Dom » Kozmetika » Serološki testovi koji se koriste za dijagnosticiranje virusnih infekcija. Serološka metoda za dijagnosticiranje virusnih infekcija Serološke metode za dijagnosticiranje virusnih infekcija

Serološki testovi koji se koriste za dijagnosticiranje virusnih infekcija. Serološka metoda za dijagnosticiranje virusnih infekcija Serološke metode za dijagnosticiranje virusnih infekcija

Temelji se na određivanju antivirusnih protutijela u krvi bolesnika u serološkim reakcijama pomoću specifičnih virusnih antigena – dijagnostikuma ili posebnih test sustava. Serološke reakcije kod virusnih infekcija stavljaju se u tekući medij (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), u gel (RPG, RRG, RVIEF) ili na čvrsti nosač (npr. na stijenke jažica polistirenske ploče s fiksacijom jedne od komponenti imunološkog odgovora – antigena ili antitijela). Poznate su metode čvrste faze kao što su ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.

Često, zbog prisutnosti u krvi većine zdravi ljudi prirodna antivirusna antitijela, serološka dijagnoza virusnih infekcija temelji se na studiji upareni serumi, uzeti na početku i na vrhuncu bolesti ili u razdoblju rekonvalescencije kako bi se odredio porast titra protutijela. Povećanje titra protutijela za četiri ili više puta smatra se dijagnostički značajnim.

Povećanje osjetljivosti seroloških metoda postiže se adsorpcijom antigena ili protutijela na eritrocite (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), obilježene enzimima (ELISA), radioaktivnim izotopima (RIA, RPG) ili fluorokromima (RIF). lize eritrocita također se koristi (kao indikatorski sustav) tijekom interakcije antigena i protutijela u prisutnosti komplementa (RSK, RRG).

Reakcija vezanja komplementa (CFR) u obliku fiksacije komplementa na hladnoći (tijekom noći na temperaturi od +4 0 C) često se koristi u virologiji za retrospektivnu dijagnostiku niza virusnih infekcija i za određivanje virus-specifičnih antigena u materijalima od bolesnika. .

Reakcija radijalne hemolize (RRH) u agaroznom gelu temelji se na fenomenu hemolize eritrocita senzibiliziranih antigenom pod utjecajem virus-specifičnih protutijela u prisutnosti komplementa i koristi se za serološku dijagnostiku gripe, SARS-a, rubeole, zaušnjaka i togavirusnih infekcija.

Za postavljanje reakcije ovčjim eritrocitima (0,3 ml 10%-tne suspenzije) doda se 0,1 ml nerazrijeđenog virusnog antigena i smjesa se inkubira 10 minuta na sobnoj temperaturi. 0,3 ml senzibiliziranih eritrocita i 0,1 ml komplementa doda se 1,2%-tnoj agarozi na temperaturi od 42 0 C, smjesa se izlije na stakalce ili u jažice polistirenskih ploča, u smrznutom agaroznom gelu izrežu se rupe probušiti i napuniti proučavanim i kontrolnim serumom. Čaše ili ploče se zatvore poklopcem i stave u vlažnu komoru na 16-18 sati u termostatu. Računanje reakcije provodi se prema promjeru zone hemolize oko rupa ispunjenih serumom. U kontroli nema hemolize.

Koristi se za dijagnosticiranje virusnih bolesti sljedeće metode:

1) Viroskopski.

2) Imunoelektronska mikroskopija.

3) Virološki.

4) Serološki.

5) Imunofluorescentni.

6) Biološki.

7) Korištenje DNA (RNA) sondi.

8) Lančana reakcija polimerazom.

Reprodukcija (razmnožavanje) virusa u staničnoj kulturi prosuđuje se prema citopatskom učinku (CPE), koji se može otkriti mikroskopski i karakterizira morfološke promjene Stanice.

Priroda CPD virusa koristi se kako za njihovu detekciju (indikaciju), tako i za privremenu identifikaciju, tj. određivanje njihove vrste.

Metode otkrivanja virusa:

1) Hemadsorpcijska reakcija – temelji se na sposobnosti površine stanica u kojima se razmnožavaju da adsorbira eritrocite – hemadsorpcijska reakcija. Za stavljanje u kulturu stanica zaraženih virusima dodaje se suspenzija eritrocita, a nakon nekog vremena kontakta stanice se isperu izotoničnom otopinom natrijevog klorida. Prilijepljeni eritrociti ostaju na površini stanica zahvaćenih virusom.

2) Reakcija hemaglutinacije (RG). Koristi se za otkrivanje virusa u tekućini kulture stanične kulture ili korionalantoičkoj ili amnionskoj tekućini pilećeg embrija.

Serološke metode mogu se koristiti za otkrivanje i specifičnih protutijela i virusnih antigena u ispitivanom materijalu. U ove svrhe mogu se koristiti sve poznate serološke reakcije:

1) Reakcija vezanja komplementa.

2) Reakcija pasivne hemaglutinacije i njezine varijante (PHAg, PHAt).

3) Reakcija inhibicije hemaglutinacije.

4) Reakcija hemaglutinacije imunološke adhezije (kompleks antigen + antitijelo u prisutnosti komplementa adsorbira se na eritrocitima).

5) Reakcije taloženja gela.

6) Reakcije neutralizacije virusa.

7) Radioimuna metoda.

8) Metode enzimski imunološki test.

Od ovih metoda sve su popularnije metode enzimskog imunotestiranja koje se odlikuju visokom specifičnošću i jednostavnošću uporabe.

7. Reakcija hemaglutinacije, njen mehanizam kod virusa influence. Reakcija inhibicije hemaglutinacije, njezina praktična primjena.

Reakcija hemaglutinacije (RG). Koristi se za otkrivanje virusa u tekućini kulture stanične kulture ili korionalantoičkoj ili amnionskoj tekućini pilećeg embrija.

8. Značajke antivirusnog imuniteta. Uloga fagocitoze i humoralnih čimbenika u imunitetu. Interferoni, karakteristike glavnih svojstava, klasifikacija. Značajke djelovanja interferona na viruse .

Svi imunološki sustavi sudjeluju u zaštiti organizma od virusa, ali antivirusni imunitet ima značajne specifičnosti. Oni su određeni činjenicom da, prije svega, na prodor virusa u tijelo ne reagiraju sustavi komplementa i makrofaga, već sustavi interferona i T-killer stanica. Druga značajka formiranja imuniteta je zbog činjenice da virusi imaju slab antigenski učinak na B-limfocite, a za njihovu aktivaciju, proliferaciju i diferencijaciju, sudjelovanje T-pomagača i, sukladno tome, prezentacija prerađenog virusnog antigena. (peptidni fragmenti) uz sudjelovanje MHC molekula klase II je neophodna. Stoga uloga makrofaga i drugih stanica koje prezentiraju antigen nije toliko u samoj fagocitozi, koliko u obradi i prezentaciji antigena.

Na prodiranje virusa prije svega reagira sustav interferona koji suzbija intracelularnu reprodukciju virusa. Osim toga, a- i b-inhibitori u krvnom serumu imaju antivirusni učinak. Alfa-inhibitor - termostabilni supstrat, dio je a-globulina, sprječava adsorpciju virusa na stanici, uništava ga neuraminidaza orto- i paramiksovirusa. Beta-inhibitor - termolabilni mukopeptid, dio je b-globulina, inhibira umnožavanje orto- i paramiksovirusa.

No, interferoni i inhibitori nisu bili dovoljni za zaštitu od virusa, pa je priroda stvorila još jedan, vrlo snažan obrambeni mehanizam na tjelesnoj razini protiv virusa. Predstavlja se prvenstveno T-citotoksični limfociti i druge stanice ubojice. Ove stanice prepoznaju sve strane antigene, uključujući virusne, predstavljene MHC molekulama klase I. Glavni biološki značaj T-killer stanica leži u detekciji i uništavanju svih stanica zaraženih stranim antigenima.

Interferon je obitelj glikoproteina koje sintetiziraju stanice imunološki sustav i vezivno tkivo. Ovisno o tome koje stanice sintetiziraju interferon, postoje tri vrste: ?, ? i β-interferoni.

Alfa-interferon proizvode leukociti i naziva se leukocit; beta-interferon nazivamo fibroblastičnim, jer ga sintetiziraju fibroblasti – stanice vezivnog tkiva, a gama-interferon nazivamo imunim, jer ga proizvode aktivirani T-limfociti, makrofagi, prirodne ubojice, tj. imunološke stanice.

Proizvodnja interferona naglo se povećava kada je zaražena virusima, osim antivirusnog učinka, interferon ima antitumorsku zaštitu, jer odgađa proliferaciju (razmnožavanje) tumorskih stanica, kao i imunomodulatornu aktivnost, stimulirajući fagocitozu, prirodne ubojice, regulirajući stvaranje protutijela B stanicama, aktivirajući ekspresiju glavnog histokompatibilnog kompleksa.

Mehanizam djelovanja. Interferon ne djeluje izravno na virus izvan stanice, već se veže na posebne stanične receptore i utječe na proces reprodukcije virusa unutar stanice u fazi sinteze proteina.

Virologija privatno

1. Virusi koji uzrokuju akutne respiratorne infekcije (ARI). Klasifikacija. opće karakteristike ortomiksovirusi. Građa viriona influence. Značajke njegovog genoma i implementacija informacija sadržanih u njemu. Replikacija virionske RNA.

1. Virusi - uzročnici akutnih respiratornih infekcija. klasifikacija.

Uzročnici ARI su sljedeći virusi:

1. Virusi influence A, B, C (Orthomyxoviridae)

2. Paramiksovirusi (Paramyxoviridae) - ova obitelj uključuje tri roda: paramiksovirus - humani virusi parainfluence (HPV) tipa 1, 2, 3, 4, Newcastleska bolest, ptičja parainfluenca i zaušnjaci; Pneumovirus - respiratorni sincicijski virus (RS-virus); Morbillivirus je virus ospica.

3. Respiratorni koronavirusi (Coronaviridae).

4. Respiratorni reovirusi (Reoviridae).

5. Pikornavirusi (Picornaviridae).

Virus influence A

Virion je sferičnog oblika i promjera 80-120 nm. Genom virusa predstavljen je jednolančanom fragmentiranom (8 fragmenata) negativnom RNK s ukupnom MW od 5 MD. Vrsta simetrije nukleokapsida je spiralna. Virion Ima superkapsid (membranu) koja sadrži dva glikoproteina - hemaglutinin i neuraminidazu, koji strše iznad membrane u obliku raznih šiljaka.

Virusi su uzročnici akutnih respiratornih bolesti. Značajke manifestacije bolesti uzrokovanih virusima influence, parainfluence, rinovirusima, respiratornim sincicijskim virusom i adenovirusima. Laboratorijske metode za njihovu dijagnostiku.

Virion je sferičnog oblika i promjera 80-120 nm. Genom virusa predstavljen je jednolančanom fragmentiranom (8 fragmenata) negativnom RNK s ukupnom MW od 5 MD. Vrsta simetrije nukleokapsida je spiralna. Virion ima superkapsidu (membranu) koja sadrži dva glikoproteina - hemaglutinin i neuraminidazu, koji strše iznad membrane u obliku raznih šiljaka.

U virusima influence A ljudi, sisavaca i ptica pronađeno je 13 tipova hemaglutinina koji se razlikuju po antigenu, a koji su kontinuirano numerirani (od H1 do H13).

Neuraminidaza (N) je tetramer s MM 200-250 kD, svaki monomer ima MM 50-60 kD.

Virus influence A ima 10 različitih varijanti neuraminidaze

Laboratorijska dijagnostika. Materijal za studiju je iscjedak iz nazofarinksa, koji se dobiva ili ispiranjem ili korištenjem tampona od pamučne gaze i krvi. Koriste se sljedeće dijagnostičke metode:

1. Virološki - infekcija pilećih embrija, kulture stanica bubrega zelenih majmuna (Vero) i pasa (MDSC). Kulture stanica posebno su učinkovite za izolaciju virusa A (H3N2) i B.

2. Serološki - otkrivanje specifičnih protutijela i povećanje njihovog titra (u uparenim serumima) pomoću RTGA, RSK, enzimskog imunoeseja.

3. Kao ubrzana dijagnostika koristi se imunofluorescentna metoda koja omogućuje brzo otkrivanje virusnog antigena u brisevima-otiscima sa sluznice nosa ili u brisevima iz nazofarinksa bolesnika.

4. Za detekciju i identifikaciju virusa (virusnih antigena) predložene su metode RNA probe i PCR.

Specifična profilaksa

1) živi od atenuiranog virusa; 2) ubijeni cijeli virion; 3) subvirionsko cjepivo (od podijeljenih viriona); 4) podjedinično cjepivo koje sadrži samo hemaglutinin i neuraminidazu.

Virusi gripe (ortomiksovirusi). Opće karakteristike. Superkapsidni proteini, njihove funkcije, značaj varijabilnosti (shift i drift) za epidemiologiju gripe. Metode laboratorijske dijagnostike. Cjepiva koja se koriste za prevenciju gripe.

Akutna zarazna bolest, s groznicom, oštećenjem jetre. Antroponoza.

Taksonomija, morfologija, antigenska struktura: obitelj Picornaviridae, rod Hepatovirus. Tipska vrsta ima jedan serotip. To je virus koji sadrži RNA, jednostavno organiziran, ima jedan antigen specifičan za virus.

Uzgoj: Virus se uzgaja u kulturama stanica. Reprodukcijski ciklus duži je od ciklusa enterovirusa, citopatski učinak nije izraženo.

Otpornost: Otporan na toplinu; inaktivira se kuhanjem 5 min. Relativno stabilan u okolišu (voda).

Epidemiologija. Izvor su pacijenti. Mehanizam infekcije je fekalno-oralni. Virusi se izlučuju fecesom na početku kliničkih manifestacija. Pojavom žutice smanjuje se intenzitet izolacije virusa. Virusi se prenose vodom, prehrambeni proizvodi, ruke.

Uglavnom su bolesna djeca od 4 do 15 godina.

Mikrobiološka dijagnostika. Materijal za studiju je serum i izmet. Dijagnoza se temelji uglavnom na određivanju IgM u krvi pomoću ELISA, RIA i imunološke elektronske mikroskopije. Iste metode mogu otkriti virusni antigen u izmetu. Virološka studija ne provoditi.

3. Virološka dijagnostika gripe. Izolacija virusa, određivanje njegove vrste. Serološke metode za dijagnosticiranje gripe: RSK, RTGA. Ubrzana dijagnostička metoda pomoću fluorescentnih protutijela.

Mikrobiološka dijagnostika. Dijagnoza "gripe" temelji se na (1) izolaciji i identifikaciji virusa, (2) određivanju virusnih antigena u bolesnikovim stanicama, (3) potrazi za virus-specifičnim protutijelima u bolesnikovom serumu. Prilikom odabira materijala za istraživanje važno je dobiti stanice zahvaćene virusom, jer se u njima događa replikacija virusa. Materijal za istraživanje - nazofaringealni iscjedak. Za određivanje protutijela ispituju se upareni krvni serumi bolesnika.

Ekspresna dijagnostika. Virusni antigeni detektiraju se u ispitivanom materijalu pomoću RIF-a (izravne i neizravne mogućnosti) i ELISA-e. Genom virusa može se otkriti u materijalu pomoću PCR-a.

Virološka metoda. Optimalni laboratorijski model za uzgoj sojeva je pileći embrij. Indikacija virusa provodi se ovisno o laboratorijskom modelu (smrtom, kliničkim i patomorfološkim promjenama, CPP, stvaranjem "plakova", "uzorka boje", RHA i hemadsorpcijom). Virusi se identificiraju prema njihovoj antigenskoj strukturi. Koriste se RSK, RTGA, ELISA, RBN (reakcija biološke neutralizacije) virusa itd. Obično se tip virusa influence utvrđuje u RSK, podtip u RTGA.

Serološka metoda. Dijagnoza se postavlja četverostrukim povećanjem titra protutijela u uparenim serumima bolesnika, dobivenih u intervalima od 10 dana. Primijeniti viruse RTGA, RSK, ELISA, RBN.

Adenovirusi, karakteristike svojstava, sastav skupine. Adenovirusi patogeni za ljude. Značajke patogeneze adenovirusnih infekcija, metode uzgoja adenovirusa. Dijagnostika adenovirusnih bolesti.

Porodica Adenoviridae podijeljena je u dva roda: Mastadenovirus - adenovirusi sisavaca, uključuje adenoviruse ljudi (41 serovarijanta), majmuna (24 serovarijante), kao i goveda, konja, ovaca, svinja, pasa, miševa, vodozemaca; i Aviadenovirus - ptičji adenovirusi (9 serotipova).

Adenovirusima nedostaje superkapsid. Virion ima oblik ikosaedra - kubičnog tipa simetrije, promjer mu je 70-90 nm. Kapsida se sastoji od 252 kapsomera promjera 7-9 nm.

Virion sadrži najmanje 7 antigena. Period inkubacije 6-9 dana. Virus se replicira u epitelne stanice gornjeg dišnog trakta, sluznice očiju. Može prodrijeti u pluća, utjecati na bronhije i alveole, izazvati tešku upalu pluća; karakteristično biološko svojstvo adenovirusa je tropizam za limfno tkivo.

