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Principali classi di antigeni. Metodi moderni di diagnostica di laboratorio delle malattie autoimmuni Antigene che si lega agli anticorpi specifici dell'antigene o alle cellule T

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Diverse famiglie chimiche di base possono essere antigeni.

Carboidrati (polisaccaridi). I polisaccaridi sono immunogenici solo quando sono associati a proteine carrier. Ad esempio, i polisaccaridi che fanno parte di molecole più complesse (glicoproteine) susciteranno una risposta immunitaria, parte della quale è diretta direttamente al componente polisaccaridico della molecola. Una risposta immunitaria, rappresentata principalmente da anticorpi, può essere indotta contro molti tipi di molecole polisaccaridiche, come componenti di microrganismi e cellule eucariotiche. Un eccellente esempio di antigenicità dei polisaccaridi è la risposta immunitaria associata ai gruppi sanguigni ABO. I polisaccaridi in questo caso sono sulla superficie degli eritrociti.
Lipidi. I lipidi sono raramente immunogenici, ma una risposta immunitaria ad essi può essere suscitata se i lipidi sono coniugati alle proteine di trasporto. Pertanto, i lipidi possono essere considerati come apteni. Sono state notate anche risposte immunitarie ai glicolipidi e agli sfingolipidi.
Acidi nucleici. Gli acidi nucleici sono immunogeni deboli di per sé, ma diventano immunogeni quando si legano alle proteine di trasporto. Il DNA elicoidale nativo di solito non è immunogenico negli animali. Tuttavia, in molti casi, sono state notate risposte immunitarie agli acidi nucleici. Un esempio importante nella medicina clinica è l'emergere di anticorpi anti-DNA in pazienti con lupus eritematoso sistemico.
Scoiattoli. Praticamente tutte le proteine sono immunogeniche. Pertanto, molto spesso la risposta immunitaria si sviluppa alle proteine. Inoltre, maggiore è il livello di complessità proteica, più forte è la risposta immunitaria a quella proteina. La dimensione e la complessità delle molecole proteiche determinano la presenza di molteplici epitopi.

Legame dell'antigene con anticorpi antigene-specifici o cellule T

Legame degli antigeni agli anticorpi, interazione dell'antigene con le cellule B e T ed eventi successivi. In questa fase, è importante sottolineare solo che i legami covalenti non sono coinvolti nel legame dell'antigene all'anticorpo o ai recettori delle cellule T. Il legame non covalente può includere interazioni elettrostatiche, interazioni idrofobiche, legami a idrogeno e forze di van der Waals.

Poiché queste forze interagenti sono relativamente deboli, l'accoppiamento tra un antigene e il suo sito complementare sul recettore dell'antigene deve avvenire su un'area sufficientemente grande da consentire la somma di tutte le possibili interazioni. Questa condizione è alla base dell'eccezionale specificità delle interazioni immunologiche osservate.

Reattività incrociata

Poiché gli antigeni macromolecolari contengono diversi epitopi separati l'uno dall'altro, alcune di queste molecole possono essere modificate senza modificare completamente la loro struttura immunogenetica e antigenica. Ciò ha implicazioni importanti quando si immunizza contro microrganismi altamente patogeni o composti estremamente tossici. In effetti, non è saggio immunizzare con una tossina patogena. Tuttavia, è possibile distruggere l'attività biologica di una tale tossina e di una varietà di altre tossine (ad es. tossine batteriche o veleni di serpente) mantenendo la loro immunogenicità.

Una tossina modificata a tal punto da non essere più tossica ma che conserva ancora alcune caratteristiche immunochimiche è chiamata tossoide. Pertanto, possiamo dire che il tossoide reagisce immunologicamente in modo incrociato con la tossina. Di conseguenza, è possibile, immunizzando un individuo con un tossoide, suscitare una risposta immunitaria a determinati epitopi che sono conservati sul tossoide nella stessa forma della tossina, poiché non sono stati distrutti durante la modifica.

Sebbene le molecole di tossina e tossoide differiscano in molti aspetti fisico-chimici e caratteristiche biologiche, sono immunologicamente cross-reattivi. Un numero sufficiente di epitopi simili permette di indurre una risposta immunitaria al tossoide e di contribuire ad una efficace protezione contro la tossina stessa. Una reazione immunologica in cui i componenti immunitari, siano essi cellule o anticorpi, reagiscono con due molecole che hanno gli stessi epitopi ma differiscono in altri modi è chiamata reazione crociata.

Quando due composti sono immunologicamente cross-reattivi, condividono uno o più epitopi e una risposta immunitaria a uno dei composti riconoscerà uno o più degli stessi epitopi sull'altro composto e lo coinvolgerà nella reazione. Un'altra forma di cross-reattività si verifica quando gli anticorpi o le cellule specifiche per un epitopo si legano, solitamente più deboli, a un altro epitopo che non è esattamente identico ma assomiglia al primo epitopo nella struttura.

I termini "omologo" ed "eterologa" sono usati per indicare che l'antigene usato per l'immunizzazione è diverso da quello contro il quale i componenti immunitari prodotti successivamente reagiranno. Il termine "omologo" significa che l'antigene e l'immunogeno sono gli stessi.

Il termine "eterologa" indica che la sostanza utilizzata per indurre la risposta immunitaria è diversa dalla sostanza che viene successivamente utilizzata per reagire con i prodotti della risposta indotta. In quest'ultimo caso, l'antigene eterologo può o meno reagire con i componenti immunitari. Quando si verifica una reazione, si può concludere che gli antigeni eterologhi e omologhi presentano una cross-reattività immunologica.

Sebbene la specificità sia il criterio principale in immunologia, la reattività crociata immunologica si verifica a molti livelli. Ciò non significa che il ruolo della specificità immunologica sia ridotto, ma piuttosto indica che i composti con cross-reattività hanno gli stessi determinanti antigenici.

In caso di cross-reattività, i determinanti antigenici delle sostanze cross-reattive possono avere strutture chimiche identiche o essere costituiti da strutture fisico-chimiche identiche, ma non identiche. Nell'esempio sopra, la tossina e il suo tossoide corrispondente rappresentano due molecole: la tossina è la molecola originale e il tossoide è una molecola modificata che è cross-reattiva con la molecola originale (nativa).

Esistono altri esempi di cross-reattività immunologica, in cui due sostanze che la possiedono non sono correlate tra loro se non che condividono uno o più epitopi, più precisamente uno o più siti che hanno le stesse caratteristiche tridimensionali. Queste sostanze sono classificate come antigeni eterofili. Ad esempio, gli antigeni del gruppo sanguigno umano A reagiscono con un antisiero preparato contro una capsula pneumococcica polisaccaridica (tipo XIV). Allo stesso modo, gli antigeni del gruppo sanguigno umano B reagiscono con gli anticorpi contro alcuni ceppi di Escherichia coli. In questi esempi di reattività crociata, gli antigeni microbici sono indicati come antigeni eterofili (rispetto agli antigeni del gruppo sanguigno).

Coadiuvanti

Per migliorare la risposta immunitaria all'antigene presentato, vengono spesso utilizzati vari additivi ed eccipienti. Un adiuvante (dal latino adjuvare - aiutare) è una sostanza che, se miscelata con un immunogeno, potenzia la risposta immunitaria contro quell'immunogeno. È importante distinguere tra un portatore di aptene e un adiuvante. L'aptene diventa immunogenico dopo coniugazione covalente con un portatore; non può essere immunogeno se miscelato con un adiuvante. Pertanto, l'adiuvante migliora la risposta immunitaria agli immunogeni. ma non conferisce immunogenicità agli apteni.

Gli adiuvanti sono stati utilizzati per migliorare la risposta immunitaria agli antigeni da oltre 70 anni. Attualmente c'è un crescente interesse nell'identificare nuovi adiuvanti da utilizzare nella vaccinazione, poiché molti vaccini candidati non sono sufficientemente immunogenici. Ciò è particolarmente importante per i vaccini peptidici.

Il meccanismo d'azione dell'adiuvante include: 1) un aumento dell'emivita biologica e immunologica degli antigeni del vaccino; 2) aumento della produzione di citochine infiammatorie locali; 3) miglioramento della consegna, dell'elaborazione degli antigeni e della loro presentazione (presentazione) da parte di APC, in particolare da parte delle cellule dendritiche. È stato empiricamente riscontrato che gli adiuvanti contenenti componenti microbici (es. estratti di micobatteri) sono i migliori. I componenti patogeni fanno sì che i macrofagi e le cellule dendritiche esprimano molecole di costimolazione e secernono citochine.

Recentemente è stato dimostrato che tale induzione da parte di componenti microbiche coinvolge molecole che riconoscono strutture di microrganismi patogeni (es. TLR 2) espresse da queste cellule. Pertanto, il legame dei componenti microbici al TLR fornisce alle cellule un segnale per esprimere molecole di costimolazione e secernere citochine.

Sebbene molti diversi adiuvanti siano stati testati negli esperimenti sugli animali (Tabella 3.2) e negli esperimenti sull'uomo, solo uno è stato utilizzato per la vaccinazione di routine. Attualmente, gli unici adiuvanti approvati per l'uso nei vaccini umani brevettati negli Stati Uniti sono l'idrato di allumina e il fosfato di alluminio.

come componente sale inorganico lo ione alluminio si lega alle proteine, provocandone la precipitazione, il che migliora la risposta infiammatoria, che aumenta in modo non specifico l'immunogenicità dell'antigene. Dopo l'iniezione, l'antigene precipitato viene rilasciato dal sito di iniezione più lentamente del normale. Inoltre, se la dimensione dell'antigene aumenta a seguito della precipitazione, ciò aumenterà la probabilità che la macromolecola sia soggetta a fagocitosi.

Molti adiuvanti sono usati negli esperimenti sugli animali. Uno degli adiuvanti comunemente usati è Adiuvante completo di Freund (FCA), costituito da Mycobacterium tuberculosis o M.Butyricum ucciso, sospeso in olio. Successivamente, da loro viene preparata un'emulsione con soluzione acquosa antigene. L'emulsione acqua in olio contenente adiuvante e antigene consente il rilascio lento e graduale dell'antigene, prolungando l'esposizione dell'immunogeno al ricevente. Altri microrganismi utilizzati come coadiuvanti sono Bacillus Calmette-Guerin (BCG) (attenuato da Mycobacterium), Corynebacterium parvum e Bordetella pertusis.

Infatti, molti di questi coadiuvanti sfruttano la capacità delle molecole espresse dai microbi di attivare le cellule immunitarie. Tali molecole includono lipopolisaccaridi (LPS), DNA batterico contenente ripetizioni dinucleotidiche CpG non metilate e proteine batteriche da shock termico. Molti di questi adiuvanti microbici legano i recettori che riconoscono strutture patogene come i TLR. Il legame di questi recettori, espressi da molti tipi cellulari del sistema immunitario innato, promuove la stimolazione di una risposta adattativa da parte dei linfociti B e T. Ad esempio, le cellule dendritiche sono importanti APC attraverso le quali

Tabella 3.2. Coadiuvanti noti e loro meccanismo d'azione azione dei coadiuvanti microbici. Rispondono con la secrezione di citochine e l'espressione di molecole costimolatorie, che a loro volta stimolano l'attivazione e la differenziazione delle cellule T antigene-specifiche.

Adiuvante	Composizione	Meccanismo di azione
Idrossido o fosfato di alluminio (allume)	Gel di idrossido di alluminio
Alluminio con un dipeptide isolato da micobatteri	Gel idrato di allumina con Muramyl Dipeptide
Alluminio con Bordetella pertusis	Idrato di allumina di abete rosso con Bordetella pertusis uccisa	Aumento dell'assorbimento degli antigeni APC; rallentare il rilascio dell'antigene; induzione di molecole costimolatorie su APC
Completa l'adiuvante di Freund	Emulsione acqua-olio con micobatteri uccisi	Aumento dell'assorbimento degli antigeni APC; rallentare il rilascio dell'antigene; induzione di molecole costimolatorie su APC
Adiuvante di Freund incompleto	Emulsione acqua-olio	Aumento dell'assorbimento degli antigeni APC; rilascio ritardato dell'antigene
Complessi immunostimolanti	Strutture simili a cellule aperte contenenti colesterolo e una miscela di saponine	Rilascio dell'antigene nel citoplasma; permettono di indurre risposte citotossiche delle cellule T

R. Koiko, D. Sunshine, E. Benjamini

Risposta immunitaria dell'organismo: definizione, condizioni di sviluppo. Antigeni: struttura, proprietà, classificazione. Antigeni T-dipendenti e T-indipendenti. Superantigeni.

risposta immunitaria- questa è una complessa reazione cooperativa multicomponente dell'IS del corpo, indotta da un antigene e finalizzata alla sua eliminazione. Il fenomeno della risposta immunitaria è alla base dell'immunità.

La risposta immunitaria dipende da: 1 Antigene - proprietà, composizione, peso molecolare, dose, frequenza di contatto, durata del contatto; 2 Condizioni del corpo - reattività immunologica; 3 Condizioni ambientali.

La risposta immunitaria è caratterizzata da: 1 Clonalità - esistono cloni di linfociti T e B specifici per determinati epitopi (la loro totalità è chiamata gruppo determinante); 2 Specificità; 3 Varietà di AT e TCR; 4 Formazione in cellule e molecole di effettori e cellule di memoria 5 Azioni di meccanismi specifici sono compatibili con azioni non specifiche;6 Controllo del genoma;7 Divisione in naturale e artificiale;

Componenti della risposta immunitaria: 1 Antigeni; 2 Cellule che processano e presentano l'antigene (imacrofagi); 3 Cellule che riconoscono l'antigene (linfociti B e T e loro sottopopolazioni), 4 Molecole che riconoscono l'antigene (VCR, molecole del complesso maggiore di istocompatibilità); 5 Citochine - emopoietico, crescita, regolatore, recettore.

risposta immunitaria si sviluppa in periferia organi linfoidi. I macrofagi, i linfociti T e B, i fibroblasti e le cellule reticolari sono coinvolti nell'IA. Distinguere umorale, cellulare misto risposta immunitaria, il cui sviluppo avviene in più fasi.

OGM(formazione di anticorpi) - La base della risposta immunitaria umorale è l'attivazione dei linfociti B e la loro differenziazione in plasmacellule (plasmociti), che sintetizzano anticorpi (immunoglobuline) specifici per l'antigene che ha causato la risposta immunitaria.

KIO- una complessa reazione cooperativa dell'organismo, indotta dall'antigene e attuata attraverso il sistema T dell'immunità in collaborazione con l'APC, che termina con la formazione di linfociti T specifici dell'antigene che svolgono funzioni regolatorie ed effettrici. Compiti: sviluppo e regolazione della risposta umorale e cellulare, eliminazione dell'antigene dall'organismo.

macrofagi partecipare sia all'IA naturale che a quella specifica. I macrofagi maturi hanno recettori AG (Fc), recettori C3b, antigeni MHC. Nella fase iniziale dell'IE, i macrofagi svolgono la funzione di presentare AG - come risultato della fagocitosi, l'AG viene scisso e il suo epitopo viene portato alla membrana in combinazione con MHC2. Nella fase finale dell'IE, il macrofago è attivato dalle linfochine.

Linfociti B- riconoscere AH, partecipare a OGM, avere recettori per eritrociti di topo, Fc, C3b, per MHC AG. Non hanno specifici recettori che riconoscono l'antigene. Il recettore che riconosce l'antigene è una molecola di immunoglobulina.

Linfociti T- sono divisi in quattro sottopopolazioni principali: T-helper, T-suppressor, T-killer e T-effectors. Tutti loro hanno recettori per eritrociti di pecora, per immunoglobuline, proteine del sistema del complemento (ma non hanno recettori per C3b), per interferoni, per antigeni, hanno antigeni MHC1 e MHC2. Le sottopopolazioni di linfociti T sono eterogenee, quindi i T-helper sono divisi in due gruppi: T-helper 1 e T-helper 2. I primi sono attivatori di CIO e i secondi sono OGM. I linfociti T forniscono immunità cellulare, antivirale, antibatterica, TOS.

Antigeni- sostanze geneticamente aliene che, una volta introdotte nell'organismo, sono in grado di stimolare la risposta immunitaria (risposta cellulare, formazione di anticorpi, allergia, tolleranza) e reagire in modo specifico con gli anticorpi formatisi sia in vivo che in vitro.

Parti strutturali e funzionali della molecola di Ag:

1. Stabilizzazione (vettore)- 97-99% della massa: macromolecole (proteine), cellule (qualsiasi), in condizioni artificiali, possono esserci particelle corpuscolari. Proprietà portanti: alto peso molecolare, struttura complessa. Funzione - induzione della risposta immunitaria.

2. Gruppo determinante (epitopo): oligosaccaridi , oligopeptidi , Gruppo NH2 . Proprietà: basso peso molecolare , struttura rigida , debole attività metabolica , estraneo al corpo . Funzione: la specificità degli anticorpi e dei linfociti T effettori nella risposta immunitaria.

Epitopi di AG: superficiale, nascosto (conformazionale), cellule T (TCR sono riconosciute), cellule B (RCR sono riconosciute). Densità epitopicaè il numero in 1 molecola di Ag.

Proprietà AG:

L'immunogenicità è la capacità di indurre l'IA nel corpo.

L'antigenicità è la capacità di interagire in modo specifico.

Completo(completo) Ag ha due proprietà. Aptene(incompleto) – Ag, non immunogenico.

Classificazione:

1. Per immunogenicità: forte(viene somministrata una dose elevata, ma gli indicatori di immunità sono bassi), debole(provoca alti livelli di immunità a piccole dosi), superantigeni (Antigeni microbici che interagiscono con le molecole MHC di classe II APC e TKR dei linfociti T, al di fuori del gap di legame dell'antigene, cioè non in centri attivi. Si uniscono, per così dire, dalla parte delle molecole di MHC II e TCR. Bloccano una possibile risposta immunitaria specifica e provocano l'attivazione policlonale dei linfociti, il rilascio di citochine e, quindi, la morte dei linfociti T con sintomi di immunodeficienza).

2. Per estraneità per il corpo - il portatore di Ag: Etero- (xeno-) Ag (per l'uomo è Ag di batteri, piante, virus, animali), Homo- (allo-) Ag è l'Ag di altri individui della specie, Auto Ag: proteine tardive (sperma, latte), sostanze di organi "barriera", cellule proprie con superficie modificata, tessuto embrionale.

3. A seconda del tipo di IA: immunogeni, allergeni, tollerogeni, trapianto.

4. Secondo la connessione della risposta immunitaria con il timo: T-dipendente, T-indipendente.

Antigeni di microrganismi. Struttura antigenica dei batteri. Antigeni tipici, di specie, di gruppo. antigeni protettivi. Antigeni cross-reattivi, significato.

Antigeni batterici:

Gruppo specifico (disponibile in diverse specie dello stesso genere o famiglia)
Specie-specifica (in rappresentanti di una specie)
Tipo-specifico (determinare una variante sierologica all'interno di una specie)
Ceppo specifico
Stadiospecifico
Antigeni cross-reattivi (simili, uguali nell'uomo e nei microbi)

Per localizzazione:

OSA– somatico (LPS parete cellulare)

N-Ag- flagelli (natura proteica)

K-Ag– capsulare (PS, proteine, polipeptidi)

Ag Piley(fimbriale)

Ag citoplasmatico(membrana, CPU)

Esotossine(proteine)

Ectoenzimi

OSA- lipopolisaccaride della parete cellulare dei batteri gram-negativi. È costituito da una catena polisaccaridica e dal lipide A. Il polisaccaride è termostabile, chimicamente stabile, debole immunogenicità. Lipide A - contiene glucosamina e acidi grassi, ha una forte attività immunostimolante adiuvante e non specifica e tossicità. In generale, LPS è un'endotossina. Già a piccole dosi provoca febbre dovuta all'attivazione dei macrofagi e al rilascio di IL1, TNF e altre citochine, degranulazione dei degranulociti e aggregazione piastrinica.

STREGA fa parte dei flagelli batterici, la sua base è la proteina flagellina. Termolabile.

K-AGè un gruppo eterogeneo di batteri AG capsulari superficiali. Sono in una capsula. Contengono principalmente polisaccaridi acidi, che includono acido galatturonico e glucuronico.

Antigeni protettivi- epitopi di antigeni esogeni (microbi), anticorpi contro i quali hanno le proprietà protettive più pronunciate, che proteggono l'organismo dalla reinfezione, vengono utilizzati per ottenere vaccini. Gli antigeni protettivi purificati possono essere preparati vaccinali "ideali".

Determinanti antigenici cross-reattivi trovato in MO e umani/animali. Microbi vari tipi e negli esseri umani ci sono comuni, simili nella struttura AH. Questi fenomeni sono chiamati mimetismo antigenico. Spesso, gli antigeni cross-reattivi riflettono la comunanza filogenetica di questi rappresentanti, a volte sono il risultato di una somiglianza casuale nella conformazione e nelle cariche - molecole AG. Ad esempio, l'AG di Forsman si trova negli eritrociti di ariete, nella salmonella e nelle cavie. Gli streptococchi emolitici di gruppo A contengono antigeni a reazione crociata (in particolare la proteina M) che sono comuni con gli antigeni dell'endocardio e dei glomeruli dei reni umani. Tali antigeni batterici causano la formazione di anticorpi che reagiscono in modo incrociato con le cellule umane, il che porta allo sviluppo di reumatismi e glomerulonefrite post-streptococcica. L'agente eziologico della sifilide ha fosfolipidi simili nella struttura a quelli trovati nel cuore degli animali e dell'uomo. Pertanto, l'antigene cardiolipina del cuore degli animali viene utilizzato per rilevare gli anticorpi contro la spirocheta nelle persone malate (reazione di Wassermann).

DIPARTIMENTO DELLA SALUTE DELL'AMMINISTRAZIONE DELLA REGIONE DI KRASNOYARSK

Centro regionale per la prevenzione e il controllo dell'AIDS e di altre malattie infettive

Dipartimento di Clinica diagnostica di laboratorio FUV dell'Accademia medica statale di Krasnoyarsk

"APPROVARE"

Capo del dipartimento della salute

Amministrazione del territorio di Krasnoyarsk

Schneider I.A.

"______" __________ 1999

METODI MODERNI DI DIAGNOSI DI LABORATORIO DELLE MALATTIE AUTOIMMUNI

Krasnojarsk - 1999

Seconda edizione con modifiche e integrazioni 2002

^ Olkhovsky Igor Alekseevich -candidato med. scienze, capo. laboratorio e dipartimento diagnostico del Centro regionale per l'AIDS, professore associato del dipartimento di KLD FUV KrasGMA;

Izyurova Olga Yurievna- Assistente del Dipartimento di KLD FUV KrasGMA.

Protopopova Natalia Borisovna- Assistente del Dipartimento di KLD FUV KrasGMA;

^ Shevchenko Nailya Minvaleevna - Candidato di Biol. scienze, capo. il Dipartimento AIDS e Infezioni da Marker AIDS del Centro Regionale AIDS;

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La necessità di sviluppare linee guida per la diagnosi di laboratorio delle malattie autoimmuni (AID), soprattutto nelle prime fasi della malattia, è determinata dall'ampia diffusione di questa patologia e dai metodi di trattamento insoddisfacenti.

Le raccomandazioni forniscono brevemente dati sull'eziologia, i principali collegamenti nella patogenesi dell'AID e danno una classificazione dell'AID. Vengono inoltre brevemente presentati i dati sulle manifestazioni cliniche di alcune lesioni diffuse del tessuto connettivo.

L'obiettivo principale delle raccomandazioni è sui metodi di sierodiagnosi dell'AIDS. Le tabelle compilate con successo dimostrano chiaramente i vantaggi della determinazione degli autoanticorpi contro determinati antigeni per risolvere problemi di verifica della diagnosi, previsione del decorso della malattia e identificazione dei suoi sottotipi clinici e immunologici. Alcuni metodi per determinare i marcatori sierologici dell'AID sono brevemente e accessibili.

^ Professore del Dipartimento di Clinica

immunologia NMI,

INTRODUZIONE:

Le malattie autoimmuni colpiscono il 5-7% della popolazione mondiale, si sviluppano da 3 a 10 volte più spesso nelle donne che negli uomini e sono considerate le più causa comune patologia umana cronica. Esistono più di 40 forme nosologiche classificate come malattie autoimmuni umane.

Attualmente, il problema dell'autoimmunizzazione è considerato un problema biologico generale, strettamente correlato a problemi come le deficienze immunitarie e l'oncogenesi, ei processi autoimmuni sono considerati non solo patologici, ma anche come un collegamento importante nelle reazioni omeostatiche del corpo. È generalmente riconosciuto che il ruolo del sistema immunitario non è solo quello di proteggere il corpo da agenti patogeni di malattie infettive e protezione antitumorale, ma anche di garantire il processo di proliferazione e differenziazione di vari tessuti e organi, l'eliminazione e l'utilizzo di strutture tissutali morenti .

IN letteratura contemporaneaÈ consuetudine distinguere tra i concetti di "processi autoimmuni (autoimmunizzazione)" e "malattie autoimmuni".

^ 1. PROCESSI AUTOIMMUNI

I processi autoimmuni sono i processi del sistema immunitario che rispondono agli antigeni normali (invariati) dei propri tessuti - autoantigeni.

Un certo numero di autori ritiene che gli antigeni modificati dei propri tessuti non debbano essere classificati come veri autoantigeni. La loro modifica può essere il risultato di fattori biologici, chimici o fisici. Non è corretto classificare come veri autoantigeni anche integrati (ad esempio, per l'integrazione del genoma virale e cellulare) o complessi (dovuti alla combinazione di un aptene eso- o endogeno con un autoantigene). Poiché gli antigeni modificati, integrati e complessi, infatti, sono estranei al corpo. Allo stesso tempo, in determinate condizioni, possono diventare un punto di partenza per cambiamenti patologici autoimmuni nel corpo.

Fatti noti permetterci di dividere tutti i processi autoimmuni in omeostatici (fisiologici) e patologici (Schema 1). Il primo gruppo non ha alcun significato patogenetico nello sviluppo dell'infiammazione cronica. I titoli dei normali autoanticorpi contro il DNA, le proteine del citoscheletro, gli ormoni, i mediatori e i loro recettori aumentano durante lo stress, la gravidanza, l'invecchiamento e varie infezioni batteriche e virali. Gli autoanticorpi "normali" non causano reazioni citotossiche ed è probabile che siano coinvolti nell'attuazione delle funzioni regolatorie e "sanitarie".
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Schema 1. Classificazione dei processi autoimmuni

	Processi autoimmuni

G omeostatico			Patologico

Sanitario	Normativa

			Malattie autoimmuni	Malattie con disordini autoimmuni
	sistema immune	Immunoendocrino

^ 2. INFORMAZIONI SULLA PATOGENESI:

I processi autoimmuni patologici si sviluppano sulla base di quelli fisiologici e non sono reazioni fondamentalmente nuove. A quanto pare, inadeguate attività di "sanitario" processi autoimmuni causate da tali malattie non specifiche dell'organo come LES, polimiosite, cirrosi biliare primaria, ecc., nonché lesioni autoimmuni secondarie nella malattia da ustione, sindrome post-infartuale, ecc. I processi autoimmuni regolatori fuori controllo portano ovviamente allo sviluppo di malattie autoimmuni organo-specifiche: emocitopenia autoimmune, endocrinopatie, ecc.

I principali tipi di processi autoimmuni possono essere associati a:

risposta ad autoantigeni verso i quali non esiste tolleranza naturale (espressione debole, inaccessibilità ai linfociti o mancanza della loro presentazione da parte delle cellule A Ja+;
aggirando l'autotolleranza esistente mediante la cooperazione di T-helper, reagendo a "stranieri", con cellule B, reagendo ad autoantigeni;
vera abolizione della tolleranza agli antigeni self

Lo sviluppo di reazioni autoimmuni patologiche può essere dovuto ai seguenti meccanismi di danno:

Citolisi dipendente dal complemento;
Induzione di citotossicità cellulare anticorpo-dipendente;
Interazione con recettori cellulari per ligandi naturali (attivazione o blocco dell'azione di regolatori endogeni);
Cambiamenti nell'attività funzionale delle cellule di vari organi e tessuti;
Induzione dell'apoptosi (morte cellulare programmata);
Reazioni immunocomplesse (alterata clearance e deposizione di complessi nei tessuti, principalmente nei vasi del microcircolo).

Molte malattie autoimmuni sono caratterizzate da reazioni di ipersensibilità alternate. tipo immediato nella fase acuta ad una reazione di ipersensibilità di tipo ritardato nella fase di remissione. Una caratteristica delle lesioni autoimmuni è la frequente formazione follicoli linfoidi negli organi bersaglio.

Esistono numerosi concetti del meccanismo per lo sviluppo di processi autoimmuni patologici, in cui vengono alla ribalta i cambiamenti nelle cellule bersaglio (organi) o i cambiamenti primari nel sistema immunitario stesso.

I fautori del primo gruppo di concetti attribuiscono grande importanza a un eccessivo aumento della concentrazione di autoantigeni circolanti nel sangue e localizzati sulle membrane cellulari, nonché allo smascheramento degli antigeni intracellulari. Si presume che un ruolo importante sia svolto dalla perdita di tolleranza agli antigeni dei tessuti "oltre la barriera": antigeni della mielina del sistema nervoso, della camera anteriore dell'occhio, ecc. Un ruolo significativo nella patogenesi del lupus eritematoso sistemico (LES) è assegnato ai disturbi dell'eliminazione degli autoantigeni e dell'utilizzo degli immunocomplessi da parte del sistema dei macrofagi. Viene discusso il ruolo dei disturbi nell'espressione degli autoantigeni della membrana cellulare nella patogenesi delle malattie autoimmuni. ghiandola tiroidea, diabete mellito di tipo 1, cirrosi biliare primitiva. Le cellule bersaglio in queste malattie portano antigeni di classe II del sistema HLA sulla membrana, la loro espressione aumenta sotto l'influenza dei virus e quindi queste cellule sono in grado di presentare l'antigene senza la partecipazione dei macrofagi. Sempre più conferma viene trovata dal concetto di antigeni cross-reattivi (tabella 1).
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Tabella 1. Antigeni cross-reattivi

Eteroantigeni	Autoantigeni	Manifestazioni cliniche
- Streptococco emolitico di gruppo A	Subsarcolemma dei cardiomiociti	Reumatismi
- streptococco emolitico A 12	glomerulo renale	Glomerulonefrite
Antigeni Escherichia coli O14, O86, ecc.	Epitelio intestinale, antigeni del SNC	Colite ulcerosa aspecifica
Antigeni di Yersinia enterocolitica Antigeni Ldu polmonite	Epitelio tiroideo Recettore dell'acetilcolina del muscolo scheletrico	tombe di miastenia
Antigeni meningococcici di gruppo B Mycoplasma pneumoniae Antigeni del tripanosoma cruze	Antigeni del SNC	Encefalite
Tessuto cerebrale animale	Antigeni del SNC	Encefalite post-vaccinale

Numerosi microrganismi patogeni, come micoplasmi, streptococco emolitico, stafilococco, alcuni virus sono in grado di secernere i cosiddetti superantigeni - proteine immunogene che possono legarsi senza previa cattura da parte dei macrofagi con molecole di classe HLA 1 o 2 e stimolare l'autoreattività "proibita" cloni di linfociti T.

Non meno importante è la disfunzione del sistema immunitario stesso, con reazioni eccessive agli antigeni auto- e cross-reattivi. Un posto eccezionale appartiene al concetto di F. Burnet, che assegna un ruolo chiave alle mutazioni dei linfociti con una violazione dell'eliminazione dei cloni autoaggressivi emergenti. Attualmente, le malattie autoimmuni non sono considerate come un'iperfunzione del sistema immunitario, ma come una sua disfunzione associata a una mancanza di meccanismi regolatori, ad es. come una sorta di deficienza immunitaria. La risposta immunitaria alta e bassa geneticamente determinata a determinati antigeni è importante. Con una bassa risposta a un antigene e un'alta risposta ad altri, si creano le condizioni per la persistenza di microrganismi nei tessuti, la comparsa di antigeni complessi e modificati e l'esaurimento dei meccanismi soppressori.

Le cellule immunocompetenti possono diventare un bersaglio per un attacco virale. Il risultato è una violazione della loro attività funzionale, un effetto citotossico o l'attivazione policlonale dei linfociti (ad esempio: se infettati dal virus Epstein-Barr), che porta a una violazione dell'immunoregolazione e alla comparsa di un eccesso di autoanticorpi.

L'importanza è attribuita ai disturbi nel sistema dei linfociti T regolatori, in particolare, la carenza assoluta o relativa di T-soppressori. In questo caso, la causa della disfunzione del sistema dei linfociti T regolatori può essere un disturbo congenito o acquisito del timo.

^ 3. MALATTIE AUTOIMMUNI

Le malattie nella cui patogenesi i processi patologici autoimmuni giocano un ruolo di primo piano sono definite malattie autoimmuni. In generale, lo sviluppo delle malattie autoimmuni comprende tre gruppi principali di fattori: predisponenti, scatenanti e contribuenti (Tabella 2).

Tra i fattori predisponenti, le caratteristiche genetiche sono di primaria importanza (Tabella 3). Ad eccezione della spondilite anchilosante e delle condizioni correlate associate al portatore di HLA-B27, tutte le altre malattie autoimmuni sono associate a determinati aplotipi HLA di classe 2 o molecole del complesso maggiore di istocompatibilità di classe 3.
^

Tabella 2. Patogenesi delle malattie autoimmuni

Quindi, l'80-90% dei pazienti con artrite reumatoide sono portatori di HLA - DR1 o di una delle varianti di HLA DR4 (DW4, DW14, DW15). Un difetto nel gene che controlla la sintesi del componente C4 del complemento si trova nel 50-80% dei pazienti con LES.

Tabella 3. Il ruolo dei fattori genetici nello sviluppo delle malattie autoimmuni.

Fattore	meccanismo di predisposizione
Geni del complesso maggiore di istocompatibilità	Legame selettivo di autoanticorpi; espansione delle cellule T autoreattive; difetti nelle cellule T coinvolte nell'immunità anti-infettiva
Geni Recettori delle cellule T	Aumento del numero di cellule T autoreattive; diminuzione della capacità di controllare l'infezione
Geni che codificano l'elaborazione dell'antigene	Sottoespressione di molecole che prevengono l'anergia periferica; alterazione dell'elaborazione degli antigeni self
Geni del complemento	Alterata clearance dei complessi immunitari
Geni legati al sesso	effetti immunitari ormoni sessuali
Geni delle citochine	Effetti immunitari delle citochine

^ 4. CLASSIFICAZIONE DELLE MALATTIE AUTOIMMUNI

La classificazione delle malattie autoimmuni è ancora un problema molto difficile e controverso. La maggior parte degli autori divide le malattie autoimmuni a seconda della natura dell'autoantigene, dei meccanismi di autoimmunizzazione, del grado di evidenza del suo ruolo nella patogenesi della malattia. È consuetudine distinguere tra malattie la cui natura autoimmune è fuori dubbio: LES, artrite reumatoide, emocitopenia autoimmune, endocrinopatie, coagulopatia, una serie di malattie del sistema nervoso centrale e degli occhi, ecc.); molto probabilmente (cirrosi biliare primaria, periarterite nodosa, sclerodermia, polimiosite, ecc.); solo ipotizzato (dislipidemia, epilessia, schizofrenia, parkinsonismo, ecc.). Le malattie del recettore anticorpale sono particolarmente distinte (tireotossicosi, diabete mellito di tipo 2, miastenia grave, sclerosi multipla, ecc.). Esistono malattie autoimmuni con autoimmunizzazione come principale fattore di patogenesi (primarie) e malattie con disturbi autoimmuni secondari. La principale classificazione operativa è la divisione in malattie autoimmuni organo-specifiche e organo-non specifiche. Di più classificazione dettagliata(citato da Shirinsky V.S., 1997) comprende 5 classi: A - E (schema 2).

Sorgono difficoltà sufficientemente grandi nella diagnosi differenziale delle manifestazioni precoci delle principali, cosiddette "Grandi collagenosi" - malattie sistemiche del tessuto connettivo con il coinvolgimento di vari organi e sistemi nel processo patologico. Queste malattie includono: lupus eritematoso sistemico, sclerosi sistemica progressiva, artrite reumatoide, sindrome di Sjögren e un gruppo di malattie miste del tessuto connettivo.

^ Schema 2. Classificazione delle malattie autoimmuni.

Schema 2. Classificazione delle malattie autoimmuni (Shirinsky V.S., 1997).

CLASSE A(malattie autoimmuni primarie con e senza predisposizione genetica)

Autoimmune "Organo-specifico" "Intermedio" "Organo-non-specifico". malattie

sangue

Tiroidite di Hashimoto pemfigo, lupus eritematoso sistemico pemfigoide autoimmune emolitico mixedema primario cirrosi biliare primaria artrite reumatoide anemia

tireotossicosi epatica dermatomiosite trombocitopenia autoimmune

gastrite atrofica epatite cronica attiva sclerodermia sistemica neutropenia autoimmune

adrenalite sindrome di Sjögren malattia mista granulomatosi di Wegener

alcune forme di colite ulcerosa del tessuto connettivo infertilità primaria enteropatia celiaca policondrite ricorrente sindrome di Goodlascher insulino-dipendente

diabete di tipo 1

varianti di iperlipoproteinemia

Miastenia grave

CLASSE: B(malattie autoimmuni secondarie con e senza predisposizione genetica)

Reumatismi, morbo di Chagas

Sindromi postinfartuali e postcardiotomiche

Reazioni autoimmuni da farmaci

Spondilite anchilosante

Uveite endogena

Cardiomiopatia dilatativa

^ CLASSE: c(malattie con difetti genetici del complemento)

Angioedema

Sindromi simil-lupus

CLASSE: D(infezione virale lenta)

Sclerosi multipla

Reazioni post-vaccinazione

CLASSE: E- una combinazione di malattie delle classi A - D

^ 5. MALATTIE SISTEMICHE PRINCIPALI

Lupus eritematoso sistemico

Il lupus eritematoso sistemico (LES) è una malattia multisistemica che si verifica sullo sfondo di numerosi disturbi immunitari: la produzione di autoanticorpi, ipergammaglobulinemia, la patologia dei linfociti T soppressori, una diminuzione del contenuto di proteine complementari sieriche e un aumento del livello della CEC, che si ritiene svolgano un ruolo importante nella patogenesi del LES.

Con un sufficiente grado di certezza, possiamo parlare dell'interruzione del funzionamento dei recettori Fc-IgG e C3b responsabili della fagocitosi della CEC. Allo stesso tempo, non tutti gli autoanticorpi e gli immunocomplessi che compaiono nel sangue dei pazienti affetti da LES sono equivalenti in termini di patogenicità. Alcuni autoanticorpi causano sintomi patologici a causa della loro specificità antigenica (per antigeni di superficie degli eritrociti o fattori della coagulazione). L'azione degli altri è dovuta all'isotipo dell'immunoglobulina, alla capacità di fissare il complemento, alla loro avidità per i tessuti, ecc.

Indubbiamente, la partecipazione degli ormoni sessuali alla patogenesi del LES. Gli estrogeni migliorano e gli androgeni inibiscono la produzione di autoanticorpi. Nei pazienti affetti da LES si nota un aumento della produzione di 16-alfaidrossiestrone, che provoca una prolungata stimolazione degli estrogeni.

Le manifestazioni cliniche della malattia dipendono da quale popolazione di autoanticorpi e CIC sono presenti nel questo momento in un particolare paziente, quali organi, cellule o prodotti cellulari fungono da bersaglio per loro, così come la capacità del paziente di correggere questi disturbi. Circa il 72% dei pazienti sopravvive più di 10 anni dopo l'inizio della malattia. Le principali cause di disabilità e morte sono le complicanze infettive e l'insufficienza renale.

I principali criteri di laboratorio per la diagnosi e il monitoraggio sono presentati nella Tabella 4:

Test diagnostici per la diagnosi e la valutazione della gravità del processo

Test di monitoraggio delle malattie

Specifica:

Anti dsDNA

Anti-Sm

Non specifico

ANA (più sensibile)

СР50, С3, С4

Test diretto di Coombs

Falsa reazione di Waserman

Anticorpi anticardiolipina

Anticorpi antipiastrinici

Anticorpi anti-linfociti

Anticorpi antineuronali

Ematocrito

Analisi delle urine

Cratinina sierica

Proteine della fase acuta

Titolo anti dsDNA

Livelli di complemento

Ematocrito

Leucociti del sangue periferico

Piastrine nel sangue periferico

Analisi delle urine (microalbuminuria)

Siero di creatinina

* Per ogni paziente in base al più caratteristico Segni clinici malattia, dovrebbe essere stabilita una serie individuale di test da utilizzare come aggiuntivo criteri di valutazione decorso clinico malattie.

Gli anticorpi contro l'antigene Sm sono altamente specifici per il LES), ma il loro livello non riflette la gravità della malattia. Allo stesso tempo, le lesioni del sistema nervoso e le psicosi del lupus sono più spesso associate clinicamente alla presenza di anticorpi contro Sm, ma allo stesso tempo è caratteristica la relativa conservazione della funzione renale. Gli anticorpi anti-Sm vengono rilevati nel 25-30% (metodo RIF) e nel 50-60% (metodo ELISA) dei pazienti. I risultati negativi del test per gli anticorpi SM non escludono la malattia. La concentrazione di anticorpi contro l'antigene Sm non cambia significativamente durante la terapia e quindi il loro monitoraggio quantitativo non ha alcun significato pratico. La presenza di anticorpi contro l'antigene Sm è inclusa nei criteri per il LES adottati dall'American Rheumatological Association.

Il livello di anticorpi contro il DNA nativo (a doppia elica), a differenza degli anticorpi contro Sm, riflette il rischio e la gravità della nefrite da lupus ed è utilizzato come criterio per l'efficacia della terapia del LES. Un ulteriore criterio di laboratorio è una diminuzione del livello dei componenti del complemento C3 e C4, che è anche correlato all'attività della nefrite lupica.

Circa l'80% di tutti i pazienti con LES ha anticorpi contro gli istoni. Molto spesso, questi anticorpi si trovano in pazienti con lupus eritematoso indotto da farmaci (PLE). Tuttavia, non ci sono anticorpi contro il DNA nativo in LC. Pertanto, la determinazione simultanea degli anticorpi anti istoni e dsDNA consente la diagnosi differenziale tra SLE e LLE. Inoltre, gli anticorpi contro gli istoni possono essere rilevati in pazienti con cirrosi biliare primaria, artrite reumatoide e sclerodermia.

Sclerosi sistemica progressiva (sclerodermia sistemica)

La PSS è una malattia multisistemica caratterizzata da malattie infiammatorie, vascolari e alterazioni fibrotiche nella pelle (sclerodermia) e in vari organi interni, specialmente nel tratto gastrointestinale, polmoni, cuore e reni. La natura del decorso, il grado di prevalenza nel corpo, la gravità della manifestazione della malattia variano in modo significativo nei diversi pazienti. In alcuni casi, possono verificarsi manifestazioni viscerali senza manifestazioni cutanee visibili.

L'eziologia della malattia è sconosciuta, il ruolo fattori ereditariè ambiguo. Le persone di solito si ammalano all'età di 30-40 anni, le donne hanno una probabilità 4 volte maggiore rispetto agli uomini.

La PSS è accompagnata da ridotta immunità umorale e cellulare. nel sangue dei pazienti si trovano spesso ipergammaglobulinemia e anticorpi antitnucleari, anticorpi contro le membrane cellulari dei fibroblasti e contro i tipi di collagene 1 e 4.

Le manifestazioni cliniche di solito (nel 90% dei pazienti) iniziano con il fenomeno di Raynaud - vasocostrizione episodica delle arterie e delle arteriole delle dita, dei piedi, a volte della pelle del viso, che si verifica a causa del freddo o dello stress emotivo. Le aree della pelle colpite prima diventano pallide, poi diventano cianotiche e poi arrossate. La prognosi della malattia è determinata dall'interessamento miocardico, dall'ipertensione polmonare e dall'insufficienza renale.

La coesistenza di calcificazione cutanea, fenomeno di Raynaud, ipocinesia dell'esofago, sclerodattilia e telangiectasia è chiamata "CRESTA"- sindrome ed è valutata come una variante relativamente benigna di PSS.

I dati di laboratorio per PSS dipendono dallo stadio e dall'attività del processo patologico, la VES è spesso aumentata, l'ipergammaglobulinemia è osservata nel 50% dei pazienti, principalmente a causa delle IgG, nel 25% viene rilevato un basso titolo di fattore reumatoide, ANA - in quasi 96% di coloro che soffrono di PSS. Autoanticorpi specifici: anti ribonucleoproteina nucleare (RNP), proteine centromeriche e anti Scl-70. Tuttavia, il marcatore anti-Scl-70- più specifico si trova solo nel 20% dei casi di PSS. Gli anticorpi che reagiscono con la regione centromerica dei cromosomi in metafase si trovano nella maggior parte dei pazienti corrispondenti al gruppo della sindrome "CREST". Pertanto, se la determinazione degli anticorpi contro Scl-70 nella PSS funge da scarso segno prognostico, la rilevazione degli anticorpi anticentromerici, al contrario, indica un decorso più favorevole della malattia.

Artrite reumatoide

L'artrite reumatoide (RA) è una malattia polisistemica cronica di eziologia sconosciuta, in cui, insieme a una varietà di manifestazioni sistemiche, patogmonico è la sinovite infiammatoria persistente, che colpisce simmetricamente le articolazioni periferiche. Il decorso della malattia è molto variabile, solitamente con decorso ondulatorio.

Non ci sono test di laboratorio specifici per diagnosticare l'AR. Tuttavia, i fattori reumatoidi, che sono autoanticorpi IgG-reattivi, si trovano nel 60% dei pazienti. Gli stessi fattori reumatoidi possono appartenere alle classi: IgA, IgM o IgG. La frequenza di rilevamento di fattori reumatoidi tra individui sani raggiunge il 5% e aumenta con l'età. Inoltre, il fattore reumatoide può essere presente in molte malattie: LES, sindrome di Sjögren, malattia epatica cronica, epatite B, tubercolosi, sifilide, ecc. A questo proposito, l'individuazione di fattori reumatoidi non stabilisce una diagnosi, ma ha un certo valore prognostico, poiché i pazienti con un titolo elevato (soprattutto IgM e IgA) tendono ad avere un decorso più grave e progressivo della malattia. L'eosinofilia nei pazienti con AR indica la gravità delle manifestazioni sistemiche. Quasi tutti i pazienti hanno aumento della VES, CRP, ceruloplasmina, altre proteine della fase acuta. Questo generalmente è correlato all'attività della malattia e indica la progressione del danno articolare.

Malattie miste del tessuto connettivo.

La malattia mista del tessuto connettivo (MCTS) è una sindrome caratterizzata da una combinazione variabile di manifestazioni cliniche simili a quelle osservate nel LES, nella sclerodermia, nella polimiosite e nell'artrite reumatoide in associazione con titoli insolitamente elevati di autoanticorpi circolanti contro l'antigene della ribonucleoproteina nucleare (RNP). In questo caso, vi è una mancanza o un titolo molto basso di anticorpi verso altri antigeni nucleari estraibili e verso il DNA. Oltre all'anti-RNP, vi è una pronunciata ipergammaglobulinemia policlonale, una diminuzione dei componenti del complemento, un difetto nel legame soppressore dei linfociti T, la presenza di CIC, la deposizione di complessi immunitari lungo le membrane del sarcolemma e del basamento glomerulare membrane, infiltrazione linfocitaria e plasmacitocitaria di molti tessuti. Una delle principali manifestazioni di SBST è una lesione proliferativa dell'intima e della media. vasi sanguigni portando al loro restringimento. È la sconfitta di vasi grandi e piccoli che forniscono organi vitali che determina il decorso e la prognosi di questa malattia. Alcuni pazienti hanno segni di diverse malattie autoimmuni, ma a differenza dei pazienti con BSTS, non ci sono anticorpi contro RNP. In questo caso, se i segni esistenti soddisfano più malattie autoimmuni contemporaneamente, viene fatta una diagnosi di "sindrome incrociata", in caso contrario viene fatta una diagnosi di "malattia indifferenziata del tessuto connettivo".

Sindrome di Sjogren

La sindrome di Sjögren (SS) o sindrome "secca" è una patologia immunologica caratterizzata dalla progressiva distruzione delle ghiandole esocrine, ed è accompagnata da una varietà di disturbi autoimmuni. La malattia può manifestarsi da sola (SS primaria) o in presenza di altre anomalie autoimmuni (SS secondaria). Inoltre, la SS è suddivisa in una forma ghiandolare, quando le manifestazioni cliniche sono limitate al sistema delle ghiandole esocrine, e una forma extraghiandolare, quando anche altri tessuti sono coinvolti nel processo patologico.

I principali meccanismi di lesione nella SS sono l'infiltrazione linfocitaria e la deposizione di immunocomplessi. Circa il 10% dei casi di SS sviluppa un processo linfoproliferativo chiamato pseudolinfoma. Alcuni pazienti successivamente sviluppano un vero linfoma non Hodgkin. Molto spesso c'è una lesione autoimmune della ghiandola tiroidea come la tiroidite di Hashimoto.

Oltre alle mucose secche (cheratocongiuntivite, xerostomia), i pazienti con SS sviluppano vasculite, polineuropatia, polmonite interstiziale e glomerulonefrite. In generale, rispetto ad altre collagenosi, la prognosi per i pazienti con SS può essere considerata abbastanza favorevole.

A ricerca di laboratorio prestare attenzione all'aumento del livello di CEC, leucopenia, trombocitosi, VES accelerata. Viene registrata una reazione positiva all'ANA. Gli autoanticorpi sono principalmente rappresentati dal fattore reumatoide, SSA (anti-Ro), SSB (anti-La). La maggior parte dei pazienti con le manifestazioni sistemiche più gravi sono SSA positivi. Nelle donne in gravidanza, la presenza di SSA aumenta significativamente il rischio di dare alla luce bambini con disturbi della conduzione cardiaca.

Polimiosite e dermatomiosite

La dermatomiosite è una malattia sistemica del tessuto connettivo che colpisce prevalentemente la pelle e il tessuto muscolare. Una varietà di lesioni cutanee con edema periorbitale patogeno con eritema violaceo-lilla è associata a sindrome miastenica, distrofia miocardica, poliartrite e infiammazione associata dei polmoni (ipoventilazione e origine di aspirazione). L'alta frequenza di combinazione di dermatomiosite con tumori maligni merita un'attenzione speciale. Polimiosite - miopatie infiammatorie sistemiche senza lesioni cutanee significative, che rappresentano un gruppo di malattie caratterizzate da danno muscolare diffuso dovuto all'infiltrazione perivascolare e interstiziale del tessuto muscolare da parte di cellule infiammatorie, principalmente leucociti.

^ 6. AUTOANTICORPI COME MARCATORI SIEROLOGICI DI COLLAGENOSI SISTEMICA.

Per la prima volta, le manifestazioni di uno specifico fenomeno LE furono registrate nel 1948 durante l'incubazione dei sieri vari pazienti con una sospensione di leucociti da donatori normali. Un anno dopo, è stata identificata un'immunoglobulina sierica che mediava la reazione antinucleare alla base del fenomeno LE. Il rilevamento delle cellule LE ha dominato negli anni 50-70 come reazione principale per il rilevamento di anticorpi antinucleari (ANA).

Negli anni '80 è stato proposto un metodo di immunofluorescenza indiretta per rilevare gli ANA, con analisi dei sieri dei pazienti su sezioni di tessuto dei reni e del fegato di un coniglio (topo), o su una coltura di cellule epitelioidi tumorali umane (Hep-2). Il metodo si è affermato come altamente sensibile e specifico, consentendo di registrare la presenza simultanea di autoanticorpi verso quasi 40 singoli antigeni nucleari. Le caratteristiche della natura della distribuzione della luminescenza specifica quando si tiene conto della reazione (omogenea, maculata, periferica, associata ai nucleoli o ai centromeri, la presenza di foci di legame citoplasmatico) consentono nel primo studio di determinare la principale specificità antigenica degli autoanticorpi rilevati. Gli svantaggi di questo metodo includono la relativa laboriosità, la dipendenza dalle caratteristiche ottiche di un microscopio luminescente, nonché problemi di standardizzazione e controllo di qualità, principalmente associati all'uso di tessuti animali o colture cellulari.

Allo stesso tempo, è stato sviluppato il metodo di utilizzo dell'ELISA in fase solida sia per il rilevamento del complesso totale di autoanticorpi antinucleari (screening ANA) sia per il rilevamento di singoli autoanticorpi contro antigeni nucleari estraibili (screening ENA e profilo ENA). I vantaggi del metodo sono la possibilità di automazione e alta produttività. La sensibilità e la specificità sono paragonabili a RNIF, sebbene l'uso di antigeni ricombinanti in alcuni sistemi di test possa potenzialmente causare risultati falsi positivi quando si analizzano sieri con un titolo elevato di anticorpi antibatterici.

Altri metodi ben noti per identificare gli autoanticorpi contro ENA - immunodiffusione su gel, immunoelettroforesi, emoagglutinazione, immunoprecipitazione e immunoblotting non sono ancora stati ampiamente utilizzati nella pratica clinica di laboratorio.

Un elenco degli autoanticorpi più importanti contro gli antigeni nucleari estraibili è presentato nella Tabella 5:

Tabella 5. Principali marcatori sierologici di malattie autoimmuni

Antigene	Nome originale	struttura molecolare	Funzione	Valore diagnostico
sm	Smith (nome del paziente)	Complesso formato da 9 proteine con 13 piccole molecole di RNA		Specificità per LES Sm + e RNP + = alto rischio di nefrite lupica *Può essere rilevato in assenza di dsDNA.
Complesso Sm/RNP	RNP - particelle di ribonucleoproteine	Complesso nativo di antigeni Sm e RNP	Scissione dei precursori dell'RNA messaggero	LES, sindrome di Sjögren, sclerodermia, polimiosite, SBSTc
U1RNP	antigene principale (68 rDa) del complesso U1RNP	Sempre accoppiato con RNA U1.	Scissione dei precursori dell'RNA messaggero	* RNP + , Sm - = basso rischio di nefrite * crediti elevati sullo sfondo di "neg" altri ANA = SBSTk
Oppure Ro	Sostanza solubile (solubile) (sostanza) A o proteina A della sindrome di Sjogren o antigene di Robert (nome del paziente)	Proteine da 52 e 60 kD associate a molecole di RNA citoplasmatico	sconosciuto	* Sindrome di Sjögren e LES * Blocco cardiaco neonatale dovuto al trasferimento transplacentare di anticorpi *SSA+, SSB - = alto rischio di nefrite
O La	Sostanza solubile (solubile) (sostanza) B o proteina B Sindrome di Sjögren o antigene di Lane (nome del paziente)	Fosfoproteine associate ai trascritti della polimerasi III	Terminatore di trascrizione elicasi	* Sindrome di Sjögren, LES *SSA+ , SSB+ = nefrite a basso rischio
dsDNA	DNA a doppio filamento	DNA nativo a doppio filamento privo di proteine	Portatore di informazioni genetiche	SCR, monitoraggio del flusso Coinvolgimento del SNC e dei reni
istoni	istoni	Proteine basiche associate al DNA	Elementi strutturali della cromatina	LES da farmaci
CENP-B	Centromeri proteici (proteine).	Cinetocoro proteico 80 kD	Sito di attacco per microfilamenti	Sclerodermia, sindrome CROSS
Jo L	Proteina specifica di 1 paziente con miosite	Proteina 55kD, istidina-tRNA sintetasi	legame del tRNA con l'istidina	La polimiosite è più comune della dermatomiosite Associato a polmonite interstiziale
PM-Scl-100	Antigene polimiosite-sclerodermia 100 kD (poliniosite-sclerodermia)	Parte di un complesso multiproteico contenente almeno 11 proteine	Sintesi di un precursore ribosomiale	Sindrome polimiosite-sclerodermo-CREST
Scl-70	Antigene sclerodermico 70 rL	Prodotto di degradazione proteica di 70 kD con una massa di 100 kD	Denaturazione del DNA della topoisomerasi I (svolgimento)	*Sclerodermia e, meno comunemente, sindrome CROSS

Nella diagnosi differenziale delle collagenosi maggiori è data importanza all'analisi dei marcatori di malattie autoimmuni rilevate sia mediante immunofluorescenza che ELISA (Tabella 6).

Tabella 6

Tipo di patologia	Risultati dello studio immunologico	Valore clinico
Tipo di patologia	Tipo di anticorpi e frequenza della loro comparsa (%)
Lupus eritematoso sistemico	* ANA 95-99% * dsDNA 50-75% * Sm 30% * RNP 25-40% * SSA(Ro) 30-40% * SSB(La) 10-15% * anticorpi antifosfolipidi 30-50% * PCNA 2 -10% *anti-Ku (Ki) 10%	ANA e ENA - screening (rilevamento); Anti-nDNA e anti-Sm - marcatori di monitoraggio
Lupus eritematoso discoide	Quadro normale (solitamente titoli ANA normali)	Le bande LE nei campioni di biopsia cutanea (in EPIF) sono altamente specifiche
Lupus eritematoso cutaneo subacuto	*ANA 70% SSA (Ro) > 60%	anti-SS-A(Ro) sono altamente specifici
Lupus eritematoso nei neonati	ANA 70% SS-A(Ro) 60% SS-B(La) 60%	Anti-SS-A(Ro) sono altamente specifici
"Farmaco" lupus eritematoso	ANA > 90% anticorpi contro istoni > 90% ^ Altri ANA e anti-ENA sono assenti	gli anticorpi antiistonici sono altamente specifici in assenza di altri anticorpi nucleari
Malattia mista del tessuto connettivo	ANA (tipo di macchia screziata) > 95% anti-RNP > 90%	Preziose informazioni diagnostiche sono fornite dalla natura della colorazione dei nuclei nei campioni di biopsia cutanea e nello studio del siero del sangue mediante immunofluorescenza indiretta.
Sindrome di Sjogren	ANA 55%. SS-A(Ro) 43-88% .SS-B(La) 14-60% ^ La presenza di fattore reumatoide (RF)	La diagnosi è confermata da dati sierologici positivi
sclerodermia	ANA 85% (tipo di colorazione a chiazze o nucleolare) *anticorpi anticentromerici 70-90% ^ sclerosi diffusa : Anti-Scl -70 45% Acrosclerosi: Anti-Scl-70 15-20%	Anticorpo anticentromero - un marcatore della sindrome CREST Scl-70 - marcatore di sclerodermia ^ Il valore diagnostico dell'immunofluorescenza diretta delle biopsie cutanee è basso.
Dermatomiosite da polimiosite	^ Caratteristica comune:ANA 80% Dermatomiosite: Anti-Jo-l 10% Polimiosite: Anti-Jo-l 30% SS-A(Ro) 55% anti-Ku(Ki) 10% (osservato anche nella sclerodermia)	Risultati positivi studio sierologico può essere utilizzato per confermare la diagnosi
Artrite reumatoide	ANA titoli bassi o assenza di RF 90% RANA 70-90% (presente nel 95% dei sieri privi di RF)	I risultati di uno studio sierologico vengono utilizzati per confermare la diagnosi.

Determinazione degli ANA nella reazione di immunofluorescenza indiretta

In un test tipico, il siero del paziente viene incubato con substrati antigenici (fegato animale o tessuto renale, coltura cellulare Hep-2) per effettuare il legame specifico degli anticorpi presenti nel siero ai nuclei cellulari. Dopo aver lavato via le proteine sieriche non legate, il substrato viene incubato con anticorpi contro le immunoglobuline umane. Poiché gli anticorpi introdotti sono coniugati con una sostanza fluorescente, in presenza di anticorpi contro antigeni nucleari nel siero, il complesso risultante (antigene nucleare + anticorpi sierici antinucleari + anticorpi contro anticorpi umani + sostanza fluorescente) può essere rilevato mediante microscopia a fluorescenza. La natura del bagliore: periferico, diffuso, maculato, ecc. consente di identificare la connessione con specifiche strutture intranucleari, vedere la Tabella 7:

Tabella 7. Valutazione dei risultati della determinazione di ANA nella reazione di immunofluorescenza indiretta.

La natura del bagliore	Specificità antigenica	Significato clinico
Periferico o marginale	dsDNA, lamine. complessi dei pori nucleari	LES primario
Omogeneo (diffuso)	dsDNA	Specificità 20 - 40% in LES attivo, SNC e coinvolgimento renale
Omogeneo (diffuso)	istoni	LES idiopatico - 50-70%, LES indotto da farmaci - 95%, sclerodermia locale
Screziatura: grossolana	U1-RNP	SCR 20%-40%: C 95%
	SM	Marcatore LES 15%-30%
Sottile (polverizzato)	SS-A(Ro)	LES 24%-60%; lupus neonatale > 90%: Carenza di complemento (C2 e C4)/LE > 90%; Sindrome di Shagren 85%-95%
	SS-B (La)	LES 9%-35%; Lupus neonatale 75%; Sindrome di Sjögren 70%-85%
	DNA polimerasi	SCR 3%
	Mi-2	Dermatomiosite (DM) 15%-35%: Polimiosite (PM) 5%-9%
discreto	Centromero proteico Inclusioni simili per dimensione e numero	Sclerodermia limitata 60%-80%: diluso sclerodermia - 8%; sindrome di Raynaud 25%; ^ PSS-CROSS 50%-70%
discreto	NSP-1 (pseudo ASA) Inclusioni di varie dimensioni e quantità	Malattie reumatiche e malattie epatiche croniche
Bagliore intranucleare Tipo "grumoso".	fibrillarina (U3RNP)	PSS 6% -8%; diluso sclerodermia - 5%: ^ CROCE - 10%
screziato	RNA polimerasi 1	PSS 4% -20%; dilosi sclerodermia -13%
Omogeneità: (nucleoli/nucleoplasma)
Aspetto debole screziatura (nuleolo) / "vetro smerigliato" del nucleoplasma	DNA-topoisomerasi 1 (Scl-70)	PSS 4% -20%; diluso sclerodermia -13%:
Forte bagliore omogeneo del nucleolo / debole bagliore omogeneo del nucleoplasma	PM-SCI	^ PM/PSS - 24%
Forte bagliore omogeneo di nucleolo e nucleoplasma	Ku	Sclerodermia 1%-14%; PM/SCI 26%-55%; LES 1%-19%; Sindrome di Sjogren - 20%
Luminescenza screziata del citoplasma	Jo-1 (istidil tRNA sintetasi) PL-7 (treonil tRNA sintetasi) PL12 (alanil tRNA sintetasi)	^ PM 18%-36%; DM - 13%; PM/DM - 43% PM/DM - 3%

Determinazione di ANA ed ENA mediante ELISA in fase solida

Il sistema di test per ELISA ANA (UBI MAGIWELL) - per l'analisi di screening per gli anticorpi antinucleari fornisce la determinazione semiquantitativa di un'ampia gamma di anticorpi contro il complesso di vari antigeni nucleari cellulari assorbiti nei pozzetti: DNA a doppio e singolo filamento, istoni , ribonucleoproteine (RNP), SS-A, SS-B, Sm, ecc.

Caratteristica distintiva sistemi ELISA ENA-screening e ENA-profile (CLARK LABORATORIES) è che sulla superficie dei pozzetti di polisterolo vengono adsorbiti preliminarmente antigeni nucleari estraibili individuali altamente purificati: SS-A, SS-B, Sm, Sm/RNP, Scl-70 e Jo -1. Nella variante di screening - tutti e 6 gli antigeni insieme, nella variante del profilo - ciascun antigene in un pozzetto separato. Pertanto, il solito algoritmo diagnostico consiste nell'analisi primaria del siero sul sistema di screening e nell'analisi ripetuta di sieri positivi sul sistema di test ENA - un profilo per rilevare anticorpi contro antigeni specifici. In caso di test positivo sul sistema di screening ANA e risultato negativo sui sistemi di test ENA, è necessario testare il siero sui sistemi di test per la determinazione isolata degli anticorpi al DNA, istoni e altri antigeni non presenti nei sistemi ENA.

Nel caso di una diagnosi accertata e di autoanticorpi precedentemente identificati, per monitorare l'efficacia della terapia, vengono utilizzati sistemi di test per quantificare il titolo di anticorpi verso i singoli antigeni.

In alternativa ai sistemi di test su piastra, è possibile utilizzare i test ELISA in provetta di ROCHE e Sanofi.

Risultati positivi dei test sierologici per ANA ed ENA possono essere osservati nell'1-5% degli individui sani, specialmente negli anziani. Alcuni farmaci, come l'acido p-aminosalicilico, il fenitione, l'isoniazide, l'idrazina, la procainamide e alcuni altri, possono indurre la formazione di anticorpi antinucleari.

^ 7. AUTOANTICORPI NELLA DIAGNOSTICA DELLE VASCULTITI SISTEMICHE

La vasculite sistemica è un gruppo di malattie caratterizzate da infiammazione cronica e distruzione delle pareti dei vasi sanguigni. Fattori eziologici che svolgono un ruolo di innesco includono: agenti infettivi, farmaci, progressione tumorale, circolazione di proteine patologiche e CEC, autoanticorpi. Tuttavia, circa la metà di tutti i casi di vasculite sistemica non ha una causa eziologica evidente e viene considerata "idiopatica". È importante ricordare che alcune vasculiti con manifestazioni cliniche simili possono avere una prognosi significativamente diversa e richiedere approcci terapeutici differenti.

Fino ad ora, gli schemi di classificazione di questo gruppo di malattie non sono stati finalmente elaborati. Le ultime classificazioni si basano sul calibro dei vasi prevalentemente colpiti e sul tipo predominante di elementi cellulari al centro della distruzione: neutrofili, monociti o linfociti. È vero, questo riflette piuttosto lo stadio del processo, piuttosto che il processo patogenetico dominante.

L'emergere della possibilità di determinare autoanticorpi contro antigeni citoplasmatici neutrofili ( ANCA) ha notevolmente migliorato la diagnosi di queste malattie. Esistono due sottoclassi di autoanticorpi contro i neutrofili umani: c-ANCA (ANCA citoplasmatico) e p-ANCA (ANCA perinucleare). I più significativi sono gli anticorpi contro gli enzimi dei granuli primari dei neutrofili: rispettivamente proteinasi-3 (PR3) e mieloperossidasi (MPO). La determinazione dello spettro ANCA (PR3, MPO) consente la diagnosi differenziale della granulomatosi di Wegener e della poliarterite microscopica. L'uso di ANCA come indicatore dell'attività della vasculite presenta alcuni vantaggi rispetto a indicatori classici come ESR e CRP, riflettendo in modo più adeguato il grado di attività e l'efficacia della terapia e indipendentemente dall'aggiunta di complicanze infettive.

Tabella 8. Significato diagnostico del rilevamento di vari anticorpi antineutrofili (ANCA).

Tipo di anticorpi	Patologia
Anti-MPO ANCA	Vasculite, poliangioite microscopica, Churg-Strauss, RA, SLE
Anti-PR3 ANCA	Granulomatosi di Wegener
Anti BPI ANCA	cronico malattie infettive, morbo di Crohn, colite ulcerosa
Antielastasi ANCA	Enfisema, AR, malattie reumatiche infiammatorie
Anti-catepsina G ANCA	malattie reumatiche infiammatorie, LES, sindrome di Sjögren, sindrome di Felty
Antilisozima ANCA	vasculite reumatoide, processi infiammatori nel tratto gastrointestinale, colite ulcerosa
Anti-lattoferina ANCA	RA, colite ulcerosa, colangite sclerosante primitiva

^ 8. DIAGNOSTICA DI LABORATORIO DELLA SINDROME DA ANTIFOSFOLIPIDI

Gli anticorpi anti-fosfolipidi sono un gruppo eterogeneo di autoanticorpi contro i fosfolipidi caricati negativamente. Si trovano principalmente nel test degli anticorpi anti-cardiolipina (test ACA), danno reazioni false positive nei test biologici per la sifilide e nel test degli anticoagulanti per il lupus. Tutti e tre questi test rilevano anticorpi simili ma non necessariamente identici. Pertanto, per identificare gli anticorpi contro i fosfolipidi, a volte è necessario utilizzare tutti i test elencati.

Da vari metodi esistenti analisi per la determinazione degli anticorpi contro i fosfolipidi, il più sensibile è il saggio di immunoassorbimento enzimatico per la determinazione degli anticorpi contro la cardiolipina. La presenza di questi anticorpi nei pazienti aiuta a identificare i pazienti a rischio di venoso e/o trombosi arteriosa spesso accompagnato da trombocitopenia.

Il termine sindrome da anticorpi antifosfolipidi è stato proposto per riferirsi a un gruppo di malattie accompagnate da un aumento della quantità di autoanticorpi contro i fosfolipidi ed è suddiviso in primario (non associato a una specifica patologia autoimmune) e secondario, associato a LES o altre malattie autoimmuni.

La sindrome da antifosfolipidi è più comunemente osservata nei pazienti con lupus eritematoso sistemico o in pazienti con disturbi simili al lupus in cui i criteri per il lupus eritematoso sistemico non sono soddisfatti. Alti livelli di anticorpi contro la cardiolipina si osservano in caso di trombosi, aborto fetale, trombocitopenia e alcune altre malattie. Bassi livelli di anticorpi anticardiolipidi sono stati riscontrati in una varietà di disturbi clinici non correlati alla sindrome da antifosfolipidi. Pertanto, bassi livelli di questi anticorpi hanno un valore diagnostico limitato.

La sindrome da anticorpi antifosfolipidi è più chiaramente associata agli anticorpi delle classi di cardiolipina IgG e IgA che agli anticorpi della classe IgM. Tuttavia, nel trattamento più il livello di anticorpi lgM cambia. Bassi livelli di anticorpi IgM possono essere osservati anche in altre malattie autoimmuni come artrite reumatoide, sindrome di Sjögren primaria, lupus sistemico indotto da farmaci, malattia di Lyme e sifilide.

Il sistema di test ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA è uno strumento utile per l'identificazione preliminare di quei pazienti il cui sangue contiene ASA. La successiva analisi dei sieri positivi utilizzando i kit ImmuUsa ™ ACA-IgG, ImmuUsa ™ ACA-lgA, ImmuUsa ™ ACA "IgM consente di determinare i singoli isotipi di questi autoanticorpi.

Tabella 9 Sindromi associate ad ASA

Sindrome	% occorrenza
Trombosi venosa intermittente	28-71
Aborti frequenti	28- 64
Mielite trasversa	50
Anemia emolitica	38
Trombocitopenia	27-33
Occlusioni arteriose	25 -31
Livedo Riticularis (pelle di marmo)	25
Ipertensione polmonare	20 - 40
LES	33-57

Gli studi hanno dimostrato che nei pazienti con sindrome antifosfolipidica la presenza di anticorpi non solo contro la cardiolipina (ACA) ma anche contro la fosfatidilserina è di grande importanza, quest'ultima può essere rilevata sia insieme all'ASA che separatamente.

Nel LES, anche gli ASA si legano abbastanza bene alla fosfatidilserina, mentre alcuni malattie infettive, ASA sono altamente specifici per la cardiolipina. A questo proposito, è importante la determinazione separata degli anticorpi contro la fosfatidilserina. criterio diagnostico sindrome antifosfolipidica secondaria.

Indicazioni per il test per la sindrome da anticorpi antifosfolipidi:

trombosi e vasculiti nelle malattie autoimmuni (valutazione della gravità della condizione, prognosi e monitoraggio della terapia)
aborto frequente o morte fetale intrauterina (possibilità di una profilassi efficace durante una nuova gravidanza)
poco chiaro manifestazioni neurologiche(corea, emicrania, epilessia possono essere causate da microtrombosi)
trombocitopenia ricorrente di origine sconosciuta (chiarimento della diagnosi)
pelle di marmo

^ 9. DIAGNOSI SIEROLOGICA DELLE ENDOCRINOPATIE AUTOIMMUNI

Alcuni malattie endocrine accompagnato dalla comparsa di autoanticorpi che, in alcuni casi, svolgono un ruolo significativo nella loro patogenesi. Queste malattie includono: diabete di tipo 1 insulino-dipendente, tiroidite di Hashimoto, morbo di Graves, tiroidite nodulare, sindrome "candidosi-endocrinopatia", ecc.

Determinazione degli anticorpi contro le cellule beta delle isole di Langerhans del pancreas.

È noto che il momento chiave nello sviluppo del diabete mellito insulino-dipendente di tipo 1 è il fenomeno della trasformazione delle cellule  da "self" a "non-self" e l'attivazione del loro danno autoimmune. Con un decorso lento della malattia, il primo segno di patologia è la comparsa di anticorpi contro le cellule beta delle isole di Langerhans del pancreas e, in particolare, contro la decarbossilasi dell'acido glutammico legata alla membrana durante il periodo in cui il livello di zucchero nel sangue diminuisce non supera ancora la norma e la tolleranza al glucosio rimane normale. Poiché le prime manifestazioni cliniche del diabete compaiono quando sono colpite più del 90% di tutte le cellule che sintetizzano l'insulina, gli anticorpi possono comparire molti anni (fino a 8 anni) prima della manifestazione clinica della malattia. Allo stesso tempo, la presenza di anticorpi contro le cellule beta è correlata alla loro quantità residua, e quando le rimanenti cellule beta muoiono, lo stimolo per una risposta autoimmune diminuisce, il titolo di autoanticorpi può diminuire significativamente fino a valori non rilevabili. Di norma, quando si esaminano le persone con diabete di tipo 1, gli anticorpi contro le cellule insulari vengono rilevati nel 50-80% dei casi. La frequenza di insorgenza di questi autoanticorpi nei parenti (1o grado) dei diabetici raggiunge il 2-5%. È noto che ogni anno l'11% di questo gruppo di persone sviluppa sintomi di diabete.

La determinazione degli anticorpi contro le cellule beta delle isole di Langerhans del pancreas viene effettuata sia mediante immunofluorescenza indiretta che mediante ELISA in fase solida. Nel primo caso si utilizzano come substrato sezioni di pancreas di scimmie, nel secondo si adsorbono nei pozzetti della piastra gli antigeni purificati delle cellule insulari. Emolisi, lipemia e contaminazione microbica impediscono l'analisi. I sieri contenenti un'alta concentrazione di ANA rendono difficile la determinazione, specialmente quando si esegue l'RNIF.

Determinazione degli autoanticorpi contro gli antigeni tiroidei

Nelle malattie della ghiandola tiroidea, è importante il contenuto di anticorpi contro la perossidasi tiroidea (Anti-TPO) e anticorpi contro la tireoglobulina (Anti-TG) nel siero del paziente. Poiché i loro livelli cambiano indipendentemente l'uno dall'altro, si raccomanda di determinare contemporaneamente entrambi i tipi di anticorpi.

Il TPO è un componente antigenico dell'antigene microsomiale tiroideo ed è una proteina contenente eme debolmente glicosilata che svolge un ruolo importante nel processo di iodinazione della tireoglobulina e nella sintesi degli ormoni tiroidei. Anticorpi anti-TPO sono presenti nel siero di pazienti con gozzo e tiroidite atrofica o tireotossicosi primaria. Le concentrazioni più elevate sono presenti in pazienti con variante fibrosa o ossifila del gozzo di Hashimoto. I pazienti con malattia di Graves (malattia di Basedow) producono entrambi i tipi di anticorpi, ma in concentrazioni piuttosto basse. Alte concentrazioni di anticorpi anti-TG sono tipiche per i sieri di pazienti con ipotiroidismo, gozzo fibroso di Hashimoto, mixedema. Gli anticorpi antitiroidei sono più tipici delle malattie autoimmuni della tiroide, in questi casi i titoli di autoanticorpi sono più alti.

Tabella 10. Frequenza (%) degli autoanticorpi antitiroidei

^ 10. DIAGNOSI SIEROLOGICA DELLE MALATTIE AUTOIMMUNI DEL FEGATO

Secondo la moderna classificazione dell'epatite cronica, l'epatite autoimmune (AIH) è definita come un'epatite irrisolta, prevalentemente periportale, con la presenza di ipergammaglobulinemia e autoanticorpi tissutali, che nella maggior parte dei casi regredisce sotto l'influenza della terapia immunosoppressiva. Attualmente, il gruppo delle malattie epatiche autoimmuni, insieme all'epatite autoimmune, comprende la cirrosi biliare primaria (danno ai piccoli dotti biliari con presenza di anticorpi antimitocondriali (AMA) ), colangite autoimmune (danno ai piccoli dotti in assenza di AMA), colangite sclerosante primitiva (danno ai grossi dotti biliari).

La patogenesi dell'AIH non è ben compresa. È noto che il sistema immunitario svolge un ruolo importante nello sviluppo dell'eziologia dell'epatite cronica. È stato stabilito che gli autoanticorpi sierici si trovano spesso nell'epatite cronica di qualsiasi eziologia (Tabella 11). Per gli ANA trovati nell'AIH e in altre malattie del fegato, non è stato possibile identificare specifici antigeni nucleari e sottotipi di ANA. Gli obiettivi dei processi autoimmuni nelle malattie epatiche croniche di varie eziologie (AIH, epatite come parte della sindrome poliendocrina autoimmune di tipo 1, autoimmunità indotta da virus epatotropi, epatite indotta da farmaci) sono gli enzimi del metabolismo xenobiotico di fase 1 (citocromo P-450) e la fase II (uridina difosfato glucuronosil transferasi - UGT).

Tabella 11. Autoanticorpi trovati in varie eziologie di epatite cronica.

Eziologia dell'epatite cronica	Autoanticorpi rilevabili
Epatite virale B
Epatite virale C	ANA, SMA, LKM-1, GOR
Epatite virale D	LKM-3 (UGT)
AIH tipo 1	ANA, SMA, anticorpi anti-actina
EAI di tipo 2	LKM-1
EAI di tipo 3	SLA
epatite indotta da farmaci	ANA, LKM-1
criptogenico	No

AIH tipo 1(presenza di ANA sierico, SMA, anticorpi anti-actina) è l'85% di tutti con AIH. Si osserva prevalentemente nelle donne (8:1). Colpisce le persone anziane, è caratterizzata da manifestazioni extraepatiche meno frequenti e una prognosi relativamente favorevole. AIH - tipo 2(presenza di siero LKM-1) rappresenta non più del 15% di tutti i casi di AIH, tra i quali predominano i giovani (dai 2 ai 14 anni). Spesso accompagnato da manifestazioni sistemiche e prognosi infausta.

AIH- 3° tipo(presenza di SLA) si sviluppa più spesso nelle giovani donne (90%) e, secondo alcuni autori, è una delle varianti della AIH di tipo 1.

CONCLUSIONE

Pertanto, le moderne possibilità di test sierologici del siero per la presenza di autoanticorpi specifici forniscono al clinico un importante strumento aggiuntivo per la diagnosi differenziale delle malattie autoimmuni, determinando la prognosi e monitorando l'efficacia della terapia. Allo stesso tempo, tenendo conto delle peculiarità dei processi autoimmuni, della possibilità di rilevare autoanticorpi in individui praticamente sani e della non sempre sufficiente specificità dei marcatori, nell'interpretazione si dovrebbe prestare particolare attenzione al fatto che il risultato di un'analisi sierologica della determinazione degli autoanticorpi di per sé non può essere considerata una conferma o esclusione inequivocabile di una diagnosi di malattia autoimmune. Solo un'analisi completa dell'intero complesso di dati di laboratorio, amnesici e clinici può consentire di prendere la decisione giusta.

^ ELENCO DELLA LETTERATURA USATA

Shirinsky V.S. "Malattie autoimmuni: patogenesi, diagnosi, principi di cura", Kit di strumenti per studenti e medici, Novosibirsk, 1997
Serov V.V., Zayratyants O.V. "Autoimmunizzazione e malattie autoimmuni", Archives of Pathology, 1992, v.54, pp. 5-11
Aprosina Z.G., Serov V.V. "Epatite autoimmune (storia di studio, aspetti contemporanei)", Archive of Pathology, 1998, vol. 60, n. 3, pp. 71-75.
Pokrovsky V.I., Gordienko S.P. "Immunologia del processo infettivo", Guida per medici, M., 1994
Protopopov B.V. "Concetti di base dell'immunologia clinica", Guida per i professionisti, Krasnoyarsk, 1995.
Vijay Kamar, MA Janderski "Antinuclear Antibody test", ANTIBODY, 1995, 8/CLN, P. 6, 8
Nakamura RM, Tan EM "Recenti progressi nei test di laboratorio e significato degli autoanticorpi contro gli antigeni nucleari nella malattia reumatica sistemica" Clin. Laboratorio Med., 1986, 6, pag. 41 - 53
McCarty GA, Valencia DW, Fritzler M.J. "Anticorpi antinucleari: tecniche contemporanee e applicazione clinica alla malattia del tessuto connettivo. In: Anticorpi antinucleari. Oxford Univ. Press, NY, 1984, p. 1 - 95.
Saggio immunoenzimatico: kit e attrezzature, gruppo di società BioChemMac, 2002.
Immunologia Clinica e Allergologia, ed. Pratica, M., 2000
TS de Araujo, R.S. Kirsner "Vasculite", Ferite 2001,13(3) p.99-110.

Antigeni batterici:

Gruppo specifico (disponibile in diverse specie dello stesso genere o famiglia)

Specie-specifica (in rappresentanti di una specie)

Tipo-specifico (determinare una variante sierologica all'interno di una specie)

Ceppo specifico

Stadiospecifico

Antigeni cross-reattivi (simili, uguali nell'uomo e nei microbi)

Per localizzazione:

OSA– somatico (LPS della parete cellulare)

N-Ag- flagelli (natura proteica)

K-Ag– capsulare (PS, proteine, polipeptidi)

Ag Piley(fimbriale)

Ag citoplasmatico(membrana, CPU)

Esotossine(proteine)

Ectoenzimi

STREGA fa parte dei flagelli batterici, la sua base è la proteina flagellina. Termolabile.

K-AGè un gruppo eterogeneo di batteri AG capsulari superficiali. Sono in una capsula. Contengono principalmente polisaccaridi acidi, che includono acido galatturonico e glucuronico.

Determinanti antigenici cross-reattivi trovato in MO e umani/animali. Nei microbi di varie specie e nell'uomo sono comuni, simili nella struttura, AG. Questi fenomeni sono chiamati mimetismo antigenico. Spesso, gli antigeni cross-reattivi riflettono la comunanza filogenetica di questi rappresentanti, a volte sono il risultato di una somiglianza casuale nella conformazione e nelle cariche - molecole AG. Ad esempio, l'AG di Forsman si trova negli eritrociti di ariete, nella salmonella e nelle cavie. Gli streptococchi emolitici di gruppo A contengono antigeni a reazione crociata (in particolare la proteina M) che sono comuni con gli antigeni dell'endocardio e dei glomeruli dei reni umani. Tali antigeni batterici causano la formazione di anticorpi che reagiscono in modo incrociato con le cellule umane, il che porta allo sviluppo di reumatismi e glomerulonefrite post-streptococcica. L'agente eziologico della sifilide ha fosfolipidi simili nella struttura a quelli trovati nel cuore degli animali e dell'uomo. Pertanto, l'antigene cardiolipina del cuore degli animali viene utilizzato per rilevare gli anticorpi contro la spirocheta nelle persone malate (reazione di Wassermann).

54. Linfociti B: sviluppo, marcatori, recettore antigene-specifico delle cellule B. Metodi per determinare il numero e l'attività funzionale dei linfociti B.

Linfociti B così chiamati perché vengono identificati per la prima volta negli uccelli in uno speciale organo centrale dell'immunità, chiamato "borsa di Fabricius" (borsa di Fabricius) e in cui passano la fase di maturazione. Negli animali, questo organo è assente e le prime fasi di maturazione dei linfociti B passano nell'RMC.

Hanno un recettore delle cellule B specifico per l'antigene (RCR) sotto forma di molecole di anticorpi legati alla membrana, nonché un numero di AG e recettori CD di superficie. I linfociti B possono riconoscere l'AG nativo allo stato libero.

Peculiarità:

costituiscono il 10-15% dei linfociti del sangue e il 20-25% delle cellule linfonodali.

espresso sulla superficie di IgD(IgM), HLA II, CD19,20,21,22,40,80/86, ecc.

funzione principale:

OGM, produzione di anticorpi di una certa specificità (Ig G, A, M)

presentazione dell'antigene ai linfociti T

Sviluppo:

cellule staminali pluripotenti (CD34 e CD117)

cellule pro-B (esprimono AG e cellule staminali (CD34 e CD117) e linfociti B - CD19 e CD22))

cellule pre-B (la sintesi di IgM inizia nel citoplasma)

cellule B immature (esprimono IgM sulla superficie)

2. Le cellule che trasportano i recettori per l'autoAG vengono distrutte.

3. Zone delle cellule T degli organi linfoidi periferici:

le cellule che non hanno ricevuto un segnale di sopravvivenza dalle cellule T vengono distrutte

4. Follicoli linfatici:

Cellule B mature (esprimono IgM e IgD, nonché antigeni CD21, CD22).

5. Prima di incontrare AH, i linfociti B maturi circolano costantemente nel sangue tra l'RMC e gli organi linfoidi secondari. Dopo l'incontro con l'AG, si trasformano in plasmacellule producendo AT (1 milione di molecole/ora) e celle di memoria.

Recettore delle cellule B che riconosce l'antigene dei linfociti B costituito da una molecola di immunoglobulina di membrana (IgM monomerica o IgD) e due molecole di CD79 (a e c). BcR ha segmenti transmembrana e intracitoplasmatici che trasmettono segnali intracellulari.

Metodi per determinare il numero e l'attività funzionale dei linfociti B.

I linfociti B umani sono in grado di legare gli eritrociti di topo e formare rosette con essi, nonché formare rosette con eritrociti, molecole di anticorpi sensibilizzati (IgG) e molecole C3b del frammento del sistema del complemento, che viene utilizzato nella pratica di laboratorio. Queste proprietà, insieme all'espressione delle molecole CD 5, consentono di identificare una sottopopolazione di linfociti B.

Studio del numero e dello stato funzionale dei linfociti B Le cellule B si trovano nel sangue periferico dal loro apparato recettore, vale a dire:

a) dalla presenza di recettori per le immunoglobuline e per la 3a frazione del complemento- reazione rosetta EAC; La reazione di formazione della rosetta EAC è organizzata in 2 fasi: prima

preparare un reagente costituito da eritrociti bovini, anticorpi contro di essi e complemento, quindi questo complesso formato viene aggiunto ai linfociti del sangue umano. Si forma una rosetta, che esternamente non differisce dalle rosette E, ma il metodo per ottenere indica l'identificazione dei linfociti B.

b) dalla presenza di recettori immunoglobulinici- reazione di immunofluorescenza; consente di rilevare i recettori delle immunoglobuline sulla superficie del linfocita B. Per questo vengono utilizzati sieri antiglobulinici marcati con fosfori.

c) dalla presenza di recettori per gli eritrociti di topo- reazione di formazione della rosetta ME. La reazione di fionda con gli eritrociti di topo appare come risultato della miscelazione di questi ultimi con i linfociti del sangue periferico.

Caratteristiche funzionali dei linfociti B e quantità di immunoglobuline di varie classi. Il più comunemente usato metodo di immunodiffusione radiale in agar: l'agar fuso viene versato su una lastra di vetro contenente anticorpi contro una data classe di immunoglobuline. I pozzetti vengono eliminati in agar, in cui vengono introdotti campioni dei sieri studiati. Come risultato dell'immunoprecipitazione si formano strisce radiali, il cui diametro dipende dalla concentrazione dell'immunoglobulina corrispondente. - Determinazione degli anticorpi contro gli autoantigeni o contro i microbi della microflora normale.

Determinazione del titolo di anticorpi specifici prodotti nel corpo umano dopo l'immunizzazione con vaccini.

55. Risposta immunitaria umorale: definizione, stadi di sviluppo. Attivazione, proliferazione e differenziamento delle cellule. eliminazione dell'antigene. Risposta T-dipendente e T-indipendente. Manifestazioni della risposta immunitaria umorale primaria e secondaria.

Fasi OGM:

Presentazione dell'antigene (riconoscimento, elaborazione e presentazione dell'antigene).

Fase induttiva (trasmissione di informazioni al corrispondente clone di linfociti B, loro proliferazione e differenziazione).

Stadio effettore (sintesi anticorpale e formazione dei linfociti B della memoria).

Attivazione T-indipendente dei linfociti B- stimolazione diretta dei linfociti B senza la partecipazione di linfociti T con antigeni T-indipendenti.

Questi AG sono LPS o polisaccaridi di microbi con strutture che si ripetono linearmente.

Legandosi a HCR, attivano il corrispondente clone di linfociti B (polisaccaridi pneumococcici) o provocano l'attivazione policlonale di linfociti B (LPS di batteri Gram), che proliferano, si differenziano in plasmacellule che sintetizzano IgM.

I linfociti B di memoria non sono formati.

Attivazione T-dipendente dei linfociti B- effettuato da antigeni T-dipendenti (proteine, batteri) con la partecipazione obbligatoria dei linfociti T.

Le APC catturano l'antigene, lo elaborano in peptidi a basso peso molecolare e, in combinazione con la molecola MHC II, lo presentano ai linfociti T naive (Tx0), che interagiscono con esso con il recettore TCR e il co-recettore CD4.

Le Tx0 vengono attivate, proliferano e si trasformano in cellule effettrici - Tx2.

L'HRC riconosce l'antigene e la cellula lo assorbe. Dopo l'elaborazione, si forma anche un complesso peptide-molecola MHC di classe II, che i linfociti B presentano agli aiutanti Th2.

Interazione cellula BT: i Th2 percepiscono il segnale con l'aiuto del TCR e del co-recettore CD4. Tuttavia, per la piena attivazione dei T-helper, è necessaria una stimolazione aggiuntiva (costimulazione), che viene effettuata da molecole di interazione intercellulare (CD40-CD40L, CD80/86-CD28, ecc.). Questi processi sono importanti anche per l'attivazione dei linfociti B. In assenza di costimolazione, si verifica l'apoptosi dei linfociti T.

Il Th2 attivato produce IL-4, 5, 6, 10, sotto l'influenza del quale i linfociti B proliferano, si trasformano in blasti e poi in plasmacellule che sintetizzano anticorpi. È con la partecipazione delle citochine Tx2 che è possibile cambiare i geni delle immunoglobuline dei linfociti B, che garantisce la sintesi delle immunoglobuline. vari classi.

Alcune delle cellule esplosive si trasformano in Linfociti B della memoria. Una piccola popolazione di cellule formata durante la risposta immunitaria umorale dai linfociti B attivati. Sopravvivono in uno stato di riposo funzionale per molti anni dopo l'eliminazione dell'antigene dal corpo. Portano una "memoria" dell'antigene sotto forma di HRC antigene-specifici (principalmente IgG).

Risposta immunitaria primaria si sviluppa al primo colpo dell'antigene nel corpo dopo un periodo di latenza (2-3 giorni). Prima vengono sintetizzate le IgM (rilevate dopo 2-3 giorni) e poi le IgG (picco nei giorni 10-14, possono rimanere a basso titolo per tutta la vita). Parallelamente, c'è un leggero aumento del livello di IgA, IgE, IgD. La risposta immunitaria primaria diminuisce 2-3 settimane dopo la sfida dell'antigene. Dopo di ciò, rimangono le cellule della memoria e un livello di tracce di anticorpi IgG può essere mantenuto a lungo.

risposta immunitaria secondaria a causa delle cellule B-memoria, la stimolazione della sintesi di anticorpi avviene rapidamente (dopo 1-3 giorni). Il numero di anticorpi aumenta bruscamente e vengono immediatamente sintetizzate le IgG, i cui titoli sono molte volte maggiori rispetto alla risposta immunitaria primaria. La loro affinità (affinità) per l'antigene aumenta. Sulle mucose, il livello degli anticorpi IgA secretori aumenta in modo significativo. Il livello di anticorpi IgM non cambia in modo significativo a causa dell'assenza di cellule B di memoria con il recettore IgM. Il tempo di decadimento del secondario supera significativamente la durata della conservazione degli anticorpi durante la risposta immunitaria primaria.

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