u diferencijalnoj dijagnozi ranih manifestacija glavnih, takozvanih "Velikih kolagenoza" - sistemskih bolesti vezivnog tkiva s uključenjem različitih organa i sistema u patološki proces. U ove bolesti spadaju: sistemski eritematozni lupus, progresivna sistemska skleroza, reumatoidni artritis, Sjogrenov sindrom i grupa mešovitih bolesti vezivnog tkiva.

^ Shema 2. Klasifikacija autoimunih bolesti.

Šema 2. Klasifikacija autoimunih bolesti (Shirinsky V.S., 1997).

KLASA: A(primarne autoimune bolesti sa i bez genetske predispozicije)

"Specifičan za organe" "Srednji" "Nespecifičan za organ" Autoimuni bolesti

krv

Hashimotov tiroiditis pemfigus, pemfigoidni sistemski lupus eritematozus autoimuni hemolitički primarni miksedem primarna bilijarna ciroza reumatoidni artritis anemija

tireotoksikoza jetre dermatomiozitis autoimuna trombocitopenija

atrofični gastritis hronični aktivni hepatitis sistemska skleroderma autoimuna neutropenija

adrenalitis Sjogrenov sindrom miješana bolest Wegenerova granulomatoza

neki oblici ulceroznog kolitisa vezivnog tkiva primarna neplodnost celijakija enteropatija rekurentni polihondritis inzulinsko ovisni Goodlascherov sindrom

dijabetes tipa 1

varijante hiperlipoproteinemije

Myasthenia gravis

KLASA: B(sekundarne autoimune bolesti sa i bez genetske predispozicije)

Reumatizam, Chagasova bolest

Postinfarktni i postkardiotomski sindromi

Autoimune reakcije na lijekove

Ankilozantni spondilitis

Endogeni uveitis

Dilataciona kardiomiopatija

^ KLASA: C(bolesti sa genetskim defektima komplementa)

Angioedem

Sindromi slični lupusu

KLASA: D(spora virusna infekcija)

Multipla skleroza

Reakcije nakon vakcinacije

KLASA: E- kombinacija bolesti klasa A - D

^ 5. GLAVNE SISTEMSKE BOLESTI

Sistemski eritematozni lupus

Sistemski eritematozni lupus (SLE) je multisistemska bolest koja se javlja u pozadini brojnih imunoloških poremećaja - produkcije autoantitijela, hipergamaglobulinemije, patologije supresorskih T-limfocita, smanjenja sadržaja komplementarnih proteina u serumu i povećanja nivoa CEC-a, za koje se vjeruje da igraju glavnu ulogu u patogenezi SLE.

Sa dovoljnim stepenom sigurnosti možemo govoriti o poremećaju funkcionisanja Fc-IgG i C3b- receptora odgovornih za fagocitozu CEC-a. Istovremeno, nisu sva autoantitijela i imunološki kompleksi koji se pojavljuju u krvi pacijenata sa SLE ekvivalentni u smislu patogenosti. Neka autoantitijela uzrokuju patološke simptome zbog svoje antigenske specifičnosti (za površinske antigene eritrocita ili faktore zgrušavanja). Djelovanje drugih je zbog izotipa imunoglobulina, sposobnosti fiksiranja komplementa, njihove avidnosti za tkiva itd.

Nesumnjivo je učešće polnih hormona u patogenezi SLE. Estrogeni pojačavaju, a androgeni inhibiraju proizvodnju autoantitijela. Kod pacijenata sa SLE uočena je povećana proizvodnja 16-alfahidroksiestrona, što uzrokuje produženu estrogensku stimulaciju.

Kliničke manifestacije bolesti zavise od toga koja su populacija autoantitijela i CIC prisutni u ovog trenutka kod određenog pacijenta, koji organi, ćelije ili ćelijski proizvodi im služe kao mete, kao i sposobnost pacijenta da ispravi ove poremećaje. Oko 72% pacijenata preživi više od 10 godina nakon pojave bolesti. Vodeći uzroci invaliditeta i smrti su infektivne komplikacije i zatajenje bubrega.

Glavni laboratorijski kriterijumi za dijagnozu i praćenje prikazani su u tabeli 4:

Dijagnostički testovi za dijagnozu i procjenu težine procesa

Testovi za praćenje bolesti

Specifično:

Anti dsDNA

Anti-Sm

Nespecifičan

ANA (najosjetljiviji)

SR50, S3, S4

Direktan Coombsov test

Lažna Wasermanova reakcija

Antikardiolipinska antitijela

Antitrombocitna antitijela

Anti-limfocitna antitijela

Antineuronska antitijela

Hematokrit

Analiza urina

Serumski kratinin

Proteini akutne faze

Anti dsDNA titar

Nivoi komplementa

Hematokrit

Leukociti periferne krvi

Trombociti u perifernoj krvi

Analiza urina (mikroalbuminurija)

Kreatinin u serumu

* Za svakog pacijenta na osnovu najkarakterističnijeg kliničkih znakova bolesti, potrebno je uspostaviti individualni skup testova koji će se koristiti kao dodatno kriterijumi evaluacije klinički tok bolesti.

Antitela na Sm antigen su visoko specifična za SLE), ali njihov nivo ne odražava težinu bolesti. Istovremeno, lezije nervnog sistema i lupusne psihoze su češće klinički povezane sa prisustvom antitela na Sm, ali je istovremeno karakteristično relativno očuvanje funkcije bubrega. Antitela na Sm se detektuju kod 25-30% (RIF metoda) i 50-60% (ELISA metoda) pacijenata. Negativni rezultati testa na SM antitela ne isključuju bolest. Koncentracija antitela na Sm antigen se ne menja značajno tokom terapije, te stoga njihovo kvantitativno praćenje nema praktičnog značaja. Prisustvo antitela na Sm antigen je uključeno u kriterijume za SLE koje je usvojila Američka reumatološka asocijacija.

Nivo antitela na nativnu (dvolančanu) DNK, za razliku od antitela na Sm, odražava rizik i težinu lupus nefritisa i koristi se kao kriterijum za efikasnost terapije SLE. Dodatni laboratorijski kriterijum je smanjenje nivoa C3 i C4 komponenti komplementa, što je takođe u korelaciji sa aktivnošću lupus nefritisa.

Otprilike 80% svih pacijenata sa SLE ima antitijela na histone. Vrlo često se ova antitijela nalaze kod pacijenata sa eritematoznim lupusom izazvanim lijekovima (PLE). Međutim, u LC nema antitijela na nativnu DNK. Stoga, simultano određivanje antitijela na histone i dsDNK omogućava diferencijalnu dijagnozu između SLE i LLE. Osim toga, antitijela na histone mogu se otkriti kod pacijenata s primarnom bilijarnom cirozom, reumatoidnim artritisom i sklerodermom.

Progresivna sistemska skleroza (sistemska sklerodermija)

PSS je multisistemski poremećaj karakteriziran upalnim, vaskularnim i fibroznih promena u koži (skleroderma) i u raznim unutrašnjim organima, posebno u gastrointestinalnom traktu, plućima, srcu i bubrezima. Priroda tijeka, stupanj prevalencije u tijelu, težina manifestacije bolesti značajno se razlikuju kod različitih pacijenata. U nekim slučajevima mogu se pojaviti visceralne manifestacije bez vidljivih kožnih manifestacija.

Etiologija bolesti je nepoznata, uloga nasledni faktori je dvosmislen. Ljudi obično obolijevaju u dobi od 30 - 40 godina, žene su 4 puta češće od muškaraca.

PSS je praćen oslabljenim humoralnim i ćelijskim imunitetom. u krvi pacijenata često se nalaze hipergamaglobulinemija i antitnuklearna antitijela, antitijela na ćelijske membrane fibroblasta i na kolagen tip 1 i 4.

Kliničke manifestacije obično (kod 90% pacijenata) počinju Raynaudovim fenomenom - epizodičnom vazokonstrikcijom arterija i arteriola prstiju, stopala, ponekad kože lica, koja nastaje kao posljedica hladnoće ili emocionalnog stresa. Pogođena područja kože prvo blede, zatim postaju cijanotična, a zatim crvenila. Prognozu bolesti određuje zahvaćenost miokarda, plućna hipertenzija i zatajenje bubrega.

Koegzistencija kalcifikacije kože, Raynaudovog fenomena, hipokinezije jednjaka, sklerodaktilije i telangiektazije naziva se "CREST"- sindrom i ocjenjuje se kao relativno benigna varijanta PSS.

Laboratorijski podaci za PSS zavise od stadijuma i aktivnosti patološkog procesa, ESR je često povećan, hipergamaglobulinemija se primećuje kod 50% pacijenata, uglavnom zbog IgG, nizak titar reumatoidnog faktora detektuje se u 25%, ANA - kod skoro 96% onih koji boluju od PSS. Specifična autoantitijela: na nuklearni ribonukleoprotein (RNP), proteine centromera i anti Scl-70. Međutim, najspecifičniji anti-Scl-70- marker nalazi se u samo 20% slučajeva PSS. Antitela koja reaguju sa centromernom regijom metafaznih hromozoma nalaze se kod većine pacijenata koji odgovaraju grupi „CREST” sindroma. Stoga, ako određivanje antitijela na Scl-70 u PSS-u služi kao loš prognostički znak, onda detekcija anticentromernih antitijela, naprotiv, ukazuje na povoljniji tok bolesti.

Reumatoidni artritis

Reumatoidni artritis (RA) je hronična polisistemska bolest nepoznate etiologije, kod koje se, uz niz sistemske manifestacije Patogmoničan je perzistentni inflamatorni sinovitis, koji simetrično zahvaća periferne zglobove. Tok bolesti je veoma varijabilan, obično sa valovitim tokom.

Ne postoje specifični laboratorijski testovi za dijagnosticiranje RA. Međutim, reumatoidni faktori, koji su IgG-reaktivna autoantitijela, nalaze se u 60% pacijenata. Sami reumatoidni faktori mogu pripadati klasama: IgA, IgM ili IgG. Učestalost otkrivanja reumatoidnih faktora kod zdravih osoba dostiže 5% i raste s godinama. Osim toga, reumatoidni faktor može biti prisutan kod mnogih bolesti - SLE, Sjogrenov sindrom, hronična oboljenja jetre, hepatitis B, tuberkuloza, sifilis itd. U tom smislu, otkrivanje reumatoidnih faktora ne postavlja dijagnozu, ali ima određenu prognostičku vrijednost, budući da pacijenti sa visokim titrom (posebno IgM i IgA) imaju teži i progresivniji tok bolesti. Eozinofilija kod pacijenata sa RA ukazuje na ozbiljnost sistemskih manifestacija. Gotovo svi pacijenti imaju povećanje ESR, CRP, ceruloplazmin, drugi proteini akutne faze. Ovo je općenito u korelaciji s aktivnošću bolesti i ukazuje na progresiju oštećenja zglobova.

Mješovite bolesti vezivnog tkiva.

Mješovita bolest vezivnog tkiva (MCTS) je sindrom karakteriziran promjenjivom kombinacijom kliničkih manifestacija sličnih onima uočenim kod SLE, skleroderme, polimiozitisa i reumatoidnog artritisa u kombinaciji s neobično visokim titarima cirkulirajućih autoantitijela na nuklearni ribonukleoproteinski antigen (RNP). U ovom slučaju postoji nedostatak ili vrlo nizak titar antitijela na druge nuklearne antigene koji se mogu ekstrahirati i na DNK. Pored Anti-RNP, postoji izražena poliklonska hipergamaglobulinemija, smanjenje komponenata, defekt supresorske veze T-limfocita, prisustvo CIC-a, taloženje imunoloških kompleksa duž membrana sarkoleme i glomerularne baze. membrane, limfocitna i plazmacitocitna infiltracija mnogih tkiva. Jedna od glavnih manifestacija SBST-a je proliferativna lezija intime i medija. krvni sudovišto dovodi do njihovog sužavanja. Upravo je poraz velikih i malih žila koji opskrbljuju vitalne organe ono što određuje tok i prognozu ove bolesti. Neki pacijenti imaju znakove nekoliko autoimunih bolesti, ali za razliku od pacijenata sa BSTS, nema antitijela na RNP. U tom slučaju, ako postojeći znakovi zadovoljavaju nekoliko autoimunih bolesti odjednom, postavlja se dijagnoza „unakrsnog sindroma“, ako ne, postavlja se dijagnoza „nediferencirane bolesti vezivnog tkiva“.

Sjogrenov sindrom

Sjogrenov sindrom (SS) ili "suhi" sindrom je imunološka patologija koju karakterizira progresivno uništavanje egzokrinih žlijezda, a praćena je raznim autoimunim poremećajima. Bolest se može javiti samostalno (primarni SS) ili u prisustvu drugih autoimunih abnormalnosti (sekundarni SS). Osim toga, SS se dijeli na glandularni oblik, kada su kliničke manifestacije ograničene na sistem egzokrinih žlijezda, i na ekstraglandularni oblik, kada su i druga tkiva uključena u patološki proces.

Glavni mehanizmi oštećenja kod SS su limfocitna infiltracija i taloženje imunološkog kompleksa. Otprilike 10% slučajeva SS razvija limfoproliferativni proces koji se naziva pseudolimfom. Neki pacijenti kasnije razviju pravi ne-Hodgkinov limfom. Vrlo često postoji autoimuna lezija štitne žlijezde poput Hashimoto tireoiditisa.

Osim suhe sluzokože (keratokonjunktivitis, kserostomija), kod pacijenata sa SS razvija se vaskulitis, polineuropatija, intersticijalna pneumonija i glomerulonefritis. Generalno, u poređenju sa drugim kolagenozama, prognoza za pacijente sa SS može se smatrati prilično povoljnom.

At laboratorijska istraživanja obratiti pažnju na povećanje nivoa CEC, leukopenija, trombocitoza, ubrzana ESR. Zabilježena je pozitivna reakcija na ANA. Autoantitela su uglavnom predstavljena reumatoidnim faktorom, SSA (anti-Ro), SSB (anti-La). Većina pacijenata sa najtežim sistemskim manifestacijama je pozitivna na SSA. Kod trudnica, prisustvo SSA značajno povećava rizik od rađanja dojenčadi sa poremećajima srčane provodljivosti.

