مظهر من مظاهر تفاعل التراص هو. تفاعل التراص (RA) ، آلية وطرق الإعداد. المكونات وكيفية الحصول عليها. استخدام التهاب المفاصل الروماتويدي في تشخيص الأمراض المعدية. الأنواع الممكنة من التراص في تحديد فصيلة الدم
يعتمد تفاعل التراص على التفاعل المحدد للأجسام المضادة (agglutinins) مع خلايا ميكروبية كاملة أو خلايا أخرى. نتيجة لهذا التفاعل ، تتشكل الجزيئات-التكتلات التي تترسب (تراص). يمكن أن تشارك البكتيريا ، والأوليات ، والفطريات ، والخمائر ، والريكتسيا ، وخلايا الدم الحمراء والخلايا الأخرى ، الحية والمقتولة ، في تفاعل التراص. يستمر التفاعل على مرحلتين: الأولى هي التركيبة المحددة لمولد الضد والجسم المضاد ، والثانية غير محددة ، أي تكوين تراص مرئي. يحدث الترسيب المتراكم في وجود الإلكتروليتات ، مثل كلوريد الصوديوم. تبقى الكائنات الحية الدقيقة في التراص على قيد الحياة ، لكنها تفقد قدرتها على الحركة.
يستخدم تفاعل التراص على نطاق واسع للتشخيص المصلي المنطقي. أمراض معديةوتحديد التركيب المستضدي للميكروبات المعزولة. لتأسيس التركيب المستضدي لمسببات الأمراض المعزولة من جسم المريض أو الناقل ، يتم استخدام مصل مناعي محدد تم الحصول عليه عن طريق تحصين الحيوانات (أرنب ، حمار ، كبش) مع بعض الكائنات الحية الدقيقة. يتم التعرف على الميكروب في تفاعل التراص على الزجاج مع الأمصال الممتصة أو أحادية المستقبلات أو في أنابيب الاختبار مع أمصال تراص محددة. تحتوي الأمصال الممتزة على أجسام مضادة فقط لمولدات المضادات الخاصة بميكروب معين ، وتحتوي الأمصال أحادية المستقبلات على أجسام مضادة لمستضد واحد محدد من العامل الممرض.
تحتوي الأمصال على أجسام مضادة لجميع المستضدات الخاصة بميكروب معين.
انتماء الثقافة المعزولة للكائنات الحية الدقيقة إلى هذه الأنواعيتم تحديده عن طريق التراص مع مصل معروف لعيار الجسم المضاد الموضح على ملصق أمبولة المصل. يعتبر عيار الأجسام المضادة في الدم هو التخفيف الأخير له ، حيث لا يزال يتم ملاحظة تراص ثقافة الميكروبات المستخدمة لتحصين الحيوان. عادة ما يتم استخدام الأمصال الممتزة والمستقبلات الأحادية غير المخففة في تفاعل التراص على الزجاج.
عند تحديد وجود الأجسام المضادة في مصل دم المريض ، يتم تخفيفه بمحلول متساوي التوتر من كلوريد الصوديوم ، بدءًا من التخفيف من 1: 50 إلى 1: 800 أو أكثر. يتم إضافة تعليق الميكروبات الحية أو الميتة إلى كل تخفيف. تسمى المستحضرات التي تحتوي على ميكروبات تقتل بالحرارة أو الفورمالين بالتشخيصات. التشخيصات التي تم الحصول عليها عن طريق تسخين مزارع الكائنات الحية الدقيقة تحتوي فقط على مستضدات جسدية. عند استخدام الفورمالين فقط ، يتم الحفاظ على المستضدات السوطية أيضًا في الميكروبات.
في حالة وجود أجسام مضادة في دم المريض ، فإن التشخيص المأخوذ في التفاعل يلتصق ببعضه البعض ويتشكل راسب (تراص) في أنبوبين اختبار. في هذه الحالة ، تعتبر نتائج تفاعل التراص إيجابية. في أنبوب التحكم ، حيث يتم إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر والتشخيص ، يجب أن يكون تعليق الميكروبات متجانسًا (تفاعل تراص سلبي).
يتم حساب نتائج تفاعل التراص في بعض الأمراض ، مثل داء البريميات ، فقط مجهريًا في مجال رؤية المجهر المظلم (التراص الدقيق). يعتمد التشخيص المصلي للمرض مرض تشخيصي. عادة ما يتوافق مع تخفيف مصل بنسبة 1: 100 أو 1: 200.
يمكن اكتشاف الأجسام المضادة في مصل دم المريض باستخدام تفاعل التراص في حالات حمى التيفود وحمى نظير التيفوئيد (تفاعل فيدال) ، الحمى المالطية (تفاعل رايت) ، التولاريميا ، إلخ.
رد فعل كاستيلاني. في بعض الأمراض المعدية أو التحصين بالكائنات الحية الدقيقة التي تحتوي على مستضدات جماعية في تركيبها ، بالإضافة إلى الأجسام المضادة المحددة لهذا النوع ، تظهر أيضًا الأجسام المضادة الجماعية في مصل الدم. في هذه الحالة ، سوف تتراكم الأنواع البكتيرية ذات الصلة بالمصل الناتج.
اقترح Castellani طريقة لامتصاص الأجسام المضادة الجماعية من الأمصال المناعية ، بناءً على إزالتها بمساعدة الكائنات الحية الدقيقة من الأنواع ذات الصلة التي تحتوي على مستضدات جماعية ، ولكنها تفتقر إلى مستضدات محددة. تمتاز زراعة هذه الكائنات الدقيقة ، المضافة إلى المصل ، بأجسام مضادة جماعية غير محددة ، وبعد إزالة معقد الأجسام المضادة للمستضد عن طريق الطرد المركزي ، تبقى الغلوبولين المناعي المحدد فقط في المصل. يمكن استخدام الأمصال المعالجة وفقًا لطريقة Castellani في تفاعل التراص على أنها شديدة التحديد.
ردود الفعل المناعية. استخدام الاستجابات المناعية في تشخيص الأمراض المعدية.
خطة:
أنواع ردود الفعل المناعية.
شروط إجراء التفاعلات المصلية.
متطلبات المصل.
مفهوم النتائج الإيجابية والسلبية.
المحتوى الرئيسي:
أنواع ردود الفعل المناعية.
رد فعل مناعي – هذا هو تفاعل مستضد مع جسم مضاد ، والذي يتم تحديده من خلال التفاعل المحدد للمراكز النشطة للجسم المضاد (نظير) مع حواتم المستضد.
التصنيف العام ردود الفعل المناعية:
التفاعلات المصلية - التفاعلات بين المستضدات (Ag) والأجسام المضادة (Ig)
في المختبر ;
ردود الفعل الخلوية بمشاركة الخلايا المناعية.
اختبارات الحساسية - الكشف عن فرط الحساسية.
التفاعلات المصلية: 1) التعريف ، 2) المراحل ، 3) تحديد الهدف ، 4) التصنيف العام.
1) التعريف
الطرق المصليةالبحث (من مصل خطي - مصل وشعارات - تعليم) باستخدام تفاعل مستضد - جسم مضاد.
2) مراحل
مرحلتان من التفاعل:
أنا. محدد (مرئي) - يأتي بسرعة ، تتحد الأجسام المضادة مع المستضدات المقابلة لها. تتفاعل مجموعات محددة من المستضدات (AG) ومراكز الأجسام المضادة النشطة (AT) في هذه المرحلة.
القوى المشاركة في تشكيل مجمع AG + AT هي:
كولوم.
فان دير فال
روابط هيدروجينية.
لا توجد تغييرات مرئية في هذه المرحلة. تحت المجهر الإلكتروني المعقد AG + AT في شكل شعرية.
ثانيًا. غير محدد - يأتي ببطء ، يتفاعل مركب الجسم المضاد المكون مع عامل إضافي غير محدد للبيئة التي يحدث فيها التفاعل ، وهذا مرئي للعين - الالتصاق ، الذوبان ، ترسيب الرقائق ، إلخ. في وجود المنحل بالكهرباء ، تنخفض الشحنة ، تقل القابلية للذوبان ، تتشكل التكتلات المرئية (التراص).
