El método principal en el diagnóstico de la leucemia aguda. Leucemia: diagnóstico. Laboratorio, diferencial. Síntomas de varios tipos de leucemia.

La sospecha de leucemia ocurre en presencia de síntomas clínicos y los siguientes cambios Sangre periférica: anemia normocítica normocrómica; el número de leucocitos puede ser diferente: bajo (por debajo de 5 109 / l), normal (de 5 109 / l a 20 109 / l), aumentado (más de 20 109 / l, alcanzando en algunos casos 200 109 / l); neutropenia (no depende del número total de leucocitos); linfocitosis absoluta; trombocitopenia (casi siempre presente); "fallo leucémico": la presencia de blastos, formas maduras en el contexto de la ausencia de formas intermedias; en la leucemia mieloblástica aguda, se pueden detectar gránulos azurofílicos y bastones de Auer.

Punción de la médula ósea

La punción de la médula ósea es el principal método de investigación para la leucemia. Se utiliza para confirmar el diagnóstico e identificar el tipo (morfológico, inmunofenotípico, citogenético) de leucemia. La aspiración de médula ósea puede ser difícil debido a su agotamiento (supresión de la hematopoyesis) y al aumento del contenido de estructuras fibrosas en ella.

Mielograma (cuantificación de todos formas celulares médula ósea) en la leucemia aguda: un aumento en el contenido de células blásticas en más del 5% y hasta la blastosis total; la morfología de los blastos es diferente según el tipo de leucemia; aumento de formas intermedias; linfocitosis; el germen rojo de la hematopoyesis está deprimido (con excepción de la eritromielosis aguda); los megacariocitos están ausentes o su número es insignificante (con la excepción de la leucemia megacarioblástica aguda).

El examen citoquímico es el método principal para diagnosticar formas de leucemia aguda. Se lleva a cabo con el fin de identificar enzimas específicas para varios blastos. Entonces, con OJUI, se determina una reacción PAS positiva al glucógeno, una reacción negativa a los lípidos, la peroxidasa y la cloroacetato esterasa. En leucemias mieloides agudas - reacción positiva sobre mieloperoxidasa, lípidos, cloroacetato esterasa. La reacción PAS depende de la forma de leucemia mieloide aguda.

La inmunofenotipificación de los blastos se lleva a cabo por un método automatizado en un citómetro de flujo o por inmunoensayo enzimático en vidrio usando microscopía óptica. Este último tiene la ventaja de que puede realizarse en paralelo al estudio citoquímico. La inmunofenotipificación permite determinar la presencia o ausencia de grupos de diferenciación de células blásticas (marcadores CD) utilizando anticuerpos monoclonales. Es principalmente necesario para un diagnóstico preciso de la LLA, así como en casos difíciles de diagnóstico diferencial de leucemias linfoblásticas y mieloblásticas agudas. Este es un punto fundamental, ya que el tratamiento de estas formas es diferente.

El estudio citogenético de las células leucémicas permite determinar anomalías cromosómicas y un mayor pronóstico.

Otros métodos obligatorios de investigación primaria

• Investigación de licores. El aumento de la citosis debido a los blastos indica neuroleucemia.
• Examen de rayos X del tórax: expansión de la sombra del mediastino debido a un aumento en los ganglios linfáticos intratorácicos, leucemias en los pulmones.
• Un análisis de sangre bioquímico, ECG, ecocardiografía, EEG son necesarios para determinar los indicadores iniciales de las funciones de los órganos vitales y se realizan antes y durante la quimioterapia, ya que los citostáticos utilizados tienen propiedades cardiotóxicas, hepatotóxicas y nefrotóxicas.
• Ultrasonido: agrandamiento del hígado y el bazo, focos de infiltración leucemoide en órganos parenquimatosos.

En hematología, existe el concepto de hemoblastosis: tumores que emanan de tejido hematopoyético. Las hemoblastosis incluyen leucemias y hematosarcomas. Las leucemias son hemoblastosis con una lesión tumoral primaria de la médula ósea. Hematosarcomas: formas con crecimiento tumoral local primario, fuera de la médula ósea, estos son tumores sólidos que consisten en células blásticas del tejido hematopoyético.

La leucemia es una enfermedad sistémica del tejido hematopoyético que surge de las células hematopoyéticas y afecta necesariamente a la médula ósea. Actualmente, la naturaleza tumoral de la leucemia está fuera de toda duda, y para la mayoría de las leucemias se ha establecido su naturaleza clonal. Se reveló que todas las células tumorales son un clon, es decir, la descendencia de una célula alterada, que luego se diseminó y metastatizó por todo el sistema hematopoyético. La fuente de crecimiento del tumor es la progenie más cercana (clon) del padre: la célula madre hematopoyética. La capacidad de metástasis determina la naturaleza sistémica del proceso, y el principal lugar de distribución de estas células tumorales es la médula ósea, como resultado de lo cual se desplazan las células de la hematopoyesis normal.

La etiología de la leucemia sigue sin estar clara. Como escribe AI Vorobyov: "La búsqueda de una causa o un grupo del mismo tipo de causas de tumores humanos en su pobreza solo puede competir con la búsqueda de la Atlántida". Para leucemias individuales, ya se han encontrado algunos factores que contribuyen a la revelación de su etiología. Así, el desprendimiento del brazo largo del cromosoma del par 22 y la transferencia de este segmento a uno de los cromosomas grandes del par 9 ocurren en casi todas las células de la médula ósea en pacientes con leucemia mielógena crónica. Un cromosoma patológico de 22 pares con un brazo largo acortado recibe el nombre de Filadelfia por la ciudad donde fue descubierto en 1959 por Nowell y Hungerford. Las translocaciones cromosómicas similares ocurren, por regla general, bajo la influencia de la radiación ionizante, por lo que estos hechos confirman la naturaleza mutacional (más a menudo radiación) de la leucemia mieloide crónica. Después de la explosión bomba nuclear en Japón, los casos de leucemia mieloide crónica y leucemia aguda son 7 veces más comunes que en otros países.

Las anomalías cromosómicas en la leucemia aguda tienen la naturaleza de la aneuploidía: cambios en la cantidad de cromosomas en la célula tumoral y no en la estructura, como en la leucemia mieloide crónica. Una forma peculiar de leucemia aguda, que se encuentra principalmente en África, el linfoma de Burkitt, revela brotes epidémicos, lo que da motivos para pensar en su naturaleza viral. Así, en el desarrollo de una leucemia aguda existen diferentes causas: radiaciones ionizantes, desordenes genéticos, no excluye el papel de los virus.

La leucemia linfocítica crónica no muestra dependencia de los efectos de factores mutagénicos, incluidas las radiaciones ionizantes, pero tiene una clara conexión con las características étnicas. La leucemia linfocítica crónica rara vez se diagnostica en algunas tribus y pueblos.

Actualmente, a falta de terapia etiotrópica para la leucemia, se lleva a cabo su terapia patogénica, lo que en algunos casos nos permite hablar de la curación de pacientes con ciertos tipos de leucemia. Más de 3-5 años de observación de niños con leucemia linfoblástica aguda, que se encuentran en un estado de remisión completa, muestra que existe una posibilidad fundamental de eliminar las células tumorales aunque estén ampliamente distribuidas por todo el sistema hematopoyético.

En los seres humanos, la médula ósea roja está contenida en todos los huesos tubulares, el cráneo, las costillas, el esternón, la clavícula, el omóplato, la columna vertebral y los huesos pélvicos. Hay 2 tipos de células en la médula ósea: estroma reticular y parénquima. La hematopoyesis es una serie diferenciación celular dando lugar a la aparición de células sanguíneas periféricas maduras.

El esquema moderno de la hematopoyesis. Las ideas modernas sobre la hematopoyesis fueron establecidas en los años 20 por A.A. Maksimov. En nuestro país, el esquema de hematopoyesis más común fue el esquema de I.A. Kassirsky y G.A. Alekseev. Sin embargo, en este esquema, lo más hipotético era su parte superior, es decir, la célula, el antepasado de la hematopoyesis. El esquema hematopoyético utilizado actualmente ha sido propuesto

IL Chertkov y AI Vorobyov en 1973.

Todas las células sanguíneas se dividieron en 6 clases.

La primera clase de células consiste en células madre hematopoyéticas, cuyo contenido cuantitativo en el tejido hematopoyético no excede una fracción de un porcentaje. Estas células proporcionan hematopoyesis estable y su recuperación después de influencias perturbadoras. La célula madre es la única capaz de autosostenerse durante mucho tiempo, más que la vida de un individuo. Las células madre son pluripotentes y pueden diferenciarse según todos los linajes hematopoyéticos. No se excluye que la linfopoyesis tenga la misma célula madre que su eslabón inicial. Por lo tanto, las células madre se denominan células que tienen la capacidad de automantenimiento ilimitado, así como la capacidad de proliferar y diferenciarse.

Las células reticulares, los fibroblastos y las células endoteliales parecen tener sus propias células precursoras. El diámetro de la célula madre es de 8-10 µm, la forma de la célula es redonda o irregular. El núcleo es a menudo homogéneo, redondo o en forma de riñón, por lo general son visibles 1-2 nucléolos grandes. El borde del citoplasma azul claro es estrecho, no contiene granularidad. El 65% de las células madre se diferencian a lo largo de la vía eritroide, el 30% a lo largo de la vía mieloide y el 5% a lo largo de la vía megacariocítica.

Células de clase 2: una clase de células progenitoras pluripotentes que son capaces de proliferación y diferenciación: células precursoras de linfocitos T, la célula formadora de colonias del cultivo sirve como enlace inicial en la histogénesis de células de dos líneas: granulocitos y monocitos. .

Clase 3: una clase de células progenitoras bipotentes, como las células sensibles a la eritropoyetina y a la trombopoyetina. Estas tres clases son células morfológicamente indiferenciadas.

Clase 4: células progenitoras unipotentes que pueden diferenciarse solo en la dirección de un linaje hematopoyético. Estas células son morfológicamente reconocibles. Se denominan blastos (según la estructura del núcleo), que inician filas separadas de hematopoyesis: plasmablasto, linfoblasto, monoblasto, mieloblasto, eritroblasto, megacarioblasto.

Grado 5: una clase de células en maduración.

Grado 6: una clase de células maduras con un ciclo de vida limitado.

Así, el término blastos indiferenciados (células de las 3 primeras clases) reemplazó al antiguo nombre de hemocitoblastos. En la hematología moderna, los métodos de investigación citoquímicos son ampliamente utilizados, lo que permite identificar diferentes tipos glóbulos, su grado de madurez, pertenecientes a una u otra serie hematopoyética.

Clasificación de las leucemias. En 1857, Friedrich dividió todas las leucemias en agudas y crónicas. La división se basó en el principio morfológico: el grupo de las leucemias agudas está unido por característica común- el sustrato del tumor son células jóvenes - células indiferenciadas de las primeras 3 clases o clase 4 - blastos. La leucemia aguda de células morfológicamente indiferenciadas de las primeras 3 clases se denomina leucemia aguda indiferenciada. Si el tumor surge de las células de la 4ª clase, entonces se llama por la designación de las células de la 4ª clase. El grupo de leucemias crónicas incluye tumores diferenciados del sistema sanguíneo, cuyo sustrato principal son las células maduras y maduras. La duración de la enfermedad no afecta el aislamiento de la leucemia aguda y crónica, aunque con mayor frecuencia las leucemias agudas se caracterizan por una esperanza de vida más corta y las crónicas son mucho más largas. Al mismo tiempo, con la terapia citostática moderna, hay casos de un curso prolongado de leucemia aguda (años). Por el contrario, puede haber un curso rápido de leucemia crónica.

Ya a principios del siglo XX, la leucemia aguda comenzó a dividirse en variantes linfoblástica y mieloblástica. Esta división se asoció principalmente con la presencia o ausencia de la enzima mieloperoxidasa. Luego, en 1964, se creó una comisión en Cambridge para desarrollar una clasificación general de la leucemia aguda. Se basó en una característica morfológica. Actualmente, la clasificación de las leucemias agudas se basa en características citoquímicas. La leucemia aguda de células morfológicamente indiferenciadas de las primeras 3 clases se denomina leucemia aguda indiferenciada. Si un tumor surge a partir de células de clase 4, entonces se denomina por la designación de células de clase 4: mieloblástica, mielomonoblástica, monoblástica, promielocítica, eritromielosis aguda, megacarioblástica, linfoblástica, plasmablástica, leucemia aguda indiferenciada.

Diagnóstico de leucemia aguda. Como se mencionó anteriormente, la leucemia aguda

Tumor maligno del tejido hematopoyético, cuyo sustrato morfológico son células blásticas transformadas correspondientes a los elementos progenitores de uno de los linajes hematopoyéticos. El diagnóstico de leucemia aguda solo puede ser morfológico. Para este propósito, se realiza una punción esternal, y solo un porcentaje muy elevado de células de las primeras 3 clases o células de la cuarta clase permite diagnosticar la leucemia aguda. Por lo general, el porcentaje de células de las primeras 4 clases en la leucemia aguda es de varias decenas de porcentaje, a veces este porcentaje es del 10-20%, esta es una forma de leucemia aguda de bajo porcentaje. Si el porcentaje de células blásticas está por debajo de estas cifras, se puede realizar una trepanobiopsia, un estudio de la médula ósea extraída del ala ilíaca. Con la trepanobiopsia, se encuentran acumulaciones de células jóvenes en una cantidad significativa. Si en este caso el diagnóstico es dudoso, el análisis debe repetirse después de 3-4 semanas.

En la sangre periférica en la leucemia aguda, hay una brecha, una brecha entre las células blásticas y los elementos maduros con ausencia de promielocitos y mielocitos en el mielograma, el llamado hiato leucémico.

Etapas de la leucemia aguda: etapa inicial, período prolongado (primer ataque, recaída), remisión (completa o parcial), recuperación, recaída de leucemia aguda (indicando cuál) y etapa terminal.

La información actualmente disponible sobre la etapa inicial de la leucemia aguda es escasa, esta etapa solo puede juzgarse retrospectivamente. Los pacientes tienen debilidad progresivamente creciente, sudoración.

El diagnóstico se puede realizar mediante un análisis de sangre aleatorio o durante la fase pico de la enfermedad. cuando se despliega síntomas clínicos los pacientes tienen fiebre alta, escalofríos, mareos, dolor en los huesos, articulaciones, anorexia, sangrado de las encías. Al inicio de la enfermedad, el 55-70% de las personas presentan un síndrome hemorrágico con sangrado de cualquier localización y aparición de hemorragias en la piel, lo que se asocia a trombocitopenia. Con la inhibición del germen granulocítico, se observa amigdalitis ulcerosa-necrótica, un aumento de la temperatura.

En los análisis de sangre, hay anemia moderada, el número de leucocitos puede aumentar, normal, disminuir, con blastos en la sangre periférica, se observa trombocitopenia. Incluso si los cambios en la sangre periférica son confusos, la médula ósea descifra el diagnóstico: varias decenas de % de blastos o el 100% se encuentran en el mielograma. Por lo general, el agrandamiento del bazo es moderado, su agrandamiento coincide con otros signos de progresión. Tampoco se observa un aumento significativo en el hígado. A menudo aparecen crecimientos en la piel, mientras que la infiltración leucémica también se localiza en tejido subcutáneo, formando densos, soldados a la piel y levantando sus nudos. Puede haber infiltración leucémica del tejido pulmonar y del cerebro.

Semejante cuadro clinico característica de la leucemia mieloide aguda en adultos.

