Serološke metode ispitivanja krvi za dijagnostiku bolesti. Serološke metode istraživanja u dijagnostici parazitskih bolesti Serološka laboratorijska analiza čega

Analiza na sifilis jedna je od najčešćih među laboratorijskim testovima. Testovi za sifilis naširoko se koriste tijekom preventivnih pregleda. Uz pomoć mikroskopije otkriva se uzročnik sifilisa -. Uz pomoć seroloških reakcija potvrđuje se dijagnoza sifilisa, postavlja dijagnoza latentnog sifilisa, prati se učinkovitost liječenja i utvrđuje postotak izlječenja bolesnika.

Dijagnoza sifilisa postavlja se na temelju kliničkih podataka, otkrivanja uzročnika sifilisa u uzorcima materijala i potvrde dijagnoze serološkim metodama istraživanja. Manifestacije sifilisa su brojne i raznolike, zbog čega bolest otkrivaju liječnici različitih specijalnosti. Diferencijalna dijagnoza primarnog sifilisa provodi se s nizom bolesti.

Riža. 1. Na fotografiji je primarna manifestacija sifilisa tvrdi šankr.

Protutijela na blijedu treponemu i serološka dijagnostika

Kada su zaraženi sifilisom, u tijelu pacijenta stvaraju se antitijela. Serološka dijagnoza pomaže liječniku u proučavanju dinamike stvaranja protutijela u tijelu pacijenta sa sifilisom u početne faze bolesti, tijekom razdoblja liječenja i nakon njegovog završetka, riješiti pitanje recidiva bolesti kod pacijenta ili ponovne infekcije (ponovne infekcije), dijagnosticirati sifilis u masovnim medicinskim uvjetima.

Antitijela na blijedu treponemu IgM

Antitijela IgM su prva koja se proizvode nakon infekcije. Počinju se otkrivati ​​pomoću seroloških reakcija od drugog tjedna nakon infekcije. U 6-9 tjedana bolesti njihov broj postaje maksimalan. Ako pacijent nije liječen, antitijela nestaju nakon šest mjeseci. IgM antitijela nestati nakon 1-2 mjeseca. nakon, nakon 3 - 6 mjeseci. - nakon liječenja kasnog sifilisa. Ako se zabilježi njihov rast, to služi ili ukazuje na ponovnu infekciju. Molekule IgM su velike i ne prolaze kroz placentu do fetusa.

Protutijela na blijedu treponemu IgG

Antitijela imunoglobulina IgG pojavljuju se krajem prvog mjeseca (4. tjedna) od trenutka infekcije. Titar im je viši od titra IgM. IgG perzistiraju nakon liječenja dosta dugo.

Nespecifična antitijela

Postoje mnoge serološke reakcije. To je zbog antigene višestrukosti blijede treponeme. U krvnom serumu bolesne osobe, različite faze sifilisa, osim specifičnih, stvaraju se i određena nespecifična protutijela - aglutinini, fiksatori komplementa, imobilizini, protutijela koja uzrokuju imunološku fluorescenciju, precipitini i dr. Serološke reakcije za dokazivanje nespecifičnih protutijela imaju relativnu specifičnost, reakcije (CSR ).

Lažno pozitivni testovi na sifilis

Posebnost netreponemski testovi dobivaju lažno pozitivne reakcije. Reaginska antitijela, koja se stvaraju u ljudskoj krvi protiv kardiolipinskog antigena, registrirana su ne samo kod sifilisa, već i kod drugih bolesti: kolagenoza, hepatitis, bolesti bubrega, tireotoksikoza, onkološka oboljenja, zarazne bolesti(guba, tuberkuloza, bruceloza, malarija, tifus, šarlah), tijekom trudnoće i menstruacije, pri uzimanju masne hrane i alkohola. Uočeno je da se s godinama povećava broj lažno pozitivnih reakcija.

Riža. 2. Fotografija prikazuje primarni sifilis kod žena.

Laboratorijska dijagnostika sifilisa pomoću seroloških testova

Serološke pretrage na sifilis dijele se na treponemske i netreponemske.

1. Netreponemski testovi

Kao antigen u ovoj skupini testova koristi se kardiolipinski antigen. Najbrojniji su lipidni antigeni uzročnika sifilisa. Oni čine 1/3 suhe mase stanice. Uz pomoć ne-treponemskih testova otkrivaju se reagin antitijela koja se proizvode protiv kardiolipinskog antigena. U ovu skupinu spadaju reakcija vezanja komplementa (RSKcard), reakcija mikroprecipitacije (RMP), brzo određivanje reagina u plazmi (RPR) itd. Netreponemskim testovima provodi se primarni probir na sifilis (pregled populacijskih skupina), a mogućnost dobivanja rezultata u kvantitativnoj varijanti omogućuje korištenje ovih testova za praćenje učinkovitosti liječenja. Pozitivne rezultate netreponemskih testova treba potvrditi treponemskim testovima. Posebnost netreponemskih testova je stvaranje lažno pozitivnih reakcija.

2. Treponemski testovi

Treponemski testovi koriste antigene treponemskog podrijetla izolirane iz kulture treponema pallidum. Uz njihovu pomoć potvrđuju se pozitivni rezultati netreponemskih testova. Skupina uključuje: RSKtrep - reakcija fiksacije komplementa, RIF - reakcija imunofluorescencije i njezine modifikacije, RIT, RIBT - reakcija imobilizacije blijede treponeme, RPHA - reakcija pasivne hemaglutinacije, ELISA - enzimski imunotest.

3. Testovi na sifilis pomoću rekombinantnih antigena

Antigeni za ovu skupinu testova dobivaju se genetskim inženjeringom i koriste u reakcijama - TPHA i ELISA, u imunobloting (IB) analizama i imunokromatografskim analizama.

Riža. 3. Skup seroloških testova koristi se za dijagnosticiranje sifilisa.

Dijagnoza sifilisa pomoću netreponemskih testova

Za otkrivanje sifilisa koriste se netreponemalni testovi ili kompleks seroloških reakcija (CSR). Serološka dijagnostika će se primjenjivati ​​od 5. tjedna od trenutka infekcije ili od 2-3 tjedna od pojave. Protutijela se otkrivaju u gotovo svih bolesnika sa svježim primarnim,. Serološke reakcije pozitivne su u 70 - 80% bolesnika s tercijarnim latentnim sifilisom u 50 - 60% slučajeva.

Serološke reakcije korištenjem ne-treponemskih testova mogu dati lažno pozitivne rezultate.

Riža. 4. Vađenje krvi za testiranje na sifilis.

Reakcija vezanja komplementa (kartica RSK, KSK s KA, Wassermanova reakcija)

Wassermanova reakcija (RW, RV), koju je izumio A. Wasserman prije više od 100 godina, danas je doživjela mnoge promjene, međutim, kao danak tradiciji, zadržala je svoje ime do danas. Test fiksacije komplementa s kardiolipinskim antigenom namijenjen je ne samo otkrivanju protutijela, već se provodi i u kvantitativnoj verziji - s različitim razrjeđenjima seruma, što omogućuje praćenje učinkovitosti liječenja. Niska osjetljivost i specifičnost, dobivanje lažno pozitivnih rezultata su negativni aspekti ove vrste istraživanja.

Suština Wassermanove reakcije je sljedeća: antigeni koji se koriste u formuliranju Wassermanove reakcije, u slučaju prisutnosti protutijela na uzročnike sifilisa u ljudskoj krvi, pomoću komplimenta, vežu se za njih. i talog. Intenzitet reakcije označen je znakom (+). Reakcija može biti negativna (-) - bez taloga, dvojbena (mali sediment ili +), slabo pozitivna (++), pozitivna (+++) i oštro pozitivna (++++).

Osjetljivija je modificirana Wassermannova reakcija - Kolmerova reakcija. Uz njegovu pomoć, antitijela se otkrivaju u serumu, gdje je Wassermanova reakcija dala negativan rezultat.

S izrazito pozitivnim reakcijama provodi se kvantitativno određivanje reagina, za koje se koristi serum u razrjeđenjima od 1:10 do 1:320, što omogućuje upotrebu ove vrste studije za praćenje učinkovitosti liječenja. Na primjer, smanjenje titra protutijela i njihova naknadna seronegativnost (dobivanje negativnih rezultata) ukazuje na uspješno izlječenje bolesti.

Riža. 5. Test krvi na sifilis - Wassermanova reakcija.

Mikroreakcija taloženja (MPR)

Precipitacijska mikroreakcija koristi se za masovna ispitivanja pojedinačne grupe populacije, dijagnosticiranje sifilisa i praćenje učinkovitosti liječenja. Za provođenje ove vrste istraživanja potrebna je mala količina materijala koji se proučava. Mikroreakcija precipitacije temelji se na imunološkoj reakciji antigen-antitijelo. U slučaju prisutnosti antitijela u krvnom serumu ispitanika, kompleks antigen-antitijelo taloži se uz stvaranje ljuskica. Reakcija se provodi u jažicama posebne staklene ploče. Procjenjuje se prema intenzitetu istaloženog taloga i veličini pahuljica u (+) kao Wassermanova reakcija. Prilikom ispitivanja trudnica, donatora i za praćenje učinkovitosti liječenja ne koristi se. VDRL i RPR su vrste mikroreakcija.

Riža. 6. Prikaz reakcije taloženja u kapi na staklu.

Riža. 7. Test krvi za sifilis - reakcija mikroprecipitacije.

Riža. 8. Pribor za brzo određivanje reagina u plazmi (Test za sifilis RPR).

Svi pozitivni testovi dobiveni tijekom nespecifičnih seroloških reakcija zahtijevaju potvrdu specifičnim reakcijama – treponemskim testovima.

Dijagnoza sifilisa pomoću treponemskih testova

Pri provođenju treponemskih testova koriste se antigeni treponemskog podrijetla. Njihovo negativna strana je nemogućnost korištenja za kontrolu učinkovitosti liječenja, dobivanje pozitivnih rezultata kod spirohetoze i neveneričnih treponematoza te dobivanje lažno pozitivnih rezultata kod onkološke bolesti, lepra, neke endokrine patologije. Testovi kao što su RPHA, ELISA i RIF ostaju pozitivni mnogo godina nakon izlječenja sifilisa, au nekim slučajevima i doživotno.

RIBT i RIF najspecifičniji su od svih seroloških testova koji se koriste za dijagnosticiranje sifilisa. Omogućuju vam razlikovanje lažno pozitivnih reakcija, identificiranje kasnih oblika sifilisa koji se javljaju s negativnim reakcijama. Uz pomoć RIBT-a prepoznaju se lažno pozitivne reakcije u trudnica kada je potrebno riješiti problem infekcije djeteta.

Reakcija imobilizacije treponeme pallidum (RIBT, RIT)

Bit reakcije je da antitijela u krvnom serumu pacijenta imobiliziraju blijedu treponemu. Reakcija s imobilizacijom do 20% patogena smatra se negativnom, slabo pozitivnom - 21 - 50%, pozitivnom - 50 - 100%. RIBT ponekad daje lažno pozitivne rezultate. Test je složen i dugotrajan, ali je nezaobilazan pri izvođenju diferencijalna dijagnoza latentni oblici bolesti i lažno pozitivni rezultati seroloških reakcija, uključujući i trudnice. RIBT daje 100% pozitivan rezultat u sekundarnom, ranom i kasnom sifilisu, u 94 - 100% slučajeva - u drugim oblicima sifilisa.

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Bit reakcije je da blijede treponeme (antigeni), u kombinaciji s antitijelima obilježenim fluorokromima, emitiraju žuto-zeleni sjaj u fluorescentnom mikroskopu. Rezultat se vrednuje znakom (+). Uz pomoć RIF-a otkrivaju se imunoglobulini klase A. Reakcija imunofluorescencije postaje pozitivna prije nego Wassermanova reakcija. Uvijek je pozitivan kod sekundarnog i latentnog sifilisa, u 95-100% slučajeva pozitivan je kod tercijarnog i kongenitalnog sifilisa. Tehnika provođenja ove vrste studije jednostavnija je od one RIBT-a, ali je nemoguće zamijeniti RIF s RIBT-om, budući da je ova reakcija inferiorna u odnosu na RIBT u specifičnosti. RIF-10 (RIF modifikacija) je osjetljiviji, RIF-200 i RIF-abs su specifičniji.

Riža. 9. Test krvi za sifilis - reakcija imunofluorescencije (RIF).

Treponema pallidum test imunološke adhezije (TRIPBT)

Bit reakcije je da blijede treponeme senzibilizirane serumom bolesnika u prisutnosti komplementa prianjaju na površinu eritrocita. Dobiveni kompleksi precipitiraju tijekom centrifugiranja. Osjetljivost ovaj test i specifičnosti su bliski RIF-u i RIBT-u.

Enzimski imunološki test za sifilis (ELISA)

Uz pomoć ELISA-e određuju se imunoglobulini klase M i G. Metoda IgM - ELISA može se koristiti kao test probira i potvrda. Osjetljivost i specifičnost ELISA testa slične su RIF-u. Kod sifilisa, ELISA daje pozitivne rezultate od trećeg mjeseca infekcije i ostaje pozitivan dosta dugo (ponekad i cijeli život).

Riža. 10. ELISA analizator.

Reakcija pasivne (indirektne) hemaglutinacije (RPHA)

TPHA se temelji na sposobnosti lijepljenja (hemaglutinacija) eritrocita na koje su adsorbirani antigeni treponeme pallidum u prisutnosti seruma bolesnika. RPHA se koristi za dijagnosticiranje svih oblika sifilisa, uključujući i latentni. Kada se primijeni Visoka kvaliteta antigen, ova vrsta serološke reakcije premašuje sve druge testove u specifičnosti i osjetljivosti.

Riža. 11. RPHA se koristi za dijagnosticiranje svih oblika sifilisa.

Riža. 12. Analiza za sifilis - reakcija pasivne (neizravne) hemaglutinacije (shema).

Riža. 13. Pojava obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno epruvete, ukazuje na pozitivnu reakciju. U slučaju kada se eritrociti talože u stupcu ("gumb") u sredini dna epruvete, govore o negativnoj reakciji.

Riža. 14. Ispitivanje RPGA u laboratorijskim uvjetima.

Mikrobiološka dijagnostika

Uz serološku dijagnostiku, metoda za otkrivanje blijedih treponema ( mikrobiološku dijagnostiku) igra važnu ulogu, posebno u razdoblju seronegativnog sifilisa, kada još nema antitijela u krvi, ali već postoje prve manifestacije svježeg primarnog sifilisa (tvrdi šankr).

Biološki materijal za studiju je iscjedak s površine tvrdih ulkusa (šankri), sadržaj pustularnih sifilida, plakajućih i erozivnih papula, punktati zaraženih limfnih čvorova, cerebrospinalna tekućina i amnionska tekućina te krv za PCR.

Najbolja metoda za otkrivanje uzročnika sifilisa je proučavanje biološkog materijala u tamnom polju mikroskopa. Ova tehnika omogućuje vam da vidite blijedu treponemu u živom stanju, da proučite njezine značajke strukture i kretanja, da ih razlikujete patogeni agensi od saprofita.

Riža. 15. Analiza na sifilis - mikroskopija u tamnom polju.

Riža. 16. Pri proučavanju suhih razmaza koristi se bojanje po Romanovsky-Giemsa. Blijede treponeme mrlja u isto vrijeme u ružičasta boja, sve ostale vrste spiroheta - u ljubičastoj boji.

Detekcija blijedih treponema mikroskopijom u tamnom polju apsolutni je kriterij za konačnu dijagnozu sifilisa.

Riža. 17. Za otkrivanje bakterija koristi se reakcija imunofluorescencije (RIF) - treponemski test. Specifični kompleks antigen – antitijelo u kombinaciji sa specifičnim serumom označenim fluorokromom, pod svjetlom fluorescentnog mikroskopa, daje bakterijama zelenkasti sjaj.

Riža. 18. Uzročnici sifilisa jasno su vidljivi u razmazima pripremljenim po metodi Levaditi (impregnacija srebrom). Blijedo tamne treponeme na pozadini žute boje stanica zaraženih tkiva.

Riža. 20. Fotografija prikazuje koloniju blijedog treponema. Dobivanje kulture bakterija je teško. Oni praktički ne rastu na umjetnom hranjive podloge. Na podlozi sa serumom konja i kunića kolonije se pojavljuju 3.-9. dana.

PCR za sifilis

Učinkovita i obećavajuća danas je tehnika provođenja polimeraze lančana reakcija. PCR za sifilis omogućuje vam da dobijete rezultat u roku od nekoliko sati, a barem nekoliko patogena može biti prisutno u materijalu prikupljenom za dijagnozu.

Riža. 21. PCR za sifilis omogućuje vam otkrivanje DNK ili njegovih fragmenata blijede treponeme.

Osjetljivost ove metode istraživanja ovisi o prisutnosti blijedih treponema u biološkom materijalu i doseže 98,6%. Specifičnost ovog testa uvelike ovisi o pravi izbor ciljeve za pojačanje tijekom dijagnostike i doseže 100%.

Istodobno, zbog nedovoljno proučenih komparativnih karakteristika osjetljivosti i specifičnosti izravnih metoda za dijagnosticiranje sifilisa i PCR-a, ova metoda ispitivanja u Ruskoj Federaciji za dijagnosticiranje bolesti još nije odobrena.

PCR za sifilis dopušten je samo u nekim slučajevima, kao npr dodatna metoda dijagnoza kongenitalnog sifilisa, neurosifilisa, s poteškoćama u dijagnosticiranju sifilisa pomoću seroloških metoda istraživanja u bolesnika s HIV-om.

Riža. 22. Detekcija DNA treponema pallidum pomoću PCR-a ukazuje ili na prisutnost živih bakterija ili na ostatke mrtvih bakterija, ali sadrže dodatne kopije pojedinačnih dijelova kromosomske DNA sposobne za stvaranje dodatnih kopija.

Što pokazuje serološka analiza krv? Dijagnostičke mjere Ovo je najvažniji korak u liječenju svake bolesti. Uspjeh liječenja ne ovisi samo o propisanim lijekovima, već iu velikoj mjeri o tome koliko je ispravno postavljena dijagnoza.

Osim toga, dijagnoza pomaže u sprječavanju komplikacija i popratne bolesti. Uz pomoć serološke analize krvi bolesnika otkriva se prisutnost protutijela i antigena. Studija pomaže pronaći mnoge bolesti, odrediti njihovu fazu i kontrolirati tijek liječenja.

Što je serologija?

Serologija je grana imunologije koja proučava reakcije antigena na antitijela. Ovaj odjeljak medicina se bavi proučavanjem krvne plazme i njezinih imunoloških karakteristika.

Danas je serološki test krvi na antitijela pouzdan način otkrivanja virusa humane imunodeficijencije, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosivih bolesti i drugih bolesti opasnih po život. Razmotrimo u kojim je slučajevima propisano.

Indikacije za termin

Serološki test krvi je neophodan za identifikaciju uzročnika bolesti u slučaju poteškoća u postavljanju dijagnoze.

Za izvođenje ove reakcije, antigeni patogena ubrizgavaju se u plazmu, a zatim laboratorijski pomoćnik proučava proces koji je u tijeku. Ili provode obrnutu reakciju: antitijela se ubrizgavaju u zaraženu krv kako bi se utvrdila specifična pripadnost patogena.

Opseg primjene

Ova se studija koristi u raznim granama medicine. Uz pomoć ove reakcije otkrivaju se specifične stanice i antitijela koja proizvodi tijelo u svrhu borbe protiv infekcija i virusa.

Osim toga, pomoću serološke metode određuje se krvna grupa osobe.

Slična serološka pretraga krvi koristi se u ginekologiji za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti. Ova metoda se također koristi za sveobuhvatne ankete trudnice (otkrivanje toksoplazmoze, HIV-a, sifilisa itd.). Prolazak ovog testa je obavezan prilikom registracije u antenatalnoj klinici.

U djece se serološki test koristi za potvrdu dijagnoze takozvanih "dječjih" bolesti (vodene kozice, ospice, rubeola, itd.) U slučaju da simptomi nemaju izražene manifestacije i nemoguće je identificirati bolest analizirajući kliničke indikacije.

Otkrivanje spolnih bolesti

Za venereologe ovo testiranje je doista neophodno i omogućuje vrlo točnu dijagnozu.

Uz zamagljenu kliničku sliku, serološki test krvi za sifilis, giardijazu, ureaplazmozu, klamidiju, herpes i druge bolesti omogućuje vam brzo prepoznavanje prisutnosti protutijela.

Virusne i zarazne bolesti

Serološku analizu aktivno koriste gastroenterolozi, hepatolozi i stručnjaci za zarazne bolesti za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa.

Dešifriranjem serološke pretrage krvi moguće je odrediti stadij tijeka bolesti i odgovoriti na pitanje koliko je hospitalizacija potrebna u ovaj trenutak. Kako se pravilno pripremiti?

Priprema za predaju analize

Serološke pretrage krvi rade se u javnim i komercijalnim klinikama. Prednost treba dati laboratoriju sa suvremenom opremom i kvalificiranim osobljem.

Biološki uzorci za istraživanje mogu biti slina i izmet, no u većini slučajeva koristi se venska krv bolesnika. Krv za serološku pretragu uzima se iz kubitalna vena u laboratorijskim uvjetima. Prije polaganja testa trebate se posavjetovati sa svojim liječnikom o pripremi za ovaj postupak.

Da biste se pripremili za isporuku analize za serološku studiju, morate slijediti nekoliko jednostavnih pravila.

Krv se uzima u mirnom stanju prije jela, odnosno natašte. Prije toga ne biste se trebali podvrgavati drugim studijama, poput rendgenskih zraka, ultrazvuka itd.

Nekoliko tjedana prije davanja krvi potrebno je isključiti upotrebu antibakterijskih i nekih drugih lijekova. Određene preporuke u ovom slučaju ovise o bolesti za koju se radi pretraga. Na primjer, testiranje na hepatitis uključuje izbjegavanje masne hrane i alkohola 48 sati prije postupka.

Reakcija fluorescencije

Među vrstama seroloških reakcija postoji reakcija fluorescencije. Ova tehnika koristi reagens koji ističe antitijela u krvnom serumu.

Postavljanje serološke reakcije izravnog tipa uključuje označavanje specifičnih protutijela fluorescentnom tvari. Ova reakcija je najbrža i odvija se u jednom koraku.

Druga opcija za provođenje takve analize naziva se neizravno ili RNIF. Provodi se u dvije faze. U prvom koraku antitijela nisu obilježena fluorescentnim oznakama, au drugom koraku se koriste odgovarajuće obilježena antitijela za detekciju antigena i antitijela. Luminescencija se javlja tek nakon što se veže na specifično antitijelo.

Što pokazuje serološka pretraga krvi? Rezultat cijelog postupka procjenjuje se posebnim uređajem koji analizira snagu zračenja, otkriva oblik i veličinu predmeta koji se proučava. Uzročnici zaraznih bolesti otkrivaju se rezultatom čija je pouzdanost 90-95%, ovisno o vrsti i stadiju patologije.

Vezani imunosorbentni test

Ove vrste serologije koriste jedinstvene, stabilne reagense. Čini se da se označene tvari lijepe na željena antitijela. Kao rezultat toga, dobivamo kvalitativni ili kvantitativni rezultat.

Ako se ne pronađu izraženi markeri, rezultat će se smatrati negativnim. Ako se otkrije prisutnost protutijela u biološkim uzorcima tijekom kvalitativne studije, tada se rezultat analize smatra pozitivnim. Na kvantifikacija analiza stanica daje točniji rezultat.

Analizirajući pokazatelje analize (na primjer, količinu otkrivenih stanica), stručnjak utvrđuje je li bolest na početno stanje, u akutnom stadiju ili je pogoršan kronični oblik patologija. Da bi postavio dijagnozu, liječnik uzima u obzir ne samo podatke serološke studije, već i klinička slika bolesti.

Značajke ovog testa

Provođenje ove analize nije uvijek u mogućnosti dati 100% sigurnost da je određena bolest otkrivena. Događa se da rezultati mogu biti dvosmisleni i potrebni su drugi postupci.

Na primjer, tijekom testa na brucelozu, serum se testira na samozadržavanje bez antigena. To značajno povećava pouzdanost testiranja. Analiza na brucelozu može biti pozitivna ili negativna, a također može izazvati sumnju.

Ako dobijete sumnjive rezultate koji nemaju nedvosmisleno tumačenje, preporučuje se ponovno polaganje analize. Osim toga, bruceloza se može otkriti kao rezultat hemokulture pregledom Koštana srž i cerebrospinalnu tekućinu.

Prednosti serološke pretrage krvi

Dijagnostičke tehnike pomoću seroloških testova naširoko se koriste u suvremenom svijetu medicinska praksa. To se osobito često radi pri određivanju virusnih i zaraznih patologija.

Isti se testovi koriste u geografskom probiru i liječničkom pregledu kako bi se spriječilo epidemiološko širenje infekcije.

Prednosti metode uključuju:

• Visoka razina samopouzdanja.
• Brz odgovor i rezultati. Rezultati RSC-a poznati su unutar 24 sata. U posebnoj situaciji, u bolničkom okruženju, analiza će biti spremna za nekoliko sati.
• Praćenje razvoja bolesti i učinkovitosti terapije.
• Niska cijena i dostupnost za pacijente.

Nedostaci metode

Međutim, serološke studije imaju i svoje nedostatke.

To uključuje činjenicu koju analiza treba uzeti u obzir trajanje inkubacije bolesti kako bi se dobila pouzdanija slika.

Na primjer, određivanje herpes simplexa prvog ili drugog tipa moguće je tek nakon 14 dana od trenutka infekcije. Analiza na prisutnost virusa imunodeficijencije provodi se nakon 30 dana, nakon 90 dana i šest mjeseci nakon kontakta sa zaraženom osobom.

Naravno, na pouzdanost rezultata može utjecati i ljudski faktor: zanemarivanje pravila za pripremu uzorkovanja krvi ili pogreška laboratorijskog pomoćnika tijekom reakcije.

Statistički, pogrešan rezultat može se dobiti u 5% slučajeva. Iskusni liječnik, prilikom pregleda pacijenta, proučavajući kliničku sliku, u većini slučajeva može izračunati učinjenu pogrešku.

Stranica pruža popratne informacije samo u informativne svrhe. Dijagnostika i liječenje bolesti trebaju se provoditi pod nadzorom stručnjaka. Svi lijekovi imaju kontraindikacije. Potreban savjet stručnjaka!

Serološki analiza krvi je metoda laboratorijskog ispitivanja određenih antigena ili protutijela ( specifične bjelančevine) u serumu pacijenta, na temelju imunološke reakcije organizam. Ova metoda primjenjuje se kada dijagnostika zarazne bolesti za otkrivanje prisutnosti protutijela u krvi bolesnika na određenu vrstu virusa ili bakterije, kao i za određivanje krvne grupe.

Materijal koji se proučava

Prije svega, za serološku analizu koristi se biološki materijal prikupljen od bolesnika:

• krvni serum
• slina
• fekalne tvari

U nekim slučajevima ispituje se materijal izoliran iz određenih okolišnih objekata:

• tlo

Metoda analize ili uzorkovanja krvi

Ova analiza ne zahtijeva posebnu pripremu pacijenta. Vađenje krvi provodi se ujutro na prazan želudac i provodi se u sobama za liječenje medicinske ustanove, prema općeprihvaćenim hematološkim metodama. Za serološke pretrage krv se uzima na dva načina: venske krvi uzima se iz kubitalne vene pacijenta, a iz kapilarne krvi prstenjak. Krv se stavlja u sterilne zatvorene epruvete.

Značajke transporta krvi i skladištenja seruma

Odmah nakon vađenja krv se transportira u poseban laboratorij, gdje se isti dan priprema serum. Čuvanje seruma dopušteno je ne više od 4-6 dana u hladnjaku na temperaturi od 2-4 stupnja. Ako je potrebno dulje skladištenje, serum se zamrzava. Kako bi se izbjeglo narušavanje kvalitete seruma, dopušteno ga je jednom zamrznuti i, sukladno tome, odmrznuti. Tijekom dugotrajnog skladištenja protutijela gube svoja svojstva i postaju djelomično neaktivna, a najosjetljiviji na smrzavanje su imunoglobulini klase M. Nakon odmrzavanja seruma, potrebno ga je dobro promiješati do homogene mase, što pomaže vratiti koncentraciju antitijela sadržanih u ovom serumu.

Za što se koristi serologija?

Serološke metode laboratorijska dijagnostika koristi se za otkrivanje bolesti kao što su ehinokokoza, trihineloza, toksokarijaza, opistorhoza, cisticerkoza, toksoplazmoza, amebijaza, giardijaza, utvrditi učinkovitost tijeka liječenja i, konačno, otkriti ponovna bolest nakon potpunog oporavka bolesnika.

Osnovne metode serološke dijagnostike

Reakcija imunofluorescencije (RIF)

Ova reakcija je neizravna verzija serološke studije, odnosno provodi se u dvije faze. U prvoj fazi detektira se potrebno antitijelo u cirkulirajućem kompleksu antigen-antitijelo pomoću antiglobulina, koji je po strukturi sličan proteinima imunološkog seruma. Identifikacija željenog antitijela moguća je i proučavanjem prethodno pripremljenog antigenskog preparata pod fluorescentnim mikroskopom, bez upotrebe antiglobulina.

Imunofluorescentna reakcija je vrlo dugotrajan proces koji zahtijeva puno vremena i odgovornosti stručnjaka. Reakcija počinje pripremom otopina, zatim se serumi i njihovi kontrolni uzorci podvrgavaju titraciji ( postupak koji omogućuje određivanje sadržaja određene tvari postupnim miješanjem ispitivane otopine s kontroliranom količinom reagensa). Prethodno pripremljena razrjeđenja i njihovi kontrolni uzorci pažljivo se nanose na stakalce s antigenom. Zatim se pripravci podvrgavaju inkubaciji, nakon čega slijedi njihovo pranje i sušenje na zraku. Na predmetna stakalca koja sadrže antigen nanosi se tanak sloj antiseruma, nakon čega se preparati ponovno inkubiraju i ponavlja cijeli prethodni lanac radnji, a završava sušenjem preparata. Kao rezultat toga, preparat na stakalcu se tretira glicerolom i ispituje pod fluorescentnim mikroskopom.

Rezultati reakcije ocjenjuju se na skali od četiri točke, koja je karakterizirana intenzitetom površinskog žuto-zelenog sjaja antigenskih stanica:
+ vrlo slab sjaj stanice, primjetan samo na njenoj periferiji
++ slab sjaj periferije stanice, ali s jasno vidljivom zelenom nijansom
+++/++++ svijetli sjaj Zelena boja periferija stanica
Reakcijskim titrom smatra se takvo razrjeđenje seruma gdje najmanje 50% antigenskih stanica pokazuje jasan površinski sjaj, odnosno rezultat reakcije +++ ili ++++ . Vrijednost raspona reakcije je od 1/80 do 1/100.

Intenzitet reakcije ovisi o broju istaloženih eritrocita na dnu formiranih jažica:
– negativna reakcija, koju karakterizira taloženje eritrocita na dnu jažica u obliku malog prstena s glatkim rubovima ili "gumbima"
+ niskog intenziteta, ovu reakciju karakteriziraju male pojedinačne naslage na dnu rupe. Neaglutinirani eritrociti formiraju "mali prsten" u središtu jažice
++ srednjeg intenziteta, karakterizira ga stvaranje "širokog gustog prstena" neaglutiniranih eritrocita na dnu jažice
+++ intenzivna reakcija, aglutinirani eritrociti stvaraju tzv. "kišobrane" u čijem se središtu jasno vide prstenovi koje čine nataloženi neaglutinirani eritrociti.
++++ oštro intenzivna reakcija u kojoj su svi eritrociti aglutinirani i, formirajući "kišobrane", oblažu dno rupa.
Titar ove reakcije smatra se zadnjim razrjeđenjem seruma, u kojem se očita aglutinacija eritrocita otkriva najmanje +++ , odnosno s intenzivnom ili oštro intenzivnom reakcijom.

Pouzdanost i kvaliteta metoda serološka dijagnoza ovise o organizaciji provedene unutarnje i vanjske laboratorijske kontrole, koja se sastoji od nekoliko neovisni postupci dizajniran za procjenu kvalitete rezultata analize.

Serologija(od latinskog serum - "serum", logos - "znanost") je grana imunologije koja proučava specifičnosti interakcije serumskih protutijela s antigenima.

Osnova dijagnoze je otkrivanje specifičnih protutijela koja nastaju kao reakcija na infekciju organizma određenim antigenom. Ovisno o tome koja se protutijela nalaze u krvi, zaključuje se o prirodi infekcije, a količina tih protutijela ukazuje na stupanj aktivnosti zarazne bolesti.

Proučava se materijal uzet za istraživanje u sklopu serološke pretrage krvi i drugi opasne bolesti- herpes, crijevne infekcije, rubeola, toksoplazmoza, klamidija, ospice, klamidija. Osim toga, ova studija vam omogućuje da odobrite krvnu grupu, odredite specifičnost proteina.

Dakle, provode se serološke studije:

• ako je postavljena preliminarna dijagnoza i sada je potrebna njena potvrda. Studija se temelji na dodatku odgovarajućeg antigena krvnom serumu. Odgovor vam omogućuje da donesete zaključak o prisutnosti ili odsutnosti bolesti;
• ako se dijagnoza ne može postaviti. Kao dio studije, antitijela se dodaju u krv i određuje se vrsta antigena, što omogućuje određivanje specifične bolesti;
• ako je potrebno.

Dakle, u postavljanju dijagnoze ili propisivanju najviše pomaže serološka pretraga krvi učinkovito liječenje- uz minimalne vremenske i financijske troškove.

Prednosti seroloških studija uključuju:

• sposobnost otkrivanja patoloških mikroorganizama u rani stadiji infekcije;
• kontrola razvoja bolesti i razine učinkovitosti terapije;
• nema potrebe za posebnom pripremom prije uzimanja biomaterijala;
• učinkovitost. Rezultat će biti dostupan za dva do tri sata, što u uvjetima stacionarno liječenje jako važno;
• pristupačnost reagensa, što omogućuje uzorkovanje onoliko često koliko je potrebno;
• nema kontraindikacija.

Kako se izvodi serološki test?

Uzimanje krvi vrši se iz kubitalne vene. Važna točka- krv se ne uzima štrcaljkom, već gravitacijom - igla se uvodi u venu bez šprice i skuplja se do pet ml krvi u epruvetu. Postupak se provodi ujutro.

Ovisno o reakcijama koje su u osnovi studije, postoji nekoliko vrsta postupaka:

1. reakcija neutralizacije. Na temelju sposobnosti protutijela imunološkog seruma da reagiraju kao neutralizirajuće sredstvo na mikroorganizme ili toksine, sprječavajući ih negativan utjecaj na tijelu;
2. reakcija aglutinacije. Može biti izravno ili neizravno. U prvom slučaju, govorimo o proučavanju krvnog seruma na prisutnost antitijela (ubijeni mikrobi se bacaju u materijal, a reakcija se procjenjuje - ako postoji talog u obliku pahuljica, reakcija je pozitivna) , neizravna reakcija na temelju uvođenja eritrocita s adsorbiranim antigenima u materijal (nazubljeni sediment ukazuje na pozitivnu reakciju);
3. reakcija taloženja. Otopina antigena nanosi se na imunološki serum (djeluje kao tekući medij). Koristi se topljivi antigen. Ako se kompleks antigen-antitijelo taloži, reakcija se smatra pozitivnom;
4. reakcija komplementa. Opseg — otkrivanje zaraznih bolesti. Aktivira se komplement i ispituju se reakcije;
5. reakcija s obilježenim antigenima i antitijelima. Temelji se na činjenici da tkivni antigeni ili mikrobi, obrađeni na poseban način, počinju emitirati svjetlost pod utjecajem UV zraka. Metoda se široko koristi ne samo u dijagnostici antigena, već i za određivanje hormona, enzima i lijekova.

Potrebno je pripremiti se za test: u četiri dana pacijent mora odbiti uzimanje lijekova za srce, također morate isključiti alkohol u bilo kojoj od njegovih manifestacija, začinjenu i masnu hranu, slatkiše, ograničiti fizički napor i izbjegavati stres.

Ako se ne pridržavate ovih pravila, povećava se rizik od lažno pozitivnog rezultata. Prije propisivanja druge pretrage liječnik mora saznati što je pacijent radio dan prije zahvata i dati preporuke o odgovarajuću pripremu na anketu.

Serološka analiza: transkript

Serološki test krvi - analiza koja vam omogućuje određivanje / potvrdu vrste zaraznog agensa, pomaže stručnjaku da postavi dijagnozu. Ovo je nezamjenjiva pomoć ako liječnik ne može pronaći terapija lijekovima jer uzročnici razne bolesti različita osjetljivost na djelovanje specifičnih lijekova i antibiotika.

Nakon završetka postupka prikupljanja materijala, laboratorijski pomoćnici prelaze na sljedeću fazu - dešifriraju pokazatelje. Dakle, ako se antitijela ne pronađu u krvi pacijenta, može se zaključiti da u tijelu nema infekcija - rezultat analize u ovom slučaju je pozitivan.

Ali ovo stanje stvari je prilično iznimka od pravila: ako postoje simptomi bolesti, serološke studije otkrivaju i dokazuju prisutnost ozbiljne patologije u tijelu.

Prvo se uz pomoć analize pronađu patogeni u tijelu, zatim se procjenjuje količina protutijela, na temelju čega se donosi zaključak o ozbiljnosti razvoja infekcije.

Serološko testiranje na hepatitis, HIV, sifilis: značajke

Sifilis . Prilikom testiranja na sifilis, stručnjaci traže proteine ​​koji su odgovorni za ulazak ljudsko tijelo uzročnik infekcije - govorimo o blijedom treponemu. U ovom slučaju, krvni serum djeluje kao biološki materijal.

. Virusni hepatitis- ozbiljne zarazne bolesti, čija opasnost leži u činjenici da su dovoljno dugo vremena može živjeti u tijelu a da se ni na koji način ne pokaže. Bolest je moguće prepoznati u ranoj fazi, kada je lakše izlječiva, analizom markera - markeri se pojavljuju u krvi nakon prebolijevanja ili uvođenja cjepiva.

Treba razumjeti da je identifikacija uzročnika moguća tek 1,5-2 mjeseca nakon infekcije. Ako analizu uzima trudnica, moguć je lažno pozitivan rezultat.

Preporučujemo da pogledate medicinsku stranicu https://tabletix.ru/. Na stranici ćete naći korisna informacija, liječnička mišljenja.
Ako primijetite jedan ili više dolje navedenih simptoma, trebali biste razmotriti poduzimanje serološkog testa:

• povraćanje;
• slab apetit ili nedostatak;
• bezrazložna impotencija tijela, prekomjerni rad;
• žućkasti ten;
• promjena boje izmeta i urina.

HIV. Ako je pokazao pozitivan rezultat, to ne znači da je pacijent zaražen AIDS-om. Ako se infekcija dogodila nedavno (prije ne više od dva mjeseca), prisutnost protutijela ne dopušta određivanje činjenice razvoja bolesti. Zakazano je ponovno ispitivanje.

Serološki test krvi- najvažnija metoda istraživanja, čija je glavna svrha brzo otkrivanje virusa, infekcija, mikroba u tijelu.

Ovaj jedinstveni laboratorijski "alat" omogućuje vam da identificirate bilo koju bolest koja je posljedica imunološke supresije, stoga nemojte biti lijeni, već redovito uzimajte analize kako biste na vrijeme prepoznali bolest i brzo je se riješili.

8 057

Serološka dijagnostička metoda uključuje korištenje 2 područja istraživanja: serodijagnostika (otkrivanje specifičnih protutijela u krvnom serumu ispitanika) i seroidentifikacija (određivanje antigenskih svojstava izoliranog uzročnika radi utvrđivanja njegove vrste i tipa).

U serodijagnostici se koriste aglutinacija, precipitacija, liza, RSK, reakcije s obilježenim antigenima ili antitijelima. Komponente ovih reakcija su: krvni serum ispitivanih bolesnika i standardni antigenski preparati. Svrha istraživanja je određivanje titra protutijela na uzročnike zaraznih bolesti u proučavanim serumima.

Detekcija visokih titara specifičnih protutijela, osobito ako dosegnu razinu tzv. "dijagnostičkih" titara, potvrđuje predloženu dijagnozu. Velika važnost pridaje se proučavanju uparenih seruma, kada se istovremeno titriraju serumi uzeti na samom početku bolesti (3-4. dan) i serumi dobiveni 7.-10. dana bolesti. Dijagnostička vrijednost ima 4-struko povećanje titra antitijela.

U seroididentifikaciji, reakcija aglutinacije na staklu koristi se češće od ostalih. Komponente reakcije: uzgojena čista kultura uzročnika (antigen) i standardni dijagnostički imunološki serumi kunića (antitijela).

Prednost serološke metode- jednostavnost, dostupnost, visoka osjetljivost, specifičnost, brzina.

Mane: potreba za skupim standardne droge i hardver.

Alergološka metoda

Ova metoda uključuje otkrivanje senzibilizacije tijela na određeni infektivni agens, što je od velike dijagnostičke vrijednosti. Poznato je da je tijek nekih zaraznih bolesti popraćen stvaranjem preosjetljivosti odgođenog tipa. U tom smislu, intradermalna primjena malih doza alergena takvim pacijentima uzrokuje odgovarajuću reakciju tijela, uzrokovanu ponovljenim susretom s alergenom. Reakcija se odvija prema odgođenom tipu, a nakon 48-72 sata na mjestu ubrizgavanja alergena pojavljuje se crvenilo, oteklina, a ponekad i infiltrat ( pozitivna reakcija). Ako tijelo nije senzibilizirano, intradermalna primjena neće izazvati nikakvu reakciju tijela (negativnu reakciju). Industrija proizvodi posebne pripravke za kožno-alergijske testove: tuberkulin, dizenterija, brucelin, tularin itd.

Alergološka metoda ima posebno veliki značaj u slučajevima kada je identifikacija uzročnika zarazne bolesti teška ili nemoguća (npr. kod lepre) ili kada to traje dugo (npr. kod bruceloze). Tuberkulinski test se u praksi koristi ne samo sa dijagnostička svrha, ali i odrediti vrijeme revakcinacije djece BCG cjepivom, kao i proučavati kolektivni antituberkulozni imunitet.

Prednosti alergološke metode - njegova jednostavnost, pouzdanost, izražajnost.

Mana - ograničena uporaba, budući da sve zarazne bolesti ne stvaraju preosjetljivost odgođenog tipa.

SEROLOŠKE REAKCIJE U DIJAGNOSTICI

ZARAZNE BOLESTI

Trenutno imunološke metode Istraživanja se široko koriste za laboratorijsku dijagnostiku zaraznih i nezaraznih bolesti.

Reakcije interakcije između antigena i protutijela nazivaju se serološke (serum - serum, logos - nastava).

Bit svih seroloških reakcija je specifična kombinacija antigena i njihovih odgovarajućih protutijela u kompleks. Serološka reakcija je moguća ako postoji imunološka korespondencija (homologija) - glavne komponente - antigeni i antitijela. Imunološka specifičnost temelji se na strukturnoj komplementarnosti antigena i protutijela.

Proces interakcije između antigena i antitijela odvija se u dvije faze - specifične i nespecifične. Prva faza se razvija brzo. Sastoji se od specifične veze aktivnog centra protutijela s determinantnim skupinama odgovarajućeg (homolognog) antigena. Sljedeća faza razvija se sporije, nespecifična - to je vanjska manifestacija reakcije antigen-antitijelo (flokulacija, zamućenje medija itd.)

Serološki testovi se koriste u dvije svrhe:

1) za otkrivanje antitijela u ispitivanom serumu pomoću poznatih antigena (serodijagnostika);

2) utvrditi nepoznati antigen pomoću poznatih seruma (seroidentifikacija).

Određivanje nepoznatog antigena na mikrobiološka istraživanja provodi se kako bi se utvrdio generički, vrsta, tip patogena izoliranih od subjekta. U takvim slučajevima, od dvije glavne komponente reakcije (antitijela, antigen), antigen je nepoznat, reakcija se mora izvesti s poznatim antitijelima. U ovom slučaju, antigen je čista kultura mikroorganizama izoliranih iz ispitivanog materijala. Kao poznata antitijela koriste se imunološki dijagnostički serumi. Potonji se dobivaju iz krvi životinja (najčešće kunića) prethodno imuniziranih odgovarajućim bakterijskim antigenima. Imunološki serumi moraju sadržavati visoka razina specifična antitijela.

Osim toga, serološkim testovima mogu se odrediti različiti nebakterijski antigeni: za određivanje krvnih grupa, tkivnih antigena, tumora, za odabir parova davatelj-primatelj kod transplantacije organa i tkiva itd.

Serološki testovi također se mogu koristiti za otkrivanje antitijela u krvnom serumu. U takvim slučajevima potreban je poznati antigen (diagnosticum). Suspenzije živih ili mrtvih mikroba, ekstrakti ili izolirane kemijske frakcije iz njih mogu se koristiti kao antigeni.

Brojni serološki testovi koji se danas koriste u zdravstvenoj praksi razlikuju se po fenomenu koji otkriva odnos između antigena i antitijela. Vidljiva manifestacija reakcije bit će različita ovisno o tome koja se tehnika koristi, u kojoj fizičko stanje koristi se antigen ili imunološki serum, bilo da je u reakciji uključen komplement. Na primjer, ako se koristi korpuskularni antigen, dolazi do pojave aglutinacije - prianjanja čestica (aglutinacijska reakcija). Budući da se čestični antigeni sastoje od relativno velikih čestica, stvara se vidljivi flokulentni talog. Ako se u reakciji koristi topljivi antigen, uočava se sitnozrnati talog - precipitat (reakcija taloženja). Ako se u reakciju interakcije bakterijskih antigena i imunološkog seruma unese i komplement, dolazi do bakteriolize (otapanje bakterijskih antigena) ili do lize eritrocita (kada se koriste kao antigen). Korištenje imunoloških seruma obilježenih fluorokromima, enzimima ili radioizotopima u serološkim reakcijama omogućuje utvrđivanje specifičnog vezanja antigena na protutijela prema odgovarajućem fenomenu (sjaj, promjena boje ili aktivnost radioizotopne oznake).

Za procjenu seroloških reakcija koriste se kriteriji kao što su specifičnost i osjetljivost. Specifičnost je sposobnost antigena da reagira samo s homolognim protutijelima. Osjetljivost - sposobnost specifične interakcije s minimalnim količinama antigena i protutijela.

Reakcija aglutinacije

Reakcija aglutinacije (RA) je specifična interakcija antigena s protutijelima, izražena u adheziji antigena pod utjecajem serumskih protutijela i njihovom taloženju u prisutnosti elektrolita. Bila je prva od predloženih seroloških reakcija.

Značajka reakcije aglutinacije je da se stanice ili druge korpuskularne čestice koriste kao antigeni u njezinoj formulaciji. Reakcija se temelji na sposobnosti korpuskularnih antigena da se specifično kombiniraju s homolognim protutijelima imunoloških seruma uz stvaranje taloga u obliku zrnaca, pahuljica, grudica. Reakcija se odvija samo u prisustvu elektrolita. Antigeni koji se koriste u reakciji nazivaju se aglutinogeni, protutijela se nazivaju aglutinini, a nastali talog naziva se aglutinat.

Kao antigen u reakciji aglutinacije može se koristiti suspenzija živih kultura u izotoničnoj otopini natrijevog klorida ili mikrobi ubijeni formalinom, alkoholom ili zagrijavanjem, te eritrociti, leukociti ili druge stanice.

Izvor protutijela je poznati aglutinacijski serum dobiven imunizacijom životinja odgovarajućim antigenima ili serum bolesnika koji se ispituje.

Postoje različiti načini postavljanja reakcije aglutinacije. Od njih se najčešće koriste: orijentacijska reakcija na staklu, proširena aglutinacija u epruvetama, hemaglutinacijske reakcije i neizravna hemaglutinacija(RNGA).

Slične informacije.