Polimiozitis i dermatomiozitis

Dermatomiozitis je sistemska bolest vezivnog tkiva koja pretežno zahvaća kožu i mišićno tkivo. Različite kožne lezije s patogmoničnim periorbitalnim edemom sa ljubičasto-jorgovanim eritemom kombiniraju se s mijastenskim sindromom, distrofijom miokarda, poliartritisom i pridruženom upalom pluća (hipoventilacijsko i aspiracijsko porijeklo). Posebnu pažnju zaslužuje visoka učestalost kombinacije dermatomiozitisa sa malignim tumorima. Polimiozitis - sistemske inflamatorne miopatije bez značajnih kožnih lezija, koje predstavljaju grupu bolesti karakteriziranih difuznim oštećenjem mišića zbog perivaskularne i intersticijalne infiltracije mišićnog tkiva upalnim stanicama, uglavnom leukocitima.

^ 6. AUTOANTITELA KAO SEROLOŠKI MARKERI SISTEMSKE KOLAGENOZE.

Prvi put su manifestacije specifičnog LE-fenomena registrovane 1948. godine tokom inkubacije seruma. raznih pacijenata sa suspenzijom leukocita normalnih donora. Godinu dana kasnije, identificiran je serumski imunoglobulin koji je posredovao u antinuklearnoj reakciji koja je u osnovi LE fenomena. Detekcija LE-ćelija je dominirala 50-70 godina kao glavna reakcija za detekciju antinuklearnih antitijela (ANA).

80-ih godina predložena je metoda indirektne imunofluorescencije za otkrivanje ANA, uz ispitivanje seruma pacijenata na dijelovima tkiva bubrega i jetre zeca (miša), ili na kulturi epiteloidnih stanica ljudskog raka (Hep-2). Metoda se etablirala kao visoko osjetljiva i specifična, omogućavajući registriranje istovremenog prisustva autoantitijela na gotovo 40 pojedinačnih nuklearnih antigena. Karakteristike prirode distribucije specifične luminescencije kada se uzme u obzir reakcija (homogena, pjegava, periferna, povezana s nukleolima ili centromerima, prisustvo citoplazmatskih vezivnih žarišta) omogućavaju u prvoj studiji da se odredi glavna antigena specifičnost otkrivenih autoantitijela. Nedostaci ove metode uključuju relativnu mukotrpnost, ovisnost o optičkim karakteristikama luminiscentnog mikroskopa, kao i probleme standardizacije i kontrole kvalitete, uglavnom povezane s upotrebom životinjskih tkiva ili ćelijskih kultura.

Istovremeno, razvijena je metoda upotrebe čvrste faze ELISA kako za detekciju ukupnog kompleksa antinuklearnih autoantitijela (ANA-screening), tako i za detekciju pojedinačnih autoantitijela na ekstrahovane nuklearne antigene (ENA-screening i ENA-profil). Prednosti metode su mogućnost automatizacije i visoka produktivnost. Osetljivost i specifičnost su uporedivi sa RNIF-om, iako upotreba rekombinantnih antigena u nekim test sistemima može potencijalno da izazove lažno pozitivne rezultate pri testiranju seruma sa visokim titrom antibakterijskih antitela.

Druge dobro poznate metode za identifikaciju autoantitijela na ENA - gel imunodifuzija, imunoelektroforeza, hemaglutinacija, imunoprecipitacija i imunoblotiranje još uvijek nisu široko korištene u kliničkoj laboratorijskoj praksi.

Lista najvažnijih autoantitijela na nuklearne antigene koji se mogu ekstrahirati prikazana je u Tabeli 5:

Tabela 5. Glavni serološki markeri autoimunih bolesti

Antigen	originalno ime	molekularna struktura	Funkcija	Dijagnostička vrijednost
sm	Smith (ime pacijenta)	Kompleks formiran od 9 proteina sa 13 malih RNK molekula		Specifičnost za SLE Sm + i RNP + = visok rizik od lupus nefritisa *Može se otkriti u odsustvu dsDNK.
Sm/RNP kompleks	RNP - ribonukleoproteinske čestice	Nativni kompleks Sm i RNP antigena	Cijepanje prekursora glasničke RNK	SLE, Sjögrenov sindrom, skleroderma, polimiozitis, SBSTc
U1RNP	glavni antigen (68 rDa) kompleksa U1RNP	Uvijek uparen sa RNA U1.	Cijepanje prekursora glasničke RNK	* RNP + , Sm - = nizak rizik od nefritisa * visoki krediti na pozadini "neg" drugih ANA = SBSTk
Ili Ro	Rastvorljiva (topiva) supstanca (supstanca) A ili protein A Sjogrenovog sindroma ili Robert-antigen (ime pacijenta)	52 i 60 kD proteini povezani sa citoplazmatskim RNA molekulima	nepoznato	* Sjögrenov sindrom i SLE * neonatalni srčani blok zbog transplacentalnog prijenosa antitijela *SSA+, SSB - = visok rizik od nefritisa
Ili La	Rastvorljiva (topiva) supstanca (supstanca) B ili protein B Sjogrenov sindrom ili Lane antigen (ime pacijenta)	Fosfoproteini povezani sa transkriptima polimeraze III	Terminator transkripcije helikaze	* Sjögrenov sindrom, SLE *SSA+ , SSB+ = nefritis niskog rizika
dsDNA	dvolančana DNK	Nativna dvolančana DNK bez proteina	Nosilac genetske informacije	SCR, praćenje protoka Zahvaćenost CNS-a i bubrega
Histoni	Histoni	Osnovni proteini povezani sa DNK	Strukturni elementi hromatina	Drug SLE
CENP-B	Proteinske (proteinske) centromere	Proteinski kinetohor 80 kD	Mjesto za pričvršćivanje mikrofilamenata	Skleroderma, CROSS-sindrom
Jo l	Specifični protein 1 pacijenta sa miozitisom	Protein 55kD, histidin-tRNA sintetaza	vezivanje tRNA za histidin	Polimiozitis je češći od dermatomiozitisa Povezano sa intersticijska pneumonija
PM-Scl-100	100 kD antigen polimiozitis-skleroderme (poliniozitis-skleroderma)	Dio multiproteinskog kompleksa koji sadrži najmanje 11 proteina	Sinteza ribosomskog prekursora	Polimiozitis-sklerodermo-CREST sindrom
Scl-70	70 rL antigen skleroderme	70 kD produkt razgradnje proteina sa masom od 100 kD	Denaturacija DNK topoizomeraze I (odmotavanje)	*Sklerodermija i, rjeđe, CROSS-sindrom

U diferencijalnoj dijagnozi velike kolagenoze značajna je analiza markera autoimunih bolesti otkrivenih i imunofluorescencijom i ELISA (tabela 6).

