Serološke metode testova krvi za dijagnozu bolesti. Serološke metode istraživanja u dijagnostici parazitskih bolesti Serološka laboratorijska analiza čega

Analiza na sifilis jedna je od najčešćih među laboratorijskim pretragama. Testovi na sifilis se široko koriste prilikom preventivnih pregleda. Uz pomoć mikroskopije otkriva se uzročnik sifilisa -. Uz pomoć seroloških reakcija potvrđuje se dijagnoza sifilisa, postavlja dijagnoza latentnog sifilisa, prati se efikasnost liječenja i utvrđuje stopa izlječenja pacijenata.

Dijagnoza sifilisa se postavlja na osnovu kliničkih podataka, otkrivanja uzročnika sifilisa u uzorcima materijala i potvrde dijagnoze serološkim metodama istraživanja. Manifestacije sifilisa su brojne i raznolike, zbog čega bolest otkrivaju liječnici različitih specijalnosti. Diferencijalna dijagnoza primarnog sifilisa provodi se s nizom bolesti.

Rice. 1. Na fotografiji, primarna manifestacija sifilisa je tvrdi šankr.

Antitijela na blijedu treponemu i serološka dijagnoza

Kada se zarazi sifilisom, u tijelu pacijenta se stvaraju antitijela. Serološka dijagnoza pomaže doktoru da prouči dinamiku stvaranja antitijela u tijelu pacijenta sa sifilisom u početnim fazama bolesti, tokom perioda lečenja i nakon njegovog završetka, da se reši pitanje recidiva bolesti kod pacijenta ili ponovne infekcije (reinfekcije), da se dijagnostikuje sifilis u masovnim medicinskim uslovima.

Antitijela na blijedu treponemu IgM

IgM antitijela su prva koja se proizvode nakon infekcije. Počinju se otkrivati ​​serološkim reakcijama od druge sedmice nakon infekcije. U 6-9 sedmici bolesti njihov broj postaje maksimalan. Ako pacijent nije bio liječen, tada antitijela nestaju nakon šest mjeseci. IgM antitela nestaju nakon 1-2 mjeseca. posle, posle 3 - 6 meseci. - nakon liječenja kasnog sifilisa. Ako je zabilježen njihov rast, onda to služi ili ukazuje na ponovnu infekciju. IgM molekuli su veliki i ne prolaze kroz placentu do fetusa.

Antitijela na IgG blijedu treponemu

Antitela imunoglobulina IgG javljaju se na kraju prvog meseca (4. nedelje) od trenutka infekcije. Njihov titar je veći od titra IgM. IgG perzistiraju nakon tretmana dosta dugo.

Nespecifična antitela

Postoji mnogo seroloških reakcija. To je zbog antigenske multiplicitnosti blijede treponeme. U krvnom serumu bolesne osobe, različite faze sifilis, osim specifičnih, formiraju se i određena nespecifična antitela - aglutinini, komplementarna, imobilizini, antitela koja izazivaju imunološku fluorescenciju, precipitini itd. Serološke reakcije za otkrivanje nespecifičnih antitela imaju relativnu specifičnost, reakcije (CSR ).

Lažno pozitivni testovi na sifilis

Prepoznatljiva karakteristika ne-treponemski testovi dobijaju lažno pozitivne reakcije. Antitela na reagin, koja se stvaraju u ljudskoj krvi na kardiolipin antigen, registrovana su ne samo kod sifilisa, već i kod drugih bolesti: kolagenoze, hepatitisa, bolesti bubrega, tireotoksikoze, onkoloških bolesti, zarazne bolesti(guba, tuberkuloza, bruceloza, malarija, tifus, šarlah), tokom trudnoće i menstruacije, prilikom uzimanja masne hrane i alkohola. Primjećuje se da se s godinama povećava broj lažno pozitivnih reakcija.

Rice. 2. Fotografija prikazuje primarni sifilis kod žena.

Laboratorijska dijagnostika sifilisa serološkim testovima

Serološki testovi na sifilis se dijele na treponemske i netreponemske.

1. Netreponemski testovi

Kardiolipin antigen se koristi kao antigen u ovoj grupi testova. Lipidni antigeni uzročnika sifilisa su najbrojniji. Oni čine 1/3 suve mase ćelije. Uz pomoć netreponemskih testova otkrivaju se reaginska antitijela koja se proizvode protiv kardiolipinskog antigena. Ova grupa uključuje reakciju fiksacije komplementa (RSKcard), reakciju mikroprecipitacije (RMP), brzo određivanje reagina plazme (RPR) itd. Netreponemskim testovima vrši se primarni skrining na sifilis (pregled populacionih grupa), a mogućnost dobijanja rezultata u kvantitativnoj varijanti omogućava vam da koristite ove testove za praćenje efikasnosti lečenja. Pozitivne rezultate na netreponemskim testovima treba potvrditi treponemskim testovima. Karakteristična karakteristika netreponemskih testova je proizvodnja lažno pozitivnih reakcija.

2. Treponemski testovi

Treponemski testovi koriste antigene treponemskog porijekla izolovane iz kulture treponema pallidum. Uz njihovu pomoć potvrđuju se pozitivni rezultati netreponemskih testova. Grupa uključuje: RSKtrep - reakcija fiksacije komplementa, RIF - reakcija imunofluorescencije i njene modifikacije, RIT, RIBT - reakcija imobilizacije blijede treponema, RPHA - reakcija pasivne hemaglutinacije, ELISA - enzimski imunotest.

3. Testovi na sifilis korištenjem rekombinantnih antigena

Antigeni za ovu grupu testova se dobijaju genetskim inženjeringom i koriste u reakcijama - TPHA i ELISA, u imunobloting (IB) analizama i imunohromatografskim analizama.

Rice. 3. Za dijagnosticiranje sifilisa koristi se set seroloških testova.

Dijagnoza sifilisa korištenjem netreponemskih testova

Za otkrivanje sifilisa koriste se netreponemski testovi ili kompleks seroloških reakcija (CSR). Serološka dijagnostika će se primjenjivati ​​od 5. sedmice od trenutka infekcije ili od 2-3 sedmice od početka. Antitijela se otkrivaju kod gotovo svih pacijenata sa svježim primarnim,. Serološke reakcije su pozitivne u 70 - 80% pacijenata sa, u 50 - 60% slučajeva kod pacijenata sa tercijarnim latentnim sifilisom.