3) تحديد الأهداف :
أ) للتعرف على المستضد (مصل الجسم المضاد المعروف بالتشخيص):
التحديد المصلي (تحديد الأنواع) ؛
التنميط المصلي (تحديد السيروفار) - تحديد السلالة ؛
في المواد المرضية (التشخيص السريع) ؛
في الثقافة النقية:
ب) للكشف عن الأجسام المضادة (Ig) (مستضد معروف - تشخيصي):
الوجود (ردود الفعل النوعية) ؛
الكمية (زيادة العيار - طريقة "الأمصال المزدوجة").
4) التصنيف العام التفاعلات المصلية :
أ) بسيط (مكونان: Ag + Ig):
تفاعلات تراص RA (مع مستضد عضلي) ؛
تفاعلات ترسيب RP (مع مستضد قابل للذوبان) ؛
ب) مركب (3 مكونات: Ag + Ig + C) ؛
ج) استخدام الملصق.
متغيرات تفاعل التراص والترسيب
تفاعل التراص :
تفاعل التراص (RA) هو تفاعل مناعي لتفاعل تعليق AG (كريات الدم الحمراء ، بكتيريا) مع AT في محلول فسيولوجي.
أثناء التراص ، تلتصق جسيمات AT معًا بتكوين راسب ندف.
تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA) هو نوع من تفاعل التراص يتم فيه استخدام الجسم المضاد أو تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية (يتم امتصاص خلايا الدم الحمراء مع AT أو AG على سطحها).
تعمل كريات الدم الحمراء في هذا التفاعل كناقلات سلبية.
يتم تقييم نتائج RPGA على النحو التالي:
- في رد فعل إيجابي تغطي كريات الدم الحمراء الملصقة بشكل سلبي الجزء السفلي من الفتحة على شكل حرف U أو V بطبقة متساوية ذات حواف متعرجة ("مظلة") ؛
- في رد فعل عنيف (نقص التراص) ، تتراكم كريات الدم الحمراء في التجويف المركزي للفتحة ، وتشكل "زرًا" مضغوطًا بحواف محددة بشكل حاد.
يستخدم اختبار تثبيط التراص الدموي (HITA) في تشخيص الالتهابات الفيروسية. تحتوي بعض الفيروسات على بروتين هيماجلوتينين على سطحها ، والذي يلتصق خلايا الدم الحمراء معًا. تؤدي إضافة أجسام مضادة محددة مضادة للفيروسات إلى حجب الهيماجلوتينين الفيروسي - لا يوجد تراص دموي.
يتم استخدام تفاعل التراص الدموي غير المباشر (RIHA) ، أو تفاعل كومبس ، لتحديد الأجسام المضادة غير المكتملة. إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (AT ضد Ig البشري) يعزز نتائج التفاعل. يستخدم RNGA في تحديد عامل Rh.
لإعداد تفاعل التراص (RA) ، يلزم وجود ثلاثة مكونات:
1) مولد المضاد (agglutinogen) AG ؛
2) جسم مضاد(agglutinin) AT ؛
3)
بالكهرباء
(محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).
Ag + AT + المنحل بالكهرباء = تراص
التراص (من الالتصاق اللاتيني - اللصق) - لصق الكريات (البكتيريا ، كريات الدم الحمراء ، إلخ) بالأجسام المضادة في وجود الإلكتروليتات - كلوريد الصوديوم.
يتجلى التهاب المفاصل الروماتويدي في شكل رقائق أو رواسب ، تتكون من كريات (على سبيل المثال ، بكتيريا ، كريات الدم الحمراء) ، "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة.
يستخدم RA من أجل:
تفاعل التراص المباشر للميكروبات (RA).
في هذا التفاعل ، تقوم الأجسام المضادة (agglutinins) مباشرة بتلصص المستضدات الجسدية (agglutinogens).
عادة ما يتم تمثيلهم بتعليق الكائنات الحية الدقيقة المعطلة (تفاعل التراص الميكروبي).
تستخدم لتحديد نوع الكائنات الحية الدقيقةالتراص التشخيصي القياسي مصل (المعروف في ).
الأكثر شيوعًا هي الصفيحة (الدلالة) والمنتشرة RA.
يتم وضع Lamellar RA على الزجاج. يتم استخدامه كطريقة معجلة لاكتشاف الأجسام المضادة أو تحديد الكائنات الحية الدقيقة.
عناصر:
1. مصل التراص التشخيصي القياسي (AT) ؛
2. اختبار الثقافة النقية من المريض.
3. محلول ملحي.
في الثقافة النقية المدروسة ، تكون المستضدات (AG) في شكل جسيمات (خلايا ميكروبية ، كريات الدم الحمراء ومستضدات جسمية أخرى) ، والتي تلتصق ببعضها البعض بواسطة الأجسام المضادة وترسب.
مثال:
انطلاق دلالي تفاعلات التراص (RA ) على الزجاج من أجل التعرف على بكتيريا المجموعة المعوية.
يتم تطبيق القطرات على شريحة زجاجية:
1
الزحار
;
2
- القطرة الثالثة: - تلوث المصل لمسببات الأمراضحمى التيفود
;
(1-2 مصل تشخيصي)
3
- أنا قطرة: - محلول ملحي(مراقبة).
يتم إضافة الثقافة النقية المختبرة للبكتيريا إلى كل قطرة. يقلب.
نتيجة
:
إيجابي
- وجود رقائق مصقولة ،
نفي
- لا رقائق متماسكة
استنتاج:البكتيريا المدروسة هي العوامل المسببة لحمى التيفود (تم تحديد المستضدات).
لتحديد الأجسام المضادة في مصل المريض (التشخيص المصلي) ، وهو معيار ميكروبيالتشخيص تحتوي على تعليقمشهور الميكروبات أو مستضداتهااي جي .
تحديد فصائل الدم لنظام ABO (تفاعل التراص الدموي (RHA)) - تراص كريات الدم الحمراء.
مكونات التفاعل:
1. AG (خلايا الدم الحمراء) يختبر الدم
2. ال (erythrotests - tsoliclones)
مجموعة Zoliclone:
كاشف تسوليكلون مضاد- A (وردي)
كاشف Tsoliklon anti-B (أزرق)
كاشف Zoliclone المضاد AB (عديم اللون)
3. المنحل بالكهرباء (محلول ملحي)
تقنية التعريف:
1
.
يتم تطبيق قطرة واحدة (0.1 مل) من تسوليكلون مضاد لـ A و B و AB (للتحكم) على آبار الجهاز اللوحي.
2.
يتم وضع قطرة صغيرة (0.05-0.01 مل) من دم الاختبار بجانب كل قطرة من الكاشف.
ثم يتم خلط قطرة من تسوليكلون مع قطرة دم بقضيب زجاجي نظيف.
3.
يتطور تفاعل التراص خلال الثواني 3-5 الأولى عندما تهتز اللوحة برفق.
تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار بعد 2.5 - 3 دقائق من خلط القطرات. من اليسار إلى اليمين في الآبار المضادة لـ A و B و Anti-AB.
النتيجة الإيجابية هي ظهور ترسبات حبيبية (تراص).
RA إيجابي (+)
سلبي - لا رواسب.
RA سلبي (-)
4.
تحليل النتائج.
ا(أنا) α β - لا تراص
أ(ثانيًا) β - تراص بمضاد A
ب(ثالثا) α - تراص بمضاد B
AB(رابعا) O - تراص بمضاد A مع مضاد B
تمثيل تخطيطي للتراص.
مستضدات AH على كريات الدم الحمراء (تم الكشف عنها) + الجسم المضادفي(تسوليكلون) مصل التشخيص
المحاسبة عن التراص في اللوحات
معادلة الترسيب:
تفاعل الترسيب هو رد فعل مناعي لتفاعل AG في حالة قابلة للذوبان مع AT في محلول ملحي.
أثناء هطول الأمطار ، يحدث تكوين معقد مناعي جزيئي كبير ، والذي يتجلى من خلال انتقال محلول غرواني شفاف إلى تعليق معتم ، أو راسب.
يجب أن تكون كمية كلا الكواشف بنسب محددة بدقة ، لأن زيادة أحدهما تقلل النتيجة.
يوجد طرق مختلفةإعداد تفاعل هطول الأمطار.
1. يتم وضع تفاعل ترسيب الحلقة في أنابيب ترسيب بقطر صغير. يضاف المصل المناعي إلى أنبوب الاختبار ويتم وضع مستضد قابل للذوبان في طبقات بعناية. يتم خلط AG و AT بسبب الحركة الحرارية للجزيئات ، ويتفاعلان. مع نتيجة إيجابية ، يتم تشكيل حلقة من الترسبات غير الشفافة عند حدود الحلين.
2. يتم تنفيذ تفاعل الانتشار المناعي المزدوج Ouchterlony في هلام أجار ، حيث يتم إضافة محلول AG أو محلول AT وفقًا للمخطط. ينتشر AG و AT في الهلام تجاه بعضهما البعض ، وإذا كان التفاعل إيجابيًا ، فقم بتكوين مجمعات مناعية ، مرئية كخطوط ترسيب.
معادلة الترسيب -هذا التشكيلوترسيب مركب مستضد جزيئي قابل للذوبان مع أجسام مضادة في شكل تعكر ، يسمى راسب. يتكون عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات مكافئة.
مكونات RA:
مصل الترسيب (المعروف باسم AT-precipitin) ؛
مصل الاختبار (غير معروف AG- المرسبات) ؛
بدني المحلول.
يتم وضع تفاعل الترسيب إما في أنابيب اختبار ضيقة خاصة (تفاعل ترسيب الحلقة) ، أو في أطباق بتري في المواد الهلامية ، وسائط المغذياتوإلخ.
رد فعل حلقة هطول الأمطار
بيان ومحاسبة نتائج التفاعلحلقة هطول الأمطارللكشف عن العوامل الممرضة الجمرة الخبيثة(تفاعل اسكولي).
انطلاق .
1. تُغلى مادة الاختبار (جلد ، صوف ، لباد ، شعيرات ، قماش ، لحم ، تراب ، براز حيوانات ، إلخ) في محلول ملحي لمدة 5-45 دقيقة. للحصول على مستخلص متساوي التوتر (مستخلص). منقي.
2. صب مصل الجمرة الخبيثة المترسب في أنبوب الاختبار.
3. ضع مادة الاختبار (المستخلص) عليها بعناية.
محاسبة .
في غضون 10 دقائق القادمة. على الحدود بين المصل والمستخلص ، في الحالات الإيجابية ، تظهر حلقة تعكر (ترسيب الحلقة). تفاعل أسكولي حساس ومحدد للغاية
بمساعدتها ، من الممكن التعرف بسرعة على المواد المصابة بالجمرة الخبيثة.
تفاعل الترسيب في أجار
بيان ومحاسبة النتائجتفاعلات هطول الأمطار أجارلتحديد سموم البكتيريا الوتدية (العوامل المسببة للخناق)
انطلاق
توضع على أجار الفوسفات والببتون في طبق بتري.
1. شريط من ورق الترشيح المعقم مبلل بهمصل مضاد للسموم.
2. بعد التجفيف ، على مسافة 1 سم من حافة الشريط ، تزرع لويحات بقطر 10 مممحاصيل معزولة.
في كوب واحد ، يمكنك أن تزرع من 3 إلى 10 محاصيل ، إحداها ،مراقبةيجب أن يكون معروفًاسموم.
توضع المحاصيل في منظم الحرارة.
محاسبة
يتم إجراء التحليل بعد 24-48-72 ساعة.
نتيجة إيجابية - (ثقافةسموم) - على مسافة ما من شريط الورق ينشأخطوط مترسبة, « سهام المحلاق"، والتي يمكن رؤيتها بوضوح في الضوء المنقول.
يوضح الشكل تفاعل الترسيب في أجار لتحديد سموم عصيات الخناق. الثقافات المتوسطة لم تشكل "هوائيات سهم" ، هذه ليست مسببات الأمراض السامة.
سلالات العامل المسبب للخناق يمكن أن تكون سامة (تنتج السموم الخارجية) وغير مسببة للسموم. يعتمد تكوين السموم الخارجية على وجود البكتيريا في نبتة تحمل الجين السام الذي يشفر تكوين السموم الخارجية.
في حالة المرض ، يتم اختبار جميع مسببات مرض الدفتيريا بحثًا عن السمية - إنتاج السموم الخارجية للخناق باستخدام تفاعل الترسيب في أجار
تفاعلات مصلية معقدة ( 3-مكون: Ag + Ig + C):
تفاعل التثبيت التكميلي (RSC).
يتم تنفيذ التفاعل على مرحلتين.
في المرحلة الأولى ، تتفاعل الأجسام المضادة مع AG وتكمل ؛ في المرحلة الثانية ، يضاف مؤشر - نظام الانحلالي (خليط من كريات الدم الحمراء ومصل مضاد لكريات الدم الحمراء).
مع نتيجة إيجابية ، في المرحلة الأولى ، تشكل AT معقدًا مناعيًا مع AG ، والذي يربط تكملة خليط التفاعل.
في هذه الحالة ، لا يتم تدمير كريات الدم الحمراء للنظام الانحلالي المضافة في المرحلة الثانية.
خلاف ذلك ، فإن المكمل غير منضم يسبب تحلل مؤشر خلايا الدم الحمراء.
يتطلب خمسة مكونات: AG ، AT والمكمل (النظام الأول) ، الكريات الحمراء الكبريتية والمصل الانحلالي (النظام الثاني) (الشكل 1).
يستمر التفاعل على مرحلتين (الشكل 3).
الطور الأول - تفاعل المستضد والأجسام المضادة مع المشاركة الإجبارية للمكمل.
ثانيا - تحديد نتائج التفاعل باستخدام جهاز انحلالي مؤشر (كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي). يحدث تدمير كريات الدم الحمراء بواسطة المصل الانحلالي فقط في حالة التعلق التكميلي بالجهاز الانحلالي. إذا تم امتصاص المكمل في وقت سابق على معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فلن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء (الشكل).
نتيجة التجربة
تقييم (الشكل 2) ، مع ملاحظة وجود أو عدم وجود انحلال الدم في جميع الأنابيب. يعتبر التفاعل إيجابيًا مع تأخير كامل في انحلال الدم ، عندما يكون السائل في أنبوب الاختبار عديم اللون وتستقر كريات الدم الحمراء في القاع ، سلبيًا - مع تحلل كامل لكريات الدم الحمراء ، عندما يكون السائل ملونًا بشكل مكثف (الدم "ورنيش") .
يتم تقدير درجة تأخير انحلال الدم اعتمادًا على كثافة لون السائل وكمية رواسب كرات الدم الحمراء في القاع (++++ ، +++ ، ++ ، +).
أرز. 4. بيان ونتيجة RSC.
استنتاج:تم الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم المدروس.
يسمح لك RSK باكتشاف الأجسام المضادة لأي سلالة من نفس النمط المصلي للفيروس.
القيمة التشخيصية هي:
زيادة عيار الجسم المضاد بمقدار أربعة أضعاف في الأمصال المزدوجة (أثناء وباء الأنفلونزا) ؛
زيادة مضاعفة في مصل الدم للمرضى الذين يعانون من صورة سريرية مميزة.
ردود الفعل التسمية :
هذه الأساليب حساسة للغاية. تستخدم الأصباغ والنظائر المشعة والإنزيمات وما إلى ذلك كتسميات للمستضدات أو الأجسام المضادة.
RIF - تفاعل التألق المناعي
يعتمد تفاعل التألق المناعي على الإشارة الضوئية لمركب الجسم المضاد للمستضد
مقايسة الممتز المناعي المرتبط.
معاصر البحوث المخبرية، يتم خلالها البحث عن أجسام مضادة معينة في الدم أو مستضدات لأمراض معينة من أجل تحديد ليس فقط المسببات ، ولكن أيضًا مرحلة المرض.
يمكن إصدار نتائج ELISA نوعيًا وكميًا.
حاليًا ، يتم استخدام ELISA في المواقف التالية:
1) البحث عن أجسام مضادة محددة لأي مرض معدي ؛
2) البحث عن مستضدات أي أمراض (أمراض معدية ، تناسلية) ؛
3) دراسة الحالة الهرمونية للمريض.
4) فحص علامات الورم.
5) الفحص لوجود أمراض المناعة الذاتية.
في الشكل ، يتم امتصاص مستضدات ELISA الصلبة المعروفة (على اليسار) على بئر الصفيحة ، (على اليمين) على آبار الصفيحة المعروفة بالأجسام المضادة
مزايا طريقة ELISA:
1) الدقة والنوعية العالية لطريقة ELISA (أكثر من 90٪).
2) القدرة على تحديد المرض وتتبع ديناميات العملية ، أي مقارنة كمية الأجسام المضادة في فترات زمنية مختلفة.
3) توافر تشخيص ELISA في أي مؤسسة طبية.
النقص النسبي: الكشف عن الاستجابة المناعية (الأجسام المضادة) ، ولكن ليس العامل الممرض نفسه ، مقترنًا بعلامة إنزيم.
إعداد ELISA (آلية عامة):
أساس الإنزيم المناعييشكل تفاعلًا مناعيًا لمولد الضد والجسم المضاد مع تكوين مركب مناعي: جسم مضاد للمستضد ، مما يؤدي إلى تغيير في النشاط الأنزيمي لملصقات معينة على سطح الأجسام المضادة.
مكونات التفاعل:
1. AG (AT) معروف - على بئر الجهاز اللوحي.
2. التحقيق في AT (AG).
3. AT مع إنزيم خاص بمركب AT (AG) -AG (AT)
4- ركيزة مولدة للكروم تتفاعل مع الإنزيم
5. وقف الحل
المراحل الرئيسية من ELISA
1. على سطح آبار الجهاز اللوحي يوجد مستضد منقى لمسبب مرض معين. تضاف إليهم المادة البيولوجية للمريض ، ويحدث تفاعل محدد بين هذا المستضد والجسم المضاد المطلوب (الغلوبولين المناعي). يتكون المجمع.
2. يضاف اتحاد - AT مع إنزيم. هذا الاقتران خاص بمركب AT-AG للمرحلة الأولى. يتم تنشيط الانزيم.
3. يتم إضافة الركيزة و انزيم نشطيتفاعل معها ، ويغير لون المحلول عديم اللون.
4. يضاف محلول توقف لإيقاف تفاعل الركيزة الإنزيمية.
محاسبة.
إيجابي النتيجة - التغييرتظهر الألوان باللون الأصفر.
تحليل الكروماتوغرافيا المناعية
طريقة التحليل المناعي (ICA ، الاختبارات السريعة) هي طريقة أولية للفحص النوعي تسمح لك بسرعة ، في غضون دقائق قليلة ، بالتحليل في أي ظروف ، بما في ذلك. "مجال".
تشمل مزايا ICA ما يلي:
السرعة وسهولة الاستخدام ؛
أحجام عينات صغيرة ، لا يوجد تحضير للعينة ؛
الرخص بالنسبة للمنتج والمستهلك ؛
القدرة على إجراء الاختبارات بكميات كبيرة ؛
سهولة قراءة وتفسير النتيجة ؛
حساسية عالية وقابلية للتكاثر ؛
إمكانية تحديد الكميات;
القدرة على استخدام أجهزة قراءة محمولة متوافقة مع الكمبيوتر ؛
إمكانية التحليل المتعدد.
المكونات (المطبقة على شريط الاختبار):
1. المسمى المقترن بذهب غرواني - خاص بـ AG المحدد.
2. AT لخط الاختبار - خاص بمركب AT-AG
3. القيمة المطلقة لخط التحكم خاصة بالمرافق.
إعداد IHA:
1. تطبيق العينة على منطقة البداية المعينة للشريط.
2. الحصول على نتيجة في شكل ظهور عصابات ملونة بدلاً من خطوط الاختبار والتحكم.
محاسبة
إيجابي - عند تلطيخ خط الاختبار.
سلبي - في حالة عدم وجود تلطيخ لخط الاختبار.
غير صالح - في حالة عدم وجود تلطيخ لخط التحكم.
آلية IHA العامة:
1. توضع العينة في حقل البداية (وسادة العينة) وترتبط بالمُقارن (الجسم المحدد بعلامة اللون) الموجود على الوسادة المُرافقة. نتيجة لذلك ، يتم تشكيل مجمع ملون.
2. يتحرك المركب المناعي الملون الناتج تحت تأثير القوى الشعرية على طول غشاء النيتروسليلوزو يتفاعلمع خط اختبار AT.والنتيجة هي لون واحد شريط وردي أحمر.
3. القيمة المطلقة غير مرتبطة بشريط الاختبار (مترافق)يتحرك ويصل إلى خط التحكم ، ويرتبط بـ AT لخط التحكم.نتيجة لذلك ، تظهر فرقة ملونة ثانية.إذا تم إجراء التحليل بشكل صحيح ، فيجب أن يظهر خط التحكم دائمًا ، بغض النظر عن وجود المستضد الذي تم فحصه (الجسم المضاد) في عينة السائل البيولوجي.
2. شروط إجراء التفاعلات المصلية.
1. وجود متماثل - يتوافق مع كل من المستضد والأجسام المضادة الأخرى.
2. أطباق نظيفة وجافة.
3. نسبة معينة من المخدرات (غالبا متساوية).
4. الوجود الإلزامي للكهارل (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).
5. درجة الحموضة محايدة أو قريبة من القلوية قليلاً.
6. درجة الحرارة + 37 درجة مئوية أو درجة حرارة الغرفة (موجبة بالضرورة).
7. يتم التحكم في المستضد والتحكم في المصل (الجسم المضاد).
3 متطلبات المصل
يجب أن يكون المصل صافيًا تمامًا دون أي خليط من الخلايا.
عادة ما يتم الحصول عليها في الأسبوع الثاني من المرض ، عندما تكون الأجسام المضادة موجودة بالفعل.
يؤخذ الدم بكمية 3-5 مل على معدة فارغة أو بعد 6 ساعات من الوجبة.
للحصول على المصل ، يترك الدم لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة أو بالطرد المركزي. يمتص المصل بعناية شديدة حتى لا يلتقط العناصر المكونة.
يتم الحصول على الأمصال المناعية من دم الأشخاص أو الحيوانات (الأرانب والخيول عادةً) المحصنة وفقًا لنظام معين مع المستضد المقابل (اللقاح). عادة ما يتم تحضير مصل اللبن في الإنتاج.
4. مفهوم النتائج الإيجابية والسلبية.
RA.
مع رد فعل إيجابي ، تغطي كريات الدم الحمراء الملصقة قاع البئر بطبقة متساوية ذات حواف صدفي ("مظلة") ؛ في حالة عدم وجود تراص ، تتراكم كريات الدم الحمراء في التجويف المركزي للبئر ، وتشكل "زرًا" مضغوطًا بحواف محددة بدقة (انظر الأشكال أعلاه).
RP.
بنتيجة إيجابية ، يتم تشكيل حلقة حليبية عند حدود الحلين (انظر الأشكال أعلاه).
إليسا.
يحدث تغيير في لون المحلول برد فعل إيجابي.
RSK.
تأخير انحلال الدم - رد الفعل إيجابي ؛ إذا كان المكمل مجانيًا ، لوحظ انحلال الدم - يكون التفاعل سلبيًا(انظر الصور أعلاه).
نتائج تفاعل واسرمان:
أ - تأخير كامل لانحلال الدم (+ + ++) ؛
ب - تأخر واضح في انحلال الدم (+ ++) ؛
ج - تأخير جزئي لانحلال الدم (++) ؛
د - تأخر ضعيف في انحلال الدم (+) ؛
هـ - انحلال الدم الكامل (-).