Tabela 6

Vrsta patologije	Rezultati imunološke studije	Klinička vrijednost
Vrsta patologije	Vrsta antitijela i učestalost njihove pojave (%)
Sistemski eritematozni lupus	* ANA 95-99% * dsDNA 50-75% * Sm 30% * RNP 25-40% * SSA(Ro) 30-40% * SSB(La) 10-15% * antifosfolipidna antitela 30-50% * PCNA 2 -10% *anti-Ku (Ki) 10%	ANA i ENA - skrining (detekcija); Anti-nDNA i anti-Sm - markeri za praćenje
Diskoidni eritematozni lupus	Normalna slika (obično normalni ANA titri)	LE trake u uzorcima biopsije kože (u EPIF) su visoko specifične
Subakutni kožni eritematozni lupus	* ANA 70% SSA (Ro) > 60%	anti-SS-A(Ro) su visoko specifični
Lupus eritematozus u novorođenčadi	ANA 70% SS-A(Ro) 60% SS-B(La) 60%	Anti-SS-A(Ro) su vrlo specifični
"Lijekovi" lupus eritematozus	ANA > 90% antitela protiv histona > 90% ^ Ostali ANA i anti-ENA su odsutni	antihistonska antitijela su visoko specifična u odsustvu drugih nuklearnih antitijela
Mješovita bolest vezivnog tkiva	ANA (tip mrlja) > 95% anti-RNP > 90%	Vrijedne dijagnostičke informacije pruža priroda bojenja jezgara u uzorcima biopsije kože i proučavanje krvnog seruma indirektnom imunofluorescencijom.
Sjogrenov sindrom	ANA 55%. SS-A(Ro) 43-88% .SS-B(La) 14-60% ^ Prisustvo reumatoidnog faktora (RF)	Dijagnoza je potvrđena pozitivnim serološkim podacima
skleroderma	ANA 85% (pjegasto ili nukleolarno bojenje) *anticentromerna antitela 70-90% ^ difuzna skleroza : Anti-Scl -70 45% akroskleroza: Anti-Scl-70 15-20%	Anticentromerna antitela - marker CREST sindroma Scl-70 - marker skleroderme ^ Dijagnostička vrijednost direktne imunofluorescencije biopsija kože je niska.
Polimiozitis dermatomiozitis	^ Zajednička karakteristika: ANA 80% dermatomiozitis: Anti-Jo-l 10% polimiozitis: Anti-Jo-l 30% SS-A(Ro) 55% anti-Ku(Ki) 10% (takođe se vidi kod skleroderme)	Pozitivni rezultati serološka studija može se koristiti za potvrdu dijagnoze
Reumatoidni artritis	ANA niski titri ili bez RF 90% RANA 70-90% (prisutan u 95% seruma bez RF)	Za potvrdu dijagnoze koriste se rezultati serološke studije.

Određivanje ANA u reakciji indirektne imunofluorescencije

U tipičnom testu, pacijentov serum se inkubira sa antigenskim supstratima (životinjska jetra ili tkivo bubrega, Hep-2 ćelijska kultura) kako bi se uticalo na specifično vezivanje antitijela prisutnih u serumu za ćelijska jezgra. Nakon ispiranja nevezanih serumskih proteina, supstrat se inkubira s antitijelima protiv humanih imunoglobulina. Budući da su unesena antitijela konjugirana sa fluorescentnom supstancom, u prisustvu antitijela na nuklearne antigene u serumu, nastali kompleks (nuklearni antigen + antinuklearna serumska antitijela + antitijela na ljudska antitijela + fluorescentna supstanca) može se detektirati fluorescentnom mikroskopijom. Priroda sjaja - periferna, difuzna, tačkasta, itd. omogućava vam da identifikujete vezu sa određenim intranuklearnim strukturama, pogledajte tabelu 7:

Tabela 7. Procjena rezultata određivanja ANA u reakciji indirektne imunofluorescencije.

Priroda sjaja	Antigenska specifičnost	Klinički značaj
Periferni ili marginalni	dsDNK, lamins. kompleksi nuklearnih pora	Primary SLE
Homogeni (difuzni)	dsDNA	Specifičnost 20 - 40% kod aktivnog SLE, CNS i zahvaćenosti bubrega
Homogeni (difuzni)	Histoni	Idiopatski SLE - 50-70%, SLE izazvan lijekovima - 95%, lokalna skleroderma
Pegavost: gruba	U1-RNP	SCR 20%-40%: C 95%
	SM	SLE marker 15%-30%
Tanak (u prahu)	SS-A(Ro)	SLE 24%-60%; neonatalni lupus > 90%: Nedostatak komplementa (C2 i C4)/LE > 90%; Šagrenov sindrom 85%-95%
	SS-B (La)	SLE 9%-35%; Neonatalni lupus 75%; Sjogrenov sindrom 70%-85%
	DNK polimeraza	SCR 3%
	Mi-2	Dermatomiozitis (DM) 15%-35%: Polimiozitis (PM) 5%-9%
diskretno	Proteinska centromera Uključci slične veličine i broja	Ograničena sklerodermija 60%-80%: diluzna skleroderma - 8%; Raynaudov sindrom 25%; ^ PSS -CROSS 50%-70%
diskretno	NSP-1 (pseudo ASA) Uključci različitih veličina i količina	Reumatske bolesti i kronične bolesti jetre
Intranuklearni sjaj "Klumpy" tip	fibrilarin (U3RNP)	PSS 6% -8%; dilluse skleroderma - 5%: ^ CROSS - 10%
išaran	RNA polimeraza 1	PSS 4% -20%; diluzna skleroderma -13%
Homogenost: (nukleoli/nukleoplazma)
Slaba pjegavost (nuleol) / izgled nukleoplazme „brušenog stakla“.	DNK-topoizomeraza 1 (Scl-70)	PSS 4% -20%; dilluse skleroderma -13%:
Jak homogeni sjaj nukleola / slab homogeni sjaj nukleoplazme	PM-SCI	^ PM/PSS - 24%
Snažan homogeni sjaj nukleola i nukleoplazme	Ku	Skleroderma 1%-14%; PM/ScI 26%-55%; SLE 1%-19%; Sjogrenov sindrom - 20%
Šarena luminiscencija citoplazme	Jo-1 (histidil tRNA sintetaza) PL-7 (treonil tRNA sintetaza) PL12 (alanil tRNA sintetaza)	^ PM 18%-36%; DM - 13%; PM/DM - 43% PM/DM - 3%

Određivanje ANA i ENA pomoću ELISA-e u čvrstoj fazi

Test sistem za ELISA ANA (UBI MAGIWELL) - za skrining analizu na antinuklearna antitijela omogućava semi-kvantitativno određivanje širokog spektra antitijela na kompleks različitih ćelijskih nuklearnih antigena sorbiranih u jažici: dvolančana i jednolančana DNK, histoni , ribonukleoproteini (RNP), SS-A, SS-B, Sm, itd.

Prepoznatljiva karakteristika sistemi ELISA ENA-skrining i ENA-profil (CLARK LABORATORIES) je da se na površini polisteronskih bunara adsorbuju prethodno visoko prečišćeni pojedinačni ekstrahovani nuklearni antigeni: SS-A, SS-B , Sm, Sm/RNP, Scl-70 i Jo -1 . U varijanti skrininga - svih 6 antigena zajedno, u varijanti profila - svaki antigen u posebnoj jažici. Dakle, uobičajeni dijagnostički algoritam se sastoji od primarne analize seruma na skrining sistemu i ponovljene analize pozitivnih seruma na ENA test sistemu – profilu za detekciju antitela na specifične antigene. U slučaju pozitivnog testa na ANA skrining sistemu i negativnog na ENA test sistemima, potrebno je testirati serum na test sistemima za izolovano određivanje antitela na DNK, histone i druge antigene koji nisu prisutni. u ENA sistemima.

U slučaju utvrđene dijagnoze i prethodno identifikovanih autoantitela, za praćenje efikasnosti terapije, koriste se test sistemi za kvantifikaciju titra antitela na pojedinačne antigene.

Kao alternativa sistemima za testiranje ploča, mogu se koristiti ELISA testovi u epruvetama ROCHE i Sanofi.

Pozitivni rezultati seroloških ispitivanja na ANA i ENA mogu se uočiti kod 1-5% zdravih osoba, posebno kod starijih osoba. Određeni lijekovi, kao što su p-aminosalicilna kiselina, fenition, izoniazid, hidrazin, prokainamid i neki drugi, mogu izazvati stvaranje antinuklearnih antitijela.

^ 7. AUTOANTILA U DIJAGNOSTICI SISTEMSKOG VASKULTITISA

Sistemski vaskulitis je grupa bolesti koje karakteriše hronična upala i uništavanje zidova krvnih sudova. Etiološki faktori koji obavljaju ulogu okidača uključuju: infektivne agense, lijekove, progresiju tumora, cirkulaciju patoloških proteina i CEC-a, autoantitijela. Međutim, otprilike polovina svih slučajeva sistemskog vaskulitisa nema očigledan etiološki uzrok i smatra se "idiopatskim". Važno je zapamtiti da neki vaskulitisi sa sličnim kliničkim manifestacijama mogu imati značajno drugačiju prognozu i zahtijevati različite terapijske pristupe.

Do sada nisu konačno razrađene šeme klasifikacije ove grupe bolesti. Najnovije klasifikacije temelje se na kalibru pretežno zahvaćenih krvnih žila i dominantnom tipu ćelijskih elemenata u žarištu destrukcije: neutrofili, monociti ili limfociti. Istina, ovo više odražava fazu procesa, a ne dominantni patogenetski proces.

Pojava mogućnosti određivanja autoantitijela na neutrofilne citoplazmatske antigene ( ANCA) značajno je poboljšao dijagnostiku ovih bolesti. Postoje dvije podklase ljudskih neutrofilnih autoantitijela: c-ANCA (citoplazmatska ANCA) i p-ANCA (perinuklearna ANCA). Najznačajnija su antitijela na enzime primarnih granula neutrofila: proteinazu-3 (PR3) i mijeloperoksidazu (MPO), respektivno. Određivanje ANCA spektra (PR3, MPO) omogućava diferencijalnu dijagnozu Wegenerove granulomatoze i mikroskopskog poliarteritisa. Upotreba ANCA kao indikatora aktivnosti vaskulitisa ima određene prednosti u odnosu na klasične indikatore kao što su ESR i CRP, adekvatnije odražavajući stepen aktivnosti i efikasnosti terapije i bez obzira na pojavu infektivnih komplikacija.

Tabela 8. Dijagnostički značaj detekcije različitih antineutrofilnih (ANCA) antitijela

Vrsta antitela	Bolest
Anti-MPO ANCA	Vaskulitis, mikroskopski poliangiitis, Churg-Strauss, RA, SLE
Anti-PR3 ANCA	Wegenerova granulomatoza
Anti-BPI ANCA	Hronični zarazne bolesti, Crohnova bolest, ulcerozni kolitis
Anti-elastaza ANCA	Emfizem, RA, upalne reumatske bolesti
Anti-katepsin G ANCA	upalne reumatske bolesti, SLE, Sjögrenov sindrom, Feltyjev sindrom
Anti-lizozim ANCA	reumatoidni vaskulitis, upalnih procesa u gastrointestinalnom traktu, ulcerozni kolitis
Anti-laktoferin ANCA	RA, ulcerozni kolitis, primarni sklerozirajući holangitis

^ 8. LABORATORIJSKA DIJAGNOSTIKA ANTIFOSFOLIPIDNOG SINDROMA

Anti-fosfolipidna antitijela su heterogena grupa autoantitijela protiv negativno nabijenih fosfolipida. Nalaze se prvenstveno u testu anti-kardiolipin antitijela (ACA test), daju lažno pozitivne reakcije u biološkim testovima na sifilis i u antikoagulansnom testu na lupus. Sva tri ova testa otkrivaju slična, ali ne nužno identična antitijela. Stoga je za identifikaciju antitijela na fosfolipide ponekad potrebno koristiti sve navedene testove.

Od raznih postojeće metode analize za određivanje antitela na fosfolipide, najosetljiviji je enzimski imunosorbentni test za određivanje antitela na kardiolipin. Prisustvo ovih antitijela kod pacijenata pomaže u identifikaciji pacijenata s rizikom od venske i/ili arterijska trombozačesto praćeno trombocitopenijom.

Predloženo je da se termin antifosfolipidni sindrom odnosi na grupu bolesti praćenih povećanom količinom autoantitijela na fosfolipide i dijeli se na primarne (nije povezane sa specifičnom autoimunom patologijom) i sekundarne, povezane sa SLE ili drugim autoimunim bolestima.

Antifosfolipidni sindrom se najčešće javlja kod pacijenata sa sistemskim eritematoznim lupusom ili kod pacijenata sa poremećajima sličnim lupusu kod kojih nisu ispunjeni kriterijumi za sistemski eritematozni lupus. Visoki nivoi antitela na kardiolipin primećuju se kod tromboze, gubitka fetusa, trombocitopenije i nekih drugih bolesti. Niski nivoi antikardiolipidnih antitijela su pronađeni u različitim kliničkim poremećajima koji nisu povezani s antifosfolipidnim sindromom. Stoga su niske razine ovih antitijela ograničene dijagnostičke vrijednosti.

Antifosfolipidni sindrom je jasnije povezan s antitijelima na kardiolipin klase IgG i IgA nego s antitijelima klase IgM. Međutim, u liječenju većina nivo lgM antitela se menja. Nizak nivo IgM antitela može se videti i kod drugih autoimunih bolesti kao npr reumatoidni artritis, primarni Sjogrenov sindrom, sistemski lupus izazvan lijekovima, lajmska bolest i sifilis.

ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA test sistem je zgodan alat za preliminarnu identifikaciju onih pacijenata čija krv sadrži ASA. Naknadna analiza pozitivnih seruma pomoću ImmuUsa ™ ACA-IgG, ImmuUsa ™ ACA-lgA, ImmuUsa ™ ACA "IgM kompleta omogućava vam da odredite pojedinačne izotipove ovih autoantitijela.

Tabela 9 Sindromi povezani sa ASA

Sindrom	% pojavljivanja
Intermitentna venska tromboza	28-71
Česti pobačaji	28- 64
Transverzalni mijelitis	50
Hemolitička anemija	38
Trombocitopenija	27-33
Okluzije arterija	25 -31
Livedo Riticularis (mermerna koža)	25
Plućna hipertenzija	20 - 40
SLE	33-57

Istraživanja su pokazala da je kod pacijenata sa antifosfolipidnim sindromom od velike važnosti prisustvo antitijela ne samo na kardiolipin (ACA), već i na fosfatidilserin, koji se može otkriti kako zajedno sa ASK, tako i zasebno.

