ردود الفعل المناعية. تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد والتفاعلات مع المكونات الموصوفة. يستخدم لتحديد الكائنات الحية الدقيقة ولأغراض التشخيص أمراض معدية.

تستخدم التفاعلات المناعية في الدراسات التشخيصية والمناعة في المرضى و الأشخاص الأصحاء. لهذا الغرض ، تطبيق الطرق المصلية (من اللات. مصل - مصل و الشعارات - العقيدة) ، أي طرق دراسة الأجسام المضادة والمستضدات باستخدام تفاعلات الأجسام المضادة للمستضد المحددة في مصل الدم والسوائل الأخرى ، وكذلك أنسجة الجسم.

إن اكتشاف الأجسام المضادة ضد مستضدات العامل الممرض في مصل دم المريض يجعل من الممكن تشخيص المرض. تُستخدم الدراسات المصلية أيضًا لتحديد المستضدات الميكروبية ، والمواد النشطة بيولوجيًا المختلفة ، ومجموعات الدم ، ومستضدات الأنسجة والأورام ، والمجمعات المناعية ، ومستقبلات الخلايا ، إلخ.

عندما يتم عزل ميكروب من مريض ، يتم التعرف على العامل الممرض من خلال دراسته. خصائص مستضديةباستخدام الأمصال التشخيصية المناعية ، أي مصل الدم للحيوانات مفرطة المناعة التي تحتوي على أجسام مضادة محددة. هذا ما يسمى تحديد المصليالكائنات الدقيقة.

تستخدم على نطاق واسع في علم الأحياء الدقيقة والمناعة ، التراص ، الترسيب ، تفاعلات المعادلة ، التفاعلات التي تنطوي على مكمل ، باستخدام الأجسام المضادة والمضادات الموصوفة (المناعية الإشعاعية ، الإنزيم المناعي ، طرق التألق المناعي). تختلف التفاعلات المدرجة في التأثير المسجل وتقنية الإعداد ، ومع ذلك ، فكلها أساسية. عربات على تفاعل تفاعل مستضد مع جسم مضاد وتستخدم للكشف عن كل من الأجسام المضادة والمستضدات. تتميز تفاعلات المناعة بحساسية وخصوصية عالية.

فيما يلي مبادئ وخطط المناعية الرئيسية ردود الفعل التشخيصية. تقنية التفاصيلتعيين ردود الفعل في. إرشادات عملية للتشخيص المناعي.

تفاعل التراص - RA(من اللات. aggluti- ناتيو- الترابط) - تفاعل بسيط تقوم فيه الأجسام المضادة بربط مستضدات الجسم (البكتيريا ، كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى ، الجسيمات غير القابلة للذوبان مع المستضدات الممتصة عليها ، وكذلك التكتلات الجزيئية). يحدث في وجود الشوارد ، على سبيل المثال ، عند إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر.

يتم استخدام أنواع مختلفة من تفاعل التراص: ممتد ، تقريبي ، غير مباشر ، إلخ. يتجلى تفاعل التراص من خلال تكوين رقائق أو رواسب

يستخدم RA من أجل:

تحديد الأجسام المضادة في مصل الدم للمرضى ، على سبيل المثال ، داء البروسيلات (تفاعلات رايت ، هيدلسون) ، حمى التيفودو نظير التيفية (رد فعل فيدال) والأمراض المعدية الأخرى ؛

تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض.

تحديد فصائل الدم باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد خيفيات كرات الدم الحمراء.

لتحديد الأجسام المضادة للمريض وضعتفاعل التراص الممتد:إضافة إلى تخفيف مصل دم المريض التشخيص(تعليق الميكروبات المقتولة) وبعد عدة ساعات من الحضانة عند 37 درجة مئوية ، لوحظ أعلى تخفيف في المصل (عيار مصل) ، حيث حدث التراص ، أي تشكل راسب.

تعتمد طبيعة ومعدل التراص على نوع المستضد والأجسام المضادة. مثال على ذلك هو تفاعل التشخيص (مستضدات O و R) مع أجسام مضادة محددة. تفاعل التراص مع O- التشخيص(البكتيريا تقتل بالحرارة ، وتحتفظ بالحرارة يا مستضد)يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات. يكون تفاعل التراص مع H-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتلها الفورمالين ، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي القابل للحرارة) خشن الحبيبات ويستمر بشكل أسرع.

إذا كان من الضروري تحديد العامل الممرض المعزول عن المريض ، ضع توجيه تفاعل التراص ،باستخدام الأجسام المضادة التشخيصية (مصل التراص) ، أي يتم إجراء التنميط المصلي للعامل الممرض. يتم إجراء تفاعل تقريبي على شريحة زجاجية. إلى قطرة من مصل التراص التشخيصي بتخفيف 1:10 أو 1:20 أضف ثقافة نقية من العامل الممرض المعزول عن المريض. يتم وضع عنصر تحكم في مكان قريب: بدلاً من المصل ، يتم وضع قطرة من محلول كلوريد الصوديوم. عندما تظهر الرواسب النضرة في قطرة مع مصل وميكروبات ، فإنهم يضعون تفاعل تراص واسع النطاقفي أنابيب الاختبار مع تخفيفات متزايدة من مصل التراص ، والتي تضاف إليها 2-3 قطرات من تعليق العامل الممرض. يؤخذ التراص في الاعتبار من خلال كمية الرواسب ودرجة توضيح السائل. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا لوحظ التراص في تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي. في الوقت نفسه ، يتم أخذ الضوابط في الاعتبار: يجب أن يكون المصل المخفف بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر شفافًا ، ويجب أن يكون تعليق الميكروبات في نفس المحلول عكرًا بشكل موحد ، بدون رواسب.

يمكن أن تلتصق البكتيريا المختلفة ذات الصلة بنفس مصل التراص التشخيصي ، مما يجعل التعرف عليها أمرًا صعبًا. لذلك استمتع الأمصال التراصية الممتصة ،التي تمت إزالة الأجسام المضادة التفاعلية التبادلية منها عن طريق الامتزاز بواسطة البكتيريا ذات الصلة. في مثل هذه الأمصال ، تبقى الأجسام المضادة الخاصة بهذه البكتيريا فقط. تم اقتراح تحضير مصل التراص التشخيصي أحادي المستقبل بهذه الطريقة من قبل A. Castellani (1902).

تفاعل التراص الدموي غير المباشر (السلبي) (RNHA ، RPHA) يعتمد على استخدام كريات الدم الحمراء مع المستضدات أو الأجسام المضادة الممتصة على السطح ، والتي يؤدي تفاعلها مع الأجسام المضادة المقابلة أو مستضدات مصل الدم للكرة إلى التصاق كريات الدم الحمراء ببعضها والسقوط في قاع أنبوب الاختبار أو الخلية فيشكل الرواسب الصدفي (الشكل 13.2). مع رد فعل سلبي ، تستقر كريات الدم الحمراء على شكل "زر". عادة ، يتم الكشف عن الأجسام المضادة في RNHA باستخدام مستضد تشخيص كريات الدم الحمراء ، وهو عبارة عن كريات حمراء مع كثف علىالمستضدات لهم. في بعض الأحيان نستخدم تشخيصات الجسم المضاد لكريات الدم الحمراء ، والتي يتم فيها امتصاص الأجسام المضادة. على سبيل المثال ، يمكن الكشف عن توكسين البوتولينوم عن طريق إضافة البوتولينوم التشخيصي للجسم المضاد لكريات الدم الحمراء (يسمى هذا التفاعل رد فعل التراص الدموي العكسي غير المباشر- رونجا). يستخدم RNHA لتشخيص الأمراض المعدية ، وتحديد هرمون موجهة الغدد التناسلية فيالبول عندما يثبت الحمل ، للكشف فرط الحساسيةل الأدويةوالهرمونات وفي بعض الحالات الأخرى.

تفاعل التخثر . يتم تحديد الخلايا الممرضة باستخدام المكورات العنقودية ، المعالجة مسبقًا بمصل التشخيص المناعي. بروتين يحتوي على المكورات العنقودية و،وجود انجذاب لإف سي - شظية من الغلوبولين المناعي ، لا تمتص على وجه التحديد الأجسام المضادة للميكروبات ، والتي تتفاعل بعد ذلك مع المراكز النشطة مع الميكروبات المقابلة المعزولة من المرضى. نتيجة للتجلط ، يتم تكوين رقائق تتكون من المكورات العنقودية والأجسام المضادة التشخيصية في المصل والميكروب الذي يتم تحديده.

تفاعل تثبيط التراص الدموي (RTGA) يقوم على الحصار ، قمع مستضدات الفيروسات بواسطة الأجسام المضادة للمصل المناعي ، ونتيجة لذلك تفقد الفيروسات قدرتها على تراص خلايا الدم الحمراء (الشكل 13.3). يستخدم RTHA لتشخيص العديد من الأمراض الفيروسية ، والتي يمكن للعوامل المسببة لها (الأنفلونزا ، والحصبة ، والحصبة الألمانية ، والتهاب الدماغ الذي ينتقل عن طريق القراد ، وما إلى ذلك) أن تتراكم في كريات الدم الحمراء للحيوانات المختلفة.

تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم يستخدم لتأسيس نظام ABO (انظر القسم 10.1.4.1) باستخدام تراص كريات الدم الحمراء بأجسام مضادة للمصل المناعي ضد مستضدات فصائل الدم A (II) ، B (III). الضوابط هي: مصل خال من الأجسام المضادة ، أي مصل AB (GU)فصائل الدم المستضدات الموجودة في كريات الدم الحمراء من المجموعات A (II) ، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات ، أي يتم استخدام المجموعة 0 (I) كريات الدم الحمراء.

في تفاعلات التراص لتحديد عامل Rh(انظر القسم 10.1.4.1) استخدم الأمصال المضادة لـ Rh (سلسلتان مختلفتان على الأقل). في وجود مستضد Rh على غشاء كريات الدم الحمراء المدروسة ، يحدث تراص هذه الخلايا. تعمل كريات الدم الحمراء المعيارية ذات العامل الريصي الإيجابي والسلبي لجميع مجموعات الدم كعناصر تحكم.

تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة لمضاد Rhesus ( رد فعل غير مباشركومبس)يستخدم في المرضى الذين يعانون من انحلال الدم داخل الأوعية الدموية. في بعض هؤلاء المرضى ، تم العثور على أجسام مضادة لمضاد Rhesus ، وهي غير مكتملة ، أحادية التكافؤ. يتفاعلون على وجه التحديد مع كريات الدم الحمراء إيجابية العامل الريصي ، لكن لا تسبب تراصهم. يتم تحديد وجود مثل هذه الأجسام المضادة غير المكتملة في تفاعل كومبس غير المباشر. للقيام بذلك ، يتم إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (الأجسام المضادة ضد الغلوبولين المناعي البشري) إلى نظام الأجسام المضادة لـ Rh + كريات الدم الحمراء الموجبة للعامل الريصي ، والتي تسبب تراص كريات الدم الحمراء (الشكل 13.4). باستخدام تفاعل كومبس ، يتم تشخيص الحالات المرضية المرتبطة بالتحلل داخل الأوعية الدموية للكريات الحمراء ذات المنشأ المناعي ، على سبيل المثال ، مرض الانحلالي عند الوليد: تتحد كريات الدم الحمراء لجنين موجب عامل الريسوس مع أجسام مضادة غير مكتملة لعامل الريزوس المنتشر في الدم ، والذي يعبر المشيمة من أم سلبي عامل ريسس.

ردود الفعل هطول الأمطار

معادلة الترسيب - RP (مناللات. برايسي بيتو- راسب ،) هو تكوين وترسيب مركب من مستضد جزيئي قابل للذوبان مع أجسام مضادة في شكل تعكر ، يسمى ترسب.يتكون عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات مكافئة ؛ فائض واحد منهم يقلل من مستوى تكوين مجمع المناعة.

وضع تفاعلات الترسيب في أنابيب الاختبار (رد فعل حلقة هطول الأمطار) ،في المواد الهلامية ، وسائط المغذيات ، إلخ. تستخدم على نطاق واسع أنواع مختلفة من تفاعل الترسيب في هلام شبه سائل من أجار أو أغاروز: الانتشار المناعي المزدوج وفقًا لـ Ouchterlony. الانتشار المناعي الشعاعي ، الرحلان الكهربي المناعيوإلخ.

رد فعل حلقة هطول الأمطار . يتم إجراء التفاعل في أنابيب ترسيب ضيقة مع مصل مناعي ، حيث يتم وضع مستضد قابل للذوبان في طبقات. مع النسبة المثلى للمستضد والأجسام المضادة ، تتشكل حلقة مترسبة معتمة عند حدود هذين المحلين (الشكل 13.5). لا يؤثر الفائض من المستضد على نتيجة تفاعل ترسيب الحلقة بسبب الانتشار التدريجي للكواشف إلى حدود السائل. إذا تم استخدام المستخلصات المائية المغلية والمفلترة للأعضاء أو الأنسجة كمستضدات في تفاعل ترسيب الحلقة ، عندئذٍ يسمى هذا التفاعل تفاعل الترسيب الحراري الثالث (تفاعل أسكولي ،مع الجمرة الخبيثة /

رد فعل Oukhteruni مزدوج الانتشار المناعي . لإعداد التفاعل ، يُسكب هلام الأجار المذاب في طبقة رقيقة على لوح زجاجي ، وبعد أن يصلب ، يتم قطع ثقوب بحجم 2-3 مم فيه. يتم وضع المستضدات والأمصال المناعية بشكل منفصل في هذه الآبار ، والتي تنتشر تجاه بعضها البعض. عند نقطة الالتقاء بنسب مكافئة ، فإنها تشكل راسبًا على شكل شريط أبيض. في الأنظمة متعددة المكونات ، تظهر عدة خطوط من الرواسب بين الآبار ذات المستضدات المختلفة والأجسام المضادة في الدم ؛ بالنسبة للمستضدات المتطابقة ، تندمج الخطوط المترسبة ؛ بالنسبة لغير المتطابقين ، فإنها تتقاطع (الشكل 13.6).

رد فعل الانتشار المناعي الشعاعي . يُسكب المصل المناعي مع هلام الأجار المنصهر بالتساوي على الزجاج. بعد التصلب في الهلام ، يتم عمل الآبار التي يوضع فيها المستضد تخفيفات مختلفة. ينتشر المستضد في الهلام ، ويشكل مناطق الترسيب الحلقية حول الآبار مع الأجسام المضادة (الشكل 13.7). يتناسب قطر حلقة الترسيب مع تركيز المستضد. يستخدم التفاعل لتحديد مستويات الدم من الغلوبولين المناعي من مختلف الفئات ، ومكونات النظام التكميلي ، إلخ.

الرحلان المناعي- مزيج من طريقة الرحلان الكهربي والترسيب المناعي: يتم إدخال خليط من المستضدات في آبار الهلام ويفصل في الهلام باستخدام الرحلان الكهربي. بعد ذلك ، بالتوازي مع مناطق الرحلان الكهربائي ، يتم إدخال مصل مناعي في الأخدود ، حيث تتشكل الأجسام المضادة ، المنتشرة في الهلام ، عند نقطة التقاء مستضد خط الترسيب.

تفاعل التلبد(حسب رامون) (من اللات. الندف-رقائق الصوف) - ظهور براق أو كتلة ندفية (ترسيب مناعي) في أنبوب اختبار أثناء تفاعل مضاد السموم أو مضادات السموم. يتم استخدامه لتحديد نشاط المصل المضاد للسموم أو الذيفان.

المجهر الإلكتروني المناعي- الفحص المجهري الإلكتروني للميكروبات ، والفيروسات في كثير من الأحيان ، ومعالجتها بالأجسام المضادة المناسبة. الفيروسات التي يتم علاجها بمصل المناعة من تكتلات المناعة (الرواسب الدقيقة). يتم تكوين "كورولا" من الأجسام المضادة حول الفيريونات ، على النقيض من حمض الفوسفوتونجستيك أو غيره من المستحضرات الإلكترونية الكثيفة بصريًا.

ردود الفعل التي تنطوي على مكمل

ردود الفعل التي تنطوي على مكملبناءً على تنشيط المكمل بواسطة مركب مضاد - مستضد (تفاعل تثبيت مكمل ، انحلال دم شعاعي ، إلخ).

تفاعل التثبيت التكميلي (RSK) تكمن في حقيقة أنه عندما تتطابق مع بعضها البعض ، فإن المستضدات والأجسام المضادة تشكل معقدًا مناعيًا ، والذي ، من خلالإف سي - جزء من الأجسام المضادة ينضم إلى المكمل (C) ، أي يحدث الارتباط التكميلي مع مركب مضاد لجسم مضاد. إذا لم يتم تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، فإن المكمل يظل خاليًا (الشكل 13.8). يتم تنفيذ RSK على مرحلتين: المرحلة الأولى - حضانة خليط يحتوي على ثلاثة مكونات للمستضد + الجسم المضاد + المكمل ؛ المرحلة الثانية (المؤشر) - الكشف عن المكمل الحر في الخليط عن طريق إضافة نظام انحلالي يتكون من كريات الدم الحمراء في الأغنام ومصل انحلالي يحتوي على أجسام مضادة لها. في المرحلة الأولى من التفاعل ، أثناء تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد ، يحدث ارتباط مكمل ، ثم في المرحلة الثانية ، لن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء المحسوسة بالأجسام المضادة ؛ رد الفعل إيجابي. إذا كان المستضد والجسم المضاد لا يتوافقان مع بعضهما البعض (لا يوجد مستضد أو جسم مضاد في عينة الاختبار) ، فإن المكمل يظل حراً وفي المرحلة الثانية سينضم إلى معقد الأجسام المضادة لخلايا الدم الحمراء ، مما يتسبب في انحلال الدم ؛ رد الفعل سلبي.

يستخدم RSK لتشخيص العديد من الأمراض المعدية ، وخاصة مرض الزهري (تفاعل واسرمان).

تفاعل انحلال الدم الشعاعي (RRH ) توضع في آبار هلام أجار تحتوي على كريات الدم الحمراء ومكملات. بعد إضافة المصل الانحلالي (الأجسام المضادة ضد كريات الدم الحمراء الكبش) إلى آبار الهلام ، يتم تشكيل منطقة انحلال الدم حولها (نتيجة الانتشار الشعاعي للأجسام المضادة). وبالتالي ، من الممكن تحديد نشاط المصل التكميلي والانحلالي ، وكذلك الأجسام المضادة في مصل الدم لمرضى الأنفلونزا والحصبة الألمانية والتهاب الدماغ الذي ينقله القراد. للقيام بذلك ، يتم امتصاص المستضدات المقابلة للفيروس على كريات الدم الحمراء ، ويضاف مصل دم المريض إلى آبار الهلام المحتوي على كريات الدم الحمراء. تتفاعل الأجسام المضادة للفيروسات مع المستضدات الفيروسية الممتصة على كريات الدم الحمراء بعد ذلك

ترتبط المكونات المكملة بهذا المركب ، مما يؤدي إلى انحلال الدم.

تفاعل الالتصاق المناعي (RIP ) يعتمد على تنشيط النظام التكميلي بواسطة مستضدات الجسم (البكتيريا والفيروسات) المعالجة بمصل المناعة. نتيجة لذلك ، يتم تكوين مكون مكمل ثالث نشط (C3b) ، والذي يرتبط بمستضد الجسم كجزء من المجمع المناعي. على كريات الدم الحمراء والصفائح الدموية والبلاعم ، توجد مستقبلات لـ C3b ، ونتيجة لذلك ، عندما تختلط هذه الخلايا مع المجمعات المناعية التي تحمل C3b ، فإنها تتحد وتتراكم.

تفاعل التعادل

الأجسام المضادة في مصل الدم قادرة على تحييد التأثير الضار للميكروبات أو سمومها على الخلايا والأنسجة الحساسة ، والذي يرتبط بحصار المستضدات الميكروبية بواسطة الأجسام المضادة ، أي تحييد. تفاعل التعادليتم إجراء (RN) عن طريق إدخال خليط من المستضد والأجسام المضادة في الحيوانات أو في كائنات اختبار حساسة (مزرعة الخلية ، الأجنة). في حالة عدم وجود التأثير الضار للكائنات الحية الدقيقة أو مستضداتها والسموم في الحيوانات وكائنات الاختبار ، فإنهم يتحدثون عن التأثير المعادل للمصل المناعي ، وبالتالي ، خصوصية التفاعل بين معقد الأجسام المضادة للمستضد (الشكل 13.9).

تفاعل التألق المناعي - RIF (طريقة Koons)

هناك ثلاثة أنواع رئيسية من الطريقة: مباشرة ، غير مباشرة (الشكل 13.10) ، مع تكملة. رد فعل Koons هو طريقة تشخيص سريعة للكشف عن المستضدات الميكروبية أو الكشف عن الأجسام المضادة.

طريقة RIF المباشرة يعتمد على حقيقة أن مستضدات الأنسجة أو الميكروبات المعالجة بمصل مناعي بأجسام مضادة تحمل علامات الفلوروكرومات قادرة على التوهج في الأشعة فوق البنفسجية لمجهر الفلورسنت.

تتوهج البكتيريا الموجودة في اللطاخة ، والتي تُعالج بمصل إنارة ، على طول محيط الخلية في شكل حد أخضر.

طريقة RIF غير المباشرة هو التعرف على مركب الجسم المضاد للمستضد باستخدام مصل مضاد الغلوبولين (الجسم المضاد) المسمى بالفلوروكروم. للقيام بذلك ، يتم علاج مسحات من الميكروبات المعلقة بأجسام مضادة من مصل تشخيص الأرانب المضاد للميكروبات. ثم يتم غسل الأجسام المضادة غير المرتبطة بالمستضدات الميكروبية ، ويتم الكشف عن الأجسام المضادة المتبقية على الميكروبات عن طريق معالجة اللطاخة بمضاد الغلوبولين (مضاد للأرانب) المسمى بالفلوروكرومات. نتيجة لذلك ، يتم تكوين ميكروب معقد + أجسام مضادة للأرانب المضادة للميكروبات + أجسام مضادة للأرانب تحمل علامة الفلوروكروم. لوحظ هذا المركب في مجهر الفلورسنت ، كما في الطريقة المباشرة.

طريقة ELISA أو التحليل (ELISA)

إليسا -الكشف عن المستضدات باستخدام الأجسام المضادة المقابلة المرتبطة بإنزيم وضع العلامات (الفجل البيروكسيديز ، بيتا جالاكتوزيداز أو الفوسفاتاز القلوي). بعد أن يتم دمج المستضد مع الأمصال المناعية المسمى بالإنزيم ، تتم إضافة الركيزة / الكروموجين إلى الخليط. يتم شق الركيزة بواسطة الإنزيم ، ويتغير لون منتج التفاعل - كثافة اللون تتناسب طرديًا مع عدد جزيئات المستضد والأجسام المضادة المرتبطة.

المرحلة الصلبة إليسا - النوع الأكثر شيوعًا للاختبار المناعي ، عندما يتم امتصاص أحد مكونات الاستجابة المناعية (مستضد أو أجسام مضادة) على مادة حاملة صلبة ، على سبيل المثال ، في آبار ألواح البوليسترين

عند تحديد الأجسام المضادة ، يتم إضافة مصل دم المريض ، ومصل مضاد الغلوبولين المسمى بالإنزيم ، والركيزة (الكروموجين) للإنزيم بشكل تسلسلي إلى آبار الصفائح مع المستضد الممتص.

في كل مرة بعد إضافة المكون التالي ، تتم إزالة الكواشف غير المقيدة من الآبار عن طريق الغسيل الشامل. مع نتيجة إيجابية ، يتغير لون محلول الكروموجين. يمكن تحسس حامل المرحلة الصلبة ليس فقط بمولد ضد ، ولكن أيضًا بالأجسام المضادة. بعد ذلك ، يتم إدخال المستضد المطلوب في الآبار مع الأجسام المضادة الممتصة ، ويضاف المصل المناعي ضد المستضد المسمى بالإنزيم ، ثم يضاف الركيزة للإنزيم.

إليسا التنافسية . يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالإنزيم مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة المناعية في المصل. اختبار آخر هو الأجسام المضادة التي تبحث عنها

والأجسام المضادة الموصوفة تتنافس مع بعضها البعض للحصول على المستضدات.

الطريقة الإشعاعية المناعية أو التحليل (RIA)

طريقة حساسة للغاية تعتمد على تفاعل الجسم المضاد للمستضد باستخدام مولدات الضد أو الأجسام المضادة الموصوفة بالنويدات المشعة (125 J ، 14 C ، 3 H ، 51 Cr ، إلخ). بعد تفاعلهم ، يتم فصل المركب المناعي المشع الناتج ويتم تحديد نشاطه الإشعاعي في العداد المناسب (إشعاع بيتا أو جاما):

كثافة الإشعاع تتناسب طرديا مع عدد جزيئات المستضد والجسم المضاد المرتبطة.

في نسخة المرحلة الصلبة من ريا يتم امتصاص أحد مكونات التفاعل (مستضد أو أجسام مضادة) على مادة حاملة صلبة ، على سبيل المثال ، في آبار مصفوفات البوليسترين الدقيقة. نسخة أخرى من الطريقة هي ريا تنافسية.يتنافس المستضد المستهدف والمستضد المسمى بالنويدات المشعة مع بعضهما البعض لربط كمية محدودة من الأجسام المضادة في المصل المناعي. يستخدم هذا الخيار لتحديد كمية المستضد في مادة الاختبار.

يستخدم RIA للكشف عن المستضدات الميكروبية ، وتحديد الهرمونات ، والإنزيمات ، المواد الطبيةوالغلوبولين المناعي ، وكذلك المواد الأخرى الموجودة في مادة الاختبار بتركيزات طفيفة - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 جم / لتر. تمثل الطريقة خطرًا بيئيًا معينًا.

مناعي

مناعي (IB)- طريقة حساسة للغاية تعتمد على مزيج من الرحلان الكهربائي و ELISA أو RIA.

يتم عزل المستضد باستخدام هلام البولي أكريلاميد الكهربائي ، ثم يتم نقله (النشاف - من اللغة الإنجليزية. لطخة, بقعة) من الجل على الورق المنشط أو غشاء النيتروسليلوز وتم تطويره بواسطة ELISA. تنتج الشركات مثل هذه الشرائط مع "البقع"

المستضدات. يتم وضع مصل المريض على هذه الشرائط. ثم ، بعد الحضانة ، يتم غسل المريض من الأجسام المضادة غير المقيدة للمريض ويتم تطبيق المصل ضد الغلوبولين المناعي البشري ، المسمى بالإنزيم. يتم الكشف عن المستضد المعقد + الجسم المضاد للمريض + الجسم المضاد ضد Ig البشري المتكون على الشريط عن طريق إضافة ركيزة / كروموجين يتغير لونه تحت تأثير الإنزيم (الشكل 13.12).

يستخدم IB كطريقة تشخيص لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية ، إلخ.

تفاعل التراص تفاعل التراص

(RA) - طريقة لاكتشاف وتقدير Ag و Ab ، بناءً على قدرتها على تكوين تكتلات مرئية للعين المجردة. في عيادة الالتهابات. الأمراض أو لأغراض أخرى ، يتم استخدامه لتحديد الميكروبات والخلايا غير المعروفة ، لتحديد وجود وكمية الأجسام المضادة في الدم والسوائل الأخرى. يعتمد مبدأ التحديد على خصوصية التفاعل بين Ag و Am ويتكون من العثور على المعروف من المجهول. هناك العديد من المتغيرات لـ RA: الكمية والنوعية ، في المختبر وعلى الزجاج ، والطرق الحجمية والتنقيط ، والطرق التقليدية ، والمتسارعة ، والصريحة. لإعداد RA ، تحتاج إلى: 1) الدم s-ka.في المتغير مع تعريف الأنواع (var) من البكتيريا ، يتم استخدام s-ki التراص الصناعي ، الذي يتم إنتاجه عن طريق تحصين الأرانب. في المتغير مع تعريف نوع Ab ، يأخذون عينة دم تم الحصول عليها من البحث. الناس أو الحيوانات. يجب أن تكون S-ka معقمة ولا تحتوي على جزيئات معلقة. تحضير التخفيف الرئيسي في محلول ملحي. يجب أن يكون أقل من 2-4 مرات من العيار التشخيصي لهذا المرض ؛ 2) اي جي .في متغير التفاعل مع تحديد نوع Ab ، يتم استخدام تشخيصات الإنتاج ؛ في المتغير مع تحديد Ag ، يتم تحضير التشخيصات نفسها في شكل تعليق 1-3 مليار في محلول ملحي من 18-20 ساعة أجار (في كثير من الأحيان مرق) للبحث. ميكروب معطل بالتسخين في حمام مائي عند 70 درجة مئوية لمدة ساعة أو 24 ساعة حضانة عند 37 درجة مئوية مع الفورمالين (تركيز نهائي 0.2٪) ؛ 3) المنحل بالكهرباء المالحة.تقنية الإعداد أنبوب تسلسلي كبير RA لتحديد عيار Ab في s-ke: يتم تحضير عدة صفوف من تخفيفات العمل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki. يعتمد عدد الصفوف على عدد التشخيصات المأخوذة في التجربة ، ويتم تحديد عوامل العدد والتخفيف من خلال العيار التشخيصي للمرض المشتبه به. يجب أن يحتوي الصف على الأقل على تخفيف يتوافق مع مقياس Ab التشخيصي ، وتخفيفان أسفله وتخفيفان فوقه. على سبيل المثال ، إذا كان عيار التشخيص هو 1: 100 ، فعندئذٍ باستخدام الطريقة الحجمية لضبط RA ، يجب تحضير التخفيفات التالية لـ s-ki: 1:25 ، 1:50 ، 1: 100 ، 1: 200 ، 1 "400 ؛ باستخدام طريقة التنقيط ، لا يلزم التخفيف الأول (1:25) ، ولكن هناك حاجة إلى تخفيف آخر أعلى - 1: 800. بحث علميمع كو معاير لرد فعل سلبي. يتم تخفيفه على النحو التالي: في جميع الأنابيب التجريبية ، باستثناء الأول ، صب 0.25 مل من محلول ملحي عند إعداد التفاعل بحجم 0.5 مل و 0.5 مل عند إعداد التفاعل بحجم 1 مل. صب 0.25 (0.5) مل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki في أنابيب الاختبار الأولى والثانية ، من أنبوب الاختبار الثاني ، في حجم مقطوع و تتكاثر معوزاد بمقدار مرتين ، يتم نقل 0.25 (0.5) مل إلى الثالث ، من الثالث إلى الرابع ، إلخ. حتى النهاية ، يتم سكب 0.25 (0.5) مل من القطع في كل شيء لموازنة الأحجام. يتم تنفيذ كل تخفيف باستخدام كي باستخدام ماصة منفصلة. إذا تم إجراء العديد من التشخيصات في التجربة ، فسيتم تحضير سلسلة تخفيف لكل منها بنفس الطريقة. يتم إضافة Diagnosticum إلى كل تخفيف لـ s-ki في حجم مساوٍ لحجم s-ki ، ونتيجة لذلك يزيد التخفيف في كل أنبوب اختبار بمقدار مرتين. تتوافق التجربة مع التحكم في s-ki (0.25 -0.5 مل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki ونفس كمية المحلول الملحي) والتحكم في AG (0.25 - 0.5 مل من التشخيص ونفس كمية المحلول الملحي). إذا تم إجراء العديد من التشخيصات في التجربة ، فسيكون لكل منها تحكمه الخاص Ag. يتم رج الرف مع أنابيب الاختبار جيدًا ويوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات ، ثم يترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي، وبعد ذلك يتم حساب RA ، بناءً على كمية الرواسب ودرجة توضيح السائل. يتم تحديد هذه المؤشرات ، اعتمادًا على طبيعة التراص ، بالعين المجردة على خلفية مظلمة ، في منظار التكتل أو فوق السطح المقعر لمرآة مجهرية. تبدأ المحاسبة بالضوابط: يجب أن يكون التحكم شفافًا ، ويجب أن يكون Ag غائمًا بشكل موحد (بعد هز الأنبوب). إذا كانت عناصر التحكم جيدة ، يتم تحديد وجود ودرجة التراص في جميع أنابيب الاختبار التجريبية ، والتي يشار إليها بالإيجابيات: الرواسب الكبيرة والتوضيح الكامل للسائل - 4 إيجابيات ؛ رواسب كبيرة وتنوير غير مكتمل للسائل -3 الإيجابيات ؛ رواسب ملحوظة وتنوير ملحوظ للسائل - 2 إيجابيات. بعد ذلك ، يتم تحديد العيار: أعلى تخفيف مع كثافة تراص لا تقل عن إضافتين. عيار الامتحان تتم مقارنة s-ki مع عيار تشخيصي لهذا المرض. إذا كان عيار الدراسة s-ki أقل مرتين من التشخيص ، ويتم تقييم التفاعل على أنه مشكوك فيه ؛ إذا كان العيار مساويًا للتشخيص - إيجابيًا ضعيفًا ؛ إذا كانت أعلى من 2 إلى 4 مرات - إيجابية ، إذا كانت أعلى بمقدار 8 مرات أو أكثر - تكون إيجابية بشكل حاد. مع التوزيع الواسع لـ Ab في الأشخاص الأصحاء ، يتم استخدام زيادة في عيار Ab لتقييم RA. لتحديد نوع Ag في RA التسلسلي ، يجب أن يتوافق عدد الصفوف مع الرقم المأخوذ لتحديد الهوية التشخيص. من التخفيف الرئيسي لـ s-ki التشخيصي ، يتم تحضير سلسلة من التخفيفات المتتالية ذات الشقين بنفس الطريقة كما في RA لتحديد عيار At. تعتمد عوامل التخفيف على عيار التراص. في التجربة ، وجود مخفف يساوي عيار التخفيفات 1 3200 ، 1600 ، 1800 ، 1400 ، 1200 نفس حجم البحث Ag هو يضاف إلى تخفيفات s-ki ، ونتيجة لذلك ، يزداد تخفيف s-to بمقدار مرتين. وتشارك عدة s-to ، ثم يحتاج كل منهم إلى التحكم الخاص به. عند الانتهاء من التفاعل ، فإن الحامل ثلاثي القوائم يهتز بقوة ويوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية. تؤخذ النتائج في الاعتبار كما هو موصوف أعلاه. Ag المأخوذة في التجربة مع ke ، يجب أن يتوافق عيار التفاعل مع نصف عيار الاختبار القياسي على الأقل من الاختبار التشخيصي القياسي. بالتنقيط م ديختلف إعداد RA عن الحجمي حيث يتم تخفيف s-ku بحجم 1 مل ، ويستخدم Ag بتركيز أعلى (10 مليار / مل) ويتم إضافته 1 - 2 قطرات في أنبوب اختبار يعتبر تخفيف s-ki بعد إضافة Ag دون تغيير ، وإلا فإن طريقة الضبط والتسجيل والتقييم تشبه الطريقة الحجمية

(المصدر: مسرد مصطلحات علم الأحياء الدقيقة)

تفاعل التراص (من اللات. التلصيق- الترابط) - ترابط الجسيمات (البكتيريا ، كريات الدم الحمراء ، إلخ) مع الأجسام المضادة في وجود الإلكتروليتات.

تفاعل التراصيتجلى في شكل رقائق أو رواسب ، تتكون من كريات (على سبيل المثال ، البكتيريا) ، "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة (الشكل 7.37). يتم استخدام تفاعل التراص من أجل: تحديد العامل الممرض المعزول من المريض ؛ تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض ؛ تحديد فصائل الدم.

أرز. 7.37 أ ، ب. تفاعل التراص معIgM- الأجسام المضادة (أ) ومفتش- الأجسام المضادة (ب)

1. تحديد العامل الممرض المعزول من المريض تفاعل التراص التقريبي على الزجاج (الشكل 7.38). يضاف معلق البكتيريا المعزولة من المريض إلى قطرة من مصل التراص (التخفيف 1:20). أشكال مترسبة متقشرة.

أرز. 7.38.

تفاعل تراص ممتد مع عامل ممرض معزول عن المريض (الشكل 7.39). يضاف معلق البكتيريا المعزولة من المريض إلى التخفيفات في مصل التراص.

أرز. 52

2. تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض
رد فعل تراص ممتد مع مصل دم المريض (الشكل 7.39). يضاف التشخيص إلى مخففات مصل المريض.
- يحدث التراص مع O-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتل بالتسخين ، وتحتفظ بالمستضد الصفري) في شكل تراص دقيق الحبيبات.
- التراص مع H-Diagnosticum (البكتيريا التي تقتلها الفورمالين ، وتحتفظ بالمستضد السوطي H) يكون خشن الحبيبات ويستمر بشكل أسرع.
3. اختبار التراص لتحديد فصائل الدميتم استخدام تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم لإنشاء نظام ABO (الجدول ب) عن طريق تراص كريات الدم الحمراء بأجسام مضادة مناعية في الدم ضد مستضدات فصائل الدم A (I) ، B (III). الضوابط هي: مصل لا يحتوي على أجسام مضادة ، أي. فصائل الدم AB (IV) في الدم ؛ المستضدات الموجودة في كريات الدم الحمراء من المجموعات A (II) ، B (III). لا يحتوي الضبط السلبي على مستضدات ، أي يتم استخدام المجموعة O (I) كريات الدم الحمراء.

الجدول 7.6. تحديد فصائل الدم ABO

1.1 تفاعل التكتل (RA)

تفاعل التكتل (RA)

نظرًا لخصوصياتها وسهولة وضعها وإثباتها ، أصبح تفاعل التراص واسع الانتشار في الممارسة الميكروبيولوجية لتشخيص العديد من الأمراض المعدية.

يعتمد تفاعل التراص على خصوصية تفاعل الأجسام المضادة (agglutinins) مع خلايا ميكروبية كاملة أو خلايا أخرى (agglutinogens). نتيجة لهذا التفاعل ، تتشكل الجزيئات - تكتلات تترسب (تتراكم) على شكل رقائق.

كل من البكتيريا الحية والميتة ، اللولبيات ، الفطريات ، البروتوزوا ، الريكتسيا ، وكذلك كريات الدم الحمراء والخلايا الأخرى يمكن أن تشارك في تفاعل التراص. يستمر التفاعل على مرحلتين: الأولى (غير المرئية) المحددة ، اتصال المستضد والأجسام المضادة ، الثانية (المرئية) غير المحددة ، ارتباط المستضدات ، أي تشكيل التراص.

يتشكل التصاق عند واحد مركز نشطجسم مضاد ثنائي التكافؤ مع مجموعة مستضد محدد. يحدث تفاعل التراص ، مثل أي تفاعل مصلي ، في وجود الإلكتروليتات.

خارجيًا ، يكون مظهر تفاعل التراص الإيجابي ذو شقين. في الميكروبات غير الجلدية ، التي لا تحتوي إلا على مستضد O جسدي ، تلتصق الخلايا الميكروبية نفسها ببعضها البعض بشكل مباشر. يسمى هذا التراص الحبيبات الدقيقة. يتم ذلك في غضون 18 - 22 ساعة. الخامس

تحتوي الميكروبات ذات الجلد على مستضدين جسديين من نوع O ومستضد H سوطي. إذا التصقت الخلايا مع الأسواط ، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة ويسمى تفاعل التراص هذا بالحبيبات الخشنة. يأتي في غضون 2 4 ساعات.

يمكن ضبط تفاعل التراص لغرض التحديد النوعي والكمي لأجسام مضادة معينة في مصل دم المريض ، ولغرض تحديد أنواع الممرض المعزول. الخامس

يمكن ضبط تفاعل التراص في نسخة مفصلة ، مما يسمح بالعمل مع مصل مخفف إلى عيار تشخيصي ، وفي متغير إعداد تفاعل إرشادي ، والذي يسمح ، من حيث المبدأ ، باكتشاف أجسام مضادة معينة أو تحديد أنواع العوامل الممرضة.

عند إعداد تفاعل تراص مفصل ، من أجل الكشف عن أجسام مضادة معينة في مصل الدم للموضوع ، يتم أخذ مصل الاختبار بتخفيف 1:50 أو 1: 100. هذا يرجع إلى حقيقة أنه في مصل الدم الكامل أو المخفف قليلاً ، قد توجد الأجسام المضادة الطبيعية بتركيزات عالية جدًا ، ومن ثم قد تكون نتائج التفاعل غير دقيقة. مادة الاختبار في هذا النوع من التفاعل هي دم المريض.

يؤخذ الدم على معدة فارغة أو في موعد لا يتجاوز 6 ساعات بعد تناول الوجبة (وإلا فقد تكون هناك قطرات من الدهون في مصل الدم ، مما يجعلها غائمة وغير مناسبة للبحث). عادة ما يتم الحصول على مصل دم المريض في الأسبوع الثاني من المرض ، حيث يتم جمع كمية معقمة من الوريد المرفقي 3 4 مل من الدم (في هذا الوقت يتم تركيز الحد الأقصى من الأجسام المضادة المحددة). يتم استخدام التشخيص المحضر من الخلايا الميكروبية المقتولة ولكن غير المدمرة من نوع معين له بنية مستضدية محددة كمستضد معروف.

عند إعداد تفاعل تراص مفصل من أجل تحديد النوع ونوع العامل الممرض ، يكون المستضد أحد مسببات الأمراض الحية المعزولة من مادة الاختبار. من المعروف أن الأجسام المضادة الموجودة في مصل التشخيص المناعي. الخامس

يتم الحصول على مصل التشخيص المناعي من دم أرنب محصن. بعد تحديد العيار (الحد الأقصى للتخفيف الذي يتم فيه اكتشاف الأجسام المضادة) ، يتم سكب المصل التشخيصي في أمبولات مع إضافة مادة حافظة. يستخدم هذا المصل لتحديد التركيب المستضدي لمسببات الأمراض المعزولة.

خيارات رد فعل التكتل

تشارك المستضدات على شكل جزيئات (خلايا ميكروبية ، كريات الدم الحمراء ومستضدات جسيمية أخرى) في هذه التفاعلات ، التي تلتصق بالأجسام المضادة وتتراكم.

ثلاثة مكونات ضرورية لإعداد تفاعل تراص (RA): 1) مستضد (agglutinogen) ؛ 2) الجسم المضاد (agglutinin) و 3) المنحل بالكهرباء (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).

رد فعل التكتل الدلالي (RA)

يتم وضع RA التقريبي أو الرقائقي RA على شريحة زجاجية في درجة حرارة الغرفة. للقيام بذلك ، يتم وضع قطرة من المصل في مخفف بنسبة 1:10 1:20 وقطرة تحكم من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بشكل منفصل على الزجاج باستخدام ماصة Pasteur. يتم إدخال المستعمرات أو الثقافة اليومية للبكتيريا (قطرة من التشخيص) في كل من الحلقات البكتريولوجية ويتم خلطها جيدًا. يتم أخذ ردود الفعل بعين الاعتبار في غضون بضع دقائق بصريًا ، وأحيانًا باستخدام عدسة مكبرة (x5). مع RA إيجابي في قطرة مع مصل ، لوحظ ظهور رقائق كبيرة وصغيرة ، مع سلبي ، يظل المصل غائمًا بشكل متساوٍ.

تفاعل النزف الدموي غير المباشر (السلبي) (RNHA ، RPHA)

يتم ضبط التفاعل: 1) للكشف عن السكريات والبروتينات ومستخلصات البكتيريا والمواد الأخرى شديدة التشتت ، والريكتسيا والفيروسات ، التي لا يمكن رؤية مجمعاتها مع الراصات في التهاب المفاصل الروماتويدي العادي ، أو 2) للكشف عن الأجسام المضادة في مصل المرضى الذين يعانون من هذه المواد شديدة التشتت وأصغر الكائنات الحية الدقيقة.

في ظل التراص غير المباشر أو السلبي ، يُفهم رد فعل تتفاعل فيه الأجسام المضادة مع المستضدات التي تم امتصاصها مسبقًا على جسيمات خاملة (اللاتكس ، السليلوز ، البوليسترين ، أكسيد الباريوم ، إلخ أو كريات الدم الحمراء ، أنا (0) مجموعات الدم البشرية).

في تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA) ، يتم استخدام كريات الدم الحمراء كناقل. تلتصق كريات الدم الحمراء المحملة بمستضد معًا في وجود أجسام مضادة محددة لهذا المستضد والترسب. تُستخدم كريات الدم الحمراء المُحسَّسة بالمستضد في RPHA كتشخيص للكريات الحمراء للكشف عن الأجسام المضادة (التشخيص المصلي). إذا كانت كريات الدم الحمراء محملة بالأجسام المضادة (تشخيص الأجسام المضادة لكريات الدم الحمراء) ، فيمكن استخدامها للكشف عن المستضدات.

انطلاق. في آبار أقراص البوليسترين ، قم بإعداد سلسلة من التخفيفات التسلسلية للمصل. يضاف 0.5 مل من المصل الإيجابي المعروف إلى البئر قبل الأخير ويضاف 0.5 مل من المحلول الملحي (الضوابط) إلى البئر الأخير. بعد ذلك ، يضاف 0.1 مل من كريات الدم الحمراء المخففة إلى جميع الآبار ، ورجها ووضعها في منظم حرارة لمدة ساعتين.

محاسبة. في الحالة الإيجابية ، تستقر كريات الدم الحمراء في قاع الحفرة على شكل طبقة متساوية من الخلايا ذات حافة مطوية أو خشنة (مظلة مقلوبة) ، في حالة سلبية ، تستقر على شكل زر أو حلقة .

1.2 تفاعل التعادل. ليسيس ،
رد فعل OPSONOPHAGOCYTIC ، تفاعل فرط الحساسية

تفاعل تحييد الإكسوتوكسين مع مضادات السموم (RN)

يعتمد التفاعل على قدرة المصل المضاد للتسمم على تحييد تأثير السموم الخارجية. يتم استخدامه لمعايرة الأمصال المضادة للتسمم وتحديد السموم الخارجية.

عند معايرة المصل ، تضاف جرعة معينة من السم المقابل إلى تخفيفات مختلفة من المصل المضاد للسموم. مع التحييد الكامل للمستضد وغياب الأجسام المضادة غير المستخدمة ، يحدث التندف الأولي. يمكن استخدام تفاعل التلبد ليس فقط لمعايرة المصل (على سبيل المثال ، الدفتيريا) ، ولكن أيضًا لمعايرة السموم والذوفان. رد فعل تحييد السموم مع الترياق له تأثير كبير قيمة عمليةكطريقة لتحديد نشاط الأمصال العلاجية المضادة للتسمم. المستضد في هذا التفاعل هو سم خارجي حقيقي.

يتم تحديد قوة المصل المضاد للتسمم بوحدات تقليدية من AE.

1 AU من مصل البوتولينوم كميته تحيد 1000 DLM من توكسين البوتولينوم. يمكن إجراء تفاعل المعادلة لتحديد نوع أو نوع السموم الخارجية (في تشخيص الكزاز ، والتسمم الغذائي ، والدفتيريا ، وما إلى ذلك) في المختبر (وفقًا لرامون) ، وعند تحديد سموم الخلايا الميكروبية - في الجل ( وفقًا لـ Ouchterlony).

تفاعل التحلل (RL)

من الخصائص الوقائية للمصل المناعي قدرته على إذابة الميكروبات أو العناصر الخلوية التي تدخل الجسم.

تسمى الأجسام المضادة المحددة التي تسبب انحلال (تحلل) الخلايا بالليسين. اعتمادًا على طبيعة المستضد ، يمكن أن تكون بكتيرية ، سيتوليزين ، سبيروشيوليزين ، هيموليزين ، إلخ.

تظهر Lysines تأثيرها فقط في وجود عامل إضافي - مكمل. تكملة كعامل غير محدد الحصانة الخلطيةتوجد في جميع سوائل الجسم تقريبًا ماعدا السائل النخاعيوسوائل الغرفة الأمامية. لوحظ وجود محتوى مكمل مرتفع وثابت في مصل دم الإنسان والكثير منه في مصل الدم. خنزير غينيا. في الثدييات الأخرى ، يختلف محتوى المكمل في مصل الدم.

التكملة نظام معقد بروتين مصل اللبن. إنه غير مستقر وينهار عند 55 درجة لمدة 30 دقيقة. في درجة حرارة الغرفة ، يتم إتلاف المكمل في غضون ساعتين. إنه حساس للغاية للاهتزاز لفترات طويلة ، لعمل الأحماض والأشعة فوق البنفسجية. ومع ذلك ، يتم تخزين المكمل لفترة طويلة (تصل إلى ستة أشهر) في حالة جافة عند درجة حرارة منخفضة. مكمل يعزز تحلل الخلايا الميكروبية وكريات الدم الحمراء.

التمييز بين تفاعل انحلال الجراثيم وانحلال الدم.

إن جوهر تفاعل التحلل الجرثومي هو أنه عندما يتم دمج مصل مناعي معين مع الخلايا الميكروبية الحية المتجانسة المقابلة في وجود مكمل ، يتم تحلل الميكروبات.

يتكون تفاعل انحلال الدم من حقيقة أنه عندما تتعرض كريات الدم الحمراء لمصل معين ، محصن ضدهم (انحلال الدم) في وجود مكمل ، تذوب كريات الدم الحمراء ، أي. انحلال الدم.

يتم استخدام تفاعل انحلال الدم في الممارسة المختبرية لتحديد صور المكمل ، وكذلك لمراعاة نتائج اختبارات تثبيت التكملة التشخيصية. العيار التكميلي هو أصغر كمية تسبب تحلل خلايا الدم الحمراء في غضون 30 دقيقة في الجهاز الانحلالي بحجم 2.5 مل. يحدث تفاعل التحلل ، مثل جميع التفاعلات المصلية ، في وجود إلكتروليت.

تفاعلات فرط الحساسية (الحساسية)

يمكن أن تتسبب أشكال معينة من المستضد ، عند الاتصال المتكرر بالجسم ، في تفاعل محدد بشكل أساسي ، ولكنه يتضمن عوامل خلوية وجزيئية غير محددة للاستجابة الالتهابية الحادة. يُعرف نوعان من فرط النشاط: فرط الحساسية النوع الفوري(GHT) وفرط الحساسية من النوع المتأخر (DTH). يتجلى النوع الأول من التفاعل بمشاركة الأجسام المضادة ، بينما يتطور التفاعل في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد التلامس المتكرر مع مسببات الحساسية. النوع الثاني يتم تنفيذه بمساعدة الخلايا التائية الالتهابية (Tr3) باعتبارها المؤثرات الرئيسية للتفاعل ، والتي تضمن تراكم البلاعم في منطقة الالتهاب ، يتجلى التفاعل بعد 6-8 ساعات وما بعدها.

يسبق تطور تفاعل فرط الحساسية لقاء مع مستضد وحدوث حساسية ، أي ظهور الأجسام المضادة ، الخلايا الليمفاوية التي تم تحسسها بشكل نشط وتحسسها بشكل سلبي بواسطة الأجسام المضادة المحبة للخلايا من الكريات البيض الأخرى (الضامة ، الخلايا المحببة).

تفاعلات فرط الحساسية لها ثلاث مراحل من التطور: مناعي. مرضية. الفسيولوجية المرضية.

في المرحلة الأولى المحددة ، يتفاعل المستأرج مع الأجسام المضادة و (أو) الخلايا الحساسة. في المرحلة الثانية ، هناك إطلاق بيولوجي المواد الفعالةمن الخلايا المنشطة. تسبب الوسطاء المفرجون (الهستامين ، السيروتونين ، الليكوترين ، البراديكينين ، إلخ) تأثيرات محيطية مختلفة مميزة لنوع التفاعل المقابل - المرحلة الثالثة.

تفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع

تحدث ردود الفعل من هذا النوع بسبب التفاعلات بين الخلايا المسببة للأمراض من Thelpers المحسّسة ، والخلايا Tlymphocytes السامة للخلايا (Tkillers) والخلايا المنشطة لنظام البلعمة أحادي النواة الناتجة عن التحفيز المطول للجهاز المناعي بواسطة المستضدات البكتيرية ، حيث يوجد قصور نسبي في مناعة الجسم نظام للتخلص من البيئة الداخلية مسببات الأمراض البكتيريةأمراض معدية. تسبب تفاعلات فرط الحساسية هذه تجاويف الرئة السلية ونخرها الجبني والتسمم العام في مرضى السل. يتكون الورم الحبيبي الجلدي في مرض السل والجذام بشكل كبير من تفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع.

أشهر مثال على تفاعل فرط الحساسية من النوع 4 هو تفاعل Mantoux ، الذي يتطور في موقع إعطاء السولين داخل الأدمة لمريض حساس جسمه ونظامه لمولدات المضادات الفطرية. نتيجة للتفاعل ، يتم تكوين حطاطة كثيفة مفرطة الدم مع نخر في المركز ، والتي تظهر بعد بضع ساعات فقط (ببطء) بعد إعطاء السلين داخل الأدمة. يبدأ تكوين الحطاطة بالخروج من سرير الأوعية الدمويةفي الفراغات بين الخلايا للبلعمات وحيدة النواة في الدورة الدموية. في نفس الوقت ، تبدأ الهجرة من السرير الوعائي للخلايا متعددة الأشكال. ثم ينحسر تسلل العدلات ، ويبدأ التسلل في الغالب في تكوين الخلايا الليمفاوية والبلعمات وحيدة النواة. هذا هو الفرق بين تفاعل Mantoux وتفاعل Arthus ، حيث تتراكم كريات الدم البيضاء متعددة الأشكال في الغالب في موقع الآفة.

في تفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع ، يؤدي التحفيز المطول للخلايا الليمفاوية الحساسة مع المستضدات إلى التغيرات المرضيةالأنسجة للإفراز المرضي المكثف والمطول للسيتوكينات بواسطة Thelpers. يؤدي الإطلاق المكثف للسيتوكينات في أماكن تلف الأنسجة إلى فرط نشاط خلايا نظام البلعمات وحيدة النواة الموجودة هناك ، والتي يشكل الكثير منها خيوطًا من الخلايا الظهارية في حالة مفرطة النشاط ، وبعضها يندمج مع بعضها البعض لتشكيل خلايا عملاقة. يمكن تدمير البلاعم ، التي تتعرض على سطحها المستضدات البكتيرية والفيروسية ، من خلال عمل Tkillers (قاتلات طبيعية).

يتم تحفيز تفاعل فرط الحساسية من النوع الرابع عن طريق التعرف على مستضد بكتيري غريب بواسطة مساعدي T المحسسين تجاهه. الشرط الضروري للاعتراف هو تفاعل المحرضات مع المستضدات المكشوفة على سطح الخلايا العارضة للمستضد بعد الالتقام ومعالجة المناعة الأجنبية بواسطة البالعات وحيدة النواة. اخر شرط ضروريالتعرض للمستضدات في تركيبة مع جزيئات الفئة الأولى من معقد توافق الأنسجة الرئيسي. بعد التعرف على المستضد ، يطلق المساعدون الحساسون السيتوكينات ، وعلى وجه الخصوص ، الإنترلوكين 2 ، الذي ينشط القاتلات الطبيعية والبالعات أحادية النواة. تقوم الخلايا البلعمية وحيدة النواة المنشطة بإطلاق الإنزيمات المحللة للبروتين وجذور الأكسجين الحرة التي تتلف الأنسجة.

اختبارات حساسية الجلد لتحديد حساسية الجسم لمسببات الحساسية ، وتحديد مدى إصابته ، على سبيل المثال ، السل ، داء البروسيلات ، المستوى مناعة القطيعمثل التولاريميا. حسب مكان إدخال مسببات الحساسية هناك: 1) اختبارات الجلد. 2) خدش. 3) داخل الأدمة. 4) تحت الجلد. ينقسم رد الفعل السريري لمسببات الحساسية في اختبار حساسية الجلد إلى محلي ، عام وبؤري ، وكذلك فوري ومتأخر.

تحدث التفاعلات الموضعية لنوع HIT الوسيط بعد 5-20 دقيقة ، ويتم التعبير عنها على شكل حمامي وبثور ، وتختفي بعد بضع ساعات ، ويتم تقديرها بالطريقة الإضافية بكمية الحمامي المقاسة بالملم. تحدث التفاعلات الموضعية للهرمون التعويضي بالهرمونات بعد 24-48 ساعة ، وتستمر لفترة طويلة ، وتظهر على شكل تسلل ، أحيانًا مع نخر في المركز ، ويتم تقييمها من خلال حجم الارتشاح بالملليمتر ، وأيضًا بواسطة نظام زائد. في الأنواع السامة للخلايا والمركب المناعي من GNT ، لوحظ احتقان الدم والتسلل بعد 3-4 ساعات ، وتصل إلى الحد الأقصى في 6-8 ساعات وتهدأ بعد حوالي يوم. في بعض الأحيان لوحظت ردود الفعل المشتركة.

1.3 التفاعل المترابط التكميلي (CFR)

يستخدم هذا التفاعل ل البحوث المخبريةللكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم في حالات العدوى المختلفة ، وكذلك لتحديد العامل الممرض من خلال التركيب المستضدي.

اختبار تثبيت المكمل هو اختبار مصلي معقد ويتميز بحساسية وخصوصية عالية.

من سمات هذا التفاعل أن التغيير في المستضد أثناء تفاعله مع أجسام مضادة محددة يحدث فقط في وجود مكمل. يتم امتصاص المكمل فقط على مركب الجسم المضاد-المستضد. يتشكل معقد الأجسام المضادة - المستضد فقط إذا كان هناك تقارب بين مولد الضد والجسم المضاد الموجود في المصل.

يمكن أن يؤثر الامتصاص التكميلي في مركب "الجسم المضاد للمستضد" على مصير المستضد بطرق مختلفة ، اعتمادًا على خصائصه.

تتعرض بعض المستضدات في ظل هذه الظروف إلى درجة حادة التغيرات المورفولوجية، حتى الذوبان (انحلال الدم ، ظاهرة إيزيف فايفر ، تأثير انحلال الخلايا). يغير البعض الآخر سرعة الحركة (تجميد اللولبية). لا يزال آخرون يموتون دون حاد تغييرات مدمرة(عمل مبيد للجراثيم أو سام للخلايا). أخيرًا ، قد لا يكون الامتصاص التكميلي مصحوبًا بتغييرات في المستضد يمكن ملاحظتها بسهولة.

وفقًا للآلية ، يتم إجراء RSC على مرحلتين:

1. المرحلة الأولى هي تكوين مركب "الجسم المضاد للمستضد" والامتصاص على هذا المركب التكميلي. نتيجة المرحلة غير مرئية بصريًا (تفاعل المستضد والأجسام المضادة مع المشاركة الإلزامية للمكمل).
2. المرحلة الثانية هي تغيير في مولد الضد تحت تأثير أجسام مضادة معينة في وجود مكمل. يمكن أن تكون نتيجة المرحلة مرئية أو غير مرئية (الكشف عن نتائج التفاعل باستخدام نظام انحلالي مؤشر (كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي).

يحدث تدمير كريات الدم الحمراء بواسطة المصل الانحلالي فقط في حالة التعلق التكميلي بالجهاز الانحلالي. إذا تم امتصاص المكمل في وقت سابق على مركب الجسم المضاد للمستضد ، فلن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء.

يتم تقييم نتيجة التجربة من خلال ملاحظة وجود أو عدم وجود انحلال الدم في جميع أنابيب الاختبار. يعتبر التفاعل إيجابيًا مع تأخير كامل في انحلال الدم ، عندما يكون السائل في أنبوب الاختبار عديم اللون وتستقر كرات الدم الحمراء في القاع ، يكون سالبًا مع التحلل الكامل لكريات الدم الحمراء ، عندما يكون السائل ملونًا بشكل مكثف (دم "ورنيش"). يتم تقدير درجة تأخير انحلال الدم اعتمادًا على كثافة لون السائل وكمية رواسب كرات الدم الحمراء في القاع (++++ ، +++ ، ++ ، +).

في حالة عدم إمكانية الوصول إلى التغييرات في المستضد للمراقبة البصرية ، فمن الضروري استخدام نظام ثان يعمل كمؤشر يسمح لك بتقييم حالة المكمل واستخلاص نتيجة حول نتيجة التفاعل.

يتم تمثيل نظام المؤشر هذا من خلال مكونات تفاعل انحلال الدم ، والتي تشمل كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي الذي يحتوي على أجسام مضادة محددة لكريات الدم الحمراء (الهيموليزين) ، ولكن لا يحتوي على مكمل. يضاف نظام المؤشرات هذا إلى أنابيب الاختبار بعد ساعة واحدة من ضبط CSC الرئيسي. إذا كان تفاعل تثبيت المكمل موجبًا ، فسيتم تكوين معقد مضاد - مستضد يمتص على نفسه. نظرًا لاستخدام المكمل بالكمية اللازمة لتفاعل واحد فقط ، ويمكن أن يحدث تحلل كريات الدم الحمراء فقط في وجود مكمل ، فعندما يتم امتصاصه في مركب "الجسم المضاد للمستضد" ، لن يحدث تحلل كرات الدم الحمراء في نظام (المؤشر) الانحلالي . إذا كان تفاعل التثبيت التكميلي سالبًا ، لا يتشكل معقد "الجسم المضاد للمستضد" ، ويظل المكمل حراً ، وعند إضافة النظام الانحلالي ، يحدث تحلل كرات الدم الحمراء.

1.4 دنابروبس. تفاعل سلسلة البوليمرات (PCR) ،
طريقة المناعة الإنزيمية (إليسا) ، طريقة المضاد الفلوريسنت (MFA)

طرق التحقيق الجيني

كان التطوير المكثف للبيولوجيا الجزيئية وخلق أساس منهجي مثالي للبحث الجيني الأساس الهندسة الوراثية. في مجال التشخيص ، نشأ اتجاه ويتطور بسرعة لتحديد متواليات نوكليوتيد معينة من الحمض النووي والحمض النووي الريبي ، ما يسمى بالتحقيق الجيني. تعتمد هذه الطرق على قدرة الأحماض النووية على التهجين لتشكيل هياكل مزدوجة الشريطة بسبب تفاعل النيوكليوتيدات التكميلية (AT ، GC).

لتحديد تسلسل الحمض النووي (أو RNA) المطلوب ، يتم إنشاء ما يسمى مسبار متعدد النوكليوتيد مع تسلسل أساسي محدد خصيصًا. يتم إدخال ملصق خاص في تركيبته ، مما يجعل من الممكن تحديد تكوين المجمع.

على الرغم من أن فحص الجينات لا يمكن أن يُعزى إلى طرق التحليل الكيميائي المناعي ، إلا أن مبدأه الرئيسي (تفاعل الهياكل التكميلية) يتم تنفيذه بشكل منهجي بنفس الطرق مثل طرق مؤشرات التشخيص المناعي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن طرق فحص الجينات تجعل من الممكن ملء المعلومات حول عامل معدي في غياب تعبيره الظاهري (الفيروسات المدمجة في الجينوم ، الجينات "الصامتة").

لتحليل الحمض النووي ، تخضع العينة للتمسخ من أجل الحصول على هياكل أحادية السلسلة ، والتي تتفاعل معها جزيئات DNA أو RNAprobe. يتم تحضير المجسات باستخدام أي منهما أقسام مختلفةالحمض النووي (أو الحمض النووي الريبي) المعزول من مصدر طبيعي (على سبيل المثال ، كائن حي دقيق أو آخر) ، وعادة ما يتم تقديمه على شكل متواليات جينية كجزء من بلازميدات ناقلات ، أو أوليغنوكليوتيدات مركبة كيميائيًا. في بعض الحالات ، تُستخدم مستحضرات الحمض النووي الجينومي المتحلل إلى شظايا كمسبار ، وأحيانًا مستحضرات RNA ، وخاصة RNA الريبوسومي غالبًا. يتم استخدام نفس المؤشرات كتسمية ، كما في أنواع مختلفةالتحليل الكيميائي المناعي: النظائر المشعة ، الفلورسين ، النظائر الحيوية (مع مزيد من المظاهر بواسطة مركب أفيدين أنزيم) ، إلخ.

يتم تحديد ترتيب التحليل من خلال خصائص المسبار المتاح

في الوقت الحالي ، يتم استخدام مجموعات تجارية تحتوي على جميع المكونات الضرورية بشكل متزايد.

في معظم الحالات ، يمكن تقسيم إجراء التحليل إلى المراحل التالية: تحضير العينة (بما في ذلك استخراج الحمض النووي والتمسخ) ، وتثبيت العينة على الناقل (غالبًا ، مرشح غشاء بوليمر) ، التهجين المسبق ، التهجين نفسه ، غسل المنتجات غير المقيدة ، كشف. بدون دواء قياسييتم الحصول على DNA أو RNAprobe مبدئيًا وتمييزها.

لتحضير العينة ، قد يكون من الضروري "إنماء" مادة الاختبار من أجل تحديد المستعمرات البكتيرية الفردية أو زيادة تركيز الفيروسات في زراعة الخلايا. تحليل مباشر لعينات من مصل الدم ، البول ، عناصر على شكلالدم أو دم كامللوجود عامل معدي. لإطلاق الأحماض النووية من تكوين الهياكل الخلوية ، يتم تحلل الخلايا ، وفي بعض الحالات يتم تنقية تحضير الحمض النووي باستخدام الفينول.

يحدث تمسخ الحمض النووي ، أي انتقاله إلى شكل أحادي السلسلة ، أثناء العلاج بالقلويات. يتم بعد ذلك تثبيت عينة الحمض النووي على حامل غشاء نيتروسليلوز أو نايلون ، عادة عن طريق الحضانة لمدة 10 دقائق إلى 4 ساعات عند 80 درجة مئوية تحت التفريغ. علاوة على ذلك ، في عملية التهجين المسبق ، يتم تعطيل مواقع الربط الحر لتقليل التفاعل غير المحدد للمسبار مع الغشاء. تستغرق عملية التهجين من 2 إلى 20 ساعة ، اعتمادًا على تركيز الحمض النووي في العينة ، وتركيز المسبار المستخدم وحجمه.

بعد اكتمال التهجين وغسل المنتجات غير المنضمة ، يتم اكتشاف المركب الناتج. إذا كان المسبار يحتوي على ملصق إشعاعي ، فإن الغشاء يتعرض لفيلم فوتوغرافي لإظهار التفاعل (التصوير الشعاعي الذاتي). بالنسبة للملصقات الأخرى ، استخدم الإجراءات المناسبة.

أكثرها واعدة هو إنتاج المجسات غير المشعة (ما يسمى بالمجسات الباردة). على نفس الأساس ، يتم تطوير تقنية التهجين التي تجعل من الممكن إثبات وجود العامل الممرض في تحضير المقاطع وثقوب الأنسجة ، وهو أمر مهم بشكل خاص في التحليل المرضي (التهجين في الموقع).

كانت الخطوة الأساسية في تطوير طرق فحص الجينات هي استخدام تفاعل تضخيم البلمرة (PCR). هذا النهج يجعل من الممكن زيادة تركيز تسلسل DNA معين (معروف سابقًا) في عينة عن طريق توليف نسخ متعددة في المختبر. لإجراء التفاعل ، يتم إضافة تحضير إنزيم بوليميريز DNA ، وفائض من ديوكسينوكليوتيدات للتخليق وما يسمى بالبادئات ، نوعان من قليل النيوكليوتيدات من 20 إلى 25 قاعدة تتوافق مع الأقسام النهائية لتسلسل الحمض النووي ذي الأهمية ، إلى عينة الحمض النووي قيد الدراسة. يجب أن يكون أحد البادئات نسخة من بداية منطقة القراءة لخيط DNA المشفر في اتجاه القراءة 53 ، والثاني يجب أن يكون نسخة من الطرف المقابل من الشريط غير المشفر. بعد ذلك ، مع كل دورة من تفاعل البلمرة ، يتضاعف عدد نسخ الحمض النووي.

لربط البادئات ، يلزم تمسخ الحمض النووي (الذوبان) عند 94 درجة مئوية ، متبوعًا بجلب الخليط إلى 4055 درجة مئوية.

لتنفيذ التفاعل ، صُممت حاضنات العينات الدقيقة القابلة للبرمجة لتبديل التغيرات في درجات الحرارة بسهولة والتي تكون مثالية لكل مرحلة من مراحل التفاعل.

يمكن أن يؤدي تفاعل التضخيم إلى زيادة حساسية التحليل بشكل كبير أثناء التحقيق الجيني ، وهو أمر مهم بشكل خاص عند التركيزات المنخفضة للعامل المعدي.

تتمثل إحدى المزايا المهمة للتحري الجيني مع التضخيم في إمكانية دراسة كمية دون مجهرية من المادة المرضية.

ميزة أخرى للطريقة ، أكثر أهمية لتحليل المواد المعدية ، هي القدرة على اكتشاف الجينات المخفية (الصامتة). من المؤكد أن الطرق المتعلقة باستخدام التحقيق الجيني سيتم إدخالها على نطاق أوسع في ممارسة تشخيص الأمراض المعدية لأنها تصبح أبسط وأرخص.

تعد طرق ELISA و RIF في الغالب نوعية أو شبه كمية. جدا تركيزات منخفضةالمكونات ، لا يمكن تسجيل تكوين معقد الأجسام المضادة للمستضد بصريًا أو بوسائل آلية بسيطة. يمكن إجراء بيان مركب الجسم المضاد للمستضد في مثل هذه الحالات إذا كان أحد المكونات الأولية للمستضد أو الجسم المضاد يقدم ملصقًا يمكن اكتشافه بسهولة بتركيزات مماثلة لتركيز التحليل المطلوب تحديده.

يمكن استخدام النظائر المشعة (على سبيل المثال ، 125I) والمواد الفلورية والإنزيمات كتسمية.

اعتمادًا على الملصق المستخدم ، هناك طرق تحليل المناعة الإشعاعية (RIA) والمناعة الفلورية (FIA) والمقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA) ، إلخ. السنوات الاخيرةواسع الاستخدام العمليحصل على ELISA ، والذي يرتبط بالاحتمال التحديدات الكمية، حساسية عالية وخصوصية وأتمتة المحاسبة.

طرق ELISA لتحليل مجموعة من الطرق التي تسمح باكتشاف معقد الأجسام المضادة للمستضد باستخدام ركيزة مشقوقة بواسطة إنزيم مع ظهور اللون.

يكمن جوهر الطريقة في الجمع بين مكونات تفاعل الجسم المضاد للمستضد مع ملصق إنزيم مُقاس. يتم تمييز المستضد أو الجسم المضاد الذي يتفاعل مع الإنزيم. من خلال تحويل الركيزة تحت تأثير الإنزيم ، يمكن للمرء أن يحكم على كمية مكون تفاعل المستضد والجسم المضاد الذي دخل في التفاعل. يعمل الإنزيم في هذه الحالة كعلامة على الاستجابة المناعية ويسمح لك بمراقبتها بصريًا أو آليًا.

تعتبر الإنزيمات من الملصقات المريحة للغاية لأن خصائصها التحفيزية تسمح لها بالعمل كمعززات ، حيث يمكن أن ينتج جزيء إنزيم واحد أكثر من 1 × 105 جزيء منتج تحفيزي في الدقيقة. من الضروري اختيار إنزيم يحتفظ بنشاطه التحفيزي لفترة طويلة ، ولا يفقده عند ارتباطه بمولد ضد أو جسم مضاد ، وله خصوصية عالية فيما يتعلق بالركيزة.

الطرق الرئيسية للحصول على الأجسام المضادة أو المستضدات الموصوفة بالإنزيم ، المتقارنات: الهندسة الكيميائية والمناعية والوراثية. غالبًا ما تستخدم الإنزيمات في ELISA: الفجل البيروكسيديز ، الفوسفاتيز القلوي ، الجالاكتوزيداز ، إلخ.

لاكتشاف نشاط الإنزيم في معقد الأجسام المضادة للمستضد لغرض المحاسبة البصرية والأدوات للتفاعل ، يتم استخدام ركائز كروموجينيك ، والتي تكون حلولها عديمة اللون في هذه العملية رد فعل إنزيمياكتساب لون تتناسب شدته مع كمية الإنزيم. وبالتالي ، للكشف عن نشاط بيروكسيداز الفجل في المرحلة الصلبة إليزا ، يستخدم حمض 5 أمينوساليسيليك كركيزة ، والتي تعطي لونًا بنيًا كثيفًا ، أورثوفينيلين ديامين ، الذي يشكل لونًا برتقاليًا أصفر. للكشف عن نشاط الفوسفاتاز القلوي و galatosidase ، يتم استخدام nitrophenylphosphates و nitrophenylgalactosides على التوالي.

يتم تحديد نتيجة التفاعل في تكوين منتج ملون بصريًا أو باستخدام مقياس طيف ضوئي يقيس امتصاص الضوء بطول موجي معين.

هناك العديد من الخيارات لتحديد مرحلة إليسا. هناك متغيرات متجانسة وغير متجانسة.

وفقًا لطريقة الإعداد ، تتميز طرق ELISA التنافسية وغير التنافسية. في حالة وجود المركب الذي تم تحليله ومراكز الارتباط المقابلة له (مستضد وأجسام مضادة محددة) في النظام في المرحلة الأولى ، تكون الطريقة غير تنافسية. إذا كان المركب الذي تم تحليله (المستضد) والمماثل له (المستضد المسمى بالإنزيم) موجودًا في المرحلة الأولى ، يتنافس مع بعضهما البعض للارتباط بمراكز الربط المحددة (الأجسام المضادة) الموجودة في النقص ، فإن الطريقة تكون تنافسية. في هذه الحالة ، كلما احتوى المستضد المدروس على المحلول ، فإن كمية أقلالمستضدات المسمى ملزمة.

طريقة مضادات الجسيمات المتدفقة (MFA) أو التفاعلات المناعية (RIF)

طريقة الفلورسنت المناعي هي الطريقة المختارة للكشف السريع والتعرف على كائن حي مجهري غير معروف في مادة الاختبار.

Ag + AT + المنحل بالكهرباء = مجمع مضيء للأشعة فوق البنفسجية

مصل الميكروب المسمى بالفلوروكروم

غالبًا ما يتم استخدام صبغة إيزوثيوسيانات FITC

في هذه الدراسة ، تم استخدام مجهر الفلورسنت.

انطلاق RIF

يتم وضع 30 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة التي تحمل علامة FITC على اللطاخة.

ضع الزجاج في غرفة رطبة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-25 دقيقة ، أو في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

اشطف الزجاج في ماء الصنبور الجاري لمدة دقيقتين ، ثم اشطفه بالماء المقطر وجففه في الهواء.

يتم وضع قطرة من سائل التركيب على اللطاخة المجففة ، ويتم تغطية اللطاخة بغطاء منزلق ويتم فحصها تحت المجهر باستخدام مجهر الفلورسنت أو ملحق الفلورسنت بالمجهر الضوئي التقليدي.

في علم الأحياء الدقيقة

"تفاعل التراص وأنواعه (RA)"

يخطط:

1. مقدمة ……………………………………………………………………………………………… .. 3

2. RA على الزجاج …………………………………………………………………………………………… .4

3. أنبوب اختبار PA ……………………………………………………………………………………… .5

4. الأدب المستخدم …………………………………………………………………………… .. 7

1 المقدمة.

تفاعل المستضد الميكروبي والأجسام المضادة محدد بدقة ويتم توجيهه في جسم الحيوان لتحييد العامل الممرض وسمومه. تفاعل المستضد والأجسام المضادة في المختبر في ظل ظروف معينة مصحوب بظواهر مرئية (تراص ، ترسيب ، تحلل مناعي) ، مما يسمح باستخدام تفاعلات AG-AT ، والتي تسمى مصلية (من مصل مصل لاتيني) ، لأغراض عملية. تنتج المعامل الحيوية مستضدات وأمصال مناعية (أجسام مضادة) ذات اتجاه محدد معروف (تشخيصي). بمساعدة هذه الأمصال في التفاعلات المصلية ، من الممكن تحديد كائن دقيق غير معروف أو ، باستخدام مستضد معروف ، للكشف عن الأجسام المضادة في الجسم التي يتم تصنيعها استجابة لإدخال العامل الممرض ، وبالتالي إجراء التشخيص (التشخيص المصلي) . بالإضافة إلى ذلك ، يمكن استخدام التفاعلات المصلية لتقييم شدة الاستجابة المناعية بعد التطعيم أو الإصابة بمرض معدي.

تعتمد تفاعلات التراص ، مثل التراص غير المباشر و Coombs ، على التفاعل في المختبر بين مستضدات الجسم والأجسام المضادة وقدرة المجمعات الناتجة على الترسيب. كمستضدات في الجسم ، يتم استخدام الخلايا البكتيرية أو المستضدات القابلة للذوبان المستخرجة من الكائنات الدقيقة والممتزة على كريات الدم الناقلة: كريات الدم الحمراء وجزيئات اللاتكس وما إلى ذلك.

تتفاعل المحددات المستضدية لمولدات المضادات الجسدية على وجه التحديد مع الأجسام المضادة المتجانسة (مرحلة محددة وغير مرئية من التفاعل) ، ثم تتشكل مجمعات الأجسام المضادة للمستضد كبيرة ، ومرئية لتكتلات العين المجردة التي تترسب - تتراكم (مرحلة غير محددة ومرئية من التفاعل) . في الأشكال غير الجلدية من الميكروبات (البروسيلا) ، تتشكل المواد التراصية الحبيبية ، في سوط (Escherichia ، Salmonella) - قطن كبير ، يستقر في قاع أنبوب الاختبار على شكل مظلة مقلوبة ويمكن كسرها بسهولة عند رجها . تتفاعل المستضدات والأجسام المضادة فقط في وجود إلكتروليت (في محلول كلوريد الصوديوم بنسبة 0.8٪). يتأثر مسار التفاعل بتركيز الملح في المنحل بالكهرباء ، وعدد الخلايا الميكروبية في المعلق ، وتركيز المصل ، ودرجة الحموضة ، ودرجة الحرارة ، وعوامل أخرى.

تفاعل التراص (ra).

التمييز بين التراص النوعي ، يعتمد السرب على تفاعل المستضد معجسم مضاد متماثل , الموجود في جسم الحيوان ، أدخل كروم هذا المستضد (التراص المناعي) ؛ غير محدد (كيميائي) ، ناشئ عن تغيرات في درجة الحموضة في البيئة ، وتركيز الشوارد ؛ يتم ملاحظة العفوية إلى ruyu عندما يتم تعليق البكتيريا (الموجودة في شكل R) في محلول ملحي وعند تسخينها ، وهو ما يرتبط بتغير في الحالة الغروانية للخلية البكتيرية. مولد المضاد , المتورط في التهاب المفاصل الروماتويدي يسمى agglutinogen ، يسمى الجسم المضاد agglutinin ، ويطلق على المادة المترسبة الناتجة اسم agglutinate. في تكوين التراص ، تكون النسبة الكمية للمستضد والأجسام المضادة (الظاهرة المثلى) مهمة. مع وجود فائض أو نقص في الأجسام المضادة ، فإن A.

تفاعل التراص (RA) هو أحد التفاعلات المناعية الأولى المستخدمة في الممارسة الميكروبيولوجية. لأول مرة (1895) استخدم F.Vidal RA لتشخيص حمى التيفود. في وقت لاحق (1897) ، استخدم أ. رايت نفس التفاعل لتشخيص داء البروسيلات في البشر. وجد التهاب المفاصل الروماتويدي أيضًا تطبيقًا في تشخيص التصلب في الدجاج ، وداء البريميات ، والإجهاض المعدي للأفراس ، وكذلك في تصنيف الثقافات غير المعروفة للميكروبات وفقًا لمصل التراص المعروف. التهاب المفاصل الروماتويدي حساس للغاية ؛ يمكنه الكشف عن 0.01 ميكروجرام من نيتروجين بروتين الجسم المضاد في 1 مل.

تم تطوير العديد من المتغيرات لتفاعل التراص ، تختلف في التنفيذ المنهجي والغرض من الدراسة.

2. رع على الزجاج.

في هذا النوع من التهاب المفاصل الروماتويدي ، يمكن اختبار كل من المصل والمستضد ، ولكن غالبًا ما يستخدم هذا المتغير لتحديد الكائنات الحية الدقيقة.

1. لتحديد الكائن الدقيق (m / o) ، يتم وضع قطرة من مصل التراص المعروف ، مثل داء السلمونيلات ، وقطرة من محلول ملحي (تحكم) بشكل منفصل على شريحة زجاجية منزوعة الدهن. ثم ، باستخدام حلقة جرثومية ، تؤخذ الكتلة البكتيرية للثقافة المدروسة من المستعمرة في طبق بتري أو من سطح MPA المائل في أنبوب اختبار ويتم تعليقها بشكل منفصل في مصل مناعي ومحلول ملحي فسيولوجي حتى يتم الحصول على معلق متجانس . تؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد 2 ... 4 دقائق.

المحاسبة عن النتائج: يجب ألا يكون هناك تغيير في العينة الضابطة. مع التطابق المحدد للثقافة البكتيرية مع المصل المناعي ، تظهر رقائق التراص (نتيجة إيجابية) ، في غياب ظاهرة التراص ، استنتج أن الثقافة البكتيرية المدروسة لا تتوافق مع مصل المناعة.

2. سيتم النظر في الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم المدروس باستخدام مثال اختبار الورد البنغال المستخدم في التشخيص المصلي لمرض البروسيلا. يتم وضع 0.3 مل من مصل دم الحيوان المدروس و 0.03 مل من مستضد البروسيلا (خلايا البروسيلا الملطخة باللون الوردي البنغالي) على شريحة زجاجية. يتم خلط المكونات جيدًا عن طريق هز الزجاج وتؤخذ النتيجة في الاعتبار بعد 4 دقائق.

نتائج المحاسبة: مع رد فعل إيجابي ، تظهر رقائق وردية من التراص. يتم تصنيف التفاعل المصلي من هذا النوع على أنه نوعي ، حيث يمكن استخدامه للكشف عن الأجسام المضادة لمسببات الأمراض في مصل دم الحيوان ، ولكن من المستحيل تقييم محتواها الكمي.