Serološke reakcije pomoću netreponemskih testova mogu dati lažno pozitivne rezultate.

Rice. 4. Uzimanje krvi za testiranje na sifilis.

Reakcija fiksacije komplementa (RSK kartica, KSK sa KA, Wassermanova reakcija)

Wassermanova reakcija (RW, RV), koju je A. Wasserman izmislio prije više od 100 godina, danas je pretrpjela mnoge promjene, međutim, kao počast tradiciji, zadržala je ime do danas. Test fiksacije komplementa pomoću kardiolipin antigena namijenjen je ne samo otkrivanju antitijela, već se izvodi i u kvantitativnoj verziji - s različitim razrjeđenjima seruma, što omogućava da se koristi za praćenje učinkovitosti liječenja. Niska osjetljivost i specifičnost, dobivanje lažno pozitivnih rezultata su negativni aspekti ove vrste istraživanja.

Suština Wassermanove reakcije je sljedeća: antigeni koji se koriste u formulaciji Wassermanove reakcije, u slučaju prisustva antitijela na uzročnike sifilisa u ljudskoj krvi, putem komplimenta se vezuju za njih. i talog. Intenzitet reakcije je označen znakom (+). Reakcija može biti negativna (-) - nema taloga, sumnjiva (mali sediment ili +), slabo pozitivna (++), pozitivna (+++) i oštro pozitivna (++++).

Osetljivija je modifikovana Wassermannova reakcija - Kolmerova reakcija. Uz njegovu pomoć, antitijela se otkrivaju u serumima, gdje je Wassermanova reakcija dala negativan rezultat.

S oštro pozitivnim reakcijama, provodi se kvantitativno određivanje reagina, za koje se koristi serum u razrjeđenjima od 1:10 do 1:320, što omogućava upotrebu ovu vrstu studije za praćenje efikasnosti lečenja. Na primjer, smanjenje titra antitijela i njihova naknadna seronegativnost (dobivanje negativnih rezultata) ukazuje na uspješno izlječenje bolesti.

Rice. 5. Test krvi na sifilis - Wassermanova reakcija.

Precipitacijske mikroreakcije (MPR)

Mikroreakcija precipitacije koristi se za masovna ispitivanja pojedinačne grupe populacije, dijagnosticiranje sifilisa i praćenje efikasnosti liječenja. Za izvođenje ove vrste studija potrebna je mala količina materijala koji se proučava. Mikroreakcija precipitacije zasniva se na imunološkoj reakciji antigen-antitijelo. U slučaju prisustva antitijela u krvnom serumu subjekta, kompleks antigen-antitijelo precipitira sa stvaranjem pahuljica. Reakcija se izvodi u jamicama posebne staklene ploče. Procjenjuje se intenzitetom istaloženog precipitata i veličinom pahuljica u (+) kao Wassermanova reakcija. Prilikom pregleda trudnica, donora i praćenja efikasnosti liječenja se ne koristi. VDRL i RPR su vrste mikroreakcija.

Rice. 6. Pogled na reakciju taloženja u kapi na staklu.

Rice. 7. Test krvi na sifilis - reakcija mikroprecipitacije.

Rice. 8. Komplet za brzo određivanje plazma reagina (Test za RPR na sifilis).

Svi pozitivni testovi dobijeni tokom nespecifičnih seroloških reakcija zahtevaju potvrdu specifičnim reakcijama - treponemskim testovima.

Dijagnoza sifilisa pomoću treponemskih testova

Prilikom provođenja treponemskih testova koriste se antigeni treponemskog porijekla. Njihova negativnu stranu je nemogućnost upotrebe za kontrolu efikasnosti lečenja, dobijanje pozitivnih rezultata kod spirohetoze i nevenerične treponematoze i dobijanje lažno pozitivnih rezultata kod onkološke bolesti, guba, neke endokrine patologije. Testovi kao što su RPHA, ELISA i RIF ostaju pozitivni mnogo godina nakon izlječenja sifilisa, au nekim slučajevima i doživotno.

RIBT i RIF su najspecifičniji od svih seroloških testova koji se koriste za dijagnosticiranje sifilisa. Omogućuju vam da razlikujete lažno pozitivne reakcije, da identifikujete kasne oblike sifilisa koji se javljaju s negativnim reakcijama. Uz pomoć RIBT-a prepoznaju se lažno pozitivne reakcije kod trudnica kada je potrebno riješiti pitanje infekcije djeteta.

Treponema pallidum reakcija imobilizacije (RIBT, RIT)

Suština reakcije je da antitijela u krvnom serumu pacijenta imobiliziraju blijedu treponemu. Reakcija s imobilizacijom do 20% patogena smatra se negativnom, slabo pozitivnom - 21 - 50%, pozitivnom - 50 - 100%. RIBT ponekad daje lažno pozitivne rezultate. Test je složen i dugotrajan, ali je neophodan prilikom izvođenja diferencijalna dijagnoza latentni oblici bolesti i lažno pozitivni rezultati seroloških reakcija, uključujući i trudnice. RIBT daje 100% pozitivan rezultat kod sekundarnog, ranog i kasnog sifilisa, u 94 - 100% slučajeva - kod drugih oblika sifilisa.

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Suština reakcije je da blijedi treponemi (antigeni), u kombinaciji s antitijelima označenim fluorohromima, emituju žuto-zeleni sjaj u fluorescentnom mikroskopu. Rezultat se vrednuje sa (+) znakom. Uz pomoć RIF-a detektuju se imunoglobulini klase A. Reakcija imunofluorescencije postaje pozitivna ranije od Wassermanove reakcije. Uvijek je pozitivan kod sekundarnog i latentnog sifilisa, u 95-100% slučajeva pozitivan je kod tercijarnog i kongenitalnog sifilisa. Tehnika za provođenje ove vrste istraživanja je jednostavnija od RIBT-a, ali je nemoguće zamijeniti RIF sa RIBT, jer je ova reakcija inferiorna u odnosu na RIBT u specifičnosti. RIF-10 (RIF modifikacija) je osjetljiviji, RIF-200 i RIF-abs su specifičniji.

Rice. 9. Test krvi na sifilis - reakcija imunofluorescencije (RIF).

Treponema pallidum test imunološke adhezije (TRIPBT)

Suština reakcije je da se blijedi treponemi senzibilizirani pacijentovim serumom u prisustvu komplementa prianjaju na površinu eritrocita. Dobijeni kompleksi se talože tokom centrifugiranja. Osjetljivost ovaj test i specifičnosti su bliske RIF-u i RIBT-u.

Enzimski imunosorbentni test za sifilis (ELISA)

Uz pomoć ELISA-e određuju se imunoglobulini klase M i G. IgM - ELISA metoda se može koristiti kao skrining i potvrdni test. ELISA osjetljivost i specifičnost su slične RIF-u. Kod sifilisa ELISA daje pozitivne rezultate od trećeg mjeseca infekcije i ostaje pozitivna dosta dugo (ponekad i cijeli život).

Rice. 10. ELISA analizator.

Reakcija pasivne (indirektne) hemaglutinacije (RPHA)

TPHA se zasniva na sposobnosti eritrocita, na kojima se adsorbuju antigeni treponema pallidum, da se drže zajedno (hemaglutinacija) u prisustvu seruma pacijenta. RPHA se koristi za dijagnosticiranje svih oblika sifilisa, uključujući latentni. Kada se primeni Visoka kvaliteta antigena, ova vrsta serološke reakcije nadmašuje sve druge testove po specifičnosti i osjetljivosti.

Rice. 11. RPHA se koristi za dijagnostiku svih oblika sifilisa.

Rice. 12. Analiza na sifilis - reakcija pasivne (indirektne) hemaglutinacije (šema).

Rice. 13. Pojava obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno epruvete, ukazuje na pozitivnu reakciju. U slučaju kada se eritrociti talože u stupcu (“dugme”) u sredini dna epruvete, govore o negativnoj reakciji.

Rice. 14. RPGA test u laboratorijskim uslovima.

Mikrobiološka dijagnostika

Uz serološku dijagnostiku, metoda za otkrivanje blijedih treponema ( mikrobiološka dijagnostika) igra važnu ulogu, posebno u periodu seronegativnog sifilisa, kada još nema antitela u krvi, ali već postoje prve manifestacije svežeg primarnog sifilisa (tvrdi šankr).

Biološki materijal za ispitivanje je iscjedak sa površine tvrdih ulkusa (šankr), sadržaj pustularnih sifilida, plačućih i erozivnih papula, punktata inficiranih limfnih čvorova, likvora i amnionske tekućine, te krvi za PCR.

Najbolja metoda za otkrivanje uzročnika sifilisa je proučavanje biološkog materijala u tamnom polju mikroskopa. Ova tehnika vam omogućava da vidite blijedu treponemu u živom stanju, da proučite njene karakteristike strukture i kretanja, da razlikujete patogeni agensi od saprofita.

Rice. 15. Analiza na sifilis - mikroskopija tamnog polja.

Rice. 16. Prilikom proučavanja suhih razmaza koristi se bojanje po Romanovsky-Giemsa. Blijede treponeme se istovremeno boje u roze boje, sve ostale vrste spiroheta - u ljubičastoj boji.

Otkrivanje blijedih treponema mikroskopijom u tamnom polju je apsolutni kriterij za konačnu dijagnozu sifilisa.

Rice. 17. Za otkrivanje bakterija koristi se imunofluorescentna reakcija (RIF) – treponemski test. Specifični kompleks antigen - antitelo u kombinaciji sa specifičnim serumom označenim fluorohromom, u svjetlu fluorescentnog mikroskopa, daje bakteriji zelenkasti sjaj.

Rice. 18. Uzročnici sifilisa su jasno vidljivi u brisevima pripremljenim po Levaditi metodi (impregnacija srebrom). Blijede tamne treponeme na pozadini žute boje ćelija inficiranih tkiva.

Rice. 20. Fotografija prikazuje koloniju blijede treponema. Dobijanje kulture bakterija je teško. Oni praktički ne rastu na umjetnim hranljive podloge. Na podlogama koje sadrže konjski i zečji serum kolonije se pojavljuju 3. - 9. dana.

PCR za sifilis

Danas je efikasna i obećavajuća tehnika izvođenja polimeraze lančana reakcija. PCR za sifilis omogućava vam da dobijete rezultat u roku od nekoliko sati, a najmanje nekoliko patogena može biti prisutno u materijalu prikupljenom za dijagnozu.

Rice. 21. PCR za sifilis vam omogućava da otkrijete DNK ili njene fragmente blijede treponeme.

Osetljivost ove metode istraživanja zavisi od prisustva bledih treponema u biološkom materijalu i dostiže 98,6%. Specifičnost ovog testa uvelike zavisi od pravi izbor cilja za pojačanje tokom dijagnostike i dostiže 100%.

Istovremeno, zbog nedovoljno proučenih komparativnih karakteristika osjetljivosti i specifičnosti direktnih metoda za dijagnosticiranje sifilisa i PCR-a, ova metoda ispitivanja u Ruskoj Federaciji za dijagnosticiranje bolesti još nije odobrena.

PCR za sifilis je dozvoljen samo u nekim slučajevima, kao npr dodatna metoda dijagnoza kongenitalnog sifilisa, neurosifilisa, sa poteškoćama u dijagnosticiranju sifilisa serološkim metodama istraživanja kod HIV pacijenata.

Rice. 22. Detekcija treponema pallidum DNK pomoću PCR-a ukazuje ili na prisustvo živih bakterija, ili na ostatke mrtvih bakterija, ali sadrži dodatne kopije pojedinačnih dijelova hromozomske DNK sposobne za formiranje dodatnih kopija.

Šta pokazuje serološka analiza krv? Dijagnostičke mjere Ovo je najvažniji korak u liječenju svake bolesti. Uspjeh liječenja ne ovisi samo o propisanim lijekovima, već u velikoj mjeri i o tome koliko je tačna dijagnoza postavljena.

Osim toga, dijagnostika pomaže u sprječavanju komplikacija i prateće bolesti. Uz pomoć serološke analize krvi pacijenta otkriva se prisutnost antitijela i antigena. Studija pomaže u otkrivanju mnogih bolesti, određivanju njihove faze i kontroli toka liječenja.

Šta je serologija?

Serologija je grana imunologije koja proučava reakcije antigena na antitijela. Ovaj odeljak medicina se bavi proučavanjem krvne plazme i njenih imunoloških karakteristika.

Danas je serološki test krvi na antitijela pouzdan način za otkrivanje virusa humane imunodeficijencije, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosivih bolesti i drugih bolesti opasnih po život. Hajde da shvatimo u kojim slučajevima je to propisano.

Indikacije za termin

Neophodan je serološki test krvi za identifikaciju uzročnika bolesti u slučaju poteškoća u postavljanju dijagnoze.

Da bi se izvela ova reakcija, antigeni patogena se ubrizgavaju u plazmu, a zatim laboratorijski asistent proučava proces koji je u toku. Ili provode obrnutu reakciju: antitijela se ubrizgavaju u zaraženu krv kako bi se utvrdila specifična pripadnost patogena.

Područje primjene

Ova studija se koristi u raznim granama medicine. Uz pomoć ove reakcije otkrivaju se specifične ćelije i antitijela koje tijelo proizvodi u cilju borbe protiv infekcija i virusa.

Osim toga, serološkom metodom određuje se krvna grupa osobe.

Sličan serološki test krvi koristi se u ginekologiji za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti. Ova metoda se također koristi za sveobuhvatne ankete trudnice (otkrivanje toksoplazmoze, HIV-a, sifilisa itd.). Polaganje ovog testa je obavezno prilikom prijave u antenatalnu ambulantu.

Kod djece se serološkim testom potvrđuje dijagnoza tzv. "dječijih" bolesti (varičele, boginje, rubeole i dr.) u slučaju da simptomi nemaju izražene manifestacije i bolest je nemoguće identificirati analiziranje kliničkih indikacija.

Otkrivanje veneričnih bolesti

Za venereologe ovo testiranje je zaista neophodno i omogućava vam da vrlo precizno postavite dijagnozu.

Uz zamagljenu kliničku sliku, serološki test krvi na sifilis, giardiju, ureaplazmozu, klamidiju, herpes i druge bolesti omogućava vam da brzo identificirate prisutnost antitijela.

Virusne i zarazne bolesti

Serološku analizu aktivno koriste gastroenterolozi, hepatolozi i specijalisti za infektivne bolesti za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa.

Dešifrovanje serološkog testa krvi omogućava određivanje stadija toka bolesti i odgovor na pitanje kolika je hospitalizacija potrebna u ovog trenutka. Kako se pravilno pripremiti?

Priprema za dostavu analize

Serološke analize krvi rade se u javnim i komercijalnim klinikama. Prednost treba dati laboratoriji sa savremenom opremom i kvalifikovanim osobljem.

Biološki uzorci za istraživanje mogu biti pljuvačka i izmet, ali se u većini slučajeva koristi venska krv pacijenta. Uzima se krv za serološki test kubitalna vena u laboratorijskim uslovima. Prije nego što uradite test, trebate se posavjetovati sa svojim ljekarom o pripremi za ovu proceduru.

Da biste se pripremili za isporuku analize za serološku studiju, morate slijediti nekoliko jednostavnih pravila.

Krv se uzima u mirnom stanju prije jela, odnosno na prazan želudac. Prije toga ne biste se trebali podvrgavati drugim studijama, kao što su rendgenski snimci, ultrazvuk itd.

Nekoliko sedmica prije davanja krvi potrebno je isključiti upotrebu antibakterijskih i nekih drugih lijekova. Određene preporuke u ovom slučaju zavise od bolesti za koju se radi test. Na primjer, test na hepatitis uključuje izbjegavanje masne hrane i alkohola 48 sati prije zahvata.

Reakcija fluorescencije

Među varijetetima seroloških reakcija postoji reakcija fluorescencije. Ova tehnika koristi reagens koji ističe antitijela u krvnom serumu.

Postavljanje serološke reakcije direktnog tipa uključuje obilježavanje specifičnih antitijela fluorescentnom supstancom. Ova reakcija je najbrža i odvija se u jednom koraku.

Druga opcija za provođenje takve analize naziva se indirektna ili RNIF. Izvodi se u dvije faze. U prvom koraku, antitijela se ne obilježavaju fluorescentnim oznakama, au drugom koraku se koriste odgovarajuće označena antitijela za otkrivanje antigena i antitijela. Luminiscencija se javlja tek nakon što dođe do vezivanja za specifično antitijelo.

Šta pokazuje serološki test krvi? Rezultat cjelokupnog postupka ocjenjuje se posebnim uređajem koji analizira jačinu zračenja, otkriva oblik i veličinu predmeta koji se proučava. Uzročnici zaraznih bolesti otkrivaju se rezultatom čija je pouzdanost 90-95%, ovisno o vrsti i stadiju patologije.

Vezani imunosorbentni test

Ove vrste serologije koriste jedinstvene, stabilne reagense. Čini se da se označene supstance lijepe za željena antitijela. Kao rezultat, dobijamo kvalitativni ili kvantitativni rezultat.

Ako se ne pronađu izraziti markeri, rezultat će se smatrati negativnim. Ako se tokom kvalitativne studije otkrije prisustvo antitijela u biološkim uzorcima, tada se rezultat analize smatra pozitivnim. At kvantifikacija analiza ćelija daje precizniji rezultat.

Analizirajući pokazatelje analize (na primjer, količinu otkrivenih ćelija), specijalist utvrđuje da li je bolest na početna faza, u akutnoj fazi, ili je pogoršana hronični oblik patologija. Da bi postavio dijagnozu, liječnik uzima u obzir ne samo podatke serološke studije, već i kliničku sliku bolesti.

Karakteristike ovog testa

Sprovođenje ove analize nije uvijek u mogućnosti dati 100% sigurnost da je određena bolest otkrivena. Dešava se da rezultati mogu biti dvosmisleni i da su potrebne druge procedure.

Na primjer, tokom testa na brucelozu, serum se testira na samozadržavanje bez antigena. Ovo značajno povećava pouzdanost testiranja. Analiza na brucelozu može biti pozitivna ili negativna, a može izazvati i sumnju.

Ako dobijete sumnjive rezultate koji nemaju jednoznačno tumačenje, preporučuje se da ponovite analizu. Osim toga, bruceloza se može otkriti kao rezultat hemokulture pregledom Koštana srž i cerebrospinalnu tečnost.

Prednosti serološke analize krvi

Dijagnostičke tehnike korištenjem seroloških testova široko se koriste u modernim medicinska praksa. To se posebno često radi pri određivanju virusnih i zaraznih patologija.

Isti testovi se koriste u geografskom skriningu i medicinskom pregledu kako bi se spriječilo epidemiološko širenje infekcije.

Prednosti metode uključuju:

• Visok nivo samopouzdanja.
• Brz odgovor i rezultati. Rezultati RSC-a poznati su u roku od 24 sata. U posebnoj situaciji, u bolničkom okruženju, analiza će biti gotova za nekoliko sati.
• Praćenje razvoja bolesti i efikasnosti terapije.
• Niska cijena i dostupnost za pacijente.

Nedostaci metode

Međutim, serološke studije imaju i svoje nedostatke.

To uključuje činjenicu koju bi analiza trebala uzeti u obzir period inkubacije bolesti kako bi se dobila pouzdanija slika.

Na primjer, određivanje herpes simpleksa prvog ili drugog tipa moguće je tek nakon 14 dana od trenutka infekcije. Analiza na prisustvo virusa imunodeficijencije vrši se nakon 30 dana, nakon 90 dana i šest mjeseci nakon kontakta sa zaraženom osobom.

Naravno, na pouzdanost rezultata može uticati i ljudski faktor: zanemarivanje pravila pripreme za uzimanje krvi ili greška laboratorijskog asistenta tokom reakcije.

statistički, pogrešan rezultat mogu se dobiti u 5% slučajeva. Iskusan doktor, prilikom pregleda pacijenta, proučavajući kliničku sliku, u većini slučajeva može izračunati učinjenu grešku.

Stranica pruža pozadinske informacije samo u informativne svrhe. Dijagnozu i liječenje bolesti treba provoditi pod nadzorom specijaliste. Svi lijekovi imaju kontraindikacije. Potreban je savjet stručnjaka!

Serološki analiza krvi je metoda laboratorijskog testiranja određenih antigena ili antitijela ( specifičnih proteina) u pacijentovom serumu, na osnovu imunološke reakcije organizam. Ova metoda primjenjuje se kada dijagnostika zarazne bolesti radi otkrivanja prisustva antitijela u krvi pacijenta na određenu vrstu virusa ili bakterija, kao i određivanje krvne grupe.

Materijal koji se proučava

Prije svega, za serološke analize koristi se biološki materijal sakupljen od pacijenta:

• krvni serum
• pljuvačke
• fekalne materije

U nekim slučajevima ispituje se materijal izoliran iz određenih objekata okoliša:

• tlo

Metoda analize ili uzorkovanja krvi

Ova analiza ne zahtijeva posebnu pripremu pacijenta. Uzimanje krvi se vrši ujutro na prazan želudac i obavlja se u prostorijama za tretmane medicinske ustanove, prema opšteprihvaćenim hematološkim metodama. Za serološka ispitivanja, vađenje krvi vrši se na dvije metode: venska krv uzima se iz pacijentove kubitalne vene i kapilarna krv prstenjak. Krv se stavlja u sterilne zatvorene epruvete.

Karakteristike transporta krvi i skladištenja seruma

Odmah nakon uzimanja uzorka krvi se transportuje u posebnu laboratoriju, gdje se istog dana priprema serum. Čuvanje seruma je dozvoljeno ne više od 4-6 dana u frižideru na temperaturi od 2-4 stepena. Ako je potrebno duže skladištenje, serum se zamrzava. Kako bi se izbjeglo narušavanje kvalitete seruma, dopušteno je jednom zamrznuti i, shodno tome, odmrznuti. Prilikom dugotrajnog skladištenja, antitijela gube svojstva i postaju djelomično neaktivna, a najosjetljiviji na smrzavanje su imunoglobulini klase M. Nakon odmrzavanja seruma, potrebno ga je temeljito promiješati do homogene mase, što pomaže u obnavljanju koncentracije antitijela sadržanih u ovom serumu.

Za šta se koristi serologija?

Serološke metode laboratorijska dijagnostika koristi se za otkrivanje bolesti kao npr ehinokokoza, trihineloza, toksokaroza, opistorhijaza, cisticerkoza, toksoplazmoza, amebijaza, giardijaza, da se utvrdi efikasnost tijeka liječenja i, konačno, otkrije ponovna bolest nakon potpunog oporavka pacijenta.

Osnovne metode serološke dijagnostike

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Ova reakcija je indirektna verzija serološke studije, odnosno izvodi se u dvije faze. U prvoj fazi detektuje se potrebno antitijelo u cirkulirajućem kompleksu antigen-antitijelo pomoću antiglobulina, koji je po strukturi sličan proteinima imunološkog seruma. Identifikacija željenog antitela je moguća i kada se proučava unapred pripremljeni antigenski preparat pod fluorescentnim mikroskopom, bez upotrebe antiglobulina.

Imunofluorescentna reakcija je vrlo dugotrajan proces koji od specijaliste zahtijeva puno vremena i odgovornosti. Reakcija počinje pripremom rastvora, zatim se serumi i njihovi kontrolni uzorci podvrgavaju titraciji ( proces koji omogućava određivanje sadržaja određene tvari postupnim miješanjem ispitne otopine s kontroliranom količinom reagensa). Prethodno pripremljena razblaženja i njihovi kontrolni uzorci pažljivo se nanose na stakalce sa antigenom. Zatim se preparati podvrgavaju inkubaciji, nakon čega slijedi njihovo pranje i sušenje na zraku. Na pločice koje sadrže antigen nanosi se tanak sloj antiseruma, nakon čega se preparati ponovo inkubiraju i ponavlja cijeli prethodni lanac djelovanja, završavajući sušenjem preparata. Kao rezultat, preparat na predmetnom predmetu se tretira glicerolom i ispituje pod fluorescentnim mikroskopom.