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La leucemia promielocítica aguda se distingue un poco del grupo de leucemias agudas, principalmente por el hecho de que el promielocitos es una célula de clase 5. Aparentemente, el nombre no es del todo correcto y la célula pertenece a la clase 4, pero en un microscopio óptico convencional no se puede distinguir de un promielocitos. Se distingue por una malignidad aguda del curso, la gravedad del síndrome hemorrágico, la hipofibrinogenemia y la rapidez del curso. El primer y más típico síntoma de la enfermedad es el síndrome hemorrágico. Como regla general, estamos hablando de la aparición de hematomas en el sitio de lesiones menores, sangrado de las encías. Es posible un inicio rápido de la enfermedad: fiebre alta, hemorragias, necrosis de las membranas mucosas. Casi todos los pacientes mueren por hemorragia cerebral o hemorragia gastrointestinal. En esta leucemia, las células patológicas tienen una granularidad morfológicamente similar a la de los mastocitos y basófilos que contienen heparina. Esta leucemia a veces se denomina

parinocítica o basófila, pero el término promielocítica

se ha vuelto tradicional y se usa con mayor frecuencia en la práctica clínica. Anteriormente, con esta forma se describían las formas fulminantes y la esperanza de vida de los pacientes no superaba el mes. La fiebre alta y los sudores profusos desgastan a los enfermos. Actualmente, en relación con el uso de nuevos medicamentos, en particular, la rubomicina, la esperanza de vida de los pacientes ha aumentado. La esperanza de vida es en promedio de 26 meses, e incluso se describen formas cuando la esperanza de vida superaba los 4 años.

Las leucemias monoblásticas y mielomonoblásticas agudas no son muy diferentes de las leucemias mieloides agudas. También son frecuentes las lesiones necróticas de la cavidad oral, la gingivitis, las leucemias cutáneas y el bazo agrandado. La peculiaridad de este tipo de leucemia es que las remisiones ocurren con menos frecuencia que con otros tipos de leucemia. La esperanza de vida promedio es de aproximadamente 3 meses.

Eritromielosis aguda. Ocurre raramente. En la médula ósea, el contenido de glóbulos rojos nucleados en la médula ósea aumenta bruscamente, acompañado de un alto contenido de blastos indiferenciados, mieloblastos o monoblastos.

Leucemia linfoblástica aguda. Esta forma llama la atención de oncólogos y hematólogos porque fue con esta forma que el uso de efectos citostáticos complejos permitió lograr la remisión en más del 90% de los niños enfermos, y en muchos pacientes las remisiones fueron tan largas que se hablaba de la recuperación de los niños. Estos datos fueron obtenidos por científicos de muchos países simultáneamente. El efecto positivo fue estable en niños de 2 a 9 años, fue peor en niños menores y mayores de esta edad, y en mayores de 20-25 años, las diferencias entre leucemia aguda linfoblástica y mieloblástica se borran gradualmente, aunque la esperanza de vida y en estas formas es mayor que en otras formas de leucemia aguda. En el 80% de los casos, la leucemia linfoblástica ocurre en la infancia. Su peculiaridad radica en el agrandamiento de los ganglios linfáticos y el bazo.

Otra característica de la leucemia linfoblástica aguda en los niños es la osalgia, más a menudo dolor en las piernas. Por lo general, en tales casos, se sospecha reumatismo en los pacientes. La anemia comienza a desarrollarse. Una punción de médula ósea confirma el diagnóstico por la presencia de linfoblastos. Estas células también se encuentran en el punteado del ganglio linfático y el bazo. Básicamente, esta leucemia surge de las células progenitoras de los linfocitos T. Sin terapia, el curso de la leucemia linfoblástica aguda no tiene ninguna característica: aumenta la inhibición de la hematopoyesis normal, aparecen complicaciones infecciosas, hemorragias y progresa la anemia. Antes de la llegada del metotrexato, la 6-mercaptopurina y la prednisona, la esperanza de vida de los niños enfermos era de aproximadamente 2,5 a 3,5 meses, los adultos, de 1,4 a 2 meses. El curso de cada recurrencia de la enfermedad se caracteriza por una cierta persistencia de la manifestación de la enfermedad en comparación con su primer ataque. A menudo, el proceso hace metástasis en los testículos y las meninges, es decir, hay fenómenos de neuroleucemia. Se cree que la gran mayoría de los casos de leucemia linfoblástica aguda surgen de los linfocitos T.

También hay casos de leucemia aguda que se desarrollan a partir de células progenitoras de linfocitos B. Este grupo pertenece a las leucemias plasmablásticas agudas. La leucemia megacarioblástica aguda es menos común.

Actualmente, el concepto de neuroleucemia se ha introducido en la leucemia. Ocurre en todas las formas de leucemia aguda, y especialmente a menudo en la leucemia linfoblástica aguda en niños, en esencia, la neuroleucemia es un proceso metastásico,

Su cuadro clínico consiste principalmente en los síntomas de meningitis y síndrome de hipertensión. Hasta que no se incluyeron los fármacos administrados por vía endolumbar en el tratamiento de la leucemia aguda, no se pudo prevenir la neuroleucemia.

La remisión clínica y hematológica completa en la leucemia aguda tiene las siguientes características: normalización del estado general del paciente, presencia de no más del 5% de células blásticas en la médula ósea punteada y número total de células blásticas (menos del 5%). y las células linfoides no supera el 40%. Al mismo tiempo, no hay células blásticas en la sangre periférica, la composición de la sangre es casi normal, aunque es posible una leucopenia moderada, alrededor de 1,5-3 x 10,9 / l, y trombocitopenia de hasta 100 x 10,9 / l. No hay signos clínicos de proliferación leucémica en hígado, bazo y otros órganos. Para la leucemia linfoblástica en niños, es obligatoria la normalización del líquido cefalorraquídeo.

La recuperación de la leucemia aguda se considera como un estado de remisión completa durante 5 años o más.

Las remisiones parciales son condiciones muy diversas que se caracterizan por una clara mejoría hematológica con disminución del porcentaje de células blásticas en la médula ósea y fluido cerebroespinal en la eliminación de los síntomas de la neuroleucemia, así como la desaparición de las células blásticas de la sangre.

Recaída de leucemia aguda. Puede ser medular (aparición de más del 5% de blastos en el punteado) o local (extramedular) con cualquier localización de infiltración leucémica.

La etapa terminal de la leucemia aguda ocurre cuando todos los agentes citostáticos son ineficaces, e incluso en su contexto, hay un deterioro en el cuadro sanguíneo: aumentan la granulocitopenia y la trombocitopenia, aparecen necrosis de la mucosa y hemorragias espontáneas.

leucemia crónica

Clasificación de la leucemia crónica:

1. Leucemia mieloide crónica

2. Mielosis subleucémica

3. Eritremia

4. Megacariocítico crónico

5. Eritromielosis crónica

6. Leucemia linfocítica crónica

Leucemia mieloide crónica- un tumor que surge de las células precursoras de la mielopoyesis que retienen la capacidad de diferenciarse a formas maduras. El sustrato tumoral son predominantemente granulocitos, principalmente neutrófilos.

La enfermedad se caracteriza por un aumento de la leucocitosis neutrofílica, a menudo hipertrombocitosis, agrandamiento progresivo del bazo. El proceso tumoral pasa por dos etapas: expandido - monoclonal benigno y terminal - policlonal maligno. La leucemia mieloide crónica en etapa avanzada es un tumor del germen neutrofílico de la hematopoyesis, que reemplazó casi por completo los elementos de la granulocitopoyesis normal.

El clon patológico tiene como ancestro una célula hematopoyética pluripotente, que tiene un par 22 en lugar de un cromosoma normal con un brazo largo acortado. Los signos iniciales de la enfermedad se asocian con un agrandamiento del bazo o con una intoxicación creciente. En el primer caso, el paciente presta atención a la pesadez en el abdomen, la aparición de dolor en el hipocondrio izquierdo. En otros casos, los primeros síntomas son debilidad, sudoración, pérdida de peso. El diagnóstico se basa en un análisis de sangre. Este es siempre un proceso leucémico, es decir, las células jóvenes de la serie neutrofílica están presentes en la sangre: aumenta el contenido de neutrófilos punzantes, metamielocitos, mielocitos, promielocitos y mieloblastos posteriores. En la fórmula de leucocitos, aumenta el contenido de basófilos y, a veces, eosinófilos: "asociación basófila-eosinófila". La leucocitosis siempre aumenta, aumenta el contenido de plaquetas. Por lo tanto, la creciente leucocitosis neutrofílica con un desplazamiento hacia la izquierda a mielocitos y promielocitos, un aumento en el número de plaquetas que se produce en el contexto de una condición satisfactoria del paciente, debería sugerir leucemia mieloide crónica.

Sin embargo, se sabe que la leucocitosis neutrofílica y la trombocitosis son comunes. estados reactivos en respuesta a cualquier deterioro celular en el cuerpo y, sobre todo, a tumor canceroso. En estos casos se habla de reacciones leucemoides. Pueden ocurrir como una respuesta de la médula ósea a la irritación por productos de descomposición de proteínas, o como resultado de una violación de la integridad de la médula ósea por metástasis cancerosas. El diagnóstico generalmente se realiza sobre la base de un frotis de sangre periférica. En casos dudosos, se realiza una punción esternal. Se encuentra un fuerte aumento relativo de los granulocitos, la proporción de leucocitos: eritrocitos alcanza 10: 1 y 20: 1. Hay una fuerte disminución de la fosfatasa alcalina.

El desarrollo de leucemia mieloide crónica en ausencia de terapia citostática se caracteriza por un aumento gradual de los fenómenos patológicos: el bazo se agranda, aumenta la pesadez en el abdomen, aumenta la leucocitosis y la intoxicación se vuelve más pronunciada. Cuando se alcanza el nivel de 500 x 10,9/lo más células, existe un peligro real de formación de trombos de leucocitos en los vasos del cerebro, el bazo y los pulmones. La infiltración leucémica en el hígado se propaga. Previamente, la expectativa de vida de los pacientes con leucemia mieloide crónica sin terapia citostática era en promedio de 2,4 a 2,6 años. La causa de muerte durante este período fueron manifestaciones de la etapa terminal: inhibición de la hematopoyesis normal, síndrome hemorrágico, infecciones, necrosis, el 70% asociado a crisis blástica.

En las condiciones de la terapia citostática moderna, el cuadro de la leucemia mieloide crónica difiere del descrito anteriormente. El uso de mielosán conduce a la normalización práctica de la condición de los pacientes: el nivel de leucocitos se puede mantener dentro del rango de 10-20 x 10,9/l, y el tamaño del bazo se mantiene estable. Con los años, el contenido de formas más jóvenes, incluidos los promielocitos, aumenta en la sangre periférica. Esta es una etapa avanzada de la enfermedad.

Si el paciente se vuelve refractario a la terapia citostática en curso, aumenta la intoxicación general, disminuye el contenido de plaquetas y luego se diagnostica la etapa terminal de la enfermedad. Una disminución de plaquetas determina la aparición de un síndrome hemorrágico pronunciado. Luego se junta la pancitopenia. por la mayoría característica importante esta etapa es la presencia de células blásticas en la médula ósea y luego en la sangre periférica. Hay signos de mielemia: el contenido de la médula ósea ingresa a la sangre periférica, principalmente para glóbulos rojos nucleados y megacariocitos. Los focos de hematopoyesis patológica van más allá de la médula ósea, el bazo, el hígado y forman leucemias cutáneas debajo de la piel. Hay fuertes dolores óseos, infartos de bazo, fiebre persistente.

Por lo general, la esperanza de vida de un paciente hasta la etapa terminal se calcula en años, y la etapa terminal más larga en sí es de 3 a 6 meses. Hay signos de una crisis blástica en la sangre: la aparición de células blásticas y no diferenciadas en la sangre, que se asemeja a la imagen de la sangre en la leucemia aguda. Este hecho confirma la naturaleza de tres crecimientos de la leucemia mieloide crónica, su aparición a nivel de la célula progenitora de la mielopoyesis.

Eritremia. Anteriormente, se llamaba enfermedad de Wakez o policitemia verdadera. La enfermedad es un tumor benigno del sistema sanguíneo que se desarrolla a partir de una célula progenitora de mielopoyesis, aunque para algunas variantes no se puede excluir su desarrollo a partir de una célula sensible a la eritropoyetina. En el torrente sanguíneo y el depósito vascular, la masa de eritrocitos aumenta, mientras que sus características cualitativas también cambian. Por lo tanto, estos eritrocitos dan una VSG muy disminuida (1-4 mm / h), a veces hasta la ausencia de sedimentación de eritrocitos).

Los pacientes se quejan de dolores de cabeza, pesadez en la cabeza. A veces, el primer signo de la enfermedad es el enrojecimiento de la cara y las palmas de las manos. síntoma frecuente la eritremia es prurito. Los pacientes tienen tendencia a la trombosis. Los trombos se localizan tanto en las arterias de las extremidades con formación de necrosis como en las arterias coronaria y cerebral. A menudo hay un aumento en la presión arterial. El hígado y el bazo están agrandados.

El cuadro hematológico de la eritremia es bastante característico: un aumento en el número de eritrocitos, así como de plaquetas y leucocitos. Hay una hiperplasia pronunciada de elementos celulares en la médula ósea, todos los brotes hematopoyéticos están agrandados, principalmente eritroides. Al igual que la leucemia mieloide crónica, la eritremia tiene dos etapas: benigna avanzada y maligna terminal. Se debe realizar el diagnóstico diferencial con la eritrocitosis sintomática.

Leucemia linfocítica crónica. La leucemia linfocítica crónica es un tumor del tejido linfoide, el sistema inmunocompetente. El sustrato tumoral está representado por linfocitos morfológicamente maduros. La enfermedad se caracteriza por leucocitosis, proliferación linfocítica obligatoria en la médula ósea, ganglios linfáticos agrandados, hígado y bazo. La derrota del sistema inmunocompetente se caracteriza por una tendencia a desarrollar complicaciones infecciosas y el desarrollo frecuente de condiciones autoinmunes (hemolíticas y trombocitopénicas).

Se sabe que los linfocitos son heterogéneos. En 1970, se aislaron timodependientes (linfocitos T), que son responsables de la inmunidad al trasplante, reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado. Estos linfocitos sensibles al antígeno son los primeros en responder a la aparición de un nuevo antígeno.

El segundo grupo son los linfocitos B, que se encuentran por primera vez en la bolsa de Fabricio de las aves. La leucemia linfocítica crónica puede estar representada por células T y células B. Sin embargo, por regla general, la leucemia linfocítica crónica está representada por linfocitos B. Su contenido en la sangre alcanza el 80-98%, mientras que el número de linfocitos T se reduce al 3-9%. Solo se han encontrado casos aislados de leucemia linfocítica crónica, representada por linfocitos T. Lo más probable es que la leucemia linfocítica crónica surja de la célula precursora de la linfopoyesis. Al mismo tiempo, se revelan algunos signos de la relativa buena calidad del proceso: no hay violaciones en conjunto de cromosomas, no se han obtenido datos claros sobre la atipia celular. Las células patológicas en la leucemia linfocítica crónica son prácticamente indistinguibles de los linfocitos normales. Durante un período significativo de la enfermedad, no hay progresión del tumor. Además, la enfermedad se puede controlar con un agente citostático durante varios años, y es rara una crisis blástica en las etapas finales de la enfermedad.

Al mismo tiempo, en varios casos, la leucemia linfocítica crónica, habiendo sido tumor benigno, se transforma y adquiere las características de malignidad, que se manifiesta por la resistencia del tumor a una variedad de terapia citostática. En la morfología de los linfocitos se pueden detectar rasgos de atipismo, en la sangre aparecen prolinfocitos y linfoblastos en un gran porcentaje. Tampoco hay conexión con factores mutagénicos, que se rastrearon en personas que se sometieron a exposición a radiación ionizante. Los habitantes de Hiroshima y Nagasaki, así como en las personas que reciben terapia de rayos X, se han vuelto más frecuentes los casos de leucemia aguda, leucemia mieloide crónica, pero no leucemia linfocítica crónica.