Adenovirusne bolesti mogu se okarakterizirati kao febrilne sa kataralna upala sluznice dišnog trakta i očiju, praćeno porastom submukoznog limfoidnog tkiva i regionalnog limfni čvorovi.

Laboratorijska dijagnostika. 1. Detekcija virusnih antigena u zahvaćenim stanicama pomoću metoda imunofluorescencije ili IFM. 2. Izolacija virusa. Materijal za studiju je iscjedak nazofarinksa i konjunktive, krv, izmet (virus se može izolirati ne samo na početku bolesti, već i 7-14 dana od nje). Za izolaciju virusa koriste se primarne tripsinizirane stanične kulture (uključujući diploidne) ljudskog embrija koje su osjetljive na sve serovarijante adenovirusa. Virusi se otkrivaju po njihovom citopatskom učinku i CSC-u, budući da svi dijele zajednički antigen za fiksaciju komplementa. Identifikacija se provodi pomoću antigena specifičnih za tip pomoću RTGA i pH u staničnoj kulturi. 3. Detekcija porasta titra antitijela u uparenim serumima pacijenta pomoću RSC. Određivanje porasta titra tip-specifičnih protutijela provodi se s referentnim serosojevima adenovirusa u RTGA ili RN u kulturi stanica.

5. Coxsackie i ECHO virusi. Karakterizacija njihovih svojstava. Sastav grupa. Metode mikrobiološke dijagnostike bolesti uzrokovanih Coxsackie i ECHO virusima.

Coxsackie su najkardiotropniji od svih enterovirusa. U 20-40% bolesnika mlađih od 20 godina Coxsackie infekcija je komplicirana miokarditisom. Coxsackie virusi predstavljeni su u dvije skupine: Coxsackie A skupina uključuje 23 serovarijante (A1-A22, 24); skupina Coxsackie B uključuje 6 serovarijanti (B1-B6).

Coxsackie A i B virusi mogu kod ljudi, osim bolesti sličnih poliomijelitisu, ponekad praćenih paralizom, izazvati i razne druge bolesti osebujne klinike: aseptični meningitis, epidemijsku mialgiju (Bornholmova bolest), herpanginu, manja bolest, gastroenteritis, akutne respiratorne infekcije, miokarditis

ECHO, što znači: E - crijevni; C - citopatogen; H - čovjek; O - siroče - siroče. sadrži 32 serotipa.

Izvor Coxsackie- i ECHO-infekcija je osoba. Infekcija virusima Nastaje fekalno-oralnim putem.

Patogeneza bolesti uzrokovanih virusima Coxsackie i ECHO slična je patogenezi poliomijelitisa. Ulazna vrata su sluznica nosa, ždrijela, tankog crijeva, u čijim se epitelnim stanicama, kao i u limfoidnom tkivu, ovi virusi razmnožavaju.

Afinitet prema limfnom tkivu jedno je od karakterističnih obilježja ovih virusa. Nakon razmnožavanja, virusi prodiru u limfu, a zatim u krv, uzrokujući viremiju i generalizaciju infekcije.

Nakon što uđu u krvotok, virusi se hematogeno šire po tijelu, selektivno se naseljavajući u onim organima i tkivima za koje imaju tropizam.

Metode dijagnosticiranja enterovirusnih bolesti. koristiti virološku metodu i razne serološke pretrage. studija se mora provesti na cijeloj skupini enterovirusa. Za njihovu izolaciju koristi se crijevni sadržaj, ispiranje i brisevi iz ždrijela, rjeđe likvor ili krv, a u slučaju smrti bolesnika pregledavaju se komadići tkiva iz različitih organa. Stanične kulture (poliovirusi, ECHO, Coxsackie B i neki Coxsackie A serovari), kao i novorođeni miševi (Coxsackie A) zaraženi su ispitivanim materijalom.

Tipizacija izoliranih virusa provodi se u reakcijama neutralizacije, RTGA, RSK, reakcijama taloženja, korištenjem referentnih mješavina seruma različitih kombinacija. Za otkrivanje protutijela u serumima oboljelih od enterovirusnih infekcija koriste se isti serološki testovi (RN, kolor testovi, RTGA, RSK, precipitacijske reakcije), ali je za te potrebe potrebno imati uparene serume svakog bolesnika (u akutnoj periodu i nakon 2-3 tjedna.od početka bolesti). Reakcije se smatraju pozitivnima kada se titar antitijela poveća najmanje 4 puta. Ove dvije metode također koriste IFM (za otkrivanje antitijela ili antigena).

Hepatitis B. Struktura i karakteristike glavnih svojstava viriona. Površinski antigen, njegovo značenje. Značajke interakcije virusa sa stanicom. Načini infekcije. Metode laboratorijske dijagnostike. specifična profilaksa.

Virus hepatitisa B, HBV Virion sadrži tri glavna antigena

1. HBsAg - površinski (površinski), ili topljivi (topivi), ili australski antigen.

2. HBcAg - core antigen (cog-antigen).

3. HBeAg - antigen e, lokaliziran u jezgri viriona

Stvarni virion - čestica Dane - ima sferni oblik i promjer od 42 nm. Superkapsid viriona sastoji se od tri proteina: glavnog (glavnog), velikog i srednjeg (slika 88.1). Genom je zatvoren u kapsidu i predstavljen je dvolančanom kružnom DNA s m.m. od 1,6 MD. DNK se sastoji od približno 3200 nukleotida, ali je njen "plus" lanac 20-50% kraći od "minus" lanca.

Površinski antigen - HBsAg - postoji u obliku tri morfološki različite varijante: 1) predstavlja superkapsid cijelog viriona; 2) u u velikom broju javlja se u obliku čestica promjera 20 nm, sferičnog oblika; 3) u obliku niti duljine 230 nm. Kemijski su identični. HBsAg sadrži jedan zajednički antigen a i dva para međusobno isključivih determinanti specifičnih za tip: d/y i w/r, tako da postoje četiri glavna podtipa HBsAg (i, sukladno tome, HBV): adw, adr, ayw i ayr. Antigen a osigurava stvaranje općeg unakrsnog imuniteta na sve podtipove virusa.

Proteini koji tvore površinski antigen postoje u glikoziliranom (gp) i neglikoziliranom obliku. Gp27, gp33, gp36 i gp42 su glikozilirani (brojevi označavaju m.m. u CD). HBV superkapsid se sastoji od glavnog, ili glavnog, S-proteina (92%); srednji M-protein (4%) i veliki, ili dugi, L-protein (1%).

Glavni protein - p24/gp27, Veliki protein - p39/gp42, Srednji protein - gp33/gp36.

interakcija sa stanicom.

1. Adsorpcija na stanici.

2. Prodor u stanicu mehanizmom endocitoze posredovane receptorima (obložena fosa -> obrubljena vezikula -> lizosom -> oslobađanje nukleokapsida i prodor virusnog genoma u jezgru hepatocita).

3. Intracelularno razmnožavanje.

Izvor infekcije virusom hepatitisa B je samo osoba. Infekcija se ne događa samo parenteralno, već i spolno i vertikalno (s majke na fetus).

Trenutno je glavna metoda za dijagnosticiranje hepatitisa B uporaba reverzne pasivne hemaglutinacije (RPHA) za otkrivanje virusa ili njegovog površinskog antigena, HBsAg. Kao što je već navedeno, krv sadrži mnogo puta više površinskog antigena od samog virusa (100-1000 puta). Za ROPHA reakciju koriste se eritrociti senzibilizirani antitijelima protiv virusa hepatitisa B. U prisutnosti antigena u krvi dolazi do reakcije hemaglutinacije. Za otkrivanje protutijela na virusni antigen HBsAg, razni imunološke metode(RSK, RPGA, IFM, RIM, itd.)

Specifična profilaksa

Cijepljenje protiv hepatitisa B je obavezno i treba ga primijeniti u prvoj godini života. Za cijepljenje su predložene dvije vrste cjepiva. Za pripremu jednog od njih kao sirovina koristi se plazma nositelja virusa, jer sadrži virusni antigen u količinama dovoljnim za pripremu cjepiva. Glavni uvjet za pripremu ove vrste cjepiva je njihova potpuna sigurnost.Za proizvodnju druge vrste cjepiva koriste se metode genetski inženjering Konkretno, za dobivanje antigenskog materijala koristi se rekombinantni klon kvasca koji proizvodi površinski antigen virusa hepatitisa B.

U Rusiji su stvorena cjepiva i za odrasle i za novorođenčad i djecu ranoj dobi. Cijeli tijek cijepljenja sastoji se od tri injekcije:

doziram - odmah nakon rođenja; II doza - nakon 1-2 mjeseca; III doza - do kraja 1. godine života.

Serološka dijagnostika koja se temelji na reakciji antigen-protutijelo može se koristiti za utvrđivanje i jednog i drugog, a ima ulogu u određivanju etiologije virusne infekcije čak i kod negativnih rezultata izolacije virusa.

Uspjeh serološka dijagnoza ovisi o specifičnosti reakcije i poštivanju privremenih uvjeta za uzimanje krvi potrebnih za sintezu antitijela od strane tijela.

U većini slučajeva koriste se upareni krvni serumi koji se uzimaju u intervalima od 2-3 tjedna. Pozitivnom reakcijom smatra se povećanje titra protutijela najmanje 4 puta. Poznato je da većina specifičnih protutijela pripada razredima IgG i IgM, koji se sintetiziraju u različito vrijeme. infektivni proces. Istodobno, antitijela IgM su rana, a testovi koji se koriste za njihovo određivanje navikli su rana dijagnoza(dovoljno je pregledati jedan serum). Protutijela klase IgG sintetiziraju se kasnije i dugo se pohranjuju.

RN se koristi za tipizaciju virusa, za grupno specifičnu dijagnostiku, na primjer, adenovirusna infekcija, koristiti reakcija vezanja komplementa(RSK). Najviše se koriste reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA), RSK, RIF, pasivne reakcije i obrnuta pasivna hemaglutinacija(RPGA, ROPGA), razne varijante ELISA-e, koje su gotovo posvuda zamijenile RIA, jednake osjetljivosti na nju.

RTGA koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih hemaglutinirajućim virusima. Temelji se na vezanju antitijela na bolesnikov serum dodanog standardnog virusa. Pokazatelj reakcije su eritrociti aglutinirani virusom (stvaranje karakterističnog "kišobrana") u nedostatku specifičnih protutijela i taloženje na dno, neaglutinirani ako ih ima.

RSK je jedan od tradicionalnih seroloških testova i koristi se za dijagnosticiranje mnogih virusnih infekcija. U reakciji sudjeluju dva sustava: antitijela seruma bolesnika + standardni virusni i ovčji eritrociti + antitijela na njih, kao i titrirani komplement. Ako se protutijela i virus podudaraju, ovaj kompleks veže komplement i ne dolazi do lize ovčjih eritrocita ( pozitivna reakcija). S negativnim RSC, komplement pridonosi razgradnji eritrocita. Nedostatak metode je nedovoljno visoka osjetljivost i teškoća standardizacije reagensa.

Da bi se uzeo u obzir značaj RSK, kao i RTGA, potrebno je titrirati parne serume, odnosno uzete na početku bolesti i tijekom rekonvalescencije.

RPGA- aglutinacija eritrocita (ili polistirenskih kuglica) senzibiliziranih virusnim antigenima u prisutnosti protutijela. Na eritrocite se mogu sorbirati svi virusi, bez obzira na prisutnost ili odsutnost hemaglutinacijske aktivnosti u njima. Zbog prisutnosti nespecifičnih reakcija, serumi se ispituju u razrjeđenju 1:10 ili većem.

RNGA- aglutinacija eritrocita senzibiliziranih specifičnim protutijelima u prisutnosti virusnih antigena. ROPHA je dobila najveću distribuciju u detekciji HBs antigena i kod pacijenata i kod davatelja krvi.

AKO metoda također ELISA koristi se za otkrivanje antitijela u serumu. ELISA u dijagnostičke svrhe postaje sve važnija i raširenija. Virusni antigen se sorbira na čvrstu fazu (dno jažica polistirenskih ploča ili polistirenskih kuglica). Kada se dodaju odgovarajuća antitijela u serumu, ona se vežu na adsorbirane antigene. Prisutnost željenih antitijela detektira se pomoću anti-antitijela (na primjer, ljudskih) konjugiranih s enzimom (peroksidaza). Dodatak supstrata i reakcija supstrat-enzim daju boju. ELISA se također može koristiti za određivanje antigena. U ovom slučaju, antitijela se adsorbiraju na čvrstu fazu.

monoklonska antitijela. Veliki napredak u dijagnostici virusnih infekcija učinjen je u posljednjem desetljeću, kada je razvojem istraživanja genetskog inženjeringa razvijen sustav za dobivanje monoklonskih protutijela. Tako je specifičnost i osjetljivost dijagnostičkih metoda za određivanje virusnih antigena naglo povećana. Uska specifičnost monoklona, koji predstavljaju mali udio virusnih proteina koji možda nisu prisutni u kliničkom materijalu, uspješno se prevladava korištenjem nekoliko monoklonskih protutijela na različite virusne determinante.

imunološke reakcije koristi se u dijagnostičkim i imunološkim studijama kod bolesnih i zdravih ljudi. U tu svrhu primijenite serološke metode , tj. metode proučavanja antitijela i antigena pomoću reakcija antigen-antitijelo utvrđenih u krvnom serumu i drugim tekućinama, kao i tjelesnim tkivima.

Detekcija u krvnom serumu antitijela pacijenta protiv antigena patogena omogućuje postavljanje dijagnoze bolesti. Serološkim istraživanjima također se identificiraju mikrobni antigeni, različite biološki aktivne tvari, krvne grupe, tkivni i tumorski antigeni, imunološki kompleksi, stanični receptori itd.

Pri izolaciji mikroba od bolesnika, uzročnik se identificira proučavanjem njegovih antigenskih svojstava pomoću imunoloških dijagnostičkih seruma, tj. krvnih seruma hiperimuniziranih životinja koji sadrže specifična protutijela. Ovaj tzv serološka identifikacija mikroorganizama.

Široko se koristi u mikrobiologiji i imunologiji aglutinacija, precipitacija, reakcije neutralizacije, reakcije s komplementom, pomoću obilježenih protutijela i antigena (radioimunološki, enzimski imunotest, imunofluorescentne metode). Navedene reakcije razlikuju se po registriranom učinku i tehnici stupnjevanja, no sve se temelje na reakciji interakcije antigena s protutijelom i koriste se za dokazivanje i protutijela i antigena. Reakcije imuniteta karakteriziraju visoka osjetljivost i specifičnost.

Značajke interakcije antitijela s antigenom su osnova dijagnostičke reakcije u laboratorijima. Reakcija in vitro između antigena i antitijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. NA specifična faza dolazi do brzog specifičnog vezanja aktivnog mjesta protutijela na determinantu antigena. Zatim dolazi nespecifična faza - sporije, što se očituje vidljivim fizičke pojave, na primjer, stvaranje ljuskica (fenomen aglutinacije) ili taloga u obliku zamućenja. Ova faza zahtijeva određene uvjete (elektroliti, optimalni pH medija).

Vezanje antigenske determinante (epitopa) na aktivno mjesto Fab fragmenta antitijela nastaje zbog van der Waalsovih sila, vodikovih veza i hidrofobnih interakcija. Snaga i količina antigena vezanog antitijelima ovisi o afinitetu, avidnosti antitijela i njihovoj valenciji.

Imunodeficijencije, primarne i posebno sekundarne su raširene među ljudima. Oni su uzrok manifestacije mnogih bolesti i patoloških stanja, stoga zahtijevaju prevenciju i liječenje imunotropnim lijekovima.

34. Inaktivirana (korpuskularna) cjepiva. Priznanica. Primjena. Prednosti. Nedostaci.

Inaktivirana (umrtvljena, čestična ili molekularna) cjepiva- pripravci, kao aktivni sastojak, uključujući i one ubijene kemijskim ili na fizički način kulture patogenih virusa ili bakterija (stanične, virionske) ili komplekse antigena ekstrahiranih iz patogenih mikroba koji sadrže zaštitne antigene (subcelularna, subvirionska cjepiva).

Za izolaciju antigenskih kompleksa (glikoproteina, LPS, proteina) iz bakterija i virusa koriste se trikloroctena kiselina, fenol, enzimi i izoelektrično taloženje.

Dobivaju se uzgojem patogenih bakterija i virusa na umjetnim hranjivim podlogama, inaktivirani, izolirani antigenski kompleksi, pročišćeni, konstruirani u obliku tekućeg ili liofilnog pripravka.

Prednost ove vrste cjepiva je relativna jednostavnost dobivanja (nije potrebno dugotrajno proučavanje i izolacija sojeva). Nedostaci uključuju nisku imunogenost, potrebu za trostrukom primjenom i visoku reaktogenost formaliziranih cjepiva. Također, u usporedbi sa živim cjepivima, imunitet koji izazivaju je kratkotrajan.

Trenutno se koriste sljedeća mrtva cjepiva: protiv tifusa, obogaćeno Vi antigenom; cjepivo protiv kolere, cjepivo protiv hripavca.

1 Serološki testovi koji se koriste za dijagnozu virusne infekcije.

imunološke reakcije koristi se u dijagnostičkim i imunološkim studijama kod bolesnih i zdravih ljudi. U tu svrhu primijenite serološke metode, tj. metode proučavanja antitijela i antigena pomoću reakcija antigen-antitijelo utvrđenih u krvnom serumu i drugim tekućinama, kao i tjelesnim tkivima.

Otkrivanje antitijela protiv antigena uzročnika u krvnom serumu pacijenta omogućuje dijagnosticiranje bolesti. Serološkim istraživanjima također se identificiraju mikrobni antigeni, različite biološki aktivne tvari, krvne grupe, tkivni i tumorski antigeni, imunološki kompleksi, stanični receptori itd.

Kada se mikrob izolira iz bolesnika, uzročnik se identificira proučavanjem njegovih antigenskih svojstava pomoću imunoloških dijagnostičkih seruma, tj. krvnih seruma hiperimuniziranih životinja koji sadrže specifična protutijela. To je takozvana serološka identifikacija mikroorganizama.

U mikrobiologiji i imunologiji naširoko se koriste reakcije aglutinacije, precipitacije, reakcije neutralizacije, reakcije koje uključuju komplement, uz korištenje obilježenih protutijela i antigena (radioimunološki, enzimski imunotest, imunofluorescentne metode). Navedene reakcije razlikuju se po registriranom učinku i tehnici stupnjevanja, no sve se temelje na reakciji interakcije antigena s protutijelom i koriste se za dokazivanje i protutijela i antigena. Reakcije imuniteta karakteriziraju visoka osjetljivost i specifičnost.

Značajke interakcije antitijela s antigenom temelj su dijagnostičkih reakcija u laboratorijima. In vitro reakcija između antigena i protutijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. U specifičnoj fazi dolazi do brzog specifičnog vezanja aktivnog mjesta protutijela na determinantu antigena. Zatim dolazi nespecifična faza – sporija, koja se očituje vidljivim fizikalnim pojavama, poput stvaranja ljuskica (fenomen aglutinacije) ili taloga u obliku zamućenja. Ova faza zahtijeva određene uvjete (elektroliti, optimalni pH medija).

Br. 2 Uzročnici lišmanioze. Taksonomija. Značajka. Mikrobiološka dijagnostika. Liječenje.

Taksonomija: tip Sarcomastigophorae, podtip Mastigophora - flagela, razred Zoomastigophora, red Kinetoplastida, rod Leishmania.

uzgoj: NNN medij kulture koji sadrži agar od defibrinirane krvi kunića. Leishmania također raste na korionsko-alantoisnoj membrani pilećeg embrija iu kulturama stanica.

Epidemiologija: u zemljama s toplom klimom. Mehanizam prijenosa uzročnika je transmisivan, putem uboda vektora – komaraca. Glavni izvori uzročnika: u kožnoj antroponoznoj lišmaniozi - ljudi; s kožnom zoonotskom lišmaniozom - glodavcima; s visceralnom lišmaniozom - ljudi; s mukokutanom lišmaniozom - glodavci, divlje i domaće životinje.

Patogeneza i klinika. Dva su uzročnika kožne lišmanioze: L. tropica, uzročnik antroponotične lišmanioze, i L. major, uzročnik zoonotične kožne lišmanioze.

Antroponoznu kožnu lišmaniozu karakterizira dugo razdoblje inkubacije - nekoliko mjeseci. Na mjestu uboda komarca pojavljuje se kvržica koja se nakon 3 mjeseca povećava i ulcerira. Čirevi su češće locirani na licu i gornjim udovima, ožiljci do kraja godine. Zoonotska kožna lišmanijaza (rani ulcerativni lišmanijaza, Pendinski ulkus, ruralni oblik) je akutnija. Razdoblje inkubacije je 2-4 tjedna. Mokri čirevi su češće lokalizirani na Donji udovi. Mukokutana lišmanijaza uzrokovana je lišmanijom kompleksa L. braziliensis; razvija granulomatozne i ulcerativne lezije kože nosa, sluznice usta i grkljana. Antraponoznu visceralnu lišmaniozu uzrokuje lišmanija kompleksa L. donovani; kod bolesnika su zahvaćeni jetra, slezena, limfni čvorovi, koštana srž i probavni trakt.

Imunitet: uporan doživotno

U razmazima (iz tuberkula, sadržaja ulkusa, punktata iz organa), obojenih po Romanovsky-Giemsi, unutarstanično su smještene male lišmanije (amastigoti) ovalnog oblika. Za izolaciju čiste kulture uzročnika inokulacija se vrši na NNN medij: inkubacija 3 tjedna. Serološke metode nisu dovoljno specifične. Moguće je koristiti RIF, ELISA.

Kožni alergijski test za HNL na lišmanin koristi se u epidemiološkim studijama lišmanioze.

Liječenje: Kod visceralne lišmanioze koriste se preparati antimona i diamidini (pentamidin). Uz kožnu lišmaniozu - kinakrin, amfotericin.

Prevencija: uništavati bolesne životinje, provoditi borbu protiv glodavaca i komaraca. Imunoprofilaksa kožne lišmanioze provodi se inokulacijom žive kulture L. major.

ULAZNICA#28

№ 1 Imunoglobulini, struktura i funkcije.

priroda imunoglobulina. Kao odgovor na uvođenje antigena, imunološki sustav proizvodi antitijela - proteine koji se mogu specifično spojiti s antigenom koji je uzrokovao njihovo stvaranje, te tako sudjelovati u imunološkim reakcijama. Protutijela pripadaju β-globulinima, tj. onom dijelu proteina krvnog seruma koji je najmanje pokretljiv u električnom polju. U tijelu β-globuline proizvode posebne stanice - plazma stanice. α-globulini koji imaju funkciju antitijela nazivaju se imunoglobulini i označavaju se simbolom Ig. Prema tome, antitijela su imunoglobulini koji nastaju kao odgovor na uvođenje antigena i sposobni su za specifičnu interakciju s istim antigenom.

Funkcije. Primarna funkcija je interakcija njihovih aktivnih središta s komplementarnim determinantama antigena. Sekundarna funkcija je njihova sposobnost da:

Vežu antigen kako bi ga neutralizirali i eliminirali iz organizma, odnosno sudjelovali u stvaranju zaštite od antigena;

Sudjelovati u prepoznavanju "stranog" antigena;

Osigurati suradnju imunokompetentne stanice(makrofagi, T- i B-limfociti);

Sudjelovati u razne forme imunološki odgovor (fagocitoza, killer funkcija, GNT, HRT, imunološka tolerancija, imunološka memorija).

Struktura antitijela. Proteini imunoglobulina kemijski sastav pripadaju glikoproteinima, jer se sastoje od proteina i šećera; izgrađen od 18 aminokiselina. Imaju razlike u vrstama povezane uglavnom sa skupom aminokiselina. Njihove molekule imaju cilindrični oblik, vidljive su u elektronskom mikroskopu. Do 80% imunoglobulina ima konstantu sedimentacije 7S; otporan na slabe kiseline, lužine, zagrijavanje do 60 °C. Imunoglobuline iz krvnog seruma moguće je izolirati fizikalnim i kemijskim metodama (elektroforeza, izoelektrično taloženje alkoholom i kiselinama, soljenje, afinitetna kromatografija itd.). Ove se metode koriste u proizvodnji u izradi imunobioloških pripravaka.

Imunoglobulini se prema strukturi, antigenskim i imunobiološkim svojstvima dijele u pet klasa: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imunoglobulini M, G, A imaju podklase. Na primjer, IgG ima četiri potklase (IgG, IgG 2 , IgG 3 , IgG 4). Sve klase i podklase razlikuju se po aminokiselinskom slijedu.

Molekule imunoglobulina svih pet klasa sastoje se od polipeptidnih lanaca: dva identična teška lanca H i dva identična laka lanca - L, povezani disulfidnim mostovima. Prema svakoj klasi imunoglobulina, tj. M, G, A, E, D, razlikuju pet tipova teških lanaca: ? (mu), ? (gama), ? (alfa), ? (epsilon) i? (delta), koji se razlikuju po antigenosti. Laki lanci svih pet klasa su uobičajeni i dolaze u dvije vrste: ? (kappa) i? (lambda); L-lanci imunoglobulina različitih klasa mogu se spojiti (rekombinirati) i s homolognim i s heterolognim H-lancima. Međutim, u istoj molekuli mogu postojati samo identični L-lanci (? ili?). I H- i L-lanci imaju varijabilnu - V regiju, u kojoj je sekvenca aminokiselina nestabilna, i konstantnu - C regiju s konstantnim skupom aminokiselina. U lakim i teškim lancima razlikuju se NH 2 - i COOH-terminalne skupine.

Tijekom obrade? -globulin merkaptoetanol razara disulfidne veze i molekula imunoglobulina se razlaže u zasebne lance polipeptida. Kada je izložen proteolitičkom enzimu papainu, imunoglobulin se cijepa na tri fragmenta: dva nekristalizirajuća fragmenta koja sadrže determinantne skupine za antigen i nazivaju se Fab fragmenti I i II, i jedan kristalizirajući Fc fragment. Fragmenti FabI i FabII slični su po svojstvima i sastavu aminokiselina i razlikuju se od Fc fragmenta; Fab- i Fc-fragmenti su kompaktne formacije međusobno povezane fleksibilnim dijelovima H-lanca, zbog čega molekule imunoglobulina imaju fleksibilnu strukturu.

I H-lanci i L-lanci imaju odvojene, linearno povezane kompaktne regije koje se nazivaju domene; ima ih 4 u H-lancu, a 2 u L-lancu.

Aktivna mjesta ili determinante koje se formiraju u V-područjima zauzimaju približno 2% površine molekule imunoglobulina. Svaka molekula ima dvije determinante vezane uz hipervarijabilne regije H- i L-lanci, tj. svaka molekula imunoglobulina može vezati dvije molekule antigena. Prema tome, antitijela su dvovalentna.

Tipična struktura molekule imunoglobulina je IgG. Preostale klase imunoglobulina razlikuju se od IgG u dodatnim elementima organizacije svojih molekula.

Kao odgovor na uvođenje bilo kojeg antigena mogu se proizvesti antitijela svih pet klasa. Obično se prvo proizvodi IgM, zatim IgG, ostatak - malo kasnije.

No 2. Uzročnik klamidije. Taksonomija. Značajka. Mikrobiološka dijagnostika. Liječenje.

Taksonomija: red Chlamydiales, porodica Chlamydaceae, rod Chlamydia. Rod je zastupljen vrstama C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.

Bolesti uzrokovane klamidijom nazivaju se klamidija. Bolesti uzrokovane C. trachomatis i C. pneumoniae su antroponoza. Ornitoza, čiji je uzročnik C. psittaci, je zooantroponozna infekcija.

Morfologija klamidije: mala, gram "-" bakterija, sfernog oblika. Ne stvara spore, nema flagele i kapsule. Stanična stijenka: 2-slojna membrana. Imaju glikolipide. Gram je crven. Glavna metoda bojenja je prema Romanovsky-Giemsi.

2 oblika postojanja: elementarna tijela (neaktivne zarazne čestice, izvan stanice); retikularna tjelešca (unutar stanica, vegetativni oblik).

Uzgoj: Može se razmnožavati samo u živim stanicama. NA žumanjčana vrećica u razvoju pilećih embrija, prijemljivih životinja i u kulturi stanica

Enzimska aktivnost: mali. Oni fermentiraju pirogrožđanu kiselinu i sintetiziraju lipide. Nije sposoban sintetizirati visokoenergetske spojeve.

Antigenska struktura: Antigeni tri vrste: termostabilni lipopolisaharid specifičan za rod (u staničnoj stijenci). Identificiran uz pomoć RSK; antigen specifičan za vrstu proteinske prirode (u vanjskoj membrani). Otkrij pomoću RIF-a; varijantno specifični antigen proteinske prirode.

faktori patogenosti. Proteini vanjske membrane klamidije povezani su s njihovim adhezivnim svojstvima. Ti se adhezini nalaze samo u elementarnim tijelima. Klamidija proizvodi endotoksin. Utvrđeno je da neke klamidije imaju protein toplinskog šoka koji može izazvati autoimune reakcije.

otpornost. Visoko na različite čimbenike vanjsko okruženje. Otporan na niske temperature, sušenje. Osjetljivo na toplinu.

C. trachomatis je uzročnik bolesti genitourinarnog sustava, očiju i dišnih puteva u ljudi.

Trahom je kronična zarazna bolest koju karakterizira oštećenje konjunktive i rožnice oka. Antroponoza. Prenosi se putem kontakt-kućanstva.

Patogeneza: utječe na sluznicu očiju. Prodire u epitel konjunktive i rožnice, gdje se umnožava, uništavajući stanice. Razvija se folikularni keratokonjunktivitis.

Dijagnostika: pregled strugotina s konjunktive. U zahvaćenim stanicama, kada se boje prema Romanovsky-Giemsi, nalaze se citoplazmatske inkluzije ljubičaste boje, smještene u blizini jezgre - Provachekovo tijelo. RIF i ELISA također se koriste za otkrivanje specifičnog klamidijskog antigena u zahvaćenim stanicama. Ponekad se pribjegavaju uzgoju klamidije trahoma na pilećim embrijima ili kulturi stanica.

Liječenje: antibiotici (tetraciklin) i imunostimulansi (interferon).

Prevencija: Nespecifičan.

Urogenitalna klamidija je spolno prenosiva bolest. Ovo je akutna / kronična zarazna bolest koju karakterizira dominantna lezija genitourinarnog trakta.

Ljudska infekcija javlja se kroz sluznicu genitalnog trakta. Glavni mehanizam infekcije je kontakt, način prijenosa je seksualni.

Imunitet: stanični, sa serumom zaraženih - specifičnih antitijela. Nakon prenesene bolesti - ne formira se.

Dijagnostika: U bolestima očiju koristi se bakterioskopska metoda - intracelularne inkluzije otkrivaju se u strugotinama epitela konjunktive. RIF se koristi za otkrivanje antigena klamidije u zahvaćenim stanicama. U slučaju oštećenja genitourinarnog trakta može se primijeniti biološka metoda koja se temelji na infekciji ispitivanim materijalom (strugotine epitela iz uretre, vagine) kulture stanica.

Izjava RIF, ELISA vam omogućuje otkrivanje antigena klamidije u ispitivanom materijalu. Serološka metoda - za dokazivanje IgM protiv C. trachomatis u dijagnostici upale pluća u novorođenčadi.

Liječenje. antibiotici (azitromicin iz skupine makrolida), imunomodulatori, eubiotici.

Prevencija. Samo nespecifična (liječenje bolesnika), osobna higijena.

Venerični limfogranulom je spolno prenosiva bolest koju karakteriziraju lezije genitalnih organa i regionalnih limfnih čvorova. Mehanizam infekcije je kontakt, put prijenosa je spolni.

Imunitet: perzistentna, stanična i humoralna imunost.

Dijagnostika: Materijal za studiju je gnoj, biopsija iz zahvaćenih limfnih čvorova, krvni serum. Bakterioskopska metoda, biološka (uzgoj u žumanjčanoj vrećici pilećeg embrija), serološka (RCC s parnim serumima je pozitivan) i alergološka (intradermalni test s alergenom klamidije) metoda.

Liječenje. Antibiotici - makrolidi i tetraciklini.

Prevencija: Nespecifičan.

C. pneumoniae - uzročnik respiratorne klamidije, uzrokuje akutne i kronični bronhitis i upala pluća. Antroponoza. Infekcija je kapljicama u zraku. U pluća ulaze kroz gornji dišni put. Izazvati upalu.

Dijagnostika: postavljanje RSK za dokazivanje specifičnih antitijela (serološka metoda). Kod primarne infekcije uzima se u obzir otkrivanje IgM. RIF se također koristi za otkrivanje klamidijskog antigena i PCR.

Liječenje: Provodi se uz pomoć antibiotika (tetraciklina i makrolida).

Prevencija: Nespecifičan.

C. psittaci – uzročnik ornitoze – akutni zarazna bolest, koji je karakteriziran oštećenjem pluća, živčanog sustava i parenhimskih organa (jetra, slezena) i intoksikacijom.

Zooantroponoza. Izvori zaraze - ptice. Mehanizam infekcije je aerogen, put prijenosa je zračni. Uzročnik je preko sluzi. školjke dišu. putova, u epitel bronha, alveole, razmnožava se, upala.

Dijagnostika: Materijal za studiju je krv, sputum pacijenta, krvni serum za serološko testiranje.

Koristi se biološka metoda - uzgoj klamidije u žumanjčanoj vrećici pilećeg embrija, u kulturi stanica. Serološka metoda. Primijeniti RSK, RPHA, ELISA, koristeći upareni krvni serum pacijenta. Intradermalni alergijski test s ornitinom.

Liječenje: antibiotici (tetraciklini, makrolidi).

ULAZNICA#29

br. 1. Uzročnik difterije. Taksonomija i karakteristike. Uvjetno patogene korinebakterije. Mikrobiološka dijagnostika. Detekcija anatoksičnog imuniteta. Specifična prevencija i liječenje.

Difterija je akutna zarazna bolest koju karakterizira fibrinozna upala ždrijela, grkljana, rjeđe drugih organa i intoksikacija. Njegov uzročnik je Corynebacterium diphtheriae.

Taksonomija. Corynebacterium pripada odjelu Firmicutes, rodu Corynebacterium.

Morfološka i tinktorijalna svojstva. Uzročnik difterije karakterizira polimorfizam: nalaze se tanki, blago zakrivljeni štapići (najčešće), kokoidni i razgranati oblici. Bakterije su često smještene pod kutom jedna prema drugoj. Ne stvaraju spore, nemaju flagele, mnogi sojevi imaju mikrokapsulu. Značajka- prisutnost volutinskih zrnaca na krajevima štapića (uzrokuje toljasti oblik). Uzročnik difterije po Gramu se boji pozitivno.

kulturnih dobara. Fakultativni anaerob, opt. temperatura. Mikrob raste na posebnim hranjivim medijima, na primjer, na Claubergovom mediju (krvno-teluritni agar), na kojem bacil difterije daje kolonije 3 vrste: a) velike, sive, s neravnim rubovima, radijalne pruge, nalik na tratinčice; b) mala, crna, konveksna, glatkih rubova; c) slično prvom i drugom.

Ovisno o kulturološkim i enzimskim svojstvima, razlikuju se 3 biološke varijante C. diphtheriae: gravis, mitis i intermediate intermedius.

enzimska aktivnost. visoko. Fermentiraju glukozu i maltozu pri stvaranju kiseline, ne razgrađuju saharozu, laktozu i manitol. Ne stvaraju ureazu i ne stvaraju indol. Proizvodi enzim cistinazu, koji cijepa cistein do H 2 S. Formira katalazu, sukcinat dehidrogenazu.

antigenska svojstva. O-antigeni su termostabilni polisaharidi smješteni duboko u staničnoj stijenci. K-antigeni - površinski, termolabilni, sivkasto specifični. Uz pomoć seruma na K-antigen C. diph. podijeljen na serovare (58).

faktori patogenosti. Egzotoksin koji remeti sintezu proteina i, kao rezultat, utječe na stanice miokarda, nadbubrežnih žlijezda, bubrega i živčanih ganglija. Sposobnost proizvodnje egzotoksina posljedica je prisutnosti u stanici profaga koji nosi tox gen odgovoran za stvaranje toksina. Enzimi agresije - hijaluronidaza, neuraminidaza. Mikrokapsula također spada u faktore patogenosti.

otpornost. Otporan na sušenje, djelovanje niske temperature, stoga se može nekoliko dana čuvati na predmetima u vodi.

Epidemiologija. Izvor difterije - bolesne osobe Infekcija se češće javlja dišnim putem. Glavni put prijenosa je zrakom, moguće je i kontaktni način- kroz posteljinu, posuđe.

Patogeneza. Ulazna vrata infekcije su sluznice ždrijela, nosa, respiratornog trakta, očiju, genitalija, površine rane. Na mjestu ulaznih vrata opaža se fibrinozna upala, formira se karakterističan film koji se teško odvaja od temeljnih tkiva. Bakterije luče egzotoksin koji ulazi u krv – nastaje toksinemija. Toksin utječe na miokard, bubrege, nadbubrežne žlijezde i živčani sustav.

Klinika. Postoje različiti lokalizacijski oblici difterije: difterija ždrijela, koja se opaža u 85-90% slučajeva, difterija nosa, grkljana, očiju, vulve, kože, rana. Razdoblje inkubacije je od 2 do 10 dana. Bolest počinje groznicom, bolom pri gutanju, pojavom filma na krajnicima, natečenim limfnim čvorovima. Razvija se oticanje grkljana, difterijski krup, što može dovesti do asfiksije i smrti. Ostale teške komplikacije koje također mogu uzrokovati smrt su toksični miokarditis, paraliza dišnih mišića.

Imunitet. Nakon bolesti - uporan, intenzivan antitoksični imunitet. Od posebne je važnosti stvaranje protutijela na fragment B. Oni neutraliziraju histotoksin difterije, sprječavajući pričvršćivanje potonjeg na stanicu. Antibakterijski imunitet - bez stresa, sivkasto specifičan

Mikrobiološka dijagnostika. Uz pomoć tampona pacijentu se uzima film i sluz iz grla i nosa. Za postavljanje preliminarne dijagnoze moguće je koristiti bakterioskopsku metodu. Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka: inokulacija na podlogu Klauber II (krvno-teluritni agar), na podlogu s gustim serumom za dokazivanje produkcije cistinaze, na podlogu Hiss, na podlogu za određivanje toksigenosti uzročnika. Intraspecifična identifikacija sastoji se u određivanju bio- i serovara. Za ubrzano otkrivanje toksina difterije koriste se: RIGA (reakcija neizravne hemaglutinacije) s eritrocitnim dijagnostikumom protutijela, reakcija neutralizacije protutijela (prisutnost toksina prosuđuje se prema učinku sprječavanja hemaglutinacije); RIA (radioimuni) i ELISA (enzimski imunotest).

Liječenje. Glavna metoda terapije je neposredna primjena specifičnog antitoksičnog antidifterijskog tekućeg seruma konja. Humani imunoglobulin antidifterijski za intravenoznu primjenu.

Povezana cjepiva: DTP (apsorbirano cjepivo protiv hripavca-tetanusa), DTP (apsorbirani toksoid difterije-tetanusa).

№ 2 Klase imunoglobulina, njihove karakteristike.

Imunoglobulini se prema strukturi, antigenskim i imunobiološkim svojstvima dijele u pet klasa: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.

Imunoglobulin klase G. Izotip G je glavnina Ig seruma. Čini 70-80% svih serumskih Ig, dok se 50% nalazi u tkivnoj tekućini. Prosječan sadržaj IgG u krvnom serumu zdrave odrasle osobe iznosi 12 g/l. Poluživot IgG je 21 dan.

IgG je monomer koji ima 2 centra za vezanje antigena (istodobno može vezati 2 molekule antigena, stoga mu je valencija 2), molekulske mase oko 160 kDa i konstante sedimentacije 7S. Postoje podtipovi Gl, G2, G3 i G4. Sintetiziraju ga zreli B-limfociti i plazma stanice. Dobro je definiran u krvnom serumu na vrhuncu primarnog i sekundarnog imunološkog odgovora.

Ima visok afinitet. IgGl i IgG3 vežu komplement, a G3 je aktivniji od Gl. IgG4, poput IgE, ima citofilnost (tropizam ili afinitet za mastocite i bazofile) i uključen je u razvoj alergijska reakcija tipkam. U imunodijagnostičkim reakcijama IgG se može manifestirati kao nepotpuno protutijelo.

Lako prolazi kroz placentarnu barijeru i osigurava humoralni imunitet novorođenčeta u prva 3-4 mjeseca života. Također se može izlučiti u sekret sluznice, uključujući mlijeko difuzijom.

IgG osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena, pokreće citolizu posredovanu komplementom i citotoksičnost posredovanu stanicama ovisnu o antitijelima.

Imunoglobulin klase M. Najveća molekula od svih Ig. Ovo je pentamer koji ima 10 centara za vezanje antigena, tj. njegova valencija je 10. Njegova molekularna težina je oko 900 kDa, konstanta sedimentacije je 19S. Postoje podtipovi Ml i M2. Teški lanci molekule IgM, za razliku od drugih izotipova, izgrađeni su od 5 domena. Poluživot IgM je 5 dana.

Čini oko 5-10% svih serumskih Ig. Prosječan sadržaj IgM u krvnom serumu zdrave odrasle osobe je oko 1 g/l. Ova razina kod ljudi se postiže u dobi od 2-4 godine.

IgM je filogenetski najstariji imunoglobulin. Sintetiziraju ga prekursori i zreli B-limfociti. Nastaje na početku primarnog imunološkog odgovora, također se prvi sintetizira u organizmu novorođenčeta – utvrđuje se već u 20. tjednu intrauterinog razvoja.

Ima visoku avidnost i najučinkovitiji je aktivator komplementa u klasičnom putu. Sudjeluje u stvaranju seruma i sekretora humoralni imunitet. Budući da je polimerna molekula koja sadrži J-lanac, može formirati sekretorni oblik i izlučiti u sekret sluznice, uključujući mlijeko. Većina normalna antitijela i izoaglutinini odnosi se na IgM.

Ne prolazi kroz placentu. Otkrivanje specifičnih protutijela izotipa M u krvnom serumu novorođenčeta ukazuje na bivšu intrauterinu infekciju ili defekt posteljice.

IgM osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena, pokreće citolizu posredovanu komplementom i citotoksičnost posredovanu stanicama ovisnu o antitijelima.

Imunoglobulin klase A. Postoji u serumskom i sekretornom obliku. Oko 60% svih IgA nalazi se u mukoznim sekretima.

IgA u serumu:Čini oko 10-15% svih serumskih Ig. Krvni serum zdrave odrasle osobe sadrži oko 2,5 g/l IgA, maksimum se postiže u dobi od 10 godina. Poluživot IgA je 6 dana.

IgA je monomer, ima 2 centra za vezanje antigena (tj. 2-valentni), molekulsku težinu od oko 170 kDa i konstantu sedimentacije od 7S. Postoje podtipovi A1 i A2. Sintetiziraju ga zreli B-limfociti i plazma stanice. Dobro je definiran u krvnom serumu na vrhuncu primarnog i sekundarnog imunološkog odgovora.

Ima visok afinitet. Može biti nepotpuno antitijelo. Ne veže komplement. Ne prolazi kroz placentarnu barijeru.

IgA osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena, pokreće citotoksičnost posredovanu stanicama ovisnu o antitijelima.

Sekretorni IgA: Za razliku od seruma, sekretorni sIgA postoji u polimernom obliku kao di- ili trimer (4- ili 6-valentni) i sadrži J- i S-peptide. Molekulska težina 350 kDa i više, konstanta sedimentacije 13S i više.

Sintetiziraju ga zreli B-limfociti i njihovi potomci - plazma stanice odgovarajuće specijalizacije samo unutar sluznice i oslobađaju se u njihove tajne. Količina proizvodnje može doseći 5 g dnevno. Pul slgA smatra se najbrojnijim u tijelu - njegov broj premašuje ukupni sadržaj IgM i IgG. Ne nalazi se u krvnom serumu.

Sekretorni oblik IgA glavni je čimbenik specifičnog humoralnog lokalnog imuniteta sluznice gastrointestinalnog trakta, genitourinarnog sustava i respiratornog trakta. Zbog S-lanca otporan je na proteaze. slgA ne aktivira komplement, ali se učinkovito veže na antigene i neutralizira ih. Sprječava adheziju mikroba na epitelne stanice i generalizaciju infekcije unutar sluznice.

Imunoglobulin klase E. Naziva se i reagin. Sadržaj u krvnom serumu je izuzetno nizak - približno 0,00025 g / l. Detekcija zahtijeva korištenje posebnih visoko osjetljivih dijagnostičkih metoda. Molekularna težina - oko 190 kDa, konstanta sedimentacije - oko 8S, monomer. Čini oko 0,002% svih cirkulirajućih Ig. Ova razina se postiže u dobi od 10-15 godina.

Sintetiziraju ga zreli B-limfociti i plazma stanice uglavnom u limfoidnom tkivu bronhopulmonalnog stabla i gastrointestinalnog trakta.

Ne veže komplement. Ne prolazi kroz placentarnu barijeru. Ima izraženu citofilnost – tropizam za mastocite i bazofile. Sudjeluje u razvoju preosjetljivosti neposredni tip- reakcija tipa I.

Imunoglobulin klase D. O Ig ovog izotipa nema puno podataka. Gotovo u potpunosti sadržan u krvnom serumu u koncentraciji od oko 0,03 g / l (oko 0,2% od ukupnog broja cirkulirajućih Ig). IgD ima molekularnu težinu od 160 kDa i konstantu sedimentacije od 7S, monomer.

Ne veže komplement. Ne prolazi kroz placentarnu barijeru. Receptor je za prekursore B-limfocita.

ULAZNICA#30

br. 1. Uzročnik amebijaze. Taksonomija. Karakteristično. Mikrobiološka dijagnostika. specifično liječenje.

Taksonomija: tip Sarcomastigophorae, subfilum Sarcodina, razred Lobosia, red Amoebida.

Morfologija: Postoje dvije faze razvoja patogena: vegetativni i cistični. Vegetativni stadij ima više oblika: veliki vegetativni (tkivni), mali vegetativni; prekistični oblik, sličan prozirnom, tvoreći ciste.

Cista (stadij mirovanja) ima ovalni oblik. Zrela cista sadrži 4 jezgre. Translucentni oblik je neaktivan, živi u lumenu gornja podjela debelo crijevo kao bezopasni komensal, hrani se bakterijama i detritusom.

Veliki vegetativni oblik nastaje, pod određenim uvjetima, iz malog vegetativnog oblika. Najveći je, formira pseudopodije i ima pokretljivost. Može fagocitirati eritrocite. Nalazi se u svježem izmetu kod amebijaze.

uzgoj: uključeno hranjive podloge bogata hranjivim tvarima.

Otpornost: Izvan tijela, vegetativni oblici patogena brzo (unutar 30 minuta) umiru. Ciste su otporne na okoliš zadržavaju se u fekalijama i vodi. U prehrambenim namirnicama, na povrću i voću, ciste se zadržavaju nekoliko dana. Umiru kad se kuhaju.

Epidemiologija: Amebijaza - antroponozna bolest; izvor invazije je čovjek. Mehanizam prijenosa je fekalno-oralni. Infekcija se javlja kada se ciste unesu s hranom, vodom, kroz kućanske predmete.

Patogeneza i klinika: Ciste koje su ušle u crijevo, a potom iz njih nastale, luminalni oblici ameba mogu živjeti u debelom crijevu, a da ne uzrokuju bolest. Sa smanjenjem otpornosti tijela, amebe prodiru u crijevnu stijenku i množe se. Razvija se crijevna amebijaza.

Trofozoiti tkivnog oblika su pokretni zbog stvaranja pseudopodija. Prodiru u stijenku debelog crijeva, uzrokujući nekrozu; sposoban fagocitozirati eritrocite; može se naći u ljudskom izmetu. Uz nekrozu nastaju čirevi. Klinički, intestinalna amebijaza manifestira se u obliku čestih tekućih stolica s krvlju, praćenih vrućicom i dehidracijom. U izmetu se nalazi gnoj i sluz, ponekad s krvlju.

Ameba s protokom krvi može ući u jetru, pluća, mozak, što rezultira razvojem ekstraintestinalne amebijaze.

Imunitet: Nestabilan, uglavnom je aktivna mobilna veza.

Mikrobiološka dijagnostika. Glavna metoda je mikroskopski pregled pacijentovog izmeta, kao i sadržaja apscesa. unutarnji organi. Brisevi se boje Lugolovom otopinom ili hematoksilinom. Serološke studije (RNGA, ELISA, RSK): najveći titar protutijela u krvnom serumu otkriva se s ekstraintestinalnom amebijazom.

Liječenje: Nanesite metronidazol, furamid.

Prevencija: prepoznavanje i liječenje cističnih izlučivača i kliconoša ameba, opće sanitarne mjere.

2 Interferoni. Priroda, metode dobivanja. Primjena.

Interferoni su glikoproteini koje proizvode stanice kao odgovor na virusnu infekciju i druge podražaje. Oni blokiraju reprodukciju virusa u drugim stanicama i sudjeluju u interakciji stanica imunološkog sustava. Postoje dvije serološke skupine interferona: tip I - IFN-? i IFN-a; II tip - IFN-.? Interferoni tipa I djeluju antivirusno i antitumorski, dok interferoni tipa II reguliraju specifični imunološki odgovor i nespecifičnu rezistenciju.

Interferon (leukocitarni) proizvode leukociti tretirani virusima i drugim agensima. α-interferon (fibroblast) proizvode fibroblasti tretirani virusom.

IFN tipa I veže se za zdrave stanice i štiti ih od virusa. Antivirusni učinak IFN-a tipa I također može biti posljedica činjenice da je sposoban inhibirati proliferaciju stanica ometanjem sinteze aminokiselina.

IFN-? koje proizvode T-limfociti i NK. Potiče aktivnost T- i B-limfocita, monocita/makrofaga i neutrofila. Inducira apoptozu aktiviranih makrofaga, keratinocita, hepatocita, stanica koštana srž, endoteliocite i potiskuje apoptozu perifernih monocita i neurona inficiranih herpesom.

Genetski modificirani leukocitni interferon proizvodi se u prokariotskim sustavima (E. coli). Biotehnologija proizvodnje leukocitnog interferona uključuje sljedeće korake: 1) liječenje leukocitne mase induktorima interferona; 2) izolacija smjese mRNA iz tretiranih stanica; 3) dobivanje ukupne komplementarne DNA korištenjem reverzne transkriptaze; 4) umetanje cDNA u plazmid Escherichie coli i njegovo kloniranje; 5) selekcija klonova koji sadrže gene interferona; 6) uključivanje u plazmid jakog promotora za uspješnu transkripciju gena; 7) ekspresija gena za interferon, t.j. sinteza odgovarajućeg proteina; 8) uništavanje prokariotskih stanica i pročišćavanje interferona pomoću afinitetne kromatografije.

Interferoni primijeniti za prevenciju i liječenje niza virusnih infekcija. Međutim, njihov učinak je određen dozom lijeka visoke doze render interferona toksični učinak. Interferoni se naširoko koriste za gripu i druge akutne bolesti dišnog sustava. Lijek je učinkovit u ranim fazama bolesti, primijenjen lokalno. Interferoni imaju terapijski učinak kod hepatitisa B, herpesa, a također i kod malignih neoplazmi.

Udio: