مبدأ RTGAيتكون من حقيقة أنه يتم خلط كميات متساوية من مصل الدم ومعلق الفيروس في أنبوب اختبار ، وبعد التعرض يتم تحديد ما إذا كان الفيروس محفوظًا في الخليط عن طريق إضافة تعليق من كريات الدم الحمراء. يشير تراص كريات الدم الحمراء إلى وجودها ، ويشير غياب التراص الدموي إلى عدم وجود الفيروس في الخليط. يعتبر اختفاء الفيروس من خليط الفيروس + المصل علامة على تفاعل الأجسام المضادة في المصل والفيروسات.

لكن الأجسام المضادة تتفاعل مع المستضدات بنسب كمية محددة بدقة. لذلك ، من أجل حرمان كمية معينة من الفيروس من قدرة التراص الدموي ، يلزم وجود حد أدنى معين من الأجسام المضادة ، وبما أن أحد مكونات RTHA غير معروف دائمًا ، فمن الضروري وضع التفاعل في سلسلة من أنابيب الاختبار بجرعات مختلفة من الأجسام المضادة ونفس جرعات الفيروس أو العكس. يتم تحقيق ذلك عن طريق تناول إما تخفيفات مختلفة من المصل ونفس التخفيف للفيروس ، أو تخفيفات مختلفة للفيروس ونفس التخفيف من المصل.

يسمح لك RTGA بحل المهام التالية: تحديد عيار الأجسام المضادة لفيروس التراص الدموي في المصل ؛ التعرف على فيروس التراص الدموي غير المعروف من الأمصال المعروفة ؛ تحديد درجة العلاقة المستضدية للفيروسين.

مزايا RTGA:بساطة التقنية ، السرعة ، العمل المعقم غير مطلوب ، الخصوصية ، التكلفة المنخفضة. العيب: RTGA ممكن فقط مع فيروسات التراص الدموي.

مبدأ معايرة الأجسام المضادة في RTGAيتكون مما يلي:

- تحضير سلسلة من التخفيفات المتسلسلة (عادة ضعفين) من مصل الاختبار بكميات متساوية (عادة 0.25 أو 0.2 مل) ؛

- أضف إلى كل تخفيف نفس الأحجام من الفيروس المتماثل في عيار 4 HAU ؛

- يتم الاحتفاظ بالخلائط لفترة معينة عند درجة حرارة معينة (لفيروس مرض نيوكاسل 40-60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة) ؛

- تضاف أحجام متساوية من 1٪ معلق من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى جميع الخلائط ؛

- بعد التعرض ، يتم تقييم التراص الدموي في كل خليط على شكل تقاطعات.

يشمل التفاعل ضوابط المصل والفيروسات وكريات الدم الحمراء.

يُؤخذ هذا التخفيف في المصل ، والذي لا يزال يمنع التراص الدموي تمامًا ، كمؤشر على عيار الجسم المضاد في هذا المصل.

استخدم في علم الفيروسات من تفاعل الحمى.

RGAd.تم اكتشاف الامتصاص الدموي - ارتباط كريات الدم الحمراء بسطح الخلايا المصابة بالفيروس - لأول مرة بواسطة فوغل وشيلوكوف (1957) في مزرعة الأنسجة المصابة بفيروس الأنفلونزا. تعتمد هذه الظاهرة على تقارب مستقبلات الفيروس الموجودة على سطح الخلية المصابة بمستقبلات كرات الدم الحمراء ، مما يؤدي إلى ارتباطها المتبادل بشكل مشابه لتفاعل التراص الدموي. وتتمثل ميزة هذا التفاعل في أنه يصبح إيجابيًا حتى قبل ظهور تغيرات اعتلال خلوي مميزة في الخلايا المصابة.

منهجية RGAdيتكون مما يلي. في اليوم الثالث والرابع بعد الإصابة بالخلية ، يتم أخذ أنبوبين لهما نفس ثقافة الخلية ، أحدهما مصاب بمواد تحتوي على فيروسات ، والثاني عبارة عن أنبوب تحكم. يتم تصريف سائل المزرعة من كل من أنابيب الاختبار وتضاف 2-3 قطرات من 0.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى كلا الأنبوبين. يتم ترك كلا الأنبوبين لمدة 5-10 دقائق بحيث تكون كريات الدم الحمراء على سطح الخلايا (توضع أفقيًا على الطاولة) ، ثم يتم شطفها قليلاً بمحلول ملحي وفحصها تحت المجهر (تكبير صغير). في أنبوب التحكم ، تتم إزالة كريات الدم الحمراء تمامًا بالمحلول الملحي ، وتطفو بعض الخلايا المتبقية مع السائل. إذا لم تتم إزالة كريات الدم الحمراء الموجودة في أنبوب الاختبار المصاب بمحلول ملحي ولا تطفو ، ولكنها متصلة بسطح الخلايا ، فيجب اعتبار RHAd موجبًا.

اعتمادًا على الفيروس ونوع الخلايا ، يمكن أن يكون ترتيب خلايا الدم الحمراء ثلاثة أضعاف:

- يتم امتصاص كريات الدم الحمراء فقط على محيط طبقة الخلية على شكل "قلادة" (فيروس حمى الخنازير الأفريقية) ؛

- توجد كريات الدم الحمراء على طبقة الخلية في بؤر أو عناقيد (فيروس الأنفلونزا) ؛

- توجد كريات الدم الحمراء بشكل منتشر على طبقة الخلية (فيروس نظير الانفلونزا).

كل فيروس قادر على امتصاص خلايا الدم الحمراء لبعض أنواع الحيوانات.

التشخيص المصلي للأمراض الفيروسية عن طريق زيادة عيار الأجسام المضادة في مصل الدم المقترن.

تفاعل التراص الدموي (RGA) وتفاعل تثبيط التراص الدموي (HITA) ، آلية ومكونات وتطبيق التفاعلات.

أساس تفاعل التراص الدموي هو ظاهرة تراص كرات الدم الحمراء التي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة. يميز بين التراص الدموي المباشر وغير المباشر.

أولاً ، يتم غسل كريات الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ثم ، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات ذات طبيعة بروتينية) ، يتم معالجتها بمحلول تانين 1: 20000 وتحسسها بمستضدات قابلة للذوبان. بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، يكون مستضد كرات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام.

يتم تخفيف مصل الاختبار بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة بها ثقوب ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف مصل. تؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر في الاعتبار من خلال طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب. تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية ، حيث تغطي كريات الدم الحمراء الجزء السفلي بالكامل من أنبوب الاختبار بالتساوي. مع وجود رد فعل سلبي ، توجد خلايا الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو "زر" في منتصف الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

المكونات الرئيسية لـ RP:

أ) مستضد قابل للذوبان

ب) أجسام مضادة محددة (مصل)

(RTGA) هي طريقة للتعرف على الفيروس أو الكشف عن الأجسام المضادة للفيروسات في مصل دم المريض ، بناءً على ظاهرة عدم تراص كريات الدم الحمراء بواسطة دواء يحتوي على فيروس في وجود مصل الدم المناعي له.
يقوم على الحصار ، قمع مستضدات الفيروسات بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء.

يستخدم RTHA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، والتهاب الدماغ الذي ينتقل عن طريق القراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم في كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.
آلية.يتم إجراء تصنيف الفيروس في اختبار تثبيط التراص الدموي (HITA) باستخدام مجموعة من الأمصال الخاصة بالنوع. تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار من خلال عدم وجود تراص دموي. الأنواع الفرعية للفيروس A مع المستضدات H0N1 ، H1N1 ، H2N2 ، H3N2 ، إلخ.

يمكن تمييزها في RTGA بمجموعة من الأمصال المتماثلة من النوع المحدد.

في الصميم تفاعلات التراص الدموي تكمن ظاهرة تراص كرات الدم الحمراء التي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة.

يميز بين التراص الدموي المباشر وغير المباشر.
في تفاعل التراص الدموي المباشر ، تلتصق كريات الدم الحمراء ببعضها عندما يتم امتصاص مستضدات معينة ، مثل الفيروسات ، عليها.
في الدراسات المصلية ، يتم استخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي المباشر ، عندما يتم تحييد الفيروس المعزول من المريض بمصل مناعي معين ، ثم يتم دمجه مع خلايا الدم الحمراء.

يشير غياب التراص الدموي إلى تطابق الفيروس مع المصل المناعي المستخدم.

لوحظ تفاعل التراص الدموي غير المباشر (التراص الدموي السلبي) عندما يتم تكميل كريات الدم الحمراء المعالجة مسبقًا (المحسّسة) بمولدات المضادات المختلفة بمصل مناعي أو مصل المريض الذي يحتوي على الأجسام المضادة المناسبة.

هناك ارتباط محدد لكريات الدم الحمراء ، التراص الدموي السلبي.

يتفوق تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي في الحساسية والنوعية للطرق المصلية الأخرى ، ويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا والريكتسيا والأوليات.

تتكون طريقة ضبط تفاعل التراص الدموي غير المباشر من عدة مراحل.

أولاً ، يتم غسل كريات الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ثم ، إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات ذات طبيعة بروتينية) ، يتم معالجتها بمحلول تانين 1: 20000 وتحسسها بمستضدات قابلة للذوبان.

بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، يكون مستضد كرات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام. يتم تخفيف مصل الاختبار بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة بها ثقوب ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء إلى كل تخفيف مصل.

تؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر في الاعتبار من خلال طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب. تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية ، حيث تغطي كريات الدم الحمراء الجزء السفلي بالكامل من أنبوب الاختبار بالتساوي. مع رد فعل سلبي ، توجد كريات الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو "زر" في وسط الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

تفاعل تثبيط التراص الدموي- تفاعل مصلي يعتمد على قدرة الأجسام المضادة على منع تراص كرات الدم الحمراء بأنواع من الفيروسات التراصية الدموية (فيروسات غدية ، فيروسات آربوفيروس ، بعض الفيروسات المعوية ، فيروسات الإنفلونزا ونظير الإنفلونزا ، الحصبة ، فيروسات الإنفلونزا).

تتفاعل الأجسام المضادة المحددة المضادة للفيروسات مع الجزيئات السطحية للهيماجلوتينين في فيروسات هذه الفيروسات وتمنع ارتباطها بالجزيئات التكميلية لغشاء كرات الدم الحمراء.

في الآونة الأخيرة ، تم استخدام التفاعل على نطاق واسع في مختبرات علم الفيروسات السريرية لتحديد عيارات الأجسام المضادة المحددة لفيروسات معينة ، وكذلك لتحديد الهوية المصلي ونوع الفيروس المعزول من المواد السريرية من المرضى.

الاستخدام محدود إلى حد ما بسبب وجود مثبطات غير محددة للفيروسات في مصل الدم ، وكذلك الأجسام المضادة الطبيعية - الراصات.

تفاعل التحييد - تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA).

يتم تطبيق RTGA:
- من أجل التنميط المصلي للفيروس.
- للتشخيص المصلي للالتهابات.
هناك طريقتان للإعداد:
- طريقة التنقيط على الزجاج (تفاعل تقريبي) ، تستخدم لفيروسات التنظير المصلي ؛
- منتشرة في أنابيب الاختبار.

آلية.

تحتوي بعض الفيروسات (على سبيل المثال ، الأنفلونزا) على دماجلوتينين ، والذي يسبب تراص كريات الدم الحمراء لحيوانات مختلفة ، اعتمادًا على نوع الفيروس.

في وجود الأجسام المضادة في المصل - مضادات الجلوتينين ، لوحظ تثبيط نشاط الفيروسات.
RTGA.
الغرض: التنميط المصلي لفيروس الأنفلونزا أ

عناصر:
1. المادة قيد الدراسة هي السائل السقائي لجنين الفرخ ،
2. الأمصال التشخيصية الخاصة بنوع مضاد الأنفلونزا ،
3. 5٪ معلق من كريات الدم الحمراء في الدجاج.
4.

محلول ملحي.

يتم وضع التفاعل على الزجاج بطريقة الإسقاط. يتم وضع قطرة واحدة من مصل التشخيص ومواد الاختبار على الزجاج ، مختلطة ، ثم يتم إضافة قطرة واحدة من تعليق كريات الدم الحمراء. مع رد فعل إيجابي ، لوحظ احمرار متجانس ، ومع رد فعل سلبي ، تظهر رقائق حمراء (تراص دموي).

السابق التالي

خصائص فيروسات الانفلونزا. وبائيات وتشخيص الأنفلونزا. استخدام RTGA في التنميط المصلي لفيروس الأنفلونزا. الاستعدادات للوقاية والعلاج المحدد.

الأنفلونزا أو الأنفلونزا مرض معدي حاد يتميز بتلف الأغشية المخاطية في الجزء العلوي الجهاز التنفسي، حمى ، تسمم عام ، اضطراب في الجهاز القلبي الوعائي والجهاز العصبي.

تتميز الأنفلونزا بالميل إلى انتشار الأوبئة والجائحة بسبب ارتفاع معدل العدوى وتنوع العامل الممرض.

خصائص مسببات الأمراض. مسببات الأمراض - تنتمي فيروسات الأنفلونزا إلى العائلة. Orthomyxoviridae وأجناس Influenzavirus A و B و Influenzavirus C. فيروسات الأنفلونزا هي فيروسات RNA. تم عزل فيروس الأنفلونزا من النوع A في عام 1933 بواسطة W. Smith، K. Andrews، P. Laidlaw. في عام 1940 ، تم العثور على T.

تطبيق طريقة التراص الدموي في علم الفيروسات.

عزل فرانسيس و ر. ميدزيل فيروسات الأنفلونزا من النمط B ، في عام 1949 R. Taylor - type C. في روسيا ، تم عزل فيروسات الأنفلونزا الأولى في عام 1936 بواسطة A. فيروسات الإنفلونزا لها شكل كروي (شكل كروي) - 80-120 نانومتر ، وغالبًا ما يكون لها شكل خيطي. وهي تتكون من: 1) النواة - غلاف نووي من نوع حلزوني من التناظر (خطي أحادي الجديلة "-" - خيط من RNA + قفيصة بروتينية) ؛ 2) الغشاء القاعدي - غشاء البروتين الدهني الخارجي - الكابسيد.

يوجد على سطح الغشاء بروتينات سكرية (على شكل طفرات وزغابات) من نوعين: 1) هيماجلوتينين - يعزز الارتباط بمستقبلات الخلية ؛ 2) النورامينيداز - يعزز إطلاق الفيروس من الخلية. زراعة. للزراعة ، يتم استخدام أجنة الدجاج ، ومزارع الخلايا الأولية بالتريبسين ، وأحيانًا حيوانات المختبر.

النموذج الأكثر ملاءمة هو أجنة الدجاج التي تتراوح أعمارها بين 10 و 12 يومًا. يسمح لك بالحصول على كميات كبيرة من الفيروس ، وهو أمر ضروري في إنتاج اللقاحات والمستحضرات البكتيرية.

يتم إجراء العدوى في التجويف اللوني ، على الغشاء المشيمي ، في التجويف الذي يحيط بالجنين ، في السلى. تم الكشف عن وجود الفيروس في جنين الدجاج في اختبار التراص الدموي. هيكل مستضد. تحتوي الفيروسات على مستضد داخلي - S ومستضدات سطحية: HA-hemagglutinin و NA-neuraminidase. مستضد S - خاص بالمجموعة ، شائع في النوع بأكمله ، وفقًا لهذا المستضد ، تنقسم فيروسات الإنفلونزا إلى أنواع A و B و C. هذا مستضد ثابت (غير متغير) مثبت مكمل.

مستضدات HA و NA هي مستضدات محددة. يتسبب مستضد HA في تكوين أجسام مضادة معادلة للفيروسات وتراص كريات الدم الحمراء.

يتسبب مستضد NA في تكوين الأجسام المضادة التي تعمل على تحييد الفيروسات جزئيًا.

فيروس النوع B أقل تغيرًا ، بينما النوع C مستقر للغاية.

خصائص سامة. التأثير السام للفيروس على الجسم ( صداع الراس, ألم عضلي، درجة الحرارة ، ظاهرة النزلات) بسبب بروتينات الفيروس (الجسيم الفيروسي نفسه). هذا الإجراء محدد بدقة ولا يتم تحييده إلا عن طريق مصل المناعة من النوع أو النوع الفرعي المقابل أو عن طريق مصل المرضى. مقاومة. فيروسات الإنفلونزا حساسة للأشعة فوق البنفسجية والمطهرات (الفورمالين والكحول والفينول والكلورامين) ومذيبات الدهون.

في وسط سائل ، يموتون عند درجة حرارة 50-60 درجة مئوية لعدة دقائق. في درجة حرارة الغرفة في الهواء ، تظل الفيروسات معدية لعدة ساعات. يتم تخزينها لفترة طويلة في شكل جاف ، وفي حالة التجميد (-70 درجة مئوية) لا تبقى فقط لفترة طويلة ، ولكنها أيضًا لا تفقد ضراوتها.

حساسية الحيوان. في ظل الظروف الطبيعية ، تصيب فيروسات النوع A البشر والحيوانات (تمرض الخيول والخنازير) ، بينما تصيب فيروسات النوع B و C البشر فقط. من بين حيوانات المختبر ، الفئران البيضاء ، القوارض الأفريقية ، الهامستر السوري ، والقرود معرضة للإصابة بالفيروسات.

يتسم المرض الذي يصيب الحيوانات بتلف الرئة والحمى وقد يؤدي إلى موت الحيوانات. وبائيات المرض. مصدر العدوى هو شخص مريض بشكل واضح أو بدون أعراض. الشخص المريض يفرز الفيروس بيئةعند السعال والحديث والعطس مع قطرات من اللعاب والمخاط والبلغم بالفعل في فترة الحضانة.

يصبح المريض معديًا قبل 24 ساعة من ظهور الأعراض الرئيسية ويشكل خطرًا وبائيًا في غضون 48 ساعة بعد اختفائها.

آلية النقل الهوائية. طريق الانتقال من الجو. إن قابلية الإنسان للإصابة بالإنفلونزا عالية جدًا. الجميع يمرض الفئات العمرية، أساسا في وقت الشتاء. الأطفال وكبار السن هم الأكثر عرضة للإصابة. يعكس اسم المرض ملامح علم الأوبئة: الأنفلونزا من الفرنسيين. القابض - انتزاع ، الأنفلونزا - من الإيطالية. إنفلونزا فريدو - تأثير البرد.

من كل شارب أمراض الجهاز التنفسيالأنفلونزا هي الأكثر انتشارًا و مرض خطير. تغطي أوبئة الأنفلونزا والأوبئة ما يصل إلى 30-50٪ أو أكثر من السكان العالمإلحاق أضرار جسيمة بصحة واقتصاد البلدان. تعود الأوصاف الأولى لأوبئة الإنفلونزا إلى القرنين الثاني عشر والرابع عشر. يحدث حدوث الأوبئة والأوبئة الكبرى بسبب فيروس الأنفلونزا من النوع A ، والذي يرجع إلى التباين الكبير للفيروس ويرتبط بظهور نوع فرعي جديد نتيجة تحول المستضد.

بين الأوبئة ، يحدث تفشي الأوبئة كل 1.5 إلى 2 سنوات ، وهو ما يرتبط بانجراف الفيروسات المستضدي. في عام 1918 ، كان جائحة الأنفلونزا الإسبانية (أصيب 1.5 مليار شخص بالمرض ، وتوفي 20 مليون شخص) سببه فيروس الإنفلونزا A1 ، والذي تم تسجيله بشكل أساسي في إسبانيا ، وقد غطى هذا الوباء جميع سكان الأرض تقريبًا ؛ وقد تميز المرض بتطور شديد للغاية الالتهاب الرئوي النزفيبمعدل وفيات قياسي (يصل إلى 1٪ من جميع الحالات).

في عام 1957 ، كان الوباء "الآسيوي" (مرض 2 مليار شخص) سببه نوع فرعي جديد - النوع الفرعي A2. في عام 1968 ، كان جائحة "هونج كونج" (مرض مليار شخص) سببه نوع فرعي ظهر حديثًا - نوع فرعي A3. كقاعدة عامة ، يزيح نوع جديد من الفيروسات تنوعًا متداولًا سابقًا من البشر.

ولكن في عام 1977 ، بعد انقطاع دام 20 عامًا ، "عاد" النوع A1 بشكل غير متوقع ، مما أدى إلى انتشار وباء كبير. وبالتالي ، فإن المتغيرات المكبوتة لفيروس الأنفلونزا تستمر ، وفي فترات زمنية معينة ، يمكن أن تتسبب مرة أخرى في حدوث وباء. يسبب فيروس النوع B أوبئة محلية ، بينما النوع C لا يسبب الأوبئة. التسبب وعيادة المرض. بوابة الدخول هي الجهاز التنفسي العلوي. يغزو الفيروس الخلايا الظهارية للغشاء المخاطي ويتكاثر فيها.

يتسبب تأثير الفيروس على الخلايا الظهارية في نخرها وتقشر (رفض) الظهارة ، ونتيجة لذلك يصبح الغشاء المخاطي نافذًا للفيروسات والبكتيريا. إنها تخترق الدم وتنتشر في جميع أنحاء الجسم ". يصاحب الفيرميا آفات متعددة في البطانة الشعرية مع زيادة نفاذية لها.

في الحالات الشديدة ، هناك نزيف واسع النطاق في الرئتين ، عضلة القلب ، أعضاء متني. منتجات اضمحلال الخلايا التالفة والبروتينات الفيروسية لها تأثير سامعلى مختلف الأجهزة وأنظمة الأعضاء. تضغط سموم الفيروس بشدة على الجهاز العصبي المركزي ، وعلى الرغم من أن العملية لا تدوم طويلاً (3-5 أيام) ، يظل المريض ضعيفًا لفترة طويلة وأي عدوى ثانوية تنضم إلى الجسم الضعيف وتظهر المضاعفات: التهاب رئوي إنفلونزا و وذمة حادةالرئتين وتلف الكلى والقلب والشعب الهوائية.

المضاعفات الشائعة للإنفلونزا هي الالتهاب الرئوي الجرثومي (المكورات العقدية من المجموعة ب). خلال جائحة الأنفلونزا الإسبانية ، مات الناس بشكل رئيسي من التهاب رئوي جرثومي ثانوي.

في التسبب في الإنفلونزا ، ليس التسمم مهمًا فحسب ، بل أيضًا الحساسية ، بالإضافة إلى انتهاك الخصائص الوظيفية للخلايا المؤهلة للمناعة مع تطور نقص المناعة. فترة الحضانة- عدة ساعات - 1-3 أيام. تتميز ببداية حادة ، حمى تصل إلى 37.5 - 38 درجة مئوية ، تسمم عام ، يعبر عن توعك ، صداع ، ألم في مقل العيون, العمليات الالتهابيةالجهاز التنفسي متفاوتة الخطورة (التهاب الأنف ، التهاب الحنجرة ، القصبات ، التهاب البلعوم).

الحالة المحمومة مع الأنفلونزا بدون مضاعفات تدوم من 5 إلى 6 أيام. حصانة. بعد المرض ، يتم تكوين مناعة خاصة بالنوع والسلالة ، والتي يتم توفيرها بواسطة عوامل خلطية وخلطية محددة وغير محددة. أهمية عظيمةلديك أجسام مضادة Ig A. لا تتطور المناعة المتقاطعة ، بعد الإصابة بالإنفلونزا من النوع A1 ، يمكن أن تصاب بالإنفلونزا من النوع A2 ، إلخ. بعد فيروس من نوع المناعة - 1-2 سنوات ، بعد فيروس من النوع B - 3-5 سنوات.

سلبي مناعة طبيعية- في الأطفال حتى سن 8 - 11 شهرًا. بسبب التباين العالي في مستضدات الفيروس ، فإن الشفاء لا يؤدي إلى تطوير مناعة ثابتة ضد العدوى مرة أخرى.

التشخيصات المخبرية. المواد قيد الدراسة: مسحات - بصمات من الغشاء المخاطي للأنف ، إفرازات بلعومية ، قطع من الرئتين ، دماغ في حالة النتائج المميتة.

طرق التشخيص: 1) طريقة تنظير الأنف الخلوي - الكشف عن شوائب داخل الخلايا خاصة بالفيروس - عند تلطيخها بالبيوكتانين تحت المجهر ، تظهر شوائب حمراء زاهية لفيروس الأنفلونزا في خلايا الظهارة الهدبية ؛ 2) الطريقة الفيروسية - عزل فيروس الأنفلونزا عن جسم الإنسان عن طريق إصابة أجنة الدجاج بغسل البلعوم الأنفي للمريض ؛ يتم تنفيذ دلالة (وجود) الفيروس باستخدام RGA (فيروسات الأنفلونزا تتراكم كريات الدم الحمراء للإنسان والحيوانات المختلفة) ، ويتم تحديد الفيروس على مراحل: يتم تحديد النوع في RSC ، ويتم تحديد النوع الفرعي hemagglutinin في يتم تحديد RTGA ، والنوع الفرعي للنيورامينيداز في تفاعل تثبيط نشاط الإنزيم ؛ 3) الطريقة المصلية - الكشف عن زيادة في العيار (4 مرات) من الأجسام المضادة المحددة في مصل دم المريض باستخدام RSK ، RTGA ، PH في زراعة الخلايا ، تفاعل ترسيب الهلام ، ELISA ؛ 4) الطريقة البيولوجية - إصابة الفئران داخل الأنف - إدخال مادة إلى الرئتين تحت تأثير التخدير بالإيثر ؛ تموت الفئران بعد 2-3 أيام نتيجة للالتهاب الرئوي. 5) التشخيص السريع - الكشف عن المستضد الفيروسي باستخدام RIF.

العلاج والوقاية.

للوقاية والعلاج في الأيام الأولى من المرض ، يتم استخدام مضاد للفيروسات الكريات البيض البشرية (داخل الأنف). في أغراض طبيةاستعمال الأدوية المضادة للفيروسات- ريمانتادين (الأنفلونزا من النوع أ) ، أدابرومين ، فيرازول وأدوية معدلة للمناعة - ديبازول ، بروديجيوسان ، ليفوميزول.

في الإنفلونزا الشديدة ، وخاصة عند الأطفال ، يتم استخدام الغلوبولين المناعي المضاد للأنفلونزا من المانحين ، وكذلك الأدوية - مثبطات البروتياز الخلوية (gordox ، contrical ، aminocaproic acid).

منع خاص. يتم استخدام الأدوية المضادة للفيروسات ومعدلات المناعة ، وكذلك اللقاحات الحية والمعطلة: 1) اللقاحات الأحادية الحية من أجل تناوله عن طريق الفم- سلالات الفيروسات الموهنة المنتشرة حالياً (A1 و A3 و B) ؛ تظهر أكبر مناعة. 2) لقاحات الفيروس الكامل من سلالات خبيثة معطلة بالفورمالديهايد أو الأشعة فوق البنفسجية ؛ 3) لقاحات أنفلونزا الوحدة الفرعية فقط من المستضدات السطحية - مستضدات HA و NA (لها تفاعل ضئيل).

للحصول على اللقاحات ، تزرع الفيروسات في أجنة الكتاكيت وفي زراعة خلايا أجنة الكتاكيت.

مع إدخال لقاحات محلية و الحصانة الخلطية. يتم التطعيم خلال فترات الخطر الأكبر لتطور الأوبئة. هو أكثر ملاءمة للشباب وكبار السن. يتطلب استخدام اللقاحات المقتولة إعادة التطعيم السنوية ؛ كفاءتها لا تتجاوز 60-70٪.

لان نظرًا لأن الاختلافات المستضدية للعامل الممرض غالبًا ما يتم ملاحظتها ، فلا يمكن تحديد مجموعة مستضدات الفيروس المقابل للتحصين إلا بعد ظهور الفاشية.

التذكرة 15.

تفاعل التراص الدموي (RGA).

في المختبر ، يتم استخدام تفاعلين مختلفين عن التراص الدموي.

يشير RGA الأول إلى السيرولوجي. في هذا التفاعل ، تتراكم كريات الدم الحمراء عند التفاعل مع الأجسام المضادة المقابلة (هيماجلوتينين).

يستخدم التفاعل على نطاق واسع لتحديد فصائل الدم.

RHA الثاني ليس مصلي. في ذلك ، لا يسبب تراص كريات الدم الحمراء

الأجسام المضادة ، ولكن المواد الخاصة التي تشكلها الفيروسات. على سبيل المثال ، يتراكم فيروس الأنفلونزا على كريات الدم الحمراء للدجاج والخنازير الغينية ، وفيروس شلل الأطفال يتراكم في كريات الدم الحمراء في الأغنام. هذا التفاعل يجعل من الممكن الحكم على وجود فيروس معين في مادة الاختبار.

يتم إجراء التفاعل في أنابيب اختبار أو على ألواح خاصة بها آبار.

يتم تخفيف المادة المراد اختبارها بحثًا عن وجود الفيروس بمحلول متساوي التوتر من 1:10 إلى 1: 1280 ؛ يتم خلط 0.5 مل من كل تخفيف مع حجم متساوٍ من 1-2٪ تعليق كريات الدم الحمراء. في عنصر التحكم ، يتم خلط 0.5 مل من كريات الدم الحمراء مع 0.5 مل من محلول متساوي التوتر. توضع أنابيب الاختبار في منظم الحرارة لمدة 30 دقيقة ، وتترك الألواح في درجة حرارة الغرفة لمدة 45 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج.مع النتيجة الإيجابية للتفاعل في قاع أنبوب الاختبار أو البئر ، تسقط رواسب من كريات الدم الحمراء ذات الحواف الصدفية ("المظلة") تغطي قاع البئر بالكامل.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

إذا كانت النتيجة سلبية ، فإن كريات الدم الحمراء تشكل راسبًا كثيفًا بحواف ناعمة ("زر"). يجب أن يكون نفس الراسب تحت السيطرة.

يتم التعبير عن شدة التفاعل بعلامات "+". عيار الفيروس هو أقصى تخفيف للمادة التي يحدث فيها التراص.

تفاعل تثبيط التراص الدموي

هذا تفاعل مصلي تتفاعل فيه أجسام مضادة معينة للفيروسات ، تتفاعل مع الفيروس (مستضد) ، وتحييده وتحرمه من القدرة على تكتل خلايا الدم الحمراء ، أي.

ه - تمنع تفاعل التراص الدموي. يتيح لك هذا التفاعل تحديد نوع الفيروسات ونوعها.

وضع رد الفعل.يتم خلط 0.25 مل من المصل المضاد للفيروسات مع كمية متساوية من المواد المحتوية على الفيروس. يُرج الخليط ويوضع في منظم حرارة لمدة 30 دقيقة ، وبعد ذلك يضاف 0.5 مل من تعليق كريات الدم الحمراء بنسبة 1-2٪.

المحاسبة عن النتائج.مع الإعداد الصحيح للتجربة في التحكم في المصل وخلايا الدم الحمراء ، يجب أن يتكون "زر" - لا يوجد عامل تراص في كريات الدم الحمراء ؛ في التحكم في المستضد ، يتم تشكيل "مظلة" - تسبب الفيروس في تراص كريات الدم الحمراء.

إذا كان المصل متماثلًا مع الفيروس الذي تتم دراسته ، يتم تكوين "زر" - حيث قام المصل بتحييد الفيروس.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر

يعتمد تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RIHA) على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، إذا تم امتصاص مستضد قابل للذوبان على سطحها ، تكتسب القدرة على التراص عند التفاعل مع الأجسام المضادة للمستضد الممتص.

وضع رد الفعل.

يسخن المصل لمدة 30 دقيقة عند 56 درجة مئوية ، ويخفف بالتتابع بنسبة 1:10 - 1: 1280 ويصب في أنابيب الاختبار أو الآبار في 0.25 مل ، ثم تضاف قطرتان من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها.

ضوابط:تعليق كريات الدم الحمراء مع مستضدات كثف عليها بمصل مناعي واضح ، تعليق من كريات الدم الحمراء مع مستضدات ممتصة عليها بمصل طبيعي ؛ ايقاف عن العمل كريات الدم الحمراء الطبيعيةمع المصل المختبَر.

في التحكم الأول ، يجب أن يحدث التراص ، في الثانية والثالثة لا ينبغي أن يحدث.

أسئلة الاختبار.

1. ما الذي تشير إليه نتيجة RGA الإيجابية بين كريات الدم الحمراء والمواد المختبرة لوجود الفيروس؟

2. هل سيحدث تفاعل تراص كريات الدم الحمراء إذا تمت إضافة الفيروس والمصل المقابل لهم؟

ما اسم رد الفعل الذي يكشف هذه الظاهرة؟

عمل عملي 12.

تفاعل مكمل ملزم.

يعتمد تفاعل الارتباط التكميلي (RCT) على حقيقة أن مركبًا محددًا من الجسم المضاد-المستضد يقوم دائمًا بامتصاص (الروابط) المتممة على نفسه.

يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع في تحديد المستضدات والتشخيص المصلي للعدوى ، خاصة الأمراض التي تسببها اللولبيات (تفاعل واسرمان) ، الريكتسيات والفيروسات.

PCS هو تفاعل مصلي معقد.

إنه يشتمل على مكمل ونظامين للأجسام المضادة للمستضد. في الأساس ، هذان نوعان من التفاعلات المصلية.

يتكون النظام الأساسي الصحيح من مستضد وجسم مضاد (أحدهما معروف والآخر غير معروف). يتم إضافة كمية معينة من المكمل إليها. إذا تطابق المستضد والجسم المضاد لهذا النظام ، فسيقومان بالاتصال وربط المجاملة. المجمع الناتج مشتت بدقة وغير مرئي.

يُعرف تكوين هذا المركب بمساعدة نظام انحلالي ثانٍ أو نظام مؤشر.

ويشمل كريات الدم الحمراء في الأغنام (مستضد) ومصل الدم الانحلالي المقابل (الجسم المضاد) ، أي مركب مناعي جاهز. في هذا النظام ، يمكن أن يحدث تحلل كرات الدم الحمراء فقط في وجود مكمل. إذا كان المكمل مرتبطًا بالنظام الأول ، فلن يكون هناك انحلال دم في النظام الثاني ؛

لا يوجد مكمل مجاني. يتم تسجيل غياب انحلال الدم (محتويات الأنبوب غائم أو توجد رواسب كريات الدم الحمراء في قاع الأنبوب) كنتيجة إيجابية لـ RSK.

إذا كان المستضد في النظام الأول لا يتوافق مع الجسم المضاد ، فلن يتشكل المركب المناعي وسيظل المجمل مجانيًا. يبقى مجملًا مجانيًا ، ويشترك في النظام الثاني ، مما يتسبب في انحلال الدم ، ونتيجة RSK سلبية (محتويات الأنابيب شفافة - "دم ورنيش").

المكونات ، تفاعلات التثبيت التكميلية:

المستضد - عادة ما يكون محللًا ، أو مستخلصًا ، أو ناشئًا ،

أقل في كثير من الأحيان تعليق الكائنات الحية الدقيقة.

2. الجسم المضاد - مصل المريض.

3. مكمل - مصل خنزير غينيا.

مستضد - كريات الدم الحمراء في الأغنام.

5. الجسم المضاد - الهيموليسين لكريات الدم الحمراء في الأغنام.

6. محلول متساوي التوتر.

في ضوء حقيقة أن RSC تشارك عدد كبير منمكونات معقدة ،

يجب معايرتها مسبقًا وإدخالها في التفاعل بكميات دقيقة وبأحجام متساوية: 0.5 أو 0.25 مل ، أقل من 0.2 أو 1.25 أو 1.0 مل (تعطي الأحجام الأكبر نتيجة أكثر دقة). يتم إجراء معايرة مكونات التفاعل بنفس حجم التجربة ، مع استبدال المكونات المفقودة بمحلول متساوي التوتر.

معلومات ذات صله:

بحث الموقع:

يعتمد على حقيقة أن كريات الدم الحمراء ، التي يتم فيها امتصاص المستضدات مسبقًا ، تكتسب القدرة على التراص في وجود الأمصال المتجانسة (الأجسام المضادة).

في هذه الحالة ، تلعب كريات الدم الحمراء دور الناقلات ذات المحددات المحددة ، والتي يحدث تراصها نتيجة تفاعل المستضد + الجسم المضاد.

تسمى كريات الدم الحمراء ، بالسطح الذي ترتبط به المستضدات بشدة ، بتشخيص مستضد كريات الدم الحمراء ، أو كريات الدم الحمراء المحسوسة بواسطة مستضد.

يتم امتصاص نوع آخر من الأجسام المضادة RNHA على سطح كريات الدم الحمراء ويحدث تراصها اللاحق في وجود مستضد متماثل.

في هذه الحالة ، تسمى كريات الدم الحمراء بتشخيص الأجسام المضادة ، أو كريات الدم الحمراء التي تتحسس بواسطة الأجسام المضادة.

على أساس هذين النهجين المنهجيين الأساسيين ، تم تطوير العديد من التعديلات على RNGA ويتم استخدامها. لذلك ، يتم استخدام جزيئات اللاتكس القياسية الصغيرة كناقلات.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (HITA)

في هذه الحالة ، يُسمى التفاعل تفاعل تراص اللاتكس (RLA) أو المكورات العنقودية الذهبية - تفاعل التراص ، إلخ. عادةً ، يتم تحضير تشخيصات كريات الدم الحمراء في مؤسسات الصناعة البيولوجية ، ويتم بالفعل تعيين تجربة RNGA الرئيسية في مختبرات التشخيص.

يتضمن إعداد تشخيص كرات الدم الحمراء الخطوات التالية:

• تثبيت كريات الدم الحمراء مع الفورمالديهايد أو الجلوتاريك أو الألدهيدات الأكريليكية.

  يتم تخزين كريات الدم الحمراء المعالجة لفترة طويلة. في كثير من الأحيان ، تستخدم كريات الدم الحمراء للأغنام والبشر والدجاج وما إلى ذلك لهذا الغرض ؛

• علاج كريات الدم الحمراء الثابتة بمحلول التانين. نتيجة لذلك ، تكتسب كريات الدم الحمراء خاصية امتصاص البروتينات بشكل لا رجعة فيه (الفيروسات والأجسام المضادة) على سطحها ؛
• توعية كريات الدم الحمراء المدبوغة بالفيروسات أو الأجسام المضادة.

وتجدر الإشارة إلى أن طرق تحضير تشخيص الكريات الحمر اصابات فيروسيةمختلف.

تقنية إعداد RNHA لاكتشاف وتحديد عيار الجسم المضاد هي كما يلي:

• إضافة جرعات متساوية من كريات الدم الحمراء المحسوسة بواسطة المستضد إلى التخفيفات المتتالية ذات الضعفين ؛
• يُترك الخليط لمدة 2-3 ساعات في درجة حرارة الغرفة أو لمدة 16-18 ساعة عند 4 درجات مئوية ؛
• تأخذ في الاعتبار النتائج.

  إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة للفيروس الذي تم تحسس كريات الدم الحمراء به ، يتم ملاحظة التراص الدموي ، والذي يتم تقييمه في التهجينات.

يتم أخذ عيار الجسم المضاد في الدم على أنه أعلى تخفيف للمصل الذي لا يزال يوفر التراص الدموي بواسطة تهجينين على الأقل.

RNGA مصحوب بجميع الضوابط ذات الصلة. عادة ما يضعون التفاعل بالطريقة الدقيقة.

تسمح RNHA بحل المهام التشخيصية التالية:

• الكشف عن الأجسام المضادة وتحديد عيارها في مصل الدم باستخدام تشخيص مستضد معروف لكريات الدم الحمراء ؛
• الكشف عن فيروس غير معروف والتعرف عليه باستخدام تشخيص معروف للجسم المضاد لكريات الدم الحمراء.

مزايا RNGA: حساسية عالية ، سهولة في تقنية الضبط والاستجابة السريعة.

ومع ذلك ، من المهم ملاحظة أن هناك صعوبات كبيرة في إعداد تشخيصات كريات الدم الحمراء المستقرة (اعتماد كبير على نقاء المكونات المستخدمة ، والحاجة إلى تحديد طريقة التثبيت ، ودباغة ، وتوعية كريات الدم الحمراء لكل نوع من أنواع الفيروسات) .

إذا وجدت خطأً ، فيرجى تحديد جزء من النص والضغط على Ctrl + Enter.

في تواصل مع

زملاء الصف

يستخدم كريات الدم الحمراء أو المواد الاصطناعية المحايدة (على سبيل المثال ، جزيئات اللاتكس) ، والتي يتم امتصاص المستضدات (البكتيرية ، الفيروسية ، الأنسجة) أو الأجسام المضادة على سطحها.

يحدث تراصها عند إضافة الأمصال أو المستضدات المناسبة. تسمى كرات الدم الحمراء المحسّسة بالمستضدات تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية وتستخدم للكشف عن الأجسام المضادة ومعايرتها. كريات الدم الحمراء التي تتحسس بواسطة الأجسام المضادة. تسمى تشخيص الغلوبولين المناعي كرات الدم الحمراء وتستخدم للكشف عن المستضدات.

يستخدم تفاعل التراص الدموي السلبي لتشخيص الأمراض التي تسببها البكتيريا (حمى التيفود والنظيرة التيفية ، الزحار ، الحمى المالطية ، الطاعون ، الكوليرا ، إلخ) ، البروتوزوا (الملاريا) والفيروسات (الأنفلونزا ، التهابات الفيروس الغدي, التهاب الكبد الفيروسي B ، والحصبة ، والتهاب الدماغ الذي ينقله القراد ، وحمى القرم النزفية ، وما إلى ذلك) ، وكذلك لتحديد هرمونات معينة ، وتحديد فرط الحساسيةمريض ل أدويةوالهرمونات مثل البنسلين والأنسولين.

تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA).

يعد اختبار التراص الدموي السلبي طريقة حساسة التشخيص المصليويستخدم للتشخيص المبكر والتشخيص بأثر رجعي ، وكذلك لتحديد الحالة المناعية للتلقيح. في المرضى الذين يعانون من مرض التولاريميا ، عادةً ما يتم اكتشاف الأجسام المضادة في نهاية الأسبوع الأول أو الثاني من المرض ، بعد 1-1.5 شهرًا يصل عيار TPHA إلى قيمه القصوى (1: 100.000 - 1: 20.000 ، أقل غالبًا) ، وبعد ذلك ينخفضون عند المستوى 1: 100-1: 200 المحفوظ وقت طويل.

في التطعيم ، يتم أيضًا اكتشاف الأجسام المضادة باستمرار ، ومع ذلك ، في التتر المنخفض ، لا يتجاوز 1: 2000-1: 5000 1-1.5 شهرًا بعد التطعيم ، فإنها تبقى لعدة سنوات عند مستوى منخفض 1: 20-1: 80.

يعمل تشخيص التولاريميا (مستضد) كمستضد لتحديد RPHA.

الدواء عبارة عن كريات الدم الحمراء في الكبش فورمالين محسّسة بمستضد التولاريميا ، المتوفر في صورة سائلة وجافة. دواء سائل- 10٪ معلق من كريات الدم الحمراء في محلول فورمالين بتركيز 10٪. المستحضر المجفف بالتجميد الجاف - معلق بالمجفف بالفراغ بنسبة 10٪ من كريات الدم الحمراء بدون مادة حافظة. قبل الاستخدام ، يتم تخفيفه وفقًا للإرشادات الموجودة على الملصق. لإعداد التفاعل في ألواح البوليسترين ، يتم استخدام كلا المستحضرين بتركيز 2.5٪ ، وعند إعداد التفاعل في أحجام ميكروية بتركيز 0.5٪.

تقنية إعداد RPGA.

يتم تخفيف مصل الاختبار بمحلول ملحي 1: 5 (1:10) وتسخينه عند 56 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.

تفاعل التراص الدموي (RHA) و

بعد ذلك ، من أجل إزالة الأجسام المضادة غير المتجانسة لكريات الدم الحمراء ، يتم علاج الأمصال بتعليق بنسبة 50٪ من كريات الدم الحمراء في الكبش. للقيام بذلك ، تضاف كريات الدم الحمراء بمعدل قطرتين (0.05 مل) لكل 1 مل من المصل وتُخلط جيدًا بالرج.

يُترك المصل حتى اكتمال ترسيب كريات الدم الحمراء ، أو يُطرد بعد ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يصبح جاهزًا للبحث.

يُسكب سائل التخفيف بحجم 0.5 مل في عدد من الآبار في لوح البوليسترين.

في دراسة أولية للمصل ، يُنصح باختبارها عن طريق إعداد التفاعل في صف قصير من اللوحة (6 ثقوب). في حالة الكشف عن الأجسام المضادة في سلسلة قصيرة من الأمصال ، يتم إعادة فحص الأمصال في سلسلة طويلة من التخفيفات (12 بئراً).

بعد سكب السائل المخفف ، يضاف 0.5 مل من مصل الاختبار بتخفيف 1: 5 إلى البئر الأول من كل صف (قصير أو طويل). ثم ، في نفس الأحجام ، يتم معايرة المصل بتخفيفات مضاعفة. وبالتالي ، يتم الحصول على تخفيفات المصل في سلسلة قصيرة من 1:10 إلى 1: 320 ، وفي سلسلة طويلة - من 1:10 إلى 1: 20480. بعد معايرة المصل ، يتم إضافة قطرة واحدة (0.05 مل) من محلول معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء إلى كل بئر.

تهتز محتويات الألواح تمامًا حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. تُترك الألواح في درجة حرارة الغرفة على سطح ثابت من الطاولة. يتم إجراء التسجيل الأولي للتفاعل بعد 2-3 ساعات ، ويتم التحديد النهائي للعيار بعد الترسيب الكامل لكريات الدم الحمراء في الآبار. يتم توفير الضوابط التالية للتفاعل: 1) اختبار المصل بتخفيف 1:10 في حجم 0.5 مل + 1 قطرة من 2.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء غير الحساسة. 2) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + قطرة واحدة من محلول 2.5٪ من كريات الدم الحمراء غير الحساسة ؛ 3) سائل مخفف بحجم 0.5 مل + قطرة واحدة من محلول 2.5٪ من كريات الدم الحمراء المحسسة.

يجب أن تعطي جميع عناصر التحكم رد فعل سلبيًا واضحًا.

محاسبة وتقييم RPGA. يتم تقييم التفاعل وفقًا للمخطط التالي:

1) بشكل حاد رد فعل إيجابي(++++) - تسقط كريات الدم الحمراء في قاع البئر في طبقة موحدة على شكل "مظلة" ، والتي غالبًا ما يكون لها حواف صدفي ؛

2) رد فعل إيجابي (+++) - تغطي كريات الدم الحمراء ما لا يقل عن 2/3 من قاع الحفرة ؛

3) رد فعل إيجابي ضعيف (++) - التراص صغير ويقع في وسط الحفرة ؛

4) رد فعل مشكوك فيه (+) - توجد حبيبات منفصلة من التراص حول رواسب كرات الدم الحمراء في مركز الحفرة ؛

5) سالب (-) - في الجزء السفلي من الحفرة ، تستقر كريات الدم الحمراء على شكل "زر" أو حلقة صغيرة ذات حواف ناعمة ومحددة بشكل حاد.

يتم أخذ عيار المصل في الاعتبار وفقًا للتخفيف المصل الأخير ، والذي أعطى تفاعلًا واضحًا جدًا (ثلاث إيجابيات على الأقل).

يعتبر التخفيف بنسبة 1: 100 وما فوق عيارًا تشخيصيًا ، ومع ذلك ، كما في حالة التهاب المفاصل الروماتويدي ، من الضروري مراقبة زيادته.

TPHA في التولاريميا محدد تمامًا ويكتشف بعض التفاعلات المتصالبة فقط مع مصل الحمى المالطية. تشخيص متباينممكن من خلال ارتفاع التتر في TPHA ، والتي تكون أعلى بكثير مع مستضد متماثل.

تقنية ضبط RPHA في أحجام صغيرة.

يمكن إجراء RPHA في أحجام ميكروية باستخدام جهاز ميكروتر من نوع Takachi (أو ألواح ميكروترية مستديرة ذات قاع مع ماصات دقيقة) ، مما يسمح بمعايرة المواد بأحجام 25 ميكرولتر و 50 ميكرولتر. تقنية إعداد التفاعلات ، تسلسل جميع العمليات هو نفسه كما في الدراسة في ألواح البوليسترين. ومع ذلك ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أن حساسية الطريقة الدقيقة عادة ما تكون لكل تخفيف (أي

2 مرات) أقل من الطريقة الكبيرة.

لإعداد التفاعل في ميكروتر باستخدام قطارة ماصة ، يتم إدخال سائل مخفف في كل بئر بحجم 50 ميكرولتر. ثم ، باستخدام أجهزة معايرة برأس 50 ميكرولتر ، يتم أخذ مصل الاختبار عن طريق غمر الرأس فيه.

تأكد من أن السائل قد ملأ رأس جهاز المعايرة. يتم نقل جهاز معايرة المصل إلى البئر الأول والاحتفاظ به الوضع الرأسي، قم بإجراء عدة حركات دورانية في كلا الاتجاهين. ثم يتم نقل جهاز المعايرة إلى البئر التالي وتكرار المعالجة. يمكن إجراء المعايرة بالتحليل الحجمي في وقت واحد في عدة صفوف. بعد معايرة الصف بأكمله ، يتم غسل جهاز المعايرة بالماء المقطر (مع تغيير جزئين) عن طريق الحركات الدورانية ، ويتم إزالة الماء من الرأس بمسحة وإحراقه على لهب الموقد.

بعد المعايرة ، يضاف 25 ميكرولتر من تشخيص كريات الدم الحمراء إلى الآبار.

يجب أن يكون تركيز التشخيص لـ RPHA في الأحجام الدقيقة 0.5٪ (أي 2.5٪ معلق من كريات الدم الحمراء يخفف 5 مرات). بعد إضافة كريات الدم الحمراء ، يجب اهتزاز الصفائح برفق حتى يتم الحصول على تعليق متجانس. يمكن تسجيل النتائج بالفعل بعد 1-1.5 ساعة ، وهي ميزة مهمة لـ RPHA في جهاز ميكروتيتير.

بالإضافة إلى ذلك ، تتطلب هذه الطريقة كمية صغيرة من جميع مكونات التفاعل ومصل الاختبار.

يتم احتساب رد الفعل على النحو التالي:

1) "+" - التراص الدموي الكامل ، حيث تسقط كريات الدم الحمراء في قاع البئر في طبقة موحدة على شكل "مظلة" ، تحتل ثلثي القاع على الأقل ؛

2) "+ -" - التراص الدموي الجزئي ، حيث تسقط كريات الدم الحمراء في القاع على شكل حلقة فضفاضة ذات حجم صغير ؛

3) "-" - غياب التراص الدموي ، عندما تسقط كريات الدم الحمراء إلى الأسفل على شكل زر صغير أو حلقة بحافة ملساء.

يمكن اختبار خصوصية النتيجة الإيجابية التي تم الحصول عليها في TPHA باستخدام تفاعل ثلاثي المكونات - تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي (RPHA).

تقنية إعداد RTPGA.

تم ضبط رد الفعل هذا لتأكيد خصوصية النتيجة الإيجابية لـ RPHA عندما تكون موضع شك أو ذات أهمية وبائية خاصة. تتكون آلية التفاعل من تثبيط محدد للتراص الدموي عند إضافة تعليق لبكتيريا التولاريميا المقتولة إلى مصل الاختبار. تتفاعل ثلاثة مكونات في التفاعل: مصل الاختبار ، ومستضد التولاريميا المحدد ، ومستضد كريات الدم الحمراء التشخيصية المستضدية RTPGA توضع عادة في صف من 7-8 آبار.

يُنصح بتثبيت RPHA ثانٍ بالتوازي مع RTPGA. يسكب 0.25 مل من السائل المخفف في صفين من الآبار ، ثم يضاف مصل الاختبار بحجم 0.25 مل إلى الآبار الأولى من كلا الصفين ويتم معايرته ، ويتم الحصول على صفين متطابقين من التخفيفات المصلية. أضف 0.25 مل من سائل التخفيف إلى جميع آبار الصف الثاني ، و 0.25 مل من معلق بكتيريا التولاريميا إلى آبار الصف الأول.

يستخدم تشخيص التولاريميا (يحتوي على 25 مليار بكتيريا تولاريميا لكل 1 مل) ، مخفف مسبقًا 50 مرة.

يحتوي هذا المعلق على 500 مليون بكتيريا في 1 مل أو 125 مليون بحجم 0.25 مل. بعد إضافة المستضد ، تُترك اللوحة لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك تُضاف قطرة واحدة (0.05 مل) من تشخيص خلايا الدم الحمراء إلى جميع الآبار في كلا الصفين ، وتُهتز اللوحة وتُترك على سطح مستوٍ من الطاولة.

تتم المحاسبة في 2-3 ساعات.

محاسبة وتقييم RTPGA. إذا كان مصل الاختبار يحتوي على أجسام مضادة معينة للتولاريميا ، فسيتم تحييدها بواسطة المستضد المضاف ولن يحدث التراص الدموي في الصف الأول من الآبار ، أو مع وجود عيار مصل مرتفع ، سيتم ملاحظة التراص الدموي في عدد (2-4) آبار أقل مما هو عليه في الصف مع TPHA. في هذه الحالة ، يتم تأكيد خصوصية النتائج.

إذا لوحظ التراص الدموي في كلا الصفين ، أي تتزامن نتائج RTHA و RPHA ، وهذا يشير إلى عدم وجود الأجسام المضادة لمرض التولاريميا في مصل الاختبار. في هذه الحالة ، تعتبر النتيجة الأولية لـ RPHA غير محددة.

تقنية لضبط RTPGA بأحجام دقيقة. يمكن إجراء RTHA ، وكذلك RPHA ، في أحجام ميكروية باستخدام جهاز ميكروتيتر من نوع Takachi.

للقيام بذلك ، يضاف 0.25 ميكرولتر من السائل المخفف إلى آبار الألواح الدقيقة في صفين من 7-8 آبار لكل منهما. بعد ذلك ، بمساعدة جهاز معايرة ، يتم تسجيل 0.25 ميكرولتر من مصل الاختبار ومعايرته في كلا الصفين. بعد ذلك ، يضاف 25 ميكرولتر من مستضد التولاريميا (تركيز 500 مليون من بكتيريا التولاريميا في 1 مل) إلى كل بئر في الصف الأول ، و 25 ميكرولتر من السائل المخفف في الصف الثاني.

تُترك الألواح لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة ، وبعد ذلك يُضاف 25 ميكرولتر من تشخيص خلايا الدم الحمراء المستضدية (تركيز 0.5٪) إلى جميع الآبار في كلا الصفين.

يتم إجراء المحاسبة وتقييم النتائج بشكل مشابه للتفاعل في الأحجام الكبيرة.

تاريخ النشر: 2015/02/03 ؛ قراءة: 3176 | انتهاك حقوق النشر الصفحة

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0.003 ثانية) ...

التخثر

التراص الدموي(من اليونانية háima blood and lat. agglutinatio glue) ، الالتصاق وتساقط كرات الدم الحمراء تحت تأثير البكتيريا والفيروسات والسموم وما إلى ذلك ، القادرة على الامتصاص على سطح كريات الدم الحمراء ، وكذلك hemagglutinins. يمكن أن تتراكم كريات الدم الحمراء لحيوان ما بمصل آخر بسبب وجود إيزوهماجلوتينين طبيعي (أجسام مضادة) فيه. بمساعدة رد الفعل ج.تثبيت . ظاهرة ج.تستخدم في الدراسات الميكروبيولوجية والمناعية.

يميز بين المباشر ، أو النشط ، أو غير المباشر ، أو السلبي ، ج.مستقيم ج.بسبب التأثير المباشر للعوامل البكتيرية والفيروسية على كريات الدم الحمراء. في الوقت نفسه ، تتفاعل الهيماجلوتينين مع مستقبلات طبيعة المخاطية الموجودة على سطح كريات الدم الحمراء بمساعدة إنزيم الموسينيز ، مما يتسبب في امتصاص المستضد. نتيجة لذلك ، يشكل تعليق كريات الدم الحمراء (على سبيل المثال ، الدجاج) راسبًا واسعًا على شكل مظلة ذات حواف غير متساوية. رد الفعل هذا ليس محددًا ، ويستمر دون مشاركة مصل المناعة. مباشرة ج.تستخدم في الدراسات المصلية ، ولا سيما في تحديد التخفيف العامل للمستضد المستخدم في تفاعل التثبيط ج.، والذي يعتمد على تأخير عمل التراص الدموي للمستضد بواسطة مصل المناعة المحدد. مباشرة ج.تستخدم أيضا للتشخيص التقريبي لبعض الأمراض الفيروسية (أنفلونزا الخيول ، طاعون الطيور ، مرض نيوكاسل ، أنفلونزا البط). غير مباشر ج.(RNHA) يعتمد على قدرة كريات الدم الحمراء المحسّسة (عن طريق امتصاص مستضد عليها) على التراص بأجسام مضادة متماثلة في مصل المناعة. بسبب الحساسية العالية والخصوصية غير المباشرة ج.يتم استخدامه لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية والبكتيرية والريكتسية. هناك العديد من التعديلات على غير المباشر ج.تفاعلات التثبيط والتأخير وتحييد الأجسام المضادة ، وما إلى ذلك بمساعدة RNHA وتعديلاته ، كل من الأجسام المضادة في مصل دم الحيوانات والبشر (عند استخدام كريات الدم الحمراء المحسّسة بمولد ضد معروف) والمستضد (عند استخدام كريات الدم الحمراء المحسّسة مع بعض الأجسام المضادة). للتفاعل ، يتم استخدام كريات الدم الحمراء المغسولة لأنواع حيوانية مختلفة (غالبًا كرات الدم الحمراء للأغنام والدجاج). تزداد قدرة كريات الدم الحمراء على امتصاص مستضدات جزيئية كبيرة ذات طبيعة بروتينية بعد معالجتها بالتانين. لزيادة العمر الافتراضي لكريات الدم الحمراء ، يتم حفظها مع الفورمالين. يمكن للتشخيصات التي يتم الحصول عليها من كريات الدم الحمراء الرسمية الاحتفاظ بنشاطها لفترة طويلة. في وجود تشخيصات كريات الدم الحمراء الجاهزة ، يتم تبسيط صياغة التفاعل إلى حد كبير. في الممارسة البيطرية ، يتم استخدام RNGA لتشخيص بعض الأمراض الحيوانية (الفيروسية بشكل أساسي) - طاعون الطيور الكلاسيكي ، ومرض نيوكاسل ، وجديري البقر ، وإنفلونزا الخيول ، وأنفلونزا الخنازير والبط ، وداء التيفوئيد - التيفوئيد للطيور ، وما إلى ذلك. انظر أيضًا.

المؤلفات:
البحوث المعملية في الطب البيطري ، M. ، 1971.
كتيب علم الأحياء الدقيقة و الطرق الفيروسيةبحث ، محرر. M. O. Birger الطبعة الثانية ، M. ، 1973.

طبيب بيطري - بيطري قاموس موسوعي. - م: "الموسوعة السوفيتية". رئيس التحرير V.P. شيشكوف. 1981 .

المرادفات:

شاهد ما هو "HEMAGGLUTINATION" في القواميس الأخرى:

التراص الدموي- التراص الدموي ... قاموس التدقيق الإملائي

التراص الدموي- قاموس الازدحام والتكتل من المرادفات الروسية. اسم التراص الدموي ، عدد المرادفات: 2 تراص (3) ... قاموس مرادف

التخثر- (من الترابط الدموي ... والترابط اللاتيني) الترابط وترسيب كريات الدم الحمراء المعلقة في سائل تحت تأثير عوامل مختلفة ، على سبيل المثال ، الأجسام المضادة أو البكتيريا أو الفيروسات. يستخدم اختبار التراص الدموي لتشخيص ... ... قاموس موسوعي كبير

التراص الدموي- عملية لصق كريات الدم الحمراء في مجاميع مرئية للعين المجردة. زاي سبب: 1) في كريات الدم الحمراء و Ag غير المتجانسة. 2) Ab to Ag ، غريب على كريات الدم الحمراء ، ممتز على سطحها (انظر تفاعل التراص الدموي السلبي) ؛ 3) ... قاموس علم الأحياء الدقيقة

التخثر- تخثر الدم ، تراص (تكتل) كريات الدم الحمراء عند مزجه مع مصل متماثل. إذا تم استبدال كريات الدم الحمراء البشرية بمصل نفس الشخص ، فسيتم الحصول على تعليق موحد عن طريق الاهتزاز. إذا كانت كريات الدم الحمراء لشخص واحد ... ... موسوعة طبية كبيرة

التراص الدموي- الظاهرة الكامنة وراء طريقة تحديد الأجسام المضادة ، بناءً على تراصها من كريات الدم الحمراء نتيجة الارتباط إما بمستضدات كريات الدم الحمراء نفسها ، أو بمستضدات أخرى مرتبطة بشكل مصطنع بسطح كريات الدم الحمراء. ... ... دليل المترجم الفني- (الهيم + تراص) تراص كريات الدم الحمراء ... قاموس طبي كبير

التراص الدموي- من اليونانية. هيما الدم واللات. agglutinatio agglutination) ، عملية التراص والترسيب اللاحق لخلايا الدم الحمراء ؛ التي تسببها الهيماجلوتينين (انظر. Hemagglutinins) والبكتيريا والفيروسات ، العوامل القادرة على الامتصاص على ... ... الموسوعة السوفيتية العظمى

التراص الدموي- التصاق (تراص) كريات الدم الحمراء. يتطور ، بما في ذلك نقل الدم غير المتوافق.

تفاعل التراص المباشر للميكروبات (RA). في هذا التفاعل ، تقوم الأجسام المضادة (agglutinins) مباشرة بتلصص المستضدات الجسدية (agglutanogens). عادة ما يتم تمثيلهم بتعليق الكائنات الحية الدقيقة المعطلة (تفاعل التراص الميكروبي). وفقًا لطبيعة التراص الناتج ، يتم تمييز التراص الحبيبي والقشاري. يحدث التراص الحبيبي عندما تلتصق الميكروبات المحتوية على مستضد O معًا. تتراكم البكتيريا التي تحتوي على سوط (مستضد H) لتشكيل رقائق كبيرة.

لتحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة ، يتم استخدام مصل التراص التشخيصي القياسي. يتم الحصول عليها عن طريق فرط المناعة لحيوانات المختبر مع تعليق البكتيريا. عيار هذا المصل هو أعلى تخفيف له ، حيث يتم ملاحظة تراص مميز للمستضد المقابل. ومع ذلك ، نظرًا لتعقيد التركيب المستضدي للبكتيريا ، تحتوي الأمصال التراصية على أجسام مضادة ليس فقط للأنواع المحددة ، ولكن أيضًا لمجموعة المستضدات ويمكن أن تعطي تراصًا جماعيًا مع الأنواع البكتيرية ذات الصلة. تكون عيارات الأجسام المضادة في المصل لمولدات المضادات الخاصة بالأنواع أعلى دائمًا من تلك الموجودة في مجموعة المستضدات. لإزالة الأجسام المضادة الخاصة بالمجموعة ، يتم إضافة الكائنات الحية الدقيقة التي تحتوي على مستضدات المجموعة بشكل تسلسلي إلى المصل (طريقة Castellani). تستخدم هذه الطريقة للحصول على الأمصال الممتصة ، والتي تحتوي على أجسام مضادة لنوع معين من الميكروبات.

طرق تفاعل التراص.الأكثر شيوعًا هي الصفيحة (الدلالة) والمنتشرة RA.

يتم وضع Lamellar RA على الزجاج. في هذا التفاعل ، يتم استخدام الأمصال مع تخفيف طفيف أو غير مخفف. يتم استخدامه كطريقة معجلة لاكتشاف الأجسام المضادة أو تحديد الكائنات الحية الدقيقة. يتم وضع قطرة من مصل الدم على الزجاج ، حيث يتم إدخال ثقافة غير معروفة من البكتيريا بحلقة ، مختلطة ، وبعد 2-3 دقائق ، لوحظ ظهور تراص دقيق الحبيبات أو قشاري. تستخدم قطرة للتحكم. محلول فيسولوجي، حيث لوحظ التعكر بعد إدخال البكتيريا. عند استخدام الأمصال غير الممتزجة ، يكون رد الفعل على الشريحة مجرد إرشادات.

يتم إجراء التهاب المفاصل الروماتويدي الموسع في أنابيب الاختبار أو آبار الألواح. في هذه الحالة ، يتم تخفيف المصل التشخيصي إلى عيار وتضاف كميات متساوية من المستضد. إذا كانت النتيجة موجبة ، يتم تشكيل راسب رخو على شكل "مظلة" في أسفل أنبوب الاختبار ؛ إذا كانت النتيجة سلبية ، يتم تشكيل راسب على شكل "زر". نظرًا لأن عيارات الأجسام المضادة الخاصة بالمجموعة في مصل الدم أقل بكثير من عيار الأجسام المضادة الخاصة بالأنواع المحددة ، يتم ملاحظة تفاعلات المجموعة فقط في التخفيفات الصغيرة في المصل. إذا حدث التراص للعيار أو إلى نصف عيار المصل ، فإنه يكون خاصًا بالنوع.

لتحديد الأجسام المضادة في مصل المريض (التشخيص المصلي) ، يتم استخدام تشخيص جرثومي قياسي يحتوي على معلق للميكروبات المعروفة أو مستضداتها. في هذه الحالة ، من الممكن أيضًا تثبيت لوحة ونشر RA.

تفاعل التراص المباشر للخلايا. تستخدم لتحديد فصائل الدم الأمصال القياسيةالمتبرعون بالدم الذين يحتويون على أجسام مضادة معروفة لـ A أو B. توضع التفاعلات على الزجاج أو الألواح. في وجود A (فصيلة الدم الثانية) ، B (فصيلة الدم الثالثة) أو كلا المستضدين (فصيلة الدم الرابعة) على كريات الدم الحمراء ، كريات الدم الحمراء المتجمعة في المصل. يستخدم أيضًا اختبار توافق الدم ، عندما يتم خلط قطرات الدم من المتبرع والمتلقي وتقييم التراص.

في العيادات ، يتم استخدام تفاعل تراص الكريات البيض والصفائح الدموية والخلايا الأخرى للكشف عن الأجسام المضادة الذاتية ، وكذلك لتحديد المستضدات على هذه الخلايا.

أساس تفاعل التراص الدموي هو ظاهرة تراص كرات الدم الحمراء التي تحدث تحت تأثير عوامل مختلفة. يميز بين التراص الدموي المباشر وغير المباشر.
في تفاعل التراص الدموي المباشر ، تلتصق كريات الدم الحمراء ببعضها عندما يتم امتصاص مستضدات معينة ، مثل الفيروسات ، عليها.

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RNHA ، RPHA)يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء (أو اللاتكس) مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتصة على سطحها ، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة أو المستضدات المقابلة لمصل الدم لدى المرضى إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها وتسقط في قاع أنبوب أو خلية على شكل رواسب صدفي.

عناصر.لإنتاج RNHA ، يمكن استخدام كريات الدم الحمراء للأغنام والخيول والأرانب والدجاج والفئران والبشر وغيرهم ، والتي يتم حصادها للاستخدام المستقبلي ، ومعالجتها بالفورمالين أو الجلوتارالدهيد. تزداد قدرة امتصاص كريات الدم الحمراء عند معالجتها بمحلول التانين أو كلوريد الكروم.

يمكن أن تعمل مستضدات السكاريد للكائنات الحية الدقيقة ، ومستخلصات اللقاحات البكتيرية ، ومستضدات الفيروسات والريكتسيا ، بالإضافة إلى مواد أخرى كمستضدات في RNGA.

تسمى كريات الدم الحمراء التي يتم تحسسها بواسطة AG باسم تشخيص كرات الدم الحمراء. من أجل تحضير تشخيص كريات الدم الحمراء ، غالبًا ما يتم استخدام كريات الدم الحمراء ، التي لها نشاط امتصاص عالٍ.

طلب. يستخدم RNHA لتشخيص الأمراض المعدية ، وتحديد هرمون موجهة الغدد التناسلية في البول عند حدوث الحمل ، والكشف عن فرط الحساسية للأدوية والهرمونات ، وفي بعض الحالات الأخرى.

في الدراسات المصلية ، يتم استخدام تفاعل تثبيط التراص الدموي المباشر ، عندما يتم تحييد الفيروس المعزول من المريض بمصل مناعي معين ، ثم يتم دمجه مع خلايا الدم الحمراء. يشير غياب التراص الدموي إلى تطابق الفيروس مع المصل المناعي المستخدم.

لوحظ تفاعل التراص الدموي غير المباشر (التراص الدموي السلبي) عندما يتم تكميل كريات الدم الحمراء المعالجة مسبقًا (المحسّسة) بمولدات المضادات المختلفة بمصل مناعي أو مصل المريض الذي يحتوي على الأجسام المضادة المناسبة. هناك ارتباط محدد لكريات الدم الحمراء ، التراص الدموي السلبي.

يتفوق تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي في الحساسية والنوعية للطرق المصلية الأخرى ، ويستخدم في تشخيص الالتهابات التي تسببها البكتيريا والريكتسيا والأوليات.

تتكون طريقة ضبط تفاعل التراص الدموي غير المباشر من عدة مراحل.

· أولاً ، يتم غسل كريات الدم الحمراء بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، ثم إذا لزم الأمر (عند استخدام مستضدات ذات طبيعة بروتينية) ، يتم معالجتها بمحلول تانين بنسبة 1: 20000 وتحسسها بمولدات المضادات الذائبة.

بعد الغسيل بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر ، يكون مستضد كرات الدم الحمراء جاهزًا للاستخدام.

· يخفف السيرم المدروس بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب اختبار أو ألواح بلاستيكية خاصة بها ثقوب ، ثم يضاف تشخيص كريات الدم الحمراء لكل مخفف مصل.

· تؤخذ نتائج تفاعل التراص الدموي غير المباشر في الاعتبار حسب طبيعة رواسب كرات الدم الحمراء المتكونة في قاع الأنبوب.

· تعتبر نتيجة التفاعل إيجابية ، حيث تغطي كريات الدم الحمراء الجزء السفلي من أنبوب الاختبار بالتساوي. مع رد فعل سلبي ، توجد كريات الدم الحمراء على شكل قرص صغير أو "زر" في وسط الجزء السفلي من أنبوب الاختبار.

بعد ساعتين من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، ضع في الاعتبار النتائج وتقييمها مظهر خارجيرواسب كريات الدم الحمراء (بدون اهتزاز): مع تفاعل سلبي ، يظهر راسب على شكل قرص مضغوط أو حلقة في قاع البئر ، مع رد فعل إيجابي ، رواسب كريات الدم الحمراء المميزة ، طبقة رقيقة ذات حواف غير متساوية

تفاعل التخثر.

هذا رد الفعل على أساس خاصية فريدة المكورات العنقودية الذهبية، الذي يحتوي على جدار الخليةالبروتين A ، يرتبط بشظايا Fc من IgG و IgM.

حيث المراكز النشطةتظل الأجسام المضادة حرة ويمكن أن تتفاعل مع محددات معينة لمولدات المضادات. يتم وضع قطرة من 2 ٪ معلق من المكورات العنقودية المحسّسة مع الأجسام المضادة المقابلة على شريحة زجاجية ، وتضاف قطرة من معلق البكتيريا المدروسة. عندما يتوافق المستضد مع الأجسام المضادة ، بعد 30-60 ثانية ، يحدث تراص واضح للمكورات العنقودية المحملة بالأجسام المضادة.

متطلبات المصل المناعي المستخدم لتوعية خلايا المكورات العنقودية والقيام بعملية التحسس. للحصول على كاشف تجلط الدم ، يجب معالجة تعليق المكورات العنقودية بمصل مناعي ضد المستضد المطلوب. يجب أن يؤخذ المصل من الحيوان الذي يحتوي IgG على صلة بالبروتين A. الغلوبولين المناعي للبشر والخنازير والكلاب و خنزير غينيا، الأصغر - الحمير والأرانب ، ويتفاعل معها IgG من الأغنام والحصان والجرذان والفأر بشكل ضعيف جدًا.

بالإضافة إلى الخصوصية الصارمة للمستضد المطلوب ، يجب ألا يحتوي المصل المستخدم في RKOA على أجسام مضادة للمكورات العنقودية الذهبية لتجنب تراص كاشف المكورات العنقودية بسبب التأثير المحدد للمستضد والأجسام المضادة ، والتي في نظام IgG - البروتين A يجب استبعادها. يتم التحكم عن طريق خلط قطرة واحدة من المصل و 10٪ معلق من كاشف المكورات العنقودية على الزجاج. إذا لم تتشكل رقائق التراص بعد 3-5 دقائق ، فإن المصل يعتبر مناسبًا للتفاعل.

إذا كانت الأمصال المتاحة لهذا المستضد تراص المكورات العنقودية الذهبية ، فيمكن أن يتم امتصاصها عن طريق تعليق خلايا المكورات العنقودية التي لا تحتوي على البروتين A (على سبيل المثال ، سلالات Wood-46). بهذه الطريقة ، تتم إزالة الأجسام المضادة التي تتفاعل مع المكورات العنقودية بسبب شظايا Fab.

وبالتالي ، يجب أن يفي المصل المستخدم في تحضير كاشف التخثر بالمتطلبات التالية:

• تم الحصول عليها من منتج حيواني ، يحتوي IgG على تقارب للبروتين A ؛
• يجب أن تكون محددة لمولد الضد المعني ؛
• أن تكون خالية من الأجسام المضادة للمكورات العنقودية.

· تحضير التشخيص. يتم دمج كاشف المكورات العنقودية المحضرة بنسبة 10 ٪ مع حجم متساوٍ من المصل المناعي في تخفيف عمل مثالي محدد مسبقًا. يُرج الخليط لمدة 60 دقيقة عند 40-42 درجة مئوية في جهاز Schutgel بمعدل 90 اهتزازًا في الدقيقة. ثم ، بعد 15 دقيقة ، يتم غسلها مرتين باستخدام برنامج تلفزيوني ، وتعليقها إلى 2٪ معلق ، وحفظها بميرثيولات الصوديوم (1: 10000).

تفاعل التراص الدموي (RHA)

يعتمد RGA على حقيقة أن بعض أنواع البكتيريا والفيروسات لديها القدرة على الامتصاص على سطح كريات الدم الحمراء لأنواع مختلفة من الحيوانات (والطيور) ، مما يجعلها تلتصق ببعضها البعض وتشكل التراص (مباشر RGA).

لا يتجلى امتزاز المستضد (البكتيريا والفيروسات) على سطح كريات الدم الحمراء دائمًا من خلال تكوين راسب مرئي ؛ بالإضافة إلى ذلك ، RGA غير محدد ، لأن كريات الدم الحمراء من نفس النوع الحيواني يمكن أن تمتص مستضدات مختلفة.

يكون تفاعل التراص الدموي السلبي (غير المباشر) محددًا. لإعداده ، يتم تحضير تشخيص كريات الدم الحمراء مسبقًا (كريات الدم الحمراء التي يتم امتصاص المستضد عليها). لهذا الغرض ، يتم الحصول على دم الكبش (أو الديك) بشكل معقم ، ويتم إزالته وغسله عدة مرات في محلول فوسفات مؤقت (درجة الحموضة 7.2) باستخدام الطرد المركزي 3-5 أضعاف. تتم إزالة المادة الطافية ، ويتم تعديل تركيز كريات الدم الحمراء إلى 2.5٪ (1:40). يضاف إلى معلق 2.5٪ من كريات الدم الحمراء في حجم متساوٍ (1 مل أو 0.5 مل) معلق من البكتيريا من أنواع الميكروبات المدروسة بتركيز 5-10 مليار خلية لكل 1 مل. تمتص كريات الدم الحمراء بسهولة مستضد طبيعة عديد السكاريد. لامتصاص مستضد ذو طبيعة بروتينية ، يتم معالجة كريات الدم الحمراء مسبقًا بالتانين بتخفيف 1: 20000. تُترك كريات الدم الحمراء جنبًا إلى جنب مع المستضد المضاف للتحسس (الامتزاز) لمدة ساعتين في منظم حرارة (37 درجة مئوية) ، ثم طرد مرة أخرى عند 3-4 آلاف دورة في الدقيقة / دقيقة لمدة 5 دقائق بمحلول فوسفات منظم (الشكل 9.13).

يتم وضع تشخيص الكريات الحمراء الناتج في أنابيب اختبار (أو آبار في لوح زجاج شبكي) ويضاف إليه مصل مناعي قياسي.

في الحالات الإيجابية ، سيحدث RGA - فقدان كريات الدم الحمراء على شكل رواسب قشارية أو حبيبية مميزة موزعة على كامل سطح قاع أنبوب الاختبار (hemagglutinate). هذا يعني أن نوع الميكروب (المستضد) قيد الدراسة خاص بالأجسام المضادة للمصل المناعي. في الحالات السلبية ، تستقر خلايا الدم الحمراء غير الملتصقة في الأسفل على شكل دائرة صغيرة متساوية.

لمزيد من الموثوقية لنتائج RPGA ، رد فعل تأخير(الفرملة) ظاهرة التراص الدموي(RZGA) أو تعديله - تفاعل تحييد الجسم المضاد(ريا).

أرز. 9.13. تفاعل التراص الدموي السلبي (مخطط): Er - كريات الدم الحمراء: AG - مستضد: AT - الجسم المضاد

جوهر RZGAيتكون من حقيقة أن تفاعل التراص يتم ضبطه مع مصل تشخيصي محدد ومستضد تم اختباره (يتم استخدام نوع الميكروب المدروس كمستضد). يتم الاحتفاظ بهذا الخليط لمدة 1-2 ساعة عند 37 درجة مئوية ، ثم تضاف كريات الدم الحمراء. إذا كان مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة في المصل التشخيصي ، فإنها تتفاعل مع بعضها البعض ولا تتراكم كريات الدم الحمراء المضافة - تكون نتيجة التفاعل إيجابية. إذا لم يكن مستضد الاختبار متماثلًا مع الأجسام المضادة في المصل أو لم يكن موجودًا في المادة ، فإن كريات الدم الحمراء المضافة تمتص المستضد ويحدث RHA - نتيجة RHA سلبية ، ولم يتم تحديد نوع الميكروب (المستضد) الذي يتم اختباره.

طريقة ضبط الرقم الهيدروجيني أهو أن يأخذوا كميات متساوية ويخلطون المصل المناعي التشخيصي تخفيفات مختلفةمن المادة قيد الدراسة (المستضد المرغوب) ، اتركه للتلامس لمدة 1-2 ساعة ، ثم أضف كريات الدم الحمراء المحسّسة بمستضد معين (معروف) خاص بالأجسام المضادة في الدم (تشخيص كرات الدم الحمراء). عندما يتفاعل المستضد المطلوب مع الأجسام المضادة في الدم ، يتم تحييدها ولا تتراكم كريات الدم الحمراء المضافة ، ولا يحدث RHA - تكون نتيجة PHA إيجابية. إذا كانت مادة الاختبار لا تحتوي على مستضد خاص بالأجسام المضادة للمصل المستخدم ، فلن يكون هناك تحييد للأجسام المضادة. لذلك ، عند إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء ، يظهر تراص كرات الدم الحمراء (التراص الدموي) ، وتكون نتيجة RHA سلبية. اختبار تحييد الجسم المضاد هو طريقة حساسة للغاية لاكتشاف مستضد ليس فقط في تعليق البكتيريا الحية (أو المقتولة) ، ولكن أيضًا في تعليق الأنسجة الأرضية للأعضاء المختلفة ، والإفرازات الأصلية والمسخنة وإفرازات كائن حي مريض.

رد فعل فيدال. من الأسبوع الثاني للمرض ، تتراكم الأجسام المضادة للعامل المعدي في دم المرضى. للتعرف عليها ، يتم فحص مصل دم المريض في تفاعل التراص. تستخدم مزارع السالمونيلا المقتولة - التشخيص - كمستضد.

لإعداد تفاعل فيدال ، يتم استخدام مصل المريض ومجموعة من مجموعات التشخيص ومحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

دم (2-3 مل) من لب الإصبع أو الوريد المرفقييتم جمعها في أنبوب معقم وتسليمها إلى المختبر. في المختبر ، يوضع أنبوب الاختبار في منظم حرارة لمدة 20-30 دقيقة لتشكيل جلطة ، ثم يتم وضع دائرة حول الجلطة باستخدام ماصة باستور لفصلها عن جدار أنبوب الاختبار ، وتوضع في البرد لمدة 30- 40 دقيقة. يُمتص المصل المنفصل ويستخدم لتكوين تفاعل تراص مع تشخيصات من السالمونيلا التيفوئيد والنظيرة التيفية. للحصول على مصل الدم ، يمكن طرد الدم.

متي عملية معدية - حمى التيفودأو نظائر التيفويدات - يتم إنتاج أجسام مضادة لـ O- و H لمسببات الأمراض التي تحمل الاسم نفسه في الجسم.

تظهر الأجسام المضادة لـ O أولاً وتختفي بسرعة إلى حد ما. تستمر الأجسام المضادة لـ H لفترة طويلة. يحدث نفس الشيء أثناء التطعيم ، لذلك فإن تفاعل فيدال الإيجابي مع مستضدات O- و H يشير إلى وجود مرض ، ويمكن أن يكون رد الفعل مع مستضدات H فقط في كل من المرضى (رد فعل anamnestic) وفي الذين تم تطعيمهم (التطعيم). بناءً على ذلك ، يتم وضع تفاعل فيدال بشكل منفصل مع مستضدات O و H (التشخيص).

نظرًا لأن حمى التيفوئيد السريرية وحمى نظير التيفويد A و B متشابهة ، لتحديد طبيعة المرض ، يتم اختبار مصل المريض في وقت واحد مع تشخيصات السالمونيلا التيفوئيدية والنظيرة التيفية A و B.

يتم استخدام تفاعل فيدال على نطاق واسع لأنه بسيط ولا يتطلب شروطًا خاصة.

هناك طريقتان لإعداد التفاعل: الإسقاط والحجم (انظر الفصل 12). في الممارسة العملية ، يتم استخدام الطريقة الحجمية في كثير من الأحيان. عند إعداد تفاعل تراص خطي ، يجب أن يتوافق عدد الصفوف مع عدد المستضدات (التشخيص). يعتبر العامل المسبب للمرض من الكائنات الحية الدقيقة ، والتشخيص الذي يتراكم منه مصل المريض. في بعض الأحيان يلاحظ التراص الجماعي ، لأن العوامل المسببة للتيفوئيد والحمى نظيرة التيفية لها مستضدات جماعية مشتركة. في هذه الحالة ، تعتبر نتيجة التفاعل في السلسلة التي لوحظ فيها التراص في تخفيف أكبر للمصل إيجابية (الجدول 36).

الجدول 36 النتيجة المحتملةتفاعلات التراص

ملحوظة. في الممارسة العملية ، يتم وضع رد فعل فيدال مع أربعة تشخيصات: حمى التيفود "O" و "H" ، ونظير التيفوئيد A و B - مع تشخيص "OH".

إذا حدث التراص فقط في تخفيفات صغيرة من المصل - 1: 100 ، 1: 200 ، ثم لتمييز رد الفعل في حالة المرض عن التطعيم أو اللقاح ، يلجأون إلى إعادة تفاعل التراص بعد 5-7 أيام. في المريض ، يرتفع عيار الجسم المضاد ، لكن في مريض تم تطعيمه أو تعافيه لا يتغير. وبالتالي ، فإن زيادة عيار الأجسام المضادة في مصل الدم تعمل كمؤشر للمرض.

تظهر Vi-agglutinins في دم المريض استجابة لإدخال مسببات أمراض التيفوئيد التي تمتلك مستضد Vi في الجسم. يتم تحديدها من الأسبوع الثاني من المرض ، لكن عيارها لا يتجاوز عادة 1:10. يرتبط اكتشاف الأجسام المضادة لـ Vi بوجود مسببات أمراض التيفوئيد في الجسم ؛ لذلك ، فإن تحديد هذه الأجسام المضادة له أهمية وبائية كبيرة ، لأنه يجعل من الممكن التعرف على ناقلات البكتيريا.

تفاعل سادسا- التراص الدموي. هذا هو رد الفعل الأكثر حساسية للكشف عن الأجسام المضادة.

مبدأ التفاعل هو أن خلايا الدم الحمراء البشرية (المجموعة الأولى) أو الأغنام ، بعد معالجة خاصة ، يمكن أن تمتص المستضد السادس على سطحها وتكتسب القدرة على التراص مع الأجسام المضادة المقابلة.

تسمى كريات الدم الحمراء ذات المستضدات الممتصة على السطح بتشخيص كرات الدم الحمراء.

لإعداد تفاعل التراص الدموي Vi-hemagglutination ، خذ:

1) مصل دم المريض (1-2 مل) ؛ 2) كرات الدم الحمراء السالمونيلا السادس التشخيص. ح) مصل السادس. 4) مصل O ؛ 5) محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يوضع التفاعل في أنابيب اختبار تراص أو في ألواح بلاستيكية بها آبار.

يؤخذ الدم من المريض بنفس طريقة أخذ فيدال. احصلي على المصل. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من المصل ، بدءًا من 1:10 إلى 1: 160.

يضاف 0.5 مل من كل تخفيف إلى البئر و 0.25 مل من تشخيص كريات الدم الحمراء. يوضع التفاعل بحجم 0.75 مل.

الضوابط هي: 1) مصل مستقبلات مونو مستقبلات التراص القياسي + التشخيص - يجب أن يكون التفاعل إيجابيًا حتى عيار المصل ؛ 2) التشخيص في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (التحكم) - يجب أن يكون التفاعل سلبياً.

يتم خلط محتويات الآبار جيدًا ، وتوضع في منظم الحرارة لمدة ساعتين وتترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي(لمدة 18-24 ساعة).

تبدأ المحاسبة بالتحكم. يتم تقييم التفاعل اعتمادًا على درجة التراص التشخيصي.

تؤخذ النتائج في الاعتبار وفقًا للنظام الرباعي:

تتراكم كريات الدم الحمراء بالكامل - رواسب في قاع الحفرة على شكل "مظلة" ؛

+++ "مظلة" أصغر ، لم تكن كل كريات الدم الحمراء متصقة ؛

++ "مظلة" صغيرة ، يوجد في قاع الحفرة رواسب من كريات الدم الحمراء غير المتراصة ؛

رد الفعل سلبي. لم تتراكم كريات الدم الحمراء واستقرت في قاع البئر على شكل زر.

أسئلة الاختبار

1. في أي فترة من المرض يتم تشخيص رد فعل فيدال؟

2. ما هي المكونات اللازمة لأداء تفاعل فيدال؟

3. ما التشخيصات المستخدمة لرد فعل فيدال؟

4. أي من التفاعلات المصلية هي الأكثر حساسية في تشخيص التيفوئيد والعدوى نظيرة التيفوئيد؟

5. ما هو التشخيص المستخدم في صياغة تفاعل Vi-hemagglutination؟

6. ما المصل المستخدم لتحديد وجود مستضد Vi في الثقافة المدروسة؟

7. ما هي أهمية تعريف النوع Vi-phage؟

خذ من تشخيص المعلم O- و H من السالمونيلا التيفوئيد ، نظير التيفوئيد A و نظير التيفويد B ومصل المريض. ضع رد فعل فيدال.

الوسائط الغذائية

يتم إنتاج البيئات EMS ، Ploskirev ، أجار البزموت والكبريتيت من قبل الصناعة الطبية في شكل مسحوق جاف. يتم تحضيرها وفقًا للتعليمات الموجودة على الملصق: يتم وزن كمية معينة من المسحوق ، ويتم سكب الكمية المناسبة من الماء وغليها وصبها في أطباق بتري المعقمة.

الأربعاء راسل. في 950 مل من الماء المقطر أضف 40 جم من الماء الجاف متوسطة النمووأضف 5 غرام من أجار المغذيات. يُسخن حتى يغلي ويذوب المساحيق. قم بإذابة 1 جم × في 50 مل من الماء المقطر. ساعات من الجلوكوز ويضاف إلى الخليط الجاهز. يُسكب الوسط في أنابيب اختبار معقمة من 5-7 مل ، ويتم تعقيمها بالبخار المتدفق (يومين لمدة دقيقتين) ويتم شطفها بحيث يبقى العمود. يتم تحضير وسيط راسل مع المانيتول والسكروز بنفس الطريقة.

وسط Olkenitsky من أجار جاف. يتم إذابة 2.5 جرام من أجار المغذيات الجافة في 100 مل من الماء المقطر. تضاف جميع المكونات الموضحة في الوصفة (الملصق) إلى الأجار المبرد إلى 50 درجة مئوية. يتم تعقيم الوسيط الذي يتم سكبه في أنابيب الاختبار بالبخار المتدفق (3 أيام لمدة 20 دقيقة) ثم يتم شطفه. يجب أن يكون الوسط النهائي بلون وردي باهت.