La enfermedad es a largo plazo, a veces durante muchos años, puede continuar sin signos de progresión del tumor. Así, en los primeros estadios, este tumor es benigno, pero en determinadas circunstancias puede malignizarse: crisis blástica, transformación en sarcoma.

Como se mencionó anteriormente, la leucemia linfocítica crónica consiste principalmente en linfocitos morfológicamente maduros que crecen en la médula ósea, ganglios linfáticos, bazo, hígado y se libera en grandes cantidades a la sangre periférica. El diagnóstico de la enfermedad generalmente se establece al detectar un aumento en el número de linfocitos en la sangre periférica junto con un aumento en los ganglios linfáticos. Núcleos de linfocitos medio destruidos con restos de nucléolo: la sombra de Gumprecht se encuentra en la sangre. En esencia, estas células de leucólisis son un artefacto, en sangre liquida Ellos están perdidos. Estas células se forman durante la preparación de un frotis. En muchas sombras de Gumprecht, entre las masas de cromatina, se pueden ver nucléolos. A veces, estas células de leucolisis reciben el nombre de Botkin-Gumprecht, aunque este nombre no es del todo exacto. Un hijo

S.P. Botkin S.S. Botkin describió células lisadas en la sangre en la fiebre tifoidea, pero no en la leucemia linfocítica crónica. La aparición de tales células es característica de la leucemia linfocítica crónica. A veces, en la sangre periférica, se observa la aparición de prolinfocitos individuales, con menos frecuencia, linfoblastos individuales. Se observa un fuerte aumento de linfocitos en el punto punteado de la médula ósea. En el trepanado de la médula ósea, hay acumulaciones características de células linfoides.

Como regla general, el paciente acude al médico ya en presencia de ganglios linfáticos agrandados y un aumento significativo en el contenido de linfocitos. La enfermedad comienza gradualmente, dentro de unos años, se puede observar linfocitosis hasta en un 40-50% en la sangre. Poco a poco, los ganglios linfáticos en el cuello, en las axilas comienzan a aumentar. En las etapas posteriores, se agregan anemia y trombocitopenia.

El origen de la leucemia linfocítica crónica a partir de las células del sistema inmunocompetente, la naturaleza tumoral de este proceso, determinan las características de las complicaciones inherentes a la leucemia linfocítica crónica. Estos pacientes son muy sensibles a las infecciones de carácter bacteriano: amigdalitis, neumonía, procesos supurativos en los pulmones. Además de las complicaciones infecciosas, la leucemia linfocítica crónica se caracteriza por conflictos inmunitarios asociados con la aparición de anticuerpos contra sus propias células sanguíneas normales. En la mayoría de los casos, se diagnostica anemia hemolítica autoinmune: ictericia, aparece reticulocitosis, disminuye el contenido de glóbulos rojos y hemoglobina y aumenta el tamaño del bazo. La trombocitopenia autoinmune tampoco es infrecuente. AI Vorobyov también describe condiciones autoinmunes relacionadas con los leucocitos.

El estado terminal del paciente puede caracterizarse por agotamiento creciente, complicaciones infecciosas graves, estomatitis, síndrome hemorrágico y anemia causada por conflictos inmunitarios.

La leucemia de "células peludas" o de células pilosas está representada por células del tipo linfocito B. La característica morfológica de estas células es la presencia de protuberancias vellosas del citoplasma. La enfermedad se caracteriza por citopenia, los ganglios linfáticos están moderadamente agrandados, el hígado y el bazo alcanzan un gran tamaño. Las células pilosas predominan en la médula ósea.

Hemoblastosis paraproteinémicas

Este grupo combina procesos tumorales en el sistema de células inmunocompetentes que realizan las funciones de inmunidad humoral. Incluye tres formas nosológicas: plasmocitoma, mieloma, enfermedades de cadenas pesadas y otras.

La característica principal de este grupo es la capacidad de las células tumorales para sintetizar inmunoglobulinas homogéneas o sus fragmentos: paraproteínas. Como es sabido, la síntesis de anticuerpos se lleva a cabo normalmente por un sistema policlonal de células plasmáticas y linfocitos, que son capaces de reaccionar específicamente con casi cualquiera de los antígenos posibles. Además, cada representante del clon, una célula, está genéticamente programado para la síntesis de un solo tipo de anticuerpo, una inmunoglobulina homogénea. En las hemoblastosis paraproteinémicas, toda la masa del tumor, que representa la descendencia de una célula, es genotípicamente homogénea, homogénea y su producción es inmunoglobulina monoclonal. Una paraproteína es siempre una proteína patológica. De acuerdo con la clasificación moderna de inmunoglobulinas, las paraproteínas se dividen en 5 clases: A, C, M, D y E.

Plasmacitoma (mieloma múltiple). Puede haber plasmocitomas solitarios, forma tumoral múltiple, formas nodulares difusas y formas difusas. Las células de mieloma que proliferan en la médula ósea conducen a la destrucción de la médula ósea en Huesos planos, columna vertebral, huesos tubulares.

Clínicamente, las lesiones óseas se manifiestan por la clásica tríada de Kahler: dolor, tumores, fracturas. No existen signos radiológicos específicos para distinguir los cambios en los huesos de las metástasis óseas. El examen citológico de la médula ósea revela un cuadro específico de metaplasia de células de mieloma.

El síndrome de patología proteica se manifiesta por: hiperproteinemia con hiperglobulinemia, aumento de la VSG y viscosidad de la sangre, reacciones positivas de proteínas sedimentarias. La nefropatía por mieloma se expresa por proteinuria persistente, desarrollándose gradualmente insuficiencia renal en ausencia de signos de síndrome nefrótico: edema, hipoproteinemia, hipercolesterolemia. La hipertensión y la retinopatía tampoco son típicas.

El fenotipo de células T está representado por una variante rara de células T.

En términos clínicos y pronósticos, es muy importante establecer la afiliación de leycélulas químicas a los fenotipos T o B, ya que las formas de leucemia linfocítica crónica de células T tienen un curso más agresivo y son difíciles de tratar.

La variante más característica del curso de la leucemia linfocítica crónica (LLC) es la leucémica (el número de leucocitos es de 10,0 a 150,010 9 /l). Sin embargo, en algunos casos de LLC, se ha comprobadopunción esternal, desde el principio hasta el final de la enfermedad procede con leucopenia (1.5-3,0-109/l). Con una imagen detallada de la leucemia linfocítica, el contenido de linfocitos alcanza el 80%e incluso el 99% (con un curso más severo). La mayoría de las células están representadas por lim madurofocitos, a menudo sus micro y mesogeneraciones, pero se pueden detectar prolinfocitos(5-10%), con menos frecuencia - linfoblastos individuales. Un aumento en el contenido de estas formas suele indicar una exacerbación del proceso. La característica de la CLL es la presencia de sombras celulares en los frotis de sangre (sombras de Botkin-Gumprecht); Las células de paseo también se encuentran a menudora (linfocitos que tienen un núcleo en forma de riñón o bilobulado). sangre roja al principiopoco se ve afectado en la primera etapa de la enfermedad, pero la anemia se desarrolla con el tiempo, son posibles las crisis hemolíticas autoinmunes, asociadas con la formación de anticuerpos contrapropios eritrocitos. La trombocitopenia suele aparecer cuando el huesoun cerebro encuentra una infiltración linfoide masiva. Sin embargo, en algunos casos, la trombocitopenia ocurre temprano, debido a la misma mecanismo inmunológico, como el desarrollo de anemia hemolítica y leucopenia. La médula ósea punteada está dominada porlinfocitos, el contenido de granulocitos y eritronormoblastos se reduce considerablemente. En casos severos, desde el comienzo de la enfermedad, la médula ósea contiene hasta un 50-60% de linfocitos. ENetapas posteriores, así como en la fase terminal de la enfermedad, metaplasia linfática total de la médula ósea (95-98%). Con la aparición de la anemia hemolítica autoinmune, el cuadro de punteado puede cambiar, ya que en respuesta a la hemólisis, la cantidadcélulas eritroides. En términos de valor diagnóstico, la punción esternal es superior a la biopsi y punción del ganglio linfático, en el que la naturaleza de la hiperplasia del linfoidelas telas no siempre se pueden instalar. Es posible que durante mucho tiempo no se observen signos de progresión tumoral con la liberación de células patológicas del control de fármacos citostáticos.toda enfermedad. La crisis por explosión terminal se desarrolla raramente (en 1-4 % casos),más a menudo hay un crecimiento tumoral pronunciado de los ganglios linfáticos (pero esta transiciónrelativamente raro en LLC). La etapa terminal se caracteriza por avispas infecciosas.desnutrición, agotamiento inmunológico, síndrome hemorrágico y anemia.

En la variante de células T de CLL, los linfocitos leucémicos tienen malformaciones polimórficas.núcleos grises, cromatina gruesa, en algunas células grandes gránulos azurofílicos. SemejanteLas células en el estudio citoquímico se caracterizan por una alta actividad de ácidofosfatasa, alfa-naftil acetato esterasa; de acuerdo con los parámetros inmunológicos, son más a menudo tienen el fenotipo CD 4+, CD 8-, con menos frecuencia CD 4+, CD 8+ y muy raramente CD 4-, CD 8+. El flujo del agua levia a menudo es rápidamente progresiva, con una posible transición a una crisis blástica, pero también es posible que sea benigna.

Se han propuesto varias clasificaciones de la leucemia linfocítica crónica por etapas de desarrollo.enfermedades. En clasificación RAI (1975) distinguen el estadio cero solo con la linfocitosisen la sangre y la médula ósea, y las siguientes 4 etapas, lo que refleja la propagación del proceso a lo largoganglios linfáticos, bazo e hígado. Las últimas etapas incluyen procesos con cito-canto (anemia, trombocitopenia) independientemente de la infiltración linfática de los órganos.

REAL ACADEMIA DE BELLAS ARTES1 - clasificación leucemia linfocítica crónica

Etapa 0.Linfocitosis en sangre periférica >15.010 9 /l, en médula ósea >40%.

Etapayo. Etapa 0 con ganglios linfáticos agrandados.

Etapa I. yo con hepato- y/o esplenomegalia.Etapatercero. Etapa 0 con ganglios linfáticos agrandados, o sin etapa yo o yo con anemia (H< НО г/л). EtapaIV. Etapa 0 con o sin etapa Yo, II, III, trombopenia (plaquetas< 100,0- 10 9 /л).

Según el Sistema Internacional, la leucemia linfocítica crónica se divide enetapas A, B y C. Las dos primeras etapas corresponden a un proceso que se extiende sobre tres (A) y más (B) campos linfáticos: ganglios linfáticos de todos los grupos periféricos, aldeaZenka, hígado y el tercero (C) - al proceso con citopenia (anemia, trombocitopenia).

Clasificación internacional de la leucemia linfocítica crónica

UNA.Linfocitosis en sangre periférica >4.010 9 /l, en médula ósea >40%. Hemoglobina
100 g/l, plaquetas > 100,0-10 9 /l, propagación del proceso - hasta dos regiones
ganglios linfáticos personalizados (cervical, axilar, inguinal, hígado, bazo).

b. Hemoglobina > 100 g/l, plaquetas >100,0 X 10 9 /l, proceso de extensión - más
tres áreas de ganglios linfáticos agrandados.

C. Hemoglobina< 100 г/л и/или тромбоциты < 100,010 9 /л, независимо от регионов уве­ ganglios linfáticos individuales.

Con leucemia prolinfocítica en sangre periférica y médula ósea punteadapredominan los prolinfocitos (más del 55%). Células patológicas en el 75-80% de los pacientestienen un fenotipo de células B, que, de acuerdo con sus características inmunológicas, sonson elementos linfoides más maduros que los linfocitos en la LLC-B típica. En20-25% de las células enfermas tienen un fenotipo de células T, en tales casos la enfermedad esheces más severamente, con leucocitosis severa, rápidamente progresiva, terapia de bajo efecto eficaz.

La leucemia de células pilosas se caracteriza por anemia, leucopenia y trombocitopenia.Las formas subleucémicas, y especialmente leucémicas, son raras. Periféricoen la que la sangre aumenta el número de linfocitos, entre los cuales hay células con crecimientocitoplasma hablador y peludo ("peludo"), que proporciona una alta actividad de fosfato ácidoPS, no inhibido por tartrato de sodio. En la médula ósea proliferador linfoide punteadowalkie-talkie. La enfermedad fluye lentamente, a menudo se observan complicaciones infecciosas. Las células leucémicas en la leucemia de células pilosas en la mayoría de los casos pertenecen al fenotipo B, en algunos casos llevan marcadores de células B y T.

mieloma múltiple

El mieloma (plasmocitoma, enfermedad de Rustitzky-Kahler) es una enfermedad tumoral del sistema hematopoyético caracterizada por la proliferación maligna de células plasmáticas. Las células plasmáticas normalmente están involucradas en la inmunidad humoral, en la formación de inmunoglobulinas. Un clon patológicamente alterado de células plasmáticas en mieloma múltiple produce intensamente una proteína de parainmunoglobulina (paraproteína) homogénea (monoclonal), en presencia de la cual no solo la cantidad proteina total en la sangre, pero también violó las defensas inmunológicas del cuerpo. Una paraproteína se excreta en la orina (proteína de Bence-Jones).

Diagnóstico de laboratorio

En el mieloma, se ve afectada principalmente la médula ósea, se desarrolla un síndrome de patología proteica y deficiencia de anticuerpos, se desarrolla nefrosis paraproteinémica.

Médula ósea.La punción de la médula ósea contiene una gran cantidad de células plasmáticas (más del 15%) con signos de atipia, que se denominan células de mieloma. Estos son plasmablastos atípicos.

Morfología de las células de mieloma . Se caracterizan por una importante variabilidad en las características morfológicas (tamaño, forma, color). Células grandes con basofilia pronunciada y vacuolización del citoplasma, con uno o más núcleos de estructura de malla delicada, que contienen 1-2 nucléolos.

cuadro de sangre. Al comienzo de la enfermedad, no hay cambios en la sangre. Aparecen a medida que avanza la enfermedad.

Variante del curso: subleucémica (10 × 109/l - 11 × 109/l) o

leucopenica (3,2 × 109/l - 4 × 109/l). En algunos pacientes,

hay neutropenia con linfocitosis relativa. A menudo monocitosis

y células plasmáticas individuales.

Anemia normocrómica característica, el número de reticulocitos es normal.

ESR se acelera constantemente a 80 - 90 mm / h.

Indicadores específicos de laboratorio:

1. Síndrome de patología proteica. En el mieloma múltiple, se manifiesta en forma de hiperproteinemia (un aumento en la cantidad de proteína total), hiperglobulinemia (el contenido de globulinas aumenta debido a la paraproteína), la presencia de inmunoglobulina patológica en la sangre: paraproteína; la presencia de proteína Bence-Jones (paraproteína en la orina) en la orina.

2. Síndrome de deficiencia de anticuerpos. En el mieloma múltiple, se reduce la cantidad de inmunoglobulinas normales.

3. Nefrosis paraproteinémica. Se caracteriza por proteinuria constante, cilindruria, es posible microhematuria.

Linfogranulomatosis

La linfogranulomatosis es una enfermedad tumoral del grupo de las hemoblastosis. Por primera vez, la enfermedad fue descrita por el médico inglés Hodgkin en 1832, ocurre a cualquier edad, los hombres se enferman con mayor frecuencia (a la edad de 16 a 30 años y mayores de 50 años). La linfogranulomatosis es un tumor maligno del tejido linfático que se desarrolla a partir de las células linfoides.

La enfermedad se caracteriza por una variedad de síntomas clínicos causados ​​por daño a los ganglios linfáticos, varios órganos y características de reacciones inmunológicas.

El síntoma principal es un aumento de los ganglios linfáticos: submandibular, cervical, supraclavicular, con menos frecuencia, inguinal. Además, hay un síntoma de intoxicación (al comienzo de la enfermedad) temperatura corporal alta hasta 39 - 40 ° C, sudoración, letargo, debilidad, pérdida de peso, falta de apetito, a veces picazón en la piel.

Diagnóstico de laboratorio. La enfermedad de Hodgkin se caracteriza por el desarrollo de un granuloma específico, que es el sustrato morfológico de esta enfermedad y ocurre con mayor frecuencia en los ganglios linfáticos, pero también puede desarrollarse en los órganos internos, con mayor frecuencia en el bazo. La composición del linfogranuloma incluye células específicas, Berezovsky-Sternberg, así como sus predecesores mononucleares, células de Hodgkin.

El diagnóstico de la enfermedad se establece mediante la detección de células de Berezovsky-Sternberg en el punteado del ganglio linfático, el bazo o la médula ósea.

Morfología de las células de Berezovsky-Sternberg. Tamaños dentro de 40 - 80 micras, la célula tiene forma redonda, la forma del núcleo es redonda, como un frijol, cinco hojas, la ubicación del núcleo es central o ekscene. Los nucleolos son claramente visibles en los núcleos (1 - 2), con menos frecuencia (5 - 8).

Las células maduras de Berezovsky-Sternberg, por regla general, contienen varios núcleos. Es característica la presencia de células con dos núcleos del mismo tamaño y forma, que son imágenes especulares entre sí. En los núcleos, se encuentra un nucléolo bastante grande. El citoplasma de las células de Berezovsky-Sternberg es basófilo.

Morfología de las células de Hodgkin.

Las células de Hodgkin son uninucleares, más pequeñas. El núcleo redondeado ubicado en el centro tiene 2-3 nucléolos grandes. El citoplasma es estrecho, basófilo, intensamente teñido.

Células de Berezovsky-Sternberg (flechas oscuras), célula de Hodgkin (flecha clara)

Linfoma de Hodgkin: célula mononuclear gigante de núcleo grande y citoplasma ancho (célula de Hodgkin) rodeada de linfocitos de tamaño pequeño y mediano.

Lhymphoma de Hodgkin: Célula de Berezovsky-Sternberg (célula binuclear gigante) rodeada de linfocitos de tamaño pequeño y mediano.

El cuadro sanguíneo en la mayoría de los pacientes se caracteriza por cambios regulares El número de leucocitos es a menudo normal o límite superior normal, con menos frecuencia leucocitosis leve (10 × 109 / l - 12 × 109 / l). Algunos pacientes desarrollan leucopenia. En la sangre, la neutrofilia con un cambio brusco hacia la izquierda (hasta metamielocitos y mielocitos) es un signo común de la enfermedad de Hodgkin. Hay monocitosis (al comienzo de la enfermedad), linfocitopenia (en las últimas etapas de la enfermedad), eosinofilia (en 3-5% de los pacientes).

La mayoría de los pacientes tienen anemia normocrómica o hipercrómica, trombocitosis (hasta 400 × 109/l). La ESR se acelera (30 - 40 mm / h) al inicio de la enfermedad, en la etapa terminal de la enfermedad, hasta 80 mm / h.

Competencias: OK-1, OK-8, PC-3, PC-5, PC-15, PC-17, PC-27

Relevancia del tema. Las hemoblastosis están representadas por un extenso grupo de enfermedades que difieren en el polimorfismo manifestaciones clínicas y se encuentran en la práctica de médicos de todas las especialidades.

1. Comprender la etiología, patogenia de las hemoblastosis.

2. Conocer la clasificación y diagnóstico clínico y de laboratorio de las leucemias agudas y crónicas.

3. Ser capaz de realizar investigación objetiva pacientes con este tipo de patología.

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La hemoblastosis es un grupo de tumores que surgen de las células hematopoyéticas. Se dividen en leucemias y hematosarcomas. Las leucemias son tumores del tejido hematopoyético con localización primaria en la médula ósea. Los hematosarcomas son tumores del tejido hematopoyético con localización extramedular primaria y crecimiento tumoral local pronunciado.

Todas las leucemias se dividen en agudas y crónicas. Lo determinante no es la velocidad del proceso, sino la morfología de las células que componen el tumor. Si la mayor parte de las células está representada por blastos, entonces estamos hablando de leucemia aguda. En la leucemia crónica, la mayor parte de las células tumorales son elementos maduros y en proceso de maduración.

Mutágenos químicos: sustancias toxicas(benceno), citostáticos.

Factor viral (virus de Epstein-Barr)

El papel de la herencia: defectos genéticos en los gérmenes hematopoyéticos, sistema inmunitario anomalías cromosómicas.

El crecimiento neoplásico de todas las hemoblastosis se basa en la clonalidad: cada leucemia debe toda la masa de sus células a mutaciones en su célula original original. La característica patogénica de las hemoblastosis es la malignidad gradual del proceso tumoral, denotada por el término progresión tumoral. Los patrones de progresión del tumor están representados por una serie de reglas:

1. Las hemoblastosis pasan por dos etapas: monoclonal (benigna) y policlonal (maligna).

2. Inhibición de los brotes hematopoyéticos normales y, en primer lugar, del brote a partir del cual se desarrolló la hemoblastosis.

3. Cambio de células diferenciadas que componen el tumor en la leucemia crónica, blástica (la aparición de una crisis blástica).

4. Pérdida de especificidad enzimática por parte de las células tumorales: morfológicamente, las células se vuelven indiferenciadas.

5. La aparición de focos extramedulares de hematopoyesis.

6. Retiro espasmódico o gradual del tumor de la terapia citostática.

La leucemia puede pasar secuencialmente por diferentes etapas de progresión, pero a veces la enfermedad comienza con síntomas característicos de la etapa final.

Las leucemias agudas son un grupo enfermedades neoplásicas sistema sanguíneo - hemoblastosis. Las leucemias agudas se caracterizan por el daño de la médula ósea por células hematopoyéticas morfológicamente inmaduras - blásticas - y su aparición en la sangre periférica. En el futuro o desde el principio, puede ocurrir la infiltración de células blásticas de varios órganos y tejidos. Todas las leucemias agudas son clonales, es decir, surgen de una sola célula mutada. Las células blásticas en todos los tipos de leucemia aguda se caracterizan por su gran tamaño, un núcleo grande, que ocupa casi toda la célula y se distingue por una estructura de malla delicada de cromatina con grandes nucléolos individuales. Citoplasma de células en forma de un borde estrecho azulado o gris azulado con pequeños gránulos individuales.

La clasificación se basa en las propiedades morfológicas, principalmente citoquímicas e inmunohistoquímicas de las células blásticas. Las leucemias agudas reciben su nombre de los blastos normales de los brotes hematopoyéticos correspondientes. La pertenencia de las células blásticas a una u otra línea de hematopoyesis, el grado de su diferenciación determina en cierta medida curso clínico leucemia aguda, programa de terapia, pronóstico de la enfermedad. Existen las siguientes formas principales de leucemia aguda (clasificación doméstica):

Leucemias mieloides agudas:

Leucemia mieloide aguda

Leucemia promielocítica aguda

Leucemia mielomonoblástica aguda

Leucemia monoblástica aguda

Leucemia linfoblástica aguda

Leucemia aguda indiferenciada

Leucemias bifenotípicas agudas.

Clasificación internacional franco-estadounidense-británica (FAB) sin diferencias fundamentales con algunas aclaraciones sobre grupos de diferenciación celular (inmunofenotipado).

No se puede encontrar el inicio característico, signos externos específicos característicos de la leucemia aguda. El diagnóstico de leucemia aguda solo se puede establecer morfológicamente, mediante la detección de células blásticas en la sangre o la médula ósea.

Se distinguen los siguientes síndromes clínicos:

1. Síndrome anémico: debilidad, mareos, dificultad para respirar, taquicardia, dolores de cabeza, palidez de la piel, soplo sistólico en todos los puntos, disminución de la presión arterial, hemoglobina, glóbulos rojos.

2. Síndrome hemorrágico: hemorragias cutáneas, sangrado de encías, sangrado nasal y uterino, sangrado por abrasiones, pequeños cortes, etc., causados ​​principalmente por trombocitopenia.

Síndrome de complicaciones bacterianas y virales: fiebre, debilidad, sudoración, pérdida de peso, manifestaciones de intoxicación, diversas enfermedades infecciosas (catarro respiratorio superior, amigdalitis, neumonía, meningitis, sepsis, etc.)

Síndrome de proliferación leucémica: ganglios linfáticos agrandados, bazo, hígado, hiperplasia gingival, leucemias cutáneas, neuroleucemia (infiltración leucémica de las meninges).

Durante la leucemia aguda, se distinguen las siguientes etapas:

1. Inicial - preleucemia. Sólo puede evaluarse retrospectivamente.

2. Etapa avanzada de la enfermedad. Se caracteriza por una inhibición severa de la hematopoyesis normal, blastosis significativa de la médula ósea, sangre periférica.

3. Remisión completa (clínica y hematológica): no más del 5% de las células blásticas en la médula ósea punteada.

4. Recuperación: remisión completa durante 5 años.

5. Remisión incompleta.

7. Fase terminal: sin efecto de la terapia citostática.

Formas de la enfermedad según los resultados de un estudio de sangre periférica: 1) aleukemic - sin la liberación de células blásticas en la sangre; 2) leucémico: con la liberación de células blásticas en la sangre periférica.

Análisis de sangre periférica:

El número de leucocitos puede ser diferente. Se distingue la forma leucémica: un aumento significativo en la cantidad de leucocitos, subleucémica: un aumento moderado en la cantidad de leucocitos, normo o leucopenia: una cantidad normal o reducida de leucocitos.

presencia de células blásticas. En la fórmula, hay una imagen de una falla leucémica: hay células blásticas jóvenes y granulocitos maduros, monocitos, linfocitos, no hay formas de transición (promielocitos, mielocitos, metamielocitos).

Estudio del punteado esternal: detección y análisis citoquímico de células blásticas, inmunofenotipado de células de médula ósea.

Remisión de inducción (obtención): una combinación de varios medicamentos citostáticos según el programa elegido.

Consolidación de la remisión (consolidación de la remisión).

Terapia sintomática: tratamiento de las complicaciones.

Trasplante de médula ósea.

Dependiendo del tipo de leucemia, se logra la remisión en el 60-70% de los pacientes, el 80% de los pacientes tratados experimentan una recaída y la curación completa en el 10-15%.

Diagnóstico de leucemia aguda

La leucemia aguda es un tumor constituido por células hematopoyéticas jóvenes indiferenciadas, con aparición obligada en la médula ósea roja. Las leucemias agudas se caracterizan por las siguientes características: carácter clonal (todas las células que componen un tumor leucémico son descendientes de una célula madre o célula precursora de cualquier dirección y nivel de diferenciación), progresión tumoral, geno y fenotípica (morfológica - atipismo, anaplasia anaplasia citoquímica - química) características de las células leucémicas.

En base a las características morfológicas de las células leucémicas en combinación con sus características citoquímicas, las leucemias agudas se dividen en dos grandes grupos.

Diagnóstico de leucemia aguda

Para el diagnóstico de leucemia aguda, es necesaria una verificación morfológica clara: la detección de células indudablemente blásticas en la médula ósea roja. Para el diagnóstico de leucemia aguda, ciertamente es necesario establecer la estructura clásica del núcleo de las células blásticas (cromatina suave - malla fina con un calibre y color uniforme de los hilos de cromatina).

Cambios en la sangre periférica

El estudio citomorfológico de las células sanguíneas periféricas proporciona información valiosa en todas las hemopatías. En la leucemia aguda, todos los elementos de la hematopoyesis se caracterizan por cambios patológicos profundos. En la mayoría de los casos de leucemia aguda, se desarrolla anemia. La anemia es normocrómica o hipercrómica, con menos frecuencia de naturaleza hipocrómica y se profundiza a medida que avanza la enfermedad (la concentración de hemoglobina disminuye perro / l, el número de glóbulos rojos es 1.5-1.0 × 10.2 / l). Otro signo característico de la leucemia aguda es la trombocitopenia (a menudo por debajo de nivel crítico). Durante el curso de la enfermedad y bajo la influencia del tratamiento, el recuento de plaquetas sufre fluctuaciones cíclicas: al comienzo de la enfermedad, a menudo es normal, disminuye durante la exacerbación y la progresión y aumenta durante la remisión. El número total de leucocitos varía mucho, desde leucopenia hasta × 10 9 /l (rara vez se registran tasas más altas). Leucocitosis en el momento diagnóstico primario la leucemia aguda se observa en menos de un tercio de los casos, suele ir acompañada de un alto contenido de células blásticas. Mucho más a menudo en el análisis de sangre inicial, la cantidad de leucocitos es normal o se detecta leucopenia con linfocitosis relativa. Por lo general, las células blásticas se pueden detectar entre los elementos linfoides, pero puede haber casos en los que las células blásticas típicas estén ausentes en la sangre. Las formas leucopénicas representan el 40-50% de todos los casos de leucemia aguda, mientras que el número de neutrófilos puede disminuir hasta un nivel catastrófico (0,2-0,3x10 9 /l). El desarrollo de citopenias (granulocitopenia, anemia, trombocitopenia) en la leucemia aguda es consecuencia de la inhibición de la hematopoyesis normal inherente a esta enfermedad. El mecanismo citolítico autoinmune, que puede complicar el curso de cualquier leucemia, también tiene cierta importancia en la aparición de citopenias.

Comenzando como leucopenia, la leucemia aguda a menudo retiene esta tendencia a lo largo de la enfermedad. A veces se observa un cambio en la leucopenia con leucocitosis (en pacientes no tratados a medida que avanza el proceso) y viceversa (por ejemplo, bajo la influencia de la terapia citostática). La leucemia aguda se caracteriza por el llamado gaping leucémico: la ausencia de elementos de transición entre las células que constituyen el sustrato morfológico de la enfermedad y los leucocitos maduros.

La leucemia, en la que se detectan células blásticas patológicas en la sangre periférica, se denomina leucémica, y la leucemia (o la fase de la leucemia) con ausencia de células blásticas en la sangre se denomina aleucémica.

Cambios en la médula ósea roja. El estudio de la médula ósea es un estudio obligatorio en el diagnóstico de leucemia aguda, incluso en los casos en los que no se duda del diagnóstico de leucemia aguda tras el estudio de sangre periférica. Esto se debe a la regla básica de la oncología: solo el estudio del sustrato del tumor proporciona una base para hacer un diagnóstico.

En la médula ósea roja durante la manifestación de la leucemia aguda, las formas blásticas suelen predominar (más del 60%), como regla general, se presenta una fuerte inhibición del germen de eritrocitos y una disminución en el número de megacariocitos con un cambio degenerativo en el megacariocitograma. anotado.

El diagnóstico de las formas citopénicas de leucemia es difícil, ya que el cuadro sanguíneo a menudo se parece al de la anemia aplásica y la agranulocitosis: anemia, leucopenia (granulocitopenia y linfocitosis relativa). La punción de la médula ósea generalmente resuelve los problemas de diagnóstico. La excepción es la variante M7 (megacarioblástica) de la leucemia aguda, en la que el pronunciado desarrollo de la fibrosis de la médula ósea no permite obtener un punteado completo (baja celularidad, una mezcla significativa de sangre periférica). Un método de diagnóstico importante para esta forma de leucemia aguda es la biopsia de trépano óseo. El examen histológico de las secciones óseas permite establecer una hiperplasia blástica pronunciada de la médula ósea roja.

El diagnóstico de leucemia aguda se puede realizar en los siguientes casos.

En otros casos más raros, la detección de 5-30% de blastos mieloides entre todas las células de la médula ósea nos permite hablar sobre el diagnóstico de síndrome mielodisplásico, es decir, anemia refractaria con un mayor contenido de blastos (anteriormente esta forma de síndrome mielodisplásico se denominó leucemia aguda de bajo porcentaje). Al establecer la naturaleza linfoide de las células blásticas, es necesario excluir el linfoma maligno en la etapa de generalización. Actualmente, se utiliza la clasificación FAB del síndrome mielodisplásico.

Clasificación FAB del síndrome mielodisplásico

Forma de síndrome mielodisplásico

Leucemias. Diagnóstico clínico y de laboratorio.

En hematología, existe un concepto de hemoblastosis: tumores que emanan del tejido hematopoyético. Las hemoblastosis incluyen leucemias y hematosarcomas. Las leucemias son hemoblastosis con una lesión tumoral primaria de la médula ósea. Hematosarcomas: formas con crecimiento tumoral local primario, fuera de la médula ósea, estos son tumores sólidos que consisten en células blásticas del tejido hematopoyético.

La leucemia es una enfermedad sistémica del tejido hematopoyético que surge de las células hematopoyéticas y afecta necesariamente a la médula ósea. Actualmente, la naturaleza tumoral de la leucemia está fuera de toda duda, y para la mayoría de las leucemias se ha establecido su naturaleza clonal. Se reveló que todas las células tumorales son un clon, es decir, la descendencia de una célula alterada, que luego se diseminó y metastatizó por todo el sistema hematopoyético. La fuente de crecimiento del tumor es la progenie más cercana (clon) del padre: la célula madre hematopoyética. La capacidad de metástasis determina la naturaleza sistémica del proceso, y el principal lugar de distribución de estas células tumorales es la médula ósea, como resultado de lo cual se desplazan las células de la hematopoyesis normal.

La etiología de la leucemia sigue sin estar clara. Como escribe AI Vorobyov: "La búsqueda de una causa o un grupo del mismo tipo de causas de tumores humanos en su pobreza solo puede competir con la búsqueda de la Atlántida". Para leucemias individuales, ya se han encontrado algunos factores que contribuyen a la revelación de su etiología. Así, el desprendimiento del brazo largo del cromosoma del par 22 y la transferencia de este segmento a uno de los cromosomas grandes del par 9 se encuentran en casi todas las células de la médula ósea en pacientes con leucemia mieloide crónica. El cromosoma patológico de 22 pares con un brazo largo acortado recibe el nombre de Filadelfia por la ciudad donde fue descubierto en 1959 por Nowell y Hungerford. Las translocaciones cromosómicas similares ocurren, por regla general, bajo la influencia de la radiación ionizante, por lo que estos hechos confirman la naturaleza mutacional (más a menudo radiación) de la leucemia mieloide crónica. Tras la explosión de una bomba nuclear en Japón, los casos de leucemia mieloide crónica y leucemia aguda son 7 veces más frecuentes que en otros países.

Las anomalías cromosómicas en la leucemia aguda tienen la naturaleza de la aneuploidía: cambios en la cantidad de cromosomas en la célula tumoral y no en la estructura, como en la leucemia mielógena crónica. Una forma peculiar de leucemia aguda, que se encuentra principalmente en África, el linfoma de Burkitt, revela brotes epidémicos, lo que da motivos para pensar en su naturaleza viral. Por lo tanto, en el desarrollo de la leucemia aguda, hay varias razones: radiación ionizante, trastornos genéticos, no se excluye el papel de los virus.

La leucemia linfocítica crónica no muestra dependencia de los efectos de factores mutagénicos, incluidas las radiaciones ionizantes, pero tiene una clara conexión con las características étnicas. La leucemia linfocítica crónica rara vez se diagnostica en algunas tribus y pueblos.

Actualmente, a falta de terapia etiotrópica para la leucemia, se lleva a cabo su terapia patogénica, lo que en algunos casos nos permite hablar de la curación de pacientes con ciertos tipos de leucemia. Más de 3-5 años de observación de niños con leucemia linfoblástica aguda, que se encuentran en un estado de remisión completa, muestra que existe una posibilidad fundamental de eliminar las células tumorales aunque estén ampliamente distribuidas por todo el sistema hematopoyético.

En los seres humanos, la médula ósea roja se encuentra en todos los huesos tubulares, el cráneo, las costillas, el esternón, la clavícula, el omóplato, la columna vertebral y los huesos pélvicos. Hay 2 tipos de células en la médula ósea: estroma reticular y parénquima. La hematopoyesis es una serie de diferenciaciones celulares que conducen a la aparición de células sanguíneas periféricas maduras.

El esquema moderno de la hematopoyesis. Las ideas modernas sobre la hematopoyesis fueron establecidas en los años 20 por A.A. Maksimov. En nuestro país, el esquema de hematopoyesis más común fue el esquema de I.A. Kassirsky y G.A. Alekseev. Sin embargo, en este esquema, lo más hipotético era su parte superior, es decir, la célula, el antepasado de la hematopoyesis. El esquema de hematopoyesis utilizado actualmente ha sido propuesto

IL Chertkov y AI Vorobyov en 1973.

Todas las células sanguíneas se dividieron en 6 clases.

La primera clase de células consiste en células madre hematopoyéticas, cuyo contenido cuantitativo en el tejido hematopoyético no excede una fracción de un porcentaje. Estas células proporcionan hematopoyesis estable y su recuperación después de influencias perturbadoras. La célula madre es la única capaz de autosostenerse durante mucho tiempo, más que la vida de un individuo. Las células madre son pluripotentes y son capaces de diferenciarse a lo largo de todos los linajes hematopoyéticos. No se excluye que la linfopoyesis tenga la misma célula madre que su eslabón inicial. Por lo tanto, las células madre se denominan células que tienen la capacidad de automantenimiento ilimitado, así como la capacidad de proliferar y diferenciarse.

Las células reticulares, los fibroblastos y las células endoteliales parecen tener sus propias células precursoras. El diámetro de la célula madre es de 8-10 µm, la forma de la célula es redonda o irregular. El núcleo es a menudo homogéneo, redondo o en forma de riñón, por lo general son visibles 1-2 nucléolos grandes. El borde del citoplasma azul claro es estrecho, no contiene granularidad. El 65% de las células madre se diferencian a lo largo de la vía eritroide, el 30% a lo largo de la vía mieloide y el 5% a lo largo de la vía megacariocítica.

Células de clase 2: una clase de células progenitoras pluripotentes que son capaces de proliferación y diferenciación: células progenitoras de linfocitos T, la célula formadora de colonias del cultivo sirve como enlace inicial en la histogénesis de células de dos líneas: granulocitos y monocitos. .

Clase 3: una clase de células progenitoras bipotentes, como las células sensibles a la eritropoyetina y a la trombopoyetina. Estas tres clases son células morfológicamente indiferenciadas.

Clase 4: células progenitoras unipotentes que pueden diferenciarse solo en la dirección de un linaje hematopoyético. Estas células son morfológicamente reconocibles. Se denominan blastos (según la estructura del núcleo), que inician filas separadas de hematopoyesis: plasmablasto, linfoblasto, monoblasto, mieloblasto, eritroblasto, megacarioblasto.

Grado 5: una clase de células en maduración.

Grado 6: una clase de células maduras con un ciclo de vida limitado.

Así, el término blastos indiferenciados (células de las 3 primeras clases) reemplazó al antiguo nombre de hemocitoblastos. En la hematología moderna, los métodos de investigación citoquímicos son ampliamente utilizados, lo que permite identificar varios tipos de células sanguíneas, su grado de madurez, pertenecientes a una u otra serie hematopoyética.

Clasificación de las leucemias. En 1857, Friedrich dividió todas las leucemias en agudas y crónicas. La división se basó en el principio morfológico: un grupo de leucemias agudas está unido por una característica común: el sustrato del tumor son células jóvenes, células indiferenciadas de las primeras 3 clases o clase 4, blastos. La leucemia aguda de células morfológicamente indiferenciadas de las primeras 3 clases se denomina leucemia aguda indiferenciada. Si el tumor surge a partir de células de clase 4, entonces se denomina con la designación de células de clase 4. El grupo de leucemias crónicas incluye tumores diferenciados del sistema sanguíneo, cuyo sustrato principal son las células maduras y maduras. La duración de la enfermedad no afecta la selección de leucemia aguda y crónica, aunque con mayor frecuencia las leucemias agudas se caracterizan por una esperanza de vida más corta y las crónicas son mucho más largas. Al mismo tiempo, con la terapia citostática moderna, hay casos de un curso prolongado de leucemia aguda (años). Por el contrario, puede haber un curso rápido de leucemia crónica.

Ya a principios del siglo XX, la leucemia aguda comenzó a dividirse en variantes linfoblástica y mieloblástica. Esta división se asoció principalmente con la presencia o ausencia de la enzima mieloperoxidasa. Luego, en 1964, se creó una comisión en Cambridge para desarrollar una clasificación general de la leucemia aguda. Se basó en características morfológicas. Actualmente, la clasificación de las leucemias agudas se basa en características citoquímicas. La leucemia aguda de células morfológicamente indiferenciadas de las primeras 3 clases se denomina leucemia aguda indiferenciada. Si el tumor surge a partir de células de clase 4, entonces se denomina por la designación de células de clase 4: mieloblástica, mielomonoblástica, monoblástica, promielocítica, eritromielosis aguda, megacarioblástica, linfoblástica, plasmablástica, leucemia aguda indiferenciada.

Diagnóstico de leucemia aguda. Como se mencionó anteriormente, la leucemia aguda

Tumor maligno del tejido hematopoyético, cuyo sustrato morfológico son células blásticas transformadas correspondientes a los elementos progenitores de uno de los linajes hematopoyéticos. El diagnóstico de leucemia aguda solo puede ser morfológico. Para este propósito, se realiza una punción esternal, y solo un porcentaje muy elevado de células de las primeras 3 clases o células de la cuarta clase permite diagnosticar la leucemia aguda. Por lo general, el porcentaje de células de las primeras 4 clases en la leucemia aguda es de varias decenas de porcentaje, a veces este porcentaje es del 10-20%, esta es una forma de leucemia aguda de bajo porcentaje. Si el porcentaje de células blásticas está por debajo de estos números, se puede realizar una trepanobiopsia, un estudio de la médula ósea extraída del ala ilíaca. Con la trepanobiopsia, se encuentran acumulaciones de células jóvenes en una cantidad significativa. Si en este caso el diagnóstico es dudoso, el análisis debe repetirse después de 3-4 semanas.

En la sangre periférica en la leucemia aguda, hay una brecha, una brecha entre las células blásticas y los elementos maduros con ausencia de promielocitos y mielocitos en el mielograma, el llamado hiato leucémico.

Etapas de la leucemia aguda: etapa inicial, período extendido (primer ataque, recaída), remisión (completa o parcial), recuperación, recaída de leucemia aguda (indicando cuál) y etapa terminal.

La información actualmente disponible sobre la etapa inicial de la leucemia aguda es escasa, esta etapa solo puede juzgarse retrospectivamente. Los pacientes tienen debilidad progresivamente creciente, sudoración.

El diagnóstico se puede realizar mediante un análisis de sangre aleatorio o durante la fase pico de la enfermedad. Con síntomas clínicos avanzados, los pacientes experimentan fiebre alta, escalofríos, mareos, dolor en los huesos, articulaciones, anorexia, sangrado de las encías. Al inicio de la enfermedad, el 55-70% de las personas presentan un síndrome hemorrágico con sangrado de cualquier localización y aparición de hemorragias en la piel, lo que se asocia a trombocitopenia. Con la inhibición del germen granulocitario, se observan amigdalitis necrótica ulcerativa y aumento de la temperatura.

En los análisis de sangre, hay anemia moderada, el número de leucocitos puede aumentar, normal, disminuir, con blastos en la sangre periférica, se observa trombocitopenia. Incluso si los cambios en la sangre periférica son confusos, la médula ósea descifra el diagnóstico: varias decenas de % de blastos o el 100% se encuentran en el mielograma. Por lo general, el agrandamiento del bazo es moderado, su agrandamiento coincide con otros signos de progresión. Tampoco se observa un aumento significativo en el hígado. Con frecuencia aparecen crecimientos cutáneos, mientras que la infiltración leucémica también se localiza en el tejido subcutáneo, formando densos ganglios que se sueldan a la piel y la levantan. Puede haber infiltración leucémica del tejido pulmonar y del cerebro.

Este cuadro clínico es típico de la leucemia mieloide aguda en adultos.

Familiarícese con el programa para el diagnóstico y tratamiento de la leucemia en Israel.

La leucemia promielocítica aguda se distingue un poco del grupo de leucemias agudas, principalmente por el hecho de que el promielocitos es una célula de clase 5. Aparentemente, el nombre no es del todo correcto y la célula pertenece a la clase 4, pero en un microscopio óptico convencional no se puede distinguir de un promielocitos. Se distingue por una malignidad aguda del curso, la gravedad del síndrome hemorrágico, la hipofibrinogenemia y la velocidad del curso. El primer y más típico síntoma de la enfermedad es el síndrome hemorrágico. Como regla general, estamos hablando de la aparición de hematomas en el sitio de lesiones menores, sangrado de las encías. Es posible un inicio rápido de la enfermedad: fiebre alta, hemorragias, necrosis de las membranas mucosas. Casi todos los pacientes mueren por hemorragia cerebral o hemorragia gastrointestinal. En esta leucemia, las células patológicas tienen una granularidad morfológicamente similar a la de los mastocitos y basófilos, que contienen heparina. Esta leucemia a veces se denomina

parinocítica o basófila, pero el término promielocítica

se ha vuelto tradicional y se usa con mayor frecuencia en la práctica clínica. Anteriormente, con esta forma se describían las formas fulminantes y la esperanza de vida de los pacientes no superaba el mes. La fiebre alta y los sudores profusos desgastan a los enfermos. Actualmente, debido al uso de nuevos medicamentos, en particular la rubomicina, la esperanza de vida de los pacientes ha aumentado. La esperanza de vida es en promedio de 26 meses, e incluso se describen formas cuando la esperanza de vida era superior a 4 años.

Las leucemias monoblásticas y mielomonoblásticas agudas no son muy diferentes de las leucemias mieloides agudas. También son frecuentes las lesiones necróticas de la cavidad oral, la gingivitis, las leucemias cutáneas y el bazo agrandado. La peculiaridad de este tipo de leucemia es que las remisiones ocurren con menos frecuencia que con otros tipos de leucemia. La esperanza de vida promedio es de aproximadamente 3 meses.

Eritromielosis aguda. Ocurre raramente. En la médula ósea, el contenido de glóbulos rojos nucleados en la médula ósea aumenta bruscamente, acompañado de un alto contenido de blastos indiferenciados, mieloblastos o monoblastos.

Leucemia linfoblástica aguda. Esta forma llama la atención de oncólogos y hematólogos porque fue con esta forma que el uso de efectos citostáticos complejos permitió lograr la remisión en más del 90% de los niños enfermos, y en muchos pacientes las remisiones fueron tan largas que se podría hablar sobre la recuperación de los niños. Estos datos fueron obtenidos por científicos de muchos países simultáneamente. El efecto positivo fue estable en niños de 2 a 9 años, fue peor en niños menores y mayores de esta edad, y en personas mayores, las diferencias entre la leucemia aguda linfoblástica y mieloide se borran gradualmente, aunque la esperanza de vida en estas formas es mayor. que en otras formas de leucemia aguda. En el 80% de los casos, la leucemia linfoblástica ocurre en la infancia. Su peculiaridad radica en el agrandamiento de los ganglios linfáticos y el bazo.

Otras características de la leucemia linfoblástica aguda en los niños son la osalgia, con mayor frecuencia dolor en las piernas. Por lo general, en tales casos, se sospecha reumatismo en los pacientes. La anemia comienza a desarrollarse. Una punción de médula ósea confirma el diagnóstico por la presencia de linfoblastos. Estas células también se encuentran en el punteado del ganglio linfático y el bazo. Básicamente, esta leucemia surge de las células progenitoras de los linfocitos T. Sin terapia, el curso de la leucemia linfoblástica aguda no tiene ninguna característica: aumenta la inhibición de los brotes hematopoyéticos normales, aparecen complicaciones infecciosas, hemorragias y progresa la anemia. Antes de la llegada del metotrexato, la 6-mercaptopurina y la prednisolona, ​​la esperanza de vida de los niños enfermos era de aproximadamente 2,5 a 3,5 meses, los adultos, de 1,4 a 2 meses. El curso de cada recurrencia de la enfermedad se caracteriza por una cierta persistencia de la manifestación de la enfermedad en comparación con su primer ataque. A menudo, el proceso hace metástasis en los testículos y las meninges, es decir, hay fenómenos de neuroleucemia. Considere que la gran mayoría de los casos de leucemia linfoblástica aguda surgen de los linfocitos T.

También hay casos de leucemia aguda que se desarrollan a partir de células progenitoras de linfocitos B. Este grupo pertenece a las leucemias plasmablásticas agudas. La leucemia megacarioblástica aguda es menos común.

Actualmente, el concepto de neuroleucemia se ha introducido en la leucemia. Ocurre en todas las formas de leucemia aguda, y especialmente a menudo en la leucemia linfoblástica aguda en niños, en esencia, la neuroleucemia es un proceso metastásico,

Su cuadro clínico consiste principalmente en los síntomas de meningitis y síndrome de hipertensión. Hasta que se incluyeron los fármacos endoluminales en el tratamiento de la leucemia aguda, no se pudo prevenir la neuroleucemia.

La remisión clínica y hematológica completa en la leucemia aguda tiene las siguientes características: normalización del estado general del paciente, presencia de no más del 5% de células blásticas en la médula ósea punteada y número total de células blásticas (menos del 5%). y las células linfoides no supera el 40%. Al mismo tiempo, no hay células blásticas en la sangre periférica, la composición de la sangre es casi normal, aunque es posible una leucopenia moderada, alrededor de 1,5-3 x 10,9 / l, y trombocitopenia de hasta 100 x 10,9 / l. No hay signos clínicos de proliferación leucémica en hígado, bazo y otros órganos. Para la leucemia linfoblástica en niños, es obligatoria la normalización del líquido cefalorraquídeo.

La recuperación de la leucemia aguda se considera como un estado de remisión completa durante 5 años o más.

Las remisiones parciales son condiciones muy diversas que se caracterizan tanto por una clara mejoría hematológica con disminución del porcentaje de células blásticas en la médula ósea y líquido cefalorraquídeo con la eliminación de los síntomas de la neuroleucemia, como por la desaparición de las células blásticas de la sangre. .

Recaída de leucemia aguda. Puede ser medular (aparición de más del 5% de blastos en el punteado) o local (extramedular) con cualquier localización de infiltración leucémica.

La etapa terminal de la leucemia aguda ocurre cuando todos los agentes citostáticos son ineficaces e incluso en su contexto hay un deterioro en el cuadro sanguíneo: aumentan la granulocitopenia y la trombocitopenia, aparecen necrosis de la mucosa y hemorragias espontáneas.

Clasificación de la leucemia crónica:

1. Leucemia mieloide crónica

2. Mielosis subleucémica

4. Megacariocítico crónico

5. Eritromielosis crónica

6. Leucemia linfocítica crónica

La leucemia mieloide crónica es un tumor que surge de las células precursoras de la mielopoyesis que retienen la capacidad de diferenciarse a formas maduras. El sustrato tumoral son predominantemente granulocitos, principalmente neutrófilos.

La enfermedad se caracteriza por un aumento de la leucocitosis neutrofílica, a menudo hipertrombocitosis, agrandamiento progresivo del bazo. El proceso tumoral pasa por dos etapas: expandido - monoclonal benigno y terminal - policlonal maligno. La leucemia mieloide crónica en estadio avanzado es un tumor del germen neutrofílico de la hematopoyesis, que ha reemplazado casi por completo los elementos de la granulocitopoyesis normal.

El clon patológico tiene como ancestro una célula hematopoyética pluripotente, que tiene en el par 22 un cromosoma con un brazo largo acortado en lugar de uno normal. Los signos iniciales de la enfermedad se asocian con un agrandamiento del bazo o con una intoxicación creciente. En el primer caso, el paciente presta atención a la pesadez en el abdomen, la aparición de dolor en el hipocondrio izquierdo. En otros casos, los primeros síntomas son debilidad, sudoración, pérdida de peso. El diagnóstico se basa en un análisis de sangre. Este es siempre un proceso leucémico, es decir, las células jóvenes de la serie neutrofílica están presentes en la sangre: aumenta el contenido de neutrófilos punzantes, metamielocitos, mielocitos, promielocitos y mieloblastos posteriores. En la fórmula de leucocitos, aumenta el contenido de basófilos y, a veces, eosinófilos: "asociación basófila-eosinófila". La leucocitosis siempre aumenta, aumenta el contenido de plaquetas. Por lo tanto, la creciente leucocitosis neutrofílica con un desplazamiento hacia la izquierda a mielocitos y promielocitos, un aumento en el número de plaquetas que se produce en el contexto de una condición satisfactoria del paciente, debería sugerir leucemia mieloide crónica.

Sin embargo, se sabe que la leucocitosis neutrofílica y la trombocitosis son condiciones reactivas frecuentes en respuesta a cualquier descomposición celular en el cuerpo y, sobre todo, a un tumor canceroso. En estos casos se habla de reacciones leucemoides. Pueden ocurrir como respuestas de la médula ósea a la irritación por productos de degradación de proteínas, o como resultado de una violación de la integridad de la médula ósea por metástasis cancerosas. El diagnóstico generalmente se basa en el análisis de un frotis de sangre periférica. En casos dudosos, se realiza una punción esternal. Se encuentra un fuerte aumento relativo de los granulocitos, la proporción de leucocitos: eritrocitos alcanza 10: 1 y 20: 1. Hay una fuerte disminución de la fosfatasa alcalina.

El desarrollo de leucemia mieloide crónica en ausencia de terapia citostática se caracteriza por un aumento gradual de los fenómenos patológicos: el bazo se agranda, aumenta la pesadez en el abdomen, aumenta la leucocitosis y la intoxicación se vuelve más pronunciada. Cuando se alcanza el nivel de 500 x 10,9/lo más células, existe un peligro real de formación de trombos de leucocitos en los vasos del cerebro, el bazo y los pulmones. La infiltración leucémica se propaga en el hígado. Previamente, la expectativa de vida de los pacientes con leucemia mieloide crónica sin terapia citostática era en promedio de 2,4 a 2,6 años. La causa de muerte en este período fueron manifestaciones de la etapa terminal: inhibición de la hematopoyesis normal, síndrome hemorrágico, infecciones, necrosis, 70% asociado a crisis blástica.

En las condiciones de la terapia citostática moderna, el cuadro de la leucemia mieloide crónica difiere del descrito anteriormente. El uso de mielosán conduce a la normalización práctica del estado de los pacientes: el nivel de leucocitos puede mantenerse dentro de los límites de 10,9/ly el tamaño del bazo permanece estable. Con los años, el contenido de formas más jóvenes, incluidos los promielocitos, aumenta en la sangre periférica. Esta es la etapa avanzada de la enfermedad.

Si el paciente se vuelve refractario a la terapia citostática en curso, aumenta la intoxicación general, disminuye el recuento de plaquetas y luego se diagnostica la etapa terminal de la enfermedad. Una disminución de plaquetas determina la aparición de un síndrome hemorrágico pronunciado. Luego se junta la pancitopenia. El signo más importante de esta etapa es la presencia de células blásticas en la médula ósea y luego en la sangre periférica. Hay signos de mielemia: el contenido de la médula ósea ingresa a la sangre periférica, principalmente para glóbulos rojos nucleados y megacariocitos. Los focos de hematopoyesis patológica van más allá de la médula ósea, el bazo, el hígado y forman leucemias cutáneas debajo de la piel. Hay fuertes dolores óseos, infartos de bazo, fiebre persistente.

Por lo general, la esperanza de vida de un paciente hasta la etapa terminal se calcula en años, y la etapa terminal más larga en sí es de 3 a 6 meses. Hay signos de una crisis blástica en la sangre: la aparición de células blásticas y no diferenciadas en la sangre, que se asemeja a la imagen de la sangre en la leucemia aguda. Este hecho confirma la naturaleza triple de la leucemia mieloide crónica, su aparición a nivel de la célula progenitora de la mielopoyesis.

Eritremia. Anteriormente, se llamaba enfermedad de Wakez o policitemia vera. La enfermedad es un tumor benigno del sistema sanguíneo que se desarrolla a partir de una célula progenitora de mielopoyesis, aunque no se puede excluir su desarrollo a partir de una célula sensible a la eritropoyetina para algunas variantes. En el torrente sanguíneo y el depósito vascular, la masa de eritrocitos aumenta, mientras que sus características cualitativas también cambian. Por lo tanto, estos eritrocitos dan una VSG muy disminuida (1-4 mm / h), a veces hasta la ausencia de sedimentación de eritrocitos).

Los pacientes se quejan de dolores de cabeza, pesadez en la cabeza. A veces, el primer signo de la enfermedad es el enrojecimiento de la cara y las palmas de las manos. Un síntoma común de la eritremia es el prurito. Los pacientes tienen tendencia a la trombosis. Los trombos se localizan tanto en las arterias de las extremidades con formación de necrosis como en las arterias coronaria y cerebral. A menudo hay un aumento en la presión arterial. El hígado y el bazo están agrandados.

El cuadro hematológico de la eritremia es bastante característico: un aumento en el número de eritrocitos, así como de plaquetas y leucocitos. Hay una hiperplasia pronunciada de elementos celulares en la médula ósea, todos los brotes hematopoyéticos están agrandados, principalmente eritroides. Al igual que la leucemia mieloide crónica, la eritremia tiene dos etapas: benigna avanzada y maligna terminal. Se debe realizar el diagnóstico diferencial con la eritrocitosis sintomática.

Leucemia linfocítica crónica. La leucemia linfocítica crónica es un tumor del tejido linfoide, el sistema inmunocompetente. El sustrato tumoral está representado por linfocitos morfológicamente maduros. La enfermedad se caracteriza por leucocitosis, proliferación linfocítica obligatoria en la médula ósea, ganglios linfáticos agrandados, hígado y bazo. La derrota del sistema inmunocompetente se caracteriza por una tendencia al desarrollo de complicaciones infecciosas y el desarrollo frecuente de condiciones autoinmunes (hemolíticas y trombocitopénicas).

Se sabe que los linfocitos son heterogéneos. En 1970, se aislaron timodependientes (linfocitos T), que son responsables de la inmunidad al trasplante, reacciones de hipersensibilidad de tipo retardado. Estos linfocitos sensibles al antígeno son los primeros en responder a la aparición de un nuevo antígeno.

El segundo grupo son los linfocitos B, que se encuentran por primera vez en la bolsa de Fabricio de las aves. La leucemia linfocítica crónica puede estar representada por células T y células B. Sin embargo, por regla general, la leucemia linfocítica crónica está representada por linfocitos B. Su contenido en la sangre alcanza el 80-98%, mientras que el número de linfocitos T se reduce al 3-9%. Solo se han encontrado casos aislados de leucemia linfocítica crónica, representada por linfocitos T. Lo más probable es que la leucemia linfocítica crónica surja de una célula precursora de la linfopoyesis. Al mismo tiempo, se revelan algunos signos de un proceso relativamente benigno: no hay violaciones en el conjunto de cromosomas, no se han obtenido datos claros sobre la atipia celular. Las células patológicas en la leucemia linfocítica crónica son prácticamente indistinguibles de los linfocitos normales. Durante un período significativo de la enfermedad, no hay progresión del tumor. Además, la enfermedad se puede controlar con un agente citostático durante varios años, y es rara una crisis blástica en las etapas finales de la enfermedad.

Al mismo tiempo, en algunos casos, la leucemia linfocítica crónica, siendo un tumor benigno durante mucho tiempo, se transforma y adquiere las características de malignidad, lo que se manifiesta por la resistencia del tumor a una variedad de terapias citostáticas. En la morfología de los linfocitos, se pueden detectar características de atipismo, en la sangre hay un gran porcentaje de prolinfocitos y linfoblastos. Tampoco hay conexión con factores mutagénicos, que se rastrearon en personas que se sometieron a exposición a radiación ionizante. La incidencia de leucemia aguda, leucemia mieloide crónica, pero no leucemia linfocítica crónica, se ha vuelto más frecuente entre los residentes de Hiroshima y Nagasaki, así como entre quienes recibieron radioterapia.

La enfermedad es a largo plazo, a veces durante muchos años, puede continuar sin signos de progresión del tumor. Así, en los primeros estadios, este tumor es benigno, pero en determinadas circunstancias puede malignizarse: crisis blástica, transformación en sarcoma.

Como se mencionó anteriormente, la leucemia linfocítica crónica consiste principalmente en linfocitos morfológicamente maduros que crecen en la médula ósea, los ganglios linfáticos, el bazo, el hígado y se liberan en grandes cantidades a la sangre periférica. El diagnóstico de la enfermedad generalmente se establece al detectar un aumento en el número de linfocitos en la sangre periférica junto con un aumento en los ganglios linfáticos. Núcleos de linfocitos medio destruidos con restos de nucléolo: la sombra de Gumprecht se encuentra en la sangre. En esencia, estas células de leucolisis son un artefacto; están ausentes en la sangre líquida. Estas células se forman durante la preparación del frotis. En muchas sombras de Gumprecht, se pueden ver nucléolos entre los grupos de cromatina. A veces, estas células de leucolisis reciben el nombre de Botkin-Gumprecht, aunque este nombre no es del todo exacto. Un hijo

S.P. Botkin S.S. Botkin describió células lisadas en la sangre en la fiebre tifoidea, pero no en la leucemia linfocítica crónica. La aparición de tales células es característica de la leucemia linfocítica crónica. A veces, en la sangre periférica, se observa la aparición de prolinfocitos individuales, con menos frecuencia, linfoblastos individuales. Se observa un fuerte aumento de linfocitos en el punto punteado de la médula ósea. En el trepanado de la médula ósea, hay acumulaciones características de células linfoides.

Como regla general, el paciente acude al médico ya en presencia de ganglios linfáticos agrandados y un aumento significativo en el contenido de linfocitos. La enfermedad comienza gradualmente, dentro de unos años, se puede observar linfocitosis hasta en un 40-50% en la sangre. Poco a poco, los ganglios linfáticos en el cuello, en las axilas comienzan a aumentar. En las etapas posteriores, se unen la anemia y la trombocitopenia.

El origen de la leucemia linfocítica crónica a partir de las células del sistema inmunocompetente, la naturaleza tumoral de este proceso, determinan las características de las complicaciones inherentes a la leucemia linfocítica crónica. Estos pacientes son muy sensibles a las infecciones de carácter bacteriano: amigdalitis, neumonía, procesos supurativos en los pulmones. Además de las complicaciones infecciosas, la leucemia linfocítica crónica se caracteriza por conflictos inmunitarios asociados con la aparición de anticuerpos contra sus propias células sanguíneas normales. En la mayoría de los casos, se diagnostica anemia hemolítica autoinmune: ictericia, aparece reticulocitosis, disminuye el contenido de glóbulos rojos y hemoglobina y aumenta el tamaño del bazo. Trombocitopenia frecuente y autoinmune. AI Vorobyov también describe condiciones autoinmunes relacionadas con los leucocitos.

El estado terminal del paciente puede caracterizarse por agotamiento creciente, complicaciones infecciosas graves, estomatitis, síndrome hemorrágico y anemia causada por conflictos inmunitarios.

La leucemia de "células peludas" o de células pilosas está representada por células del tipo linfocito B. La característica morfológica de estas células es la presencia de protuberancias vellosas del citoplasma. La enfermedad se caracteriza por citopenia, ganglios linfáticos moderadamente agrandados, el hígado y el bazo alcanzan tamaños grandes. Las células pilosas predominan en la médula ósea.

Este grupo combina procesos tumorales en el sistema de células inmunocompetentes que realizan las funciones de inmunidad humoral. Incluye tres formas nosológicas: plasmocitoma, mieloma, enfermedades de cadenas pesadas y otras.

La característica principal de este grupo es la capacidad de las células tumorales para sintetizar inmunoglobulinas homogéneas o sus fragmentos: paraproteínas. Como es sabido, la síntesis de anticuerpos se lleva a cabo normalmente por un sistema policlonal de células plasmáticas y linfocitos capaces de reaccionar específicamente con casi cualquiera de los posibles antígenos. Además, cada representante del clon, una célula, está genéticamente programado para la síntesis de un solo tipo de anticuerpo, una inmunoglobulina homogénea. En las hemoblastosis paraproteinémicas, toda la masa del tumor, que representa la descendencia de una célula, es genotípicamente homogénea, homogénea y su producción es inmunoglobulina monoclonal. Una paraproteína es siempre una proteína patológica. De acuerdo con la clasificación moderna de inmunoglobulinas, las paraproteínas se dividen en 5 clases: A, C, M, D y E.

Plasmacitoma (mieloma múltiple). Puede haber plasmocitomas solitarios, forma tumoral múltiple, formas nodulares difusas y formas difusas. Las células de mieloma que proliferan en la médula ósea conducen a la destrucción de la médula ósea en los huesos planos, la columna vertebral y los huesos tubulares.

Clínicamente, las lesiones óseas se manifiestan por la clásica tríada de Kahler: dolor, tumores, fracturas. No existen signos radiológicos específicos para distinguir los cambios óseos de las metástasis óseas. El examen citológico de la médula ósea revela un cuadro específico de metaplasia de células de mieloma.

El síndrome de patología proteica se manifiesta por: hiperproteinemia con hiperglobulinemia, aumento de la VSG y la viscosidad de la sangre, reacciones positivas a las proteínas sedimentarias. La nefropatía por mieloma se expresa por proteinuria persistente, desarrollando gradualmente insuficiencia renal en ausencia de signos de síndrome nefrótico: edema, hipoproteinemia, hipercolesterolemia. La hipertensión y la retinopatía tampoco son típicas.

GOST 25382-82
(ST SEV 2702-80,
ST SEV 6284-88)*
______________________
* Designación estándar.
Edición revisada, Rev. N 1 .

Grupo C79

ESTÁNDAR ESTATAL DE LA UNIÓN DE LA SSR

GANADO

Métodos diagnóstico de laboratorio leucemia

animales domesticos. Métodos de diagnóstico de laboratorio de leucosus.

Fecha de introducción 1983-01-01

Decreto Comité Estatal URSS según las normas del 11 de enero de 1982 N 3153, el período de validez se establece del 01/01/83 al 01/01/88 *
________________
* Se eliminó el período de vigencia de acuerdo con el protocolo del Consejo Interestatal de Normalización, Metrología y Certificación (IUS N 2, 1993)

DESARROLLADO por el Ministerio Agricultura URSS

INTÉRPRETES

LG Burba; A. F. Valikhov; EA Dun; L. A. Zinevich; MP Kudryavtseva; V. M. Nakhmans; G.A.Simonyan

INTRODUCIDO por el Ministerio de Agricultura de la URSS

APROBADO E INTRODUCIDO POR Decreto del Comité Estatal de Normas de la URSS del 11 de agosto de 1982 N 3153

INTRODUCIDA Enmienda N 1, aprobada y puesta en vigor el 01.01.90 por el Decreto de la Norma Estatal de la URSS del 23.06.89 N 1957

El cambio N 1 fue realizado por el fabricante de la base de datos de acuerdo con el texto de IUS N 10, 1989


Esta norma se aplica al ganado bovino y establece métodos para el diagnóstico de laboratorio de la leucemia.

El estándar está destinado a las instituciones de investigación.

El estándar cumple totalmente con ST SEV 2702-80.

1. MÉTODOS DE MUESTREO

1. MÉTODOS DE MUESTREO

1.1. Para el examen hematológico, se toman muestras de sangre de la vena del animal de acuerdo con las reglas de asepsia en tubos de ensayo con un anticoagulante, una solución al 10% de sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), a razón de 0,02 cm3 por 1 cm2 de sangre. Los frotis de sangre finos se preparan a partir de sangre fresca o estabilizada en portaobjetos de vidrio sin grasa calentados a 25 °C.

Las muestras de sangre estabilizada para investigación se envían al laboratorio y se examinan a más tardar 36 horas después de tomarlas. Las muestras para la investigación se toman no antes de los 15 días posteriores a la introducción de vacunas y alérgenos en los animales, 15 días antes del parto y 15 días después del parto.

1.2. Para las pruebas serológicas, se toman muestras de sangre de una vena en tubos de ensayo estériles. Con el almacenamiento prolongado de muestras, el suero sanguíneo se separa del coágulo. El suero se almacena a una temperatura de menos 20 °C e inferior. Cuando se analiza la presencia de anticuerpos contra los antígenos del oncornavirus bovino en la reacción de precipitación difusa (RID), se utiliza plasma sanguíneo estabilizado tomado de acuerdo con la cláusula 1.1.

1.3. Muestras tomadas para hematológicos y estudios serológicos sangre, etiquetado y enviado al laboratorio con un documento de acompañamiento, que indica el nombre de la granja (departamento, granja), número o apodo, sexo y edad del animal.

1.4. Para los estudios histológicos y citológicos, se toma material patológico de los cadáveres a más tardar 8 horas después de la muerte o sacrificio del animal. Las muestras se colocan en una solución fijadora en una proporción de 1:30.

Para el examen histológico, se cortan pedazos de órganos y tejidos (ganglios linfáticos, bazo, hígado, riñones, corazón, músculos, esternón, pared de los órganos digestivos y otros tejidos) de 2x2x1 cm de tamaño. al tejido normal hay zonas de tejidos alterados y adyacentes. El material para la investigación se coloca en un recipiente herméticamente cerrado con una solución acuosa de formaldehído al 8-10%. El recipiente se etiqueta y se envía al laboratorio con un documento adjunto.

1.5. Para el examen citológico, se preparan frotis de sangre fresca y preparaciones de impresión de órganos hematopoyéticos y de otro tipo obtenidos por biopsia o sacrificio del animal. Para hacer esto, utilizando una aguja de punción, observando las reglas de asepsia y antisepsia, toman muestras de la médula ósea (hueso del pecho) y los ganglios linfáticos de los animales y preparan frotis en portaobjetos de vidrio. Las preparaciones de impresión se preparan tocando la superficie cortada de una pieza de órgano con un portaobjetos de vidrio.

1.6. Para el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas, se utilizan muestras de sangre fresca, pero no antes de un día después de la toma. Los sueros sanguíneos insuficientemente clarificados se centrifugan. Durante el almacenamiento a largo plazo de muestras, el suero sanguíneo se separa del coágulo de sangre. Si se almacenan las muestras a más de 4 °C, los sueros son aptos para la investigación en un plazo de 10 días. Cuando se almacena suero a una temperatura de menos 20 ° C, la vida útil del suero para investigación es de 1 año. Los sueros descompuestos y altamente hemolizados no son adecuados para la investigación.

(Introducido adicionalmente, Rev. N 1).

2. MÉTODOS DE INVESTIGACIÓN

2.1. método hematológico

La esencia del método radica en la detección en la sangre periférica de un mayor número de leucocitos, principalmente de la serie linfoide, y células poco diferenciadas (ancestrales, prolinfocitos, linfoblastos), así como células polimórficas atípicas. órganos hematopoyéticos.

2.1.1. Equipos, materiales y reactivos

2.1.1.1. Para uso de investigación:

contador de partículas electrónico;

diluidor automático;

contador para contar fórmula de leucocitos;

filtro de vidrio microporoso según GOST 23932-79 *;
________________
GOST 23932-90. - Nota del fabricante de la base de datos.

microscopios biológicos de la marca MBI o MRB según GOST 8284-78;

pipetas con una capacidad de 1, 2, 5, 10 cm según GOST 20292-74 *;
________________
* En el territorio Federación Rusa GOST 29169-91, GOST 29227-91 - GOST 29229-91, GOST 29251-91 - GOST 29253-91 son válidos, en adelante en el texto. - Nota del fabricante de la base de datos.

micropipetas con una capacidad de 0,02; 0,03; 0,05; 0,1; 0,2 cm según GOST 20292-74;

cilindros de medición con una capacidad de 50, 100, 500, 1000 cm3 de acuerdo con GOST 20292-74;

balanzas de laboratorio;

portaobjetos de vidrio según GOST 9284-75;

una cámara para contar glóbulos (una cámara de Goryaev, Burker u otras marcas);

aparatos para fijar y colorear frotis en portaobjetos de vidrio;

aceite de inmersión según GOST 13739-78;

solución colorante Giemsa;

solución de tintura Main-Grunwald;

solución de Turk;

alcohol metílico según GOST 6995-77;

xileno según GOST 9949-76;

cloruro de sodio según GOST 4233-77;

formalina técnica (formaldehído) según GOST 1625-75 *;
________________
* En el territorio de la Federación Rusa, se aplica GOST 1625-89. - Nota del fabricante de la base de datos.

solución electrolítica isotónica; preparado de la siguiente manera: tomar una solución de cloruro de sodio al 0,9%, filtrarla a través de un filtro microporoso (filtro G-4), controlar el pH con papel indicador. Al agregar tampón Tris, el pH se ajusta a 6-7.2. Cuando utilice la solución durante más de 2 horas, agregue 5 ml de una solución de formaldehído al 35 % por cada 1000 ml de electrolito.

Para la eritrocitólisis se utiliza una solución acuosa de saponina al 1%, mezclándola en una proporción de 1000:5 con una solución de formaldehído al 35%. La solución sin espuma se filtra inmediatamente después de la preparación;

solución estabilizadora; preparado como sigue: tomar 50 g de sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético, 50 cm3 de solución de formaldehído al 35%, 2 cm3 de solución de azul de metileno al 1% y 50 cm3 de agua destilada. La solución se calienta hasta su completa disolución y se filtra a través de un filtro de vidrio microporoso.

2.1.2. Realización de investigaciones

El estudio es realizado por:

contar el número de leucocitos utilizando un contador de partículas electrónico;

contar el número de leucocitos en la cámara de recuento;

recuento de leucocitos diferenciados.

2.1.2.1. El recuento del número de leucocitos mediante un contador electrónico de partículas se realiza de acuerdo con las normas adjuntas a cada aparato.

2.1.2.2. El recuento del número de leucocitos en la cámara de recuento se realiza de acuerdo con sus parámetros técnicos.

2.1.2.3. Se lleva a cabo un recuento diferenciado de leucocitos (determinación de la fórmula de leucocitos) en un frotis teñido bajo un microscopio con una lente de inmersión con un aumento de 90. Al mismo tiempo, se cuentan al menos 100 células, viendo uniformemente todas las partes del frotis. Se realiza un recuento diferencial de leucocitos si el número establecido de leucocitos en 1 cm de sangre supera los indicadores indicados para animales sanos, teniendo en cuenta su edad según la "clave de leucemia".

Los resultados de los estudios se evalúan según la "clave de leucemia" de acuerdo con los requisitos indicados en la tabla.

2.1.3. Procesamiento de resultados

Si el número de leucocitos en el animal está por debajo del número indicado en la tabla, el resultado del estudio de leucemia se considera negativo (-).

Si el número de linfocitos está dentro de los límites indicados en la tabla, el resultado se evalúa como sospechoso (+), si es inferior al indicador más bajo de la tabla, el resultado se evalúa como negativo (-). Si la cantidad de linfocitos en 1 cm de sangre es mayor que la indicada en la tabla, el resultado se evalúa como positivo (+).

Los animales sospechosos de tener leucemia se someten a dos o tres exámenes con un intervalo de 30 días entre ellos. Si en el segundo y tercer investigación adicional se obtienen resultados negativos, dichos animales son reconocidos como sanos, y cuando se establecen cambios en la sangre característicos de pacientes o sospechosos de tener alguna enfermedad, los animales son considerados enfermos.

2.2. método citológico

La esencia del método radica en la detección en la sangre periférica y órganos hematopoyéticos (médula ósea roja, ganglios linfáticos, bazo) de la acumulación de morfológicamente alterados, predominantemente inmaduros (ancestrales, poco diferenciados, linfoblastos, prolinfocitos, mieloblastos, etc.) o células patológicas (tumores).

2.2.1. Equipos y reactivos

2.2.1.1. Para la investigación se utilizan los equipos y reactivos especificados en la cláusula 2.1.1 y adicionalmente:

aguja para punción de órganos hematopoyéticos;

jeringa con una capacidad de 20 cm3 según GOST 18137-77;

bisturí según GOST 21240-77 *;
________________
* En el territorio de la Federación Rusa, se aplica GOST 21240-89. - Nota del fabricante de la base de datos.

tijeras;

citrato de sodio según GOST 22280-76, solución al 3,8%;

GOST 5962-67 *.
________________
* En el territorio de la Federación Rusa, se aplica GOST R 51652-2000, en lo sucesivo en el texto. - Nota del fabricante de la base de datos.

2.2.2. Realización de investigaciones

2.2.2.1. Frotis preparados en portaobjetos de vidrio a partir de sangre fresca, puntos de la médula ósea hematopoyética, bazo, ganglios linfáticos y otros órganos y tumores, así como preparaciones de impresión preparadas a partir de material tomado durante una biopsia, o de partes de órganos en la autopsia del animal, se fijan en alcohol metílico, se tiñen según Pappenheim y se examinan al microscopio con un objetivo de inmersión con un aumento de 90.

2.2.3. Procesamiento de resultados

2.2.3.1. El resultado del estudio se considera positivo:

para leucemia: cuando se detecta en frotis de sangre más del 3% y en los órganos hematopoyéticos más del 10% de células ancestrales poco diferenciadas (prolinfocitos, linfoblastos, mieloblastos) o células tumorales con valores normales del número absoluto de linfocitos;

para una forma poco diferenciada de leucemia, cuando se detecta un mayor porcentaje de células ancestrales poco diferenciadas de macro, meso y microgeneración de linfoblastos y prolinfocitos en hemogramas y citogramas de órganos hematopoyéticos;

para la leucemia linfoide: si se observa un aumento en el número de células de la serie linfoide de diversos grados de madurez (prolinfocitos y linfoblastos) en frotis de sangre, bazo, ganglios linfáticos, médula ósea (metaplasia linfoide) y otros órganos;

en hematosarcoma (linfosarcomas de varios grados de madurez) - si prevalecen células atípicas (tumor) en hemogramas y citogramas, que difieren de las normales en forma, tamaño, estructura y son idénticas a las células que forman tumores;

en linfogranulomatosis - cuando la linfocitosis se establece en frotis de sangre en preparaciones de ganglios linfáticos - hiperplasia linfoide, con la detección de eosinófilos, neutrófilos, basófilos, fibroblastos, células plasmáticas, atípicas, indiferenciadas y gigantes de Berezovsky-Sternberg en ellas.

2.3. Método serológico

La esencia del método radica en la detección de anticuerpos precipitantes contra los antígenos del oncornavirus tipo C bovino en el suero sanguíneo de los animales mediante la reacción de inmunodifusión (RID).

2.3.1. Equipos y materiales

2.3.1.1. Para uso de investigación:

placas de Petri biológicas;

medidor de pH;

punzón para hacer agujeros;

un baño de agua que proporcione una temperatura de calentamiento de 50 °C o más;

solución tampón, pH 7,2;

agar purificado según GOST 17206-71;

antígeno dual, que consta de antígenos de glicoproteína (gp) y polipéptido (p24) del oncornavirus tipo C en bovino.

El antígeno se almacena a menos 20°C o se liofiliza.

Antes de establecer la RID, el antígeno preparado se compara con un antígeno estándar cuya especificidad y actividad se analizan;

suero positivo con anticuerpos precipitantes con un título de anticuerpos contra el antígeno GP de 1:16 a 1:32 en RID. El suero se obtiene de bovinos u ovinos infectados de forma natural o experimental;

control de suero negativo.

2.3.2. preparación del estudio

2.3.2.1. Se aplica una solución de agar al 0,8% fundida en una capa uniforme de 2-3 mm de espesor sobre vasos planos, placas de Petri o placas. Después de que el agar se haya solidificado, se hacen pozos con un sello especial, evitando la formación de grietas entre ellos y el desprendimiento del agar del fondo del plato. Si se acumula líquido en los pocillos antes de que se establezca la reacción, entonces se elimina. Los pozos para inmunodifusión inmediatamente después de su formación se instilan con agar para evitar la penetración de antígeno o suero debajo de la capa de agar.

2.3.3. Realización de investigaciones

2.3.3.1. El antígeno y el suero de control contribuyen a los pozos de acuerdo con el dibujo. El antígeno (A) se introduce en el pozo central, dos pozos diametralmente opuestos se llenan con suero de control (CS). Los cuatro pocillos periféricos restantes (1, 2, 3, 4) se llenan con sueros de prueba. El punto con respecto al cual se numeran los pozos con los sueros probados es la marca en el gel de la parte superior del plato.

Esquema para establecer y evaluar la reacción de inmunodifusión en gel de agar (RID)

1 - suero que reacciona negativamente; 2 - suero que reacciona positivamente; 3 - suero de reacción débilmente positiva; 4 - suero que reacciona positivamente con una segunda línea de precipitación; 5 - suero que reacciona fuertemente positivamente; 6 - suero que reacciona positivamente con una línea de precipitación no específica; 7 - suero que reacciona negativamente con una línea de precipitación no específica; 8 - suero que reacciona negativamente con una zona de opalescencia; A - antígeno de oncornavirus en bovino; CS - suero control contra antígeno glicoproteico de oncornavirus bovino

Se utilizan pipetas estériles para introducir componentes en los pocillos, al tiempo que se evita la contaminación de reactivos y sueros con bacterias y otras sustancias. Se llenan los pocillos hasta que desaparece el menisco. Después de llenar todos los pozos, los platos se cierran con tapas y se almacenan en una cámara húmeda a una temperatura de 18 a 27 °C.


La reacción se tiene en cuenta después de 48-72 horas.Los vasos se ven contra un fondo oscuro, dirigiendo el haz enfocado del iluminador al fondo del vaso en un ángulo de 30-45°. La reacción se evalúa frente a la línea de control del precipitado. Si está ausente o se expresa débilmente, la reacción se considera un fracaso y debe repetirse. La línea de precipitación formada por el suero de control y el antígeno debe ser clara, recta, cuyos extremos deben alcanzar los pocillos con los sueros analizados y estar situada a la misma distancia de los pocillos (A y CS).

2.3.4. Procesamiento de resultados

2.3.4.1. Según la presencia y el título de anticuerpos específicos contra los antígenos de oncornavirus, los sueros se clasifican en positivos, negativos y de dudosa reacción.

El suero se considera que reacciona positivamente:

si se forma una banda de precipitación entre los pozos con antígeno y el suero de prueba, que se conecta a la línea de control, coloque 2 (ver dibujo);

si no hay línea de precipitación entre los pozos con suero y antígeno, pero la línea de control forma una curva cerca del pozo con el suero de prueba, dirigida hacia el pozo con antígeno, posición 3 ;

si se forma una segunda línea de precipitación, que se encuentra más cerca del pozo con el suero de prueba e indica la presencia en el suero de anticuerpos (p24) que se precipitan contra el segundo antígeno del oncornavirus bovino tipo C, - posición 4 ;

si la línea de control se acorta significativamente en el lado del pozo con el suero de prueba y tiene una curva borrosa hacia el pozo con el antígeno o está ubicada muy cerca del pozo con el antígeno - posición 5 ;

Nota. Se forma una línea más clara si dicho suero se diluye en una proporción de 1:4 o 1:8;

si se ha formado una línea de precipitación no específica - posición 6 .

El suero se considera que reacciona negativamente:

si la línea de precipitación de control continúa hacia el pozo con el suero de prueba sin curvas o con una ligera curva hacia el pozo con el suero de control - posición 1 ;

si se ha formado una línea de precipitación no específica - posición 7 ; mientras se cruza con la línea de control.

El suero se considera dudoso reactivo si la línea de precipitación de control es poco visible debido a la presencia de una línea de precipitación no específica. En este caso, se extrae sangre nuevamente de este animal y se analiza el suero.

Si se registró una reacción dudosa dos veces, con un intervalo de 1 mes entre estudios, el suero se considera que reacciona positivamente.

Una reacción ambigua puede deberse a la fuga de suero de reacción positiva debajo de la capa de agar al pocillo con suero de reacción negativa o a la contaminación de la muestra de suero de reacción negativa - positiva. En este caso, se repite el estudio.

2.4. método histológico

La esencia del método radica en la detección de crecimientos animales (proliferación) en pacientes con leucemia que violaron la maduración y diferenciación normales de las células hematopoyéticas, tanto en los órganos hematopoyéticos (médula ósea, bazo, ganglios linfáticos) como en el tejido conectivo. de otros órganos.

2.4.1. Equipos, materiales y reactivos

2.4.1.1. Para uso de investigación:

micrótomo para secciones de parafina;

microtomo para cortes de celoidina:

microscopio según GOST 8284-78;

portaobjetos y cubreobjetos según GOST 9284-75;

bloques de madera u otro material;

termostato que proporciona control de temperatura de 80 °С;

parafina con un punto de fusión de 58 ° C;

formaldehído 8-10%, solución acuosa neutra;

alcohol etílico rectificado según GOST 5962-67;

celoidina: soluciones al 2-3, 4-5 y 8-10% en el patrón con éter sulfato en una proporción de 1:1;

cloroformo según GOST 20015-74 *;
________________
* En el territorio de la Federación Rusa, se aplica GOST 20015-88. - Nota del fabricante de la base de datos.

bálsamo de abeto según GOST 2290-76;

xileno según GOST 9949-76;

ácido clorhídrico según GOST 3118-77, solución de alcohol al 1%;

eosina, solución al 0,5 % o hematoxilina, solución al 10 %;

ácido nítrico según GOST 4461-77, solución al 5%;

sulfato de éter;

carbol-xileno.

2.4.2. preparación del estudio

2.4.2.1. Las muestras seleccionadas de órganos se fijan en formaldehído durante 48 horas y luego se lavan durante 10-24 horas en agua corriente. Luego, se cortan placas de 3 μm de espesor y 1,5-2,5 cm de área de las piezas de los órganos, que se mantienen secuencialmente en alcohol etílico con una concentración de 70%, 80%, 96%.

En alcohol de cada concentración indicada, la deshidratación dura 24 horas a una temperatura de 15 a 20 °C.

2.4.2.2. Para preparar y teñir secciones de celoidina, se incrustan en celoidina piezas deshidratadas de material patológico. Los pedazos de órganos extraídos de la solución de celoidina se pegan sobre bloques de madera u otro material, se secan y se colocan en un frasco con alcohol al 70%. Se preparan secciones de celoidina de 5 a 10 µm de espesor a partir de piezas de órganos pegadas en bloques y teñidas con hematoxilina-eosina u otros colorantes, encerradas en un bálsamo y cubiertas con un cubreobjetos. En lugar de celoidina, se pueden preparar secciones de parafina.

2.4.2.3. Para la preparación y tinción de secciones de parafina, se incluyen en parafina partes de órganos deshidratados de acuerdo con la cláusula 2.4.2.1. Se preparan secciones de 3-5 micras de espesor a partir de bloques de parafina utilizando un micrótomo de parafina, que se colocan en agua tibia para su fusión. Luego, las secciones se transfieren a portaobjetos de vidrio, se secan en un termostato a una temperatura de 37-40 ° C y se tiñen con hematoxilina-eosina u otro tinte.

2.4.3. Realización de investigaciones

Las secciones preparadas se observan bajo un microscopio con luz natural o artificial. Con un ocular con un aumento de 10 y una lente con un aumento de 10, se determina la estructura general de los órganos en estudio, teniendo en cuenta los cambios en el tejido en sus secciones individuales como resultado de procesos de infiltración (el estado del folículos, zonas interfoliculares en el bazo y ganglios linfáticos, presencia de células en la luz de los vasos, parénquima e intersticio de órganos, etc.).

Con un ocular de 20 aumentos y una lente de 40 aumentos, se revelan los detalles de los cambios, prestando atención a la naturaleza de las células proliferantes (tipo, grado de diferenciación, madurez) y la intensidad (gravedad) de cambios histopatológicos. Al mismo tiempo, se determina la presencia de enfermedades concomitantes de carácter no leucémico para realizar un diagnóstico diferencial o signos que agraven la enfermedad de base (edema, distrofia, necrosis, hemorragia, etc. en los músculos esqueléticos, cardíacos, hígado, riñones y otros órganos).

2.4.4. Procesamiento de resultados

Los resultados del análisis se consideran positivos:

en la leucemia linfoide - si se observa un borrado completo del patrón en el bazo y los ganglios linfáticos debido a la infiltración difusa por células de la serie linfoide, entre las que se detectan principalmente linfocitos maduros, prolinfocitos, linfoblastos se encuentran en menor cantidad, entre los cuales a veces se notan las jaulas reticulares;

en la médula ósea, el estroma se conserva, se revela un adelgazamiento significativo y la reabsorción de los haces, los grupos de linfocitos se pueden ubicar en forma de focos o de forma difusa, llenando todos los espacios de la médula ósea (metaplasia linfoide); en los riñones, hígado, corazón, abomaso y otros órganos se suelen detectar acúmulos de linfocitos en la luz de los capilares e infiltración de células linfoides del tejido intersticial;

para la leucemia poco diferenciada (hemocitoblastosis) - si se observan proliferaciones focales y difusas en la médula ósea, el bazo, los ganglios linfáticos y otros órganos, cuya composición celular está representada por células indiferenciadas o poco diferenciadas como el hemocitoblasto (célula ancestral);

sobre leucemia mieloide- si se encuentran en el bazo elementos inmaduros de la serie granulocítica, megacariocitos, células de tipo hemocitoblástico, células reticulares, fragmentación y descomposición de las fibras argirofílicas, acumulaciones de células maduras e inmaduras de la serie granulocítica en la médula ósea; en los ganglios linfáticos, hígado, riñones, pulmones y otros órganos se observan crecimientos focales difusos de elementos mieloides;

en linfosarcoma (pobremente diferenciado linfoblástico, linfocítico, histiocítico) - si en los ganglios linfáticos, órganos digestivos, reproducción, cardíaco, músculo esquelético, otros órganos y tejidos notan el crecimiento de tumores a partir de células indiferenciadas o poco diferenciadas del tipo linfoide (el bazo y la médula ósea no se modifican);

para linfogranulomatosis: si se detecta hiperplasia de células linfoides o proliferación de células polimórficas, cambios escleróticos y necrosis en los ganglios linfáticos, el bazo, el hígado y otros órganos; entre las células polimórficas de tipo reticular se detectan células gigantes multinucleares de tipo Berezovsky-Sternberg, células plasmáticas, eosinófilos y neutrófilos en diversos grados de madurez, así como fibroblastos.

2.5. método ELISA

La esencia del método radica en la adsorción de anticuerpos antivirales por el antígeno en la superficie de la placa durante la incubación del suero de prueba con anticuerpos anti-especie marcados con la enzima, seguido de la modificación del sustrato.

2.5.1. Equipos, materiales, reactivos

Fotómetro monocanal o multicanal con un límite mínimo de lectura de 1,5 unidades de extinción y registro automático de resultados.

Equipos de lavado de planchas automático o semiautomático.

El termostato que abastece la temperatura (37±0,5) °C.

Micropipetas monocanal automáticas.

Micropipetas automáticas de ocho o doce canales.

Placas de microtitulación de plástico con 96 pocillos.

Vasos químicos con una capacidad de 500 cm según GOST 1770-74.
.

Pipetas graduadas con una capacidad de 1 y 10 cm3 de acuerdo con GOST 20292-71.

La solución tampón es de carbonato con un pH de 8,8-9,6.

Solución tampón de fosfato fisiológico con pH 7,2-7,4 que contiene tween 20 u 80 (solución de lavado).

Disolvente: una solución de lavado que contiene una proteína inerte.

Antígeno BLV para ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) preparado a partir del líquido de cultivo de un cultivo de células de bazo de cordero embrionario (FLS) o riñón de cordero embrionario (FLK) infectado con FLV que contiene componentes del virus GP 51 y p 24, diluido en un solución tampón de carbonato.

Suero control positivo, diluido en disolvente.

Suero control negativo, que es una mezcla de al menos 10 sueros bovinos negativos, diluidos en un solvente.

Conjugado: anticuerpos contra inmunoglobulinas bovinas, marcados con peroxidasa u otra enzima, diluidos en un solvente.

Prueba de suero de sangre bovina.

sustrato para una reacción enzimática.

2.5.2. Realización de investigaciones

Se añaden 0,05 o 0,1 o 0,2 ml de la solución de antígeno a los pocillos de la placa de microtitulación (panel). La placa se cierra y se incuba durante 18 horas en una cámara húmeda a una temperatura de más 4 °C.

Después de eso, la placa se lava cuatro veces con solución tampón fisiológica de fosfato para que los pocillos se llenen por completo, se incuba durante 3 minutos y luego se retira cuidadosamente la solución de los pocillos.

Preparar diluciones iniciales de los sueros de prueba.

Los sueros de prueba en la dilución inicial se agregan en paralelo a dos pocillos adyacentes de la placa de microtitulación en la cantidad de 0,05 o 0,1 o 0,2 cm 3. De la misma manera, se agregan a cada placa sueros de control positivos y negativos diluidos. En cada placa, deje algunos pocillos llenos solo con disolvente (sin suero). El número de pocillos de disolvente en la placa está determinado por el diseño del fotómetro y se utiliza para establecer la posición cero de la escala del instrumento.

La placa se cierra y se incuba a una temperatura de 20 a 37 °C en una cámara húmeda durante 60-120 minutos.



Se añaden 0,05 o 0,1 o 0,2 ml de la solución de conjugado a los pocillos, se cierran las placas y se incuban a una temperatura de 20 a 37 °C en cámara húmeda durante 60-120 minutos.

Lave la placa cuatro veces con la solución de lavado.

Se añaden 0,05 o 0,1 o 0,2 cm de la solución de sustrato a cada pocillo y se incuba a una temperatura de 20 a 37 °C durante 50-60 minutos. Si es necesario, se agrega una solución tampón de carbonato a los pocillos para detener la reacción y se mide la densidad óptica en cada pocillo en un fotómetro a una longitud de onda característica del sustrato seleccionado.

2.5.3. Procesamiento de resultados

El resultado se considera positivo si la densidad óptica de la muestra de prueba en ambos pocillos es dos o más veces la media aritmética de la densidad óptica de la muestra negativa en la dilución apropiada.

2.5-2.5.3. (Introducido adicionalmente, Rev. N 1).

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M.: Editorial de normas, 1982



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