يكون التفاعل إيجابيًا مع تأخير جزئي وواضح وكامل في انحلال الدم ، يتم تحديده من خلال درجة تلطيخ محتويات أنابيب الاختبار من اللون الوردي الفاتح إلى الأحمر الفاتح ، وتشكل كريات الدم الحمراء غير المنحلمة لاحقًا ترسبًا أحمر.
1. دراسة المادة
قم بتدوين 3 ملاحظات على الفيديو
13.1. تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد واستخداماتها
عندما يتم حقن مستضد ، تتشكل الأجسام المضادة في الجسم. تعتبر الأجسام المضادة مكملة للمستضد الذي تسبب في تكوينها ، وهي قادرة على الارتباط به. يتكون ارتباط المستضدات بالأجسام المضادة من مرحلتين. المرحلة الأولى محددة ، حيث يوجد ارتباط سريع لمحدد مولد الضد بالمركز النشط لجزء Fab من الأجسام المضادة. وتجدر الإشارة إلى أن الارتباط يرجع إلى قوى فان دير فال والتفاعلات الهيدروجينية والكارهة للماء. يتم تحديد قوة الرابطة من خلال درجة المراسلات المكانية مركز نشطجسم مضاد وحاتمة مستضد. بعد المرحلة المحددة ، تبدأ مرحلة أبطأ - غير محددة ، والتي تتجلى من خلال ظاهرة فيزيائية مرئية (على سبيل المثال ، تكوين رقائق أثناء التراص ، وما إلى ذلك).
التفاعلات المناعية هي تفاعلات بين الأجسام المضادة ومولدات المضادات ، وهذه التفاعلات محددة وحساسة للغاية. يتم استخدامها على نطاق واسع في الممارسة الطبية. بمساعدة التفاعلات المناعية ، يمكن حل المهام التالية:
تحديد الأجسام المضادة غير المعروفة بواسطة مستضدات معروفة (تشخيص مستضد). هذه المهمة هي عندما يكون من الضروري تحديد الأجسام المضادة لمسببات الأمراض في مصل دم المريض (التشخيص المصلي). يتيح لك العثور على الأجسام المضادة تأكيد التشخيص ؛
تحديد مستضدات غير معروفة بواسطة أجسام مضادة معروفة (مصل تشخيصي). يتم إجراء هذه الدراسة عند التعرف على ثقافة العامل الممرض المعزول من مادة المريض (التنميط المصلي) ، وكذلك عند الكشف
مستضدات الميكروبات وسمومها في الدم والسوائل البيولوجية الأخرى. هناك أنواع عديدة من ردود الفعل المناعية التي تختلف في أسلوب الإعداد والتأثير المسجل. هذه هي تفاعلات التراص (RA) ، هطول الأمطار (RP) ، تفاعلات تتضمن مكمل (RCC) ، تفاعلات باستخدام المكونات المسمى (RIF ، ELISA ، RIA).
13.2. تفاعل التراص
تفاعل التراص (RA) هو تفاعل مناعي لتفاعل مستضد مع أجسام مضادة في وجود إلكتروليتات ، ويكون المستضد في حالة جسمية (كرات الدم الحمراء ، والبكتيريا ، وجزيئات اللاتكس مع المستضدات الممتصة). أثناء التراص ، يتم لصق المستضدات الجسدية معًا بواسطة الأجسام المضادة ، والتي تتجلى من خلال تكوين راسب ندف. يحدث تكوين الرقائق بسبب حقيقة أن الأجسام المضادة لها مركزان نشطان ، وأن المستضدات متعددة التكافؤ ، أي لها محددات مستضدية متعددة. يستخدم التهاب المفاصل الروماتويدي لتحديد العوامل الممرضة المعزولة من مادة المريض ، وكذلك لاكتشاف الأجسام المضادة للممرض في مصل دم المريض (على سبيل المثال ، تفاعلات رايت وهدلسون في داء البروسيلات ، تفاعل فيدال في حمى التيفودو نظيرة التيفية).
أسهل طريقة لإعداد RA هي التفاعل على الزجاج ، وهذا تقريبي RA ، والذي يستخدم لتحديد العامل الممرض المعزول عن المريض. عند ضبط التفاعل على شريحة زجاجية ، يتم تطبيق مصل تراص تشخيصي (بتخفيف 1:10 أو 1:20) ، ثم يتم إدخال مزرعة من المريض. يكون رد الفعل إيجابيًا إذا ظهر راسب طارد في القطرة. يتم وضع عنصر تحكم في مكان قريب: بدلاً من المصل ، يتم وضع قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. إذا كان مصل التراص التشخيصي غير ممتز 1 ، فإنه يتم تخفيفه (إلى العيار - التخفيف الذي يجب أن يحدث التراص) ، أي ضع RA الموسع في أنابيب اختبار مع زيادة
يمكن أن يؤدي مصل التراص غير الممتز إلى تصاق البكتيريا ذات الصلة التي تحتوي على مستضدات مشتركة (تفاعلية متصالبة). لذلك استمتعالأمصال التراصية الممتصة ، التي تمت إزالة الأجسام المضادة التفاعلية التبادلية منها عن طريق الامتزاز بواسطة البكتيريا ذات الصلة. في مثل هذه الأمصال ، تبقى الأجسام المضادة الخاصة بهذه البكتيريا فقط.
التخفيفات من مصل التراص ، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من تعليق العامل الممرض المعزول من المريض. يؤخذ التراص في الاعتبار حسب كمية الرواسب ودرجة توضيح السائل في أنابيب الاختبار. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. يكون التفاعل مصحوبًا بضوابط: يجب أن يكون المصل ، المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، شفافًا ، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول عكرًا بشكل موحد ، بدون رواسب.
لتحديد الأجسام المضادة للعامل الممرض في مصل دم المريض ، يتم استخدام RA موسع. عندما يتم وضعها في أنابيب الاختبار ، يتم تخفيف مصل دم المريض وتضاف كمية متساوية من التعليق التشخيصي (تعليق الميكروبات المقتولة) إلى أنابيب الاختبار. بعد الحضانة ، يتم تحديد أعلى تخفيف في المصل حدث فيه التراص ، أي تشكل راسب (عيار مصل). في هذه الحالة ، يحدث تفاعل التراص مع O-Diagnosticum (البكتيريا التي تم قتلها بالتسخين ، والاحتفاظ بمستضد O مستقر حرارياً) في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتلها الفورمالين ، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشن الحبيبات ويستمر بشكل أسرع.
تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي)(RNGA أو RPGA) هو نوع من RA. هذه الطريقة حساسة للغاية. بمساعدة RNGA ، يمكن حل مهمتين: تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض ، والتي يضاف إليها تشخيص مستضد كريات الدم الحمراء ، وهي كريات الدم الحمراء التي يتم امتصاص المستضدات المعروفة عليها ؛ تحديد وجود المستضدات في مادة الاختبار. في هذه الحالة ، يسمى رد الفعل أحيانًا رد الفعل العكسي. التراص الدموي غير المباشر(رونجا). عند التدريج ، تتم إضافة جسم مضاد لتشخيص كريات الدم الحمراء (كريات الدم الحمراء مع الأجسام المضادة الممتصة على سطحها) إلى مادة الاختبار. تعمل كريات الدم الحمراء في هذا التفاعل كناقلات وتشارك بشكل سلبي في تكوين المجاميع المناعية. مع رد فعل إيجابي ، تغطي كريات الدم الحمراء الملصقة قاع البئر بطبقة متساوية ذات حواف صدفي ("مظلة") ؛ في حالة عدم وجود تراص ، تتراكم كريات الدم الحمراء في التجويف المركزي للفتحة ، وتشكل "زرًا" مضغوطًا بحواف محددة بشكل حاد.
تفاعل التخثرتستخدم للكشف عن الخلايا المسببة للأمراض (المستضدات) باستخدام الأجسام المضادة الممتصة عليها المكورات العنقودية الذهبية،يحتوي على البروتين A. البروتين A له صلة بجزء Fc من الغلوبولين المناعي. نتيجة لذلك ، ترتبط الأجسام المضادة بالمكورات العنقودية بشكل غير مباشر من خلال جزء Fc ، ويتم توجيه شظايا Fab إلى الخارج وتكون قادرة على التفاعل مع الميكروبات المقابلة المعزولة عن المرضى. في هذه الحالة ، يتم تشكيل رقائق.
تفاعل تثبيط التراص الدموي (HITA)تستخدم في تشخيص الالتهابات الفيروسية ، والالتهابات التي تسببها فقط فيروسات التراص الدموي. تحتوي هذه الفيروسات على سطحها بروتين - هيماجلوتينين ، المسؤول عن تفاعل التراص الدموي (RHA) عند إضافته إلى فيروسات كرات الدم الحمراء. يتكون RTGA من منع المستضدات الفيروسية بالأجسام المضادة ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء.
تفاعل كومبس - RA للكشف عن الأجسام المضادة غير الكاملة. في بعض الأمراض المعدية ، مثل داء البروسيلات ، يدور مصل دم المريض الأجسام المضادة غير المكتملةللمثير. تسمى الأجسام المضادة غير المكتملة بالحجب لأن لها موقع ارتباط بمولد الضد واحد ، وليس موقعين ، مثل الأجسام المضادة الكاملة. لذلك ، عند إضافة تشخيص مستضد ، ترتبط الأجسام المضادة غير المكتملة بالمستضدات ، ولكنها لا تلتصق ببعضها البعض. لإظهار التفاعل ، يضاف مصل مضاد الغلوبولين (الأجسام المضادة للجلوبيولينات المناعية البشرية) ، مما يؤدي إلى تراص المجمعات المناعية (التشخيص المستضدي + الأجسام المضادة غير الكاملة) المتكونة في المرحلة الأولى من التفاعل.
يستخدم تفاعل كومبس غير المباشر في المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى ، تم العثور على أجسام مضادة أحادية التكافؤ غير مكتملة. يتفاعلون على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء إيجابية العامل الريصي ، لكن لا تسبب تراصهم. لذلك ، يضاف مصل مضاد الجلوبيولين إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الإيجابية ، مما يسبب تراص كريات الدم الحمراء. يتم استخدام تفاعل كومبس للتشخيص الظروف المرضيةيرتبط بالتحلل داخل الأوعية الدموية للكريات الحمراء ذات الأصل المناعي ، على سبيل المثال ، مرض الانحلالي عند الوليد بسبب صراع الريس.
RA لتحديد فصائل الدميعتمد على تراص كريات الدم الحمراء بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي لمستضدات فصائل الدم A (II) ، B (III). الضبط هو مصل لا يحتوي على أجسام مضادة ، أي مصل الدم AB (IV) ، ومستضدات كريات الدم الحمراء من المجموعتين A (P) و B (III). تستخدم كريات الدم الحمراء من المجموعة 0 (I) كعنصر تحكم سلبي لأنها لا تحتوي على مستضدات.
لتحديد عامل Rh ، يتم استخدام الأمصال المضادة لـ Rh (سلسلتان مختلفتان على الأقل). في وجود مستضد Rh على غشاء كريات الدم الحمراء المدروسة ، يحدث تراص هذه الخلايا.
13.3. معادلة الترسيب
RP هو رد فعل مناعي لتفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات في وجود الإلكتروليتات ، ويكون المستضد في حالة قابلة للذوبان. أثناء هطول الأمطار ، تترسب المستضدات القابلة للذوبان بواسطة الأجسام المضادة ، والتي تتجلى في التعكر في شكل نطاقات الترسيب. يتم ملاحظة تكوين الراسب المرئي عندما يتم خلط كلا الكواشف بنسب مكافئة. فائض واحد منهم يقلل من كمية المجمعات المناعية المترسبة. هناك طرق مختلفة لإعداد تفاعل هطول الأمطار.
رد فعل حلقة هطول الأمطارتوضع في أنابيب ترسيب ذات قطر صغير. يضاف المصل المناعي إلى أنبوب الاختبار ويتم وضع المستضد القابل للذوبان في طبقات بعناية. مع نتيجة إيجابية ، يتم تشكيل حلقة حليبية على حدود الحلين. يُطلق على تفاعل الترسيب الحلقي ، الذي يحدد وجود المستضدات في الأعضاء والأنسجة ، والتي يتم غليان مستخلصاتها وترشيحها ، تفاعل الترسيب الحراري (تفاعل أسكولي لتحديد مستضد الجمرة الخبيثة القابل للحرارة).
رد فعل الانتشار المناعي المزدوج Ouchterlony.يتم إجراء هذا التفاعل على هلام أجار. يتم قطع الآبار في طبقة هلامية ذات سماكة موحدة على مسافة معينة من بعضها البعض ومليئة بالمستضد والمصل المناعي ، على التوالي. بعد ذلك ، تنتشر المستضدات والأجسام المضادة في الهلام ، وتلتقي مع بعضها البعض وتشكل معقدات مناعية ، والتي تترسب في الهلام وتصبح مرئية كخطوط ترسيب.
تَغذِيَة. يمكن استخدام هذا التفاعل لاكتشاف المستضدات أو الأجسام المضادة غير المعروفة ، وكذلك للتحقق من التشابه بين المستضدات المختلفة: إذا كانت المستضدات متطابقة ، يتم دمج خطوط الترسيب ؛ إذا لم تكن المستضدات متطابقة ، تتقاطع خطوط الترسيب ؛ إذا كانت المستضدات متطابقة متطابقة جزئيًا ، يتم تشكيل حفز.
رد فعل الانتشار المناعي الشعاعي.تضاف الأجسام المضادة إلى هلام الأجار المذاب ويتم وضع الجل في طبقة متساوية على الشريحة. يتم قطع الآبار في الهلام ويتم إدخال حجم قياسي من محاليل المستضدات بتركيزات مختلفة فيها. أثناء الحضانة ، تنتشر المستضدات شعاعيًا خارج البئر ، وعند مواجهة الأجسام المضادة ، تشكل حلقة ترسيب. طالما يوجد فائض من المستضد في البئر ، فهناك زيادة تدريجية في قطر حلقة الترسيب. تُستخدم هذه الطريقة لتحديد المستضدات أو الأجسام المضادة في محلول الاختبار (على سبيل المثال ، لتحديد تركيز الغلوبولين المناعي فصول مختلفةفي المصل).
الرحلان المناعي.يتم فصل خليط المستضدات مبدئيًا عن طريق الرحلان الكهربائي ، ثم يتم إدخال مصل مضاد للترسيب في الأخدود الذي يعمل على طول اتجاه حركة البروتين. تنتشر المستضدات والأجسام المضادة في الهلام تجاه بعضها البعض ؛ تتفاعل ، فإنها تشكل خطوطًا مقوسة لهطول الأمطار.
تفاعل التلبد(وفقًا لرامون) - نوع من تفاعل الترسيب ، والذي يستخدم لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو الذيفان. يتم إجراء التفاعل في أنابيب الاختبار. في أنبوب اختبار حيث يكون الذيفان ومضاد السموم في نسبة مكافئة ، لوحظ التعكر.
13.4. تفاعل التثبيت التكميلي
تتفاعل الأجسام المضادة مع المستضد المقابل ، وتربط المكمل الإضافي (النظام الأول). مؤشر تثبيت المكمل هو تحسس كريات الدم الحمراء بواسطة مصل الانحلالي ، أي الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء (النظام الثاني). إذا لم يتم إصلاح المكمل في النظام الأول ، أي لا يحدث تفاعل الأجسام المضادة للمستضد ، ثم يتم تحليل خلايا الدم الحمراء المحسّسة تمامًا (تفاعل سلبي). عندما يرتبط المكمل بالمجمعات المناعية للنظام الأول ، بعد إضافة كريات الدم الحمراء المحسّسة ، انحلال الدم
غائب (رد فعل إيجابي). يتم استخدام تفاعل التثبيت المكمل لتشخيص الأمراض المعدية (السيلان ، الزهري ، الأنفلونزا ، إلخ).
13.5. تفاعل التعادل
للميكروبات وسمومها تأثير ضار على أعضاء وأنسجة جسم الإنسان. الأجسام المضادة قادرة على الارتباط بهذه العوامل الضارة وتمنعها ، أي إبطال مفعول. تستند هذه الميزة للأجسام المضادة رد فعل تشخيصيتحييد. يتم إجراؤه عن طريق إدخال خليط من المستضد والأجسام المضادة في الحيوانات أو في كائنات اختبار حساسة (ثقافة الخلية ، الأجنة). على سبيل المثال ، للكشف عن السموم في مادة المريض ، يتم حقن حيوانات المجموعة الأولى بمادة المريض. يتم حقن حيوانات المجموعة الثانية بمادة مماثلة ، ومعالجتها مسبقًا بالمصل المضاد المناسب. تموت حيوانات المجموعة الأولى في وجود السم في المادة. المجموعة الثانية من الحيوانات على قيد الحياة ، لا يتجلى التأثير الضار للسم ، حيث يتم تحييده.
13.6. التفاعلات باستخدام الأجسام المضادة أو المستضدات الموصوفة
13.6.1. تفاعل التألق المناعي (RIF ، طريقة Koons)
تستخدم هذه الطريقة للتشخيص السريع. يمكنه الكشف عن كل من المستضدات الميكروبية والأجسام المضادة.
طريقة RIF المباشرة- رد فعل مناعي لتفاعل الأجسام المضادة مع المستضدات ، ويتم تمييز الأجسام المضادة بـ fluorochrome - مادة قادرة على إصدار كمات ضوئية بطول موجي معين عندما يضربها ضوء بطول موجة معين. خصوصية ضبط هذه الطريقة هي الحاجة إلى إزالة المكونات غير المتفاعلة من أجل استبعاد الكشف عن التلألؤ غير المحدد. للقيام بذلك ، قم بغسل الأجسام المضادة غير المتفاعلة. يتم تقييم النتائج باستخدام مجهر الفلورسنت. تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة التي يتم علاجها بمصل إنارة على خلفية داكنة على طول محيط الخلية.
طريقة RIF غير المباشرةتستخدم أكثر من سابقتها. يتم تنفيذ هذا التفاعل في خطوتين. في المرحلة الأولى ، المستضدات متبادلة
تتفاعل مع الأجسام المضادة المقابلة ، وتشكل مجمعات مناعية. يجب إزالة جميع المكونات التي لم تتفاعل (أي ليست جزءًا من المجمعات المناعية) عن طريق الغسيل. في المرحلة الثانية ، يتم الكشف عن معقد الأجسام المضادة المكونة للمستضد باستخدام مصل مضاد الجلوبيولين الفلوروكروم. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للجلوبيولين المناعي للأرانب المسمى بالفلوروكروم. يتم تقييم النتائج باستخدام مجهر الفلورسنت.
13.6.2. المقايسة المناعية أو المقايسة
ELISA هو الأكثر شيوعًا الطريقة الحديثةتستخدم لتشخيص الالتهابات الفيروسية والبكتيرية والأولية ، ولا سيما لتشخيص عدوى فيروس نقص المناعة البشرية ، التهاب الكبد الفيروسيوإلخ.
هناك الكثير من تعديلات ELISA. يتم استخدام ELISA غير التنافسي في المرحلة الصلبة على نطاق واسع. يتم تنفيذه في ألواح بوليسترين ذات 96 بئر (المرحلة الصلبة). أثناء التفاعل ، من الضروري غسل المكونات غير المتفاعلة في كل مرحلة. عند تحديد الأجسام المضادة ، تمتلئ الآبار التي يتم فيها امتصاص المستضدات بمصل الدم قيد الدراسة ، ثم مصل مضاد الجلوبيولين المسمى بالإنزيم. أظهر التفاعل عن طريق إضافة ركيزة للإنزيم. في وجود الإنزيم ، تتغير الركيزة ، ويتم اختيار مركب الركيزة الإنزيمية بطريقة يتم فيها تلوين المنتج المتكون في التفاعل. وهكذا ، مع وجود رد فعل إيجابي ، لوحظ تغيير في لون المحلول. لتحديد المستضدات ، يتم تحسس مادة حاملة المرحلة الصلبة بالأجسام المضادة ، ثم تتم إضافة مادة الاختبار (المستضدات) ومصل المستضد المسمى بالإنزيم بشكل تسلسلي. لإظهار التفاعل ، يتم إدخال ركيزة للإنزيم. يحدث تغيير في لون المحلول برد فعل إيجابي.
13.6.3. مناعي
تعتمد هذه الطريقة على مزيج من الرحلان الكهربائي و ELISA. عند إجراء التجلط المناعي (النشاف من اللغة الإنجليزية. لطخة- بقعة) يتم تعريض خليط معقد من المستضدات أولاً لرحلان كهربائي في هلام بولي أكريلاميد. الناتج المجزأ المضاد
يتم نقل الببتيدات الجينية إلى غشاء النيتروسليلوز. ثم يتم معالجة البقع بأجسام مضادة موصوفة بالإنزيم لمستضد معين ، ط. إجراء لطخة ELISA. يستخدم التجلط المناعي في تشخيص العدوى مثل فيروس نقص المناعة البشرية.
13.6.4. المجهر الإلكتروني المناعي
تتكون الطريقة من الفحص المجهري في مجهر إلكتروني للفيروسات (نادرًا ما تكون ميكروبات أخرى) ، والتي سبق معالجتها بمصل مناعي مناسب مُصنَّف بمستحضرات كثيفة الإلكترون بصريًا ، على سبيل المثال ، فيريتين ، وهو بروتين يحتوي على الحديد.
13.7. التدفق الخلوي
يتم تمايز خلايا الدم على أساس قياس التألق الخلوي بالليزر. للقيام بذلك ، الخلايا المرغوبة ملطخة بأجسام مضادة وحيدة النسيلة الفلورية لمضادات CD. يتم تمرير عينة الدم بعد العلاج بالأجسام المضادة عبر أنبوب رفيع ويتم تمرير شعاع ليزر من خلاله ، مما يثير تألق الفلوروكروم. ترتبط شدة الإسفار بكثافة المستضدات على سطح الخلية ويمكن قياسها باستخدام المضاعف الضوئي. يتم تحويل النتائج التي تم الحصول عليها إلى رسم بياني.
يستخدم قياس التدفق الخلوي لتحديد حالة المناعة(محتوى السكان الرئيسيين للخلايا الليمفاوية ، محتوى السيتوكينات داخل الخلايا وخارجها ، نشاط وظيفيالخلايا القاتلة الطبيعية ، نشاط البلعمة ، إلخ).
رقم 29 تفاعل التراص. المكونات والآلية وطرق الإعداد. طلب.
تفاعل التراص- تفاعل بسيط تربط فيه الأجسام المضادة مستضدات الجسم (البكتيريا ، كريات الدم الحمراء أو خلايا أخرى ، جزيئات غير قابلة للذوبان مع مستضدات ممتصة عليها ، بالإضافة إلى تكتلات الجزيئات). يحدث في وجود الشوارد ، على سبيل المثال ، عند إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.
يتم استخدام أنواع مختلفة من تفاعل التراص: ممتد ، تقريبي ، غير مباشر ، إلخ. يتجلى تفاعل التراص من خلال تكوين رقائق أو رواسب (الخلايا "ملتصقة" بأجسام مضادة لها مركزان أو أكثر من مراكز ربط مولد الضد - الشكل 13.1) . يستخدم RA من أجل:
1) كشف الأجسام المضادةفي مصل دم المرضى ، على سبيل المثال ، داء البروسيلات (تفاعلات رايت ، هيدلسون) ، حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال) وأمراض معدية أخرى ؛
2) تعريفات الممرضمعزولة عن المريض
3) تحديد فصائل الدمباستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد المستضدات الكريات الحمر.
لتحديد الأجسام المضادة للمريض ضع تفاعل تراص مفصل:يضاف التشخيص (تعليق الميكروبات المقتولة) إلى تخفيفات مصل دم المريض ، وبعد عدة ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، يتم ملاحظة أعلى تخفيف للمصل (عيار المصل) ، حيث حدث التراص ، أي شكلت راسب.
تعتمد طبيعة ومعدل التراص على نوع المستضد والأجسام المضادة. مثال على ذلك هو ميزات تفاعل التشخيص (مستضدات O و H) مع أجسام مضادة محددة. يحدث تفاعل التراص مع O-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتل بالتسخين ، وتحتفظ بمستضد O القابل للحرارة) في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتلها الفورمالين ، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشن الحبيبات ويستمر بشكل أسرع. إذا كان من الضروري تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض ، ضع توجيه تفاعل التراص ،باستخدام الأجسام المضادة التشخيصية (مصل التراص) ، أي يتم إجراء التنميط المصلي للعامل الممرض. يتم إجراء تفاعل تقريبي على شريحة زجاجية. إلى قطرة من مصل التراص التشخيصي بتخفيف 1:10 أو 1:20 أضف ثقافة نقية من العامل الممرض المعزول عن المريض. يتم وضع عنصر تحكم في مكان قريب: بدلاً من المصل ، يتم وضع قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. عندما تظهر الرواسب النضرة في قطرة مع مصل وميكروبات ، يتم إجراء تفاعل تراص مفصل في أنابيب الاختبار مع تخفيفات متزايدة من مصل التراص ، حيث يتم إضافة 2-3 قطرات من تعليق العامل الممرض. يؤخذ التراص في الاعتبار من خلال كمية الرواسب ودرجة توضيح السائل. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. في الوقت نفسه ، يتم أخذ الضوابط في الاعتبار: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا ، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول عكرًا بشكل موحد ، بدون رواسب.
يمكن أن تتراكم البكتيريا المختلفة ذات الصلة بنفس مصل التراص التشخيصي ، والذي
يجعل من الصعب التعرف عليهم. لذلك ، يتم استخدام الأمصال التراصية الممتزّة ، والتي منها
تتفاعل الأجسام المضادة عن طريق الامتزاز للبكتيريا المرتبطة بها. تحتوي هذه الأمصال على أجسام مضادة
خاص بهذه البكتيريا.
تفاعل التراص
التراص (اللات. التلصيق- الإلتصاق (الإلتصاق) - الإلتصاق (الإتصال) بجزيئات الجسم الحاملة للمستضد (خلايا كاملة ، جسيمات لاتكس ، إلخ) بجزيئات من أجسام مضادة محددة في وجود إلكتروليتات ، والتي تنتهي بتكوين رقائق أو رواسب (تراص) مرئية للـ بالعين المجردة. تعتمد طبيعة الرواسب على طبيعة المستضد: البكتيريا السوطية تعطي رواسب ذات قشرة كبيرة ، سوطية وعديمة الكبسولة - حبيبات دقيقة ، كبسولة - خيطية. التمييز بين التراص المباشر ، حيث يشتمل التفاعل مع أجسام مضادة معينة بشكل مباشر على مستضدات خاصة لبكتيريا أو أي خلية أخرى ، مثل كريات الدم الحمراء ؛ وغير مباشر ، أو سلبي ، حيث تكون الخلايا البكتيرية أو كريات الدم الحمراء أو جزيئات اللاتكس حاملة ليس من تلقاء نفسها ، ولكن لمولدات المضادات الأجنبية (أو الأجسام المضادة) التي يتم امتصاصها عليها لاكتشاف الأجسام المضادة (أو المستضدات) الخاصة بها. يتضمن تفاعل التراص بشكل أساسي أجسامًا مضادة تنتمي إلى فئتي IgG و IgM. تستمر على مرحلتين: أولاً ، هناك تفاعل محدد للمركز النشط للأجسام المضادة مع محدد المستضد ، يمكن أن تحدث هذه المرحلة في غياب الإلكتروليتات ولا يصاحبها تغييرات مرئيةنظام رد الفعل. تتطلب المرحلة الثانية ، وهي تكوين التراص ، وجود إلكتروليتات تقلل الشحنة الكهربائية لمجمعات المستضد + الأجسام المضادة وتسريع عملية لصقها. تنتهي هذه المرحلة بتكوين تراص.
توضع تفاعلات التراص إما على الزجاج أو على ألواح من الورق المقوى الملساء ، أو في أنابيب تراص معقمة. عادة ما تستخدم اختبارات تراص الشرائح (المباشرة والسلبية) كطريقة سريعة للكشف عن الأجسام المضادة المحددة في مصل المريض (على سبيل المثال ، في داء البروسيلات) أو من أجل تحديد المصليالعوامل الممرضة. في الحالة الأخيرة ، عادةً ما يتم استخدام الأمصال التشخيصية النقية (الممتزجة) جيدًا ، والتي تحتوي فقط على الأجسام المضادة أحادية المستقبل أو مجموعة مستضدات مختلفة. الميزة غير المشكوك فيها لتفاعل التراص على الزجاج هي بساطة تركيبته وحقيقة أنه يستغرق عدة دقائق أو حتى ثوانٍ ، حيث يتم استخدام كلا المكونين فيه في شكل مركّز. ومع ذلك ، فإن لها قيمة نوعية فقط وهي أقل حساسية من أنبوب الاختبار. يعطي اختبار التراص الموسع في أنابيب الاختبار نتائج أكثر دقة ، لأنه يسمح لك بتحديد المحتوى الكمي للأجسام المضادة في المصل (ضبط عيارها) ، وإذا لزم الأمر ، تسجيل حقيقة الزيادة في عيار الجسم المضاد ، وهو أمر تشخيصي القيمة. لإعداد التفاعل ، يتم إدخال مصل مخفف بمحلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.85٪ بطريقة معينة وحجم متساوٍ (عادةً 0.5 مل) من معلق تشخيص معياري (أو مزرعة اختبار) تحتوي على مليار بكتيريا في 1 مل في التراص. أنابيب. يتم حساب نتائج تفاعل التراص مبدئيًا بعد ساعتين من حضانة الأنابيب عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وأخيراً بعد 20-24 ساعة وفقًا لعلامتين: وجود وحجم الراسب ودرجة شفافية المادة الطافية. يتم إجراء التقييم وفقًا للنظام الرباعي. يكون التفاعل بالضرورة مصحوبًا بالتحكم في المصل والمستضد. في تلك الحالات التي يتم فيها استخدام اختبار التراص المفصل في أنبوب اختبار للتحديد المصلي للعامل الممرض ، يكون له قيمة تشخيصية إذا تم تقييم التفاعل على أنه إيجابي عندما يتم تخفيف المصل التشخيصي بنصف عياره على الأقل.
يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند خلط محاليل المستضدات والأجسام المضادة المتماثلة ، لا يتم دائمًا ملاحظة المظاهر المرئية لتفاعل التراص. يتكون الترسيب فقط في بعض النسب المثلىكلا مكونات التفاعل. خارج هذه الحدود ، مع وجود فائض كبير من المستضد أو الأجسام المضادة ، لا يلاحظ أي تفاعل. هذه الظاهرة تسمى "ظاهرة prozone". لوحظ في كل من تفاعل التراص وفي تفاعل الهطول. ظهور prozone في ردود الفعل المناعيةنظرًا لحقيقة أن المستضدات المتضمنة فيها ، كقاعدة عامة ، هي متعددة التحديد ، والجزيئات الأجسام المضادة IgGمركزين نشطين. مع وجود فائض من الأجسام المضادة ، يتم تغطية سطح كل جسيم مستضد بجزيئات الأجسام المضادة بحيث لا تبقى مجموعات محددة حرة ، لذلك لا يمكن للمركز النشط الثاني غير المرتبط بالأجسام المضادة التفاعل مع جسيم مستضد آخر وربطها ببعضها البعض. يتم أيضًا منع تكوين تراص مرئي أو راسب مع وجود فائض من مولد الضد ، عندما لا يكون هناك موقع نشط واحد مجاني للأجسام المضادة ، وبالتالي لا يمكن تضخم معقدات المستضد + الجسم المضاد + المستضد.