Rezultati reakcije se ocjenjuju na skali od četiri tačke, koju karakterizira intenzitet površinskog žuto-zelenog sjaja antigenskih stanica:
+ veoma slab sjaj ćelije, primetan samo na njenoj periferiji
++ slab sjaj periferije ćelije, ali sa jasno vidljivom zelenom nijansom
+++/++++ sjajan sjaj Zelena bojaćelijska periferija
Reakcijskim titrom smatra se takvo razrjeđenje seruma u kojem najmanje 50% ćelija antigena pokazuje jasan površinski sjaj, odnosno rezultat reakcije +++ ili ++++ . Vrijednost raspona reakcija je od 1/80 do 1/100.

Intenzitet reakcije zavisi od broja precipitiranih eritrocita na dnu formiranih jažica:
– negativna reakcija, koju karakterizira taloženje eritrocita na dnu jažica u obliku malog prstena s glatkim rubovima ili "gumbima"
+ niskog intenziteta, ova reakcija se odlikuje malim pojedinačnim naslagama na dnu rupe. Neaglutinirani eritrociti formiraju "mali prsten" u centru jažice
++ srednjeg intenziteta, karakteriše ga formiranje "širokog gustog prstena" neaglutiniranih eritrocita na dnu rupe
+++ intenzivna reakcija, aglutinirani eritrociti formiraju takozvane "kišobrane", u čijem su središtu jasno vidljivi prstenovi formirani od staloženih neaglutiniranih eritrocita.
++++ oštro intenzivna reakcija u kojoj se svi eritrociti aglutiniraju i, formirajući "kišobrane", oblažu dno rupa.
Titar ove reakcije smatra se posljednjim razrjeđenjem seruma, u kojem je otkrivena barem očigledna aglutinacija eritrocita. +++ , odnosno sa intenzivnom ili oštro intenzivnom reakcijom.

Pouzdanost i kvalitet metoda serološka dijagnoza zavise od organizacije sprovedene interne i eksterne laboratorijske kontrole, koja se sastoji od nekoliko nezavisne procedure dizajniran za procjenu kvaliteta rezultata analize.

Serologija(od latinskog serum - "serum", logos - "nauka") je grana imunologije koja proučava specifičnosti interakcije serumskih antitijela s antigenima.

Osnova dijagnoze je otkrivanje specifičnih antitijela koja nastaju kao reakcija na infekciju organizma određenim antigenom. Ovisno o tome koja se antitijela nalaze u krvi, donosi se zaključak o prirodi infekcije, a količina ovih antitijela ukazuje na stepen aktivnosti zarazne bolesti.

Proučava se materijal uzet za istraživanje u sklopu serološke analize krvi i dr opasne bolesti- herpes, crijevne infekcije, rubeola, toksoplazmoza, klamidija, boginje, klamidija. Osim toga, ova studija vam omogućava da odobrite krvnu grupu, odredite specifičnost proteina.

Dakle, serološke studije se provode:

• ako je postavljena preliminarna dijagnoza i sada je potrebna njena potvrda. Studija se zasniva na dodavanju odgovarajućeg antigena u krvni serum. Odgovor vam omogućava da donesete zaključak o prisutnosti ili odsustvu bolesti;
• ako se dijagnoza ne može postaviti. U sklopu studije u krv se dodaju antitijela i određuje se vrsta antigena, što omogućava određivanje specifične bolesti;
• ako je potrebno.

Dakle, serološki test krvi najviše pomaže u postavljanju dijagnoze ili prepisivanju efikasan tretman- uz minimalne vremenske i finansijske troškove.

Prednosti seroloških studija uključuju:

• sposobnost otkrivanja patoloških mikroorganizama u ranim fazama infekcije;
• kontrola razvoja bolesti i stepena efikasnosti terapije;
• nema potrebe za posebnom pripremom prije uzimanja biomaterijala;
• efikasnost. Rezultat će biti dostupan za dva do tri sata, što u uslovima bolničko liječenje veoma važno;
• pristupačnost reagensa, koja omogućava uzorkovanje onoliko često koliko je potrebno;
• nema kontraindikacija.

Kako se radi serološki test?

Uzimanje krvi se vrši iz kubitalne vene. Važna tačka- krv se ne uzima štrcaljkom, već gravitacijom - igla se ubacuje u venu bez šprica i u epruvetu se skuplja do pet ml krvi. Postupak se izvodi ujutro.

Ovisno o reakcijama koje su u osnovi studije, postoji nekoliko vrsta postupaka:

1. reakcija neutralizacije. Zasnovano na sposobnosti antitijela imunološkog seruma da kao neutralizirajuće sredstvo reagiraju na mikroorganizme ili toksine, sprječavajući ih negativan uticaj na tijelu;
2. reakcija aglutinacije. Može biti direktno ili indirektno. U prvom slučaju govorimo o proučavanju krvnog seruma na prisutnost antitijela (ubijeni mikrobi se bacaju u materijal, a reakcija se procjenjuje - ako postoji talog u obliku pahuljica, reakcija je pozitivna) , indirektna reakcija baziran na uvođenju eritrocita sa antigenima adsorbovanim na njima u materijal (zupčasti sediment ukazuje na pozitivnu reakciju);
3. reakcija precipitacije. Rastvor antigena se nanosi na imuni serum (djeluje kao tečni medij). Koristi se rastvorljivi antigen. Ako se kompleks antigen-antitijelo precipitira, reakcija se smatra pozitivnom;
4. reakcija komplementa. Opseg — otkrivanje zaraznih bolesti. Komplement se aktivira i reakcije se ispituju;
5. reakcija sa obilježenim antigenima i antitijelima. Zasnovan je na činjenici da tkivni antigeni ili mikrobi, obrađeni na poseban način, počinju da emituju svetlost pod uticajem UV zraka. Metoda se široko koristi ne samo u dijagnostici antigena, već i za određivanje hormona, enzima i lijekova.

Potrebno je pripremiti se za test: za četiri dana pacijent mora odbiti uzimati lijekove za srce, također morate isključiti alkohol u bilo kojoj njegovoj manifestaciji, začinjenu i masnu hranu, slatkiše, ograničiti fizički napor i izbjegavati stres.

Ako se ne pridržavate ovih pravila, povećava se rizik od lažno pozitivnog rezultata. Prije propisivanja drugog testa, liječnik mora saznati šta je pacijent radio dan prije zahvata i dati preporuke za pravilnu pripremu na anketu.

Serološka analiza: transkript

Serološki test krvi - analiza koja vam omogućava da odredite / potvrdite vrstu infektivnog agensa, pomaže stručnjaku da postavi dijagnozu. Ovo je nezamjenjiva pomoć ako liječnik ne može pronaći terapija lijekovima jer uzročnici razne bolesti različita osjetljivost na djelovanje određenih lijekova i antibiotika.

Nakon što je postupak prikupljanja materijala završen, laboratorijski asistenti prelaze na sljedeću fazu - dešifriraju indikatore. Dakle, ako se antitijela ne pronađu u krvi pacijenta, može se zaključiti da u tijelu nema infekcija - rezultat analize u ovom slučaju je pozitivan.

Ali ovo stanje je prije izuzetak od pravila: ako postoje simptomi bolesti, serološke studije otkrivaju i dokazuju prisutnost ozbiljne patologije u tijelu.

Prvo se analizom pronalaze patogeni u tijelu, zatim se procjenjuje količina antitijela, na osnovu čega se donosi zaključak o ozbiljnosti razvoja infekcije.

Serološko testiranje na hepatitis, HIV, sifilis: karakteristike

sifilis . Prilikom testiranja na sifilis, stručnjaci traže proteine ​​koji su odgovorni za ulazak ljudsko tijelo uzročnik infekcije - govorimo o blijedoj treponemi. U ovom slučaju, krvni serum djeluje kao biološki materijal.

. Virusni hepatitis- ozbiljne zarazne bolesti, čija opasnost leži u činjenici da su u dovoljnoj mjeri dugo vremena može živjeti u tijelu a da se ni na koji način ne pokazuje. Bolest je moguće identifikovati u ranoj fazi, kada je lakše izlečiva, analizom na markere – markeri se pojavljuju u krvi nakon bolesti ili uvođenja vakcine.

Treba razumjeti da je identifikacija uzročnika moguća tek 1,5-2 mjeseca nakon infekcije. Ako analizu uzima trudnica, moguć je lažno pozitivan rezultat.

Preporučujemo pregled medicinske stranice https://tabletix.ru/. Na sajtu ćete naći korisne informacije, medicinska mišljenja.
Ako primijetite jedan ili više simptoma navedenih u nastavku, trebali biste razmisliti o serološkom testu:

• povraćati;
• slab apetit ili nedostatak istog;
• bezrazložna impotencija tijela, prekomjerni rad;
• žućkasti ten;
• promjena boje izmeta i urina.

HIV. Ako je pokazao pozitivan rezultat, to ne znači da je pacijent zaražen AIDS-om. Ako se infekcija dogodila nedavno (prije ne više od dva mjeseca), prisutnost antitijela ne dopušta utvrđivanje činjenice razvoja bolesti. Zakazano je ponovno učenje.

Serološki test krvi- najvažnija istraživačka metoda, čija je glavna svrha brzo otkrivanje virusa, infekcija, mikroba u tijelu.

Ovaj jedinstveni laboratorijski "alat" omogućava vam da identifikujete bilo koju bolest koja je posljedica supresije imuniteta, stoga nemojte biti lijeni, već redovno uzimajte analize kako biste mogli na vrijeme prepoznati bolest i brzo je se riješiti.

8 057

Serološka dijagnostička metoda uključuje korištenje 2 područja istraživanja: serodijagnostika (detekcija specifičnih antitijela u krvnom serumu ispitivanog) i seroididentifikacija (određivanje antigenskih svojstava izoliranog patogena u cilju utvrđivanja njegovog tipa i tipa).

U serodijagnostici se koriste aglutinacija, precipitacija, liza, RSK, reakcije pomoću obilježenih antigena ili antitijela. Komponente ovih reakcija su: krvni serum ispitivanih pacijenata i standardni antigeni preparati. Svrha istraživanja je utvrđivanje titara antitijela na patogene zaraznih bolesti u ispitivanim serumima.

Utvrđivanje visokih titara specifičnih antitijela, posebno ako dostignu nivo tzv. "dijagnostičkih" titara, potvrđuje predloženu dijagnozu. Veliki značaj pridaje se proučavanju parnih seruma, kada se serumi uzeti na samom početku bolesti (3-4. dan) i serumi dobijeni 7-10. dana bolesti istovremeno titriraju. Dijagnostička vrijednost ima 4 puta povećanje titra antitijela.

U seroididentifikaciji, reakcija aglutinacije na staklu se koristi češće od drugih. Komponente reakcije: uzgojena čista kultura patogena (antigen) i standardni dijagnostički imunološki serumi kunića (antitijela).

Prednost serološke metode- jednostavnost, pristupačnost, visoka osjetljivost, specifičnost, brzina.

Nedostaci: potreba za skupim standardne droge i hardver.

Alergološka metoda

Ova metoda uključuje otkrivanje senzibilizacije organizma na određeni infektivni agens, što je od velike dijagnostičke vrijednosti. Poznato je da tok nekih zaraznih bolesti prati nastanak preosjetljivosti odgođenog tipa. S tim u vezi, intradermalna primjena malih doza alergena kod takvih pacijenata izaziva odgovarajuću reakciju tijela, uzrokovanu ponovljenim susretom s alergenom. Reakcija teče odgođeno, a nakon 48-72 sata na mjestu ubrizgavanja alergena pojavljuje se crvenilo, otok, a ponekad i infiltrat ( pozitivna reakcija). Ako tijelo nije senzibilizirano, intradermalna primjena neće izazvati nikakvu reakciju tijela (negativna reakcija). Industrija proizvodi specijalne preparate za kožno-alergijske testove: tuberkulin, dizenterija, brucelin, tularin itd.

Posebno ima alergološka metoda veliki značaj u slučajevima kada je identifikacija uzročnika zarazne bolesti otežana ili nemoguća (na primjer, kod gube) ili kada to traje dugo (na primjer, kod bruceloze). Tuberkulinski test se u praksi koristi ne samo kod dijagnostička svrha, ali i da se odredi termin revakcinacije djece BCG vakcinom, kao i da se proučava kolektivni antituberkulozni imunitet.

Prednosti alergološke metode - njegova jednostavnost, pouzdanost, ekspresnost.

Mana - ograničena upotreba, jer ne stvaraju sve zarazne bolesti preosjetljivost odgođenog tipa.

SEROLOŠKE REAKCIJE U DIJAGNOSTICI

ZARAZNE BOLESTI

Trenutno imunološke metode istraživanja se široko koriste za laboratorijsku dijagnostiku zaraznih i nezaraznih bolesti.

Reakcije interakcije između antigena i antitijela nazivaju se serološke (serum - serum, logos - učenje).

Suština svih seroloških reakcija je specifična kombinacija antigena i njihovih odgovarajućih antitijela kako bi se formirao kompleks. Serološka reakcija je moguća ako postoji imunološka korespondencija (homologija) - glavne komponente - antigeni i antitijela. Imunološka specifičnost zasniva se na strukturnoj komplementarnosti antigena i antitijela.

Proces interakcije između antigena i antitijela odvija se u dvije faze - specifičnoj i nespecifičnoj. Prva faza se brzo razvija. Sastoji se od specifične veze aktivnog centra antitijela sa determinantnim grupama odgovarajućeg (homolognog) antigena. Sljedeća faza se razvija sporije, nespecifično - to je spoljašnja manifestacija reakcije antigen-antitijelo (flokulacija, zamućenost podloge, itd.)

Serološki testovi se koriste u dvije svrhe:

1) otkrivanje antitela u test serumu pomoću poznatih antigena (serodijagnostika);

2) ustanoviti nepoznati antigen pomoću poznatih seruma (seroididentifikacija).

Određivanje nepoznatog antigena na mikrobiološka istraživanja provodi se u cilju utvrđivanja generičke, vrste, vrste patogena izolovanih od ispitanika. U takvim slučajevima, od dvije glavne komponente reakcije (antitijelo, antigen), antigen je nepoznat, reakcija se mora provesti sa poznatim antitijelima. U ovom slučaju, antigen je čista kultura mikroorganizama izolovanih iz test materijala. Imunološki dijagnostički serumi se koriste kao poznata antitijela. Potonji se dobivaju iz krvi životinja (najčešće zečeva) prethodno imuniziranih odgovarajućim bakterijskim antigenima. Imuni serumi moraju sadržavati visoki nivo specifična antitela.

Osim toga, serološki testovi se mogu koristiti za određivanje različitih nebakterijskih antigena: za utvrđivanje krvnih grupa, tkivnih antigena, tumora, za odabir parova donor-primalac u transplantaciji organa i tkiva itd.

Serološki testovi se također mogu koristiti za otkrivanje antitijela u krvnom serumu. U takvim slučajevima je potreban poznati antigen (diagnosticum). Kao antigeni mogu se koristiti suspenzije živih ili ubijenih mikroba, ekstrakti ili izolirane kemijske frakcije iz njih.

Brojni serološki testovi koji se trenutno koriste u zdravstvenoj praksi razlikuju se po fenomenu koji otkriva vezu između antigena i antitijela. Vidljiva manifestacija reakcije bit će različita ovisno o tome koja tehnika se koristi, u kojoj psihičko stanje koristi se antigen ili imunološki serum, bez obzira da li je komplement uključen u reakciju. Na primjer, ako se koristi korpuskularni antigen, dolazi do fenomena aglutinacije - adhezije čestica (reakcija aglutinacije). Budući da se antigeni čestica sastoje od relativno velikih čestica, formira se vidljivi flokulantni talog. Ako se u reakciji koristi rastvorljivi antigen, uočava se sitnozrnati precipitat - precipitat (reakcija precipitacije). Ako se u reakciju interakcije bakterijskih antigena i imunološkog seruma uvede i komplement, dolazi do bakteriolize (otapanje bakterijskih antigena) ili lize eritrocita (kada se koriste kao antigen). Upotreba imunoloških seruma obilježenih fluorohromima, enzimima ili radioizotopima u serološkim reakcijama omogućava utvrđivanje specifičnog vezivanja antigena za antitijela prema odgovarajućem fenomenu (sjaj, promjena boje ili aktivnost oznake radioizotopa).

Za procjenu seroloških reakcija koriste se kriteriji kao što su specifičnost i osjetljivost. Specifičnost je sposobnost antigena da reaguju samo sa homolognim antitelima. Osetljivost - sposobnost specifične interakcije sa minimalnim količinama antigena i antitela.

Reakcija aglutinacije

Reakcija aglutinacije (RA) je specifična interakcija antigena sa antitelima, izražena u adheziji antigena pod uticajem serumskih antitela i njihovom taloženju u prisustvu elektrolita. Bila je prva od predloženih seroloških reakcija.

Karakteristika reakcije aglutinacije je da se ćelije ili druge korpuskularne čestice koriste kao antigeni u njenoj formulaciji. Reakcija se zasniva na sposobnosti korpuskularnih antigena da se specifično kombinuju sa homolognim antitelima imunih seruma sa formiranjem precipitata u obliku zrnaca, pahuljica, grudica. Reakcija se odvija samo u prisustvu elektrolita. Antigeni koji se koriste u reakciji nazivaju se aglutinogeni, antitijela se zovu aglutinini, a nastali precipitat se naziva aglutinat.

Kao antigen u reakciji aglutinacije može se koristiti suspenzija živih kultura u izotoničnom rastvoru natrijum hlorida ili mikroba ubijenih formalinom, alkoholom ili zagrijavanjem, kao i eritrociti, leukociti ili druge ćelije.

Izvor antitijela je poznati aglutinirajući serum dobiven imunizacijom životinja odgovarajućim antigenima, odnosno serumom pacijenta koji se ispituje.

Postoje različiti načini postavljanja reakcije aglutinacije. Od njih se najčešće koriste: orijentacijska reakcija na staklu, proširena aglutinacija u epruvetama, reakcije hemaglutinacije i indirektna hemaglutinacija(RNGA).

Slične informacije.