Kod SLE, ASK se takođe prilično dobro vezuju za fosfatidilserin, dok neke zarazne bolesti, ASA su visoko specifične za kardiolipin. U tom smislu, posebno je određivanje antitijela na fosfatidilserin. dijagnostički kriterijum sekundarni antifosfolipidni sindrom.

Indikacije za testiranje na antifosfolipidni sindrom:

tromboza i vaskulitis kod autoimunih bolesti (procjena težine stanja, prognoza i praćenje terapije)
česti pobačaji ili intrauterina smrt fetusa (mogućnost efikasne profilakse tokom nove trudnoće)
nejasno neurološke manifestacije(koreja, migrena, epilepsija mogu biti uzrokovane mikrotrombozama)
rekurentna trombocitopenija nepoznatog porekla (razjašnjenje dijagnoze)
mramorna koža

^ 9. SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA AUTOIMUNSKIH ENDOKRINOPATIJA

Neki endokrinih bolesti praćeno pojavom autoantitijela, koja u nekim slučajevima igraju značajnu ulogu u njihovoj patogenezi. Ove bolesti uključuju: dijabetes tipa 1 zavisan od insulina, Hashimotov tireoiditis, Gravesovu bolest, nodularni tireoiditis, sindrom "kandidijaza-endokrinopatija" itd.

Određivanje antitela na -ćelije Langerhansovih ostrvaca pankreasa.

Poznato je da je ključni momenat u nastanku insulin-zavisnog dijabetes melitusa tipa 1 fenomen transformacije -ćelija iz „sebe“ u „ne-sebe“ i aktiviranje njihovog autoimunog oštećenja. Kod sporog toka bolesti, najraniji znak patologije je pojava antitijela na -ćelije Langerhansovih otočića pankreasa i, konkretno, na membranu vezanu dekarboksilazu glutaminske kiseline u periodu kada se nivo šećera u krvi smanjuje. još ne prelazi normu, a tolerancija na glukozu ostaje normalna. Budući da se prve kliničke manifestacije dijabetesa javljaju kada je zahvaćeno više od 90% svih ćelija koje sintetiziraju inzulin, antitijela se mogu pojaviti mnogo godina (do 8 godina) prije kliničke manifestacije bolesti. Istovremeno, prisustvo antitijela na -ćelije je u korelaciji sa njihovom rezidualnom količinom, a kako preostale -ćelije odumiru, stimulans za autoimuni odgovor se smanjuje, titar autoantitela može značajno da se smanji do vrednosti koje se ne mogu detektovati. U pravilu, prilikom pregleda osoba s dijabetesom tipa 1, antitijela na stanice otočića otkrivaju se u 50-80% slučajeva. Učestalost pojave ovih autoantitijela kod srodnika (1. stepen) dijabetičara dostiže 2-5%. Poznato je da svake godine 11% ove grupe ljudi razvije simptome dijabetesa.

Određivanje antitela na -ćelije Langerhansovih ostrvaca pankreasa vrši se i indirektnom imunofluorescencijom i ELISA testom u čvrstoj fazi. U prvom slučaju, dijelovi pankreasa majmuna se koriste kao supstrat, u drugom se pročišćeni antigeni otočnih stanica adsorbiraju u jažice ploče. Hemoliza, lipemija i mikrobna kontaminacija sprečavaju analizu. Serumi koji sadrže visoku koncentraciju ANA otežavaju određivanje, posebno kada se provodi RNIF.

Određivanje autoantitijela protiv antigena štitnjače

Kod bolesti štitne žlijezde važan je sadržaj antitijela na tireoidnu peroksidazu (Anti-TPO) i antitijela na tireoglobulin (Anti-TG) u serumu bolesnika. Pošto se njihovi nivoi menjaju nezavisno jedan od drugog, preporučuje se istovremeno određivanje obe vrste antitela.

TPO je antigenska komponenta tiroidnog mikrosomalnog antigena i slabo glikozilirani protein koji sadrži hem koji igra važnu ulogu u procesu jodiranja tireoglobulina i sintezi hormona štitnjače. Antitijela na TPO prisutna su u serumu pacijenata sa gušavošću i atrofičnim tiroiditisom ili primarnom tireotoksikozom. Najveće koncentracije prisutne su kod pacijenata sa fibroznom ili oksifilnom varijantom Hashimoto gušavosti. Pacijenti sa Gravesovom bolešću (Basedowovom bolešću) proizvode oba tipa antitijela, ali u prilično niskim koncentracijama. Visoke koncentracije antitijela na TG tipične su za serume pacijenata sa hipotireozom, Hashimotovom fibroznom strumom, miksidemom. Antitireoidna antitijela su tipičnija za autoimune bolesti štitnjače, u tim slučajevima titri autoantitijela su veći.

Tabela 10. Učestalost (%) antitireoidnih autoantitijela

^ 10. SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA AUTOIMUNSKIH POREMEĆAJA JETRE

Prema savremenoj klasifikaciji hroničnih hepatitisa, autoimuni hepatitis (AIH) se definiše kao nerešeni, pretežno periportalni hepatitis sa prisustvom hipergamaglobulinemije i tkivnih autoantitijela, koji u većini slučajeva regresiraju pod uticajem imunosupresivne terapije. Trenutno u grupu autoimunih bolesti jetre, uz autoimuni hepatitis, spada i primarna bilijarna ciroza (oštećenje malih žučnih puteva uz prisustvo antimitohondrijska antitela (AMA) ), autoimuni holangitis (oštećenje malih kanala u odsustvu AMA), primarni sklerozirajući holangitis (oštećenje velikih žučnih kanala).

Patogeneza AIH nije dobro shvaćena. Poznato je da imunološki sistem igra glavnu ulogu u nastanku etiologije hroničnog hepatitisa. Utvrđeno je da se serumska autoantitijela često nalaze kod kroničnog hepatitisa bilo koje etiologije (Tabela 11). Za ANA pronađenu u AIH i drugim bolestima jetre, nije bilo moguće identificirati specifične nuklearne antigene i ANA podtip. Meta autoimunih procesa kod hroničnih oboljenja jetre različite etiologije (AIH, hepatitis kao deo autoimunog poliendokrinog sindroma tip 1, autoimunost izazvana hepatotropnim virusima, hepatitis izazvan lekovima) su 1. faza enzimi metabolizma ksenobiotika (citokrom P-450) i faza II (uridin difosfat glukuronozil transferaza - UGT).

Tabela 11. Autoantitijela pronađena u različitim etiologijama kroničnog hepatitisa.

Etiologija hroničnog hepatitisa	Autoantitijela koja se mogu detektirati
Virusni hepatitis B
Virusni hepatitis C	ANA, SMA, LKM-1, GOR
Virusni hepatitis D	LKM-3 (UGT)
AIH tip 1	ANA, SMA, anti-aktinska antitijela
AIH tip 2	LKM-1
AIH tip 3	SLA
hepatitis izazvan lekovima	ANA, LKM-1
kriptogena	br

AIH tip 1(prisustvo serumskih ANA, SMA, antitela na aktin) je 85% svih sa AIH. Uočava se pretežno kod žena (8:1). Pogađa starije osobe, karakteriziraju ga rjeđe ekstrahepatične manifestacije i relativno povoljna prognoza. AIH - tip 2(prisustvo seruma LKM-1) čini ne više od 15% svih slučajeva AIH-a, među kojima prevladavaju mladi (od 2 do 14 godina). Često praćeno sistemskim manifestacijama i lošom prognozom.

AIH- 3. tip(prisustvo SLA) češće se razvija kod mladih žena (90%) i, prema nekim autorima, jedna je od varijanti tipa 1 AIH.

ZAKLJUČAK

Dakle, savremene mogućnosti serološkog ispitivanja seruma na prisustvo specifičnih autoantitijela pružaju kliničaru važan dodatni alat za diferencijalnu dijagnozu autoimunih bolesti, određivanje prognoze i praćenje efikasnosti terapije. Istovremeno, uzimajući u obzir posebnosti autoimunih procesa, mogućnost otkrivanja autoantitijela kod praktički zdravih osoba i ne uvijek dovoljnu specifičnost markera, pri tumačenju posebnu pažnju treba obratiti na činjenicu da je rezultat serološke analize samo po sebi određivanje autoantitijela ne može se smatrati nedvosmislenom potvrdom ili isključenjem dijagnoze.autoimuna bolest. Samo sveobuhvatna analiza cjelokupnog kompleksa laboratorijskih, amnestičkih i kliničkih podataka može omogućiti donošenje prave odluke.

^ SPISAK KORIŠĆENE LITERATURE

Shirinsky V.S. "Autoimune bolesti: patogeneza, dijagnoza, principi liječenja", Toolkit za studente i doktore, Novosibirsk, 1997
Serov V.V., Zayratyants O.V. "Autoimunizacija i autoimune bolesti", Arhiv za patologiju, 1992, v.54, str. 5-11
Aprošina Z.G., Serov V.V. „Autoimuni hepatitis (istorija studija, savremeni aspekti)", Arhiv za patologiju, 1998, vol. 60, br. 3, str. 71-75.
Pokrovski V.I., Gordienko S.P. "Imunologija infektivnog procesa", Vodič za doktore, M., 1994
Protopopov B.V. "Osnovni koncepti kliničke imunologije", Vodič za praktičare, Krasnojarsk, 1995.
Vijay Kamar, M.A. Janderski "Testiranje antinuklearnih antitela", ANTITELO, 1995, 8/CLN, str. 6, 8
Nakamura R. M., Tan E. M. "Nedavni napredak u laboratorijskim testovima i značaj autoantitijela na nuklearne antigene u sistemskoj reumatskoj bolesti" Clin. Lab Med., 1986, 6, str. 41 - 53
McCarty G.A., Valencia D.W., Fritzler M.J. "Antnuklearna antitela: savremene tehnike i klinička primena na bolesti vezivnog tkiva. U: Antinuklearna antitela. Oxford Univ. Press, N.Y., 1984, str. 1 - 95.
Enzimski imunotest: kompleti i oprema, Grupa kompanija BioChemMac, 2002.
Klinička imunologija i alergologija, ur. Praksa, M., 2000
T.S. de Araujo, R.S. Kirsner "Vaskulitis", Rane 2001, 13(3) str.99-110.

Bakterijski antigeni:

Specifično za grupu (dostupno u različitim vrstama istog roda ili porodice)

Specifične vrste (kod predstavnika jedne vrste)

Specifičan tip (odredite serološku varijantu unutar jedne vrste)

Specifičan soj

Stadiospecific

Unakrsno reaktivni antigeni (slični, isti kod ljudi i mikroba)

Po lokalizaciji:

OAS– somatski (LPS ćelijskog zida)

N-Ag- flagela (proteinska priroda)

K-Ag– kapsularni (PS, proteini, polipeptidi)

Ag Piley(fimbrijalni)

Cytoplasmic Ag(membrana, CPU)

Egzotoksini(proteini)

Ektoenzimi

H-AG dio je bakterijskih flagela, a njegova osnova je protein flagelin. Thermolabile.

K-AG je heterogena grupa površinskih, kapsularnih AG bakterija. U kapsuli su. Sadrže uglavnom kisele polisaharide, koji uključuju galakturonsku, glukuronsku kiselinu.

Unakrsno reaktivne antigenske determinante nalazi se u MO i ljudima/životinjama. Kod mikroba raznih vrsta i kod ljudi postoje uobičajene, slične strukture, AG. Ove pojave se nazivaju antigenska mimikrija. Često, unakrsno reaktivni antigeni odražavaju filogenetsku zajedništvo ovih predstavnika, ponekad su rezultat nasumične sličnosti u konformaciji i nabojima - AG molekula. Na primjer, Forsmanov AG se nalazi u eritrocitima ovnova, salmoneli i zamorcima. Hemolitički streptokoki grupe A sadrže antigene unakrsne reakcije (posebno M-protein) koji su uobičajeni s antigenima endokarda i glomerula ljudskih bubrega. Takvi bakterijski antigeni uzrokuju stvaranje antitijela koja unakrsno reagiraju s ljudskim stanicama, što dovodi do razvoja reumatizma i poststreptokoknog glomerulonefritisa. Uzročnik sifilisa ima fosfolipide slične strukture onima koji se nalaze u srcu životinja i ljudi. Stoga se kardiolipinski antigen srca životinja koristi za otkrivanje antitijela na spirohetu kod bolesnih ljudi (Wassermannova reakcija).

54. B-limfociti: razvoj, markeri, antigen-specifični B-ćelijski receptor. Metode za određivanje broja i funkcionalne aktivnosti B-limfocita.

B-limfociti tako nazvani jer se prvi put identifikuju kod ptica u posebnom centralnom organu imuniteta, koji se zove "Fabriciusova bursa" (bursa of Fabricius) i u kojem prolaze fazu sazrevanja. Kod životinja ovaj organ nema, a rane faze sazrijevanja B-limfocita prolaze u RMC.

Imaju antigen-specifičan B-ćelijski receptor (RCR) u obliku molekula antitijela vezanih za membranu, kao i niz površinskih CD AG i receptora. B-limfociti mogu prepoznati nativni AG u slobodnom stanju.

Posebnosti:

čine 10-15% krvnih limfocita i 20-25% ćelija limfnih čvorova.

ekspresno na površini IgD(IgM), HLA II, CD19,20,21,22,40,80/86 itd.

glavna funkcija:

GMO, proizvodnja antitela određene specifičnosti (Ig G, A, M)

prezentacija antigena na T-limfocitima

razvoj:

pluripotentne matične ćelije (CD34 i CD117)

pro-B ćelije (izražavaju AG i matične ćelije (CD34 i CD117), i B-limfociti - CD19 i CD22))

pre-B ćelije (sinteza IgM počinje u citoplazmi)

nezrele B ćelije (eksprimiraju IgM na površini)

2. Uništene su ćelije koje nose receptore za autoAG.

3. T - ćelijske zone perifernih limfoidnih organa:

ćelije koje nisu primile signal za preživljavanje od T ćelija su uništene

4. Limfni folikuli:

Zrele B ćelije (ekspresiraju IgM i IgD, kao i CD21, CD22 antigene).

5. Prije susreta sa AH, zreli B-limfociti stalno cirkulišu u krvi između RMC i sekundarnih limfoidnih organa. Nakon sastanka sa AG, pretvaraju se u plazma ćelije proizvodeći AT (1 milion molekula/sat) i memorijske ćelije.

B-ćelijski receptor B-limfocita koji prepoznaje antigen izgrađen od molekula membranskog imunoglobulina (monomerni IgM ili IgD) i dva molekula CD79 (a i c). BcR ima transmembranske i intracitoplazmatske segmente koji prenose intracelularne signale.

Metode za određivanje broja i funkcionalne aktivnosti B-limfocita.

Ljudski B-limfociti su u stanju da vežu eritrocite miša i sa njima formiraju rozete, kao i da formiraju rozete sa eritrocitima, senzibiliziranim molekulima antitijela (IgG) i C3b molekulom fragmenta sistema komplementa, koji se koristi u laboratorijskoj praksi. Ova svojstva, zajedno sa ekspresijom CD 5 molekula, omogućavaju identifikaciju subpopulacije B-limfocita.

Proučavanje broja i funkcionalnog stanja B-limfocita B-ćelije se nalaze u perifernoj krvi njihovim receptorskim aparatom, i to:

a) prisustvom receptora za imunoglobuline i 3. frakcije komplementa- EAC rozeta reakcija; Reakcija formiranja EAC rozete odvija se u 2 faze: prva

pripremiti reagens koji se sastoji od goveđih eritrocita, antitijela na njih i komplementa, a zatim se ovaj formirani kompleks dodaje limfocitima ljudske krvi. Formira se rozeta, koja se spolja ne razlikuje od E-rozeta, ali način dobijanja ukazuje na identifikaciju B-limfocita.

b) prisustvom imunoglobulinskih receptora- reakcija imunofluorescencije; omogućava vam da otkrijete imunoglobulinske receptore na površini B-limfocita. Za to se koriste antiglobulinski serumi obilježeni fosforom.

c) prisustvom receptora za eritrocite miša- reakcija formiranja ME-rozete. Sling reakcija s mišjim eritrocitima nastaje kao rezultat miješanja ovih potonjih s limfocitima periferne krvi.

Funkcionalne karakteristike B-limfocita i količina imunoglobulina različitih klasa. Najčešće korišteni metoda radijalne imunodifuzije u agaru: otopljeni agar se sipa na staklenu ploču koja sadrži antitijela na datu klasu imunoglobulina. Jažice se izbijaju u agaru u koje se unose uzorci proučavanih seruma. Kao rezultat imunoprecipitacije formiraju se radijalne pruge čiji promjer ovisi o koncentraciji odgovarajućeg imunoglobulina. - Određivanje antitela na autoantigene ili na mikrobe normalne mikroflore.

Određivanje titra specifičnih antitijela proizvedenih u ljudskom tijelu nakon imunizacije vakcinama.

55. Humoralni imuni odgovor: definicija, faze razvoja. Aktivacija, proliferacija i diferencijacija ćelija. eliminacija antigena. T-ovisni i T-nezavisni odgovor. Manifestacije primarnog i sekundarnog humoralnog imunološkog odgovora.

GMO faze:

Prezentacija antigena (prepoznavanje, obrada i prezentacija antigena).

Induktivna faza (prenos informacija do odgovarajućeg klona B-limfocita, njihova proliferacija i diferencijacija).

Efektorski stadijum (sinteza antitijela i formiranje memorijskih B-limfocita).

T-nezavisna aktivacija B-limfocita- direktna stimulacija B-limfocita bez učešća T-limfocita sa T-nezavisnim antigenima.

Ovi AG su LPS ili polisaharidi mikroba sa linearno ponavljajućim strukturama.

Vezivanjem za HCR, oni ili aktiviraju odgovarajući klon B-limfocita (pneumokokni polisaharidi) ili izazivaju poliklonsku aktivaciju B-limfocita (LPS Gram-bakterija), koji se razmnožavaju, diferenciraju u plazma ćelije koje sintetiziraju IgM.

Memorijski B-limfociti se ne formiraju.

T-ovisna aktivacija B-limfocita- provode T-ovisni antigeni (proteini, bakterije) uz obavezno učešće T-limfocita.

APC hvataju antigen, obrađuju ga u peptide male molekularne težine i, u kombinaciji sa molekulom MHC II, predstavljaju ga naivnim T-limfocitima (Tx0), koji s njim stupaju u interakciju s TCR receptorom i CD4 ko-receptorom.

Tx0 se aktiviraju, razmnožavaju i pretvaraju u efektorske ćelije - Tx2.

HRC prepoznaje antigen i ćelija ga apsorbuje. Nakon obrade, formira se i kompleks MHC peptid-molekula klase II, koji B-limfociti predstavljaju Th2 pomagačima.

Interakcija B-T-ćelija: Th2 percipiraju signal uz pomoć TCR-a i CD4 ko-receptora. Međutim, za potpunu aktivaciju T-pomoćnika potrebna je dodatna stimulacija (kostimulacija) koju provode molekuli međućelijske interakcije (CD40-CD40L, CD80/86-CD28 itd.). Ovi procesi su važni i za aktivaciju B-limfocita. U nedostatku kostimulacije dolazi do apoptoze T-limfocita.

Aktivirani Th2 proizvodi IL-4, 5, 6, 10, pod utjecajem kojeg B-limfociti proliferiraju, pretvaraju se u blaste, a zatim u plazma ćelije koje sintetiziraju antitijela. Uz sudjelovanje Tx2 citokina moguće je zamijeniti imunoglobulinske gene B-limfocita, čime se osigurava sinteza imunoglobulina. razne casovi.

Neke od blast ćelija se pretvaraju u Memorijski B-limfociti. Mala populacija ćelija formirana tokom humoralnog imunološkog odgovora od aktiviranih B-limfocita. Oni prežive u stanju funkcionalnog mirovanja dugi niz godina nakon eliminacije antigena iz organizma. Oni nose "pamćenje" antigena u obliku antigen-specifičnih HRC (uglavnom IgG).

Primarni imuni odgovor razvija se pri prvom prodiranju antigena u tijelo nakon latentnog perioda (2-3 dana). Prvo se sintetiše IgM (otkriven nakon 2-3 dana), a zatim IgG (vrhunac 10-14 dana, može ostati u niskom titru tokom života). Paralelno, postoji blagi porast nivoa IgA, IgE, IgD. Primarni imuni odgovor se smanjuje 2-3 sedmice nakon izazivanja antigena. Nakon njega ostaju memorijske ćelije i nivo IgG antitijela u tragovima se može održavati dugo vremena.

sekundarni imuni odgovor zahvaljujući B-memorijskim ćelijama, stimulacija sinteze antitijela dolazi brzo (nakon 1-3 dana). Broj antitijela naglo raste i odmah se sintetizira IgG, čiji su titri višestruko veći nego u primarnom imunološkom odgovoru. Povećava se njihov afinitet (afinitet) za antigen. Na mukoznim membranama nivo sekretornih IgA antitijela značajno raste. Nivo IgM antitela se ne menja značajno zbog odsustva memorijskih B ćelija sa IgM receptorom. Vrijeme propadanja sekundarnog značajno premašuje trajanje očuvanja antitijela tokom primarnog imunološkog odgovora.

Podijeli: