Dom » Dijete od 1,5 do 2 godine » Glavna metoda u dijagnostici akutne leukemije. Leukemija: dijagnoza. Laboratorija, diferencijal. Simptomi raznih vrsta leukemije

Glavna metoda u dijagnostici akutne leukemije. Leukemija: dijagnoza. Laboratorija, diferencijal. Simptomi raznih vrsta leukemije

Sumnja na leukemiju javlja se u prisustvu kliničkih simptoma i sljedećih promjena periferna krv: normohromna normocitna anemija; broj leukocita može biti različit - nizak (ispod 5 109 / l), normalan (od 5 109 / l do 20 109 / l), povećan (preko 20 109 / l, dostižući u nekim slučajevima 200 109 / l); neutropenija (ne zavisi od ukupnog broja leukocita); apsolutna limfocitoza; trombocitopenija (gotovo uvijek prisutna); "leukemijski neuspjeh" - prisutnost eksplozija, zrelih oblika u pozadini odsustva srednjih oblika; kod akutne mijeloblastne leukemije mogu se otkriti azurofilne granule i Auer štapići.

Punkcija koštane srži

Punkcija koštane srži je glavna metoda istraživanja leukemije. Koristi se za potvrdu dijagnoze i identifikaciju (morfološke, imunofenotipske, citogenetske) vrste leukemije. Aspiracija koštane srži može biti otežana zbog njenog iscrpljivanja (supresije hematopoeze) i povećanog sadržaja vlaknastih struktura u njoj.

Mijelogram (kvantifikacija svih ćelijske forme koštana srž) kod akutne leukemije: povećanje sadržaja blastnih ćelija za više od 5% pa sve do ukupne blastoze; morfologija blasta je različita u zavisnosti od vrste leukemije; povećanje srednjih oblika; limfocitoza; crvena klica hematopoeze je depresivna (s izuzetkom akutne eritromijeloze); megakariociti su odsutni ili je njihov broj neznatan (s izuzetkom akutne megakarioblastne leukemije).

Citokemijski pregled je glavna metoda za dijagnosticiranje oblika akutne leukemije. Provodi se kako bi se identificirali enzimi specifični za različite blaste. Dakle, uz OJUI se utvrđuje pozitivna reakcija PAS na glikogen, negativna reakcija na lipide, peroksidazu i hloracetat esterazu. Kod akutnih mijeloidnih leukemija - pozitivna reakcija na mijeloperoksidazu, lipide, hloracetat esterazu. PAS-reakcija zavisi od oblika akutne mijeloične leukemije.

Imunofenotipizacija blasta se provodi automatiziranom metodom na protočnom citometru ili enzimskim imunotestom na staklu uz pomoć svjetlosne mikroskopije. Ovo posljednje ima prednost što se može provoditi paralelno s citokemijskom studijom. Imunofenotipizacija omogućava određivanje prisutnosti ili odsustva klastera diferencijacije blastnih ćelija (CD markera) pomoću monoklonskih antitijela. Prvenstveno je neophodan za tačnu dijagnozu ALL, kao i u teškim slučajevima diferencijalne dijagnoze akutnih limfoblastnih i mijeloblastnih leukemija. Ovo je fundamentalna stvar, jer je tretman ovih oblika različit.

Citogenetsko proučavanje ćelija leukemije omogućava vam određivanje kromosomskih abnormalnosti i daljnju prognozu.

Druge obavezne primarne metode istraživanja

Istraživanje alkoholnih pića. Povećana citoza zbog blasta ukazuje na neuroleukemiju.
Rendgenski pregled grudnog koša: proširenje sjene medijastinuma zbog povećanja intratorakalnih limfnih čvorova, leukemidi u plućima.
Biohemijski test krvi, EKG, ehokardiografija, EEG neophodni su za određivanje početnih pokazatelja funkcija vitalnih organa i provode se prije i za vrijeme kemoterapije, budući da korišteni citostatici imaju kardiotoksična, hepatotoksična i nefrotoksična svojstva.
Ultrazvuk: povećanje jetre i slezene, žarišta leukemoidne infiltracije u parenhimskim organima.

U hematologiji postoji koncept hemoblastoza - tumora koji nastaju hematopoetsko tkivo. Hemoblastoze uključuju leukemije i hematosarkome. Leukemije su hemoblastoze sa primarnom tumorskom lezijom koštane srži. Hematosarkomi - oblici sa primarnim lokalnim rastom tumora, izvan koštane srži, to su čvrsti tumori koji se sastoje od blastnih ćelija hematopoetskog tkiva.

Leukemija je sistemsko oboljenje hematopoetskog tkiva koje nastaje iz hematopoetskih ćelija i nužno zahvata koštanu srž. Trenutno je tumorska priroda leukemije van sumnje, a za većinu leukemija je utvrđena njihova klonska priroda. Otkriveno je da su sve tumorske ćelije klon, odnosno potomci jedne izmenjene ćelije, koja se potom širi i metastazira po celom hematopoetskom sistemu. Izvor rasta tumora je najbliže potomstvo (klon) roditelja - hematopoetske matične ćelije. Sposobnost metastaziranja određuje sistemsku prirodu procesa, a glavno mjesto distribucije ovih tumorskih ćelija je koštana srž, zbog čega se ćelije normalne hematopoeze pomjeraju.

Etiologija leukemije ostaje nejasna. Kako A.I. Vorobyov piše: "Potraga za jednim uzrokom ili grupom uzroka iste vrste ljudskih tumora u njihovom siromaštvu može se takmičiti samo s potragom za Atlantidom." Za pojedinačne leukemije već su pronađeni neki faktori koji doprinose otkrivanju njihove etiologije. Dakle, odvajanje dugog kraka hromozoma od para 22 i transfer ovog segmenta na jedan od velikih hromozoma para 9 dešava se u skoro svim ćelijama koštane srži kod pacijenata sa hroničnom mijelogenom leukemijom. Patološki hromozom od 22 para sa skraćenim dugim krakom nazvan je Philadelphia po gradu u kojem su ga 1959. otkrili Nowell i Hungerford. Slične translokacije hromozoma se po pravilu dešavaju pod uticajem jonizujućeg zračenja, pa ove činjenice potvrđuju mutacionu prirodu (najčešće zračenja) hronične mijeloične leukemije. Nakon eksplozije nuklearna bomba u Japanu su slučajevi kronične mijeloične leukemije i akutne leukemije 7 puta češći nego u drugim zemljama.

Kromosomske abnormalnosti kod akutne leukemije su u prirodi aneuploidije - promjene u broju hromozoma u tumorskoj ćeliji, a ne u strukturi, kao kod kronične mijeloične leukemije. Neobičan oblik akutne leukemije, koji se uglavnom nalazi u Africi, Burkittov limfom, otkriva epidemije, dajući razlog za razmišljanje o njegovoj virusnoj prirodi. Dakle, u nastanku akutne leukemije postoje različiti razlozi: jonizujuće zračenje, genetski poremećaji, ne isključuje ulogu virusa.

Hronična limfocitna leukemija ne pokazuje zavisnost od dejstva mutagenih faktora, uključujući jonizujuće zračenje, ali ima jasnu vezu sa etničkim karakteristikama. Hronična limfocitna leukemija se rijetko dijagnosticira u nekim plemenima i narodima.

Trenutno, u nedostatku etiotropne terapije leukemije, provodi se njihova patogenetska terapija, što u nekim slučajevima omogućava da se govori o izlječenju pacijenata s određenim vrstama leukemije. Više od 3-5 godina posmatranja dece sa akutnom limfoblastnom leukemijom, koja su u stanju potpune remisije, pokazuje da postoji fundamentalna mogućnost eliminacije tumorskih ćelija čak i ako su one široko rasprostranjene u celom hematopoetskom sistemu.

Kod ljudi, crvena koštana srž se nalazi u svim cjevastim kostima, lobanji, rebrima, prsnoj kosti, ključnoj kosti, lopatici, kičmi, karličnim kostima. Postoje 2 tipa ćelija u koštanoj srži: retikularna stroma i parenhim. Hematopoeza je serija ćelijska diferencijacijašto dovodi do pojave zrelih ćelija periferne krvi.

Moderna shema hematopoeze. Moderne ideje o hematopoezi iznio je 20-ih godina A.A. Maksimov. U našoj zemlji najčešća shema hematopoeze bila je shema I.A. Kassirskyja i G.A. Aleksejeva. Međutim, u ovoj shemi, najhipotetičnija je bila ona gornji dio, odnosno ćelija - predak hematopoeze. Predložena je trenutno korištena hematopoetska shema

I. L. Chertkov i A. I. Vorobyov 1973. godine.

Sva krvna zrnca podijeljena su u 6 klasa.

1. klasa ćelija sastoji se od hematopoetskih matičnih ćelija, čiji kvantitativni sadržaj u hematopoetskom tkivu ne prelazi delić procenta. Ove ćelije obezbeđuju stabilnu hematopoezu i njen oporavak nakon poremećenih uticaja. Matična ćelija je jedina sposobna da se samoodrži dugo, duže od životnog veka pojedinca. Matične ćelije su pluripotentne i sposobne su da se razlikuju prema svim hematopoetskim linijama. Nije isključeno da limfopoeza ima istu matičnu ćeliju kao i njena početna karika. Dakle, matične ćelije se nazivaju takve ćelije koje imaju i sposobnost neograničenog samoodržavanja, kao i sposobnost razmnožavanja i diferencijacije.

Čini se da retikularne ćelije, fibroblasti i endotelne ćelije imaju svoje prekursorske ćelije. Prečnik matične ćelije je 8-10 µm, oblik ćelije je okrugao ili nepravilan. Jezgro je često homogeno, okruglo ili bubrežastog oblika, obično su vidljive 1-2 velike jezgre. Obod svijetloplave citoplazme je uzak, ne sadrži granularnost. 65% matičnih ćelija se diferencira duž eritroidnog puta, 30% duž mijeloidnog puta i 5% duž megakariocitnog puta.

Ćelije klase 2 - klasa pluripotentnih progenitorskih ćelija koje su sposobne za proliferaciju i diferencijaciju: prekursorske ćelije T-limfocita, ćelija koja formira kolonije kulture služi kao početna karika u histogenezi ćelija dve linije: granulocita i monocita .

Klasa 3 - klasa bipotentnih progenitornih ćelija kao što su ćelije osetljive na eritropoetin i ćelije osetljive na trombopoetin. Ove tri klase su morfološki nediferencirane ćelije.

Klasa 4 - unipotentne progenitorske ćelije koje su sposobne da se diferenciraju samo u pravcu jedne hematopoetske loze. Ove ćelije su morfološki prepoznatljive. Zovu se blasti (prema strukturi jezgra), koji započinju odvojene redove hematopoeze: plazmablast, limfoblast, monoblast, mijeloblast, eritroblast, megakarioblast.

Stepen 5 - klasa sazrevanja ćelija.

Stupanj 6 - klasa zrelih ćelija sa ograničenim životnim ciklusom.

Tako je termin nediferencirani blasti (ćelije prve 3 klase) zamijenio staro ime hemocitoblasta. U modernoj hematologiji široko se koriste citokemijske metode istraživanja koje omogućavaju identifikaciju Razne vrste krvne ćelije, njihov stepen zrelosti, koji pripadaju jednoj ili drugoj hematopoetskoj seriji.

Klasifikacija leukemija. Godine 1857. Friedrich je podijelio sve leukemije na akutne i kronične. Podjela je zasnovana na morfološkom principu: grupu akutnih leukemija objedinjuje zajednička karakteristika- supstrat tumora su mlade ćelije - nediferencirane ćelije prve 3 klase ili klase 4 - blasti. Akutna leukemija iz morfološki nediferenciranih ćelija prve 3 klase naziva se nediferencirana akutna leukemija. Ako tumor nastaje iz ćelija 4. klase, onda se naziva oznakom ćelija 4. klase. Grupa hroničnih leukemija uključuje diferencirajuće tumore krvnog sistema, čiji su glavni supstrat zrele i zrele ćelije. Trajanje bolesti ne utječe na izolaciju akutne i kronične leukemije, iako se češće akutne leukemije karakteriziraju kraćim životnim vijekom, a kroničnim znatno dužim. Istovremeno, uz modernu citostatsku terapiju, postoje slučajevi produženog tijeka akutne leukemije (godine). Naprotiv, može doći do brzog toka hronične leukemije.

Već početkom 20. stoljeća akutna leukemija se počela dijeliti na limfoblastne i mijeloblastne varijante. Ova podjela je prvenstveno povezana s prisustvom ili odsutnošću enzima mijeloperoksidaze. Zatim je 1964. godine u Kembridžu osnovana komisija za izradu opšte klasifikacije akutne leukemije. Zasnovan je na morfološkoj osobini. Trenutno se klasifikacija akutne leukemije zasniva na citokemijskim karakteristikama. Akutna leukemija iz morfološki nediferenciranih ćelija prve 3 klase naziva se nediferencirana akutna leukemija. Ako tumor nastaje iz ćelija klase 4, onda se naziva oznakom ćelija klase 4: mijeloblastna, mijelomonoblastična, monoblastična, promijelocitna, akutna eritromijeloza, megakarioblastična, limfoblastična, plazmablastična, nediferencirana akutna leukemija.

Dijagnoza akutne leukemije. Kao što je već spomenuto, akutna leukemija

Maligni tumor hematopoetskog tkiva, čiji su morfološki supstrat transformisane blastne ćelije koje odgovaraju progenitorskim elementima jedne od hematopoetskih linija. Dijagnoza akutne leukemije može biti samo morfološka. U tu svrhu se vrši punkcija prsnog koša, a samo naglo povećan postotak ćelija prve 3 klase ili ćelija 4. klase omogućava dijagnosticiranje akutne leukemije. Obično je postotak ćelija prve 4 klase u akutnoj leukemiji nekoliko desetina posto, ponekad je taj postotak 10-20%, ovo je niskoprocentni oblik akutne leukemije. Ako je postotak blast ćelija ispod ovih cifara, može se uraditi trepanobiopsija - studija koštane srži uzete iz krila ilijake. Kod trepanobiopsije se nalaze nakupine mladih stanica u značajnoj količini. Ako je u ovom slučaju dijagnoza sumnjiva, onda analizu treba ponoviti nakon 3-4 tjedna.

U perifernoj krvi kod akutne leukemije postoji jaz, jaz između blast ćelija i zrelih elemenata uz odsustvo promijelocita i mijelocita u mijelogramu, tzv. hiatus leucemicus.

Faze akutne leukemije: početna faza, produženi period (prvi napad, recidiv), remisija (potpuna ili djelomična), oporavak, relaps akutne leukemije (označava koji) i terminalni stadijum.

Trenutno dostupne informacije o početnom stadijumu akutne leukemije su oskudne, o ovoj fazi se može suditi samo retrospektivno. Pacijenti imaju progresivno rastuću slabost, znojenje.

Dijagnoza se može postaviti nasumičnim testom krvi ili tokom vršne faze bolesti. Kada je raspoređen kliničkih simptoma pacijenti imaju visoku temperaturu, zimicu, vrtoglavicu, bolove u kostima, zglobovima, anoreksiju, krvarenje desni. Na početku bolesti 55-70% ljudi ima hemoragijski sindrom sa krvarenjem bilo koje lokalizacije i pojavom krvarenja na koži, što je povezano s trombocitopenijom. Uz inhibiciju granulocitne klice, bilježi se ulcerozno-nekrotični tonzilitis, povećanje temperature.

U krvnim pretragama postoji umjerena anemija, broj leukocita može biti povećan, normalan, smanjen, s eksplozijama u perifernoj krvi, zabilježena je trombocitopenija. Čak i ako su promjene u perifernoj krvi nejasne, koštana srž dešifruje dijagnozu: nekoliko desetina % blasta ili 100 % nalazi se u mijelogramu. Obično je povećanje slezene umjereno, njeno povećanje se poklapa s drugim znacima progresije. Značajno povećanje jetre također nije uočeno. Često se pojavljuju kožne izrasline, a nalazi se i leukemijska infiltracija potkožnog tkiva, formirajući gusto, zalemljeno na kožu i podižući njene čvorove. Može doći do leukemijske infiltracije plućnog tkiva i mozga.

Takve kliničku sliku karakteristika akutne mijeloične leukemije kod odraslih.

Upoznajte se sa programom za dijagnostiku i liječenje leukemije u Izraelu.

Akutna promijelocitna leukemija se donekle razlikuje od grupe akutnih leukemija, prvenstveno po tome što je promijelocit ćelija klase 5. Očigledno, ime nije sasvim točno, a stanica pripada klasi 4, ali u konvencionalnom svjetlosnom mikroskopu ne može se razlikovati od promijelocita. Odlikuje se oštrim malignitetom tijeka, težinom hemoragičnog sindroma, hipofibrinogenemijom i brzinom tijeka. Prvi i najtipičniji simptom bolesti je hemoragijski sindrom. U pravilu je riječ o pojavi modrica na mjestu lakših ozljeda, krvarenju iz desni. Moguća je brza pojava bolesti: visoka temperatura, krvarenja, nekroza sluzokože. Gotovo svi pacijenti umiru od cerebralnog krvarenja ili gastrointestinalnog krvarenja. Kod ove leukemije, patološke ćelije imaju granularnost koja je morfološki slična onoj mastocita i bazofila koji sadrže heparin. Ova leukemija se ponekad naziva

parinocitni ili bazofilni, ali termin promijelocitni

je postala tradicionalna i najčešće se koristi u kliničkoj praksi. Ranije su upravo ovim oblikom opisani fulminantni oblici i očekivani životni vijek pacijenata nije prelazio 1 mjesec. Visoka temperatura i obilno znojenje iscrpljuju bolesnike. Trenutno, u vezi s upotrebom novih lijekova, posebno rubomicina, produžio se životni vijek pacijenata. Očekivano trajanje života je u prosjeku 26 mjeseci, a opisani su i oblici kada je životni vijek bio duži od 4 godine.

Akutne monoblastne i mijelomonoblastne leukemije se ne razlikuju mnogo od akutnih mijeloinih leukemija. Postoje i nekrotične lezije usne duplje, gingivitis, česti su leukemidi kože, a slezina je uvećana. Posebnost ove vrste leukemije je da se remisije javljaju rjeđe nego kod drugih vrsta leukemije. Prosječan životni vijek je otprilike 3 mjeseca.

Akutna eritromijeloza. Javlja se rijetko. U koštanoj srži, sadržaj crvenih krvnih zrnaca s jezgrom u koštanoj srži naglo raste, praćen visokim sadržajem nediferenciranih blasta, ili mijeloblasta, ili monoblasta.

Akutna limfoblastna leukemija. Ovaj oblik privlači pažnju onkologa i hematologa jer je upravo s ovim oblikom primjena složenih citostatskih učinaka omogućila postizanje remisije kod više od 90% oboljele djece, a kod mnogih pacijenata remisije su bile toliko duge da je bilo govora o oporavak djece. Ove podatke su istovremeno dobili naučnici iz više zemalja. Pozitivan učinak bio je stabilan kod djece od 2 do 9 godina, lošiji su kod djece mlađe i starije od ove dobi, a kod djece starije od 20-25 godina razlike između limfoblastne i mijeloblastne akutne leukemije se postepeno brišu, iako je očekivani životni vijek i kod ovih oblika je veći nego kod drugih oblika akutne leukemije. U 80% slučajeva limfoblastna leukemija se javlja u djetinjstvu. Njegova posebnost leži u povećanju limfnih čvorova i slezene.

Još jedna karakteristika akutne limfoblastne leukemije kod djece je osalgija, najčešće bol u nogama. Obično se u takvim slučajevima kod pacijenata posumnja na reumatizam. Počinje da se razvija anemija. Punkcija koštane srži potvrđuje dijagnozu zbog prisutnosti limfoblasta. Ove ćelije se takođe nalaze u punktatu limfnog čvora i slezene. U osnovi, ova leukemija nastaje iz progenitornih ćelija T-limfocita. Bez terapije, tok akutne limfoblastne leukemije nema nikakve karakteristike: povećava se inhibicija normalne hematopoeze, infektivne komplikacije, krvarenja, anemija napreduje. Prije pojave metotreksata, 6-merkaptopurina i prednizona, očekivani životni vijek bolesne djece bio je oko 2,5-3,5 mjeseca, odraslih - 1,4-2 mjeseca. Tok svakog ponovnog pojavljivanja bolesti karakterizira određena postojanost manifestacije bolesti u odnosu na njen prvi napad. Često proces metastazira u testise i moždane ovojnice, odnosno javljaju se fenomeni neuroleukemije. Vjeruje se da velika većina slučajeva akutne limfoblastne leukemije proizlazi iz T-limfocita.

Postoje i slučajevi akutne leukemije koja se razvija iz matičnih ćelija B-limfocita. Ova grupa pripada akutnim plazmablastnim leukemijama. Akutna megakarioblastna leukemija je rjeđa.

Trenutno je koncept neuroleukemije uveden u leukemiju. Javlja se kod svih oblika akutne leukemije, a posebno često kod akutne limfoblastne leukemije kod djece, u suštini neuroleukemija je metastatski proces,

Njegovu kliničku sliku uglavnom čine simptomi meningitisa i sindroma hipertenzije. Sve dok lijekovi koji se primjenjuju endolumbalno nisu bili uključeni u liječenje akutne leukemije, neuroleukemija se nije mogla spriječiti.

Potpuna klinička i hematološka remisija kod akutne leukemije ima sljedeće karakteristike: normalizaciju općeg stanja bolesnika, prisustvo ne više od 5% blast ćelija u punktatu koštane srži i ukupan broj blast ćelija (manje od 5%). a limfoidnih ćelija ne prelazi 40%. Istovremeno, u perifernoj krvi nema blastnih ćelija, sastav krvi je blizu normalnog, iako je moguća umjerena leukopenija, oko 1,5-3 x 10,9 / l, i trombocitopenija do 100 x 10,9 / l. Nema kliničkih znakova proliferacije leukemije u jetri, slezeni i drugim organima. Za limfoblastnu leukemiju kod djece, normalizacija likvora je obavezna.

Oporavak od akutne leukemije smatra se stanjem potpune remisije u trajanju od 5 godina ili više.

Parcijalne remisije su vrlo raznolika stanja koja se karakterišu ili jasnim hematološkim poboljšanjem sa smanjenjem procenta blastnih ćelija u koštanoj srži i cerebrospinalnu tečnost u eliminaciji simptoma neuroleukemije, kao i nestanku blastnih ćelija iz krvi.

Relaps akutne leukemije. Može biti koštana srž (pojava više od 5% blasta u punktatu) ili lokalna (ekstramedularna) sa bilo kojom lokalizacijom leukemijske infiltracije.

Terminalna faza akutne leukemije nastaje kada su svi citostatici nedjelotvorni, pa čak i na njihovoj pozadini dolazi do pogoršanja krvne slike: povećava se granulocitopenija i trombocitopenija, pojavljuje se nekroza sluznice i spontana krvarenja.

Hronična leukemija

Klasifikacija hronične leukemije:

1. Hronična mijeloična leukemija

2. Subleukemijska mijeloza

3. Eritremija

4. Hronični megakariocitni

5. Hronična eritromijeloza

6. Hronična limfocitna leukemija

Hronična mijeloična leukemija- tumor koji nastaje iz ćelija prekursora mijelopoeze koje zadržavaju sposobnost diferencijacije do zrelih oblika. Supstrat tumora su pretežno granulociti, uglavnom neutrofili.

Bolest se karakterizira povećanjem neutrofilne leukocitoze, često hipertrombocitozom, progresivnim povećanjem slezene. Tumorski proces prolazi kroz dvije faze: prošireni - monoklonski benigni i terminalni - poliklonski maligni. Hronična mijeloična leukemija u uznapredovalom stadiju je tumor neutrofilne klice hematopoeze, koji je gotovo u potpunosti zamijenio elemente normalne granulocitopoeze.

Patološki klon ima kao svog pretka pluripotentnu hemopoetsku ćeliju, koja ima 22 para umjesto normalnog hromozoma sa skraćenim dugim krakom. Početni znaci bolesti povezani su ili s povećanjem slezene ili sa sve većom intoksikacijom. U prvom slučaju pacijent obraća pažnju na težinu u abdomenu, pojavu bola u lijevom hipohondrijumu. U drugim slučajevima, prvi simptomi su slabost, znojenje, gubitak težine. Dijagnoza se zasniva na analizi krvi. To je uvijek leukemijski proces, odnosno u krvi su prisutne mlade stanice neutrofilnog niza: povećan je sadržaj ubodnih neutrofila, metamijelocita, mijelocita, promijelocita, a kasnije i mijeloblasta. U formuli leukocita povećan je sadržaj bazofila, a ponekad i eozinofila - "bazofilno-eozinofilna asocijacija". Leukocitoza se uvijek povećava, sadržaj trombocita raste. Dakle, rastuća neutrofilna leukocitoza s pomakom ulijevo na mijelocite i promijelocite, povećanje broja trombocita koji se javlja u pozadini zadovoljavajućeg stanja pacijenta, treba ukazivati na kroničnu mijeloidnu leukemiju.

Međutim, poznato je da su neutrofilna leukocitoza i trombocitoza česte. reaktivna stanja kao odgovor na bilo kakvo ćelijsko propadanje u tijelu i, prije svega, na kancerozni tumor. U tim slučajevima govore o leukemoidnim reakcijama. Mogu se pojaviti kao odgovor koštane srži na iritaciju produktima raspadanja proteina ili kao rezultat kršenja integriteta koštane srži kancerogenim metastazama. Dijagnoza se obično postavlja na osnovu brisa periferne krvi. U sumnjivim slučajevima radi se sternalna punkcija. Utvrđen je nagli relativni porast granulocita, odnos leukociti:eritrociti dostiže 10:1 i 20:1. Dolazi do oštrog smanjenja alkalne fosfataze.

Razvoj kronične mijeloične leukemije u nedostatku citostatičke terapije karakterizira postupno povećanje patoloških pojava: slezena se povećava, težina u trbuhu se povećava, leukocitoza se povećava, a intoksikacija postaje sve izraženija. Kada se dostigne nivo od 500 x 10,9/l ili više ćelija, postoji realna opasnost od stvaranja tromba leukocita u sudovima mozga, slezene i pluća. Leukemijska infiltracija u jetri se širi. Ranije je očekivani životni vijek pacijenata s kroničnom mijeloidnom leukemijom bez citostatičke terapije bio u prosjeku 2,4-2,6 godina. Uzrok smrti u ovom periodu bile su manifestacije terminalnog stadijuma: inhibicija normalne hematopoeze, hemoragični sindrom, infekcije, nekroza, 70% udruženo sa blastnom krizom.

U uslovima moderne citostatičke terapije, slika hronične mijeloične leukemije se razlikuje od gore opisane. Primjena mijelozana dovodi do praktične normalizacije stanja pacijenata: nivo leukocita se može održavati u rasponu od 10-20 x 10,9/l, a veličina slezene ostaje stabilna. S godinama se u perifernoj krvi povećava sadržaj mlađih oblika, uključujući promijelocite. Ovo je uznapredovali stadijum bolesti.

Ako pacijent postane refraktoran na tekuću citostatsku terapiju, opća intoksikacija se povećava, sadržaj trombocita se smanjuje, tada se dijagnosticira terminalna faza bolesti. Smanjenje trombocita određuje pojavu izraženog hemoragijskog sindroma. Zatim se pridružuje pancitopenija. po najviše važna karakteristika ova faza je prisustvo blast ćelija u koštanoj srži, a zatim u perifernoj krvi. Postoje znaci mielemije: sadržaj koštane srži ulazi u perifernu krv, uglavnom za crvena zrnca s jezgrom i megakariocite. Fokusi patološke hematopoeze nadilaze koštanu srž, slezinu, jetru i formiraju kožne leukemide ispod kože. Pojavljuju se jaki bolovi u kostima, infarkt slezine, stalna groznica.

Obično se očekivani životni vijek pacijenta do terminalne faze računa u godinama, a najduža terminalna faza je 3-6 mjeseci. Postoje znaci blastne krize u krvi – pojava blastnih i nediferenciranih ćelija u krvi, što liči na sliku krvi kod akutne leukemije. Ova činjenica potvrđuje trostruku prirodu hronične mijeloične leukemije, njenu pojavu na nivou matične ćelije mijelopoeze.

Eritremija. Ranije se zvala Wakezova bolest ili prava policitemija. Bolest je benigni tumor krvnog sistema koji se razvija iz progenitorske ćelije mijelopoeze, iako se za neke varijante ne može isključiti njegov razvoj iz ćelije osjetljive na eritropoetin. U krvotoku i vaskularnom depou povećava se masa eritrocita, a mijenjaju se i njihove kvalitativne karakteristike. Dakle, ovi eritrociti daju naglo usporen ESR (1-4 mm / h), ponekad do odsustva sedimentacije eritrocita).

Pacijenti se žale na glavobolju, težinu u glavi. Ponekad je prvi znak bolesti crvenilo lica i dlanova. Čest simptom eritremija je pruritus. Pacijenti imaju sklonost trombozi. Trombi su lokalizirani kako u arterijama ekstremiteta sa stvaranjem nekroze, tako iu koronarnim i cerebralnim arterijama. Često dolazi do povećanja krvnog pritiska. Jetra i slezina su uvećane.

Hematološka slika eritremije je prilično karakteristična: povećanje broja eritrocita, kao i trombocita i leukocita. Postoji izražena hiperplazija ćelijskih elemenata u koštanoj srži, sve hematopoetske klice su uvećane, uglavnom eritroidne. Poput hronične mijeloične leukemije, eritremija ima dva stadija: uznapredovali benigni i terminalno maligni. Potrebno je provesti diferencijalnu dijagnozu sa simptomatskom eritrocitozom.

Hronična limfocitna leukemija. Hronična limfocitna leukemija je tumor limfoidnog tkiva – imunokompetentnog sistema. Supstrat tumora predstavljaju morfološki zreli limfociti. Bolest karakterizira leukocitoza, obavezna limfocitna proliferacija u koštanoj srži, uvećani limfni čvorovi, jetra i slezena. Poraz imunokompetentnog sistema karakterizira tendencija razvoja infektivnih komplikacija i čest razvoj autoimunih (hemolitičkih i trombocitopeničnih) stanja.

Poznato je da su limfociti heterogeni. Godine 1970. izolovani su timus-ovisni (T-limfociti) koji su odgovorni za transplantacijski imunitet, reakcije preosjetljivosti odgođenog tipa. Ovi limfociti osjetljivi na antigen su prvi koji reagiraju na pojavu novog antigena.

Druga grupa su B-limfociti, prvi put pronađeni u Fabricijevoj burzi kod ptica. Hronična limfocitna leukemija može biti predstavljena T ćelijama i B ćelijama. Međutim, u pravilu, kroničnu limfocitnu leukemiju predstavljaju B-limfociti. Njihov sadržaj u krvi dostiže 80-98%, dok je broj T-limfocita smanjen na 3-9%. Pronađeni su samo izolovani slučajevi hronične limfocitne leukemije, predstavljene T-limfocitima. Najvjerovatnije, kronična limfocitna leukemija proizlazi iz ćelije prekursora limfopoeze. Istovremeno se otkrivaju neki znaci relativno dobrog kvaliteta procesa: nema kršenja u hromozomski set, nisu dobijeni jasni podaci o ćelijskoj atipiji. Patološke stanice u kroničnoj limfocitnoj leukemiji se praktički ne razlikuju od normalnih limfocita. Tokom značajnog perioda bolesti nema progresije tumora. Osim toga, bolest se može kontrolirati jednim citostatikom tokom niza godina, a blastna kriza u završnim stadijumima bolesti je rijetka.

U isto vrijeme, u nizu slučajeva, kronična limfocitna leukemija, nakon što je benigni tumor, transformiše se i poprima crte maligniteta, što se manifestuje rezistencijom tumora na različite citostatske terapije. U morfologiji limfocita mogu se otkriti karakteristike atipizma, u krvi se u velikom procentu javljaju prolimfociti i limfoblasti. Takođe nema veze sa mutagenim faktorima, što je uočeno kod osoba koje su bile izložene jonizujućem zračenju. Kod stanovnika Hirošime i Nagasakija, kao i kod osoba na rendgenskoj terapiji, učestali su slučajevi akutne leukemije, hronične mijeloične leukemije, ali ne i hronične limfocitne leukemije.

Bolest je dugotrajna, ponekad i dugi niz godina, može teći bez znakova progresije tumora. Dakle, u prvim fazama ovaj tumor je benigni, ali pod određenim okolnostima može postati maligni: blastna kriza, transformacija u sarkom.

Kao što je već spomenuto, kronična limfocitna leukemija sastoji se uglavnom od morfološki zrelih limfocita koji rastu u koštanoj srži, limfni čvorovi, slezene, jetre i oslobađa se u velikim količinama u perifernu krv. Dijagnoza bolesti se obično postavlja otkrivanjem povećanog broja limfocita u perifernoj krvi uz povećanje limfnih čvorova. U krvi se nalaze polurazrušena jezgra limfocita sa ostacima nukleola - Gumprechtova senka. U suštini, ove ćelije leukolize su artefakt, u tečna krv oni su nestali. Ove ćelije nastaju tokom pripreme razmaza. U mnogim sjenkama Gumprechta, među nakupinama hromatina, mogu se vidjeti jezgre. Ponekad se ove ćelije leukolize nazivaju po Botkin-Gumprechtu, iako ovo ime nije sasvim tačno. Sin

S.P. Botkin S.S. Botkin je opisao lizirane ćelije u krvi kod tifusne groznice, ali ne i kod kronične limfocitne leukemije. Pojava takvih stanica karakteristična je za kroničnu limfocitnu leukemiju. Ponekad se u perifernoj krvi bilježi pojava pojedinačnih prolimfocita, rjeđe - pojedinačnih limfoblasta. Oštar porast limfocita zabilježen je u punktatu koštane srži. U trepanatu koštane srži postoje karakteristične nakupine limfoidnih ćelija.

U pravilu, pacijent ide kod liječnika već u prisustvu povećanih limfnih čvorova i značajnog povećanja sadržaja limfocita. Bolest počinje postepeno, u roku od nekoliko godina, u krvi se može primijetiti limfocitoza do 40-50%. Postepeno počinju da se povećavaju limfni čvorovi na vratu, u pazuhu. U kasnijim fazama dodaju se anemija i trombocitopenija.

Poreklo hronične limfocitne leukemije iz ćelija imunokompetentnog sistema, tumorska priroda ovog procesa, određuju karakteristike komplikacija koje su svojstvene hroničnoj limfocitnoj leukemiji. Ovi pacijenti su vrlo osjetljivi na infekcije bakterijske prirode: tonzilitis, upalu pluća, gnojne procese u plućima. Osim infektivnih komplikacija, kroničnu limfocitnu leukemiju karakteriziraju imunološki sukobi povezani s pojavom antitijela protiv vlastitih normalnih krvnih stanica. Najčešće se dijagnosticira autoimuna hemolitička anemija: žutica, pojavljuje se retikulocitoza, smanjuje se sadržaj crvenih krvnih stanica i hemoglobina, a slezena se povećava. Autoimuna trombocitopenija takođe nije neuobičajena. AI Vorobyov takođe opisuje autoimuna stanja koja se tiču leukocita.

Terminalno stanje bolesnika može se karakterizirati sve većom iscrpljenošću, teškim infektivnim komplikacijama, stomatitisom, hemoragijskim sindromom i anemijom uzrokovanom imunološkim sukobima.

"Dlakava ćelijska leukemija" ili leukemija dlakavih ćelija predstavljena je ćelijama tipa B-limfocita. Morfološka karakteristika ovih ćelija je prisustvo viloznih izbočina citoplazme. Bolest karakterizira citopenija, limfni čvorovi su umjereno povećani, jetra i slezena dostižu velike veličine. U koštanoj srži dominiraju dlakave ćelije.

Paraproteinemičke hemoblastoze

Ova grupa kombinuje tumorske procese u sistemu imunokompetentnih ćelija koje obavljaju funkcije humoralnog imuniteta. Uključuje tri nozološka oblika: plazmacitom, mijelom, bolesti teških lanaca i druge.

Glavna karakteristika ove grupe je sposobnost tumorskih ćelija da sintetiziraju homogene imunoglobuline ili njihove fragmente - paraproteine. Kao što je poznato, sintezu antitela normalno obavlja poliklonalni sistem plazma ćelija i limfocita, koji su sposobni da specifično reaguju sa gotovo bilo kojim od mogućih antigena. Štaviše, svaki predstavnik klona - jedna ćelija - genetski je programiran za sintezu samo jedne vrste antitijela - homogenog imunoglobulina. Kod paraproteinemičkih hemoblastoza, cjelokupna masa tumora, koja predstavlja potomstvo jedne ćelije, je genotipski homogena, homogena, a njegova proizvodnja je monoklonski imunoglobulin. Paraprotein je uvijek patološki protein. U skladu sa savremenom klasifikacijom imunoglobulina, paraproteini se dijele u 5 klasa: A, C, M, D i E.

Plazmacitom (multipli mijelom). Mogu postojati solitarni plazmocitomi, multipli tumorski oblik, difuzni nodularni i difuzni oblici. Ćelije mijeloma koje proliferiraju u koštanoj srži dovode do uništenja koštane srži u ravne kosti, kičma, cjevaste kosti.

Klinički se lezije kostiju manifestuju klasičnom Kahler trijadom: bol, tumori, frakture. Ne postoje specifični radiološki znakovi koji bi razlikovali promjene na kostima od metastaza u kostima. Citološki pregled koštane srži otkriva specifičnu sliku metaplazije ćelija mijeloma.

Sindrom proteinske patologije manifestuje se: hiperproteinemijom sa hiperglobulinemijom, povećanje ESR i viskoznost krvi, pozitivne sedimentne proteinske reakcije. Mijeloma nefropatija se izražava upornom proteinurijom, koja se postepeno razvija otkazivanja bubrega u odsustvu znakova nefrotskog sindroma: edem, hipoproteinemija, hiperholesterolemija. Hipertenzija i retinopatija također nisu tipične.

Fenotip T-ćelija predstavljen je rijetkom varijantom T-ćelija.

U kliničkom i prognostičkom smislu, veoma je važno utvrditi pripadnost leyhemijske ćelije na T- ili B-fenotipove, budući da T-ćelijski oblici hronične limfocitne leukemije imaju agresivniji tok i teško se leče.

Najkarakterističnija varijanta toka hronične limfocitne leukemije (HLL) je leukemična (broj leukocita je od 10,0 do 150,010 9 /l). Međutim, u nekim slučajevima CLL, dokazanosternalna punkcija, od početka do kraja bolest teče leukopenijom (1,5-3,0-10 9 /l). Uz detaljnu sliku limfocitne leukemije, sadržaj limfocita dostiže 80%pa čak i 99% (sa težim tokom). Većina ćelija je predstavljena zrelim limfociti, često njihove mikro- i mezogeneracije, ali se mogu otkriti prolimfociti(5-10%), rjeđe - pojedinačni limfoblasti. Povećanje sadržaja ovih oblika obično ukazuje na pogoršanje procesa. Karakteristično za CLL je prisustvo senki ćelija u razmazima krvi (sjene Botkin-Gumprechta); Ride ćelije se također često nalazera (limfociti koji imaju jezgro u obliku bubrega ili dvostrano). crvena krv do početkamalo je zahvaćeno u prvom stadijumu bolesti, ali se vremenom razvija anemija, moguće su autoimune hemolitičke krize povezane sa stvaranjem antitela protivsopstvenih eritrocita. Trombocitopenija se obično javlja kada je kostu mozgu pronađu masivnu limfoidnu infiltraciju. Međutim, u nekim slučajevima trombocitopenija se javlja rano, zbog istog imunološki mehanizam, kao razvoj hemolitičke anemije i leukopenije. Prevladava punktat koštane sržilimfocita, sadržaj granulocita i eritronormoblasta je naglo smanjen. U teškim slučajevima, od samog početka bolesti, koštana srž sadrži do 50-60% limfocita. INkasnijim fazama, kao iu terminalnoj fazi bolesti, totalna limfna metaplazija koštane srži (95-98%). Pojavom autoimune hemolitičke anemije može se promijeniti slika punktata, jer se kao odgovor na hemolizu povećava količinaeritroidne ćelije. U smislu dijagnostičke vrijednosti, sterlna punkcija je superiornija od bioPsihija i punkcija limfnog čvora, u kojoj je priroda hiperplazije limfnog čvoratkanine se ne mogu uvijek instalirati. Znakovi progresije tumora s oslobađanjem patoloških stanica iz kontrole citostatika možda se neće primijetiti dugo vremena.sve bolesti. Terminalna blastna kriza se rijetko razvija (u 1-4 % slučajevi),češće dolazi do izraženog rasta tumora limfnih čvorova (ali ovaj prijelazrelativno rijetko u CLL). Terminalnu fazu karakteriziraju zarazne osepothranjenost, iscrpljenost imuniteta, hemoragijski sindrom i anemija.

U T-ćelijskoj varijanti CLL-a, leukemični limfociti imaju polimorfne malformacije.siva jezgra, grubi kromatin, u nekim stanicama velike azurofilne granule. Takvećelije u citokemijskoj studiji karakteriše visoka aktivnost kiselinefosfataza, alfa-naftil acetat esteraza; prema imunološkim parametrima najčešće su imaju fenotip CD 4+, CD 8-, rjeđe CD 4+, CD 8+ i izuzetno rijetko CD 4-, CD 8+. Protok vode levija je često brzo progresivna, sa mogućim prelaskom u blastnu krizu, ali je moguća i benigna.

Predloženo je nekoliko klasifikacija kronične limfocitne leukemije prema fazama razvoja.bolesti. U klasifikaciji RAI (1975) razlikuju nulti stadijum samo sa limfocitozomu krvi i koštanoj srži, te sljedeće 4 faze, što odražava širenje procesa dužlimfni čvorovi, slezena i jetra. Posljednje faze uključuju procese sa cito-pevanje (anemija, trombocitopenija) bez obzira na limfnu infiltraciju organa.

RA1 - klasifikacija hronična limfocitna leukemija

Faza 0.Limfocitoza u perifernoj krvi >15,010 9 /l, u koštanoj srži >40%.

StageI. Faza 0 sa uvećanim limfnim čvorovima.

Faza I. ja sa hepato- i/ili splenomegalija.StageIII. Stadij 0 sa uvećanim limfnim čvorovima - ili bez stadijuma I ili II sa anemijom (H< НО г/л). StageIV. Faza 0 sa ili bez faze I, II, III, trombopenija (trombociti< 100,0- 10 9 /л).

Prema međunarodnom sistemu, hronična limfocitna leukemija se deli nastadijumi A, B i C. Prva dva stadijuma odgovaraju procesu koji se prostire na tri (A) i više (B) limfnih polja - limfni čvorovi svih perifernih grupa, s.Zenka, jetra, a treći (C) - do procesa sa citopenijom (anemija, trombocitopenija).

Međunarodna klasifikacija kronične limfocitne leukemije

A.Limfocitoza u perifernoj krvi >4,010 9 /l, u koštanoj srži >40%. Hemoglobin
100 g/l, trombociti > 100,0-10 9 /l, rasprostranjenost procesa - do dva regiona
personalizirani limfni čvorovi (cervikalni, aksilarni, ingvinalni, jetra, slezena).

b. Hemoglobin > 100 g/l, trombociti >100,0 X 10 9 /l, posipanje - više
tri područja uvećanih limfnih čvorova.

C. Hemoglobin< 100 г/л и/или тромбоциты < 100,010 9 /л, независимо от регионов уве pojedinačnih limfnih čvorova.

Sa prolimfocitnom leukemijom u perifernoj krvi i punktatu koštane sržidominiraju prolimfociti (više od 55%). Patološke ćelije u 75-80% pacijenataimaju fenotip B-ćelija, koji prema svojim imunološkim karakteristikama jesusu zreliji limfoidni elementi od limfocita u tipičnom B-CLL. At20-25% oboljelih ćelija ima fenotip T-ćelija, u takvim slučajevima bolest i jesteizmet u većoj mjeri, sa teškom leukocitozom, brzo napredujućom terapijom niskog učinka efektivno.

Leukemiju dlakavih ćelija karakterišu anemija, leukopenija i trombocitopenija.Subleukemični, a posebno leukemični oblici su rijetki. Perifernou kojoj krvi je povećan broj limfocita, među kojima ima stanica sa izraslimbrbljiva, dlakava citoplazma ("dlakava"), koja daje visoku aktivnost kiselog fosfataPS, ne inhibiran natrijum tartratom. U koštanoj srži punktat limfoidni prolifervoki-toki. Bolest teče sporo, često se uočavaju infektivne komplikacije. Leukemijske ćelije kod leukemije dlakavih ćelija u većini slučajeva pripadaju B-fenotipu, u nekim slučajevima nose markere B- i T-ćelija.

multipli mijelom

Mijelom (plazmocitom, Rustitzky-Kahlerova bolest) je tumorsko oboljenje hematopoetskog sistema koje karakteriše maligna proliferacija plazma ćelija. Plazma ćelije su normalno uključene u humoralni imunitet, u formiranje imunoglobulina. Patološki izmijenjeni klon plazma stanica u multiplom mijelomu intenzivno proizvodi homogeni (monoklonski) paraimunoglobulin (paraprotein) protein, u čijoj prisutnosti ne samo količina ukupni proteini u krvi, ali i narušio imunološku odbranu tijela. Paraprotein se izlučuje urinom (Bence-Jones protein).

Laboratorijska dijagnostika

Kod mijeloma je zahvaćena uglavnom koštana srž, razvija se sindrom proteinske patologije i nedostatka antitijela, paraproteinemička nefroza.

Koštana srž.Punkcija koštane srži sadrži veliki broj plazma ćelija (više od 15%) sa znacima atipizma, koje se nazivaju ćelije mijeloma. To su atipični plazmablasti.

Morfologija ćelija mijeloma . Odlikuje ih značajna varijabilnost u morfološkim karakteristikama (veličina, oblik, boja). Velike ćelije sa izraženom bazofilijom i vakuolizacijom citoplazme, sa jednim ili više jezgara delikatne mrežaste strukture, koje sadrže 1-2 nukleola.

Krvna slika. Na početku bolesti nema promjena u krvi. Pojavljuju se kako bolest napreduje.

Varijanta toka: subleukemična (10 × 109/l - 11 × 109/l) ili

leukopenija (3,2 × 109 / l - 4 × 109 / l). Kod nekih pacijenata,

postoji neutropenija sa relativnom limfocitozom. Često monocitoza

i pojedinačne plazma ćelije.

Karakteristična normohromna anemija, broj retikulocita je normalan.

ESR se konstantno ubrzava na 80 - 90 mm / h.

Specifični laboratorijski indikatori:

1. Sindrom proteinske patologije. Kod multiplog mijeloma manifestira se u obliku hiperproteinemije (povećanje količine ukupnog proteina), hiperglobulinemije (sadržaj globulina se povećava zbog paraproteina), prisustva patološkog imunoglobulina u krvi - paraproteina; prisustvo Bence-Jones proteina (paraproteina u urinu) u urinu.

2. Sindrom nedostatka antitela. Kod multiplog mijeloma, količina normalnih imunoglobulina je smanjena.

3. Paraproteinemička nefroza. Karakterizira ga konstantna proteinurija, cilindrurija, moguća je mikrohematurija.

Limfogranulomatoza

Limfogranulomatoza je tumorsko oboljenje iz grupe hemoblastoza. Prvi put je bolest opisao engleski liječnik Hodgkin 1832. godine, javlja se u bilo kojoj dobi, muškarci su češće bolesni (u dobi od 16 - 30 godina i stariji od 50 godina). Limfogranulomatoza je maligni tumor limfnog tkiva koji se razvija iz limfoidnih ćelija.

Bolest karakteriziraju različiti klinički simptomi uzrokovani oštećenjem limfnih čvorova, različitih organa i karakteristikama imunoloških reakcija.

Glavni simptom je povećanje limfnih čvorova: submandibularnih, cervikalnih, supraklavikularnih, rjeđe - ingvinalnih. Osim toga, javlja se i simptom intoksikacije (na početku bolesti) visoka tjelesna temperatura do 39 - 40 °C, znojenje, letargija, slabost, gubitak težine, nedostatak apetita, ponekad i svrab kože.

Laboratorijska dijagnostika. Hodgkinovu bolest karakteriše razvoj specifičnog granuloma, koji je morfološki supstrat ove bolesti i najčešće se javlja u limfnim čvorovima, ali se može razviti iu unutrašnjim organima, češće u slezeni. Sastav limfogranuloma uključuje specifične ćelije - Berezovsky-Sternberg, kao i njihove mononuklearne prethodnike - Hodgkinove ćelije.

Dijagnoza bolesti se postavlja otkrivanjem Berezovsky-Sternbergovih ćelija u punktatu limfnog čvora, slezene ili koštane srži.

Morfologija ćelija Berezovsky-Sternberg. Veličine u rasponu od 40 - 80 mikrona, ćelija je okruglog oblika, oblik jezgra je okrugao, boboliki, peterolista, položaj jezgra je centralni ili eksceni. Nukleoli su jasno vidljivi u jezgrima (1 - 2), rjeđe (5 - 8).

Zrele ćelije Berezovsky-Sternberga, u pravilu, sadrže nekoliko jezgara. Karakteristično je prisustvo ćelija sa dva jezgra iste veličine i oblika, koje su jedna drugoj zrcalne slike. U jezgrima se nalazi jedna prilično velika nukleola. Citoplazma ćelija Berezovsky-Sternberg je bazofilna.

Morfologija Hodgkinovih ćelija.

Hodgkinove ćelije su jednonuklearne, manje. Zaobljeno jezgro smješteno u sredini ima 2-3 velike jezgre. Citoplazma je uska, bazofilna, intenzivno obojena.

Berezovsky-Sternberg ćelije (tamne strelice), Hodgkinova ćelija (svetla strelica)

Hodgkinov limfom: džinovska mononuklearna ćelija sa velikim jezgrom i širokom citoplazmom (Hodgkinova ćelija) okružena malim i srednjim limfocitima.

LHodgkinov himfom: Berezovsky-Sternbergova ćelija (gigantska binuklearna ćelija) okružena malim i srednjim limfocitima.

Krvna slika kod većine pacijenata karakteriziraju redovne promjene.Broj leukocita je često normalan ili gornja granica normalna, rjeđe blaga leukocitoza (10 × 109 / l - 12 × 109 / l). Neki pacijenti razvijaju leukopeniju. U krvi, neutrofilija s oštrim pomakom ulijevo (do metamijelocita i mijelocita) je čest znak Hodgkinove bolesti. Postoji monocitoza (na početku bolesti), limfocitopenija (u kasnijim stadijumima bolesti), eozinofilija (kod 3-5% pacijenata).

Većina pacijenata ima normohromnu ili hiperhromnu anemiju, trombocitozu (do 400 × 109/l). ESR je ubrzan (30 - 40 mm/h) na početku bolesti, u terminalnoj fazi bolesti - do 80 mm/h.

Kompetencije: OK-1, OK-8, PC-3, PC-5, PC-15, PC-17, PC-27

Relevantnost teme. Hemoblastoze predstavljaju opsežna grupa bolesti koje se razlikuju po polimorfizmu kliničke manifestacije i nalaze se u ordinaciji lekara svih specijalnosti.

1. Razumjeti etiologiju, patogenezu hemoblastoza.

2. Poznavati klasifikaciju i kliničku i laboratorijsku dijagnozu akutne i kronične leukemije.

3. Biti u stanju dirigirati objektivno istraživanje pacijenata sa ovom vrstom patologije.

Kontrolna pitanja iz srodnih disciplina izučavanih na prethodnim katedrama i predmetima.

Koji organi su hematopoetski?

Navedite ćelijski sastav koštane srži.

Kako se hematopoeza normalno odvija?

Objasnite građu i funkciju eritrocita?

Navedite normalne vrijednosti ljudske crvene krvi.

Navedite glavne funkcije leukocita.

Koliki je normalan sadržaj leukocita u perifernoj krvi?

Imenujte formulu leukocita.

Koje krvne ćelije su granulociti?

Koja je morfološka struktura neutrofila?

Koja je funkcionalna uloga neutrofila?

Opišite morfološku strukturu i funkcije bazofila i mastocita.

Opišite funkcije i strukturu eozinofila.

Koja je funkcionalna uloga i struktura monocita i makrofaga?

Opisati strukturu, tipove i funkcije limfocita.

Koja je morfološka struktura limfnih čvorova?

Navedite anatomske grupe limfnih čvorova.

Recite nam o građi i funkciji slezene?

Koja je morfološka struktura i funkcija trombocita?

Kontrolna pitanja na temu koja se proučava.

Koji etiološki faktori može izazvati leukemiju?

Objasniti patogenezu leukemije.

Kako se klasifikuju leukemije?

Šta su glavne klinički sindromi uočeno kod akutne leukemije?

Koji je laboratorijski sindrom odlučujući u dijagnozi akutne leukemije?

Navedite stadijume akutne leukemije

Kako se klinički manifestuje sindrom proliferacije leukemije?

Navedite kliničke i laboratorijske manifestacije hemoragijskog sindroma kod akutne leukemije.

Šta je najtipičnije klinički simptom hronična mijeloična leukemija?

Navedite laboratorijske znakove karakteristične za kroničnu mijeloičnu leukemiju.

Koji je klinički simptom najtipičniji za kroničnu limfocitnu leukemiju?

Koja se krvna slika opaža kod kronične limfocitne leukemije?

Koji se klinički sindromi uočavaju kod eritremije?

Na osnovu kojih laboratorijskih podataka se može postaviti dijagnoza eritremije?

Navedite kliničke sindrome karakteristične za multipli mijelom.

Koji laboratorijski podaci omogućuju postavljanje dijagnoze multiplog mijeloma?

Koji je dijagnostički kriterij odlučujući za dijagnozu multiplog mijeloma?

Hemoblastoza je grupa tumora koji nastaju iz hematopoetskih ćelija. Dijele se na leukemije i hematosarkome. Leukemije su tumori hematopoetskog tkiva sa primarnom lokalizacijom u koštanoj srži. Hematosarkomi su tumori iz hematopoetskog tkiva sa primarnom ekstramedularnom lokalizacijom i izraženim lokalnim rastom tumora.

Sve leukemije se dijele na akutne i kronične. Odlučujuća karakteristika nije brzina procesa, već morfologija ćelija koje čine tumor. Ako je većina ćelija predstavljena blastima, onda govorimo o akutnoj leukemiji. Kod hronične leukemije, najveći deo tumorskih ćelija su zreli i sazrevajući elementi.

Hemijski mutageni: toksične supstance(benzen), citostatici.

Virusni faktor (Epstein-Barr virus)

Uloga naslijeđa: genetski defekti hematopoetskih klica, imunološki sistem hromozomske abnormalnosti.

Neoplastični rast svih hemoblastoza zasniva se na klonalnosti: svaka leukemija duguje čitavu masu svojih ćelija mutacijama u jednoj matičnoj ćeliji. Patogenetska karakteristika hemoblastoza je postepena malignost tumorskog procesa, označena terminom - progresija tumora. Obrasci progresije tumora predstavljeni su brojnim pravilima:

1. Hemoblastoze prolaze kroz dva stadija: monoklonalni (benigni) i poliklonalni (maligni).

2. Inhibicija normalnih hematopoetskih klica i, prije svega, klice iz koje se razvila hemoblastoza.

3. Promjena diferenciranih ćelija koje čine tumor kod hronične leukemije, blast (nastanak blastne krize).

4. Gubitak enzimske specifičnosti tumorskih ćelija: morfološki, ćelije postaju nediferencirane.

5. Pojava ekstramedularnih žarišta hematopoeze.

6. Spazmodičko ili postepeno povlačenje tumora iz citostatičke terapije.

Leukemija može uzastopno proći kroz različite faze progresije, ali ponekad bolest počinje simptomima karakterističnim za završnu fazu.

Akutne leukemije su grupa neoplastične bolesti krvni sistem - hemoblastoze. Akutne leukemije karakteriziraju oštećenje koštane srži morfološki nezrelim - blastnim - hematopoetskim stanicama i njihovom pojavom u perifernoj krvi. U budućnosti ili od samog početka može doći do infiltracije blast ćelijama različitih organa i tkiva. Sve akutne leukemije su klonske, odnosno nastaju iz jedne mutirane ćelije. Blast ćelije u svim vrstama akutne leukemije karakterizira velika veličina, veliko jezgro, koje zauzima gotovo cijelu ćeliju i odlikuje se nježnom mrežastom strukturom kromatina s velikim pojedinačnim jezgrima. Citoplazma stanica u obliku uskog plavkastog ili sivo-plavog ruba s pojedinačnim malim granulama.

Klasifikacija se zasniva na morfološkim, uglavnom citokemijskim, imunohistohemijskim svojstvima blastnih ćelija. Akutne leukemije su nazvane po normalnim eksplozijama odgovarajućih hematopoetskih klica. Pripadnost blastnih ćelija jednoj ili drugoj liniji hematopoeze, stepen njihove diferencijacije u određenoj mjeri određuje klinički tok akutna leukemija, terapijski program, prognoza bolesti. Postoje sljedeći glavni oblici akutne leukemije (domaća klasifikacija):

Akutne mijeloične leukemije:

Akutna mijeloična leukemija

Akutna promijelocitna leukemija

Akutna mijelomonoblastna leukemija

Akutna monoblastna leukemija

Akutna limfoblastna leukemija

Akutna nediferencirana leukemija

Akutne bifenotipske leukemije.

Međunarodna francusko-američko-britanska (FAB) klasifikacija bez fundamentalnih razlika sa nekim pojašnjenjima o klasterima diferencijacije ćelija (imunofenotipizacija).

Ne može se pronaći karakterističan početak, specifični vanjski znakovi karakteristični za akutnu leukemiju. Dijagnoza akutne leukemije može se postaviti samo morfološki – otkrivanjem blastnih ćelija u krvi ili koštanoj srži.

Razlikuju se sljedeći klinički sindromi:

1. Anemični sindrom: slabost, vrtoglavica, otežano disanje, tahikardija, glavobolja, bljedilo kože, sistolni šum na svim tačkama, sniženi krvni pritisak, hemoglobin, crvena krvna zrnca.

2. Hemoragični sindrom: krvarenja na koži, krvarenje desni, krvarenje iz nosa i materice, krvarenje od ogrebotina, sitnih posjekotina i sl., uzrokovano prvenstveno trombocitopenijom.

Sindrom bakterijskih i virusnih komplikacija: groznica, slabost, znojenje, gubitak težine, manifestacije intoksikacije, razne zarazne bolesti (katar gornjih dišnih puteva, upala krajnika, upala pluća, meningitis, sepsa itd.)

Sindrom proliferacije leukemije: povećani limfni čvorovi, slezena, jetra, hiperplazija gingive, leukemidi kože, neuroleukemija (leukemijska infiltracija moždanih ovojnica).

Tokom akutne leukemije razlikuju se sljedeće faze:

1. Inicijalna - preleukemija. Može se procijeniti samo retrospektivno.

2. Uznapredovali stadijum bolesti. Karakterizira ga teška inhibicija normalne hematopoeze, značajna blastoza koštane srži, periferne krvi.

3. Potpuna (klinička i hematološka) remisija: ne više od 5% blast ćelija u punktatu koštane srži.

4. Oporavak: potpuna remisija za 5 godina.

5. Nepotpuna remisija.

7. Terminalna faza: nema efekta citostatičke terapije.

Oblici bolesti prema rezultatima ispitivanja periferne krvi: 1) aleukemični - bez oslobađanja blastnih ćelija u krv; 2) leukemijski - sa oslobađanjem blastnih ćelija u perifernu krv.

Test periferne krvi:

Broj leukocita može biti različit. Razlikuje se leukemični oblik - značajno povećanje broja leukocita, subleukemični - umjereno povećanje broja leukocita, normo- ili leukopenični - normalan ili smanjen broj leukocita.

prisustvo blast ćelija. U formuli postoji slika leukemijskog zatajenja: postoje mlade - blastne ćelije i zreli granulociti, monociti, limfociti, nema prelaznih oblika (promijelociti, mijelociti, metamijelociti.

Studija punktata sternuma: detekcija i citokemijska analiza blastnih ćelija, imunofenotipizacija ćelija koštane srži.

Indukcija (dobivanje) remisije - kombinacija različitih citostatika prema odabranom programu.

Konsolidacija remisije (konsolidacija remisije).

Simptomatska terapija: liječenje komplikacija.

Transplantacija koštane srži.

U zavisnosti od vrste leukemije, remisija se postiže kod 60-70% pacijenata, kod 80% liječenih pacijenata dolazi do recidiva, a potpuno izlječenje kod 10-15%.

Dijagnoza akutne leukemije

Akutna leukemija je tumor koji se sastoji od mladih nediferenciranih hematopoetskih ćelija, sa obaveznim početkom u crvenoj koštanoj srži. Akutne leukemije karakteriziraju sljedeće karakteristike: klonalni karakter (sve ćelije koje čine leukemijski tumor potomci su jedne matične ćelije ili ćelije prekursora bilo kojeg smjera i nivoa diferencijacije), progresija tumora, geno- i fenotipski (morfološki - atipizam, anaplazija; citokemijsko - hemijska anaplazija) karakteristike leukemijskih ćelija.

Na osnovu morfoloških karakteristika leukemijskih ćelija u kombinaciji sa njihovim citokemijskim karakteristikama, akutne leukemije se dele u dve velike grupe.

Dijagnoza akutne leukemije

Za dijagnozu akutne leukemije neophodna je jasna morfološka verifikacija – otkrivanje nesumnjivo blastnih ćelija u crvenoj koštanoj srži. Za dijagnozu akutne leukemije svakako je potrebno utvrditi klasičnu građu jezgra blastnih ćelija (nježni hromatin – fina mreža ujednačenog kalibra i boje kromatinskih niti).

Promjene u perifernoj krvi

Vrijedne informacije kod svih hemopatija prvenstveno daje citomorfološka studija perifernih krvnih stanica. Kod akutne leukemije sve elemente hematopoeze karakteriziraju duboke patološke promjene. U većini slučajeva akutne leukemije razvija se anemija. Anemija je normohromna ili hiperhromna, rjeđe hipohromne prirode i produbljuje se kako bolest napreduje (koncentracija hemoglobina opada pas/l, broj crvenih krvnih zrnaca je 1,5-1,0×10,2/l). Drugi karakterističan znak akutne leukemije je trombocitopenija (često ispod kritičnom nivou). U toku bolesti i pod uticajem terapije, broj trombocita podleže cikličnim fluktuacijama: na početku bolesti je često normalan, smanjuje se tokom egzacerbacije i progresije, a povećava se tokom remisije. Ukupan broj leukocita uveliko varira - od leukopenije do × 10 9 /l (veće stope se rijetko bilježe). Leukocitoza trenutno primarna dijagnoza akutna leukemija se opaža u manje od trećine slučajeva, obično je praćena visokim sadržajem blast ćelija. Mnogo češće u inicijalnom testu krvi, broj leukocita je normalan ili se otkriva leukopenija s relativnom limfocitozom. Obično se blastne ćelije mogu otkriti među limfoidnim elementima, ali mogu postojati slučajevi kada tipične blastne ćelije odsustvuju u krvi. Leukopenični oblici čine 40-50% svih slučajeva akutne leukemije, dok broj neutrofila može da se smanji do katastrofalnog nivoa (0,2-0,3×10 9 /l). Razvoj citopenije (granulocitopenija, anemija, trombocitopenija) kod akutne leukemije posljedica je inhibicije normalne hematopoeze svojstvene ovoj bolesti. Određeni značaj u nastanku citopenija ima i autoimuni citolitički mehanizam, koji može zakomplikovati tok bilo koje leukemije.

Počevši od leukopenije, akutna leukemija često zadržava ovaj trend tokom čitave bolesti. Ponekad se opaža promjena leukopenije s leukocitozom (kod neliječenih pacijenata kako proces napreduje) i obrnuto (na primjer, pod utjecajem citostatičke terapije). Akutnu leukemiju karakterizira takozvano leukemijsko zjapanje: odsustvo prijelaznih elemenata između stanica koje čine morfološki supstrat bolesti i zrelih leukocita.

Leukemija, kod koje se patološke blastne ćelije otkrivaju u perifernoj krvi, naziva se leukemijska, a leukemija (ili faza leukemije) sa odsustvom blastnih ćelija u krvi naziva se aleukemijska.

Promjene u crvenoj koštanoj srži. Proučavanje crvene koštane srži je obavezna studija u dijagnostici akutne leukemije, uključujući i slučajeve kada dijagnoza akutne leukemije nije upitna nakon ispitivanja periferne krvi. To je zbog osnovnog pravila onkologije - samo proučavanje tumorskog supstrata daje osnovu za postavljanje dijagnoze.

U crvenoj koštanoj srži tokom manifestacije akutne leukemije obično prevladavaju blastni oblici (više od 60%), u pravilu se javlja oštra inhibicija klice eritrocita i smanjenje broja megakariocita s degenerativnim pomakom u megakariocitogramu. primetio.

Dijagnoza citopeničnih oblika leukemije je teška, jer krvna slika često podsjeća na aplastičnu anemiju i agranulocitozu: anemija, leukopenija (granulocitopenija i relativna limfocitoza). Punkcija koštane srži obično rješava dijagnostičke probleme. Izuzetak je M7 (megakarioblastična) varijanta akutne leukemije, u kojoj izraženi razvoj fibroze koštane srži ne dopušta dobivanje punopravnog punktata (niska celularnost, značajna primjesa periferne krvi). Važna dijagnostička metoda za ovaj oblik akutne leukemije je biopsija koštane trefine. Histološki pregled koštanih presjeka omogućava utvrđivanje izražene blastne hiperplazije crvene koštane srži.

Dijagnoza akutne leukemije može se postaviti u sljedećim slučajevima.

U drugim, rjeđim slučajevima, otkrivanje 5-30% mijeloidnih blasta među svim stanicama koštane srži omogućava nam da govorimo o dijagnozi mijelodisplastičnog sindroma, odnosno refraktorne anemije sa povećanim sadržajem blasta (ranije ovaj oblik mijelodisplastičnog sindroma). nazvana akutna leukemija niskog procenta). Prilikom utvrđivanja limfoidne prirode blastnih ćelija potrebno je isključiti maligni limfom u fazi generalizacije. Trenutno se koristi FAB klasifikacija mijelodisplastičnog sindroma.

FAB klasifikacija mijelodisplastičnog sindroma

Oblik mijelodisplastičnog sindroma

Leukemije. Klinička i laboratorijska dijagnostika.

U hematologiji postoji koncept hemoblastoza - tumora koji proizlaze iz hematopoetskog tkiva. Hemoblastoze uključuju leukemije i hematosarkome. Leukemije su hemoblastoze sa primarnom tumorskom lezijom koštane srži. Hematosarkomi - oblici sa primarnim lokalnim rastom tumora, izvan koštane srži, to su čvrsti tumori koji se sastoje od blastnih ćelija hematopoetskog tkiva.

Etiologija leukemije ostaje nejasna. Kako A.I. Vorobyov piše: "Potraga za jednim uzrokom ili grupom uzroka iste vrste ljudskih tumora u njihovom siromaštvu može se takmičiti samo s potragom za Atlantidom." Za pojedinačne leukemije već su pronađeni neki faktori koji doprinose otkrivanju njihove etiologije. Tako se odvajanje dugog kraka hromozoma od 22. para i prijenos ovog segmenta na jedan od velikih hromozoma 9. para nalazi u gotovo svim stanicama koštane srži kod pacijenata s kroničnom mijeloidnom leukemijom. Patološki hromozom od 22 para sa skraćenim dugim krakom nazvan je Philadelphia po gradu u kojem su ga 1959. otkrili Nowell i Hungerford. Slične translokacije hromozoma se po pravilu dešavaju pod uticajem jonizujućeg zračenja, pa ove činjenice potvrđuju mutacionu prirodu (najčešće zračenja) hronične mijeloične leukemije. Nakon eksplozije nuklearne bombe u Japanu, slučajevi kronične mijeloične leukemije i akutne leukemije su 7 puta češći nego u drugim zemljama.

Kromosomske abnormalnosti kod akutne leukemije su u prirodi aneuploidije - promjene u broju hromozoma u tumorskoj ćeliji, a ne u strukturi, kao kod kronične mijeločne leukemije. Neobičan oblik akutne leukemije, koji se uglavnom nalazi u Africi, Burkittov limfom, otkriva epidemije, dajući razlog za razmišljanje o njegovoj virusnoj prirodi. Dakle, u razvoju akutne leukemije postoje različiti razlozi: jonizujuće zračenje, genetski poremećaji, nije isključena uloga virusa.

Kod ljudi, crvena koštana srž se nalazi u svim cjevastim kostima, lobanji, rebrima, prsnoj kosti, ključnoj kosti, lopatici, kralježnici i karličnim kostima. Postoje 2 tipa ćelija u koštanoj srži: retikularna stroma i parenhim. Hematopoeza je niz ćelijskih diferencijacija koje dovode do pojave zrelih stanica periferne krvi.

Moderna shema hematopoeze. Moderne ideje o hematopoezi iznio je 20-ih godina A.A. Maksimov. U našoj zemlji najčešća shema hematopoeze bila je shema I.A. Kassirskyja i G.A. Aleksejeva. Međutim, u ovoj shemi, najhipotetičniji je bio njen gornji dio, odnosno ćelija - predak hematopoeze. Predložena je shema hematopoeze koja se trenutno koristi

I. L. Chertkov i A. I. Vorobyov 1973. godine.

Sva krvna zrnca podijeljena su u 6 klasa.

1. klasa ćelija sastoji se od hematopoetskih matičnih ćelija, čiji kvantitativni sadržaj u hematopoetskom tkivu ne prelazi delić procenta. Ove ćelije obezbeđuju stabilnu hematopoezu i njen oporavak nakon poremećenih uticaja. Matična ćelija je jedina sposobna da se samoodrži dugo, duže od životnog veka pojedinca. Matične ćelije su pluripotentne i sposobne su da se diferenciraju duž svih hematopoetskih linija. Nije isključeno da limfopoeza ima istu matičnu ćeliju kao i njena početna karika. Dakle, matične ćelije se nazivaju takve ćelije koje imaju i sposobnost neograničenog samoodržavanja, kao i sposobnost razmnožavanja i diferencijacije.

Ćelije klase 2 - klasa pluripotentnih progenitorskih ćelija koje su sposobne za proliferaciju i diferencijaciju: progenitorske ćelije T-limfocita, ćelija koja formira kolonije kulture služi kao početna karika u histogenezi ćelija dve linije: granulocita i monocita .

Klasa 3 - klasa bipotentnih progenitornih ćelija kao što su ćelije osetljive na eritropoetin i ćelije osetljive na trombopoetin. Ove tri klase su morfološki nediferencirane ćelije.

Stepen 5 - klasa sazrevanja ćelija.

Stupanj 6 - klasa zrelih ćelija sa ograničenim životnim ciklusom.

Tako je termin nediferencirani blasti (ćelije prve 3 klase) zamijenio staro ime hemocitoblasta. U modernoj hematologiji široko se koriste citokemijske metode istraživanja koje omogućavaju identifikaciju različitih vrsta krvnih stanica, njihovog stupnja zrelosti, koji pripadaju jednoj ili drugoj hematopoetskoj seriji.

Klasifikacija leukemija. Godine 1857. Friedrich je podijelio sve leukemije na akutne i kronične. Podjela je zasnovana na morfološkom principu: grupu akutnih leukemija objedinjuje zajednička karakteristika - supstrat tumora su mlade ćelije - nediferencirane ćelije prve 3 klase ili klase 4 - blasti. Akutna leukemija iz morfološki nediferenciranih ćelija prve 3 klase naziva se nediferencirana akutna leukemija. Ako tumor nastaje iz ćelija klase 4, onda se naziva oznakom ćelija klase 4. Grupa hroničnih leukemija uključuje diferencirajuće tumore krvnog sistema, čiji su glavni supstrat zrele i zrele ćelije. Trajanje bolesti ne utiče na izbor akutne i hronične leukemije, iako se češće akutne leukemije karakterišu kraćim životnim vijekom, a kroničnim znatno dužim. Istovremeno, uz modernu citostatsku terapiju, postoje slučajevi produženog tijeka akutne leukemije (godine). Naprotiv, može doći do brzog toka hronične leukemije.

Već početkom 20. stoljeća akutna leukemija se počela dijeliti na limfoblastne i mijeloblastne varijante. Ova podjela je prvenstveno povezana s prisustvom ili odsutnošću enzima mijeloperoksidaze. Zatim je 1964. godine u Kembridžu osnovana komisija za izradu opšte klasifikacije akutne leukemije. Zasnovan je na morfološkim karakteristikama. Trenutno se klasifikacija akutne leukemije zasniva na citokemijskim karakteristikama. Akutna leukemija iz morfološki nediferenciranih ćelija prve 3 klase naziva se nediferencirana akutna leukemija. Ako tumor nastaje iz ćelija klase 4, onda se naziva oznakom ćelija klase 4: mijeloblastna, mijelomonoblastična, monoblastična, promijelocitna, akutna eritromijeloza, megakarioblastična, limfoblastična, plazmablastična, nediferencirana akutna leukemija.

Dijagnoza akutne leukemije. Kao što je već spomenuto, akutna leukemija

Maligni tumor hematopoetskog tkiva, čiji su morfološki supstrat transformisane blastne ćelije koje odgovaraju progenitorskim elementima jedne od hematopoetskih linija. Dijagnoza akutne leukemije može biti samo morfološka. U tu svrhu se vrši punkcija prsnog koša, a samo naglo povećan postotak ćelija prve 3 klase ili ćelija 4. klase omogućava dijagnosticiranje akutne leukemije. Obično je postotak ćelija prve 4 klase u akutnoj leukemiji nekoliko desetina posto, ponekad je taj postotak 10-20%, ovo je niskoprocentni oblik akutne leukemije. Ako je procenat blast ćelija ispod ovih brojeva, može se uraditi trepanobiopsija – studija koštane srži uzete iz krila ilijake. Kod trepanobiopsije se nalaze nakupine mladih stanica u značajnoj količini. Ako je u ovom slučaju dijagnoza sumnjiva, onda analizu treba ponoviti nakon 3-4 tjedna.

U perifernoj krvi kod akutne leukemije postoji jaz, jaz između blast ćelija i zrelih elemenata uz odsustvo promijelocita i mijelocita u mijelogramu, tzv. hiatus leucemicus.

Faze akutne leukemije: početni stadij, produženi period (prvi napad, recidiv), remisija (potpuna ili djelomična), oporavak, relaps akutne leukemije (označava koji) i terminalni stadijum.

Trenutno dostupne informacije o početnom stadijumu akutne leukemije su oskudne, o ovoj fazi se može suditi samo retrospektivno. Pacijenti imaju progresivno rastuću slabost, znojenje.

Dijagnoza se može postaviti nasumičnim testom krvi ili tokom vršne faze bolesti. Sa uznapredovalim kliničkim simptomima, pacijenti imaju visoku temperaturu, zimicu, vrtoglavicu, bolove u kostima, zglobovima, anoreksiju, krvarenje desni. Na početku bolesti 55-70% ljudi ima hemoragijski sindrom sa krvarenjem bilo koje lokalizacije i pojavom krvarenja na koži, što je povezano s trombocitopenijom. Uz inhibiciju granulocitne klice, bilježi se ulcerozno-nekrotični tonzilitis i povećanje temperature.

U krvnim pretragama postoji umjerena anemija, broj leukocita može biti povećan, normalan, smanjen, s eksplozijama u perifernoj krvi, zabilježena je trombocitopenija. Čak i ako su promjene u perifernoj krvi nejasne, koštana srž dešifruje dijagnozu: nekoliko desetina % blasta ili 100 % nalazi se u mijelogramu. Obično je povećanje slezene umjereno, njeno povećanje se poklapa s drugim znacima progresije. Značajno povećanje jetre također nije uočeno. Često se pojavljuju kožne izrasline, a leukemijska infiltracija se nalazi i u potkožnom tkivu, formirajući guste čvorove koji se zalemljuju za kožu i podižu je. Može doći do leukemijske infiltracije plućnog tkiva i mozga.

Ova klinička slika je tipična za akutnu mijeloičnu leukemiju kod odraslih.

Upoznajte se sa programom za dijagnostiku i liječenje leukemije u Izraelu.

Akutna promijelocitna leukemija se donekle razlikuje od grupe akutnih leukemija, prvenstveno po tome što je promijelocit ćelija klase 5. Očigledno, ime nije sasvim točno, a stanica pripada klasi 4, ali u konvencionalnom svjetlosnom mikroskopu ne može se razlikovati od promijelocita. Odlikuje se oštrim malignitetom tijeka, težinom hemoragičnog sindroma, hipofibrinogenemijom i brzinom toka. Prvi i najtipičniji simptom bolesti je hemoragijski sindrom. U pravilu je riječ o pojavi modrica na mjestu lakših ozljeda, krvarenju iz desni. Moguća je brza pojava bolesti: visoka temperatura, krvarenja, nekroza sluzokože. Gotovo svi pacijenti umiru od cerebralnog krvarenja ili gastrointestinalnog krvarenja. Kod ove leukemije, patološke ćelije imaju granularnost koja je morfološki slična onoj mastocita i bazofila, koji sadrže heparin. Ova leukemija se ponekad naziva

parinocitni ili bazofilni, ali termin promijelocitni

je postala tradicionalna i najčešće se koristi u kliničkoj praksi. Ranije su upravo ovim oblikom opisani fulminantni oblici i očekivani životni vijek pacijenata nije prelazio 1 mjesec. Visoka temperatura i obilno znojenje iscrpljuju bolesnike. Trenutno se, zbog upotrebe novih lijekova, posebno rubomicina, produžio životni vijek pacijenata. Očekivano trajanje života je u prosjeku 26 mjeseci, a opisani su čak i oblici kada je životni vijek bio duži od 4 godine.

Akutna eritromijeloza. Javlja se rijetko. U koštanoj srži, sadržaj crvenih krvnih zrnaca s jezgrom u koštanoj srži naglo raste, praćen visokim sadržajem nediferenciranih blasta, ili mijeloblasta, ili monoblasta.

Akutna limfoblastna leukemija. Ovaj oblik privlači pažnju onkologa i hematologa jer je upravo kod ovog oblika primjena složenih citostatskih učinaka omogućila postizanje remisije kod više od 90% oboljele djece, a kod mnogih pacijenata remisije su bile toliko duge da se moglo govoriti o oporavku djece. Ove podatke su istovremeno dobili naučnici iz više zemalja. Pozitivan učinak bio je stabilan kod djece od 2 do 9 godina, lošiji su kod djece mlađe i starije od ove dobi, a kod starijih osoba se postepeno brišu razlike između limfoblastne i mijeloične akutne leukemije, iako je životni vijek kod ovih oblika duži. nego kod drugih oblika akutne leukemije. U 80% slučajeva limfoblastna leukemija se javlja u djetinjstvu. Njegova posebnost leži u povećanju limfnih čvorova i slezene.

Ostale karakteristike akutne limfoblastne leukemije kod djece su osalgija, najčešće bol u nogama. Obično se u takvim slučajevima kod pacijenata posumnja na reumatizam. Počinje da se razvija anemija. Punkcija koštane srži potvrđuje dijagnozu zbog prisutnosti limfoblasta. Ove ćelije se takođe nalaze u punktatu limfnog čvora i slezene. U osnovi, ova leukemija nastaje iz progenitornih ćelija T-limfocita. Bez terapije, tok akutne limfoblastne leukemije nema nikakve karakteristike: povećava se inhibicija normalnih hematopoetskih klica, pojavljuju se infektivne komplikacije, krvarenja, anemija napreduje. Prije pojave metotreksata, 6-merkaptopurina i prednizolona, očekivani životni vijek bolesne djece bio je oko 2,5-3,5 mjeseca, odraslih - 1,4-2 mjeseca. Tok svakog ponovnog pojavljivanja bolesti karakterizira određena postojanost manifestacije bolesti u odnosu na njen prvi napad. Često proces metastazira u testise i moždane ovojnice, odnosno javljaju se fenomeni neuroleukemije. Uzmite u obzir da velika većina slučajeva akutne limfoblastne leukemije proizlazi iz T-limfocita.

Postoje i slučajevi akutne leukemije koja se razvija iz progenitornih ćelija B-limfocita. Ova grupa pripada akutnim plazmablastnim leukemijama. Akutna megakarioblastna leukemija je rjeđa.

Njegovu kliničku sliku uglavnom čine simptomi meningitisa i sindroma hipertenzije. Sve dok endoluminalni lijekovi nisu bili uključeni u liječenje akutne leukemije, neuroleukemija se nije mogla spriječiti.

Oporavak od akutne leukemije smatra se stanjem potpune remisije u trajanju od 5 godina ili više.

Parcijalne remisije su vrlo raznolika stanja koja karakteriziraju ili jasno hematološko poboljšanje sa smanjenjem procenta blastnih stanica u koštanoj srži i likvoru uz eliminaciju simptoma neuroleukemije, kao i nestanak blastnih stanica iz krvi. .

Relaps akutne leukemije. Može biti koštana srž (pojava više od 5% blasta u punktatu) ili lokalna (ekstramedularna) sa bilo kojom lokalizacijom leukemijske infiltracije.

Terminalni stadij akutne leukemije nastaje kada su svi citostatici nedjelotvorni, pa čak i na njihovoj pozadini dolazi do pogoršanja krvne slike: povećavaju se granulocitopenija i trombocitopenija, pojavljuju se nekroza sluznice i spontana krvarenja.

Klasifikacija hronične leukemije:

1. Hronična mijeloična leukemija

2. Subleukemijska mijeloza

4. Hronični megakariocitni

5. Hronična eritromijeloza

6. Hronična limfocitna leukemija

Hronična mijeloična leukemija je tumor koji nastaje iz stanica prekursora mijelopoeze koje zadržavaju sposobnost diferencijacije do zrelih oblika. Supstrat tumora su pretežno granulociti, uglavnom neutrofili.

Bolest se karakterizira povećanjem neutrofilne leukocitoze, često hipertrombocitozom, progresivnim povećanjem slezene. Tumorski proces prolazi kroz dvije faze: prošireni - monoklonski benigni i terminalni - poliklonski maligni. Hronična mijeloična leukemija u poodmakloj fazi je tumor neutrofilne klice hematopoeze, koji je gotovo u potpunosti zamijenio elemente normalne granulocitopoeze.

Patološki klon ima kao svog pretka pluripotentnu hematopoetsku ćeliju, koja u paru 22 ima hromozom sa skraćenim dugim krakom umjesto normalnog. Početni znaci bolesti povezani su ili s povećanjem slezene ili sa sve većom intoksikacijom. U prvom slučaju pacijent obraća pažnju na težinu u abdomenu, pojavu bola u lijevom hipohondrijumu. U drugim slučajevima, prvi simptomi su slabost, znojenje, gubitak težine. Dijagnoza se zasniva na analizi krvi. To je uvijek leukemijski proces, odnosno u krvi su prisutne mlade stanice neutrofilnog niza: povećan je sadržaj ubodnih neutrofila, metamijelocita, mijelocita, promijelocita, a kasnije i mijeloblasta. U formuli leukocita povećan je sadržaj bazofila, a ponekad i eozinofila - "bazofilno-eozinofilna asocijacija". Leukocitoza se uvijek povećava, povećava se sadržaj trombocita. Dakle, rastuća neutrofilna leukocitoza s pomakom ulijevo na mijelocite i promijelocite, povećanje broja trombocita koji se javlja u pozadini zadovoljavajućeg stanja pacijenta, treba ukazivati na kroničnu mijeloidnu leukemiju.

Međutim, poznato je da su neutrofilna leukocitoza i trombocitoza česta reaktivna stanja kao odgovor na bilo kakvo ćelijsko propadanje u tijelu i, prije svega, na kancerogeni tumor. U tim slučajevima govore o leukemoidnim reakcijama. Mogu se javiti kao odgovor koštane srži na iritaciju produktima razgradnje proteina ili kao rezultat narušavanja integriteta koštane srži kancerogenim metastazama. Dijagnoza se obično zasniva na analizi razmaza periferne krvi. U sumnjivim slučajevima radi se sternalna punkcija. Utvrđen je nagli relativni porast granulocita, odnos leukociti:eritrociti dostiže 10:1 i 20:1. Dolazi do oštrog smanjenja alkalne fosfataze.

Razvoj kronične mijeloične leukemije u nedostatku citostatičke terapije karakterizira postupno povećanje patoloških pojava: slezena se povećava, težina u trbuhu se povećava, leukocitoza se povećava, a intoksikacija postaje sve izraženija. Kada se dostigne nivo od 500 x 10,9/l ili više ćelija, postoji realna opasnost od stvaranja tromba leukocita u sudovima mozga, slezene i pluća. Leukemijska infiltracija se širi u jetri. Ranije je očekivani životni vijek pacijenata s kroničnom mijeloidnom leukemijom bez citostatičke terapije bio u prosjeku 2,4-2,6 godina. Uzrok smrti u ovom periodu bile su manifestacije terminalnog stadijuma: inhibicija normalne hematopoeze, hemoragični sindrom, infekcije, nekroza, 70% udruženo sa blastnom krizom.

U uslovima moderne citostatičke terapije, slika hronične mijeloične leukemije se razlikuje od gore opisane. Upotreba mijelozana dovodi do praktične normalizacije stanja pacijenata: nivo leukocita se može održavati u granicama od 10,9/l, a veličina slezene ostaje stabilna. S godinama se u perifernoj krvi povećava sadržaj mlađih oblika, uključujući promijelocite. Ovo je uznapredovali stadijum bolesti.

Ako pacijent postane refraktoran na tekuću terapiju citostaticima, opća intoksikacija se povećava, broj trombocita se smanjuje, tada se dijagnosticira terminalna faza bolesti. Smanjenje trombocita određuje pojavu izraženog hemoragijskog sindroma. Zatim se pridružuje pancitopenija. Najvažniji znak ove faze je prisustvo blastnih ćelija u koštanoj srži, a potom i u perifernoj krvi. Postoje znaci mielemije: sadržaj koštane srži ulazi u perifernu krv, uglavnom za crvena zrnca s jezgrom i megakariocite. Fokusi patološke hematopoeze nadilaze koštanu srž, slezinu, jetru i formiraju kožne leukemide ispod kože. Pojavljuju se jaki bolovi u kostima, infarkt slezine, stalna groznica.

Eritremija. Ranije se zvala Wakezova bolest ili policitemija vera. Bolest je benigni tumor krvnog sistema koji se razvija iz progenitorske ćelije mijelopoeze, iako se za neke varijante ne može isključiti njegov razvoj iz ćelije koja reaguje na eritropoetin. U krvotoku i vaskularnom depou povećava se masa eritrocita, a mijenjaju se i njihove kvalitativne karakteristike. Dakle, ovi eritrociti daju naglo usporen ESR (1-4 mm / h), ponekad do odsustva sedimentacije eritrocita).

Pacijenti se žale na glavobolju, težinu u glavi. Ponekad je prvi znak bolesti crvenilo lica i dlanova. Čest simptom eritremije je pruritus. Pacijenti imaju sklonost trombozi. Trombi su lokalizirani kako u arterijama ekstremiteta sa stvaranjem nekroze, tako iu koronarnim i cerebralnim arterijama. Često dolazi do povećanja krvnog pritiska. Jetra i slezina su uvećane.

Hronična limfocitna leukemija. Hronična limfocitna leukemija je tumor limfoidnog tkiva – imunokompetentnog sistema. Supstrat tumora predstavljaju morfološki zreli limfociti. Bolest karakterizira leukocitoza, obavezna limfocitna proliferacija u koštanoj srži, uvećani limfni čvorovi, jetra i slezena. Poraz imunokompetentnog sistema karakterizira sklonost razvoju infektivnih komplikacija i čest razvoj autoimunih (hemolitičkih i trombocitopeničnih) stanja.

Druga grupa su B-limfociti, prvi put pronađeni u Fabricijevoj burzi kod ptica. Hronična limfocitna leukemija može biti predstavljena T ćelijama i B ćelijama. Međutim, u pravilu, kroničnu limfocitnu leukemiju predstavljaju B-limfociti. Njihov sadržaj u krvi dostiže 80-98%, dok je broj T-limfocita smanjen na 3-9%. Pronađeni su samo izolovani slučajevi hronične limfocitne leukemije, predstavljene T-limfocitima. Najvjerovatnije, kronična limfocitna leukemija nastaje iz ćelije prekursora limfopoeze. Istovremeno se otkrivaju neki znakovi relativnog benignog procesa: nema kršenja hromozomskog skupa, nisu dobiveni jasni podaci o ćelijskoj atipiji. Patološke stanice u kroničnoj limfocitnoj leukemiji se praktički ne razlikuju od normalnih limfocita. Tokom značajnog perioda bolesti nema progresije tumora. Osim toga, bolest se može kontrolirati jednim citostatikom tokom niza godina, a blastna kriza u završnim stadijumima bolesti je rijetka.

Istovremeno, u nekim slučajevima, kronična limfocitna leukemija, koja je dugo vremena benigni tumor, transformira se i poprima crte maligniteta, što se manifestira rezistencijom tumora na različite citostatske terapije. U morfologiji limfocita mogu se otkriti karakteristike atipizma, u krvi postoji veliki postotak prolimfocita i limfoblasta. Takođe nema veze sa mutagenim faktorima, što je uočeno kod osoba koje su bile izložene jonizujućem zračenju. Učestalost akutne leukemije, kronične mijeloične leukemije, ali ne i kronične limfocitne leukemije, sve je češća među stanovnicima Hirošime i Nagasakija, kao i među onima koji su primali rendgensku terapiju.

Kao što je već spomenuto, kronična limfocitna leukemija sastoji se uglavnom od morfološki zrelih limfocita koji rastu u koštanoj srži, limfnim čvorovima, slezeni, jetri i oslobađaju se u velikim količinama u perifernu krv. Dijagnoza bolesti se obično postavlja otkrivanjem povećanog broja limfocita u perifernoj krvi uz povećanje limfnih čvorova. U krvi se nalaze polurazrušena jezgra limfocita sa ostacima nukleola - Gumprechtova senka. U suštini, ove ćelije leukolize su artefakt; njih nema u tečnoj krvi. Ove ćelije nastaju tokom pripreme razmaza. U mnogim sjenkama Gumprechta, jezgre se mogu vidjeti među nakupinama hromatina. Ponekad se ove ćelije leukolize nazivaju po Botkin-Gumprechtu, iako ovo ime nije sasvim tačno. Sin

Poreklo hronične limfocitne leukemije iz ćelija imunokompetentnog sistema, tumorska priroda ovog procesa, određuju karakteristike komplikacija koje su svojstvene hroničnoj limfocitnoj leukemiji. Ovi pacijenti su vrlo osjetljivi na infekcije bakterijske prirode: tonzilitis, upalu pluća, gnojne procese u plućima. Osim infektivnih komplikacija, kroničnu limfocitnu leukemiju karakteriziraju imunološki sukobi povezani s pojavom antitijela protiv vlastitih normalnih krvnih stanica. Najčešće se dijagnosticira autoimuna hemolitička anemija: žutica, pojavljuje se retikulocitoza, smanjuje se sadržaj crvenih krvnih stanica i hemoglobina, a slezena se povećava. Česta i autoimuna trombocitopenija. AI Vorobyov takođe opisuje autoimuna stanja povezana sa leukocitima.

"Dlakava ćelijska leukemija" ili leukemija dlakavih ćelija predstavljena je ćelijama tipa B-limfocita. Morfološka karakteristika ovih ćelija je prisustvo viloznih izbočina citoplazme. Bolest karakterizira citopenija, umjereno povećani limfni čvorovi, jetra i slezena dostižu velike veličine. U koštanoj srži dominiraju dlakave ćelije.

Glavna karakteristika ove grupe je sposobnost tumorskih ćelija da sintetiziraju homogene imunoglobuline ili njihove fragmente - paraproteine. Kao što je poznato, sintezu antitijela normalno provodi poliklonalni sistem plazma ćelija i limfocita sposobnih da specifično reagiraju sa gotovo bilo kojim od mogućih antigena. Štaviše, svaki predstavnik klona - jedna ćelija - genetski je programiran za sintezu samo jedne vrste antitijela - homogenog imunoglobulina. Kod paraproteinemičkih hemoblastoza, cjelokupna masa tumora, koja predstavlja potomstvo jedne ćelije, je genotipski homogena, homogena, a njegova proizvodnja je monoklonski imunoglobulin. Paraprotein je uvijek patološki protein. U skladu sa savremenom klasifikacijom imunoglobulina, paraproteini se dijele u 5 klasa: A, C, M, D i E.

Plazmacitom (multipli mijelom). Mogu postojati solitarni plazmocitomi, multipli tumorski oblik, difuzni nodularni i difuzni oblici. Ćelije mijeloma koje proliferiraju u koštanoj srži dovode do razaranja koštane srži u ravnim kostima, kralježnici, tubularnim kostima.

Klinički se lezije kostiju manifestuju klasičnom Kahler trijadom: bol, tumori, frakture. Ne postoje specifični radiološki znakovi koji bi razlikovali koštane promjene od metastaza u kostima. Citološki pregled koštane srži otkriva specifičnu sliku metaplazije ćelija mijeloma.

Sindrom proteinske patologije manifestuje se: hiperproteinemijom sa hiperglobulinemijom, povećanjem ESR i viskoziteta krvi, pozitivnim sedimentnim proteinskim reakcijama. Mijelomska nefropatija se izražava upornom proteinurijom, postepeno razvijajući zatajenje bubrega u odsustvu znakova nefrotskog sindroma: edem, hipoproteinemija, hiperholesterolemija. Hipertenzija i retinopatija također nisu tipične.

GOST 25382-82
(ST SEV 2702-80,
ST SEV 6284-88)*
______________________
* Standardna oznaka.
Revidirano izdanje, Rev. N 1 .

Grupa C79

DRŽAVNI STANDARD SAVEZA SSR

CATTLE

Metode laboratorijska dijagnostika leukemija

domaće životinje. Metode laboratorijske dijagnostike leukoza

Datum uvođenja 1983-01-01

Dekret Državni komitet SSSR prema standardima od 11. januara 1982. N 3153, period važenja je postavljen od 01/01/83 do 01/01/88 *
________________
* Rok važenja je ukinut prema protokolu Međudržavnog vijeća za standardizaciju, mjeriteljstvo i sertifikaciju (IUS N 2, 1993.)

RAZVIJENO od strane Ministarstva Poljoprivreda SSSR

PERFORMERS

L.G. Burba; A.F. Valikhov; E.A. Dun; L.A. Zinevich; M.P. Kudryavtseva; V.M.Nakhmans; G.A.Simonyan

UVEDENO od strane Ministarstva poljoprivrede SSSR-a

ODOBRENO I UVOĐENO Ukazom Državnog komiteta SSSR-a za standarde od 11. avgusta 1982. N 3153

UVEDENO Amandman N 1, odobren i stupio na snagu 01.01.90 Uredbom Državnog standarda SSSR-a od 23.06.89 N 1957

Promjenu N 1 izvršio je proizvođač baze podataka prema tekstu IUS N 10, 1989

Ovaj standard se odnosi na goveda i uspostavlja metode za laboratorijsku dijagnozu leukemije.

Standard je namijenjen istraživačkim institucijama.

Standard je u potpunosti usklađen sa ST SEV 2702-80.

1. METODE UZORKOVANJA

1.1. Za hematološki pregled uzimaju se uzorci krvi iz vene životinje u skladu sa pravilima asepse u epruvetama sa antikoagulansom - 10% rastvorom dinatrijeve soli etilendiamintetraoctene kiseline (EDTA) - u količini od 0,02 cm3 na 1 cm2 krvi. Tanki razmazi krvi pripremaju se od svježe ili stabilizirane krvi na bezmasnim staklenim predmetima zagrijanim na 25 °C.

Uzorci stabilizirane krvi za istraživanje šalju se u laboratoriju i ispituju najkasnije 36 sati nakon uzimanja. Uzorci za istraživanje uzimaju se najranije 15 dana od unošenja vakcina i alergena životinjama, 15 dana prije teljenja i 15 dana nakon teljenja.

1.2. Za serološka ispitivanja, uzorci krvi se uzimaju iz vene u sterilne epruvete. Kod dužeg skladištenja uzoraka, krvni serum se odvaja od ugruška. Serum se čuva na temperaturi od minus 20 °C i nižoj. Prilikom testiranja prisutnosti antitijela protiv antigena goveđeg onkornavirusa u reakciji difuzne precipitacije (RID), koristi se stabilizirana krvna plazma uzeta u skladu s tačkom 1.1.

1.3. Uzorci uzeti za hematološke i serološke studije krv, etiketiran i poslat u laboratoriju sa pratećim dokumentom, u kojem se navodi naziv farme (odjel, farma), broj ili nadimak, spol i starost životinje.

1.4. Za histološke i citološke studije, patološki materijal se uzima sa leševa najkasnije 8 sati nakon uginuća ili klanja životinje. Uzorci se stavljaju u rastvor za fiksiranje u omjeru 1:30.

Za histološki pregled izrezuju se dijelovi organa i tkiva (limfni čvorovi, slezina, jetra, bubrezi, srce, mišići, grudna kost, zid organa za varenje i druga tkiva) veličine 2x2x1 cm. do normalnog tkiva postoje područja izmijenjenih i susjednih tkiva. Materijal za istraživanje stavlja se u hermetički zatvorenu posudu sa 8-10% vodenim rastvorom formaldehida. Posuda se etiketira i sa pratećim dokumentom šalje u laboratoriju.

1.5. Za citološki pregled pripremaju se svježi razmazi krvi i preparati otiska iz hematopoetskih i drugih organa dobijenih biopsijom ili klanjem životinje. Da bi to učinili, pomoću igle za ubijanje, poštujući pravila asepse i antisepse, uzimaju punktat iz koštane srži (grudne kosti) i limfnih čvorova od životinja i pripremaju razmaze na staklenim predmetima. Preparati otiska pripremaju se dodirivanjem odrezane površine komada orgulja staklenim predmetom.

1.6. Za enzimski imunosorbentni test koriste se svježi uzorci krvi, ali ne ranije od jednog dana nakon uzimanja. Nedovoljno bistreni krvni serumi se centrifugiraju. Tokom dugotrajnog skladištenja uzoraka, krvni serum se odvaja od krvnog ugruška. Kada se uzorci čuvaju na temperaturi od plus 4 °C, serumi su pogodni za istraživanje u roku od 10 dana. Prilikom skladištenja seruma na temperaturi od minus 20°C, rok trajanja seruma za istraživanje je 1 godina. Raspadnuti i visoko hemolizirani serumi nisu prikladni za istraživanje.

(Dodatno uvedeno, Rev. N 1).

2. METODE ISTRAŽIVANJA

2.1. Hematološka metoda

Suština metode je u otkrivanju u perifernoj krvi povećanog broja leukocita, uglavnom limfoidnog niza, i slabo diferenciranih stanica (preci, prolimfociti, limfoblasti), kao i polimorfnih, atipičnih stanica. hematopoetskih organa.

2.1.1. Oprema, materijali i reagensi

2.1.1.1. Za istraživačku upotrebu:

Elektronski brojač čestica;

automatski razblaživač;

brojač za brojanje leukocitna formula;

mikroporozni stakleni filter prema GOST 23932-79 *;
________________
GOST 23932-90. - Napomena proizvođača baze podataka.

biološki mikroskopi marke MBI ili MRB prema GOST 8284-78;

pipete kapaciteta 1, 2, 5, 10 cm prema GOST 20292-74 *;
________________
* Na teritoriji Ruska Federacija Važe GOST 29169-91, GOST 29227-91 - GOST 29229-91, GOST 29251-91 - GOST 29253-91, u daljem tekstu. - Napomena proizvođača baze podataka.

mikropipete kapaciteta 0,02; 0,03; 0,05; 0,1; 0,2 cm prema GOST 20292-74;

mjerni cilindri kapaciteta 50, 100, 500, 1000 cm3 u skladu sa GOST 20292-74;

laboratorijske vage;

stakleni klizači prema GOST 9284-75;

komora za brojanje krvnih zrnaca (komora Goryaev, Burker ili drugih marki);

Uređaji za fiksiranje i bojanje mrlja na staklenim predmetima;

ulje za potapanje prema GOST 13739-78;

Giemsa otopina boje;

Main-Grunwald otopina za bojenje;

Turkovo rješenje;

metil alkohol prema GOST 6995-77;

ksilen prema GOST 9949-76;

natrijum hlorid prema GOST 4233-77;

tehnički formalin (formaldehid) prema GOST 1625-75 *;
________________
* Na teritoriji Ruske Federacije primjenjuje se GOST 1625-89. - Napomena proizvođača baze podataka.

izotonična otopina elektrolita; priprema se na sledeći način: uzeti 0,9% rastvor natrijum hlorida, filtrirati kroz mikroporozni filter (filter G-4), kontrolisati pH indikatorskim papirom. Prilikom dodavanja Tris pufera, pH se podešava na 6-7,2. Kada koristite rastvor duže od 2 sata, dodajte 5 ml 35% rastvora formaldehida na 1000 ml elektrolita.

Za eritrocitolizu koristi se 1% vodeni rastvor saponina, miješajući ga u omjeru 1000:5 sa 35% otopinom formaldehida. Otopina bez pjene se filtrira odmah nakon pripreme;

stabilizirajuća otopina; pripremljeno na sledeći način: uzeti 50 g dinatrijumove soli etilendiamintetrasirćetne kiseline, 50 cm3 35% rastvora formaldehida, 2 cm3 1% rastvora metilen plavog i 50 cm3 destilovane vode. Otopina se zagrijava do potpunog otapanja i filtrira kroz mikroporozni stakleni filter.

2.1.2. Sprovođenje istraživanja

Studiju izvode:

brojanje broja leukocita pomoću elektronskog brojača čestica;

brojanje leukocita u komori za brojanje;

diferenciran broj leukocita.

2.1.2.1. Brojanje leukocita pomoću elektronskog brojača čestica vrši se u skladu sa pravilima koja su priložena za svaki aparat.

2.1.2.2. Brojanje leukocita u komori za brojanje vrši se u skladu sa njenim tehničkim parametrima.

2.1.2.3. Diferenciran broj leukocita (određivanje formule leukocita) se vrši u obojenom razmazu pod mikroskopom sa imerzionim sočivom sa uvećanjem od 90. Istovremeno se broji najmanje 100 ćelija, ravnomjerno gledajući sve dijelove razmazati. Diferencijalno brojanje leukocita provodi se ako utvrđeni broj leukocita u 1 cm krvi premašuje pokazatelje indicirane za zdrave životinje, uzimajući u obzir njihovu starost prema "ključu leukemije".

Rezultati studija se ocjenjuju prema "ključu leukemije" u skladu sa zahtjevima navedenim u tabeli.


Starost životinja, godine	Hematološki sumnjive životinje	Hematološki sumnjive životinje na leukemiju		Životinje koje su hematološki pozitivne na leukemiju
	Broj leukocita u 1 cm krvi			Apsolutni broj limfocita u 1 cm krvi
St. 1 do 2		Od 9000 do 11000
			" 8000 " 10000
			" 6500 " 9000
			" 5500 " 8000

2.1.3. Obrada rezultata

Ako je broj leukocita u životinji ispod broja navedenog u tabeli, tada se rezultat studije na leukemiju smatra negativnim (-).

Ako je broj limfocita u granicama navedenim u tabeli, onda se rezultat ocjenjuje kao sumnjiv (+), ako je niži od najnižeg pokazatelja u tabeli, onda se rezultat ocjenjuje kao negativan (-). Ako je broj limfocita u 1 cm krvi veći od navedenog u tabeli, rezultat se ocjenjuje kao pozitivan (+).

Životinje za koje se sumnja da imaju leukemiju podvrgavaju se dva ili tri pregleda sa razmakom od 30 dana između njih. Ako na drugom i trećem dodatna istraživanja kada se dobiju negativni rezultati, takve životinje se priznaju kao zdrave, a kada se utvrde promjene u krvi karakteristične za pacijente ili se sumnja na bolest, životinje se smatraju bolesnim.

2.2. citološka metoda

Suština metode je u otkrivanju u perifernoj krvi i hematopoetskim organima (crvena koštana srž, limfni čvorovi, slezena) akumulacije morfološki izmijenjenih, pretežno nezrelih (predak, slabo diferencirani, limfoblasti, prolimfoblasti i dr.). ili patološke (tumorske) ćelije.

2.2.1. Oprema i reagensi

2.2.1.1. Za istraživanje se koristi oprema i reagensi navedeni u tački 2.1.1, a dodatno:

igla za punkciju hematopoetskih organa;

špric kapaciteta 20 cm3 prema GOST 18137-77;

skalpel prema GOST 21240-77 *;
________________
* Na teritoriji Ruske Federacije primjenjuje se GOST 21240-89. - Napomena proizvođača baze podataka.

škare;

natrijum citrat prema GOST 22280-76, 3,8% rastvor;

GOST 5962-67 *.
________________
* Na teritoriji Ruske Federacije primenjuje se GOST R 51652-2000, u daljem tekstu. - Napomena proizvođača baze podataka.

2.2.2. Sprovođenje istraživanja

2.2.2.1. Razmazi pripremljeni na staklenim predmetima od svježe krvi, punktata hematopoetske koštane srži, slezine, limfnih čvorova i drugih organa i tumora, kao i preparati za otisak pripremljeni od materijala uzetog prilikom biopsije, ili od dijelova organa pri obdukciji životinje, fiksirani su u metil alkoholu, obojeni po Pappenheimu i pregledani pod mikroskopom sa imerzionim objektivom pri uvećanju od 90.

2.2.3. Obrada rezultata

2.2.3.1. Rezultat studije smatra se pozitivnim:

za leukemiju - kada se otkrije u brisevima krvi više od 3% i u hematopoetskim organima više od 10% slabo diferenciranih predaka (prolimfociti, limfoblasti, mijeloblasti) ili tumorskih stanica s normalnim vrijednostima apsolutnog broja limfocita;

za slabo diferencirani oblik leukemije - kada se u hemogramima i citogramima hematopoetskih organa otkrije povećani postotak predačkih, slabo diferenciranih ćelija makro-, mezo- i mikrogeneracije limfoblasta i prolimfocita;

za limfoidnu leukemiju - ako se primijeti povećanje broja stanica limfoidnog niza različitog stupnja zrelosti (prolimfociti i limfoblasti) u razmazima krvi, slezeni, limfnim čvorovima, koštanoj srži (limfoidna metaplazija) i drugim organima;

na hematosarkomu (limfosarkomi različitog stepena zrelosti) - ako na hemogramima i citogramima prevladavaju atipične (tumorske) ćelije koje se razlikuju od normalnih po obliku, veličini, strukturi i identične su ćelijama koje formiraju tumore;

na limfogranulomatozu - kada se limfocitoza uspostavi u brisevima krvi u preparatima iz limfnih čvorova - limfoidna hiperplazija, uz otkrivanje eozinofila, neutrofila, bazofila, fibroblasta, plazmatskih, atipičnih, nediferenciranih i gigantskih Berezovsky-Sbergovih stanica u njima.

2.3. Serološka metoda

Suština metode je u detekciji precipitirajućih antitijela protiv antigena goveđeg onkornavirusa tipa C u krvnom serumu životinja pomoću imunodifuzijske reakcije (RID).

2.3.1. Oprema i materijali

2.3.1.1. Za istraživačku upotrebu:

biološke Petrijeve posude;

pH metar;

bušilica za izradu rupa;

vodeno kupatilo sa temperaturom grijanja od 50 °C ili više;

puferski rastvor, pH 7,2;

agar prečišćen prema GOST 17206-71;

dvostruki antigen, koji se sastoji od glikoproteinskih (gp) i polipeptidnih (p24) antigena onkornavirusa tipa C kod goveda.

Antigen se čuva na minus 20°C ili se liofilizira.

Prije postavljanja RID-a, pripremljeni antigen se upoređuje sa standardnim antigenom testiranim na specifičnost i aktivnost;

serum pozitivan sa precipitirajućim antitelima sa titrom antitela na GP antigen od 1:16 do 1:32 u RID. Serum se dobija od prirodno ili eksperimentalno zaraženih goveda ili ovaca;

kontrola seruma negativna.

2.3.2. Priprema studija

2.3.2.1. Rastopljeni 0,8% rastvor agara nanosi se u jednoličnom sloju debljine 2-3 mm na ravne čaše, Petrijeve zdjelice ili ploče. Nakon što se agar stvrdne, posebnim pečatom se prave jažice, koje sprečavaju stvaranje pukotina između njih i odvajanje agara od dna posude. Ako se tečnost nakuplja u jamicama prije nego što se reakcija uspostavi, tada se uklanja. Jažice za imunodifuziju odmah nakon njihovog formiranja ukapaju se agarom kako bi se spriječilo prodiranje antigena ili seruma ispod sloja agara.

2.3.3. Sprovođenje istraživanja

2.3.3.1. Antigen i kontrolni serum doprinose jamicama u skladu sa crtežom. Antigen (A) se unosi u centralnu jažicu, dve dijametralno suprotne jažice se pune kontrolnim serumom (CS). Preostale četiri periferne jažice (1, 2, 3, 4) se pune test serumima. Tačka u odnosu na koju su numerisane jažice sa testiranim serumima je oznaka u gelu gornjeg dela posude.

Šema za postavljanje i evaluaciju reakcije imunodifuzije u agar gelu (RID)

1 - serum koji negativno reaguje; 2 - pozitivno reagujući serum; 3 - slabo pozitivno reagujući serum; 4 - pozitivno reagujući serum sa drugom linijom precipitacije; 5 - oštro pozitivno reagujući serum; 6 - pozitivno reagujući serum sa nespecifičnom taložnom linijom; 7 - negativno reagujući serum sa nespecifičnom taložnom linijom; 8 - negativno reagirajući serum sa zonom opalescencije; A - antigen onkornavirusa kod goveda; CS - kontrolni serum protiv glikoproteinskog antigena goveđeg onkornavirusa

Sterilne pipete se koriste za uvođenje komponenti u jažice, a istovremeno sprečavaju kontaminaciju reagensa i seruma bakterijama i drugim supstancama. Jamice se pune sve dok meniskus ne nestane. Nakon punjenja svih jažica, posude se zatvaraju poklopcima i čuvaju u vlažnoj komori na temperaturi od 18 do 27 °C.

Reakcija se uzima u obzir nakon 48-72 sata Čaše se gledaju na tamnoj pozadini, usmjeravajući fokusirani snop iluminatora na dno čaše pod uglom od 30-45°. Reakcija se procjenjuje u odnosu na kontrolnu liniju taloga. Ako je nema ili je slabo izražena, onda se reakcija smatra neuspjehom i treba je ponoviti. Taložna linija koju formiraju kontrolni serum i antigen treba da bude čista, ravna, čiji krajevi treba da dopiru do jažica sa ispitivanim serumom i da se nalaze na istoj udaljenosti od jažica (A i CS).

2.3.4. Obrada rezultata

2.3.4.1. Ovisno o prisutnosti i titru specifičnih antitijela protiv antigena onkornavirusa, serumi se dijele na pozitivne, negativne i sumnjivo reagirajuće.

Serum se smatra pozitivno reagujućim:

ako se između jažica sa antigenom i test seruma formira taložna traka, koja se povezuje sa kontrolnom linijom, pozicionirajte 2 (vidi crtež);

ako nema linije precipitacije između jažica sa serumom i antigenom, ali kontrolna linija formira zavoj u blizini jažice sa test serumom, usmjeren prema jažici sa antigenom, položaj 3 ;

ako se formira druga linija precipitacije koja se nalazi bliže jažici sa test serumom i ukazuje na prisustvo u serumu antitela (p24) koja precipitiraju protiv drugog antigena goveđeg onkornavirusa tipa C, - položaj 4 ;

ako je kontrolna linija značajno skraćena na strani jažice sa test serumom i ima mutnu krivinu prema jažici sa antigenom ili se nalazi vrlo blizu jažice sa antigenom - pozicija 5 ;

Bilješka. Čisnija linija nastaje ako se takav serum razrijedi u omjeru 1:4 ili 1:8;

ako je nastala nespecifična linija padavina - položaj 6 .

Serum se smatra negativnom reakcijom:

ako se linija kontrolne precipitacije nastavlja do bunara sa test serumom bez zavoja ili sa blagim nagibom prema bunarčiću sa kontrolnim serumom - položaj 1 ;

ako je nastala nespecifična linija padavina - položaj 7 ; dok se siječe sa kontrolnom linijom.

Serum se smatra sumnjivo reaktivnim ako je kontrolna linija padavina slabo vidljiva zbog prisustva nespecifične precipitacijske linije. U tom slučaju od ove životinje se ponovo uzima krv i analizira serum.

Ako je sumnjiva reakcija zabilježena dva puta, s razmakom od 1 mjesec između studija, serum se smatra pozitivno reagirajućim.

Dvosmislena reakcija može biti posljedica curenja seruma koji pozitivno reagira ispod sloja agara u jažicu sa serumom negativnog reagiranja ili kontaminacije uzorka seruma koji negativno reagira - pozitivan. U ovom slučaju, studija se ponavlja.

2.4. Histološka metoda

Suština metode je u otkrivanju životinjskih izraslina (proliferacije) kod pacijenata sa leukemijom koji su narušili normalno sazrijevanje i diferencijaciju hematopoetskih stanica, kako u hematopoetskim organima (koštana srž, slezena, limfni čvorovi), tako i u vezivnom tkivu. drugih organa.

2.4.1. Oprema, materijali i reagensi

2.4.1.1. Za istraživačku upotrebu:

mikrotom za parafinske rezove;

mikrotom za sekcije celuloida:

mikroskop prema GOST 8284-78;

stakalca i pokrovne stakalce prema GOST 9284-75;

blokovi od drveta ili drugog materijala;

termostat koji omogućava kontrolu temperature od 80 °S;

parafin s tačkom topljenja od 58 ° C;

formaldehid 8-10%, neutralan, vodeni rastvor;

etil alkohol rektificiran prema GOST 5962-67;

celoidin: 2-3, 4-5 i 8-10% rastvori u standardu sa eter sulfatom u omjeru 1:1;

hloroform prema GOST 20015-74 *;
________________
* Na teritoriji Ruske Federacije primjenjuje se GOST 20015-88. - Napomena proizvođača baze podataka.

balzam od jele prema GOST 2290-76;

ksilen prema GOST 9949-76;

hlorovodonična kiselina prema GOST 3118-77, 1% rastvor alkohola;

eozin, 0,5% rastvor ili hematoksilin 10% rastvor;

dušična kiselina prema GOST 4461-77, 5% rastvor;

eter sulfat;

karbol-ksilen.

2.4.2. Priprema studija

2.4.2.1. Odabrani uzorci organa fiksiraju se u formaldehidu 48 sati, a zatim se peru 10-24 sata u tekućoj vodi. Zatim se iz dijelova organa izrezuju ploče debljine 3 μm i površine 1,5-2,5 cm, koje se uzastopno čuvaju u etil alkohol sa koncentracijom od 70%, 80%, 96%.

U alkoholu svake navedene koncentracije dehidracija traje 24 sata na temperaturi od 15 do 20 °C.

2.4.2.2. Za pripremu i bojenje celuloidinskih rezova, dehidrirani komadi patološkog materijala se ugrađuju u celoidin. Komadići organa izvađeni iz rastvora celoidina se lepe na blokove drveta ili drugog materijala, suše i stavljaju u teglu sa 70% alkohola. Celoidinski rezovi debljine 5-10 µm pripremaju se od komada organa zalijepljenih na blokove i obojenih hematoksilin-eozinom ili drugim bojama, uklopljenih u balzam i prekrivenim pokrovnim stakalcem. Umjesto celooidina mogu se pripremiti parafinski rezovi.

2.4.2.3. Za pripremu i bojenje parafinskih rezova, delovi organa dehidrirani prema tački 2.4.2.1 se ugrađuju u parafin. Sekcije debljine 3-5 mikrona pripremaju se od parafinskih blokova pomoću parafinskog mikrotoma, koji se stavljaju u toplu vodu radi topljenja. Zatim se preseci prenose na staklena stakalca, suše u termostatu na temperaturi od 37-40 °C i boje se hematoksilin-eozinom ili drugom bojom.

2.4.3. Sprovođenje istraživanja

Pripremljeni preseci se posmatraju pod mikroskopom na prirodnom ili veštačkom svetlu. S okularom sa uvećanjem od 10 i sočivom sa uvećanjem od 10, utvrđuje se opća struktura organa koji se proučava, uzimajući u obzir promjene tkiva u njegovim pojedinim dijelovima kao rezultat infiltrativnih procesa (stanje folikuli, interfolikularne zone u slezeni i limfnim čvorovima, prisustvo ćelija u lumenu krvnih sudova, parenhima i intersticijuma organa i dr.).

Okularom sa uvećanjem od 20 i sočivom sa uvećanjem od 40 otkrivaju se detalji promjena, obraćajući pažnju na prirodu proliferirajućih ćelija (tip, stepen diferencijacije, zrelost) i intenzitet (ozbiljnost) histopatološke promjene. Istovremeno, utvrđuje se prisustvo popratnih bolesti neleukemijske prirode kako bi se provela diferencijalna dijagnoza ili znaci koji pogoršavaju osnovnu bolest (edem, distrofija, nekroza, krvarenje itd. u skeletnim mišićima, srcu, jetra, bubrezi i drugi organi).

2.4.4. Obrada rezultata

Rezultati analize smatraju se pozitivnim:

na limfoidnu leukemiju - ako se u slezeni i limfnim čvorovima uoči potpuno brisanje uzorka zbog difuzne infiltracije stanica limfoidnog niza, među kojima se uglavnom otkrivaju zreli limfociti, u manjoj količini nalaze se prolimfociti, limfoblasti, među kojima ponekad se primjećuju retikularne ćelije;

u koštanoj srži stroma je očuvana, otkriveno je značajno stanjivanje i resorpcija snopa, nakupine limfocita mogu se nalaziti u obliku žarišta ili difuzno, ispunjavajući sve prostore koštane srži (limfoidna metaplazija); u bubrezima, jetri, srcu, sibuhu i drugim organima obično se otkrivaju nakupine limfocita u lumenu kapilara i infiltracija limfoidnih stanica intersticijskog tkiva;

za slabo diferenciranu leukemiju (hemocitoblastoza) - ako se uoče žarišne i difuzne proliferacije u koštanoj srži, slezeni, limfnim čvorovima i drugim organima, čiji je ćelijski sastav predstavljen nediferenciranim ili slabo diferenciranim stanicama kao što je hemocitoblast (stanica predaka);

on mijeloična leukemija- ako se u slezeni nađu nezreli elementi granulocitnog niza, megakariociti, ćelije tipa hemocitoblasta, retikularne ćelije, fragmentacija i propadanje argirofilnih vlakana, u koštanoj srži se nalaze nakupine zrelih i nezrelih ćelija granulocitnog niza; u limfnim čvorovima, jetri, bubrezima, plućima i drugim organima uočavaju se fokalne difuzne izrasline mijeloidnih elemenata;

na limfosarkom (slabo diferencirani limfoblastni, limfocitni, histiocitni) - ako je u limfnim čvorovima, organima za varenje, reprodukciji, srčanom, skeletni mišić, drugi organi i tkiva bilježe rast tumora iz nediferenciranih ili slabo diferenciranih ćelija limfoidnog tipa (slezena i koštana srž nisu promijenjene);

za limfogranulomatozu - ako se otkrije hiperplazija limfoidnih stanica ili polimorfna proliferacija stanica, sklerotične promjene i nekroza u limfnim čvorovima, slezeni, jetri i drugim organima; među polimorfnim ćelijama retikularnog tipa detektuju se multinuklearne džinovske ćelije tipa Berezovsky-Sternberg, plazma ćelije, eozinofili i neutrofili različitog stepena zrelosti, kao i fibroblasti.

2.5. ELISA metoda

Suština metode je u adsorpciji antivirusnih antitela antigenom na površini ploče tokom inkubacije test seruma sa anti-specičnim antitelima obeleženim enzimom, nakon čega sledi modifikacija supstrata.

2.5.1. Oprema, materijali, reagensi

Jednokanalni ili višekanalni fotometar sa minimalnim ograničenjem očitavanja od 1,5 jedinica ekstinkcije i automatskom registracijom rezultata.

Oprema za automatsko ili poluautomatsko pranje ploča.

Termostat koji obezbeđuje temperaturu (37±0,5)°C.

Mikropipete jednokanalne automatske.

Mikropipete sa osam ili dvanaest kanala automatske.

Mikrotitar plastične ploče sa 96 jažica.

Hemijske čaše kapaciteta 500 cm prema GOST 1770-74.
.

Pipete su graduirane sa kapacitetom od 1 i 10 cm3 u skladu sa GOST 20292-71.

Puferski rastvor je karbonatni sa pH 8,8-9,6.

Fiziološki rastvor fosfatnog pufera sa pH 7,2-7,4 koji sadrži tween 20 ili 80 (rastvor za pranje).

Rastvarač - otopina za pranje koja sadrži inertni protein.

BLV antigen za enzimski imunosorbentni test (ELISA) pripremljen iz tečnosti kulture VLV-inficirane ćelijske kulture slezine jagnjadi (FLS) ili bubrega embriona jagnjadi (FLK) koja sadrži komponente virusa GP 51 i p 24, razrijeđenu u karbonatnom puferskom rastvoru.

Kontrola seruma pozitivna, razrijeđena u rastvaraču.

Kontrolni serum negativ, koji je mješavina od najmanje 10 negativnih goveđih seruma, razrijeđenih u rastvaraču.

Konjugat - antitijela protiv goveđih imunoglobulina, označena peroksidazom ili drugim enzimom, razrijeđena u rastvaraču.

Testirajte serum iz goveđe krvi.

supstrat za enzimsku reakciju.

2.5.2. Sprovođenje istraživanja

0,05 ili 0,1 ili 0,2 ml rastvora antigena dodaje se u jažice mikrotitarske ploče (panela). Ploča se zatvori i inkubira 18 sati u vlažnoj komori na temperaturi od plus 4 °C.

Nakon toga, ploča se četiri puta ispere fiziološkom otopinom fosfatnog pufera tako da se jažice potpuno popune, inkubira se 3 minute, a zatim se otopina pažljivo ukloni iz jažica.

Pripremite početna razrjeđenja test seruma.

Test serumi u početnom razrjeđenju dodaju se paralelno u dvije susjedne jažice mikrotitarske ploče u količini od 0,05 ili 0,1 ili 0,2 cm3 Na isti način se u svaku ploču dodaju razrijeđeni kontrolni pozitivni i negativni serumi. Na svakoj ploči ostaviti nekoliko jažica napunjenih samo rastvaračem (bez seruma). Broj jažica otapala na ploči je određen dizajnom fotometra i koristi se za postavljanje nulte pozicije skale instrumenta.

Ploča se zatvori i inkubira na temperaturi od 20 do 37 °C u vlažnoj komori 60-120 minuta.

U jažice se doda 0,05 ili 0,1 ili 0,2 ml rastvora konjugata, ploče se zatvaraju i inkubiraju na temperaturi od 20 do 37 °C u vlažnoj komori 60-120 minuta.

Operite ploču četiri puta rastvorom za pranje.

0,05 ili 0,1 ili 0,2 cm rastvora supstrata se dodaje u svaku jažicu i inkubira na temperaturi od 20 do 37 °C 50-60 minuta. Ako je potrebno, u jažice se dodaje otopina karbonatnog pufera kako bi se zaustavila reakcija, a optička gustoća u svakoj jažici se mjeri na fotometru na talasnoj dužini karakterističnoj za odabrani supstrat.

2.5.3. Obrada rezultata

Rezultat se smatra pozitivnim ako je optička gustina ispitnog uzorka u oba bunara dva ili više puta veća od aritmetičke sredine optičke gustoće za negativni uzorak u odgovarajućem razblaženju.

2.5-2.5.3. (Dodatno uvedeno, Rev. N 1).

Elektronski tekst dokumenta
pripremio CJSC "Kodeks" i provjerio u odnosu na:
službena publikacija
M.: Izdavačka kuća standarda, 1982

Revizija dokumenta, uzimajući u obzir
izmjene i dopune
pripremio CJSC "Kodeks"

Podijeli: