Glavne klase antigena. Suvremene metode laboratorijske dijagnostike autoimunih bolesti Vezanje antigena na antigen-specifična protutijela ili T-stanice
1673 0
Nekoliko osnovnih kemijskih obitelji mogu biti antigeni.
- Ugljikohidrati (polisaharidi). Polisaharidi su imunogeni samo kada su povezani s proteinskim nosačima. Na primjer, polisaharidi koji su dio složenijih molekula (glikoproteini) izazvat će imunološki odgovor, od kojih su neki usmjereni izravno na polisaharidnu komponentu molekule. Imunološki odgovor, uglavnom predstavljen antitijelima, može se inducirati protiv mnogih vrsta polisaharidnih molekula, kao što su komponente mikroorganizama i eukariotskih stanica. Izvrstan primjer antigenosti polisaharida je imunološki odgovor povezan s ABO krvnim grupama. Polisaharidi su u ovom slučaju na površini eritrocita.
- Lipidi. Lipidi su rijetko imunogeni, ali imunološki odgovor na njih može se izazvati ako su lipidi konjugirani s proteinskim nosačima. Stoga se lipidi mogu smatrati haptenima. Također su zabilježeni imunološki odgovori na glikolipide i sfingolipide.
- Nukleinske kiseline. Nukleinske kiseline su same po sebi slabi imunogeni, ali postaju imunogene kada se vežu na proteine nosače. Nativna spiralna DNA obično nije imunogena u životinja. Međutim, u mnogim slučajevima primijećeni su imunološki odgovori na nukleinske kiseline. Jedan važan primjer u kliničkoj medicini je pojava anti-DNA protutijela u bolesnika sa sistemskim eritemskim lupusom.
- Vjeverice. Gotovo svi proteini su imunogeni. Dakle, najčešće se imunološki odgovor razvija na proteine. Štoviše, što je veća razina kompleksnosti proteina, to je jači imunološki odgovor na taj protein. Veličina i složenost proteinskih molekula određuju prisutnost višestrukih epitopa.
Vezanje antigena na antigen-specifična antitijela ili T stanice
Vezanje antigena za protutijela, interakcija antigena s B i T stanicama i naknadni događaji. U ovoj fazi važno je samo naglasiti da kovalentne veze nisu uključene u vezanje antigena na antitijelo ili T-stanične receptore. Nekovalentna veza može uključivati elektrostatske interakcije, hidrofobne interakcije, vodikove veze i van der Waalsove sile.Budući da su te sile međudjelovanja relativno slabe, spajanje između antigena i njegovog komplementarnog mjesta na receptoru antigena mora se dogoditi na dovoljno velikom području da se saberu sve moguće interakcije. Ovo stanje je temelj za iznimnu specifičnost opaženih imunoloških interakcija.
Križna reaktivnost
Budući da makromolekularni antigeni sadrže nekoliko međusobno odvojenih epitopa, neke od tih molekula mogu se mijenjati bez potpunog mijenjanja njihove imunogenetske i antigene strukture. Ovo ima važne implikacije kod imunizacije protiv visoko patogenih mikroorganizama ili visoko toksičnih spojeva. Doista, nije mudro cijepiti se patogenim toksinom. Međutim, moguće je uništiti biološku aktivnost takvog toksina i niza drugih toksina (npr. bakterijskih toksina ili zmijskog otrova) uz održavanje njihove imunogenosti.Toksin modificiran do te mjere da više nije toksičan, ali još uvijek zadržava neke imunokemijske karakteristike naziva se toksoid. Dakle, možemo reći da toksoid imunološki unakrsno reagira s toksinom. Sukladno tome, moguće je, imuniziranjem pojedinca s toksoidom, izazvati imunološki odgovor na određene epitope koji su sačuvani na toksoidu u istom obliku kao na toksinu, budući da nisu uništeni tijekom modifikacije.
Iako se molekule toksina i toksoida razlikuju u mnogim fizikalno-kemijskim i biološke karakteristike, oni su imunološki unakrsno reaktivni. Dovoljan broj sličnih epitopa omogućuje induciranje imunološkog odgovora na toksoid i pridonosi učinkovitoj zaštiti od samog toksina. Imunološka reakcija u kojoj komponente imunološkog sustava, bilo stanice ili protutijela, reagiraju s dvije molekule koje imaju iste epitope, ali se razlikuju na druge načine, naziva se križna reakcija.
Kada su dva spoja imunološki unakrsno reaktivna, oni dijele jedan ili više epitopa, a imunološki odgovor na jedan od spojeva prepoznat će jedan ili više istih epitopa na drugom spoju i uključiti ga u reakciju. Drugi oblik unakrsne reaktivnosti javlja se kada se antitijela ili stanice specifične za jedan epitop vežu, obično slabije, za drugi epitop koji nije potpuno identičan, ali strukturom sliči prvom epitopu.
Pojmovi "homologni" i "heterologni" koriste se da naznače da je antigen korišten za imunizaciju drugačiji od onoga protiv kojeg će proizvedene imunološke komponente kasnije reagirati. Pojam "homologan" znači da su antigen i imunogen isti.
Izraz "heterologno" označava da se tvar koja se koristi za induciranje imunološkog odgovora razlikuje od supstance koja se kasnije koristi za reakciju s produktima induciranog odgovora. U potonjem slučaju, heterologni antigen može, ali i ne mora reagirati s imunološkim komponentama. Kada dođe do reakcije, može se zaključiti da heterologni i homologni antigeni pokazuju imunološku unakrsnu reaktivnost.
Iako je specifičnost glavni kriterij u imunologiji, imunološka križna reaktivnost javlja se na mnogim razinama. To ne znači da je uloga imunološke specifičnosti smanjena, već ukazuje da spojevi s unakrsnom reaktivnošću imaju iste antigene determinante.
U slučajevima unakrsne reaktivnosti, antigene determinante unakrsno reaktivnih tvari mogu imati identične kemijske strukture ili se sastojati od identičnih, ali ne identičnih, fizikalno-kemijskih struktura. U gornjem primjeru, toksin i njegov odgovarajući toksoid predstavljaju dvije molekule: toksin je izvorna molekula, a toksoid je modificirana molekula koja je unakrsno reaktivna s izvornom (nativnom) molekulom.
Postoje i drugi primjeri imunološke unakrsne reaktivnosti, u kojoj dvije tvari koje je imaju nisu povezane jedna s drugom osim što dijele jedan ili više epitopa, točnije jedno ili više mjesta koja imaju iste trodimenzionalne karakteristike. Ove tvari se klasificiraju kao heterofilni antigeni. Na primjer, antigeni ljudske krvne grupe A reagiraju s antiserumom pripremljenim protiv polisaharidne (tip XIV) pneumokokne kapsule. Na isti način, antigeni ljudske krvne grupe B reagiraju s antitijelima na određene sojeve Escherichie coli. U ovim primjerima unakrsne reaktivnosti, mikrobni antigeni se nazivaju heterofilni antigeni (u odnosu na antigene krvnih grupa).
Adjuvansi
Kako bi se poboljšao imunološki odgovor na prezentirani antigen, često se koriste različiti aditivi i pomoćne tvari. Adjuvans (od latinskog adjuvare - pomoći) je tvar koja pomiješana s imunogenom pojačava imunološki odgovor protiv tog imunogena. Važno je razlikovati nosač haptena od adjuvansa. Hapten postaje imunogen nakon kovalentne konjugacije s nosačem; ne može biti imunogen kada se pomiješa s adjuvansom. Stoga adjuvans pojačava imunološki odgovor na imunogene. ali ne daje imunogenost haptenima.Adjuvansi se koriste za poboljšanje imunološkog odgovora na antigene više od 70 godina. Trenutačno raste interes za pronalaženje novih adjuvansa za upotrebu u cijepljenju, budući da mnogi kandidati za cjepivo nisu dovoljno imunogeni. Ovo je posebno važno za peptidna cjepiva.
Mehanizam djelovanja adjuvansa uključuje: 1) povećanje biološkog i imunološkog poluživota antigena cjepiva; 2) povećana proizvodnja lokalnih upalnih citokina; 3) poboljšanje dostave, obrade antigena i njihove prezentacije (prezentacije) APC-om, posebno dendritskim stanicama. Empirijski je utvrđeno da su pomoćna sredstva koja sadrže mikrobne komponente (npr. ekstrakti mikobakterija) najbolja. Patogene komponente uzrokuju da makrofagi i dendritične stanice eksprimiraju kostimulatorne molekule i izlučuju citokine.
Nedavno je pokazano da takva indukcija mikrobnim komponentama uključuje molekule koje prepoznaju strukture patogenih mikroorganizama (npr. TLR 2) koje eksprimiraju te stanice. Dakle, vezanje mikrobnih komponenti na TLR daje stanicama signal za ekspresiju kostimulacijskih molekula i lučenje citokina.
Iako su mnogi različiti adjuvansi testirani u pokusima na životinjama (Tablica 3.2) i u pokusima na ljudima, samo se jedan počeo koristiti za rutinsko cijepljenje. Trenutno su jedini adjuvansi odobreni za upotrebu u zaštićenim ljudskim cjepivima u SAD-u aluminij hidrat i aluminij fosfat.
kao komponenta anorganska sol aluminijev ion se veže na proteine, uzrokujući njihovo taloženje, što pojačava upalni odgovor, što nespecifično povećava imunogenost antigena. Nakon injekcije, istaloženi antigen se oslobađa s mjesta injekcije sporije nego što je normalno. Štoviše, ako se veličina antigena poveća kao rezultat taloženja, to će povećati vjerojatnost da će makromolekula biti podvrgnuta fagocitozi.
U pokusima na životinjama koriste se mnogi adjuvansi. Jedan od često korištenih pomoćnih sredstava je Freundov potpuni adjuvans (FCA), koji se sastoji od ubijene Mycobacterium tuberculosis ili M.Butyricum, suspendirane u ulju. Naknadno se od njih priprema emulzija s Vodena otopina antigen. Emulzija vode u ulju koja sadrži adjuvans i antigen omogućuje polagano i postupno otpuštanje antigena, produžujući izloženost imunogena primatelju. Drugi mikroorganizmi koji se koriste kao adjuvansi su Bacillus Calmette-Guerin (BCG) (oslabljen Mycobacterium), Corynebacterium parvum i Bordetella pertusis.
Zapravo, mnogi od ovih adjuvansa iskorištavaju sposobnost molekula koje eksprimiraju mikrobi da aktiviraju imunološke stanice. Takve molekule uključuju lipopolisaharide (LPS), bakterijsku DNA koja sadrži nemetilirane CpG dinukleotidne ponavljanja i bakterijske proteine toplinskog šoka. Mnogi od ovih mikrobnih pomoćnih sredstava vežu receptore koji prepoznaju strukture patogena kao što su TLR. Vezanje ovih receptora, koje izražavaju mnoge vrste stanica urođenog imunološkog sustava, potiče stimulaciju adaptivnog odgovora B i T limfocita. Na primjer, dendritične stanice su važni APC-ovi kroz koje
Tablica 3.2. Poznati adjuvansi i njihov mehanizam djelovanja djelovanje mikrobnih adjuvansa. Oni odgovaraju izlučivanjem citokina i ekspresijom kostimulacijskih molekula, koje zauzvrat stimuliraju aktivaciju i diferencijaciju antigen-specifičnih T stanica.
| Pomoćno sredstvo | Spoj | Mehanizam djelovanja |
| Aluminijev hidroksid ili fosfat (stipsa) | Gel aluminij hidroksida | |
| Aluminij s dipeptidom izoliranim iz mikobakterija | Alumina hidratni gel s muramil dipeptidom | |
| Aluminij s Bordetella pertusis | Smrekov aluminijev oksid hidrat s mrtvom Bordetella pertusis | Povećan unos APC antigena; usporavanje oslobađanja antigena; indukcija kostimulacijskih molekula na APC |
| Potpuni Freundov adjuvans | Vodeno-uljna emulzija s ubijenim mikobakterijama | Povećan unos APC antigena; usporavanje oslobađanja antigena; indukcija kostimulacijskih molekula na APC |
| Nepotpuni Freundov adjuvans | Vodeno-uljna emulzija | Povećan unos APC antigena; odgođeno otpuštanje antigena |
| Imunostimulirajući kompleksi | Otvorene stanične strukture koje sadrže kolesterol i mješavinu saponina | Otpuštanje antigena u citosol; omogućuju induciranje citotoksičnih odgovora T-stanica |
R. Koiko, D. Sunshine, E. Benjamini
Imunološki odgovor organizma: definicija, uvjeti razvoja. Antigeni: struktura, svojstva, klasifikacija. T-ovisni i T-neovisni antigeni. Superantigeni.
imunološki odgovor- ovo je složena višekomponentna kooperativna reakcija IS tijela, izazvana antigenom i usmjerena na njegovu eliminaciju. Fenomen imunološkog odgovora je u osnovi imuniteta.
Imunološki odgovor ovisi o: 1 Antigenu - svojstva, sastav, molekulska masa, doza, učestalost kontakta, trajanje kontakta; 2 Stanja tijela - imunološka reaktivnost; 3 Uvjeti okoliša.
Imunološki odgovor karakterizira: 1 Klonalnost - postoje klonovi T- i B-limfocita koji su specifični za određene epitope (njihova ukupnost naziva se determinantna skupina); 2 Specifičnost; 3 Raznolikost AT i TCR; 4 Stvaranje u stanicama i molekulama efektora i memorijskih stanica 5 Specifični mehanizmi djelovanja su kompatibilni s nespecifičnim;6 Kontrola genoma;7 Podjela na prirodne i umjetne;
Komponente imunološkog odgovora: 1 Antigeni; 2 Stanice koje obrađuju antigen i predstavljaju antigen (imakrofagi); 3 Stanice koje prepoznaju antigen (B- i T-limfociti i njihove subpopulacije), 4 Molekule koje prepoznaju antigen (VCR, glavne molekule histokompatibilnog kompleksa); 5 Citokini - hematopoetski, rast, regulatorni, receptor.
imunološki odgovor razvija se u perifernom limfne organe. Makrofagi, T- i B-limfociti, fibroblasti i retikularne stanice uključeni su u AI. razlikovati humoralni, stanični mješoviti imunološki odgovor, čiji se razvoj odvija u nekoliko faza.
GMO(stvaranje antitijela) - Osnova humoralnog imunološkog odgovora je aktivacija B-limfocita i njihova diferencijacija u plazma stanice (plazmocite), koje sintetiziraju antitijela (imunoglobuline) specifične za antigen koji je izazvao imunološki odgovor.
KIO- složena kooperativna reakcija tijela, inducirana antigenom i provedena kroz T-sustav imuniteta u suradnji s APC-om, koja završava stvaranjem antigen-specifičnih T-limfocita koji obavljaju regulatorne i efektorske funkcije. Zadaci: razvoj i regulacija humoralnog i staničnog odgovora, eliminacija antigena iz organizma.
Makrofagi sudjeluju u prirodnoj i specifičnoj umjetnoj inteligenciji. Zreli makrofagi imaju AG receptore (Fc), C3b receptore, MHC antigene. U ranoj fazi IE, makrofagi obavljaju funkciju prezentiranja AG - kao rezultat fagocitoze, AG se cijepa, a njegov epitop se prenosi na membranu u kombinaciji s MHC2. U završnoj fazi IE, makrofag se aktivira limfokinima.
B-limfociti- prepoznaju AH, sudjeluju u GMO-u, imaju receptore za eritrocite miša, Fc, C3b, za MHC AG. Nemaju specifične receptore za prepoznavanje antigena. Receptor za prepoznavanje antigena je molekula imunoglobulina.
T-limfociti- podijeljeni su u četiri glavne subpopulacije - T-pomagači, T-supresori, T-ubice i T-efektori. Svi oni imaju receptore za ovčje eritrocite, za imunoglobuline, proteine sustava komplementa (ali nemaju receptore za C3b), za interferone, za antigene, imaju antigene MHC1 i MHC2. Subpopulacije T-limfocita su heterogene, pa se T-pomagači dijele u dvije skupine - T-pomagači 1 i T-pomagači 2. Prvi su CIO aktivatori, a drugi su GMO. T-limfociti osiguravaju stanični, antivirusni, antibakterijski imunitet, HNL.
Antigeni- genetski strane tvari koje unesene u organizam mogu potaknuti imunološki odgovor (stanični odgovor, stvaranje protutijela, alergija, tolerancija) i specifično reagirati s nastalim protutijelima kako in vivo tako i in vitro.
Strukturni i funkcionalni dijelovi molekule Ag:
1. Stabiliziranje (nosač)- 97-99% mase: makromolekule (proteini), stanice (bilo koje), u umjetnim uvjetima mogu postojati korpuskularne čestice. Svojstva nosača: visoka molekularna težina, složena struktura. Funkcija - indukcija imunološkog odgovora.
2. Determinantna skupina (epitop): oligosaharidi , oligopeptidi , NH2 skupina . Svojstva: niska molekularna težina , kruta struktura , slaba metabolička aktivnost , stranac tijelu . Funkcija – specifičnost protutijela i efektora T-limfocita u imunološkom odgovoru.
Epitopi AG: površinski, skriveni (konformacijski), T-stanični (prepoznaju se TCR), B-stanični (prepoznaju se RCR). Epitopična gustoća je broj u 1 molekuli Ag.
AG svojstva:
Imunogenost je sposobnost induciranja AI u tijelu.
Antigenost je sposobnost specifične interakcije.
puna(puno) Ag ima dva svojstva. Hapten(nepotpuno) – Ag, nije imunogeno.
Klasifikacija:
1. Po imunogenosti: snažna(primjenjuje se velika doza, ali su pokazatelji imuniteta niski), slab(uzrokuje visoku razinu imuniteta u malim dozama), superantigeni (Mikrobni antigeni u interakciji s MHC klase II APC i TKR molekulama T-limfocita, izvan antigen-veznog jaza, tj. ne u aktivnih centara. Oni se spajaju, takoreći, na strani molekula MHC II i TCR. Blokiraju mogući specifični imunološki odgovor i uzrokuju poliklonsku aktivaciju limfocita, oslobađanje citokina i potom smrt T-limfocita sa simptomima imunodeficijencije).
2. Po stranosti za tijelo - nositelj Ag: hetero- (kseno-) Ag (za ljude to je Ag bakterija, biljaka, virusa, životinja), homo- (alo-) Ag je Ag drugih jedinki vrste, Auto-Ag: kasne bjelančevine (sperma, mlijeko), tvari "barijernih" organa, vlastite stanice s modificiranom površinom, embrionalno tkivo.
3. Ovisno o vrsti AI: imunogeni, alergeni, tolerogeni, transplantacijski.
4. Prema povezanosti imunološkog odgovora s timusom: T-ovisni, T-neovisni.
Antigeni mikroorganizama. Antigenska struktura bakterija. Tipični, vrsta, grupni antigeni. zaštitni antigeni. Križno reagirajući antigeni, što znači.
Bakterijski antigeni:
- Specifično za skupinu (dostupno u različitim vrstama istog roda ili obitelji)
- Specifično za vrstu (kod predstavnika jedne vrste)
- Specifično za tip (odrediti serološku varijantu unutar jedne vrste)
- Specifično za soj
- Stadiospecifično
- Križno reaktivni antigeni (slični, isti kod ljudi i mikroba)
Po lokalizaciji:
OAS– somatski (LPS stanične stijenke)
N-Ag- bičevi (proteinska priroda)
K-Ag– kapsularni (PS, proteini, polipeptidi)
Ag Piley(fimbrijalni)
Citoplazmatski Ag(membrana, CPU)
Egzotoksini(proteini)
Ektoenzimi
OAS- lipopolisaharid stanične stijenke gram-negativnih bakterija. Sastoji se od polisaharidnog lanca i lipida A. Polisaharid je termostabilan, kemijski stabilan, slabe imunogenosti. Lipid A - sadrži glukozamin i masne kiseline, ima snažno adjuvantno, nespecifično imunostimulirajuće djelovanje i toksičnost. Općenito, LPS je endotoksin. Već u malim dozama uzrokuje vrućicu zbog aktivacije makrofaga i otpuštanja IL1, TNF i drugih citokina, degranulocitnu degranulaciju i agregaciju trombocita.
H-AG je dio bakterijskih flagela, njegova osnova je protein flagelin. Termolabilan.
K-AG je heterogena skupina površinskih, kapsularnih AG bakterija. Nalaze se u kapsuli. Sadrže uglavnom kisele polisaharide, koji uključuju galakturonsku, glukuronsku kiselinu.
Zaštitni antigeni- za dobivanje cjepiva koriste se epitopi egzogenih antigena (mikroba), antitijela protiv kojih imaju najizraženija zaštitna svojstva, što štiti organizam od ponovne infekcije. Pročišćeni zaštitni antigeni mogu biti "idealni" pripravci cjepiva.
Križnoreaktivne antigene determinante pronađen u MO i ljudima/životinjama. Mikrobi razne vrste a kod ljudi su česti, po strukturi slični AH. Ti se fenomeni nazivaju antigenska mimikrija. Često križno reaktivni antigeni odražavaju filogenetsku sličnost ovih predstavnika, ponekad su rezultat slučajne sličnosti u konformaciji i nabojima - AG molekulama. Na primjer, Forsmanov AG nalazi se u eritrocitima ovna, salmoneli i zamorcima. Hemolitički streptokoki skupine A sadrže antigene koji međusobno reagiraju (osobito M-protein) koji su zajednički antigenima endokarda i glomerula ljudskih bubrega. Takvi bakterijski antigeni uzrokuju stvaranje protutijela koja unakrsno reagiraju s ljudskim stanicama, što dovodi do razvoja reumatizma i poststreptokoknog glomerulonefritisa. Uzročnik sifilisa ima fosfolipide slične strukture onima koji se nalaze u srcu životinja i ljudi. Stoga se kardiolipinski antigen srca životinja koristi za otkrivanje antitijela na spirohete kod bolesnih ljudi (Wassermannova reakcija).
Regionalni centar za prevenciju i suzbijanje AIDS-a i drugih zaraznih bolesti
Zavod za kliničku laboratorijska dijagnostika FUV Krasnojarske državne medicinske akademije
"ODOBRITI"
Voditelj Odjela za zdravstvo
Uprava Krasnojarskog kraja
Schneider I.A.
"______" __________ 1999
SUVREMENE METODE LABORATORIJSKE DIJAGNOSTIKE AUTOIMUNIH BOLESTI
Krasnojarsk - 1999
Drugo izdanje s izmjenama i dopunama 2002
^ Olhovski Igor Aleksejevič -pristupnik med. znanosti, glavar. laboratorijski i dijagnostički odjel Regionalnog centra za AIDS, izvanredni profesor odjela KLD FUV KrasGMA;
Izyurova Olga Yurievna- asistent Katedre KLD FUV KrasGMA.
Protopopova Natalija Borisovna- asistent Katedre KLD FUV KrasGMA;
^ Shevchenko Nailya Minvaleevna - kandidat biol. znanosti, glavar. Odjel za AIDS i AIDS markerske infekcije Regionalnog centra za AIDS;
______________________________________________________
Potreba za razvojem smjernica za laboratorijsku dijagnostiku autoimunih bolesti (AID), osobito u ranim stadijima bolesti, uvjetovana je širokom rasprostranjenošću ove patologije i nezadovoljavajućim metodama liječenja.
U preporukama se ukratko navode podaci o etiologiji, glavnim karikama u patogenezi AID-a te se daje klasifikacija AID-a. Također su ukratko prikazani podaci o kliničkim manifestacijama niza difuznih lezija vezivnog tkiva.
Glavni fokus preporuka je na metodama serodijagnostike AIDS-a. Uspješno sastavljene tablice jasno pokazuju prednosti određivanja autoantitijela na pojedine antigene za rješavanje problema verifikacije dijagnoze, predviđanja tijeka bolesti i identifikacije njezinih kliničkih i imunoloških podtipova. Kratko su i pristupačno prikazane neke metode određivanja seroloških biljega AID-a.
^ Profesor Katedre za kliničku
imunološki NMI,
UVOD:
Autoimune bolesti pogađaju 5-7% svjetske populacije, razvijaju se 3-10 puta češće kod žena nego kod muškaraca i smatraju se najčešćim zajednički uzrok kronična ljudska patologija. Postoji više od 40 nozoloških oblika koji se klasificiraju kao ljudske autoimune bolesti.
Trenutno se problem autoimunizacije smatra općim biološkim, usko povezan s problemima kao što su imunološki nedostaci i onkogeneza, a autoimuni procesi se smatraju ne samo patološkim, već i važnom karikom u homeostatskim reakcijama tijela. Opće je poznato da uloga imunološkog sustava nije samo zaštita organizma od uzročnika zaraznih bolesti i antitumorska zaštita, već i osiguranje procesa proliferacije i diferencijacije različitih tkiva i organa, eliminacija i iskorištavanje odumrlih tkivnih struktura. .
U suvremena književnost Uobičajeno je razlikovati pojmove "autoimuni procesi (autoimunizacija)" i "autoimune bolesti".
^ 1. AUTOIMUNI PROCESI
Autoimuni procesi su procesi reakcije imunološkog sustava na normalne (nepromijenjene) antigene vlastitih tkiva – autoantigene.
Niz autora smatra da modificirane antigene vlastitih tkiva ne treba svrstavati u prave autoantigene. Njihova modifikacija može biti rezultat bioloških, kemijskih ili fizičkih čimbenika. Netočno je klasificirati kao prave autoantigene i integrirane (na primjer, zbog integracije virusnog i staničnog genoma) ili složene antigene (zbog kombinacije egzo- ili endogenog haptena s autoantigenom). Budući da su modificirani, integrirani i složeni antigeni zapravo stranci tijelu. Istodobno, pod određenim uvjetima, oni mogu postati polazište za patološke autoimune promjene u tijelu.
Poznate činjenice omogućuju nam da sve autoimune procese podijelimo na homeostatske (fiziološke) i patološke (Shema 1). Prva skupina nema patogenetski značaj u razvoju kronične upale. Titar normalnih autoantitijela na DNA, citoskeletne proteine, hormone, medijatore i njihove receptore raste tijekom stresa, trudnoće, starenja te raznih bakterijskih i virusnih infekcija. "Normalna" autoantitijela ne uzrokuju citotoksične reakcije i vjerojatno će biti uključena u provedbu regulatornih i "sanitarnih" funkcija.
^
Shema 1. Klasifikacija autoimunih procesa
 | Autoimuni procesi | |||
| G  homeostatski | Patološki |
|||
| Sanitarni | Regulatorni | |||
| Autoimune bolesti | Bolesti s autoimunim poremećajima |
|||
| imunološki sustav | Imuno-endokrini | |||
^ 2. PODACI O PATOGENEZI:
Patološki autoimuni procesi razvijaju se na temelju fizioloških i nisu fundamentalno nove reakcije. Očigledno, neadekvatne aktivnosti "sanitarnih" autoimuni procesi uzrokovane nespecifičnim bolestima organa kao što su SLE, polimiozitis, primarna bilijarna ciroza itd., kao i sekundarne autoimune lezije kod opeklinske bolesti, postinfarktnog sindroma itd. Regulacijski autoimuni procesi izvan kontrole očito dovode do razvoja autoimunih bolesti specifičnih za organe: autoimune hemocitopenije, endokrinopatije itd.
Glavne vrste autoimunih procesa mogu se povezati s:
odgovor na autoantigene na koje ne postoji prirodna tolerancija (slaba ekspresija, nedostupnost limfocitima ili nedostatak njihove prezentacije Ja+ A-stanicama;
zaobilaženje postojeće samotolerancije suradnjom T-pomagača, reagiranjem na "strano", s B-stanicama, reagiranjem na autoantigene;
istinsko ukidanje tolerancije na vlastite antigene
Citoliza ovisna o komplementu;
Indukcija stanične citotoksičnosti ovisne o antitijelima;
Interakcija sa staničnim receptorima za prirodne ligande (aktivacija ili blokada djelovanja endogenih regulatora);
Promjene u funkcionalnoj aktivnosti stanica različitih organa i tkiva;
Indukcija apoptoze (programirana stanična smrt);
Imunokompleksne reakcije (poremećeno čišćenje i taloženje kompleksa u tkivima, prvenstveno u krvnim sudovima mikrocirkulacije).
Postoji niz koncepata mehanizma razvoja patoloških autoimunih procesa, u kojima do izražaja dolaze promjene ili na ciljnim stanicama (organima) ili na primarne promjene u samom imunološkom sustavu.
Zagovornici prve skupine koncepata veliku važnost pridaju pretjeranom povećanju koncentracije autoantigena koji cirkuliraju u krvi i nalaze se na staničnoj membrani, kao i razotkrivanju intracelularnih antigena. Pretpostavlja se da važnu ulogu igra gubitak tolerancije na antigene tkiva "izvan barijere": antigene mijelina živčanog sustava, prednje komore oka itd. Značajnu ulogu u patogenezi sistemskog lupusa eritematozusa (SLE) imaju poremećaji u eliminaciji autoantigena i iskorištavanju imunoloških kompleksa od strane makrofagnog sustava. Raspravlja se o ulozi poremećaja ekspresije autoantigena stanične membrane u patogenezi autoimunih bolesti. Štitnjača, dijabetes melitus tipa 1, primarna bilijarna ciroza. Ciljne stanice u ovim bolestima nose antigene klase II HLA sustava na membrani, njihova ekspresija raste pod utjecajem virusa, pa su te stanice sposobne prezentirati antigen bez sudjelovanja makrofaga. Sve više potvrda nalazi koncept križno reagirajućih antigena (tablica 1).
^
Tablica 1. Križno reaktivni antigeni
| Heteroantigeni | Autoantigeni | Kliničke manifestacije |
| - hemolitički streptokok grupe A | Subsarkolemma kardiomiocita | Reumatizam |
| - hemolitički streptokok A 12 | bubrežni glomerul | Glomerulonefritis |
| Antigeni Escherichia coli O14, O86 itd. | Intestinalni epitel, antigeni CNS-a | Nespecifični ulcerozni kolitis |
| Antigeni Yersinia enterocolitica Antigeni Ldu upala pluća | Epitel štitnjače Skeletni mišić acetilkolinski receptor | miastenija graves |
| Meningokokni antigeni grupe B Mycoplasma pneumoniae Antigeni Trypanosoma cruze | CNS antigeni | Encefalitis |
| Moždano tkivo životinja | CNS antigeni | Encefalitis nakon cijepljenja |
Brojni patogeni mikroorganizmi, kao što su mikoplazme, hemolitički streptokok, stafilokok, neki virusi sposobni su lučiti tzv. superantigene - imunogene proteine koji se mogu vezati bez prethodnog hvatanja od strane makrofaga s molekulama klase HLA 1 ili 2 i stimulirati "zabranjene" autoreaktivne klonovi T-limfocita.
Ne manje se pridaje disfunkciji samog imunološkog sustava, s pretjeranom reakcijom na auto- i unakrsno reagirajuće antigene. Izuzetno mjesto pripada konceptu F. Burneta, koji dodjeljuje ključnu ulogu mutacijama limfocita s kršenjem eliminacije nastalih autoagresivnih klonova. Trenutno se autoimune bolesti ne smatraju hiperfunkcijom imunološkog sustava, već njegovom disfunkcijom povezanom s nedostatkom regulatornih mehanizama, tj. kao vrsta imunološke deficijencije. Genetski uvjetovan visok i nizak imunološki odgovor na određene antigene je važan. Niskim odgovorom na jedan antigen, a visokim odgovorom na druge, stvaraju se uvjeti za perzistenciju mikroorganizama u tkivima, pojavu složenih i modificiranih antigena te iscrpljivanje supresorskih mehanizama.
Imunokompetentne stanice mogu postati meta virusnog napada. Rezultat je kršenje njihove funkcionalne aktivnosti, citotoksični učinak ili poliklonska aktivacija limfocita (na primjer: kada su zaraženi Epstein-Barr virusom), što dovodi do kršenja imunoregulacije i pojave viška autoantitijela.
Važnost se pridaje poremećajima u sustavu regulatornih T-limfocita, posebice apsolutnom ili relativnom nedostatku T-supresora. U tom slučaju uzrok disfunkcije sustava regulacijskih T-limfocita mogu biti prirođeni ili stečeni poremećaji timusa.^ 3. AUTOIMUNE BOLESTI
Bolesti u čijoj patogenezi vodeću ulogu imaju patološki autoimuni procesi definiraju se kao autoimune bolesti. Općenito, razvoj autoimunih bolesti uključuje tri glavne skupine čimbenika: predisponirajući, inicijacijski i doprinoseći (Tablica 2).
Među predisponirajućim čimbenicima primarnu važnost imaju genetske značajke (tablica 3). S izuzetkom ankilozantnog spondilitisa i srodnih stanja povezanih s nositeljstvom HLA-B27, sve druge autoimune bolesti povezane su s određenim haplotipovima HLA klase 2 ili molekulama glavnog histokompatibilnog kompleksa klase 3.
^
Tablica 2. Patogeneza autoimunih bolesti
Dakle, 80 - 90% bolesnika s reumatoidnim artritisom nosioci su HLA - DR1 ili jedne od varijanti HLA DR4 (DW4, DW14, DW15). Defekt u genu koji kontrolira sintezu C4 komponente komplementa nalazi se u 50-80% bolesnika sa SLE.
Tablica 3. Uloga genetskih čimbenika u razvoju autoimunih bolesti.
| Faktor | mehanizam predispozicije |
| Glavni geni kompleksa histokompatibilnosti | Selektivno vezanje autoantitijela; ekspanzija autoreaktivnih T stanica; defekti T stanica uključenih u antiinfektivni imunitet |
| Geni T-stanični receptori | Povećanje broja autoreaktivnih T stanica; smanjena sposobnost kontrole infekcije |
| Geni koji kodiraju procesiranje antigena | Nedovoljna ekspresija molekula koje sprječavaju perifernu anergiju; poremećena obrada vlastitih antigena |
| Geni komplementa | Poremećeno čišćenje imunoloških kompleksa |
| Geni povezani sa spolom | imunološki učinci spolnih hormona |
| Citokinski geni | Imunološki učinci citokina |
^ 4. KLASIFIKACIJA AUTOIMUNIH BOLESTI
Klasifikacija autoimunih bolesti još uvijek je vrlo težak i kontroverzan problem. Većina autora dijeli autoimune bolesti ovisno o prirodi autoantigena, mehanizmima autoimunizacije, stupnju dokaza njegove uloge u patogenezi bolesti. Uobičajeno je razlikovati bolesti čija je autoimuna priroda nedvojbena: SLE, reumatoidni artritis, autoimuna hemocitopenija, endokrinopatije, koagulopatija, niz bolesti središnjeg živčanog sustava i očiju, itd.); najvjerojatnije (primarna bilijarna ciroza, periarteritis nodosa, sklerodermija, polimiozitis itd.); samo pretpostaviti (dislipoproteinemija, epilepsija, shizofrenija, parkinsonizam itd.). Posebno se ističu bolesti receptora za antitijela (tireotoksikoza, dijabetes melitus tipa 2, miastenija gravis, multipla skleroza i dr.). Postoje autoimune bolesti s autoimunizacijom kao glavnim faktorom patogeneze (primarne) i bolesti sa sekundarnim autoimunim poremećajima. Glavna radna klasifikacija je podjela na organ-specifične i organ-nespecifične autoimune bolesti. Više detaljna klasifikacija(citirao Shirinsky V.S., 1997.) uključuje 5 klasa: A - E (shema 2).
Dosta velike poteškoće nastaju u diferencijalnoj dijagnozi ranih manifestacija glavnih, takozvanih "Velikih kolagenoza" - sistemskih bolesti vezivnog tkiva s uključivanjem različitih organa i sustava u patološki proces. Ove bolesti uključuju: sistemski eritemski lupus, progresivnu sistemsku sklerozu, reumatoidni artritis, Sjögrenov sindrom i skupinu mješovitih bolesti vezivnog tkiva.
^ Shema 2. Klasifikacija autoimunih bolesti.
Shema 2. Klasifikacija autoimunih bolesti (Shirinsky V.S., 1997).
RAZRED: A(primarne autoimune bolesti sa i bez genetske predispozicije)
"Organ-specifičan" "Intermedijer" "Organ-nespecifičan" Autoimuni bolesti
krv
Hashimotov tiroiditis pemfigus, pemfigoid sistemski eritematozni lupus autoimuni hemolitički primarni miksedem primarna bilijarna ciroza reumatoidni artritis anemija
tireotoksikoza jetre dermatomiozitis autoimuna trombocitopenija
atrofični gastritis kronični aktivni hepatitis sistemska sklerodermija autoimuna neutropenija
adrenalitis Sjögrenov sindrom mješovita bolest Wegenerova granulomatoza
neki oblici ulceroznog kolitisa vezivnog tkiva primarna neplodnost celijakija enteropatija rekurentni polihondritis inzulin ovisan Goodlascherov sindrom
dijabetes tipa 1
varijante hiperlipoproteinemije
Miastenija gravis
RAZRED: B(sekundarne autoimune bolesti sa i bez genetske predispozicije)
Reumatizam, Chagasova bolest
Postinfarktni i postkardiotomijski sindrom
Autoimune reakcije na lijekove
Ankilozantni spondilitis
Endogeni uveitis
Dilatacijska kardiomiopatija
^ RAZRED: C(bolesti s genetskim defektima komplementa)
Angioedem
Sindromi slični lupusu
RAZRED: D(spora virusna infekcija)
Multipla skleroza
Reakcije nakon cijepljenja
RAZRED: E- kombinacija bolesti klasa A - D
^ 5. GLAVNE SUSTAVNE BOLESTI
Sistemski eritematozni lupus
Sistemski lupus erythematosus (SLE) multisistemska je bolest koja se javlja u pozadini brojnih imunoloških poremećaja - stvaranja autoantitijela, hipergamaglobulinemije, patologije supresorskih T-limfocita, smanjenja sadržaja serumskih komplementarnih proteina i povećanja razini CEC-a, za koje se vjeruje da igraju glavnu ulogu u patogenezi SLE-a.
S dovoljnom sigurnošću se može govoriti o poremećaju rada Fc-IgG i C3b-receptora odgovornih za fagocitozu CEC-a. Istodobno, nisu sva autoantitijela i imunološki kompleksi koji se pojavljuju u krvi SLE bolesnika ekvivalentni u smislu patogenosti. Neka autoantitijela uzrokuju patološke simptome zbog svoje antigene specifičnosti (za površinske antigene eritrocita ili faktore zgrušavanja). Djelovanje drugih je zbog izotipa imunoglobulina, sposobnosti fiksiranja komplementa, njihove avidnosti prema tkivima itd.
Nedvojbeno je sudjelovanje spolnih hormona u patogenezi SLE. Estrogeni pospješuju, a androgeni inhibiraju stvaranje autoantitijela. U bolesnika sa SLE-om primjećuje se povećana proizvodnja 16-alfahidroksiestrona, što uzrokuje produljenu stimulaciju estrogena.
Kliničke manifestacije bolesti ovise o tome koja je populacija autoantitijela i CIC prisutna u ovaj trenutak kod pojedinog bolesnika, koji organi, stanice ili stanični produkti im služe kao mete, kao i sposobnost bolesnika da ispravi te poremećaje. Oko 72% bolesnika preživi više od 10 godina od početka bolesti. Glavni uzroci invaliditeta i smrti su infektivne komplikacije i zatajenje bubrega.
Glavni laboratorijski kriteriji za dijagnozu i praćenje prikazani su u tablici 4:
| Dijagnostički testovi za dijagnozu i procjenu težine procesa | Testovi praćenja bolesti |
| Specifično: Anti dsDNA Anti-SmNespecifičanANA (najosjetljiviji) SR50, S3, S4 Izravni Coombsov test Lažna Wasermanova reakcija Antikardiolipinska antitijela Antitrombocitna antitijela Anti-limfocitna antitijela Antineuronska antitijela Hematokrit Analiza urina Kratinin u serumu Proteini akutne faze | ^
Anti dsDNA titarRazine komplementa Hematokrit Leukociti periferne krvi Trombociti u perifernoj krvi Analiza urina (mikroalbuminurija) Kreatinin u serumu * Za svakog bolesnika na temelju najkarakterističnijih klinički znakovi bolesti, treba uspostaviti individualni skup testova koji će se koristiti kao dodatni kriteriji evaluacije klinički tijek bolesti. |
Protutijela na Sm antigen su visoko specifična za SLE), ali njihova razina ne odražava težinu bolesti. Istodobno, lezije živčanog sustava i lupusne psihoze češće su klinički povezane s prisutnošću protutijela na Sm, ali u isto vrijeme karakteristično je relativno očuvanje funkcije bubrega. Antitijela na Sm otkrivaju se u 25-30% (RIF metoda) i 50-60% (ELISA metoda) bolesnika. Negativni rezultati testa na SM antitijela ne isključuju bolest. Koncentracija protutijela na Sm antigen ne mijenja se značajno tijekom terapije, pa stoga njihovo kvantitativno praćenje nema praktičnog smisla. Prisutnost protutijela na Sm antigen uključena je u kriterije za SLE koje je usvojila Američka reumatološka udruga.
Razina protutijela na nativnu (dvolančanu) DNA, za razliku od protutijela na Sm, odražava rizik i težinu lupusnog nefritisa i koristi se kao kriterij učinkovitosti terapije SLE. Dodatni laboratorijski kriterij je smanjenje razine komponenti komplementa C3 i C4, što također korelira s aktivnošću lupusnog nefritisa.
Otprilike 80% svih pacijenata sa SLE ima antitijela na histone. Vrlo često se ta protutijela nalaze u bolesnika s lupus erythematosusom izazvanim lijekovima (PLE). Međutim, u LC nema antitijela na nativnu DNA. Stoga, istovremeno određivanje protutijela na histone i dsDNA omogućuje diferencijalnu dijagnozu između SLE i LLE. Osim toga, protutijela na histone mogu se otkriti u bolesnika s primarnom bilijarnom cirozom, reumatoidnim artritisom i sklerodermijom.
Progresivna sistemska skleroza (Sistemska sklerodermija)
PSS je multisistemski poremećaj karakteriziran upalnim, vaskularnim i fibrozne promjene u koži (sklerodermija) i u raznim unutarnjim organima, osobito u gastrointestinalnom traktu, plućima, srcu i bubrezima. Priroda tečaja, stupanj prevalencije u tijelu, ozbiljnost manifestacije bolesti značajno variraju u različitim pacijentima. U nekim slučajevima mogu se pojaviti visceralne manifestacije bez vidljivih kožnih manifestacija.
Etiologija bolesti je nepoznata, uloga nasljedni faktori je dvosmislen. Ljudi obično obolijevaju u dobi od 30 do 40 godina, žene su 4 puta češće od muškaraca.
PSS je praćen poremećajem humoralne i stanične imunosti. u krvi bolesnika često se nalaze hipergamaglobulinemija i antinuklearna protutijela, protutijela na stanične membrane fibroblasta i na kolagen tipa 1 i 4.
Kliničke manifestacije obično (u 90% bolesnika) započinju Raynaudovim fenomenom - epizodičnom vazokonstrikcijom arterija i arteriola prstiju, stopala, ponekad i kože lica, koja se javlja kao posljedica hladnoće ili emocionalnog stresa. Zahvaćena područja kože prvo blijede, zatim postaju cijanotična, a zatim pocrvene. Prognoza bolesti određena je zahvaćenošću miokarda, plućnom hipertenzijom i zatajenjem bubrega.
Koegzistencija kalcifikacije kože, Raynaudovog fenomena, hipokinezije jednjaka, sklerodaktilije i teleangiektazije naziva se "GRB"- sindrom i procjenjuje se kao relativno benigna varijanta PSS-a.
Laboratorijski podaci za PSS ovise o stadiju i aktivnosti patološkog procesa, ESR je često povećan, hipergamaglobulinemija je zabilježena u 50% pacijenata, uglavnom zbog IgG, nizak titar reumatoidnog faktora otkriven je u 25%, ANA - u gotovo 96% onih koji pate od PSS-a. Specifična autoantitijela: na nuklearni ribonukleoprotein (RNP), proteine centromere i anti Scl-70. Međutim, najspecifičniji anti-Scl-70- marker nalazi se u samo 20% slučajeva PSS-a. Protutijela koja reagiraju s centromernom regijom metafaznih kromosoma nalaze se u većine bolesnika koji odgovaraju skupini sindroma "CREST". Stoga, ako određivanje protutijela na Scl-70 u PSS-u služi kao loš prognostički znak, tada otkrivanje anticentromernih protutijela, naprotiv, ukazuje na povoljniji tijek bolesti.
Reumatoidni artritis
Reumatoidni artritis (RA) je kronična polisistemska bolest nepoznate etiologije, kod koje se uz niz sustavne manifestacije, Patogmoničan je perzistentni upalni sinovitis, koji simetrično zahvaća periferne zglobove. Tijek bolesti je vrlo varijabilan, obično s valovitim tijekom.
Ne postoje posebni laboratorijski testovi za dijagnosticiranje RA. Međutim, reumatoidni faktori, koji su IgG-reaktivna autoantitijela, nalaze se u 60% bolesnika. Sami reumatoidni faktori mogu pripadati klasama: IgA, IgM ili IgG. Učestalost otkrivanja reumatoidnih čimbenika među zdravim osobama doseže 5% i povećava se s dobi. Osim toga, reumatoidni faktor može biti prisutan kod mnogih bolesti - SLE, Sjögrenov sindrom, kronična bolest jetre, hepatitis B, tuberkuloza, sifilis itd. U tom smislu, otkrivanje reumatoidnog faktora ne postavlja dijagnozu, ali ima određenu prognostičku vrijednost, budući da bolesnici s njegovim visokim titrom (osobito IgM i IgA) imaju tendenciju težeg i progresivnijeg tijeka bolesti. Eozinofilija u bolesnika s RA ukazuje na težinu sustavnih manifestacija. Gotovo svi pacijenti imaju povećanje ESR-a, CRP, ceruloplazmin, drugi proteini akutne faze. To općenito korelira s aktivnošću bolesti i ukazuje na napredovanje oštećenja zglobova.
Mješovite bolesti vezivnog tkiva.
Miješana bolest vezivnog tkiva (MCTS) je sindrom karakteriziran varijabilnom kombinacijom kliničkih manifestacija sličnih onima koji se vide kod SLE, sklerodermije, polimiozitisa i reumatoidnog artritisa u kombinaciji s neobično visokim titrom cirkulirajućih autoantitijela na nuklearni ribonukleoproteinski antigen (RNP). U tom slučaju postoji nedostatak ili vrlo nizak titar protutijela na druge nuklearne antigene koji se mogu ekstrahirati i na DNA. Uz Anti-RNP postoji izražena poliklonalna hipergamaglobulinemija, smanjenje komponenata komplementa, defekt supresorske veze T-limfocita, prisutnost CIC-a, taloženje imunih kompleksa duž membrana sarkoleme i glomerularnog bazala. membrane, limfocitna i plazmacitocitna infiltracija mnogih tkiva. Jedna od glavnih manifestacija SBST je proliferativna lezija intime i medija. krvne žilešto dovodi do njihovog sužavanja. To je poraz velikih i malih žila koje opskrbljuju vitalne organe koji određuju tijek i prognozu ove bolesti. Neki pacijenti imaju znakove nekoliko autoimunih bolesti, ali za razliku od pacijenata sa BSTS, nema antitijela na RNP. U tom slučaju, ako postojeći znakovi zadovoljavaju nekoliko autoimunih bolesti odjednom, postavlja se dijagnoza "križnog sindroma", ako ne, postavlja se dijagnoza "nediferencirane bolesti vezivnog tkiva".
Sjögrenov sindrom
Sjögrenov sindrom (SS) ili "suhi" sindrom je imunološka patologija koju karakterizira progresivna destrukcija egzokrinih žlijezda, a prate je različiti autoimuni poremećaji. Bolest se može javiti samostalno (primarni SS) ili u prisutnosti drugih autoimunih abnormalnosti (sekundarni SS). Osim toga, SS se dalje dijeli na žljezdani oblik, kada su kliničke manifestacije ograničene na sustav egzokrinih žlijezda, i ekstraglandularni oblik, kada su i druga tkiva uključena u patološki proces.
Glavni mehanizmi ozljede u SS su limfocitna infiltracija i taloženje imunoloških kompleksa. Približno 10% slučajeva SS-a razvije limfoproliferativni proces koji se naziva pseudolimfom. Neki pacijenti kasnije razviju pravi ne-Hodgkinov limfom. Vrlo često postoji autoimuna lezija štitnjače poput Hashimotovog tireoiditisa.
Uz suhe sluznice (keratokonjunktivitis, kserostomija) u bolesnika sa SS-om se razvijaju vaskulitis, polineuropatija, intersticijska pneumonija i glomerulonefritis. Općenito, u usporedbi s drugim kolagenozama, prognoza za pacijente sa SS može se smatrati prilično povoljnom.
Na laboratorijska istraživanja obratite pozornost na povećanje razine CEC-a, leukopeniju, trombocitozu, ubrzani ESR. Bilježi se pozitivna reakcija na ANA. Autoantitijela su uglavnom zastupljena reumatoidnim faktorom, SSA (anti-Ro), SSB (anti-La). Većina bolesnika s najtežim sustavnim manifestacijama su pozitivni na SSA. U trudnica prisutnost SSA značajno povećava rizik od rađanja dojenčadi s poremećajima srčanog provođenja.
Polimiozitis i dermatomiozitis
Dermatomiozitis je sistemska bolest vezivnog tkiva koja pretežno zahvaća kožu i mišićno tkivo. Razne kožne lezije s patogmoničnim periorbitalnim edemom s purpurno-lila eritemom kombiniraju se s miastenijskim sindromom, miokardijalnom distrofijom, poliartritisom i povezanom upalom pluća (hipoventilacijsko i aspiracijsko podrijetlo). Posebna pozornost zaslužuje visoka učestalost kombinacije dermatomiozitisa s malignim tumorima. Polimiozitis - sistemske upalne miopatije bez značajnih lezija kože, koje predstavljaju skupinu bolesti karakteriziranih difuznim oštećenjem mišića zbog perivaskularne i intersticijske infiltracije mišićnog tkiva upalnim stanicama, uglavnom leukocitima.
^ 6. AUTOANTITIJELA KAO SEROLOŠKI MARKERI SISTEMSKIH KOLAGENOZA.
Po prvi put su manifestacije specifičnog LE-fenomena registrirane 1948. godine tijekom inkubacije seruma. raznih pacijenata sa suspenzijom leukocita normalnih donora. Godinu dana kasnije identificiran je serumski imunoglobulin koji je posredovao u antinuklearnoj reakciji koja je u osnovi fenomena LE. Detekcija LE-stanica dominirala je 50-70 godina kao glavna reakcija za detekciju antinuklearnih antitijela (ANA).
U 80-ima je predložena metoda neizravne imunofluorescencije za detekciju ANA, s testiranjem seruma pacijenata na dijelovima tkiva bubrega i jetre zeca (miša) ili na kulturi epiteloidnih stanica raka čovjeka (Hep-2). Metoda se etablirala kao vrlo osjetljiva i specifična, omogućujući registriranje istovremene prisutnosti autoantitijela na gotovo 40 pojedinačnih nuklearnih antigena. Značajke prirode distribucije specifične luminiscencije uzimajući u obzir reakciju (homogena, točkasta, periferna, povezana s jezgricom ili centromerom, prisutnost žarišta vezanja citoplazme) omogućuju u prvoj studiji određivanje glavne antigene specifičnosti otkrivenih autoantitijela. Nedostaci ove metode uključuju relativnu zahtjevnost, ovisnost o optičkim karakteristikama luminiscentnog mikroskopa, kao i probleme standardizacije i kontrole kvalitete, uglavnom povezane s upotrebom životinjskih tkiva ili staničnih kultura.
Istodobno, razvijena je metoda korištenja ELISA testa čvrste faze kako za detekciju ukupnog kompleksa antinuklearnih autoantitijela (ANA-screening), tako i za detekciju pojedinačnih autoantitijela na nuklearne antigene koji se mogu ekstrahirati (ENA-screening i ENA-profil). Prednosti metode su mogućnost automatizacije i visoka produktivnost. Osjetljivost i specifičnost usporedive su s RNIF-om, iako uporaba rekombinantnih antigena u nekim testnim sustavima može potencijalno uzrokovati lažno pozitivne rezultate pri testiranju seruma s visokim titrom antibakterijskih protutijela.
Ostale dobro poznate metode za identifikaciju autoantitijela na ENA - imunodifuzija u gelu, imunoelektroforeza, hemaglutinacija, imunoprecipitacija i imunobloting još nisu široko korištene u kliničkoj laboratorijskoj praksi.
Popis najvažnijih autoantitijela na nuklearne antigene koji se mogu ekstrahirati prikazan je u tablici 5:
Tablica 5. Glavni serološki markeri autoimunih bolesti
| Antigen | originalni naziv | molekularna struktura | Funkcija | Dijagnostička vrijednost |
| sm | Smith (ime pacijenta) | Kompleks nastao od 9 proteina s 13 malih molekula RNA | | *Specifičnost za SLE *Sm + i RNP + = visok rizik od lupus nefritisa *Može se otkriti u nedostatku dsDNA. |
| Sm/RNP kompleks | RNP - ribonukleoproteinske čestice | Nativni kompleks Sm i RNP antigena | Cijepanje prekursora glasničke RNA | SLE, Sjögrenov sindrom, sklerodermija, polimiozitis, SBSTc |
| U1RNP | glavni antigen (68 rDa) kompleksa U1RNP | Uvijek uparen s RNA U1. | Cijepanje prekursora glasničke RNA | * RNP + , Sm - = nizak rizik od nefritisa * visoki krediti na pozadini "neg" drugih ANA = SBSTk |
| Ili Ro | Topljiva (topljiva) tvar (tvar) A ili protein A Sjogrenovog sindroma ili Robert-antigen (ime pacijenta) | 52 i 60 kD proteini povezani s citoplazmatskim RNA molekulama | nepoznato | * Sjögrenov sindrom i SLE * neonatalni srčani blok zbog transplacentalnog prijenosa protutijela *SSA+, SSB - = visok rizik od nefritisa |
| Ili La | Topljiva (topljiva) tvar (tvar) B ili protein B Sjögrenov sindrom ili Laneov antigen (ime pacijenta) | Fosfoproteini povezani s transkriptima polimeraze III | Helikaza terminator transkripcije | * Sjögrenov sindrom, SLE *SSA+, SSB+ = nefritis niskog rizika |
| dsDNA | dvolančana DNA | Nativna dvolančana DNA bez proteina | Nositelj genetske informacije | *SCR, praćenje protoka * Zahvaćenost CNS-a i bubrega |
| Histoni | Histoni | Osnovni proteini povezani s DNA | Strukturni elementi kromatina | Lijek SLE |
| CENP-B | Proteinski (proteinski) centromeri | Proteinski kinetohor 80 kD | Mjesto pričvršćivanja mikrofilamenata | Sklerodermija, CROSS-sindrom |
| Jo l | Specifični protein 1 pacijenta s miozitisom | Protein 55 kD, histidin-tRNA sintetaza | tRNA koja se veže za histidin | *Polimiozitis je češći od dermatomiozitisa * Povezano s intersticijska pneumonija |
| PM-Scl-100 | 100 kD polimiozitis-sklerodermijski antigen (poliniozitis-sklerodermija) | Dio višeproteinskog kompleksa koji sadrži najmanje 11 proteina | Sinteza ribosomskog prekursora | Polimiozitis-sklerodermo-CREST sindrom |
| Scl-70 | 70 rL sklerodermijski antigen | Produkt razgradnje proteina od 70 kD s masom od 100 kD | Denaturacija (odmotavanje) DNA topoizomerazom I | *Sklerodermija i rjeđe CROSS-sindrom |
U diferencijalnoj dijagnozi velikih kolagenoza značajna je analiza markera autoimunih bolesti koji se otkrivaju i imunofluorescencijom i ELISA (tablica 6).
Tablica 6
| Vrsta patologije | Rezultati imunološke studije | Klinička vrijednost |
| Vrsta antitijela i učestalost njihove pojave (%) | ||
| Sistemski eritematozni lupus | * ANA 95-99% * dsDNA 50-75% * Sm 30% * RNP 25-40% * SSA(Ro) 30-40% * SSB(La) 10-15% * antifosfolipidna antitijela 30-50% * PCNA 2 -10% *anti-Ku (Ki) 10% | ANA i ENA - probir (otkrivanje); Anti-nDNA i anti-Sm - markeri za praćenje |
| Diskoidni eritematozni lupus | Normalna slika (obično normalni ANA titri) | LE trake u uzorcima biopsije kože (u EPIF-u) vrlo su specifične |
| Subakutni kožni eritematozni lupus | * ANA 70% SSA (Ro) > 60% | anti-SS-A(Ro) su visoko specifični |
| Lupus erythematosus u novorođenčadi | *ANA 70% SS-A(Ro) 60% * SS-B(La) 60% | Anti-SS-A(Ro) su visoko specifični |
| "Lijekovi" lupus erythematosus | *ANA > 90% * antitijela protiv histona > 90% ^
Ostali ANA i anti-ENA su odsutni
| antihistonska antitijela su visoko specifična u nedostatku drugih nuklearnih antitijela |
| Mješovita bolest vezivnog tkiva | ANA (tip pjegave mrlje) > 95 % anti-RNP > 90 % | Vrijedni dijagnostički podaci daju se prirodom bojenja jezgri u uzorcima biopsije kože i u proučavanju krvnog seruma neizravnom imunofluorescencijom. |
| Sjögrenov sindrom | ANA 55%. *SS-A(Ro) 43-88% .*SS-B(La) 14-60% ^
Prisustvo reumatoidnog faktora (RF)
| Dijagnoza se potvrđuje pozitivnim serološkim podacima |
| sklerodermija | ANA 85% (pjegavi ili nukleolarni tip bojenja) *anticentromerna protutijela 70-90% ^ difuzna skleroza : Anti-Scl -70 45% Akroskleroza: Anti-Scl-70 15-20% | *Anticentromerna antitijela – biljeg CREST sindroma *Scl-70 - marker sklerodermije ^ Dijagnostička vrijednost izravne imunofluorescencije biopsija kože je niska. |
| Polimiozitis dermatomiozitis | ^ Zajednička značajka: ANA 80% Dermatomiozitis: Anti-Jo-l 10% Polimiozitis: Anti-Jo-l 30% SS-A(Ro) 55% anti-Ku(Ki) 10% (vidi se i kod sklerodermije) | Pozitivni rezultati serološka studija može se koristiti za potvrdu dijagnoze |
| Reumatoidni artritis | ANA niski titri ili bez RF 90% RANA 70-90% (prisutno u 95% seruma bez RF) | Za potvrdu dijagnoze koriste se rezultati serološke studije. |
Određivanje ANA u reakciji neizravne imunofluorescencije
U tipičnom testu, pacijentov serum se inkubira s antigenskim supstratima (životinjsko jetreno ili bubrežno tkivo, Hep-2 stanična kultura) kako bi se izvršilo specifično vezanje antitijela prisutnih u serumu na stanične jezgre. Nakon ispiranja nevezanih serumskih proteina, supstrat se inkubira s antitijelima protiv ljudskih imunoglobulina. Budući da su unesena antitijela konjugirana s fluorescentnom supstancom, u prisutnosti antitijela na nuklearne antigene u serumu, dobiveni kompleks (nuklearni antigen + antinuklearna serumska antitijela + antitijela na ljudska antitijela + fluorescentna supstanca) može se detektirati fluorescentnom mikroskopom. Priroda sjaja - periferna, difuzna, točkasta itd. omogućuje vam da identificirate vezu s određenim intranuklearnim strukturama, pogledajte tablicu 7:
Tablica 7. Ocjena rezultata određivanja ANA u reakciji neizravne imunofluorescencije.
| Priroda sjaja | Antigenska specifičnost | Klinički značaj |
| Periferno ili rubno | dsDNA, lamini. kompleksi nuklearnih pora | Primarni SLE |
| Homogena (difuzna) | dsDNA | Specifičnost 20 - 40% kod aktivnog SLE, zahvaćenosti CNS-a i bubrega |
| Histoni | Idiopatski SLE - 50-70%, SLE izazvan lijekovima - 95%, lokalna sklerodermija |
|
| Pjegavost: gruba | U1-RNP | SCR 20%-40%: C 95% |
| SM | SLE marker 15%-30% |
|
| Tanak (u prahu) | SS-A (Ro) | SLE 24%-60%; neonatalni lupus > 90%: Nedostatak komplementa (C2 i C4)/LE > 90%; Shagrenov sindrom 85%-95% |
| SS-B (La) | SLE 9%-35%; Neonatalni lupus 75%; Sjögrenov sindrom 70%-85% |
|
| DNA polimeraza | SCR 3% |
|
| Mi-2 | Dermatomiozitis (DM) 15%-35%: Polimiozitis (PM) 5%-9% |
|
| diskretna | Proteinska centromera Uključci slične veličine i broja | Ograničena sklerodermija 60%-80%: dilusna sklerodermija - 8%; Raynaudov sindrom 25%; ^ PSS -CROSS 50%-70% |
| NSP-1 (pseudo ACA) Uključci različitih veličina i količina | Reumatske bolesti i kronične bolesti jetre |
|
| Intranuklearni sjaj "Krupni" tip | fibrilarin (U3RNP) | PSS 6% -8%; diluzna sklerodermija - 5%: ^ KRIŽ - 10% |
| išaran | RNA polimeraza 1 | PSS 4% -20%; diluzna sklerodermija -13% |
| Homogenost: (nukleoli/nukleoplazma) | ||
| Slaba pjegavost (nuleol) / izgled "mljevenog stakla" nukleoplazme | DNA-topoizomeraza 1 (Scl-70) | PSS 4% -20%; dilusna sklerodermija -13%: |
| Jak homogeni sjaj jezgrice / slab homogeni sjaj nukleoplazme | PM-SCI | ^ PM/PSS - 24% |
| Jak homogeni sjaj jezgrice i nukleoplazme | Ku | Sklerodermija 1%-14%; PM/ScI 26%-55%; SLE 1%-19%; Sjogrenov sindrom - 20% |
| Mrljasta luminiscencija citoplazme | Jo-1 (histidil tRNA sintetaza) PL-7 (treonil tRNA sintetaza) PL12 (alanil tRNA sintetaza) | ^ PM 18%-36%; DM - 13%; PM/DM - 43% PM/DM - 3% |
Određivanje ANA i ENA ELISA testom na čvrstoj fazi
Test sustav za ELISA ANA (UBI MAGIWELL) - za analizu probira na antinuklearna protutijela omogućuje polukvantitativno određivanje širokog spektra protutijela na kompleks različitih staničnih nuklearnih antigena apsorbiranih u jažicama: dvolančanu i jednolančanu DNA, histone , ribonukleoproteini (RNP), SS-A, SS -B, Sm, itd.
Posebnost sustavi ELISA ENA-screening i ENA-profil (CLARK LABORATORIES) je da se na površini polisterolnih jažica adsorbiraju preliminarno visoko pročišćeni pojedinačni nuklearni antigeni koji se mogu ekstrahirati: SS-A, SS-B , Sm, Sm/RNP, Scl-70 i Jo -1 . U varijanti probira - svih 6 antigena zajedno, u varijanti profila - svaki antigen u posebnoj jažici. Dakle, uobičajeni dijagnostički algoritam sastoji se od primarne analize seruma na sustavu probira i ponovljene analize pozitivnih seruma na ENA test sustavu - profilu za otkrivanje protutijela na specifične antigene. U slučaju pozitivnog nalaza na ANA sustavu probira i negativnog nalaza na ENA test sustavima, potrebno je testirati serum na test sustavima za izolirano određivanje protutijela na DNA, histone i druge antigene koji nisu prisutni. u ENA sustavima.
U slučaju postavljene dijagnoze i prethodno identificiranih autoantitijela, za praćenje učinkovitosti terapije, koriste se testni sustavi za kvantificiranje titra antitijela na pojedine antigene.
Kao alternativa sustavima za testiranje ploča, mogu se koristiti ELISA testovi iz epruvete tvrtki ROCHE i Sanofi.
Pozitivni rezultati seroloških pretraga na ANA i ENA mogu se uočiti u 1-5% zdravih osoba, osobito u starijih osoba. Neki lijekovi, kao što su p-aminosalicilna kiselina, fenition, izoniazid, hidrazin, prokainamid i neki drugi, mogu potaknuti stvaranje antinuklearnih protutijela.
^ 7. AUTOANTITIJELA U DIJAGNOSTICI SISTEMSKOG VASKULTITISA
Sistemski vaskulitis je skupina bolesti karakteriziranih kronične upale i razaranja stijenki krvnih žila. Etiološki čimbenici koji imaju ulogu okidača uključuju: infektivne agense, lijekove, progresiju tumora, cirkulaciju patoloških proteina i CEC, autoantitijela. Međutim, otprilike polovica svih slučajeva sistemskog vaskulitisa nema očit etiološki uzrok i smatra se "idiopatskim". Važno je zapamtiti da neki vaskulitisi sa sličnim kliničkim manifestacijama mogu imati značajno drugačiju prognozu i zahtijevati različite terapijske pristupe.
Do sada sheme klasifikacije ove skupine bolesti nisu konačno razrađene. Najnovije klasifikacije temelje se na kalibru pretežno zahvaćenih žila i prevladavajućoj vrsti staničnih elemenata u žarištu uništenja: neutrofili, monociti ili limfociti. Istina, to prije odražava fazu procesa, a ne dominantni patogenetski proces.
Pojava mogućnosti određivanja autoantitijela na citoplazmatske antigene neutrofila ( ANCA) značajno je poboljšao dijagnostiku ovih bolesti. Postoje dvije podklase humanih neutrofilnih autoantitijela: c-ANCA (citoplazmatska ANCA) i p-ANCA (perinuklearna ANCA). Najznačajnija su protutijela na enzime primarnih granula neutrofila: proteinazu-3 (PR3), odnosno mijeloperoksidazu (MPO). Određivanje ANCA spektra (PR3, MPO) omogućuje diferencijalnu dijagnozu Wegenerove granulomatoze i mikroskopskog poliarteritisa. Korištenje ANCA kao pokazatelja aktivnosti vaskulitisa ima određene prednosti u odnosu na klasične pokazatelje kao što su ESR i CRP, što adekvatnije odražava stupanj aktivnosti i učinkovitosti terapije i bez obzira na dodatak zaraznih komplikacija.
Tablica 8. Dijagnostički značaj otkrivanja različitih antineutrofilnih (ANCA) protutijela
| Vrsta antitijela | Bolest |
| Anti-MPO ANCA | Vaskulitis, mikroskopski poliangiitis, Churg-Strauss, RA, SLE |
| Anti-PR3 ANCA | Wegenerova granulomatoza |
| Anti-BPI ANCA | Kronično zarazne bolesti, Crohnova bolest, ulcerozni kolitis |
| Anti-elastaza ANCA | Emfizem, RA, upalne reumatske bolesti |
| Anti-katepsin G ANCA | upalne reumatske bolesti, SLE, Sjögrenov sindrom, Feltyjev sindrom |
| Anti-lizozim ANCA | reumatoidni vaskulitis, upalni procesi u gastrointestinalnom traktu, ulcerozni kolitis |
| Antilaktoferin ANCA | RA, ulcerozni kolitis, primarni sklerozirajući kolangitis |
^ 8. LABORATORIJSKA DIJAGNOSTIKA ANTIFOSFOLIPIDNOG SINDROMA
Antifosfolipidna antitijela su heterogena grupa autoantitijela protiv negativno nabijenih fosfolipida. Nalaze se prvenstveno u testu antikardiolipinskih antitijela (ACA test), daju lažno pozitivne reakcije u biološkim testovima za sifilis i u antikoagulantnom testu za lupus. Sva tri ova testa otkrivaju slična, ali ne nužno identična antitijela. Dakle, za identifikaciju antitijela na fosfolipide ponekad je potrebno koristiti sve navedene testove.
Od raznih postojeće metode analiza za određivanje protutijela na fosfolipide, najosjetljiviji je imunoenzimski test za određivanje protutijela na kardiolipin. Prisutnost ovih protutijela u bolesnika pomaže identificirati bolesnike s rizikom od venske i/ili arterijska trombozačesto praćen trombocitopenijom.
Predloženo je da se termin antifosfolipidni sindrom odnosi na skupinu bolesti praćenih povećanom količinom autoprotutijela na fosfolipide i dijeli se na primarne (koje nisu povezane s određenom autoimunom patologijom) i sekundarne, povezane sa SLE ili drugim autoimunim bolestima.
Antifosfolipidni sindrom najčešće se viđa u bolesnika sa sistemskim eritemskim lupusom ili u bolesnika s poremećajima sličnim lupusu kod kojih kriteriji za sistemski eritematozni lupus nisu ispunjeni. Visoke razine antitijela na kardiolipin opažene su kod tromboze, gubitka ploda, trombocitopenije i nekih drugih bolesti. Niske razine antikardiolipidnih protutijela pronađene su u različitim kliničkim poremećajima koji nisu povezani s antifosfolipidnim sindromom. Stoga su niske razine ovih protutijela ograničene dijagnostičke vrijednosti.
Antifosfolipidni sindrom je jasnije povezan s antitijelima na kardiolipin klase IgG i IgA nego s antitijelima klase IgM. Međutim, u liječenju najviše mijenja se razina lgM antitijela. Niske razine IgM protutijela također se mogu vidjeti u drugim autoimunim bolestima kao što su reumatoidni artritis, primarni Sjögrenov sindrom, sistemski lupus izazvan lijekovima, lajmska bolest i sifilis.
ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA testni sustav prikladan je alat za preliminarnu identifikaciju onih pacijenata čija krv sadrži ASA. Naknadna analiza pozitivnih seruma pomoću kompleta ImmuUsa ™ ACA-IgG, ImmuUsa ™ ACA-lgA, ImmuUsa ™ ACA "IgM omogućuje određivanje pojedinačnih izotipova ovih autoantitijela.
Tablica 9 Sindromi povezani s ASA
| Sindrom | % pojave |
| Intermitentna venska tromboza | 28-71 |
| Česti pobačaji | 28- 64 |
| Transverzalni mijelitis | 50 |
| Hemolitička anemija | 38 |
| Trombocitopenija | 27-33 |
| Arterijske okluzije | 25 -31 |
| Livedo Riticularis (mramorna koža) | 25 |
| Plućna hipertenzija | 20 - 40 |
| SLE | 33-57 |
Studije su pokazale da je u bolesnika s antifosfolipidnim sindromom od velike važnosti prisutnost protutijela ne samo na kardiolipin (ACA), već i na fosfatidilserin, koji se može detektirati zajedno s ASK i zasebno.
U SLE-u se ASK također prilično dobro vežu za fosfatidilserin, dok neki zarazne bolesti, ASA su visoko specifični za kardiolipin. U tom smislu važno je zasebno određivanje antitijela na fosfatidilserin. dijagnostički kriterij sekundarni antifosfolipidni sindrom.
Indikacije za testiranje na antifosfolipidni sindrom:
tromboze i vaskulitisa u autoimunim bolestima (procjena težine stanja, prognoza i praćenje terapije)
česti pobačaji ili intrauterina fetalna smrt (mogućnost učinkovite profilakse tijekom nove trudnoće)
nejasno neurološke manifestacije(horeja, migrena, epilepsija mogu biti uzrokovane mikrotrombozama)
rekurentna trombocitopenija nepoznatog podrijetla (pojašnjenje dijagnoze)
mramorna koža
Neki endokrine bolesti praćena pojavom autoantitijela, koja u nekim slučajevima igraju značajnu ulogu u njihovoj patogenezi. U te bolesti spadaju: dijabetes tip 1 ovisan o inzulinu, Hashimotov tireoiditis, Gravesova bolest, nodularni tireoiditis, sindrom "kandidijaza-endokrinopatija" itd.
Određivanje protutijela na -stanice Langerhansovih otočića gušterače.
Poznato je da je ključni trenutak u razvoju dijabetes melitusa ovisnog o inzulinu tipa 1 fenomen transformacije -stanica iz "svojih" u "ne-svoje" i aktivacija njihovog autoimunog oštećenja. Uz polagani tijek bolesti, najraniji znak patologije je pojava protutijela na -stanice Langerhansovih otočića gušterače i, posebno, na membranski vezanu dekarboksilazu glutaminske kiseline tijekom razdoblja kada razina šećera u krvi pada. još ne prelazi normu, a tolerancija glukoze ostaje normalna. Budući da se prve kliničke manifestacije dijabetesa pojavljuju kada je zahvaćeno više od 90% svih stanica koje sintetiziraju inzulin, protutijela se mogu pojaviti mnogo godina (do 8 godina) prije kliničke manifestacije bolesti. Istovremeno, prisutnost protutijela na -stanice korelira s njihovom rezidualnom količinom, a kako preostale -stanice umiru, podražaj za autoimuni odgovor opada, titar autoantitijela može se značajno smanjiti do nemjerljivih vrijednosti. U pravilu, pri ispitivanju osoba s dijabetesom tipa 1, antitijela na stanice otočića otkrivaju se u 50-80% slučajeva. Učestalost pojave ovih autoantitijela kod rođaka (1. stupanj) dijabetičara doseže 2-5%. Poznato je da svake godine 11% ove skupine ljudi razvije simptome dijabetesa.
Određivanje protutijela na -stanice Langerhansovih otočića gušterače provodi se neizravnom imunofluorescencijom i ELISA testom na čvrstoj fazi. U prvom slučaju, dijelovi gušterače majmuna koriste se kao supstrat, u drugom, pročišćeni antigeni otočića adsorbiraju se u jažice ploče. Hemoliza, lipemija i mikrobna kontaminacija sprječavaju analizu. Serumi koji sadrže visoku koncentraciju ANA otežavaju određivanje, osobito kod provođenja RNIF.
Određivanje autoantitijela na antigene štitnjače
U bolestima štitnjače važan je sadržaj antitijela na tiroidnu peroksidazu (Anti-TPO) i antitijela na tireoglobulin (Anti-TG) u serumu bolesnika. Budući da se njihove razine mijenjaju neovisno jedna o drugoj, preporučuje se određivanje obje vrste protutijela istovremeno.TPO je antigena komponenta mikrosomalnog antigena štitnjače i slabo je glikolizirani protein koji sadrži hem i ima važnu ulogu u procesu jodiranja tireoglobulina i sintezi hormona štitnjače. Protutijela na TPO prisutna su u serumu bolesnika s gušavošću i atrofičnim tireoiditisom ili primarnom tireotoksikozom. Najveće koncentracije prisutne su u bolesnika s fibroznom ili oksifilnom varijantom Hashimotove guše. Bolesnici s Gravesovom bolešću (Basedowljeva bolest) proizvode obje vrste protutijela, ali u prilično niskim koncentracijama. Visoke koncentracije protutijela na TG tipične su za serume bolesnika s hipotireozom, Hashimotovom fibroznom gušavošću, miksidemom. Antitireoidna antitijela su tipičnija za autoimune bolesti štitnjače, u tim slučajevima su titri autoantitijela viši.
Tablica 10. Učestalost (%) antitiroidnih autoantitijela
^ 10. SEROLOŠKA DIJAGNOSTIKA AUTOIMUNIH POREMEĆAJA JETRE
Prema suvremenoj klasifikaciji kroničnog hepatitisa, autoimuni hepatitis (AIH) definiran je kao neriješeni, dominantno periportalni hepatitis s prisutnošću hipergamaglobulinemije i tkivnih autoantitijela, koja se u većini slučajeva povlače pod utjecajem imunosupresivne terapije. Trenutno se u skupinu autoimunih bolesti jetre, uz autoimuni hepatitis, ubraja primarna bilijarna ciroza (oštećenje malih žučnih vodova s prisutnošću antimitohondrijska antitijela (AMA) ), autoimuni kolangitis (oštećenje malih žučnih vodova u odsutnosti AMA), primarni sklerozirajući kolangitis (oštećenje velikih žučnih vodova).
Patogeneza AIH nije dobro shvaćena. Poznato je da imunološki sustav ima veliku ulogu u razvoju etiologije kroničnog hepatitisa. Utvrđeno je da se serumska autoantitijela često nalaze u kroničnom hepatitisu bilo koje etiologije (tablica 11). Za ANA pronađenu u AIH i drugim bolestima jetre, nije bilo moguće identificirati specifične nuklearne antigene i podtip ANA. Meta za autoimune procese u kroničnim bolestima jetre različite etiologije (AIH, hepatitis u sklopu autoimunog poliendokrinog sindroma tip 1, autoimunost inducirana hepatotropnim virusima, hepatitis izazvan lijekovima) su enzimi metabolizma ksenobiotika faze 1 (citokrom P-450) i faza II (uridin difosfat glukuronozil transferaza - UGT).
Tablica 11. Autoantitijela pronađena u različitim etiologijama kroničnog hepatitisa.
| Etiologija kroničnog hepatitisa | Autoantitijela koja se mogu detektirati |
| Virusni hepatitis B | |
| Virusni hepatitis C | ANA, SMA, LKM-1, GOR |
| Virusni hepatitis D | LKM-3 (UGT) |
| AIH tip 1 | ANA, SMA, anti-aktinska antitijela |
| AIH tip 2 | LKM-1 |
| AIH tip 3 | SLA |
| hepatitis izazvan lijekovima | ANA, LKM-1 |
| kriptogeni | Ne |
AIH tip 1(prisustvo serumskih ANA, SMA, antitijela na aktin) je 85% svih s AIH. Uočava se pretežno u žena (8:1). Pogađa starije osobe, karakterizirana je rjeđim ekstrahepatičnim manifestacijama i relativno povoljnom prognozom. AIH - tip 2(prisutnost LKM-1 u serumu) čini ne više od 15% svih slučajeva AIH, među kojima prevladavaju mladi ljudi (od 2 do 14 godina). Često praćen sistemskim manifestacijama i lošom prognozom.
AIH- 3. vrsta(prisutnost SLA) češće se razvija u mladih žena (90%) i, prema nekim autorima, jedna je od varijanti tipa 1 AIH.
ZAKLJUČAK
^ POPIS KORIŠTENE LITERATURE
Shirinsky V.S. "Autoimune bolesti: patogeneza, dijagnoza, principi liječenja", Alati za studente i liječnike, Novosibirsk, 1997
Serov V.V., Zayratyants O.V. "Autoimunizacija i autoimune bolesti", Archives of Pathology, 1992, v.54, str. 5-11
Aprosina Z.G., Serov V.V. "Autoimuni hepatitis (povijest istraživanja, suvremeni aspekti)", Arhiv za patologiju, 1998, vol. 60, br. 3, str. 71-75.
Pokrovski V.I., Gordienko S.P. "Imunologija infektivnog procesa", Vodič za liječnike, M., 1994
Protopopov B.V. "Osnovni koncepti kliničke imunologije", Vodič za praktičare, Krasnojarsk, 1995.
Vijay Kamar, mag. Janderski "Testiranje antinuklearnih protutijela", ANTITIJELO, 1995., 8/CLN, str. 6, 8
Nakamura R. M., Tan E. M. "Nedavni napredak u laboratorijskom ispitivanju i značaj autoantitijela na nuklearne antigene u sistemskoj reumatskoj bolesti" Clin. Lab Med., 1986, 6, str. 41 - 53 (prikaz, stručni).
McCarty G.A., Valencia D.W., Fritzler M.J. "Antnuklearna protutijela: suvremene tehnike i klinička primjena na bolesti vezivnog tkiva. U: Antinuklearna protutijela. Oxford Univ. Press, N.Y., 1984., str. 1 - 95.
Enzimski imunološki test: setovi i oprema, BioChemMac Group of Companies, 2002.
Klinička imunologija i alergologija, ur. Praksa, M., 2000
T.S. de Araujo, R.S. Kirsner "Vaskulitis", Rane 2001,13(3) str.99-110.
Bakterijski antigeni:
Specifično za skupinu (dostupno u različitim vrstama istog roda ili obitelji)
Specifično za vrstu (kod predstavnika jedne vrste)
Specifično za tip (odrediti serološku varijantu unutar jedne vrste)
Specifično za soj
Stadiospecifično
Križno reaktivni antigeni (slični, isti kod ljudi i mikroba)
Po lokalizaciji:
OAS– somatski (LPS stanične stijenke)
N-Ag- bičevi (proteinska priroda)
K-Ag– kapsularni (PS, proteini, polipeptidi)
Ag Piley(fimbrijalni)
Citoplazmatski Ag(membrana, CPU)
Egzotoksini(proteini)
Ektoenzimi
OAS- lipopolisaharid stanične stijenke gram-negativnih bakterija. Sastoji se od polisaharidnog lanca i lipida A. Polisaharid je termostabilan, kemijski stabilan, slabe imunogenosti. Lipid A - sadrži glukozamin i masne kiseline, ima snažno adjuvantno, nespecifično imunostimulirajuće djelovanje i toksičnost. Općenito, LPS je endotoksin. Već u malim dozama uzrokuje vrućicu zbog aktivacije makrofaga i otpuštanja IL1, TNF i drugih citokina, degranulocitnu degranulaciju i agregaciju trombocita.
H-AG je dio bakterijskih flagela, njegova osnova je protein flagelin. Termolabilan.
K-AG je heterogena skupina površinskih, kapsularnih AG bakterija. Nalaze se u kapsuli. Sadrže uglavnom kisele polisaharide, koji uključuju galakturonsku, glukuronsku kiselinu.
Zaštitni antigeni- za dobivanje cjepiva koriste se epitopi egzogenih antigena (mikroba), antitijela protiv kojih imaju najizraženija zaštitna svojstva, što štiti organizam od ponovne infekcije. Pročišćeni zaštitni antigeni mogu biti "idealni" pripravci cjepiva.
Križnoreaktivne antigene determinante pronađen u MO i ljudima/životinjama. U mikrobima raznih vrsta i kod ljudi postoje uobičajeni, slični po strukturi, AG. Ti se fenomeni nazivaju antigenska mimikrija. Često križno reaktivni antigeni odražavaju filogenetsku sličnost ovih predstavnika, ponekad su rezultat slučajne sličnosti u konformaciji i nabojima - AG molekulama. Na primjer, Forsmanov AG nalazi se u eritrocitima ovna, salmoneli i zamorcima. Hemolitički streptokoki skupine A sadrže antigene koji međusobno reagiraju (osobito M-protein) koji su zajednički antigenima endokarda i glomerula ljudskih bubrega. Takvi bakterijski antigeni uzrokuju stvaranje protutijela koja unakrsno reagiraju s ljudskim stanicama, što dovodi do razvoja reumatizma i poststreptokoknog glomerulonefritisa. Uzročnik sifilisa ima fosfolipide slične strukture onima koji se nalaze u srcu životinja i ljudi. Stoga se kardiolipinski antigen srca životinja koristi za otkrivanje antitijela na spirohete kod bolesnih ljudi (Wassermannova reakcija).
54. B-limfociti: razvoj, markeri, antigen-specifični B-stanični receptor. Metode određivanja broja i funkcionalne aktivnosti B-limfocita.
B-limfociti tako se zovu jer se prvi put identificiraju kod ptica u posebnom središnjem organu imuniteta, koji se zove "Fabricijeva burza" (bursa Fabricius) i u kojem prolaze fazu sazrijevanja. U životinja, ovaj organ je odsutan, a rane faze sazrijevanja B-limfocita prolaze u RMC.
Imaju antigen-specifični B-stanični receptor (RCR) u obliku membranski vezanih molekula antitijela, kao i brojne površinske CD AG i receptore. B-limfociti mogu prepoznati nativni AG u slobodnom stanju.
Osobitosti:
čine 10-15% limfocita krvi i 20-25% stanica limfnih čvorova.
izražavaju na površini IgD(IgM), HLA II, CD19,20,21,22,40,80/86 itd.
glavna funkcija:
GMO, proizvodnja antitijela određene specifičnosti (Ig G, A, M)
prezentacija antigena T-limfocitima
Razvoj:
pluripotentne matične stanice (CD34 i CD117)
pro-B stanice (ekspresiraju AG i matične stanice (CD34 i CD117), te B-limfociti - CD19 i CD22)
pre-B stanice (sinteza IgM počinje u citoplazmi)
nezrele B stanice (izražavaju IgM na površini)
2. Stanice koje nose receptore za autoAG su uništene.
3. T - stanične zone perifernih limfnih organa:
stanice koje nisu primile signal za preživljavanje od T stanica se uništavaju
4. Limfni folikuli:
Zrele B stanice (izražavaju IgM i IgD, kao i antigene CD21, CD22).
5. Prije susreta s AH, zreli B-limfociti stalno cirkuliraju u krvi između RMC i sekundarnih limfoidnih organa. Nakon sastanka s AG-om, pretvaraju se u plazma stanice proizvode AT (1 milijun molekula/sat), i memorijske stanice.
B-stanični receptor B-limfocita koji prepoznaje antigen građen od membranske molekule imunoglobulina (monomerni IgM ili IgD) i dvije molekule CD79 (a i c). BcR ima transmembranske i intracitoplazmatske segmente koji prenose unutarstanične signale.
Metode određivanja broja i funkcionalne aktivnosti B-limfocita.
Ljudski B-limfociti sposobni su vezati mišje eritrocite i formirati rozete s njima, kao i oblikovati rozete s eritrocitima, senzibiliziranim molekulama antitijela (IgG) i C3b molekulama fragmenta sustava komplementa, što se koristi u laboratorijskoj praksi. Ova svojstva, zajedno s ekspresijom CD 5 molekula, omogućuju identifikaciju subpopulacije B-limfocita.
Proučavanje broja i funkcionalnog stanja B-limfocita B-stanice se nalaze u perifernoj krvi svojim receptorskim aparatom, i to:
a) prisustvom receptora za imunoglobuline i 3. frakciju komplementa- EAC rozeta reakcija; Reakcija stvaranja EAC rozete odvija se u 2 stupnja: prvi
pripremiti reagens koji se sastoji od goveđih eritrocita, antitijela na njih i komplementa, zatim se tako formirani kompleks dodaje limfocitima ljudske krvi. Formira se rozeta koja se izvana ne razlikuje od E-rozeta, ali način dobivanja ukazuje na identifikaciju B-limfocita.
b) prisustvom imunoglobulinskih receptora- reakcija imunofluorescencije; omogućuje otkrivanje receptora imunoglobulina na površini B-limfocita. Za to se koriste antiglobulinski serumi obilježeni fosforima.
c) prisutnošću receptora za eritrocite miša- reakcija stvaranja ME-rozete. Sling reakcija s mišjim eritrocitima pojavljuje se kao rezultat miješanja potonjih s limfocitima periferne krvi.
Funkcionalne karakteristike B-limfocita i količina imunoglobulina različitih klasa. Najčešće korišteni metoda radijalne imunodifuzije u agaru: otopljeni agar se izlije na staklenu ploču koja sadrži antitijela na određenu klasu imunoglobulina. Jažice se izbijaju u agaru u koji se unose uzorci proučavanih seruma. Kao rezultat imunoprecipitacije nastaju radijalne pruge čiji promjer ovisi o koncentraciji odgovarajućeg imunoglobulina. - Određivanje antitijela na autoantigene ili na mikrobe normalne mikroflore.
Određivanje titra specifičnih protutijela koja nastaju u ljudskom tijelu nakon imunizacije cjepivima.
55. Humoralni imunološki odgovor: definicija, faze razvoja. Aktivacija, proliferacija i diferencijacija stanica. eliminacija antigena. T-ovisan i T-neovisan odgovor. Manifestacije primarnog i sekundarnog humoralnog imunološkog odgovora.
GMO faze:
Prezentacija antigena (prepoznavanje, obrada i prezentacija antigena).
Induktivni stadij (prijenos informacija do odgovarajućeg klona B-limfocita, njihova proliferacija i diferencijacija).
Efektorski stadij (sinteza protutijela i stvaranje memorijskih B-limfocita).
T-neovisna aktivacija B-limfocita- izravna stimulacija B-limfocita bez sudjelovanja T-limfocita s T-neovisnim antigenima.
Ovi AG su LPS ili polisaharidi mikroba s linearno ponavljajućim strukturama.
Vežući se za HCR, ili aktiviraju odgovarajući klon B-limfocita (pneumokokni polisaharidi) ili uzrokuju poliklonsku aktivaciju B-limfocita (LPS Gram-bakterija), koji proliferiraju, diferenciraju se u plazma stanice sintetizirajući IgM.
Ne stvaraju se memorijski B-limfociti.
T-ovisna aktivacija B-limfocita- provode T-ovisni antigeni (proteini, bakterije) uz obvezno sudjelovanje T-limfocita.
APC-ovi hvataju antigen, obrađuju ga u peptide niske molekularne težine i, u kombinaciji s molekulom MHC II, prezentiraju ga naivnim T-limfocitima (Tx0), koji s njime stupaju u interakciju s TCR receptorom i CD4 koreceptorom.
Tx0 se aktiviraju, proliferiraju i pretvaraju u efektorske stanice - Tx2.
HRC prepoznaje antigen i stanica ga apsorbira. Nakon obrade također se formira kompleks II klase MHC peptid-molekula, koji B-limfociti prezentiraju Th2 pomagačima.
Interakcija B-T-stanica: Th2 percipiraju signal uz pomoć TCR-a i ko-receptora CD4. Međutim, za potpunu aktivaciju T-helpera potrebna je dodatna stimulacija (kostimulacija) koju provode molekule međustanične interakcije (CD40-CD40L, CD80/86-CD28 itd.). Ovi procesi su također važni za aktivaciju B-limfocita. U nedostatku kostimulacije dolazi do apoptoze T-limfocita.
Aktivirani Th2 proizvodi IL-4, 5, 6, 10, pod čijim utjecajem B-limfociti proliferiraju, pretvaraju se u blaste, a zatim u plazma stanice koje sintetiziraju antitijela. Upravo uz sudjelovanje Tx2 citokina moguće je prebaciti imunoglobulinske gene B-limfocita, što osigurava sintezu imunoglobulina. razne klase.
Neke od blastnih stanica se pretvaraju u Memorijski B-limfociti. Mala populacija stanica nastala je tijekom humoralnog imunološkog odgovora od aktiviranih B-limfocita. Oni preživljavaju u stanju funkcionalnog mirovanja dugi niz godina nakon eliminacije antigena iz organizma. Oni nose "sjećanje" na antigen u obliku HRC-a specifičnih za antigen (uglavnom IgG).
Primarni imunološki odgovor razvija se pri prvom udaru antigena u tijelo nakon latentnog razdoblja (2-3 dana). Prvo se sintetizira IgM (otkriva se nakon 2-3 dana), a zatim IgG (vrhunac 10-14. dana, može ostati u niskom titru tijekom cijelog života). Paralelno, postoji blagi porast razine IgA, IgE, IgD. Primarni imunološki odgovor jenjava 2-3 tjedna nakon izazivanja antigenom. Nakon njega ostaju memorijske stanice i može se dugo održavati razina IgG protutijela u tragovima.
sekundarni imunološki odgovor zbog B-memorijskih stanica dolazi do stimulacije sinteze antitijela brzo (nakon 1-3 dana). Broj protutijela naglo raste, a IgG se odmah sintetizira, čiji su titri višestruko veći nego u primarnom imunološkom odgovoru. Povećava se njihov afinitet (afinitet) prema antigenu. Na sluznicama se značajno povećava razina sekretornih IgA protutijela. Razina IgM antitijela se značajno ne mijenja zbog odsutnosti memorijskih B stanica s IgM receptorom. Vrijeme raspada sekundarnog značajno premašuje trajanje očuvanja antitijela tijekom primarnog imunološkog odgovora.