immünodiagnostik reaksiyonlar. Antijen-antikor reaksiyonları ve etiketli bileşenlerle reaksiyonlar. Mikroorganizma tanımlama ve tanı amaçlı kullanım bulaşıcı hastalıklar.

İmmün reaksiyonlar, hastalarda teşhis ve immünolojik çalışmalarda kullanılır ve sağlıklı insanlar. Bu amaçla başvuru serolojik yöntemler (lat. serum - serum ve logolar - doktrin), yani kan serumu ve diğer sıvıların yanı sıra vücut dokularında belirlenen antijen-antikor reaksiyonlarını kullanarak antikorları ve antijenleri inceleme yöntemleri.

Hastanın kan serumunda patojenin antijenlerine karşı antikorların saptanması hastalığın teşhisini mümkün kılar. Serolojik çalışmalar ayrıca mikrobiyal antijenleri, çeşitli biyolojik olarak aktif maddeleri, kan gruplarını, doku ve tümör antijenlerini, bağışıklık komplekslerini, hücre reseptörlerini vb. tanımlamak için kullanılır.

Bir hastadan bir mikrop izole edildiğinde, patojen üzerinde çalışılarak tanımlanır. antijenik özellikler immün teşhis serumları, yani spesifik antikorlar içeren hiperimmünize hayvanların kan serumları kullanılarak. Bu sözde serolojik tanımlama mikroorganizmalar.

Mikrobiyoloji ve immünolojide, aglütinasyon, presipitasyon, nötralizasyon reaksiyonları, kompleman içeren reaksiyonlar, etiketli antikorlar ve antijenler (radyoimmünolojik, enzim immünoassay, immünfloresan yöntemleri) yaygın olarak kullanılmaktadır. Listelenen reaksiyonlar, kayıtlı etki ve ayar tekniğinde farklılık gösterir, ancak hepsi temeldir. Bir antijenin bir antikor ile etkileşiminin reaksiyonu üzerine vanlar ve hem antikorları hem de antijenleri saptamak için kullanılırlar. Bağışıklık reaksiyonları, yüksek duyarlılık ve özgüllük ile karakterize edilir.

Aşağıdakiler, ana immünolojik yöntemlerin ilkeleri ve şemalarıdır. teşhis reaksiyonları. detay tekniği ayar reaksiyonları verilir. immünodiagnostik için pratik kılavuzlar.

Aglütinasyon reaksiyonu - RA(lat. aglüti- millet- bağlanma) - antikorların korpüsküler antijenleri (bakteriler, eritrositler veya diğer hücreler, üzerlerine adsorbe edilmiş antijenlerle çözünmeyen parçacıklar ve ayrıca makromoleküler agregatlar) bağladığı basit bir reaksiyon. Elektrolitlerin varlığında, örneğin bir izotonik sodyum klorür çözeltisi eklendiğinde meydana gelir.

Aglütinasyon reaksiyonunun çeşitli varyantları kullanılır: genişletilmiş, yaklaşık, dolaylı, vb. Aglütinasyon reaksiyonu, pul veya tortu oluşumu ile kendini gösterir.

RA için kullanılır:

örneğin brusellozlu hastaların kan serumundaki antikorların belirlenmesi (Wright, Heddelson reaksiyonları), Tifo ve paratifoid (Vidal reaksiyon) ve diğer bulaşıcı hastalıklar;

hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi;

eritrosit allojenlerine karşı monoklonal antikorlar kullanılarak kan gruplarının belirlenmesi.

Hastanın antikorlarını belirlemek için koymakgenişletilmiş aglütinasyon reaksiyonu: hastanın kan serumunun dilüsyonlarına ekleyin teşhis(öldürülen mikropların süspansiyonu) ve 37 ° C'de birkaç saatlik inkübasyondan sonra, aglütinasyonun meydana geldiği, yani bir çökeltinin oluştuğu en yüksek serum seyreltmesi (serum titresi) not edilir.

Aglütinasyonun doğası ve hızı, antijen ve antikorların tipine bağlıdır. Bir örnek, diagnostiklerin (O- ve R-antijenleri) spesifik antikorlarla etkileşimidir. ile aglütinasyon reaksiyonu O-teşhis(ısı ile öldürülen bakteri, termostabil O antijen) ince taneli aglütinasyon şeklinde oluşur. H-diagnosticum (ısıya duyarlı flagellar H-antijeni tutan formalin tarafından öldürülen bakteri) ile aglütinasyon reaksiyonu kaba tanelidir ve daha hızlı ilerler.

Hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi gerekiyorsa, aglütinasyon reaksiyonunun yönlendirilmesi, teşhis antikorları (aglütinasyon serumu) kullanılarak, yani patojenin serotiplemesi gerçekleştirilir. Bir cam slayt üzerinde yaklaşık bir reaksiyon gerçekleştirilir. 1:10 veya 1:20 dilüsyonda bir damla tanısal aglütinasyon serumuna hastadan izole edilen patojenin saf kültürünü ekleyin. Yakına bir kontrol yerleştirilir: serum yerine bir damla sodyum klorür çözeltisi uygulanır. Serum ve mikroplarla birlikte bir damlada pıhtılaşmış bir tortu göründüğünde, kapsamlı aglütinasyon reaksiyonu 2-3 damla patojen süspansiyonunun eklendiği, artan aglütinasyon serum dilüsyonlarına sahip test tüplerinde. Aglütinasyon, tortu miktarı ve sıvının berraklaşma derecesi ile dikkate alınır. Teşhis serumunun titresine yakın bir dilüsyonda aglütinasyon görülürse reaksiyon pozitif kabul edilir. Aynı zamanda, kontroller dikkate alınır: izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilmiş serum şeffaf olmalıdır, aynı çözelti içindeki bir mikrop süspansiyonu tortusuz, tek tip bulanık olmalıdır.

Farklı ilgili bakteriler, aynı tanısal aglütinasyon serumu ile aglütine olabilir ve bu da tanımlamalarını zorlaştırır. Bu nedenle, keyfini çıkarın adsorbe aglütinasyon serumları,çapraz reaktif antikorların, ilgili bakteriler tarafından adsorpsiyon yoluyla uzaklaştırıldığı. Bu tür serumlarda sadece bu bakteriye özgü antikorlar kalır. Bu şekilde monoreseptör tanısal aglütinasyon serumlarının hazırlanması A. Castellani (1902) tarafından önerilmiştir.

Dolaylı (pasif) hemaglütinasyonun reaksiyonu (RNHA, RPHA), yüzeyde adsorbe edilmiş antijenler veya antikorlar ile eritrositlerin kullanımına dayanır; bunların karşılık gelen antikorlar veya topun kan serumunun antijenleri ile etkileşimi, eritrositlerin birbirine yapışmasına ve dibe düşmesine neden olur. test tüpü veya hücre içinde taraklı bir tortu formu (Şekil 13.2). Negatif bir reaksiyonla eritrositler bir "düğme" şeklinde yerleşir. Genellikle, RNHA'da antikorlar, adsorbe edilmiş eritrositler olan bir antijenik eritrosit tanılama kullanılarak saptanır. üzerinde antijenler. Bazen antikorların adsorbe edildiği antikor eritrosit teşhisini kullanırız. Örneğin botulinum toksini, içine eritrosit antikoru botulinum Diagnostikum eklenerek tespit edilebilir (bu reaksiyona denir). ters dolaylı hemaglütinasyon reaksiyonu-RONGA). RNHA bulaşıcı hastalıkları teşhis etmek, gonadotropik hormonu belirlemek için kullanılır içinde Hamilelik kurulduğunda idrar, tespit etmek için aşırı duyarlılık ile ilaçlar, hormonlar ve diğer bazı durumlarda.

Pıhtılaşma reaksiyonu . Patojen hücreleri, immün teşhis serumu ile ön işleme tabi tutulmuş stafilokoklar kullanılarak belirlenir. Protein içeren stafilokoklar VE, yakınlığı olan FC - spesifik olmayan bir şekilde antimikrobiyal antikorları adsorbe eden ve daha sonra hastalardan izole edilen karşılık gelen mikroplarla aktif merkezlerle etkileşime giren immünoglobulinlerin bir parçası. Pıhtılaşmanın bir sonucu olarak, stafilokoklardan oluşan pullar, teşhis serum antikorları ve tespit edilen mikrop oluşur.

Hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu (RTGA), virüslerin kırmızı kan hücrelerini aglütine etme yeteneklerini yitirmesinin bir sonucu olarak, bağışıklık serumu antikorları tarafından virüs antijenlerinin baskılanmasına, blokajına dayanır (Şekil 13.3). RTHA, nedensel ajanları (grip, kızamık, kızamıkçık, kene kaynaklı ensefalit vb.) çeşitli hayvanların eritrositlerini aglütine edebilen birçok viral hastalığı teşhis etmek için kullanılır.

Kan gruplarını belirlemek için aglütinasyon reaksiyonu A (II), B (III) kan gruplarının antijenlerine karşı immün serum antikorları ile eritrositlerin aglütinasyonunu kullanarak ABO sistemini oluşturmak için kullanılır (bkz. bölüm 10.1.4.1). Kontroller: antikor içermeyen serum, yani serum AB (GU) kan grupları; A (II), B (III) gruplarının eritrositlerinde bulunan antijenler. Negatif kontrol antijen içermez, yani grup 0 (I) eritrositler kullanılır.

AT Rh faktörünü belirlemek için aglütinasyon reaksiyonları(bkz. bölüm 10.1.4.1) anti-Rh serum kullanın (en az iki farklı seri). Çalışılan eritrositlerin zarında Rh antijeninin varlığında, bu hücrelerin aglütinasyonu meydana gelir. Tüm kan gruplarının standart Rh-pozitif ve Rh-negatif eritrositleri kontrol görevi görür.

Anti-Rhesus antikorlarının belirlenmesi için aglütinasyon reaksiyonu ( dolaylı reaksiyon Coombs)intravasküler hemolizli hastalarda kullanılır. Bu hastaların bazılarında, eksik, monovalan anti-Rhesus antikorları bulunur. Spesifik olarak Rh-pozitif eritrositlerle etkileşime girerler, ancak aglütinasyonlarına neden olmazlar. Bu tür tamamlanmamış antikorların varlığı, dolaylı Coombs reaksiyonunda belirlenir. Bunu yapmak için, anti-Rh antikorları + Rh-pozitif eritrositler sistemine, eritrositlerin aglütinasyonuna neden olan antiglobulin serumu (insan immünoglobülinlerine karşı antikorlar) eklenir (Şekil 13.4). Coombs reaksiyonu kullanılarak, immün kaynaklı eritrositlerin intravasküler lizisi ile ilişkili patolojik durumlar teşhis edilir, örneğin, yenidoğanın hemolitik hastalığı: Rh-pozitif bir fetüsün eritrositler, kanda dolaşan Rh faktörüne karşı tamamlanmamış antikorlarla birleşir; Rh negatif bir anneden plasenta.

Yağış reaksiyonları

Yağış reaksiyonu - RP (danlat. praeci-pito- çökelti,), adı verilen bulanıklık şeklinde antikorlarla çözünür bir moleküler antijen kompleksinin oluşumu ve çökelmesidir. çökelti. Antijen ve antikorların eşdeğer miktarlarda karıştırılmasıyla oluşturulur; bunlardan birinin fazlası, bağışıklık kompleksinin oluşum seviyesini azaltır.

Test tüplerine konulan çökelme reaksiyonları (halka çökeltme reaksiyonu), jellerde, besleyici ortamlarda vb. Yarı sıvı bir agar veya agaroz jelinde çökelme reaksiyonunun çeşitleri yaygın olarak kullanılmaktadır: Ouchterlony'ye göre çift immün difüzyon. radyal immünodifüzyon, immünoelektroforez ve benzeri.

Halka çökeltme reaksiyonu . Reaksiyon, üzerinde çözünür bir antijenin katmanlandığı immün serumlu dar çökeltme tüplerinde gerçekleştirilir. Optimal bir antijen ve antikor oranıyla, bu iki çözeltinin sınırında opak bir çökelti halkası oluşur (Şekil 13.5). Fazla antijen, reaktiflerin sıvı sınırına kademeli olarak difüzyonu nedeniyle halka çökelme reaksiyonunun sonucunu etkilemez. Halka çökeltme reaksiyonunda antijen olarak organ veya dokuların kaynatılıp süzülmüş sulu ekstraktları kullanılıyorsa, böyle bir reaksiyona denir. termopresipitasyon reaksiyonu-iii (Ascoli reaksiyonu,şarbonlu /

Oukhteruni çift immün difüzyon reaksiyonu . Reaksiyonu ayarlamak için eritilmiş agar jeli ince bir tabaka halinde cam bir plaka üzerine dökülür ve sertleştikten sonra üzerine 2-3 mm boyutunda delikler açılır. Birbirine doğru dağılan bu kuyucuklara antijenler ve immün serumlar ayrı ayrı yerleştirilir. Eşdeğer oranlarda buluşma noktasında beyaz bir bant şeklinde bir çökelti oluştururlar. Çok bileşenli sistemlerde, farklı antijenlere ve serum antikorlarına sahip kuyucuklar arasında birkaç çökelti çizgisi görünür; özdeş antijenler için çökelti çizgileri birleşir; özdeş olmayanlar için kesişirler (Şekil 13.6).

Radyal immünodifüzyon reaksiyonu . Erimiş agar jeli içeren bağışıklık serumu bardağa eşit şekilde dökülür. Jelde katılaşmadan sonra, antijenin yerleştirildiği kuyucuklar açılır. çeşitli dilüsyonlar. Jel içine difüze olan antijen, antikorlarla kuyuların çevresinde halka çökelme bölgeleri oluşturur (Şekil 13.7). Çökeltme halkasının çapı, antijen konsantrasyonu ile orantılıdır. Reaksiyon, çeşitli sınıflardaki immünoglobulinlerin, tamamlayıcı sistemin bileşenlerinin vb. kan seviyelerini belirlemek için kullanılır.

immünoelektroforez- elektroforez ve immünopresipitasyon yönteminin bir kombinasyonu: jelin kuyularına bir antijen karışımı verilir ve elektroforez kullanılarak jel içinde ayrılır. Daha sonra, elektroforez bölgelerine paralel olarak, oluğa, antikorları jele yayılan ve çökeltme hattının antijeni ile buluşma noktasında oluşan bir immün serum sokulur.

flokülasyon reaksiyonu(Ramon'a göre) (lat. tüy yumağı- yün pulları) - bir toksin-antitoksin veya anatoksin-antitoksin reaksiyonu sırasında bir test tüpünde opaklık veya topaklanma kütlesinin (immüno-çökeltme) görünümü. Antitoksik serum veya toksoidin aktivitesini belirlemek için kullanılır.

Bağışıklık elektron mikroskobu- uygun antikorlarla tedavi edilen mikropların, daha sıklıkla virüslerin elektron mikroskobu. İmmün serumla tedavi edilen virüsler, immün agregatlar (mikro çökeltiler) oluşturur. Fosfotungstik asit veya diğer elektron-optik olarak yoğun preparasyonların aksine, viryonların etrafında bir antikor "tacı" oluşur.

Tamamlayıcı içeren reaksiyonlar

Tamamlayıcı içeren reaksiyonlarbir antijen-antikor kompleksi (kompleman fiksasyon reaksiyonu, radyal hemoliz, vb.) tarafından komplementin aktivasyonuna dayanır.

Tamamlayıcı fiksasyon reaksiyonu (RSK) birbirine karşılık geldiğinde, antijenlerin ve antikorların bir bağışıklık kompleksi oluşturması gerçeğinde yatmaktadır; FC - antikor fragmanı komplemente (C) katılır, yani kompleman bağlanması bir antijen-antikor kompleksi ile gerçekleşir. Antijen-antikor kompleksi oluşmazsa, tamamlayıcı serbest kalır (Şekil 13.8). RSK iki aşamada gerçekleştirilir: 1. aşama - antijen + antikor + tamamlayıcının üç bileşenini içeren bir karışımın inkübasyonu; 2. aşama (gösterge) - koyun eritrositlerinden oluşan bir hemolitik sistem ve bunlara karşı antikorlar içeren hemolitik serum ekleyerek karışımdaki serbest tamamlayıcının tespiti. Reaksiyonun 1. fazında, antijen-antikor kompleksi oluşumu sırasında kompleman bağlanması meydana gelir ve ardından 2. fazda, antikorlar tarafından duyarlı hale getirilen eritrositlerin hemolizi gerçekleşmez; tepki olumlu. Antijen ve antikor birbirine uymuyorsa (test örneğinde antijen veya antikor yoktur), tamamlayıcı serbest kalır ve 2. aşamada eritrosit-antieritrosit antikor kompleksine katılarak hemolize neden olur; tepki negatiftir.

RSK başta sifiliz (Wasserman reaksiyonu) olmak üzere birçok bulaşıcı hastalığı teşhis etmek için kullanılır.

Radyal hemoliz reaksiyonu (RRH ) ram eritrositleri ve kompleman içeren agar jel kuyucuklarına yerleştirildi. Jelin kuyucuklarına hemolitik serum (koç eritrositlerine karşı antikorlar) eklendikten sonra, bunların çevresinde (antikorların radyal difüzyonunun bir sonucu olarak) bir hemoliz bölgesi oluşur. Böylece influenza, kızamıkçık, kene kaynaklı ensefalit hastalarının kan serumundaki antikorların yanı sıra kompleman ve hemolitik serumun aktivitesini belirlemek mümkündür. Bunun için virüsün karşılık gelen antijenleri eritrositler üzerinde adsorbe edilir ve bu eritrositleri içeren jelin kuyucuklarına hastanın kan serumu eklenir. Antiviral antikorlar, eritrositler üzerinde adsorbe edilen viral antijenlerle etkileşime girer.

Kompleman bileşenleri bu komplekse bağlanarak hemolize neden olur.

Bağışıklık yapışma reaksiyonu (RIP ) bağışıklık serumu ile tedavi edilen korpüsküler antijenler (bakteriler, virüsler) tarafından kompleman sisteminin aktivasyonuna dayanır. Sonuç olarak, bağışıklık kompleksinin bir parçası olarak korpüsküler antijene bağlanan aktive edilmiş bir üçüncü tamamlayıcı bileşen (C3b) oluşur. Eritrositlerde, trombositlerde, makrofajlarda C3b için reseptörler vardır, bu hücreler C3b taşıyan immün komplekslerle karıştırıldığında birleşir ve aglütine olurlar.

Nötrleştirme reaksiyonu

Bağışıklık serum antikorları, mikropların veya toksinlerinin, mikrobiyal antijenlerin antikorlar tarafından bloke edilmesiyle ilişkili hassas hücreler ve dokular üzerindeki zararlı etkisini, yani bunların nötrleştirme. Nötrleştirme reaksiyonu(RN), bir antijen-antikor karışımının hayvanlara veya hassas test nesnelerine (hücre kültürü, embriyolar) verilmesiyle gerçekleştirilir. Mikroorganizmaların veya antijenlerinin, hayvanlardaki toksinlerin ve test nesnelerinin zarar verici etkisinin yokluğunda, bağışıklık serumunun nötralize edici etkisinden ve dolayısıyla antijen-antikor kompleksinin etkileşiminin özgüllüğünden söz ederler (Şekil 13.9).

İmmünofloresan reaksiyonu - RIF (Koons yöntemi)

Yöntemin üç ana çeşidi vardır: tamamlayıcı ile doğrudan, dolaylı (Şekil 13.10). Koons reaksiyonu, mikrobiyal antijenleri tespit etmek veya antikorları tespit etmek için hızlı bir teşhis yöntemidir.

Doğrudan RIF yöntemi florokromlarla işaretlenmiş antikorlara sahip immün serumlarla tedavi edilen doku antijenlerinin veya mikropların, bir floresan mikroskobun UV ışınlarında parlayabildiği gerçeğine dayanır.

Böyle bir ışıltılı serumla tedavi edilen bir lekedeki bakteriler, hücre çevresi boyunca yeşil bir kenarlık şeklinde parlar.

Dolaylı RIF yöntemi florokrom ile etiketlenmiş antiglobulin (anti-antikor) serum kullanarak antijen-antikor kompleksini tanımlamaktır. Bunu yapmak için, bir mikrop süspansiyonundan alınan smearlar, antimikrobiyal tavşan teşhis serumunun antikorları ile tedavi edilir. Daha sonra mikrobiyal antijenlere bağlı olmayan antikorlar yıkanır ve mikroplar üzerinde kalan antikorlar, smear florokromlarla işaretlenmiş antiglobulin (anti-tavşan) serumu ile işlenerek tespit edilir. Sonuç olarak, florokrom ile işaretlenmiş kompleks bir mikrop + antimikrobiyal tavşan antikorları + anti-tavşan antikorları oluşur. Bu kompleks, doğrudan yöntemde olduğu gibi bir floresan mikroskobunda gözlenir.

ELISA yöntemi veya analizi (ELISA)

ELISA -bir etiketleme enzimi (yaban turpu peroksidaz, beta-galaktosidaz veya alkalin fosfataz) ile konjüge edilmiş karşılık gelen antikorları kullanılarak antijenlerin saptanması. Antijen, enzim etiketli immün serum ile birleştirildikten sonra, karışıma substrat/kromojen eklenir. Substrat enzim tarafından parçalanır ve reaksiyon ürününün rengi değişir - renk yoğunluğu bağlı antijen ve antikor moleküllerinin sayısı ile doğru orantılıdır.

Katı faz ELISA - bağışıklık tepkisinin bileşenlerinden biri (antijen veya antikorlar) katı bir taşıyıcı üzerine, örneğin polistiren plakaların oyuklarında adsorbe edildiğinde, immünolojik testin en yaygın varyantı

Antikorlar belirlenirken, hastanın kan serumu, enzimle işaretlenmiş antiglobulin serumu ve enzim için substrat (kromojen), adsorbe edilmiş antijenin bulunduğu plakaların kuyucuklarına sırayla eklenir.

Bir sonraki bileşenin eklenmesinden sonra her defasında, bağlanmamış reaktifler iyice yıkanarak kuyulardan çıkarılır. Olumlu bir sonuçla kromojen çözeltisinin rengi değişir. Katı fazlı bir taşıyıcı, yalnızca bir antijenle değil, aynı zamanda antikorlarla da duyarlı hale getirilebilir. Daha sonra adsorbe edilmiş antikorlar ile kuyucuklara istenen antijen verilir, enzimle işaretlenmiş antijene karşı immün serum eklenir ve ardından enzim için substrat eklenir.

Rekabetçi ELISA . hedef antijen ve enzim etiketli antijen, sınırlı miktarda immün serum antikorlarının bağlanması için birbirleriyle rekabet eder. Başka bir test, aradığınız antikorlardır.

ve etiketli antikorlar, antijenler için birbirleriyle rekabet eder.

Radyoimmünolojik yöntem veya analiz (RIA)

Bir radyonüklid (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr, vb.) ile işaretlenmiş antijenler veya antikorlar kullanan antijen-antikor reaksiyonuna dayalı oldukça hassas bir yöntem. Etkileşimlerinden sonra, ortaya çıkan radyoaktif bağışıklık kompleksi ayrılır ve radyoaktivitesi uygun sayaçta (beta veya gama radyasyonu) belirlenir:

radyasyon yoğunluğu bağlı antijen ve antikor moleküllerinin sayısı ile doğru orantılıdır.

-de RIA'nın katı faz versiyonu reaksiyon bileşenlerinden biri (antijen veya antikorlar), örneğin polistiren mikrodizilerin oyuklarında katı bir taşıyıcı üzerine adsorbe edilir. Yöntemin başka bir versiyonu ise rekabetçi RIA. hedef antijen ve radyonüklid işaretli antijen, sınırlı miktarda immün serum antikorunu bağlamak için birbirleriyle rekabet eder. Bu seçenek, test materyalindeki antijen miktarını belirlemek için kullanılır.

RIA, mikrobiyal antijenleri tespit etmek, hormonları, enzimleri belirlemek, tıbbi maddeler ve immünoglobulinler ve ayrıca test materyalinde küçük konsantrasyonlarda bulunan diğer maddeler - 10 ~ | 0 -I0 ~ 12 g / l. Yöntem belirli bir çevresel tehlike sunar.

immünoblotlama

İmmunoblotlama (IB)- elektroforez ve ELISA veya RIA kombinasyonuna dayanan oldukça hassas bir yöntem.

Antijen, poliakrilamid jel elektroforezi kullanılarak izole edilir, ardından transfer edilir (lekeleme - İngilizce'den. kirletmek, nokta) jelden aktive edilmiş kağıt veya nitroselüloz membran üzerine ve ELISA tarafından geliştirilmiştir. Firmalar bu tür şeritleri "lekeler" ile üretirler

antijenler. Bu şeritlere hastanın serumu uygulanır. Daha sonra inkübasyondan sonra hasta, hastanın bağlanmamış antikorlarından yıkanır ve insan immünoglobulinlerine karşı bir enzimle işaretlenmiş serum uygulanır. Strip üzerinde oluşan kompleks antijen + hastanın antikoru + insan Ig'sine karşı antikor, enzimin etkisi altında renk değiştiren bir substrat / kromojen eklenerek tespit edilir (Şekil 13.12).

IB, HIV enfeksiyonu vb. için bir teşhis yöntemi olarak kullanılır.

Aglütinasyon reaksiyonu Aglütinasyon reaksiyonu

(RA) - Ag ve Ab'nin çıplak gözle görülebilen aglomeralar oluşturma yeteneklerine dayalı olarak saptanması ve ölçülmesi için bir yöntem. Enfeksiyon kliniğinde. hastalıklarda veya başka amaçlarla, bilinmeyen mikrop ve hücrelerin saptanmasında, kan ve diğer sıvılarda antikor varlığının ve miktarının saptanmasında kullanılır. Belirleme ilkesi, Ag ve Am arasındaki etkileşimin özgüllüğüne dayanır ve bilineni bilinmeyenden bulmaya dayanır. RA'nın birçok çeşidi vardır: kantitatif ve kalitatif, in vitro ve cam üzerinde, hacimsel ve damlatma, geleneksel, hızlandırılmış ve hızlı yöntemler. RA'yı ayarlamak için şunlara ihtiyacınız vardır: 1) s-ka kan. Bakteri türlerinin (var) tanımına sahip varyantta, tavşanlara bağışıklık kazandırılarak üretilen endüstriyel aglütinasyon s-ki'leri kullanılır. Ab tipi tanımı olan varyantta ise araştırmadan elde edilen kan örneğini alıyorlar. insanlar veya hayvanlar. S-ka steril olmalı ve asılı partiküller içermemelidir. Ana seyreltmeyi salin içinde hazırlayın. Bu hastalık için teşhis titresinden 2-4 kat daha düşük olmalıdır; 2) Ag. Ab tipinin belirlenmesi ile reaksiyon varyantında, üretim teşhisi kullanılır; Ag tayini varyantında, teşhis maddeleri, 18-20 saatlik agarın (daha az sıklıkla et suyu) salin solüsyonunda 1-3 milyarda bir süspansiyon şeklinde hazırlanır. formalin (%0.2 nihai konsantrasyon) ile 37°C'de 24 saat inkübasyon veya 70°C'de bir su banyosunda 1 saat ısıtılarak inaktive edilen mikrop; 3) tuzlu elektrolit. ayar tekniği toplu seri tüp s-ke'de Ab titresini belirlemek için RA: s-ki'nin ana seyreltmesinden birkaç sıra çalışma seyreltisi hazırlanır. Sıra sayısı, deneyde alınan teşhis sayısına bağlıdır, sayı ve seyreltme faktörleri, şüphelenilen hastalığın teşhis titresine göre belirlenir. Satır, tanısal Ab titresine karşılık gelen en az bir dilüsyon, bunun altında iki dilüsyon ve bunun üstünde iki dilüsyon içermelidir. örneğin, teşhis titresi 1:100 ise, RA'yı ayarlamak için hacimsel yöntemle aşağıdaki s-ki dilüsyonları hazırlanmalıdır: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; damlama yöntemiyle ilk seyreltme (1:25) gerekli değildir, ancak daha yüksek bir seyreltme daha gereklidir - 1:800. bilimsel araştırma with-ku negatif bir reaksiyona titre edildi. Şu şekilde seyreltilir: 1. hariç tüm deney tüplerine, reaksiyon 0.5 ml'lik bir hacimde kurulurken 0.25 ml ve 1 ml'lik bir hacimde reaksiyon kurulurken 0.5 ml salin dökün. 0,25 (0,5) ml s-ki ana dilüsyonunu 1. ve 2. test tüplerine, 2. test tüpünden bir kesme hacmine dökün ve ile üreme ve 2 kat artırılarak 0,25 (0,5) ml 3'e, 3'ten 4'e vb. aktarılır. son olarak, hacimleri dengelemek için her şeye bir kesimden 0,25 (0,5) ml dökülür. Her seyreltme-ki ile ayrı bir pipet kullanılarak gerçekleştirildi. Deneye birkaç teşhis alınırsa, her biri için aynı şekilde bir seyreltme serisi hazırlanır. Her s-ki seyreltmesine s-ki hacmine eşit bir hacimde teşhis eklenir, bunun sonucunda her test tüpündeki seyreltme 2 kat artar. Deneyim, s-ki kontrolüne (0.25 - 0.5 ml s-ki ana dilüsyonu ve aynı miktarda salin) ve AG kontrolüne (0.25 - 0.5 ml teşhis ve aynı miktarda salin) karşılık gelir. Deneye birkaç teşhis alınırsa, her birinin kendi kontrolü Ag vardır. Test tüplerinin bulunduğu raf iyice çalkalanır ve 37°C'deki termostatta 4 saat bekletilir ve daha sonra oda sıcaklığında ertesi gün, bundan sonra RA, tortu miktarına ve sıvının berraklaşma derecesine göre hesaplanır. Bu göstergelerin belirlenmesi, aglütinatların doğasına bağlı olarak, karanlık bir arka plan üzerinde çıplak gözle, bir aglütinoskopta veya bir mikroskop aynasının içbükey yüzeyi üzerinde gerçekleştirilir. Hesaplama kontrollerle başlar: kontrol şeffaf olmalı, Ag (tüpü çalkaladıktan sonra) homojen bir şekilde bulanık olmalıdır. Kontroller iyiyse, tüm deneysel test tüplerinde artılarla gösterilen aglütinasyonun varlığı ve derecesi belirlenir: büyük tortu ve sıvının tamamen berraklaşması - 4 artı; büyük tortu ve sıvının eksik aydınlanması -3 artı; gözle görülür bir tortu ve sıvının gözle görülür bir şekilde aydınlanması - 2 artı. Bundan sonra titre belirlenir: en az 2 artı aglütinasyon yoğunluğu ile en yüksek seyreltme. Sınav titresi s-ki, bu hastalık için bir teşhis titresi ile karşılaştırılır. Çalışmanın titresi ise s-ki tanısal değerden 2 kat daha düşüktür, reaksiyon şüpheli olarak değerlendirilir; titre teşhise eşitse - zayıf pozitif olarak; 2-4 kat daha yüksekse - pozitif, 8 kat veya daha fazla ise - keskin bir şekilde pozitif. Sağlıklı insanlarda geniş bir Ab dağılımı ile, RA'yı değerlendirmek için Ab titresindeki bir artış kullanılır. Seri RA'daki Ag tipini belirlemek için, satır sayısı tanımlama için alınan numaraya karşılık gelmelidir. teşhis s-to. Diagnostik s-ki'nin ana dilüsyonundan, At titresini belirlemek için RA'daki ile aynı şekilde bir dizi ardışık iki katlı dilüsyon hazırlanır. Seyreltme faktörleri aglütinasyon yapan s'nin titresine bağlıdır.Deneyde s'nin titresine eşit bir dilüsyonun varlığı dilüsyonlar 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Aynı araştırma hacmi Ag s-ki seyreltmelerine eklenir sonuç olarak s-to seyrelmesi 2 kat artar birkaç s-to karışır sonra her birinin kendi kontrolüne ihtiyacı vardır Reaksiyonun tamamlanmasından sonra tripod kuvvetlice çalkalanır ve 37°C'deki termostata yerleştirilir. Sonuçlar yukarıda anlatıldığı gibi dikkate alınır. -ke ile yapılan deneyde alınan Ag, reaksiyonun titresi standart teşhis testinin titresinin en az yarısına karşılık gelmelidir 1 4 ve altındaki titreler bir grup reaksiyonu olarak kabul edilir damla damla RA ayarı, s-ku'nun 1 ml'lik bir hacimde seyreltilmesi, Ag'nin daha yüksek bir konsantrasyonda (10 milyar / ml) kullanılması ve 1 eklenmesiyle hacimselden farklıdır. - 2 test tüpündeki damlalar Ag eklendikten sonra s-ki'nin seyreltilmesi değişmemiş olarak kabul edilir.Aksi takdirde, ayarlama, kaydetme ve değerlendirme yöntemi hacimsel yönteme benzer

(Kaynak: Mikrobiyoloji Terimleri Sözlüğü)

Aglütinasyon reaksiyonu (lat. aglütinasyon- bağlanma) - elektrolitlerin mevcudiyetinde korpüsküllerin (bakteri, eritrositler, vb.) antikorlarla bağlanması.

Aglütinasyon reaksiyonu antikorlar tarafından "birbirine yapıştırılmış" korpuslardan (örneğin bakteriler) oluşan pul veya tortu şeklinde kendini gösterir (Şekil 7.37). Aglütinasyon reaksiyonu şunlar için kullanılır: hastadan izole edilen patojeni belirlemek; hastanın kan serumundaki antikorların belirlenmesi; kan gruplarının belirlenmesi.

Pirinç. 7.37 bir, b. ile aglütinasyon reaksiyonuIgM-antikorlar (a) veIgG-antikorlar (b)

1. Hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi Cam üzerinde yaklaşık aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.38). Hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu, bir damla aglütinasyon serumuna eklenir (seyreltme 1:20). Bir pul pul çökelti oluşur.

Pirinç. 7.38.

Bir hastadan izole edilen bir patojen ile uzun süreli aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Aglütine edici serumun dilüsyonlarına hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu eklenir.

Pirinç. 52

2. Hastanın kan serumundaki antikorların belirlenmesi
Hastanın kan serumu ile uzun süreli aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Diagnosticum hastanın serumunun dilüsyonlarına eklenir.
- O-diagnosticum ile aglütinasyon (ısıtılarak öldürülen, 0-antijeni tutan bakteri) ince taneli aglütinasyon şeklinde gerçekleşir.
- H-diagnosticum ile aglütinasyon (formalin tarafından öldürülen, kamçılı H-antijeni tutan bakteri) kaba tanelidir ve daha hızlı ilerler.
3. Kan gruplarını belirlemek için aglütinasyon testi Kan gruplarını belirlemek için aglütinasyon reaksiyonu, eritrositleri A (I), B (III) kan gruplarının antijenlerine karşı immün serum antikorları ile aglütine ederek ABO sistemini (Tablo b) oluşturmak için kullanılır. Kontroller şunlardır: antikor içermeyen serum, örn. serum AB (IV) kan grupları; A (II), B (III) gruplarının eritrositlerinde bulunan antijenler. Negatif kontrol antijen içermez, yani O (I) grubu eritrositler kullanılır.

Tablo 7.6. ABO kan gruplarının belirlenmesi

1.1. AGLUTİNASYON REAKSİYONU (RA)

AGLUTİNASYON REAKSİYONU (RA)

Spesifikliği, yerleşme kolaylığı ve gösterilebilirliği nedeniyle aglütinasyon reaksiyonu, birçok bulaşıcı hastalığın teşhisi için mikrobiyolojik uygulamada yaygınlaşmıştır.

Aglütinasyon reaksiyonu, antikorların (aglütininler) tüm mikrobiyal veya diğer hücrelerle (aglutinojenler) etkileşiminin özgüllüğüne dayanır. Bu etkileşimin bir sonucu olarak, parçacıklar oluşur - pul şeklinde çökelen (aglütine olan) aglomeralar.

Hem canlı hem de ölü bakteriler, spiroketler, mantarlar, protozoa, riketsiya, ayrıca eritrositler ve diğer hücreler aglütinasyon reaksiyonuna katılabilir. Reaksiyon iki aşamada ilerler: birinci (görünmez) spesifik, antijen ve antikorların bağlanması, ikinci (görünür) spesifik olmayan, antijenlerin bağlanması, yani. aglütine oluşumu.

Aglütinat, biri olduğunda oluşur aktif merkez belirleyici bir antijen grubuna sahip iki değerlikli bir antikor. Aglütinasyon reaksiyonu, herhangi bir serolojik reaksiyon gibi, elektrolitlerin varlığında ilerler.

Harici olarak, pozitif bir aglütinasyon reaksiyonunun tezahürü iki yönlüdür. Yalnızca somatik bir O antijenine sahip kamçılı olmayan mikroplarda, mikrobiyal hücrelerin kendileri doğrudan birbirine yapışır. Bu tür aglütinasyona ince taneli denir. 18 22 saat içinde gerçekleşir. v

Kamçılı mikroplarda somatik O antijeni ve kamçılı H antijeni olmak üzere iki antijen bulunur. Hücreler flagella ile birbirine yapışırsa, büyük gevşek pullar oluşur ve böyle bir aglütinasyon reaksiyonuna iri taneli denir. 2 4 saatte gelir.

Aglütinasyon reaksiyonu, hem hastanın kan serumundaki spesifik antikorların niteliksel ve niceliksel olarak belirlenmesi amacıyla hem de izole edilen patojenin türünün belirlenmesi amacıyla ayarlanabilir. v

Aglütinasyon reaksiyonu, hem bir teşhis titresine seyreltilmiş serumla çalışmaya izin veren ayrıntılı bir versiyonda hem de prensip olarak spesifik antikorları tespit etmeye veya türlerini belirlemeye izin veren bir gösterge reaksiyonu kurma varyantında ayarlanabilir. patojen.

Ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu kurulurken, deneğin kan serumundaki spesifik antikorları tespit etmek için test serumu 1:50 veya 1:100 dilüsyonda alınır. Bunun nedeni, tam veya hafif seyreltilmiş serumda normal antikorların çok yüksek konsantrasyonlarda bulunabilmesi ve ardından reaksiyon sonuçlarının hatalı olabilmesidir. Reaksiyonun bu varyantındaki test materyali, hastanın kanıdır.

Kan aç karnına veya yemekten en geç 6 saat sonra alınır (aksi takdirde kan serumunda yağ damlacıkları olabilir, bu da onu bulanık ve araştırma için uygun hale getirmez). Hastanın kan serumu genellikle hastalığın ikinci haftasında elde edilir ve kübital venden 3 4 ml kan steril olarak toplanır (bu zamana kadar maksimum spesifik antikor miktarı konsantre edilir). Belirli bir antijenik yapıya sahip belirli bir türün öldürülmüş ancak yok edilmemiş mikrobiyal hücrelerinden hazırlanan bir teşhis, bilinen bir antijen olarak kullanılır.

Patojenin türünü, türünü belirlemek için ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu kurarken, antijen, test materyalinden izole edilen canlı bir patojendir. Bağışıklık teşhis serumunda bulunan antikorlar bilinmektedir. v

Bağışıklık teşhis serumu, aşılanmış bir tavşanın kanından elde edilir. Titreyi (antikorların tespit edildiği maksimum seyreltme) belirledikten sonra, teşhis serumu bir koruyucu ilavesiyle ampullere dökülür. Bu serum, izole edilen patojenin antijenik yapısı ile tanımlama için kullanılır.

AGLÜTİNASYON REAKSİYONU SEÇENEKLERİ

Parçacık şeklindeki antijenler (mikrobiyal hücreler, eritrositler ve diğer korpüsküler antijenler) bu reaksiyonlarda yer alır ve antikorlarla birbirine yapışarak çökelir.

Bir aglütinasyon reaksiyonu (RA) oluşturmak için üç bileşen gereklidir: 1) bir antijen (aglütinojen); 2) antikor (aglutinin) ve 3) elektrolit (izotonik sodyum klorür çözeltisi).

GÖSTERGE (PLAK) AGLÜTİNASYON REAKSİYONU (RA)

Yaklaşık veya katmanlı RA, oda sıcaklığında bir cam slayt üzerine yerleştirilir. Bunu yapmak için, 1:10 1:20 oranında seyreltilmiş bir serum damlası ve bir kontrol damlası izotonik sodyum klorür çözeltisi, bir Pasteur pipeti ile bardağa ayrı ayrı uygulanır. Koloniler veya günlük bir bakteri kültürü (bir damla teşhis) her iki bakteriyolojik döngüye eklenir ve iyice karıştırılır. Tepkiler birkaç dakika içinde görsel olarak, bazen bir büyüteçle (x5) dikkate alınır. Serum damlasında pozitif RA ile, büyük ve küçük pulların görünümü not edilir, negatif ile serum eşit şekilde bulanık kalır.

DOLAYLI (PASİF) HEMAGLUTİNASYON REAKSİYONU (RNHA, RPHA)

Reaksiyon şu şekilde ayarlanmıştır: 1) polisakkaritleri, proteinleri, bakteri özlerini ve aglütininlerle kompleksleri sıradan RA'da görülemeyen diğer yüksek oranda dağılmış maddeleri, riketsiyaları ve virüsleri saptamak için veya 2) hastaların serumlarında bunlara karşı antikorları saptamak için yüksek oranda dağılmış maddeler ve en küçük mikroorganizmalar.

Dolaylı veya pasif aglütinasyon altında, antikorların daha önce inert partiküller (lateks, selüloz, polistiren, baryum oksit, vb. veya ram eritrositler, I (0) insan kan grupları) üzerinde adsorbe edilmiş antijenlerle etkileşime girdiği bir reaksiyon anlaşılır.

Pasif hemaglütinasyon reaksiyonunda (RPHA), eritrositler taşıyıcı olarak kullanılır. Antijen yüklü eritrositler, bu antijene spesifik antikorların varlığında birbirine yapışır ve çökelir. Antijene duyarlı eritrositler, RPHA'da antikorların saptanması (serodiagnosis) için bir eritrosit tanılama aracı olarak kullanılır. Eritrositler antikorlarla (eritrosit antikor diagnostikum) yüklüyse, antijenleri saptamak için kullanılabilir.

sahneleme. Polistiren tabletlerin haznelerinde bir dizi seri serum seyreltisi hazırlanır. Sondan bir önceki kuyuya 0,5 ml bilinen pozitif serum eklenir ve son kuyuya 0,5 ml salin solüsyonu (kontroller) eklenir. Daha sonra tüm kuyucuklara 0,1 ml seyreltilmiş eritrosit diagnostik eklenir, çalkalanır ve 2 saat termostata konur.

Muhasebe. Olumlu bir durumda, eritrositler, katlanmış veya pürüzlü kenarlı (ters bir şemsiye) düz bir hücre tabakası şeklinde deliğin dibine yerleşirler, olumsuz bir durumda, bir düğme veya halka şeklinde yerleşirler. .

1.2. NÖTRLEŞTİRME REAKSİYONU. LİZİS,
OPSONOFAGOSİTİK REAKSİYON, AŞIRI DUYARLILIK REAKSİYONU

ANTİTOKSİN (RN) İLE EKZOTOKSİN NÖTRALİZASYON REAKSİYONU

Reaksiyon, antitoksik serumun ekzotoksin etkisini nötralize etme kabiliyetine dayanır. Antitoksik serumların titrasyonu ve ekzotoksin tayini için kullanılır.

Serum titre edildiğinde, farklı antitoksik serum dilüsyonlarına karşılık gelen toksinin belirli bir dozu eklenir. Antijenin tamamen nötralizasyonu ve kullanılmayan antikorların yokluğu ile ilk flokülasyon meydana gelir. Flokülasyon reaksiyonu sadece serum titrasyonu (örneğin difteri) için değil, aynı zamanda toksin ve toksoid titrasyonu için de kullanılabilir. Toksinin antitoksin ile nötralizasyon reaksiyonu büyük bir etkiye sahiptir. pratik değer antitoksik terapötik serumların aktivitesini belirlemek için bir yöntem olarak. Bu reaksiyondaki antijen gerçek bir ekzotoksindir.

Antitoksik serumun gücü, geleneksel AE birimleri tarafından belirlenir.

1 AU botulinum serumu miktarı 1000 DLM botulinum toksini nötralize eder. Ekzotoksin türünü veya türünü belirlemek için nötralizasyon reaksiyonu (tetanoz, botulizm, difteri vb. Tanısında) in vitro (Ramon'a göre) ve mikrobiyal hücrelerin toksijenitesini belirlerken - jelde gerçekleştirilebilir ( Ouchterlony'ye göre).

Lizis reaksiyonu (RL)

Bağışıklık serumunun koruyucu özelliklerinden biri de vücuda giren mikropları veya hücresel elementleri çözmesidir.

Hücrelerin çözünmesine (lizisine) neden olan spesifik antikorlara lizinler denir. Antijenin doğasına bağlı olarak bakteriyolizinler, sitolizinler, spiroketolizinler, hemolizinler vb. olabilirler.

Lizinler etkilerini yalnızca ek bir faktör - tamamlayıcı varlığında gösterirler. Spesifik olmayan bir faktör olarak tamamlayıcı hümoral bağışıklık hariç hemen hemen tüm vücut sıvılarında bulunur. Beyin omurilik sıvısı ve ön kamara sıvısı. İnsan kan serumunda oldukça yüksek ve sabit bir kompleman içeriği ve kan serumunda bunun büyük bir kısmı belirtilmiştir. Gine domuzu. Diğer memelilerde kan serumundaki kompleman içeriği farklıdır.

Tamamlayıcı karmaşık bir sistemdir peynir altı suyu proteinleri. Dengesizdir ve 55 derecede 30 dakika boyunca çöker. Oda sıcaklığında kompleman iki saat içinde yok olur. Uzun süreli çalkalamaya, asitlerin ve ultraviyole ışınların etkisine karşı çok hassastır. Bununla birlikte, tamamlayıcı, düşük bir sıcaklıkta kurutulmuş halde uzun süre (altı aya kadar) saklanır. Tamamlayıcı, mikrobiyal hücrelerin ve eritrositlerin parçalanmasını teşvik eder.

Bakteriyoliz ve hemoliz reaksiyonlarını ayırt eder.

Bakteriyoliz reaksiyonunun özü, spesifik bir bağışıklık serumu, tamamlayıcı varlığında karşılık gelen homolog canlı mikrobiyal hücrelerle birleştirildiğinde, mikropların parçalanmasıdır.

Hemoliz reaksiyonu, eritrositler, tamamlayıcı mevcudiyetinde spesifik, kendilerine karşı bağışık bir seruma (hemolitik) maruz kaldığında, eritrositlerin çözünmesi, yani. hemoliz.

Laboratuvar pratiğinde hemoliz reaksiyonu, kompleman lastiğini belirlemek ve ayrıca tanısal kompleman fiksasyon testlerinin sonuçlarını dikkate almak için kullanılır. Komplement titresi, 2,5 ml'lik bir hacimde hemolitik bir sistemde 30 dakika içinde kırmızı kan hücrelerinin parçalanmasına neden olan en küçük miktardır. Tüm serolojik reaksiyonlar gibi lizis reaksiyonu da bir elektrolit varlığında gerçekleşir.

AŞIRI DUYARLILIK (ALLERJİK) REAKSİYONLARI

Belirli antijen formları, vücutla tekrarlanan temas üzerine, temelde spesifik olan ancak akut bir inflamatuar yanıtın spesifik olmayan hücresel ve moleküler faktörlerini içeren bir reaksiyona neden olabilir. İki tür hiperreaktivite bilinmektedir: aşırı duyarlılık acil tip(GHT) ve gecikmeli tip aşırı duyarlılık (DTH). Birinci tip reaksiyon, antikorların katılımıyla kendini gösterirken, reaksiyon, alerjenle tekrarlanan temastan en geç 2 saat sonra gelişir. İkinci tip ise makrofajların inflamasyon bölgesinde birikmesini sağlayan reaksiyonun ana efektörleri olan inflamatuar T hücreleri (Tr3) yardımıyla gerçekleştirilir, reaksiyon 6-8 saat ve sonrasında kendini gösterir.

Bir aşırı duyarlılık reaksiyonunun gelişmesinden önce, bir antijenle karşılaşma ve duyarlılık oluşumu, yani. aktif olarak duyarlılaştırılmış lenfositler ve diğer lökositlerin (makrofajlar, granülositler) sitofilik antikorları tarafından pasif olarak duyarlılaştırılmış antikorların görünümü.

Aşırı duyarlılık reaksiyonlarının üç gelişim aşaması vardır: immünolojik; patokimyasal; patofizyolojik.

İlk spesifik fazda, alerjen, antikorlar ve/veya duyarlılaştırılmış hücreler ile etkileşime girer. İkinci aşamada, biyolojik olarak bir salınım vardır. aktif maddeler aktif hücrelerden Serbest bırakılan aracılar (histamin, serotonin, lökotrienler, bradikinin, vb.), karşılık gelen reaksiyon tipinin - üçüncü aşama - karakteristiği olan çeşitli periferik etkilere neden olur.

Dördüncü tip aşırı duyarlılık reaksiyonları

Bu tip reaksiyonlara, vücudun bağışıklık sisteminde göreceli bir yetersizlik bulunan bakteriyel antijenler tarafından bağışıklık sisteminin uzun süreli uyarılmasının neden olduğu, duyarlı hale getirilmiş Thelper'lerin, sitotoksik Tlenfositlerin (Tkillers) ve mononükleer fagosit sisteminin aktive edilmiş hücrelerinin patojenik hücreler arası etkileşimleri neden olur. iç ortamdan uzaklaştırmak için sistem bakteriyel patojenler bulaşıcı hastalıklar. Bu aşırı duyarlılık reaksiyonları, tüberkülozlu hastalarda tüberküloz akciğer boşluklarına, kazeöz nekrozlarına ve genel zehirlenmeye neden olur. Morfopatogenetik açıdan tüberküloz ve cüzzamdaki deri granülomatozu, büyük ölçüde dördüncü tip aşırı duyarlılık reaksiyonlarından oluşur.

Tip 4 aşırı duyarlılık reaksiyonunun en ünlü örneği, vücudu ve sistemi mikobakteriyel antijenlere duyarlı hale gelmiş bir hastaya intradermal tüberkülin uygulama bölgesinde gelişen Mantoux reaksiyonudur. Reaksiyonun bir sonucu olarak, tüberkülinin intradermal uygulamasından sadece birkaç saat sonra (yavaşça) ortaya çıkan, merkezinde nekrozu olan yoğun bir hiperemik papül oluşur. Papül oluşumu, çıkış ile başlar. Vasküler yatak dolaşımdaki kanın mononükleer fagositlerinin hücreler arası boşluklarına. Eşzamanlı olarak, polimorfonükleer hücrelerin damar yatağından göçü başlar. Daha sonra nötrofil infiltrasyonu azalır ve infiltrat ağırlıklı olarak lenfositler ve mononükleer fagositlerden oluşmaya başlar. Bu, lezyon bölgesinde ağırlıklı olarak polimorfonükleer lökositlerin biriktiği Mantoux reaksiyonu ile Arthus reaksiyonu arasındaki farktır.

Dördüncü tip aşırı duyarlılık reaksiyonlarında, duyarlılaştırılmış lenfositlerin antijenlerle uzun süreli uyarılması, patolojik değişiklikler Thelpers tarafından patolojik olarak yoğun ve uzun süreli sitokin salınımına neden olur. Doku hasarı lokuslarında yoğun bir sitokin salınımı, orada bulunan mononükleer fagositler sisteminin hücrelerinin hiperaktivasyonuna neden olur; bunların çoğu hiperaktif durumda epiteloid hücre şeritleri oluşturur ve bazıları dev hücreler oluşturmak için birbirleriyle birleşir. Yüzeyinde bakteriyel ve viral antijenlerin açığa çıktığı makrofajlar, Tkiller'lerin (doğal öldürücüler) işleyişiyle yok edilebilir.

Dördüncü tip aşırı duyarlılık reaksiyonu, yabancı bir bakteriyel antijenin ona karşı duyarlı hale gelen T-yardımcıları tarafından tanınmasıyla indüklenir. Tanıma için gerekli bir koşul, indükleyicilerin endositozdan sonra antijen sunan hücrelerin yüzeyinde açığa çıkan antijenlerle etkileşimi ve yabancı immünojenlerin mononükleer fagositler tarafından işlenmesidir. Bir diğeri gerekli kondisyon ana doku uyumluluk kompleksinden sınıf I moleküllerle kombinasyon halinde antijenlerin maruz kalması. Antijen tanınmasından sonra, duyarlı hale getirilmiş yardımcılar, sitokinleri ve özellikle doğal öldürücüleri ve mononükleer fagositleri aktive eden interlökin2'yi serbest bırakır. Aktif mononükleer fagositler, dokulara zarar veren proteolitik enzimler ve serbest oksijen radikallerini serbest bırakır.

Skinallerjik testler vücudun alerjenlere karşı duyarlılığını belirlemek, enfeksiyonunu belirlemek için testler, örneğin tüberküloz, bruselloz, seviye sürü bağışıklığı tularemi gibi. Alerjenin giriş yerine göre: 1) cilt testleri; 2) kazıma; 3) intradermal; 4) deri altı. Deri alerjik testinde bir alerjene klinik reaksiyon, lokal, genel ve fokal, ayrıca ani ve gecikmeli olarak ayrılır.

Aracı tip HIT'in lokal reaksiyonları 5-20 dakika sonra ortaya çıkar, eritem ve kabarcık olarak ifade edilir, birkaç saat sonra kaybolur, artı yöntemiyle eritem miktarı mm olarak ölçülür. HRT'nin lokal reaksiyonları 24-48 saat sonra ortaya çıkar, uzun sürer, bir infiltrat olarak, bazen merkezde nekrozla birlikte ortaya çıkar ve infiltratın mm cinsinden boyutu ve yine artı sistem tarafından değerlendirilir. GNT'nin sitotoksik ve immünkompleks tiplerinde hiperemi ve infiltrasyon 3-4 saat sonra gözlenir, 6-8 saatte maksimuma ulaşır ve yaklaşık bir gün sonra azalır. Bazen kombine reaksiyonlar gözlenir.

1.3. TAMAMLAYICI BAĞLAMA REAKSİYONU (CFR)

Bu reaksiyon için kullanılır laboratuvar araştırmasıçeşitli enfeksiyonlarda kan serumundaki antikorların tespiti ve ayrıca antijenik yapı ile patojenin tanımlanması için.

Kompleman fiksasyon testi, karmaşık bir serolojik testtir ve yüksek duyarlılık ve özgüllük ile karakterize edilir.

Bu reaksiyonun bir özelliği, spesifik antikorlarla etkileşimi sırasında antijendeki değişikliğin yalnızca kompleman varlığında meydana gelmesidir. Tamamlayıcı, yalnızca antikor-antijen kompleksi üzerinde adsorbe edilir. Bir antikor-antijen kompleksi, yalnızca antijen ile serumda bulunan antikor arasında bir afinite varsa oluşur.

"Antijen antikor" kompleksi üzerindeki kompleman adsorpsiyonu, özelliklerine bağlı olarak antijenin kaderini farklı şekillerde etkileyebilir.

Bazı antijenler bu koşullar altında keskin bir reaksiyona maruz kalır. morfolojik değişiklikler, çözünmeye kadar (hemoliz, Isaev Pfeifer fenomeni, sitolitik etki). Diğerleri hareket hızını değiştirir (treponema hareketsizleştirme). Yine de diğerleri keskin olmadan ölür yıkıcı değişiklikler(bakterisidal veya sitotoksik etki). Son olarak, kompleman adsorpsiyonuna, antijende kolayca gözlemlenebilen değişiklikler eşlik etmeyebilir.

Mekanizmaya göre, RSC iki aşamada ilerler:

1. Birinci aşama, “antijen antikor” kompleksinin oluşumu ve bu kompleman kompleksi üzerine adsorpsiyondur. Fazın sonucu görsel olarak görünmez (komplementin zorunlu katılımı ile antijen ve antikorların etkileşimi).
2. İkinci aşama, kompleman varlığında spesifik antikorların etkisi altında antijende bir değişikliktir. Fazın sonucu görsel olarak görülebilir veya görülmeyebilir (reaksiyon sonuçlarının bir gösterge hemolitik sistem (koyun eritrositleri ve hemolitik serum) kullanılarak saptanması).

Eritrositlerin hemolitik serum tarafından yok edilmesi, yalnızca hemolitik sisteme kompleman bağlanması durumunda meydana gelir. Tamamlayıcı, antijen-antikor kompleksi üzerinde daha önce adsorbe edilmişse, eritrositlerin hemolizi gerçekleşmez.

Deneyin sonucu, tüm test tüplerinde hemoliz olup olmadığına dikkat edilerek değerlendirilir. Reaksiyon, test tüpündeki sıvı renksiz olduğunda ve eritrositler dibe çöktüğünde, hemolizde tam bir gecikme ile pozitif olarak kabul edilir, sıvı yoğun bir şekilde renkli olduğunda ("lak" kan) eritrositlerin tamamen parçalanması ile negatif olarak kabul edilir. Hemoliz gecikme derecesi, sıvının renk yoğunluğuna ve dipteki eritrosit sediment miktarına (++++, +++, ++, +) bağlı olarak tahmin edilir.

Antijendeki değişikliklerin görsel gözlem için erişilemez durumda kalması durumunda, tamamlayıcının durumunu değerlendirmenize ve reaksiyonun sonucu hakkında bir sonuç çıkarmanıza izin veren bir gösterge görevi gören ikinci bir sistem kullanmak gerekir.

Bu gösterge sistemi, koyun eritrositlerini ve eritrositlere spesifik antikorlar (hemolizinler) içeren, ancak tamamlayıcı içermeyen hemolitik serumu içeren hemoliz reaksiyonunun bileşenleri ile temsil edilir. Bu gösterge sistemi, ana CSC ayarlandıktan bir saat sonra test tüplerine eklenir. Kompleman fiksasyon reaksiyonu pozitif ise, komplemanı kendi üzerine adsorbe eden bir antikor-antijen kompleksi oluşur. Kompleman sadece bir reaksiyon için gerekli miktarda kullanıldığından ve eritrosit lizisi sadece kompleman varlığında gerçekleşebildiğinden, “antijen antikor” kompleksi üzerine adsorbe edildiğinde hemolitik (gösterge) sistemde eritrosit lizisi oluşmayacaktır. . Kompleman fiksasyon reaksiyonu negatif ise “antijen antikor” kompleksi oluşmaz, kompleman serbest kalır ve hemolitik sistem eklendiğinde eritrosit lizisi meydana gelir.

1.4. DNASONDALARI. POLİMERAZ ZİNCİR REAKSİYONU (PCR),
ENZİM BAĞIŞIKLIK YÖNTEMİ (ELISA), FLORESAN ANTİKOR YÖNTEMİ (MFA)

GEN ARAŞTIRMA YÖNTEMLERİ

Moleküler biyolojinin yoğun gelişimi ve genetik araştırma için mükemmel bir metodolojik temelin oluşturulması temel oluşturdu. genetik mühendisliği. Teşhis alanında, DNA ve RNA'nın spesifik nükleotit dizilerini belirlemek için gen araştırması olarak adlandırılan bir yön ortaya çıktı ve hızla gelişiyor. Bu tür yöntemler, tamamlayıcı nükleotitlerin (AT, GC) etkileşimi nedeniyle nükleik asitlerin çift sarmallı yapılar oluşturmak üzere hibritleşme yeteneğine dayanır.

İstenen DNA (veya RNA) dizisini belirlemek için, özel olarak belirli bir baz dizisine sahip bir polinükleotit probu oluşturulur. Bileşimine, kompleksin oluşumunu tanımlamayı mümkün kılan özel bir etiket eklenmiştir.

Gen araştırması, immünokimyasal analiz yöntemlerine atfedilemezse de, ana ilkesi (tamamlayıcı yapıların etkileşimi), immünodiagnostik gösterge yöntemleriyle aynı yöntemlerle metodik olarak uygulanır. Ek olarak, gen araştırma yöntemleri, fenotipik ifadesinin yokluğunda (genomda yerleşik virüsler, "sessiz" genler) enfeksiyöz bir ajan hakkındaki bilgilerin doldurulmasını mümkün kılar.

DNA analizi için numune, DNA veya RNAprob moleküllerinin reaksiyona girdiği tek sarmallı yapılar elde etmek için denatürasyona tabi tutulur. Problar kullanılarak hazırlanır çeşitli bölümler Doğal bir kaynaktan (örneğin, bir veya başka bir mikroorganizma) izole edilen DNA (veya RNA), genellikle vektör plazmitlerinin veya kimyasal olarak sentezlenmiş oligonükleotitlerin bir parçası olarak genetik diziler olarak sunulur. Bazı durumlarda, fragmanlar halinde hidrolize edilmiş genomik DNA preparasyonları, bazen RNA preparasyonları, özellikle sıklıkla ribozomal RNA bir prob olarak kullanılır. Aynı göstergeler etiket olarak kullanılır. çeşitli tipler immünokimyasal analiz: radyoaktif izotoplar, floreseinler, biyotop (avidinenzim kompleksi tarafından daha fazla tezahür ile), vb.

Analizin sırası, mevcut probun özelliklerine göre belirlenir.

Şu anda, gerekli tüm bileşenleri içeren ticari kitler giderek daha fazla kullanılmaktadır.

Çoğu durumda, analiz prosedürü aşağıdaki aşamalara ayrılabilir: numune hazırlama (DNA ekstraksiyonu ve denatürasyonu dahil), numunenin bir taşıyıcı üzerinde sabitlenmesi (çoğunlukla bir polimer membran filtre), ön hibridizasyon, hibridizasyonun kendisi, bağlanmamış ürünlerin yıkanması, tespit etme. Olmadan standart ilaç DNA veya RNAprobe önceden elde edilir ve etiketlenir.

Numune hazırlama için, tek tek bakteri kolonilerini tanımlamak veya içindeki virüs konsantrasyonunu artırmak için test materyalini "büyütmek" gerekebilir. hücre kültürü. Kan serumu, idrar örneklerinin doğrudan analizi, şekilli elemanlar kan veya tüm kan bulaşıcı bir ajanın varlığı için. Hücre yapılarının bileşiminden nükleik asitleri serbest bırakmak için hücreler parçalanır ve bazı durumlarda DNA preparasyonu fenol kullanılarak saflaştırılır.

DNA'nın denatürasyonu, yani tek sarmallı bir forma geçişi, alkali ile muamele sırasında meydana gelir. Nükleik asit numunesi daha sonra, genellikle 80°C'de vakum altında 10 dakika ila 4 saat süreyle inkübasyon yoluyla bir nitroselüloz veya naylon membran taşıyıcı üzerine sabitlenir. Ayrıca, ön hibridizasyon sürecinde, probun zar ile spesifik olmayan etkileşimini azaltmak için serbest bağlanma bölgelerinin etkisizleştirilmesi sağlanır. Hibridizasyon işlemi, numunedeki DNA konsantrasyonuna, kullanılan probun konsantrasyonuna ve boyutuna bağlı olarak 2 ila 20 saat sürer.

Hibridizasyon tamamlandıktan ve bağlanmamış ürünler yıkandıktan sonra ortaya çıkan kompleks saptanır. Prob bir radyoaktif etiket içeriyorsa, membran, reaksiyonu (otoradyografi) göstermek için fotoğraf filmine maruz bırakılır. Diğer etiketler için uygun prosedürleri kullanın.

En umut verici olanı, radyoaktif olmayan (soğuk denilen) probların üretilmesidir. Aynı temelde, özellikle patomorfolojik analizde (in situ hibridizasyon) önemli olan bölümlerin hazırlanmasında, doku delinmelerinde bir patojenin varlığının tespit edilmesini mümkün kılan bir hibridizasyon tekniği geliştirilmektedir.

Gen araştırma yöntemlerinin geliştirilmesinde önemli bir adım, polimeraz amplifikasyon reaksiyonunun (PCR) kullanılmasıydı. Bu yaklaşım, bir numunedeki belirli (önceden bilinen) bir DNA dizisinin konsantrasyonunu, birden çok kopyayı in vitro sentezleyerek artırmayı mümkün kılar. Reaksiyonu gerçekleştirmek için, bir DNA polimeraz enzim preparasyonu, sentez için fazla miktarda deoksinükleotit ve sözde primerler, ilgili DNA dizisinin terminal bölümlerine karşılık gelen 20-25 bazlı iki tip oligonükleotit eklenir. İncelenen DNA örneği. Primerlerden biri, 53 okuma yönünde kodlayan DNA sarmalının okuma bölgesinin başlangıcının bir kopyası, ikincisi ise kodlamayan sarmalın karşı ucunun bir kopyası olmalıdır. Daha sonra, polimeraz reaksiyonunun her döngüsünde, DNA kopyalarının sayısı iki katına çıkar.

Primerlerin bağlanması için 94°C'de DNA denatürasyonu (erime) ve ardından karışımın 4055°C'ye getirilmesi gerekir.

Reaksiyonu gerçekleştirmek için programlanabilir mikro numune inkübatörleri, reaksiyonun her aşaması için optimum olan sıcaklık değişikliklerini kolayca değiştirecek şekilde tasarlandı.

Amplifikasyon reaksiyonu, enfeksiyöz ajanın düşük konsantrasyonlarında özellikle önemli olan gen araştırması sırasında analizin hassasiyetini önemli ölçüde artırabilir.

Amplifikasyonlu gen araştırmasının önemli avantajlarından biri, mikroskobik bir miktardaki patolojik materyali inceleme olasılığıdır.

Yöntemin enfeksiyöz materyalin analizi için daha önemli olan bir diğer özelliği de gizli (sessiz) genleri tespit edebilmesidir. Gen araştırmasının kullanımına ilişkin yöntemler, daha basit ve daha ucuz hale geldikçe, bulaşıcı hastalıkların teşhisi pratiğine kesinlikle daha yaygın bir şekilde dahil edilecektir.

ELISA ve RIF yöntemleri çoğunlukla niteliksel veya yarı nicelikseldir. ile çok düşük konsantrasyonlar bileşenler, bir antijen-antikor kompleksinin oluşumu görsel olarak veya basit araçsal yollarla kaydedilemez. Bu gibi durumlarda antijen antikor kompleksinin belirtilmesi, antijen veya antikorun başlangıç ​​bileşenlerinden birinin, belirlenecek analitin konsantrasyonuyla karşılaştırılabilir konsantrasyonlarda kolaylıkla saptanabilen bir etiket ortaya koyması halinde gerçekleştirilebilir.

Etiket olarak radyoaktif izotoplar (örneğin 125I), floresan maddeler ve enzimler kullanılabilir.

Kullanılan etikete bağlı olarak, radyoimmün (RIA), floresan immün (FIA), enzim immünoassay (ELISA) analiz yöntemleri vb. son yıllar geniş pratik kullanım olasılığı ile ilişkili bir ELISA aldı kantitatif tespitler, muhasebenin yüksek hassasiyeti, özgüllüğü ve otomasyonu.

ELISA analiz yöntemleri, renkli bir görünümle bir enzim tarafından bölünen bir substrat kullanılarak bir antijen antikor kompleksinin saptanmasına izin veren bir grup yöntem.

Metodun özü, antijen antikor reaksiyonunun bileşenlerinin ölçülen bir enzim etiketi ile kombinasyonunda yatmaktadır. Reaksiyona giren antijen veya antikor, bir enzimle etiketlenir. Enzimin etkisi altında substratın dönüştürülmesiyle, etkileşime giren antijen-antikor reaksiyonu bileşeninin miktarı yargılanabilir. Bu durumda enzim, bağışıklık tepkisinin bir belirteci olarak hizmet eder ve onu görsel veya araçsal olarak gözlemlemenizi sağlar.

Bir enzim molekülü dakikada 1 x 105'ten fazla katalitik ürün molekülü üretebildiğinden, enzimler çok uygun etiketlerdir çünkü katalitik özellikleri onların güçlendirici olarak hareket etmelerine izin verir. Katalitik aktivitesini uzun süre koruyan, bir antijen veya antikora bağlandığında kaybetmeyen ve substrata göre özgüllüğü yüksek bir enzim seçmek gerekir.

Bir enzimle işaretlenmiş antikorları veya antijenleri elde etmenin ana yöntemleri, konjugatlar: kimyasal, immünolojik ve genetik mühendislik. Enzimler genellikle ELISA için kullanılır: yaban turpu peroksidaz, alkalin fosfataz, galaktosidaz, vb.

Reaksiyonun görsel ve enstrümantal muhasebesi amacıyla antijen-antikor kompleksindeki enzimin aktivitesini tespit etmek için, işlem sırasında çözeltileri başlangıçta renksiz olan kromojenik substratlar kullanılır. enzimatik reaksiyon yoğunluğu enzim miktarı ile orantılı olan bir renk elde eder. Bu nedenle, katı faz ELISA'da yaban turpu peroksidaz aktivitesini saptamak için, substrat olarak yoğun bir kahverengi renk veren 5 aminosalisilik asit, turuncu-sarı bir renk oluşturan ortofenilendiamin kullanılır. Alkali fosfataz ve agalatosidaz aktivitesini saptamak için sırasıyla nitrofenilfosfatlar ve nitrofenilgalaktozitler kullanılır.

Renkli bir ürünün oluşumundaki reaksiyon sonucu, görsel olarak veya belirli bir dalga boyuna sahip ışığın soğurulmasını ölçen bir spektrofotometre kullanılarak belirlenir.

ELISA'yı evrelemek için birçok seçenek vardır. Homojen ve heterojen çeşitleri vardır.

Kurulum yöntemine göre, rekabetçi ve rekabetçi olmayan ELISA yöntemleri ayırt edilir. İlk aşamada sistemde yalnızca analiz edilen bileşik ve buna karşılık gelen bağlanma merkezleri (antijen ve spesifik antikorlar) mevcutsa, bu durumda yöntem rekabetçi değildir. Analiz edilen bileşik (antijen) ve onun analoğu (enzim etiketli antijen) birinci aşamada mevcutsa ve eksiklikte bulunan spesifik bağlanma merkezlerine (antikorlar) bağlanmak için birbirleriyle rekabet halindeyse, o zaman yöntem rekabetçidir. Bu durumda, incelenen antijen çözeltiyi ne kadar çok içerirse, daha az miktar işaretli antijenleri bağlar.

FLORESAN ANTİKOR YÖNTEMİ (MFA) veya İMMÜNOFLORESAN REAKSİYONLARI (RIF)

İmmünofloresan yöntemi, test materyalinde bilinmeyen bir mikroorganizmanın hızlı tespiti ve tanımlanması için tercih edilen yöntemdir.

Ag + AT + elektrolit = UV ışık kompleksi

Florokrom ile etiketlenmiş mikrop serumu

Floresein izotiyosiyanat boyası genellikle FITC olarak kullanılır

Bu çalışmada floresan mikroskop kullanılmıştır.

RIF aşaması

Smere 30 µl FITC etiketli antikor solüsyonu uygulanır.

Camı nemli bir odaya yerleştirin ve oda sıcaklığında 20-25 dakika veya termostatta 37°C'de 15 dakika inkübe edin.

Bardağı akan musluk suyunda 2 dakika çalkalayın, distile su ile durulayın ve havada kurutun.

Kurutulmuş yaymaya bir damla montaj sıvısı uygulanır, yayma bir lamel ile kaplanır ve bir flüoresan mikroskobu veya geleneksel bir optik mikroskoba bir flüoresan eki kullanılarak mikroskoplanır.

mikrobiyolojide

"Aglutinasyon reaksiyonu ve türleri (RA)"

Plan:

1. Giriş……………………………………………………………………………………..3

2. Cam üzerinde RA……………………………………………………………………………….4

3. Test tüpü PA……………………………………………………………………………….5

4. Kullanılan literatür……………………………………………………………………..7

1. Giriş.

Mikrobiyal antijen ve antikorların etkileşimi kesinlikle spesifiktir ve hayvan vücudunda patojeni ve toksinlerini nötralize etmeye yöneliktir. Antijen ve antikorların belirli koşullar altında in vitro etkileşimine, pratik amaçlar için serolojik (Latince serum-serumdan) adı verilen AG-AT reaksiyonlarının kullanılmasına izin veren görünür fenomenler (aglütinasyon, çökelme, immün lizis) eşlik eder. Biyo fabrikalar, belirli bir yönü bilinen (tanısal) antijenler ve bağışıklık serumları (antikorlar) üretir. Serolojik reaksiyonlarda bu tür serumların yardımıyla bilinmeyen bir mikroorganizmayı tanımlamak veya bilinen bir antijeni kullanarak vücutta bir patojenin girmesine yanıt olarak sentezlenen antikorları tespit etmek ve böylece bir teşhis (serolojik teşhis) yapmak mümkündür. . Ek olarak, aşılama veya bulaşıcı bir hastalıktan sonra bağışıklık yanıtının yoğunluğunu değerlendirmek için serolojik reaksiyonlar kullanılabilir.

Dolaylı aglütinasyon ve Coombs gibi aglütinasyon reaksiyonları, korpüsküler antijenlerin antikorlarla in vitro etkileşimine ve ortaya çıkan komplekslerin çökelme yeteneğine dayanır. Eritrositler, lateks partikülleri, vb.

Tanecik antijenlerinin antijenik belirleyicileri, spesifik olarak homolog antikorlarla etkileşime girer (reaksiyonun spesifik, görünmez fazı) ve ardından antijen-antikor kompleksleri, çökelen - aglütine olan (reaksiyonun spesifik olmayan, görünür fazı) çıplak gözle görülebilen büyük konglomeralar oluşturur. . Kamçılı olmayan mikrop formlarında (Brucella), test tüpünün dibine ters bir şemsiye şeklinde yerleşen ve sallandığında kolayca kırılan flagella'da (Escherichia, Salmonella) - büyük pamukta granüler aglütinantlar oluşur. . Antijenler ve antikorlar yalnızca bir elektrolit varlığında (%0,8 sodyum klorür çözeltisinde) etkileşime girer. Reaksiyonun seyri, elektrolitteki tuz konsantrasyonu, süspansiyondaki mikrobiyal hücrelerin sayısı, serum konsantrasyonu, pH, sıcaklık ve diğer faktörlerden etkilenir.

Aglütinasyon reaksiyonu (ra).

Spesifik aglütinasyonu ayırt edin, sürü antijenin etkileşimine dayanır İle homolog antikor , hayvanın vücudunda bulunan bu antijen Krom'a verildi (immünoaglütinasyon); ortamın pH'ındaki, elektrolit konsantrasyonundaki değişikliklerden kaynaklanan spesifik olmayan (kimyasal); kendiliğinden, to-ruyu, bakteriler (R-formunda olan) salin içinde süspanse edildiğinde ve ısıtıldığında bakteri hücresinin koloidal durumundaki bir değişiklikle ilişkili olarak gözlenir. Antijen , RA'da yer alan aglütinojen, antikora aglütinin, oluşan çökeltiye aglütinat denir. Aglütinat oluşumunda antijen ve antikorların kantitatif oranı (optimum fenomen) önemlidir. Antikor fazlalığı veya eksikliği ile, A.

Aglütinasyon reaksiyonu (RA), mikrobiyolojik pratikte kullanılan ilk immünolojik reaksiyonlardan biridir. İlk kez (1895) F. Vidal tifo tanısı için RA kullandı. Daha sonra (1897), A. Wright aynı reaksiyonu insanlarda brusellozu teşhis etmek için kullandı. RA ayrıca tavuklarda pullorosis, leptospirosis, kısraklarda enfeksiyöz kürtaj tanısında ve ayrıca bilinen aglütinasyon serumuna göre bilinmeyen mikrop kültürlerinin tiplendirilmesinde uygulama bulmuştur. RA oldukça hassastır; 1 ml'de 0,01 µg antikor protein nitrojeni tespit edebilir.

Metodolojik uygulamada ve çalışmanın amacında farklılık gösteren aglütinasyon reaksiyonunun çeşitli varyantları geliştirilmiştir.

2. Cam üzerine Ra.

RA'nın bu varyantında hem serum hem de antijen test edilebilir, ancak bu varyant çoğunlukla mikroorganizmaların tanımlanması için kullanılır.

1. Mikroorganizmayı (m / o) tanımlamak için, yağı alınmış bir cam slayta ayrı ayrı salmoneliosis gibi bir damla bilinen aglütinasyon serumu ve bir damla salin solüsyonu (kontrol) uygulanır. Daha sonra, bir bakteriyolojik öze kullanılarak, çalışılan kültürün bakteri kütlesi, bir Petri kabındaki koloniden veya bir test tüpündeki eğimli MPA'nın yüzeyinden alınır ve homojen bir süspansiyon elde edilene kadar immün serum ve fizyolojik salin içinde ayrı ayrı süspanse edilir. . Sonuç 2 ... 4 dakika sonra dikkate alınır.

Sonuçların muhasebesi: kontrol örneğinde herhangi bir değişiklik olmamalıdır. Bakteri kültürünün bağışıklık serumuna spesifik olarak karşılık gelmesiyle, aglütinat pulları ortaya çıkar (pozitif sonuç), aglütinasyon fenomeninin yokluğunda, incelenen bakteri kültürünün bağışıklık serumuna karşılık gelmediği sonucuna varılır.

2. Çalışılan kan serumundaki antikorların tespiti, bruselloz serodiagnozunda kullanılan rose-bengal testi örneği kullanılarak ele alınacaktır. 0.3 ml incelenen hayvan kan serumu ve 0.03 ml brusella antijeni (pembe Bengal ile boyanmış brusella hücreleri) bir cam slayta uygulanır. Bileşenler cam çalkalanarak iyice karıştırılır ve 4 dakika sonra sonuç dikkate alınır.

Hesaplama sonuçları: Pozitif bir reaksiyonla, pembe aglütinat pulları belirir. Bu tür bir serolojik reaksiyon, hayvanın kan serumundaki patojene karşı antikorları tespit etmek için kullanılabileceğinden, ancak bunların niceliksel içeriğini değerlendirmek mümkün olmadığından kalitatif olarak sınıflandırılır.