Hücre kültürü. Hücre kültürleri Bitki hücre kültürleri
KK yaşayan ve üreyen çok hücreli canlıların hücreleridir. yapay koşullar vücudun dışında.
Vücudun dışında yaşayan hücreler veya dokular, in vivo olarak organ ve doku hücrelerinin özelliklerinden keskin bir şekilde farklı olan bir dizi metabolik, morfolojik ve genetik özellik ile karakterize edilir.
İki ana tek katmanlı hücre kültürü türü vardır: birincil ve nakledilen.
Öncelikle trypsinized."Birincil" terimi, embriyonik veya doğum sonrası dönemde doğrudan insan veya hayvan dokularından elde edilen bir hücre kültürünü ifade eder. Bu tür ürünlerin ömrü sınırlıdır. Belirli bir süre sonra, sitoplazmanın granülasyonu ve vakuolizasyonu, hücrelerin yuvarlanması, hücreler ile üzerinde büyüdükleri katı substrat arasındaki iletişim kaybı ile ifade edilen spesifik olmayan dejenerasyon fenomeni ortaya çıkar. Ortamın periyodik olarak değiştirilmesi, ikincisinin bileşimindeki değişiklikler ve diğer prosedürler, birincil hücre kültürünün ömrünü yalnızca biraz artırabilir, ancak nihai yıkımını ve ölümünü engelleyemez. Büyük olasılıkla, bu süreç, tüm organizmada etkili olan nörohumoral faktörlerin kontrolü dışında olan hücrelerin metabolik aktivitesinin doğal olarak yok edilmesiyle ilişkilidir.
Hücre tabakasının çoğunun dejenerasyonunun arka planına karşı popülasyondaki yalnızca tek tek hücreler veya hücre grupları büyüme ve çoğalma yeteneğini koruyabilir. In vitro sonsuz üreme gücünü bulan bu hücreler, nakledilen hücre kültürleri.
Nakledilebilir hücre dizilerinin herhangi bir birincil kültüre kıyasla ana avantajı, vücut dışında sınırsız üreme potansiyeli ve onları bakterilere ve tek hücreli protozoaya yaklaştıran göreli otonomidir.
Süspansiyon kültürleri- sıvı bir ortamda süspansiyon halinde büyütülen tek tek hücreler veya hücre grupları. Bunlar, kimyasallara kolayca maruz kalan nispeten homojen bir hücre popülasyonudur.
Süspansiyon kültürleri, ikincil metabolizma yollarını, enzim indüksiyonunu ve gen ekspresyonunu, yabancı bileşiklerin bozunmasını, sitolojik çalışmaları vb. incelemek için model sistemler olarak yaygın şekilde kullanılır.
"İyi" bir çizginin işareti, hücrelerin metabolizmayı yeniden düzenleme yeteneği ve belirli yetiştirme koşulları altında yüksek bir üreme oranıdır. Morfolojik özellikler böyle bir satır:
yüksek derecede ayrışma (grup başına 5-10 hücre);
hücrelerin morfolojik bütünlüğü (küçük boyut, küresel veya oval şekil, yoğun sitoplazma);
Tracheid benzeri elementlerin yokluğu.
Diploid hücre suşları. Bunlar, orijinal diploid kromozom setinin başarısızlığını korurken, in vitro olarak 100'e kadar bölünmeye maruz kalabilen aynı tip hücrelerdir (Hayflick, 1965). İnsan embriyolarından elde edilen fibroblastların diploid suşları, deneysel çalışmaların yanı sıra tanısal viroloji ve aşı üretiminde yaygın olarak kullanılmaktadır. Viral genomun bazı yeteneklerinin yalnızca muhafaza eden hücrelerde gerçekleştirildiği akılda tutulmalıdır. normal seviye farklılaşma.
130. Bakteriyofajlar. Morfoloji ve kimyasal bileşim
Bakteriyofajlar (fajlar) (diğer Yunanca φᾰγω - “Yutuyorum”) bakteri hücrelerini seçici olarak enfekte eden virüslerdir. Çoğu zaman, bakteriyofajlar bakterilerin içinde çoğalır ve parçalanmalarına neden olur. Kural olarak, bir bakteriyofaj, bir protein kabuğundan ve tek sarmallı veya çift sarmallı bir nükleik asidin (DNA veya daha az yaygın olarak RNA) genetik materyalinden oluşur. Parçacık boyutu yaklaşık 20 ila 200 nm'dir.
Farklı bakteriyofajların partiküllerinin - virionların - yapısı farklıdır. Ökaryotik virüslerden farklı olarak, bakteriyofajlar genellikle bir bakteri hücresinin yüzeyine özel bir bağlanma organına veya bununla düzenlenmiş bir kuyruk sürecine sahiptir. değişen dereceler karmaşıktır, ancak bazı fajların kuyruğu yoktur. Kapsid, fajın genetik materyalini, genomunu içerir. Farklı fajların genetik materyali, farklı nükleik asitlerle temsil edilebilir. Bazı fajlar, genetik materyalleri olarak DNA içerir, diğerleri ise RNA içerir. Çoğu fajın genomu çift sarmallı DNA'dır ve nispeten nadir bazı fajların genomu tek sarmallı DNA'dır. Bazı fajların DNA moleküllerinin uçlarında "yapışkan alanlar" (tek sarmallı tamamlayıcı nükleotit dizileri) bulunurken, diğer fajlarda yapışkan alanlar yoktur. Bazı fajlar, DNA moleküllerinde benzersiz gen dizilerine sahipken, diğer fajlar gen permütasyonlarına sahiptir. Bazı fajlarda DNA doğrusaldır, bazılarında ise bir halka şeklinde kapalıdır. Bazı fajlar, DNA molekülünün uçlarında birkaç genin terminal tekrarlarına sahipken, diğer fajlarda bu terminal fazlalığı nispeten kısa tekrarların varlığıyla sağlanır. Son olarak, bazı fajlarda genom, birkaç nükleik asit fragmanından oluşan bir set ile temsil edilir.
Evrimsel bir bakış açısından, bu tür farklı genetik materyal türlerini kullanan bakteriyofajlar, ökaryotik organizmaların diğer temsilcilerinden çok daha fazla farklılık gösterir. Aynı zamanda, genetik bilgi taşıyıcılarının - nükleik asitlerin yapısındaki ve özelliklerindeki bu tür temel farklılıklara rağmen, farklı bakteriyofajlar, başta duyarlı bakterilerin enfeksiyonundan sonra hücresel metabolizmaya müdahalelerinin doğası olmak üzere birçok açıdan ortaklık gösterir.
Hücrelerin üretken bir enfeksiyonuna neden olabilen bakteriyofajlar, örn. yaşayabilir yavrularla sonuçlanan bir enfeksiyon, kusurlu olmayan olarak tanımlanır. Tüm kusurlu olmayan fajların iki durumu vardır: hücre dışı veya serbest faj durumu (bazen olgun faj olarak da adlandırılır) ve bitkisel faj durumu. Bazı sözde ılıman fajlar için bir kehanet durumu da mümkündür.
Hücre dışı faj, faj genomunun enfeksiyonlar arasında korunmasını ve bir sonraki hassas hücreye girmesini sağlayan, bu tür bir fajın karakteristik yapısına sahip parçacıklardır. Hücre dışı faj biyokimyasal olarak inertken, fajın aktif ("canlı") durumu olan vejetatif faj, hassas bakterilerin enfeksiyonundan sonra veya bir profajın indüklenmesinden sonra ortaya çıkar.
Bazen hassas hücrelerin kusurlu olmayan bir fajla enfeksiyonu, canlı döl oluşumuyla sonuçlanmaz. Bu iki durumda olabilir: abortif bir enfeksiyon sırasında veya ılıman bir faj ile enfeksiyon sırasında hücrenin lizojenik durumundan dolayı.
Enfeksiyonun abortif doğasının nedeni, enfeksiyon sırasında bazı hücre sistemlerinin aktif müdahalesi olabilir, örneğin bakteriye verilen faj genomunun yok edilmesi veya hücrede gerekli bazı ürünlerin bulunmaması olabilir. fajın gelişimi vb.
Fajlar genellikle üç türe ayrılır. Tip, üretken bir faj enfeksiyonunun enfekte hücrenin kaderi üzerindeki etkisinin doğası tarafından belirlenir.
İlk tip gerçekten öldürücü fajlardır. Bir hücrenin öldürücü bir fajla enfekte olması, kaçınılmaz olarak enfekte hücrenin ölümüne, yok olmasına ve yavru fajın salınmasına yol açar (abortif enfeksiyon vakaları hariç). Bu tür fajlar, onları öldürücü ılıman faj mutantlarından ayırmak için gerçekten öldürücü olarak adlandırılır.
İkinci tip- ılıman fajlar. Bir hücrenin ılıman bir fajla üretken bir enfeksiyonu sırasında, gelişiminin temelde farklı iki yolu mümkündür: litik, genel olarak (sonucunda) öldürücü fajların litik döngüsüne benzer ve lizojenik, ılımlı bir fajın genomu özel bir duruma geçtiğinde - bir kehanet. Bir profaj taşıyan bir hücreye lizojenik veya basitçe bir lizojen denir (çünkü belirli koşullar altında faj litik gelişimine maruz kalabilir). Litik gelişimin başlangıcında bir indükleyici faktörün uygulanmasına profaj durumunda yanıt veren ılıman fajlara indüklenebilir, bu şekilde reaksiyona girmeyen fajlara indüklenemez denir. Virülent mutantlar ılıman fajlarda oluşabilir. Virülans mutasyonları, operatör bölgelerindeki nükleotid diziliminde, represör için afinite kaybına yansıyan böyle bir değişikliğe yol açar.
Üçüncü tip fajlar, üretken enfeksiyonu bakterilerin ölümüne yol açmayan fajlardır. Bu fajlar, fiziksel yıkıma neden olmadan enfekte bakteriyi terk edebilirler. Böyle bir fajla enfekte olmuş bir hücre, sürekli (kalıcı) üretken bir enfeksiyon halindedir. Fajın gelişimi, bakteri bölünme hızının bir miktar yavaşlamasına neden olur.
Bakteriyofajlar kimyasal yapı, nükleik asit türü, morfoloji ve bakterilerle etkileşim açısından farklılık gösterir. Büyüklüğüne bakteriyel virüsler mikrobiyal hücrelerden yüzlerce ve binlerce kat daha küçük.
Tipik bir faj parçacığı (virion) bir baş ve bir kuyruktan oluşur. Kuyruğun uzunluğu genellikle başın çapının 2-4 katıdır. Baş, genetik materyal içerir - tek sarmallı veya çift sarmallı RNA veya transkriptaz enzimi aktif olmayan bir durumda olan DNA, bir protein veya lipoprotein kabuğu ile çevrili - genomu hücre dışında koruyan bir kapsid.
Nükleik asit ve kapsid birlikte nükleokapsidi oluşturur. Bakteriyofajlar, bir veya iki spesifik proteinin çoklu kopyalarından oluşan bir ikosahedral kapsite sahip olabilir. Genellikle köşeler proteinin pentamerlerinden yapılır ve her bir tarafın desteği aynı veya benzer bir proteinin heksamerlerinden yapılır. Ayrıca fajlar küresel, limon şeklinde veya pleomorfik olabilir. Kuyruk bir protein tüpüdür - başın protein kabuğunun devamı, kuyruğun tabanında genetik materyalin enjeksiyonu için enerjiyi yeniden üreten bir ATPaz vardır. bakteriyofajlar da var kısa süreç, işlemsiz ve ipliksi.
Fajların ana bileşenleri proteinler ve nükleik asitlerdir. Diğer virüsler gibi fajların da yalnızca bir tür nükleik asit, deoksiribonükleik asit (DNA) veya ribonükleik asit (RNA) içerdiğine dikkat etmek önemlidir. Bu özelliği ile virüsler, hücrelerinde her iki nükleik asit türünü de içeren mikroorganizmalardan farklıdır.
Nükleik asit kafada bulunur. Faj kafasının içinde de az miktarda protein (yaklaşık %3) bulundu.
Dolayısıyla, kimyasal bileşime göre fajlar nükleoproteinlerdir. Fajlar, nükleik asitlerinin türüne bağlı olarak DNA ve RNA'ya ayrılır. Farklı fajlardaki protein ve nükleik asit miktarı farklıdır. Bazı fajlarda içerikleri hemen hemen aynıdır ve bu bileşenlerin her biri yaklaşık %50 oranındadır. Diğer fajlarda bu ana bileşenler arasındaki oran farklı olabilir.
Bu ana bileşenlere ek olarak, fajlar az miktarda karbonhidrat ve bazı ağırlıklı olarak nötr yağlar içerir.
Şekil 1: Bir faj parçacığının yapısının diyagramı.
İkinci morfolojik tipin bilinen tüm fajları RNA'dır. Üçüncü morfolojik tipteki fajlar arasında hem RNA hem de DNA formları bulunur. geri kalanın fajları morfolojik tipler- DNA-yeni.
131. İnterferon. Ne olduğunu?
müdahaleÖ N(lat. inter - karşılıklı olarak, kendi aralarında ve ferio - hit, hit), memelilerin ve kuşların vücudundaki hücrelerin yanı sıra virüs enfeksiyonlarına yanıt olarak hücre kültürleri tarafından üretilen koruyucu bir protein; virüslerin hücre içinde çoğalmasını (replikasyonunu) engeller. I., 1957'de İngiliz bilim adamları A. Isaacs ve J. Lindenman tarafından enfekte tavukların hücrelerinde keşfedildi; daha sonra bakteri, riketsiya, toksinler, nükleik asitler, sentetik polinükleotidlerin de I.. oluşumuna neden olduğu ortaya çıktı. I. bireysel bir madde değil, geniş bir pH bölgesinde kararlı, nükleazlara dirençli ve proteolitik enzimler tarafından parçalanan düşük moleküler ağırlıklı proteinler grubudur (molekül ağırlığı 25.000–110.000). I.'nin hücrelerinde oluşum, içlerinde bir virüsün gelişmesiyle ilişkilidir, yani hücrenin yabancı bir nükleik asidin penetrasyonuna reaksiyonudur. Bulaşan virüs bir hücreden kaybolduktan sonra ve normal hücrelerde Ve.bulunmaz. Etki mekanizmasına göre, I. temel olarak antikorlardan farklıdır: viral enfeksiyonlara özgü değildir (farklı virüslere karşı etki eder), virüsün bulaşıcılığını nötralize etmez, ancak vücutta çoğalmasını engelleyerek sentezi baskılar. viral nükleik asitler. İçlerinde viral bir enfeksiyon geliştikten sonra hücrelere girdiğinde, I. etkili değildir. Ayrıca, And., kural olarak, onu oluşturan hücrelere özgüdür; örneğin tavuk hücrelerinin I.'si sadece bu hücrelerde aktiftir ancak tavşan veya insan hücrelerinde virüsün üremesini baskılamaz. Virüsler üzerinde benim değil, onun etkisi altında üretilen başka bir proteinin etki ettiğine inanılıyor. Viral hastalıkların (herpetik göz enfeksiyonu, grip, sitomegali) önlenmesi ve tedavisi için test I'de cesaret verici sonuçlar elde edilmiştir. Bununla birlikte, I.'nin yaygın klinik kullanımı, ilacı elde etmenin zorluğu, vücuda tekrar tekrar uygulama ihtiyacı ve tür özgüllüğü ile sınırlıdır.
132. Ayırıcı yol. Ne olduğunu?
1.Üretken bir viral enfeksiyon 3 dönemde ortaya çıkar:
· başlangıç dönemi virüsün hücre üzerinde adsorpsiyonu, hücre içine penetrasyonu, parçalanması (deproteinizasyon) veya virüsün "soyulması" aşamalarını içerir. Viral nükleik asit uygun hücre yapılarına iletildi ve lizozomal hücre enzimlerinin etkisi altında koruyucu protein kılıflarından salınır. Sonuç olarak, benzersiz bir biyolojik yapı oluşur: enfekte bir hücre 2 genom (kendi ve viral) ve 1 sentetik aparat (hücresel) içerir;
Ondan sonra başlar ikinci grup dahil olmak üzere virüs üreme süreçleri ortalama Ve son dönemler, bu sırada hücresel baskı ve viral genomun ekspresyonu meydana gelir. Hücresel genomun baskılanması, herhangi bir hücrede sentezlenen histonlar gibi düşük moleküler ağırlıklı düzenleyici proteinler tarafından sağlanır. Viral bir enfeksiyonla, bu süreç geliştirilir, artık hücre, genetik aparatın viral genom tarafından temsil edildiği ve sentetik aparatın hücrenin sentetik sistemleri tarafından temsil edildiği bir yapıdır.
2. Hücredeki olayların sonraki seyri yönlendirilirviral nükleik asit replikasyonu için(yeni virionlar için genetik materyalin sentezi) ve içerdiği genetik bilginin uygulanması(yeni viryonlar için protein bileşenlerinin sentezi). DNA içeren virüslerde, hem prokaryotik hem de ökaryotik hücrelerde, viral DNA replikasyonu, hücresel DNA'ya bağımlı DNA polimerazın katılımıyla gerçekleşir. Bu durumda ilk önce tek sarmallı DNA içeren virüsler oluşur. tamamlayıcı iplikçik - yavru DNA molekülleri için bir şablon görevi gören sözde replikatif form.
3. DNA'da bulunan virüsün genetik bilgisinin uygulanması şu şekilde gerçekleşir: DNA'ya bağımlı RNA polimerazın katılımıyla, virüse özgü proteinlerin sentezlendiği hücrenin ribozomlarına giren mRNA'lar sentezlenir. Genomu konakçı hücrenin sitoplazmasında kopyalanan çift sarmallı DNA içeren virüslerde, bu kendi genomik proteinidir. Genomları hücre çekirdeğinde kopyalanan virüsler, burada bulunan hücresel DNA'ya bağımlı RNA polimerazı kullanır.
-de RNA virüsleri süreçler çoğaltma genomları, genetik bilgilerin transkripsiyonu ve çevirisi başka yollarla gerçekleştirilir. Viral RNA'nın hem eksi hem de artı şeritli replikasyonu, sentezi RNA içeren tüm virüslerin sahip olduğu bir genomik protein olan RNA'ya bağımlı RNA polimeraz tarafından sağlanan RNA'nın replikatif formu (orijinalin tamamlayıcısı) aracılığıyla gerçekleştirilir. . Eksi sarmallı virüslerin (artı sarmallı) RNA'sının replikatif formu, yalnızca yavru viral RNA moleküllerinin (eksi sarmallı) sentezi için bir şablon görevi görmez, aynı zamanda mRNA'nın işlevlerini de yerine getirir, yani ribozomlara gider ve sağlar. viral proteinlerin sentezi (yayın).
-de artı filaman RNA içeren virüsler, sentezi viral RNA'ya bağımlı RNA polimerazların katılımıyla replikatif form (negatif iplik) aracılığıyla gerçekleştirilen kopyalarının çeviri işlevini gerçekleştirir.
Bazı RNA virüsleri (reovirüsler) tamamen benzersiz bir transkripsiyon mekanizmasına sahiptir. Spesifik bir viral enzim tarafından sağlanır - ters transkriptaz (ters transkriptaz) ve ters transkripsiyon olarak adlandırılır. Özü, ilk başta, tek bir DNA dizisi olan ters transkripsiyonun katılımıyla viral RNA matrisi üzerinde bir transkript oluşturulması gerçeğinde yatmaktadır. Üzerinde hücresel DNA bağımlı DNA polimeraz yardımıyla ikinci zincir sentezlenir ve çift zincirli bir DNA transkripti oluşur. Ondan, olağan şekilde, i-RNA'nın oluşumu yoluyla viral genomun bilgisi gerçekleştirilir.
Açıklanan replikasyon, transkripsiyon ve translasyon işlemlerinin sonucu, oluşumdur. yavru moleküller viral nükleik asit ve viral proteinler virüs genomunda kodlanmıştır.
ondan sonra gelir üçüncü, son dönem virüs ve hücre arasındaki etkileşim. İtibaren Yapısal bileşenler(nükleik asitler ve proteinler) yeni viryonlar, hücrenin sitoplazmik retikulumunun zarlarında toplanır. Genomu bastırılmış (bastırılmış) bir hücre genellikle ölür. yeni oluşan viryonlar pasif olarak(hücre ölümü nedeniyle) veya aktif olarak(tomurcuklanarak) hücreyi terk eder ve kendisini onun ortamında bulur.
Böylece, viral nükleik asitlerin ve proteinlerin sentezi ve yeni virionların birleştirilmesi belirli bir dizide (zaman içinde ayrılmış) ve farklı hücre yapılarında (uzayda ayrılmış) meydana gelir ve bununla bağlantılı olarak virüslerin üreme yöntemi adlandırılır. ayırıcı(ayrık). Abortif bir viral enfeksiyonla, virüsün hücre ile etkileşim süreci, hücresel genomun baskılanması meydana gelmeden önce şu veya bu nedenle kesintiye uğrar. Açıkçası bu durumda virüsün genetik bilgisi gerçekleşmeyecek ve virüsün üremesi gerçekleşmemekte ve hücre fonksiyonlarını değişmeden sürdürmektedir.
Gizli bir viral enfeksiyon sırasında, her iki genom da hücrede aynı anda işlev görürken, virüs kaynaklı dönüşümler sırasında viral genom, hücresel olanın bir parçası haline gelir, işlev görür ve onunla birlikte miras alınır.
133. Camelpox virüsü
Çiçek hastalığı (Variola)- cilt ve mukoza zarlarında ateş ve papüler-püstüler döküntü ile karakterize bulaşıcı bulaşıcı bir hastalık.
Hastalığa neden olan ajanlar, çiçek hastalığı ailesinin (Poxviridae) çeşitli cins ve virüs tiplerine aittir. Bağımsız türler virüslerdir: doğal inek yuspa, vaccinia (Orthopoxvirus cinsi), doğal koyun çiçeği, keçiler (Carpipoxvirus cinsi), domuzlar (Suipoxvirus cinsi), kuşlar (Avipoxvirus cinsi) ve üç ana tür (tavuk, güvercin ve güvercinlerin çiçek hastalığına neden olan etkenler) kanaryalar).
Çiçek hastalığı patojenleri de Çeşitli türler hayvanlar morfolojik olarak benzerdir. Bunlar, göreceli olarak karakterize edilen DNA içeren virüslerdir. büyük bedenler(170 - 350 nm), epitelyotropi ve Morozov'a göre boyamadan sonra ışık mikroskobu altında görülebilen hücrelerde (Paschen, Guarnieli, Bollinger cisimcikleri) temel yuvarlak inklüzyonlar oluşturma yeteneği.Çeşitli hayvanlarda çiçek hastalığı patojenleri arasında filogenetik bir ilişki olmasına rağmen türler, patojenite spektrumu aynı değildir ve tüm vakalarda immünojenik ilişkiler korunmamıştır. Koyun, keçi, domuz ve kuşların variola virüsleri yalnızca ilgili türler için patojeniktir ve doğal koşullar altında her biri bağımsız (orijinal) bir çiçek hastalığına neden olur. Variola sığır çiçeği ve aşı virüsleri, sığır, manda, lo-tekne, eşek, katır, deve, tavşan, maymun ve insanlar dahil olmak üzere geniş bir patojenite spektrumuna sahiptir.
Deve çiçeği VARIOLA CAMELINA cilt ve mukoza zarlarında karakteristik bir nodüler-püstüler çiçek hastalığı döküntüsü oluşumu ile ortaya çıkan bulaşıcı bir hastalık. Çiçek hastalığı Variola'nın adı, çarpık (çizikli) anlamına gelen Latince Varus kelimesinden gelir.
Hastalığın epizootolojisi. Her yaştan deve çiçek hastalığına karşı hassastır, ancak genç hayvanlar daha sık ve daha ciddi şekilde hastalanır. Çiçek hastalığı sorunu olan durağan bölgelerde yetişkin develer, neredeyse tamamı genç yaşta çiçek hastalığına yakalandıkları için nadiren hastalanırlar. Gebe develerde çiçek hastalığı düşüklere neden olabilir.
Diğer türlerin hayvanları, doğal koşullarda orijinal camelpox virüsüne duyarlı değildir. İnek ve develere ek olarak, bufalolar, atlar, eşekler, domuzlar, tavşanlar ve çiçek hastalığına karşı bağışıklığı olmayan insanlar, inek çiçeği virüsü ve vaccinia'ya karşı hassastır. Laboratuvar hayvanlarından gine domuzları, gözlerin korneasına virüs uygulandıktan sonra inek çiçeği ve aşı virüslerine karşı duyarlıdır (FA Petunii, 1958).
Çiçek hastalığı virüslerinin ana kaynakları, çiçek hastalığı olan hayvanlar ve sığır çiçeği olan ve bunun sonucunda iyileşen insanlardır. aşırı duyarlılık buzağıların vaccinia virüsü, çiçek hastalığı döküntüsü ile aşılamadan sonra. Hasta hayvanlar ve insanlar virüsü dış ortamda, esas olarak virüsü içeren deri ve mukoza zarının reddedilen epiteli ile yayarlar. İçinde dış ortam virüs ayrıca düşük yapılmış fetüslerde de izole edilir (K. N. Buchnev ve R. G. Sadykov, 1967). Çiçek hastalığına neden olan ajan, kuşlar da dahil olmak üzere çiçek hastalığına bağışıklığı olan evcil ve vahşi hayvanlar ile aşı ile aşılanmış çocuklardan çiçek hastalığına bağışıklığı olan insanlar tarafından mekanik olarak taşınabilir.
Doğal koşullar altında sağlıklı develer, virüs bulaşmış bir alanda hasta hayvanlarla enfekte su, yem, tesis ve bakım malzemeleri yoluyla temas yoluyla ve ayrıca hasta hayvanlar tarafından virüs içeren çıkışlara aerojenik olarak püskürtülerek enfekte olurlar. Daha sıklıkla, virüs vücuda deri ve mukoza zarlarından girdiğinde, özellikle de bütünlükleri ihlal edildiğinde veya A vitamini eksikliği meydana geldiğinde develer enfekte olur.
Bir epizootik şeklinde, develerde çiçek hastalığı yaklaşık 20-25 yılda bir görülür. Şu anda, genç hayvanlar özellikle ciddi şekilde hasta. Çiçek hastalığı açısından durağan bölgelerde epizootikler arasındaki dönemde, develer arasında çiçek hastalığı, 2-4 yaşındaki hayvanlar başta olmak üzere 3-6 yılda bir az çok düzenli olarak ortaya çıkan enzootik ve sporadik vakalar şeklinde ortaya çıkar. Bu gibi durumlarda, özellikle sıcak mevsimde hayvanlar nispeten kolay hastalanır. Soğuk havalarda çiçek hastalığı daha şiddetlidir, daha uzun sürer ve özellikle genç hayvanlarda komplikasyonlara eşlik eder. Küçük çiftliklerde, neredeyse tüm hassas develer 2-4 hafta içinde hastalanır. Develer arasında çiçek hastalığı salgınlarına, birbirlerine karşı bağışıklık oluşturmayan hem orijinal deve çiçeği virüsü hem de sığır çiçeği virüsü neden olabileceği akılda tutulmalıdır. Bu nedenle, farklı çiçek hastalığı virüslerinin neden olduğu salgınlar birbirini takip edebilir veya aynı anda ortaya çıkabilir.
patogenez patojenin belirgin epiteliyotropizmi ile belirlenir. Bir hayvanın vücuduna girdikten sonra virüs çoğalır ve kana (viremi), lenf düğümlerine, iç organlar, derinin ve mukoza zarlarının epitel tabakasına girer ve bunlarda şiddeti organizmanın reaktivitesine ve virüsün virülansına, vücuda girme yollarına ve epitel tabakasının durumu. Çukurlar sırayla aşamalar halinde gelişir: nodüllü roseoladan kabuk ve yara oluşumu olan püstüle.
Semptomlar. Kuluçka süresi develerin yaşına, virüsün özelliklerine ve vücuda nasıl girdiğine bağlı olarak 3 ila 15 gün arasında değişir: genç hayvanlarda 4-7, yetişkinlerde 6-15 gün. Bağışıklığı olmayan develerden gelen develer doğumdan 2-5 gün sonra hastalanabilir. En kısa kuluçka dönemi (2-3 gün) develerde vaccinia virüsü ile enfekte olduktan sonra gerçekleşir.
Prodromal dönemde hasta develerde vücut ısısı 40-41 ° C'ye yükselir, uyuşukluk ve beslenmeyi reddetme görülür, ağız ve burnun konjonktiva ve mukoza zarları hiperemiktir. Ancak bu belirtiler genellikle çiftlikte özellikle hastalığın başlangıcında görülür.
Develerde çiçek hastalığının seyri, yaşlarına bağlı olarak da farklıdır: genç hayvanlarda, özellikle yenidoğanda, daha sıklıkla akuttur (9 güne kadar); yetişkinlerde - subakut ve kronik, bazen gizli, daha sık hamile develerde. Develerdeki çiçek hastalığının en karakteristik formu, hastalığın subakut seyri ile kutanözdür (Şekil 1).
Hastalığın subakut seyrinde ağız ve burundan berrak, daha sonra bulutlu, grimsi-kirli mukus salgılanır. Hayvanlar başlarını sallar, burnunu çeker ve burnunu çekerek virüsten etkilenen epitelyumu virüs içeren mukusla birlikte dışarı atar. Kısa süre sonra dudaklar, burun delikleri ve göz kapakları bölgesinde bazen intermaksiller bölgeye, boyuna ve hatta gerdan bölgesine yayılan şişlik oluşur. Submandibular ve alt servikal lenf düğümleri büyümüştür. Hayvanlarda iştah azalır, normalden daha sık ve daha uzun süre yatarlar ve büyük güçlükle ayağa kalkarlar. Bu zamana kadar dudak, burun ve göz kapaklarının derisinde, ağız ve burun mukozasında kırmızımsı gri lekeler belirir; altlarında, artan, gri papüllere dönüşen ve daha sonra bir bezelye ve fasulye büyüklüğünde püstüllere dönüşen yoğun nodüller oluşur.
Püstüller yumuşar, patlar ve onlardan açık gri renkli yapışkan bir sıvı salınır. Bu zamana kadar başın şişmesi kaybolur. Açılan püstüller 3-5 gün sonra kabuklarla kaplanır. Kaba yemden zarar görmezlerse hastalık orada biter. Çıkarılan veya düşen birincil kabuklar, ters krater benzeri bir püstül formuna sahiptir. Çukurların yerinde izler kalır. Derideki bu lezyonların tamamı 8-15 gün içerisinde oluşur.
Hasta develerdeki benler genellikle önce kafalarında belirir. Develer bir ila dört yaşlarında, kural olarak kolayca hastalanır. Lezyonlar kafa derisinde, özellikle dudaklarda ve burunda lokalizedir. Develerde meme sıklıkla etkilenir. Baş bölgesindeki primer püstüllerin açılmasından birkaç gün sonra ciltte ve vücudun diğer az tüylü bölgelerinde (meme, koltuk altı, perine ve skrotum, çevresinde, çevresinde) çiçek hastalığı lezyonları oluşur. anüs, önkol ve uyluğun iç kısmı) ve develerde ayrıca vajinanın mukoza zarında. Bu sırada develerin vücut ısısı genellikle tekrar yükselir, bazen 41,5 ° 'ye kadar çıkar ve hamileliğin son ayındaki develer, kural olarak kısa süre sonra ölen erken ve az gelişmiş develer getirir.
Bazı hayvanlarda göz korneası (diken) bulanıklaşarak tek gözde 5-10 gün geçici körlüğe, develerde ise daha sık olarak her iki gözde körlüğe neden olur. Doğumdan kısa bir süre sonra hastalanan deve buzağıları ishal olur. Bu durumda hastalıktan 3-9 gün sonra ölürler.
Nispeten iyi huylu bir subakut çiçek hastalığı seyri ile ve genellikle aşılama virüsü ile enfeksiyondan sonra hayvanlar 17-22 gün içinde iyileşir.
Yetişkin develerde, ağız mukozasında açılan püstüller, özellikle kaba yemle yaralandığında sıklıkla birleşir ve kanar. Bu da beslenmeyi zorlaştırır, hayvanlar kilo verir, iyileşme süreci 30-40 güne kadar gecikir ve hastalık kronikleşir.
Çiçek hastalığının genelleşmesi ile birlikte bazen pyemi ve komplikasyonlar (pnömoni, gastroenterit, nekrobakteriyoz vb.) gelişir, bu gibi durumlarda hastalık 45 gün veya daha uzun süre devam eder. Atoni ve kabızlığın eşlik ettiği mide ve bağırsak fonksiyon bozuklukları vakaları vardır. Bazı hasta hayvanlarda ekstremitelerde şişlik görülür.
Gizli çiçek hastalığı seyri olan develerde (hastalığın karakteristik klinik belirtileri olmadan, sadece ateş varlığında), yavrulamadan 1-2 ay önce (% 17-20'ye kadar) düşükler meydana gelir.
Yetişkin develerde hastalığın prognozu olumludur., özellikle 15-20 günlükken akut seyirli develerde ve çiçek hastalığına bağışık olmayandan doğan develerde sakıncalıdır. Develer ciddi şekilde hastalanır ve %30-90 kadarı ölür. 1-3 yaşındaki develer çiçek hastalığına daha kolay yakalanır ve daha büyük yaşta, ciddi şekilde hasta olmalarına rağmen, belirgin bir genelleşmiş süreç belirtileri ile ölüm oranı düşüktür (% 4-7).
Patolojik değişiklikler, yukarıda tarif edilen gözlerin cilt, mukoza ve kornea lezyonları ile karakterizedir. Epikard ve barsak mukozasında noktasal kanamalar görülür. Kostal plevradaki göğüs boşluğunda bazen darı tanesinden gri ve gri-kırmızı renkli mercimeklere kadar değişen boyutlarda küçük kanamalar ve nodüller de görülebilir. Yemek borusunun mukoza zarı darı büyüklüğünde nodüllerle kaplıdır ve sırt benzeri çıkıntılarla çevrilidir. Skarın mukoza zarı (bazen mesane), benzer kanamalara ve pürüzlü kenarları olan nodüllere ve ayrıca batık pembemsi bir merkeze sahip küçük ülserlere sahiptir. Papüllerde, geleneksel bir ışık mikroskobu ile daldırma altında bir yayma preparasyonunun mikroskobunda tanı değeri olan Paschen cisimcikleri gibi temel cisimler tespit edilebilir.
Teşhis, klinik ve epizootik verilerin analizine (insanlardan develerin enfeksiyon kapma olasılığını dikkate alarak), patolojik değişikliklere, pozitif mikroskopi sonuçlarına (Morozov gümüşleme yöntemi kullanılarak taze papüllerden bulaşmaları işlerken) veya elektronoskopiye dayanır. yanı sıra çiçek hastalığına duyarlı hayvanlar üzerinde biyoanalizler. Çiçek hastalığı olan develerin düşük yapılmış ceninlerinin organlarından virüsü izole etmek mümkündür. Çiçek hastalığını teşhis ederken, agar jelde difüzyon çökeltme reaksiyonunun ve aktif spesifik serum veya globulinlerin varlığında nötralizasyon reaksiyonunun kullanılması da önerilir.
Ayırıcı tanışüpheli vakalarda gerçekleştirilir (klinik ve epizootik özellikler dikkate alınarak). Çiçek hastalığı, patolojik materyalden smear mikroskopisi ve buna duyarlı beyaz farelerin enfeksiyonu ile nekrobakteriyozdan ayırt edilmelidir; ayak ve ağız hastalığından - arka ayak derisinin plantar yüzeyinde patolojik materyal süspansiyonu ile kobay enfeksiyonu; mantar enfeksiyonlarından ve uyuzdan - derinin etkilenen bölgelerinden alınan incelenen kazımalarda karşılık gelen patojenleri bularak; kürtajlar, düşükler ve prematüre taylar sırasında bruselloza karşı koruma - RA ve RSK develerinin kan serumunu inceleyerek ve fetüslerin bakteriyolojik muayenesini besiyerinde mikrobiyal kültür izolasyonu ve mikroskopi ile (gerekirse, kobaylar üzerinde bir biyoanaliz kullanın ve ardından bakteriyolojik ve serolojik çalışmalar kan ve serum).
Develerde çiçek hastalığı teşhis edilirken, bulaşıcı olmayan, ancak bazen yaygın olan, dudaklarda ve burunda deri lezyonları ile ortaya çıkan bir hastalığı - yantak-bash (Türkm.), Jantak-bas (Kazak) dışlamak gerekir. deve dikeni (yantak, jantak, Alhagi) denilen çalıları yerken onları yaralamak. Bu hastalık genellikle bir yaşın altındaki genç develerde sonbaharda görülür. Yetişkin develer, deve dikeninden çok az etkilenir. Yantak-bash ile, ağız mukozasında çiçek hastalığından farklı olarak genellikle nodüller veya papüler lezyonlar yoktur. Yantak-bash ile ortaya çıkan grimsi kaplamanın çıkarılması nispeten kolaydır. Bununla birlikte, yantak-bash'ın develerde çiçek hastalığına katkıda bulunduğu ve sıklıkla onunla aynı anda ilerlediği dikkate alınmalıdır.
Çiçek virüsü izole edilirken, SSCB Sağlık Bakanlığı'nın 1968 tarihli talimatlarında belirtilen yöntemler kullanılarak türünün (orijinal, inek çiçeği veya vaccinia) belirlenmesi gerekir. çiçek hastalığı aşılama virüsü ve izole edilmiş patojenleri olan develerin enfeksiyonu (izole koşullarda).
Hasta develerin tedavisi esas olarak semptomatiktir. Etkilenen alanlar bir potasyum permanganat çözeltisi (1:3000) ile işlenir ve kuruduktan sonra, 10% iyot tentürü ve gliserin (1:2 veya 1:3) karışımı ile yağlanır. Pockmark'ı açtıktan sonra, güçlendirilmiş bir zeminde% 5'lik bir sentomisin emülsiyonu ile muamele edilirler. Balık Yağı 1:15-1:20 oranında iyodin tentürünün eklendiği; merhemler - çinko, iktiyol, penisilin vb. Vazelin üzerinde% 2 salisilik veya borik merhem ve% 20-30 propolis merhem kullanabilirsiniz. Sıcak havalarda %3 creolin merhemi, katran ve hekzakloran tozu belirtilir. Etkilenen bölgeler günde 2-3 kez emülsiyon ve merhemlere batırılmış pamuklu çubuklarla yağlanır.
Ağız boşluğunun etkilenen mukoza zarı günde 2-3 kez% 10'luk bir potasyum permanganat çözeltisi veya% 3'lük bir hidrojen peroksit çözeltisi veya adaçayı, papatya ve diğer dezenfektanlar ve büzücü maddelerle yıkanır. Konjonktivit ile gözler% 0.1'lik bir çinko sülfat çözeltisi ile yıkanır.
İkincil bir mikrobiyal enfeksiyon gelişimini ve olası komplikasyonları önlemek için, kas içine penisilin ve streptomisin enjekte edilmesi önerilir. Genel zayıflık ve komplikasyonlar ile kalp ilaçları belirtilir.
Hastalığın şiddetli vakalarında özel tedavi yöntemlerinden çiçek hastalığı geçirmiş develerin serumunu veya kanını kullanabilirsiniz (1 kg hayvan ağırlığı başına 1-2 ml oranında deri altı). Enjeksiyon bölgeleri önceden dikkatlice kesilir ve iyot tentürü ile silinir.
Hasta ve iyileşen develer sıklıkla verilir. Temiz su, kepek veya arpa unu ezmesi, yumuşak bluegrass veya ince yonca samanı veya arpa unu ile tatlandırılmış pamuk kabukları. Soğuk havalarda hasta hayvanlar, özellikle develer temiz, kuru ve ılık bir odada tutulur veya üzeri battaniye ile örtülür.
Doğuştan hasta olan çiçek develerinde bağışıklık 20-25 yıl kadar, yani neredeyse ömür boyu sürer. Bağışıklığın doğası, iyileşmiş hayvanların kan serumunda nötralize edici antikorların varlığı ve develerin homolog çiçek hastalığı virüsü ile yeniden enfeksiyona karşı bağışıklığı ile kanıtlandığı gibi, cilt hümoraldir. Çiçek hastalığına yakalanmış develerden doğan develer, özellikle ilk üç yaşında, yani buluğ çağına kadar, devenin kaptığı çiçek hastalığının türüne karşı hassas değildir. Salgın döneminde rahim altında bulunan deve buzağıları, kural olarak çiçek hastalığına yakalanmazlar veya nispeten kolay ve kısa süreli hastalanmazlar.
Önleme ve kontrol önlemleri tüm veterinerlik, sıhhi ve karantina önlemlerine sıkı sıkıya uyularak, hastalığın zamanında teşhisi ve virüs tipinin belirlenmesi. Kişilerin aşılama sırasında ve aşılama sonrası dönemde onlar (veya çocukları) aşı çiçek hastalığına karşı klinik olarak belirgin reaksiyonlarını tamamen tamamlayana kadar develere bakmalarına izin verilmemelidir. Çiftliğe giren tüm develer, inekler ve atlar 30 gün boyunca izolasyon hücresinde tutulmalıdır.
Deve, inek ve atlarda çiçek hastalığı görüldüğünde, ilçe yönetim kurulunun özel kararı ile bu hastalığın görüldüğü alan, yerleşim veya ilçe, meralar çiçek hastalığına elverişsiz ilan edilir ve karantina, kısıtlayıcı ve sağlık tedbirleri alınır.
Çiçek hastalığının görünümü hemen daha yüksek olarak bildirilir. veterinerlik kuruluşları, komşu çiftlikler ve ilçelerde önlemek için uygun önlemleri almak daha fazla yayılma hastalık.
Develerin inek çiçek hastalığına yakalanmasını önlemek için, tıbbi bir müstahzarın kullanılması tavsiye edilir - dezavantajlı ve dezavantajlı ülkelerde yaşlarına, cinsiyetlerine ve fizyolojik durumlarına (hamilelik ve emziren develer) bakılmaksızın klinik olarak sağlıklı tüm develeri aşılamak için kullanılan çiçek hastalığı detritus. sığır çiçeği çiftliklerini tehdit etti. Bunu yapmak için, devenin boynunun alt üçte birlik kısmında yün kesilir, alkol-eter veya% 0,5'lik bir karbolik asit çözeltisi ile muamele edilir, pamuk yünü ile silinir veya kurutulur, deri kazınır ve kalın bir iğne ile uygulanır. bir neşter veya kazıyıcının ucu 2-3 sığ paralel çizik 2 uzunluğunda -4 cm 3-4 damla çözünmüş aşı taze kazınmış cilt yüzeyine uygulanır ve bir spatula ile hafifçe ovulur. Aşıyı ampullerin ve ampul kutularının etiketlerinde belirtildiği şekilde çözün. Seyreltilmiş ve kullanılmayan aşı ve aşı ampulleri kaynatılarak dezenfekte edilir ve imha edilir. Aşılama için kullanılan aletler %3'lük karbolik asit solüsyonu veya %1'lik formaldehit solüsyonu ile yıkanır ve kaynatılarak sterilize edilir.
Deve sığır çiçeğine karşı bağışık değilse, aşılamadan sonraki 5-7. Günde, kazıma bölgesinde papüller görünmelidir. Mevcut değillerse, aşılama tekrarlanır, ancak boynun karşı tarafında ve farklı bir seri aşı ile yapılır. Çiçek hastalığına karşı bağışıklığı olan ve kişisel hijyen kurallarına aşina olan kişilerin, aşılanmış ve hasta develere bakmasına izin verilir. Özellikle zayıf gruptan olan genç hayvanlar bazen aşılamaya güçlü tepki verebilir ve belirgin çiçek hastalığı belirtileriyle hastalanabilir.
Hasta ve yüksek oranda yanıt veren develer izole edilir ve tedavi edilir (yukarıya bakın). Hayvancılık binaları ve çiçek virüsü bulaşmış yerlerin sıcak %2-4 kostik soda ve kostik potas solüsyonları, %3 kükürt-karbolik karışım solüsyonu veya %2-3 sülfürik asit solüsyonları veya berraklaştırılmış solüsyonlarla dezenfekte edilmesi önerilir. çiçek hastalığı virüsünü 2-3 saat içinde etkisiz hale getiren %2-6 aktif klor içeren çamaşır suyu (O. Trabaev, 1970). %3-5 kloramin solüsyonları ve %2 formaldehit solüsyonu da kullanabilirsiniz. Gübre yakılmalı veya biyotermik olarak dezenfekte edilmelidir. Çiçek hastalığının klinik belirtileri ile yere düşen develerin cesetleri yakılmalıdır. Hasta ve çiçek hastalığından şüphelenilen deve sütü, irin safsızlıkları içermiyorsa ve başka bir nedenle kontrendike değilse, ancak 5 dakika kaynatıldıktan veya 85 ° -30 dakika pastörize edildikten sonra yenebilir. Çiçek hastalığı çiftlikleri için sorun olduğu dönemde öldürülen develerin yünü ve derisi, hayvansal kaynaklı hammaddelerin dezenfeksiyonu talimatlarına göre işlenir.
Çiftliklerden gelen kısıtlamalar ve Yerleşmeler, çiçek hastalığı nedeniyle dezavantajlı durumda, çiçek hastalığı olan tüm hayvanların ve insanların iyileşmesinden en geç 20 gün sonra çıkarılması ve son dezenfeksiyonun dikkatlice yapılması önerilir.
134. Virüslerin kimyasal bileşimi ve biyokimyasal özellikleri
1.1 Virionların yapısı ve kimyasal bileşimi.
En büyük virüsler (variola virüsleri) küçük bakterilere yakın, en küçüğü (ensefalit, çocuk felci, ayak ve ağız hastalığına neden olan maddeler) kan hemoglobin moleküllerine yönelik büyük protein moleküllerine yakındır. Yani virüsler arasında devler ve cüceler var. Virüsleri ölçmek için nanometre (nm) adı verilen koşullu bir değer kullanılır. Bir nm, milimetrenin milyonda biridir. Farklı virüslerin boyutları 20 ila birkaç yüz 1 nm arasında değişir.
Basit virüsler proteinlerden ve nükleik asitlerden oluşur. Bir virüs parçacığının en önemli parçası olan nükleik asit, genetik bilginin taşıyıcısıdır. İnsanların, hayvanların, bitkilerin ve bakterilerin hücreleri her zaman iki tür nükleik asit içeriyorsa - deoksiribonükleik asit DNA ve ribonükleik RNA, o zaman farklı virüslerde sınıflandırmalarının temeli olan yalnızca bir tür DNA veya RNA bulundu. Virionun ikinci zorunlu bileşeni olan proteinler, farklı virüslerde farklılık gösterir, bu da onların immünolojik reaksiyonlar kullanılarak tanınmalarını sağlar.
Yapı olarak daha karmaşık olan virüsler, proteinlere ve nükleik asitlere ek olarak karbonhidratlar ve lipitler içerir. Her virüs grubunun kendi proteinleri, yağları, karbonhidratları ve nükleik asitleri vardır. Bazı virüsler enzim içerir. Virionların her bir bileşeninin belirli işlevleri vardır: protein kabuğu onları olumsuz etkilerden korur, nükleik asit kalıtsal ve bulaşıcı özelliklerden sorumludur ve virüslerin değişkenliğinde öncü bir rol oynar ve enzimler onların üremesine katılır. Genellikle nükleik asit, virionun merkezinde bulunur ve sanki içine giyilmiş gibi bir protein kabuğu (kapsid) ile çevrilidir.
Kapsid, virüsün nükleik asidi (nükleokapsid) ile yerinde simetrik geometrik şekiller oluşturan, belirli bir şekilde düzenlenmiş benzer protein moleküllerinden (kapsomerler) oluşur. Nükleokapsidin kübik simetrisi durumunda, nükleik asit ipliği bir top şeklinde kıvrılır ve kapsomerler bunun etrafına sıkıca sarılır. Çocuk felci virüsleri, şap hastalığı vb.
Nükleokapsidin sarmal (çubuk şeklindeki) simetrisi ile virüs ipliği spiral şeklinde bükülür, bobinlerinin her biri birbirine koyu renkli bitişik kapsomerlerle kaplanır. Kapsomerlerin yapısı ve viryonların görünümü elektron mikroskobu kullanılarak gözlemlenebilir.
Çoğu insanlarda ve hayvanlarda enfeksiyona neden olan virüsler kübik simetri tipine sahiptir. Kapsid hemen hemen her zaman, on iki köşeli ve eşkenar üçgen yüzleri olan bir ikosahedral düzenli yirmi kenarlı altı yüzlü bir biçime sahiptir.
Birçok virüs, protein kapsidine ek olarak bir dış kabuğa sahiptir. Viral proteinlere ve glikoproteinlere ek olarak, aynı zamanda ödünç alınan lipitleri de içerir. hücre zarı Konak hücre. İnfluenza virüsü, kübik simetri tipine sahip sarmal zarflı bir virion örneğidir.
Modern sınıflandırma virüsler, nükleik asitlerinin tipine ve şekline, simetri tipine ve bir dış kabuğun varlığına veya yokluğuna bağlıdır.
Biyokimyasal özellikler - bkz. Manuel!!!
135. İn vitro fonksiyonel ve çoğalan aktiviteyi koruyan organ parçaları
Hücre kültürü
özel bir besleyici ortamla doldurulmuş cam veya plastik bir yüzey üzerinde yapay koşullar altında tek tabaka halinde büyüyebilen herhangi bir hayvan dokusunun hücreleri. Hücrelerin kaynağı taze elde edilmiş hayvan dokusudur - birincil hücreler, hücrelerin laboratuvar suşları - to-ry nakledildi. hücreler. Embriyonik ve tümör hücreleri, yapay koşullar altında büyümek için en iyi yeteneğe sahiptir. İnsan ve maymun hücrelerinin diploid to-ra'sı sınırlı sayıda pasajlanır, bu nedenle bazen hücre sürüsüne yarı nakledilebilir. Hücrelerin to-ry alma aşamaları: bir kaynağın ezilmesi; tripsin tedavisi; döküntüden salıverme; tartılan hücre sayısının standardizasyonu kültür ortamı antibiyotiklerle; hücrelerin duvarlara veya tabana yerleştiği ve çoğalmaya başladığı test tüplerine veya küçük şişelere dökülmesi; tek tabaka oluşumu üzerinde kontrol. To-ry hücreleri, virüsü çalışmadan izole etmek için kullanılır. materyal, viral süspansiyonun birikmesi için, St. in. Son zamanlarda bakteriyolojide kullanılmaya başlanmıştır.
136. Paresteziler. Ne olduğunu?
PARESTEZİ(Yunanca para-yakın, rağmen ve aisthesis-duygusundan), bazen disestezi olarak da adlandırılır, uyuşma, karıncalanma, tüyleri diken diken (myrmeciasis, myrmecismus, formicatio), yanma, kaşıntı, ağrılı soğuk (yani, dış tahrişten kaynaklanmayan) ) psikroestezi), ampütelerde (pseudomelia paresthetica) görünüşte korunmuş uzuvlardaki hareketler, vb. duyumlar. P.'nin nedenleri farklı olabilir. P., Renaud hastalığı, eritromelalji, akroparestezi, endarterit gibi kan dolaşımındaki lokal değişikliklerin bir sonucu olarak ortaya çıkabilir. ilk belirti spontan kangren. Bazen sinir sistemine zarar vererek, travmatik nevritle (bkz. tipik. P. sulcus olecrani bölgesinde n. ulnaris'in bir çürüğü ile), toksik ve enfeksiyöz nevritle, radikülitle, spinal pakimenenjitle (kompresyon) ortaya çıkarlar. kökler), akut ve hron ile. miyelit, özellikle basınçla omurilik(omurilik tümörleri) ve tabes dorsalis. Tüm bu durumlarda teşhis değerleri, ağrı, anestezi ve hiperestezinin teşhis değeri ile aynıdır: belirli alanlarda, bir veya başka bir periferik sinir yolu boyunca veya bir veya başka bir radiküler innervasyon alanında ortaya çıkarak, yapabilirler patolojinin yeri hakkında değerli göstergeler verir. işlem. Öğeler ayrıca beyin hasarının belirtileri olarak da mümkündür. Bu nedenle, kortikal epilepsi ile nöbetler genellikle, daha sonra konvülsiyonların başladığı uzuvda lokalize olan P. ile başlar. Genellikle serebral arteriyosklerozda veya serebral sifilizde de görülürler ve bazen apoplektik inmenin habercisidirler - Sözde tarafından ayrı bir pozisyon işgal edilir. zihinsel P., yani. organik gibi temel değil, karmaşık bir karaktere sahip olmalarının özellikle karakteristik olduğu psikojenik, hipokondriyak kökenli P. - "solucanların kafa derisinin altında sürünmesi", "karından bir top kaldırması" boyuna” (Oppenheim), vb. Teşhis değerleri, elbette, organik P'ninkinden tamamen farklıdır.
137. Virüs içeren malzemelerle çalışma ve güvenlik önlemleri kuralları
138. Enfeksiyöz sığır rhinotracheitis virüsü
Enfeksiyöz rinotrakit(lat. - Rhinotracheitis infectiosa bovum; İngilizce - Enfeksiyöz sığır rhinotracheites; IRT, kabarcıklı döküntü, enfeksiyöz vulvovajinit, enfeksiyöz rinit, "kırmızı burun", üst solunum yollarının enfeksiyöz nezlesi), sığırların akut bulaşıcı bir hastalığıdır ve başlıca nezle ile karakterizedir solunum yollarının nekrotik lezyonları, ateş, genel depresyon ve konjunktivitin yanı sıra püstüler vulvovajinit ve kürtaj.
IRT'nin etken maddesi - Herpesvirus bovis 1, DNA içeren herpesvirüs ailesine aittir, virionun çapı 120 ... 140 nm'dir. Bu virüsün 9 yapısal proteini izole edilmiş ve karakterize edilmiştir.
RTI virüsü, CPP'ye neden olan bir dizi hücre kültüründe kolayca yetiştirilir. Virüsün çoğalmasına, mitotik hücre bölünmesinin baskılanması ve intranükleer inklüzyonların oluşumu eşlik eder. Ayrıca solunum ve üreme organlarının hücreleri için hemaglütinasyon özelliklerine ve tropizme sahiptir ve mukoza zarlarından merkezi sinir sistemine geçebilir, gebeliğin birinci ve ikinci yarısının sonunda fetüse bulaşabilir.
- 60 ... -70 "C'de virüs 7 ... 9 ay hayatta kalır, 56 ° C'de 20 dakika sonra, 37 ° C'de - 4 ... 10 gün sonra, 22 ° C'de - inaktive edilir - 50 gün sonra 4'te virüsün aktivitesi biraz azalır. Dondurma ve çözme, virülansını ve immünojenik aktivitesini azaltır.
Formalin çözeltileri 1: 500, virüsü 24 saat sonra etkisiz hale getirir, 1: 4000 - 46 saat sonra, 1: 5000 - 96 saat sonra Asidik bir ortamda virüs aktivitesini hızla kaybeder, uzun süre kalır (9'a kadar) ay) pH 6,0 ... 9,0'da ve 4 °C sıcaklıkta. Kuru buz sıcaklığında 4 ... 12 ay saklanan boğa spermasında ve sıvı nitrojende - 1 yıl boyunca virüsün hayatta kaldığına dair bilgiler var. Boğa spermasında virüs inaktivasyonu olasılığı, %0.3'lük bir tripsin solüsyonu ile muamele edildiğinde gösterilmiştir.
Enfeksiyona neden olan ajanın kaynakları, hasta hayvanlar ve gizli virüs taşıyıcılarıdır. Virülan bir suşla enfeksiyondan sonra, tüm hayvanlar virüsün gizli taşıyıcıları haline gelir. Damızlık boğalar çok tehlikelidir çünkü hastalandıktan sonra 6 ay boyunca virüsü salgılarlar ve çiftleşme sırasında inekleri enfekte edebilirler. Virüs çevreye burun salgıları, göz ve cinsel organlardan akıntı, süt, idrar, dışkı ve meni ile bulaşıyor. Antilopların Afrika ülkelerinde RTI virüsünün rezervuarı olduğuna inanılıyor. Ayrıca virüs, sığırlarda hastalığa neden olmada önemli rol oynayan kenelerde çoğalabilir.
Virüsün bulaşma faktörleri hava, yem, sperm, Araçlar, bakım ürünleri, kuşlar, böcekler ve ayrıca insanlar (çiftlik işçileri). Bulaşma yolları - temas, hava yoluyla, bulaşıcı, beslenme.
Duyarlı hayvanlar, cinsiyet ve yaştan bağımsız olarak sığırlardır. Hastalık en çok besi sığırlarında görülür. Deneyde koyun, keçi, domuz ve geyikleri enfekte etmek mümkündü. Hayvanlar genellikle işlevsiz bir çiftliğe girdikten 10...15 gün sonra hastalanırlar.
RTI insidansı %30...100, mortalite - %1...15'tir, hastalık diğer solunum yolu enfeksiyonları ile komplike ise daha yüksek olabilir.
Birincil odaklarda, hastalık neredeyse tüm çiftlik hayvanlarını etkilerken, ölüm oranı% 18'e ulaşıyor. IRT genellikle farklı çiftliklerden getirilen hayvan gruplarını tamamlarken endüstriyel tip çiftliklerde ortaya çıkar.
Virüs, solunum veya genital sistemin mukoza zarlarına girdiğinde, epitel hücrelerini istila eder ve burada çoğalarak ölümlerine ve pul pul dökülmesine neden olur. Daha sonra solunum yolunun mukoza zarının yüzeyinde ülserler oluşur ve genital sistemde nodüller ve püstüller oluşur. Birincil lezyonlardan virüs hava ile bronşlara girer ve üst solunum yolundan konjonktivaya girebilir ve burada etkilenen hücrelerde bir tepkiye neden olan dejeneratif değişikliklere neden olur. Tahrik edici cevap organizma. Daha sonra virüs lökositler tarafından emilir ve lenf düğümleri yoluyla yayılır ve oradan kana girer. Viremiye, hayvanın genel depresyonu, ateş eşlik eder. Buzağılarda virüs kan yoluyla parankimal organlara taşınabilir ve burada çoğalır. dejeneratif değişiklikler. Virüs kan-beyin ve plasenta bariyerini geçtiğinde beyin, plasenta, rahim ve fetüste patolojik değişiklikler ortaya çıkar. Patolojik süreç aynı zamanda büyük ölçüde mikrofloranın neden olduğu komplikasyonlara da bağlıdır.
Kuluçka süresi ortalama 2-4 gündür, çok nadiren daha fazladır. Temel olarak, hastalık akuttur. IRT'nin beş formu vardır: üst solunum yolu enfeksiyonları, vajinit, ensefalit, konjonktivit ve artrit.
Solunum organlarının yenilgisiyle, buzağıların yaklaşık% 20'sinin öldüğü kronik seröz-pürülan pnömoni mümkündür. Genital formda dış genital organlar etkilenir, bazen ineklerde endometrit, babalarda kısırlığa neden olabilen orşit gelişir. Suni tohumlama için kullanılan boğalarda IRT, perine, kalça, anüs çevresinde, bazen kuyrukta, skrotumda tekrarlayan dermatit ile kendini gösterir. Virüs bulaşmış semen, ineklerde endometrit ve kısırlığa neden olabilir.
Rahimdeki fetüsün düşükleri ve ölümü, enfeksiyondan 3 hafta sonra not edilir; bu, varlığı, rahimde kürtajları ve fetal ölümü engellemeyen hamile iyileşen ineklerin kanındaki antikor titresindeki artışla çakışır.
IRT'nin gizli bir kursa eğilimi ile not edildi. cinsel organ formu. Vajinanın mukoza zarının epitelinde, girişinde ve vulvasında, farklı boyutlarda çok sayıda püstül oluşur (püstüler vulvovajinit). Erozyonlar ve yaralar yerlerinde belirir. Ülseratif lezyonların iyileşmesinden sonra, mukoza zarında uzun süre hiperemik nodüller kalır. Hasta boğalarda süreç sünnet derisi ve penis üzerinde lokalizedir. Püstül ve vezikül oluşumu karakteristiktir. Gebe ineklerin küçük bir kısmında kürtaj, fetüsün rezorpsiyonu veya erken buzağılama mümkündür. Abortlanmış hayvanlar, kural olarak, önceden rinotrakit veya konjunktivite sahipti. Abortus yapılan inekler arasında metritis ve fetal ayrışmaya bağlı ölümcül sonuçlar göz ardı edilmemiştir. Bununla birlikte, ineğin rahminin mukoza zarında enflamatuar süreçlerin yokluğunda düşük vakaları nadir değildir. IRT'de vakalar var akut mastitis. Meme keskin bir şekilde iltihaplanır ve genişler, palpasyonda ağrılıdır. Süt verimi keskin bir şekilde azalır.
-de meningoensefalit baskı ile birlikte, motor fonksiyonlarda bir bozukluk ve bir dengesizlik kaydedilmiştir. Hastalığa kas titremesi, böğürme, diş gıcırdatma, kasılmalar, tükürük salgılaması eşlik eder. Hastalığın bu formu esas olarak 2-6 aylık buzağıları etkiler.
solunum formu enfeksiyon, vücut sıcaklığında 41 ... 42 "C'ye kadar ani bir artış, burun mukozasının hiperemi, nazofarenks ve trakea, depresyon, kuru ağrılı öksürük, burundan bol miktarda seröz-mukoza akıntısı (rinit) ve köpüklü salya ile karakterizedir. Hastalık geliştikçe mukus kalınlaşır, solunum sistemi mukus tıkaçları ve nekroz odakları oluşur. Hastalığın şiddetli vakalarında, boğulma belirtileri not edilir. Hiperemi burun aynasına ("kırmızı burun") kadar uzanır. Genç sığırların kitlesel keratokonjonktivitinde RTI virüsünün etiyolojik rolü kanıtlanmıştır. Genç hayvanlarda hastalık bazen şu şekilde kendini gösterir: ensefalit. Ani heyecan, isyan ve saldırganlık, hareketlerin koordinasyonunda bozulma ile başlar. Vücut ısısı normaldir. Buzağılar Erken yaş RTI virüsünün bazı suşları akut gastrointestinal hastalığa neden olur.
Genel olarak hasta hayvanlarda solunum formu klinik olarak net bir şekilde ifade edilir, genital form sıklıkla fark edilmez.
Akut solunum yolu ile öldürülen veya ölen hayvanların otopsisi, genellikle seröz konjonktivit, nezle-pürülan rinit, larenjit ve tracheit belirtilerini ve ayrıca adneksiyal boşlukların mukoza zarlarında hasarı ortaya çıkarır. Konkaların mukoza zarı ödematöz ve hiperemiktir, mukopürülan örtülerle kaplıdır. Bazı yerlerde ifşa ediyorlar farklı şekiller ve eroziv lezyonların büyüklüğü. Pürülan eksüda burun ve adneksiyal boşluklarda birikir. Larinks ve trakeanın mukoza zarlarında, peteşiyal kanamalar ve erozyonlar. Şiddetli vakalarda, trakea mukozası fokal nekroz geçirir, ölü hayvanlarda bronkopnömoni mümkündür. Akciğerlerde atelektazinin odak alanları vardır. Etkilenen bölgelerdeki alveol ve bronşların lümeni seröz-pürülan eksüda ile doldurulur. İnterstisyel dokunun şiddetli şişmesi. Gözler etkilendiğinde, göz kapağının konjonktivası hiperemiktir ve konjonktivaya da uzanan ödem semptomları vardır. göz küresi. Konjonktiva sebase plak ile kaplıdır. Genellikle yaklaşık 2 mm boyutunda papiller tüberküller, üzerinde küçük erozyonlar ve yaralar oluşur.
Genital formda, vajina ve vulvanın oldukça iltihaplı mukoza zarında püstüller, erozyonlar ve yaralar görülür. Farklı aşamalar gelişim. Vulvovajinite ek olarak, sero-nezle veya cerahatli servisit, endometrit ve çok daha az sıklıkla proktit tespit edilebilir. Babalarda ciddi vakalarda fimoz ve parafimoz püstüler balanopostite katılır.
Yeni düşük yapılmış fetüsler genellikle küçük otolitik fenomenlerle birlikte ödemlidir. Mukoza zarlarında ve seröz zarlarda küçük kanamalar. Fetusun ölümünden daha uzun bir süre sonra değişiklikler daha şiddetlidir; kaslar arası bağ dokusunda ve vücut boşluklarında, parankimal organlarda - nekroz odaklarında koyu kırmızı bir sıvı birikir.
Meme etkilendiğinde, seröz-pürülan diffüz mastit tespit edilir. Kesit yüzeyi ödemlidir, etkilenen lobüllerdeki artışa bağlı olarak belirgin şekilde granüledir. Basıldığında, içinden bulutlu, irin benzeri bir sır akar. Sarnıcın mukoza zarı hiperemik, şiş ve kanamalı. Beyindeki ensefalit ile kan damarlarının hiperemi, dokuların şişmesi ve küçük kanamalar tespit edilir.
IRT, klinik ve epizootolojik verilere, zorunlu doğrulama ile organ ve dokulardaki patoanatomik değişikliklere dayanarak teşhis edilir. laboratuvar yöntemleri. Gizli enfeksiyon sadece laboratuvar testleriyle belirlenir.
Laboratuvar teşhisi şunları içerir: 1) hücre kültüründe patolojik materyalden virüs izolasyonu ve bunun RN veya RIF'de tanımlanması; 2) RIF kullanılarak patolojik materyalde RTI virüs antijenlerinin saptanması; 3) RN veya RIGA'da hasta ve iyileşmiş hayvanların kan serumundaki antijenlerin saptanması (geriye dönük tanı).
Virolojik inceleme için hasta hayvanlardan burun boşluğundan, gözlerden, vajinadan, sünnet derisinden mukus alınır; zorla öldürülen ve düşenlerden - ölümden en geç 2 saat sonra alınan nazal septum, trakea, akciğer, karaciğer, dalak, beyin, bölgesel lenf düğümleri parçaları. Retrospektif serolojik tanı için kan serumu da alınır. Laboratuvar teşhisi için IRT RIGA'da enfeksiyonun serodiagnozu için bir dizi sığır IRT tanı seti ve bir dizi eritrosit tanı kiti kullanın.
IRT'nin teşhisi, parainfluenza-3 için materyal çalışmasına paralel olarak gerçekleştirilir, adenovirüs enfeksiyonu, solunum sinsityal enfeksiyonu ve viral ishal.
Sığırlarda IRT için ön teşhis, kullanılarak patolojik materyalde antijen tespitinin pozitif sonuçlarına dayanarak yapılır. KAYALIK yanı sıra epizootolojik ve klinik verileri dikkate alarak patolojik değişiklikler. Nihai teşhis, RIF sonuçlarının virüsün izolasyonu ve tanımlanması ile çakışması temelinde kurulur.
-de ayırıcı tanı enfeksiyöz rinotrakit, şap hastalığı, malign nezle, parainfluenza-3, adenovirüs ve klamidyal enfeksiyonlar, viral ishal, solunum sinsityal enfeksiyonu, pastörellozu dışlamak gerekir.
Hastalığa, kolostrum antikorları ile yavrulara bulaşabilen kalıcı ve uzun süreli bağışıklık eşlik eder. İyileşen hayvanların bağışıklığı en az 1,5 ... 2 yıl sürer, ancak belirgin bir şekilde bile hümoral bağışıklık nekahat dönemindeki hayvanlarda virüsün kalıcılığını engellemez ve diğer hayvanlar için potansiyel bir enfeksiyon kaynağı olarak düşünülmelidir. Bu nedenle, RTI'ye karşı antikorları olan tüm hayvanlar gizli virüsün taşıyıcıları olarak düşünülmelidir.
139. Gelişmekte olan kuş embriyolarındaki besin rezervuarı
Kuşlarda karmaşık ve oldukça uzun embriyojenez süreci göz önüne alındığında, özel geçici ekstra embriyonik - geçici organların oluşturulması gerekir. Bunlardan ilki yolk kesesini ve ardından geri kalan geçici organları oluşturur: amniyon zarı (amniyon), seröz zar, allantois. Daha önceki evrimde, yolk kesesi yalnızca keskin bir telolecithal hücreye sahip olan ve embriyogenez süreci karmaşık ve uzun olan mersin balıklarında bulundu. Sarısı kesesinin oluşumu sırasında, ekstraembriyonik yapraklar veya ekstraembriyonik materyal dediğimiz yaprakların parçalarıyla sarının kirlenmesi not edilir. Ancak ekstraembriyonik endoderm, yumurta sarısının kenarında büyümeye başlar. Ekstra embriyonik mezoderm 2 tabakaya ayrılır: visseral ve parietal, visseral tabaka ekstra embriyonik endoderme ve parietal - ekstra embriyonik ektoderme bitişiktir.
Ekstra embriyonik ektoderm, proteini bir kenara iter ve ayrıca yumurta sarısını da büyütür. Yavaş yavaş, yumurta sarısı kütleleri, ekstra embriyonik endoderm ve ekstra embriyonik mezodermin iç organlarından oluşan bir duvarla tamamen çevrelenir - ilk geçici organ olan yumurta sarısı kesesi oluşur.
Sarısı kesesinin işlevleri. Sarısı kesesinin endoderm hücreleri, yumurta sarısı kütlelerini parçalayan hidrolitik enzimler salgılamaya başlar. Bölünme ürünleri emilir ve kan damarları yoluyla embriyoya taşınır. Böylece yolk kesesi trofik fonksiyon sağlar. Visseral mezodermden ilk kan damarları ve ilk kan hücreleri oluşur ve bu nedenle yolk kesesi de hematopoietik bir işlev görür. Kuşlarda ve memelilerde, yolk kesesinin hücreleri arasında, genital tomurcuk, gonoblast hücreleri erken bulunur.
140. Yeniden etkinleştirme. Ne olduğunu?
Genotipi değiştirerek, mutasyonlar nokta (bireysel genlerde lokalize) ve gen (genomun daha büyük kısımlarını etkileyen) olarak ayrılır.
Hassas hücrelerin virüs enfeksiyonu doğası gereği çokludur, örn. birkaç virion aynı anda hücreye girer. Bu durumda, replikasyon sürecindeki viral genomlar işbirliği yapabilir veya müdahale edebilir. Virüsler arasındaki işbirlikçi etkileşimler, genetik rekombinasyon, genetik reaktivasyon, tamamlama ve fenotipik karıştırma ile temsil edilir.
Genetik rekombinasyon, DNA içeren virüslerde veya parçalanmış genomlu (influenza virüsü) RNA içeren virüslerde daha yaygındır. Genetik rekombinasyon sırasında, viral genomların homolog bölgeleri arasında bir değişim meydana gelir.
Farklı genlerdeki mutasyonlarla ilgili virüslerin genomları arasında genetik reaktivasyon gözlenir. Genetik materyal yeniden dağıtıldığında, tam teşekküllü bir genom oluşur.
Tamamlanma, bir hücreyi enfekte eden virüslerden birinin mutasyon sonucu işlevsiz bir protein sentezlemesi ile gerçekleşir. Tam bir proteini sentezleyen vahşi tip virüs, mutant virüste onun yokluğunu telafi eder.
Hazırlama tekniğine bağlı olarak, hücre kültürleri şu şekilde sınıflandırılır:
- tek katman– hücreler kimyasal olarak nötr cam veya plastiğin yüzeyine yapışabilir ve çoğalabilir.
- süspansiyon- Karıştırıldığında hücreler besiyerinin tüm hacminde çoğalırlar.
- organ- vücut dışında orijinal yapılarını koruyan bütün organ ve doku parçaları (sınırlı kullanım).
En yaygın olanları tek katmanlı hücre kültürleri, Hangi Yaşayabilen nesillerin sayısına bağlı olarak ikiye ayrılabilir.
1) birincil (öncelikle trypsinized),
2) yarı nakledilebilir (diploid)
3) nakledilebilir.
Menşei embriyonik, neoplastik ve yetişkin organizmalardan sınıflandırılırlar.
morfogenez ile- fibroblastik, epitelyal vb.
Öncelik hücre kültürleri, özel bir besleyici ortamla kaplanmış plastik veya cam bir yüzey üzerinde tek tabaka halinde büyüme yeteneğine sahip herhangi bir insan veya hayvan dokusunun hücreleridir. Bu tür ürünlerin ömrü sınırlıdır. Her durumda, mekanik öğütme, proteolitik enzimlerle muamele ve hücre sayısının standardizasyonundan sonra dokudan elde edilirler. Maymun böbreklerinden, insan embriyonik böbreklerinden, insan amniyonundan, tavuk embriyolarından elde edilen birincil kültürler, virüslerin izolasyonu ve birikmesinin yanı sıra viral aşıların üretimi için yaygın olarak kullanılmaktadır.
yarı nakledilebilir(veya diploid ) hücre kültürleri - orijinal diploid kromozom setlerini korurken in vitro 50-100 pasaja kadar dayanabilen aynı tip hücreler. İnsan embriyonik fibroblastlarının diploid suşları hem teşhis için kullanılır viral enfeksiyonlar ve viral aşıların üretiminde. En sık kullanılan kültürler insan embriyonik fibroblastları (WI-38, MRC-5, IMR-9), inekler, domuzlar, koyunlar vs.'dir.
nakledilen hücre hatları, potansiyel ölümsüzlük ve heteroploid karyotip ile karakterize edilir. Birincil hücre kültürleri sürekli çizgilerin kaynağı olabilir(örneğin, SOC - bir sinamobus maymununun kalbi, PES - bir domuz embriyosunun böbrekleri, VNK-21 - bir günlük Suriye hamsterinin böbreklerinden; PMS - bir kobayın böbreğinden, Vero - yeşil bir maymunun böbreği vb.) tek tek hücreleri in vitro olarak sonsuz üreme eğilimi gösterir. Hücrelerden bu tür özelliklerin ortaya çıkmasına neden olan değişikliklere dönüşüm denir ve nakledilen doku kültürlerinin hücrelerine dönüştürülmüş denir. Nakledilebilir hücre dizilerinin bir başka kaynağı da malign neoplazmalar . Bu durumda, hücre dönüşümü in vivo olarak gerçekleşir. Aşağıdaki nakledilen hücre hatları virolojik uygulamada en sık kullanılır: HeLa - servikal karsinomdan elde edilir; Ner-2 - gırtlak karsinomundan; Detroit-6 - akciğer kanseri metastazından kemik iliğine; RH - insan böbreğinden, KB - ağız boşluğu karsinomu, RD - insan rabdomiyosarkomu.
Organ kültürleri- steril koşullarda hazırlanmış, özel yetiştirme koşullarında belirli bir süre (günler, haftalar) yaşamsal aktivitelerini sürdüren hayvan organlarının kesitleridir.
1966).
Hücre kültürü teknikleri, viroloji alanındaki araştırmalarla bağlantılı olarak 1940'larda ve 1950'lerde önemli ölçüde gelişti. Virüslerin hücre kültürlerinde yetiştirilmesi, aşı üretimi için saf viral materyal elde edilmesini mümkün kıldı. Çocuk felci aşısı, hücre kültürü teknolojisi kullanılarak seri üretilen ilk ilaçlardan biriydi. 1954'te Enders, Weller ve Robbins "çocuk felci virüsünün çeşitli doku kültürlerinde büyüme yeteneğini keşfettikleri için" Nobel Ödülü'nü aldılar. 1952'de, iyi bilinen insan kanser hücre dizisi HeLa geliştirildi.
Yetiştirmenin temel ilkeleri[ | ]
Hücre izolasyonu[ | ]
Vücut dışında yetiştirme için, canlı hücreler çeşitli şekillerde elde edilebilir. Hücreler kandan izole edilebilir, ancak kültürde yalnızca lökositler büyüyebilir. Mononükleer hücreler, hücre dışı matrisi bozan kollajenaz, tripsin ve pronaz gibi enzimler kullanılarak yumuşak dokulardan izole edilebilir. Ayrıca besi ortamına doku ve malzeme parçaları da yerleştirilebilir.
Doğrudan nesneden (ex vivo) alınan hücre kültürlerine birincil denir. Tümör hücreleri dışındaki çoğu birincil hücre sınırlı bir ömre sahiptir. Belirli sayıda hücre bölünmesinden sonra, bu tür hücreler yaşlanır ve bölünmeyi durdurur, ancak yine de yaşayabilirler.
Süresiz olarak çoğalabilen ölümsüzleştirilmiş ("ölümsüz") hücre dizileri vardır. Çoğu tümör hücresinde, bu yetenek rastgele bir mutasyonun sonucudur, ancak bazı laboratuvar hücre dizilerinde telomeraz genini aktive ederek yapay olarak elde edilir.
Hücre kültürü[ | ]
Hücreler, sabit bir sıcaklıkta özel besleyici ortamlarda büyütülür. Bitki hücre kültürleri için değişken aydınlatma kullanılırken, memeli hücreleri genellikle bir hücre kültürü inkübatöründe muhafaza edilen özel bir atmosfere ihtiyaç duyar. Kural olarak, havadaki karbondioksit ve su buharı konsantrasyonu düzenlenir, ancak bazen oksijen de düzenlenir. Farklı hücre kültürleri için besin ortamları, bileşim, glukoz konsantrasyonu, büyüme faktörlerinin bileşimi vb. açılarından farklılık gösterir. Memeli hücre kültürü ortamında kullanılan büyüme faktörleri en yaygın olarak kan serumu ile birlikte eklenir. Bu durumda risk faktörlerinden biri, hücre kültürünün prionlar veya virüslerle enfekte olma olasılığıdır. Yetiştirmede önemli görevlerden biri, kontamine bileşenlerin kullanımını önlemek veya en aza indirmektir. Ancak pratikte bu her zaman sağlanamamaktadır. En iyi ama aynı zamanda en pahalı yol, serum yerine saflaştırılmış büyüme faktörleriyle takviye etmektir.
Hücre hatlarının çapraz kontaminasyonu[ | ]
Bilim adamları, hücre kültürleriyle çalışırken çapraz bulaşma sorunuyla karşılaşabilirler.
Büyüyen hücrelerin özellikleri[ | ]
Hücreleri büyütürken, kalıcı bölünme kültürde çok fazla olabilir ve sonuç olarak aşağıdaki sorunlar ortaya çıkar:
Hücre kültürlerinin normal işleyişini sürdürmek ve olumsuz olayları önlemek için, besin ortamının değiştirilmesi, hücre yaşlanması ve transfeksiyon periyodik olarak gerçekleştirilir. Kültürlerin bakteri, maya veya diğer hücre hatları ile kontaminasyonunu önlemek için, tüm manipülasyonlar genellikle steril bir kutu içinde aseptik koşullar altında gerçekleştirilir. Mikroflorayı baskılamak için kültür ortamına antibiyotikler (penisilin, streptomisin) ve antifungaller (amfoterisin B) eklenebilir.
İnsan hücrelerinin yetiştirilmesi, bir şekilde biyoetik kurallarına aykırıdır, çünkü izole olarak büyütülen hücreler ana organizmadan daha uzun yaşayabilir ve daha sonra deneyler yapmak veya yeni tedaviler geliştirmek ve bundan kâr elde etmek için kullanılabilir. Bu alandaki ilk mahkeme kararı, hastaların kendi rızaları ile alınan organlardan elde edilen hücre dizilerinin mülkiyetine sahip olmadığı John Moore v. California Üniversitesi davasında Kaliforniya Yüksek Mahkemesinde verilmiştir.
hibridoma [ | ]
Hücre kültürlerinin kullanımı[ | ]
Kitle hücre kültürü, viral aşıların ve çeşitli biyoteknoloji ürünlerinin endüstriyel üretiminin temelidir.
Biyoteknoloji Ürünleri[ | ]
Hücre kültürlerinden endüstriyel bir yöntemle enzimler, sentetik hormonlar, monoklonal antikorlar, interlökinler, lenfokinler, antitümör ilaçlar gibi ürünler üretilir. Pek çok basit protein, bakteri kültürleri kullanılarak nispeten kolayca elde edilebilse de, glikoproteinler gibi daha karmaşık proteinler şu anda yalnızca hayvan hücrelerinden elde edilebilmektedir. Bu önemli proteinlerden biri de eritropoietin hormonudur. Büyüyen memeli hücre kültürlerinin maliyeti oldukça yüksektir, bu nedenle şu anda böcek veya daha yüksek bitki hücre kültürlerinde karmaşık proteinler üretme olasılığına yönelik araştırmalar yapılmaktadır.
doku kültürleri[ | ]
Hücre kültürü, doku kültürü teknolojisinin ve doku mühendisliğinin ayrılmaz bir parçasıdır, çünkü hücrelerin büyümesi ve onları ex vivo yaşayabilir bir durumda tutmanın temelini tanımlar.
Aşılar [ | ]
Şu anda hücre kültürü teknikleri kullanılarak çocuk felci, kızamık, kabakulak, kızamıkçık ve su çiçeği aşıları üretilmektedir. Bir H5N1 grip salgını tehdidi nedeniyle, Amerika Birleşik Devletleri hükümeti şu anda hücre kültürlerini kullanarak bir kuş gribi aşısı araştırmasını finanse ediyor.
Memeli olmayan hücre kültürleri[ | ]
Bitki hücre kültürleri[ | ]
Bitki hücre kültürleri genellikle ya sıvı besin ortamında süspansiyon olarak ya da katı besin bazında kallus kültürü olarak yetiştirilir. Farklılaşmamış hücrelerin ve kallusun yetiştirilmesi, bitki büyüme hormonları olan oksinler ve sitokininlerin belirli bir dengesinin korunmasını gerektirir.
Bakteriyel, maya kültürleri[ | ]
Ana makale:
Az sayıda bakteri ve maya hücresinin yetiştirilmesi için hücreler, jelatin veya agar-agar bazlı katı bir besin ortamı üzerine kaplanır. Seri üretim için, sıvı besin ortamlarında (et sularında) yetiştirme kullanılır.
virüs kültürleri[ | ]
Hücre kültürleri - bunlar, sabit çevre koşullarında büyüyen hücrelerin genetik olarak homojen popülasyonlarıdır. Bunlar normal insan, hayvan, bitki veya habis tümör hücrelerinin suşları olabilir.
Yetiştirme koşulları
Hücreler genellikle cam kavanozlara yerleştirilir, bu nedenle in vitro çalışma (Latince In - in, vitro - camdan) adı verilir, ancak kültürler artık daha çok plastik kaplarda yetiştirilmektedir. Dokulardan izole edilen hücreler 38°C 39°C (hayvan ve insan hücreleri için) ve 22°C 28°C (bitki hücreleri için) sıcaklıkta uygun bileşime sahip bir besleyici ortamda inkübe edilir. Hücreler daha sonra bir süspansiyon veya tek tabaka halinde büyür. Süspansiyon kültürü, tek tek hücrelerin veya bunların küçük gruplarının, havalandırma ve karıştırma sağlayan ekipman kullanılarak sıvı bir besin ortamında süspansiyon halinde yetiştirilmesidir. Karakteristik özellik Süspansiyon kültürleri morfolojik ve biyokimyasal heterojenlikleridir. Bir hücre popülasyonu, boyut ve şekil bakımından farklılık gösteren hücreler içerir.
Başvuru
Sitolojide uygulama
Sitolojide Bu method uygun çünkü kültürdeki hücrelere çeşitli biyokimyasal manipülasyonlar için kolayca erişilebilir. Onlarla çalışırken radyoaktif maddeler, zehirler, hormonlar vb. gerekli süre için doğru konsantrasyonda verilebilir. Bu maddelerin miktarı, hayvan deneylerinden çok daha az olabilir. Maddenin karaciğer tarafından metabolize edilmesi, böbrekler tarafından atılması veya kaslarda birikmesi tehlikesi yoktur. Bu, maddenin hücre üzerindeki etki hızının veya hücre tarafından asimilasyonunun gerçek değerlerini sağlar.
Canlı bitki hücrelerini incelemek için, izole edilmiş bir protoplast kültürü kullanılır. İzole edilmiş protoplastlar, hücre duvarı mekanik veya enzimatik olarak çıkarıldığı için "çıplak" bitki hücreleri olarak tanımlanabilir. İzole edilmiş protoplastlar sistemi, hücresel düzeyde seçilimi gerçekleştirmeyi, çok sayıda bireysel hücre ile küçük bir hacimde çalışmayı, doğrudan gen aktarımı yoluyla yeni bitki formları elde etmeyi ve sistematik olarak uzak bitkiler arasında somatik melezler elde etmeyi mümkün kılar. türler. Hücre zarının yenilenmesi izole edilmiş protoplastlarda hemen başladığından, bunlar selüloz mikrofibrillerinin oluşumunu incelemek için uygun bir nesnedir.
virolojide uygulama
Virolojide, hücre kültürleri çok yaygın olarak kullanılmaktadır, çünkü diğer yöntemlerin aksine laboratuvarda çalışmak nispeten kolaydır - tavuk embriyolarında veya canlı hayvanlarda büyüyen virüsler. Ek olarak, virüslerin sitopatik etkisi, hücre içi inklüzyonların, plakların oluşumu, hemadsorpsiyon ve hemaglütinasyon reaksiyonlarında ve renk bozulması ile bir hücre kültürü tek tabakası üzerinde iyi bir şekilde incelenebilir. Hücre kültürleri ile çalışırken az sayıda kültür ile çalışıldığında önemli sonuçlar alınabilir. Bunu veya bu gerçeği doğrulamak için yüzlerce veya binlerce laboratuvar hayvanını gerektiren deneyler, aynı sayıda hücre kültürü üzerinde eşit istatistiksel kesinlikle gerçekleştirilebilir. Bu nedenle, laboratuvarın bir vivaryum bulundurmasına gerek yoktur ve hasta hayvanlarla ilgilenmenin etik bir yönü yoktur.
Mekanizmaları habis tümörlerinkine benzer olan virüsler tarafından hücrelerin transformasyonu da incelenmektedir.
Farmakolojide uygulama
Hücre kültürleri, ilaç olarak kullanılabilecek maddelerin etkilerini test etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Hücre kültürlerinde elde edilen sonuçların tüm organizma için tahmin edilememesine rağmen, belirli bir madde birkaç farklı kültür hattından alınan hücrelerin aktivitesini bozuyorsa, bu madde kullanıldığında da olumsuz bir etki beklenmelidir. vücuda tanıtıldı.
Biyoteknolojide uygulama
Spesifik hücre kültürü, değerli bir hormon kaynağıdır ve diğer biyolojik olarak aktif maddeler. Şimdiden antiviral protein interferon üretimi için kullanılıyorlar.
Genetikte uygulama
Genetikte, hücrelerin kültürde büyüme yeteneği aşağıdaki alanlarda kullanılır:
- klonlama
- Hücre depolama
- Mutant hücrelerin elde edilmesi ve onlarla çalışılması
Hücre kültürü türleri
1. Birincil tripsinizasyon - ezilmiş insan ve hayvan dokularından, bunları tripsin veya diğer enzimlerle işleyerek elde edilir. Yalnızca 5-10 bölüme (geçişlere) dayanın.
2. nakledilebilir - insan ve hayvan tümörlerinin türevleri oldukları için sınırsız üreme yeteneği kazanmış hücreler.
3. İçme resplit (diploid) - orijinal diploid kromozom setini korurken 100 geçişe kadar dayanabilir.
En yaygın hücre hatları
| hücre çizgisi | Kısaltmanın açıklaması | organizma | Tekstil | Morfoloji | Notlar ve bağlantılar | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 293-T | İnsan | böbrek (embriyonik) | HEK-293 ECACC'den türetilmiştir | |||
| 3T3 hücreleri | "3 günlük transfer, inokulum 3 x 105 hücre" | fare | embriyonik fibroblastlar | NIH 3T3 ECACC olarak da bilinir | ||
| 721 | İnsan | melanom | ||||
| 9 litre | fare | glioblastoma | ||||
| A2780 | İnsan | yumurtalık | Yumurtalık kanseri | ECACC | ||
| A2780ADR | İnsan | yumurtalık | Adriamisine dirençli A2780 türevi | ECACC | ||
| A2780cis | İnsan | yumurtalık | A2780'in sisplatine dirençli türevi | ECACC | ||
| A172 | İnsan | glioblastoma | kötü huylu glioma | ECACC | ||
| A431 | İnsan | cilt epiteli | skuamöz hücre karsinoması | ECACCCCell Hattı Veri Tabanı | ||
| A-549 | İnsan | akciğer kanseri | epitelyum | DSMZECACC | ||
| B35 | fare | nöroblastom | ATCC | |||
| BCP-1 | İnsan | periferik lökositler | HIV + lenfoma | ATCC | ||
| BEAS-2B | bronşiyal epitel + adenovirüs 12-SV40 virüs hibrit (Ad12SV40) | İnsan | akciğerler | epitelyum | ATCC | |
| bEnd.3 | beyin endotel | fare | korteks | endotelyum | ATCC | |
| BHK-21 | "Bebek Hamster Böbreği" | hamster | tomurcuk | fibroblastlar | ECACCOlympus | |
| BR 293 | İnsan | göğüs | kanser | |||
| BxPC3 | Pankreas karsinomu hattı 3'ün biyopsi ksenografı | İnsan | pankreas adenokarsinomu | epitelyum | ATCC | |
| C3H-10T1/2 | fare | embriyonik mezenkimal hücreler | ECACC | |||
| C6/36 | sivrisinek | larva dokusu | ECACC | |||
| CHO | Çin hamsteri yumurtalığı | Cricetulus griseus | yumurtalık | epitelyum | ECACCICLC | |
| COR-L23 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| COR-L23/KPR | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| COR-L23/5010 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| COR-L23/R23 | İnsan | akciğerler | epitelyum | ECACC | ||
| COS-7 | Cercopithecus aethiops, köken kusurlu SV-40 | maymun Cercopithecus aethiops | tomurcuk | fibroblastlar | ECACCATCC | |
| KML T1 | Kronik Miyelod Lösemi T-lenfosit 1 | İnsan | Kronik miyeloid lösemi | T hücreli lösemi | Kan | |
| CMT | köpek meme tümörü | köpek | göğüs | epitelyum | ||
| D17 | köpek | osteosarkom | ECACC | |||
| DH82 | köpek | histiyositoz | monositler / makrofajlar | ECACC | ||
| DU145 | İnsan | kanser | prostat | |||
| DuCaP | Dura mater Prostat Kanseri | İnsan | epitelyum | 11317521 | ||
| EL4 | fare | T hücreli lösemi | ECACC | |||
| EMT6/AR1 | fare | göğüs | epitelyum | ECACC | ||
| EMT6/AR10.0 | fare | göğüs | epitelyum | ECACC | ||
| FM3 | İnsan | metastaz lenf düğümü | melanom | |||
| H1299 | İnsan | akciğerler | kanser | |||
| H69 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| HB54 | hibridoma | hibridoma | L243 mAb salgılar (HLA-DR'ye karşı) | İnsan İmmünolojisi | ||
| HB55 | hibridoma | hibridoma | MA2.1 mAb salgılar (HLA-A2 ve HLA-B17'ye karşı) | İmmünoloji Dergisi | ||
| HCA2 | İnsan | fibroblastlar | Genel Viroloji Dergisi | |||
| HEK-293 | insan embriyonik böbrek | İnsan | böbrek (embriyonik) | epitelyum | ATCC | |
| HeLa | Henrietta Eksikleri | İnsan | Rahim ağzı kanseri | epitelyum | DSMZECACC | |
| hepa1c1c7 | klon 1'in klon 7'si hepatoma hattı 1 | fare | hepatom | epitelyum | ECACC | |
| HL-60 | insan lösemisi | İnsan | miyeloblastlar | kan hücreleri | ECACCDSMZ | |
| HMEC | insan meme epitel hücresi | İnsan | epitelyum | ECACC | ||
| HT-29 | İnsan | kolonik epitel | adenokarsinom | ECACC Hücre Hattı Veri Tabanı |
||
| Jurkat | İnsan | T hücreli lösemi | Beyaz kan hücreleri | ECACC | ||
| JY | İnsan | lenfoblastlar | B hücreleri, EBV ölümsüzleştirme | |||
| K562 | İnsan | lenfoblastlar | ECACC | |||
| ku812 | İnsan | lenfoblastlar | eritrolösemi | ECACC | ||
| KCL22 | İnsan | lenfoblastlar | Kronik miyeloid lösemi | |||
| KYO1 | Kyoto 1 | İnsan | lenfoblastlar | Kronik miyeloid lösemi | DSMZ | |
| LNCap | Lenf düğümü Prostat Kanseri | İnsan | prostat adenokarsinomu | epitelyum | ECACCATCC | |
| Ma-Mel 1, 2, 3….48 | İnsan | melanom hücre hatları | ||||
| MC-38 | fare | adenokarsinom | ||||
| MCF-7 | Michigan Kanser Vakfı-7 | İnsan | göğüs | memenin invaziv duktal karsinomu | ER+, PR+ | |
| MCF-10A | Michigan Kanser Vakfı | İnsan | göğüs | epitelyum | ATCC | |
| MDA-MB-231 | İnsan | göğüs | kanser | ECACC | ||
| MDA-MB-468 | MD Anderson-Metastatik Meme | İnsan | göğüs | kanser | ECACC | |
| MDA-MB-435 | MD Anderson-Metastatik Meme | İnsan | göğüs | melanom veya karsinom (mutabakat yok) | Cambridge Patolojisi ECACC | |
| MDCK II | Madin Darby köpek böbreği | köpek | tomurcuk | epitelyum | ECACC | |
| MOR/0,2R | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| NCI-H69/KPR | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| NCI-H69 / LX10 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| NCI-H69 / LX20 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| NCI-H69/LX4 | İnsan | akciğerler | ECACC | |||
| NIH-3T3 | Ulusal Enstitüler Sağlık, 3 günlük transfer, inokulum 3 x 10 Mayıs hücreleri | fare | embriyo | fibroblastlar | ECACCATCC | |
| NALM-1 | Periferik kan | Kronik miyeloid lösemi | Kanser Genetiği ve Sitogenetik | |||
| NW-145 | melanom | ESDAB | ||||
| OPCN/OPCT | Onyvax Prostat Kanseri…. | prostat kanseri hücre hatları | Asterand | |||
| akran | İnsan | T hücreli lösemi | DSMZ | |||
| PNT-1A / PNT 2 | prostat kanseri hücre hatları | ECACC | ||||
| Renca | böbrek karsinomu | fare | böbrek kanseri | |||
| RIN-5F | fare | pankreas | ||||
| RMA/RMAS | fare | T hücre kanseri | ||||
| Saos-2 | İnsan | osteosarkom | ECACC | |||
| Sf-9 | Spodoptera frugiperda | kelebek Spodoptera frugiperda | yumurtalık | DSMZECACC | ||
| SkBr3 | İnsan | meme kanseri | ||||
| T2 | İnsan | B hücrelerinin hibridoması ve T hücreli lösemi | DSMZ | |||
| T-47D | İnsan | göğüs | kanal karsinomu | |||
| T84 | İnsan | kolon karsinomu/akciğer metastazları | epitelyum | ECACCATCC | ||
| THP1 | İnsan | monositler | baharatlı Miyeloid lösemi | ECACC | ||
| U373 | İnsan | glioblastoma-astrositom | epitelyum | |||
| U87 | İnsan | glioblastoma-astrositom | epitelyum | Abcam | ||
| U937 | İnsan | lösemik monositik lenfoma | ECACC | |||
| VCaP | Vertebra Prostat Kanseri | İnsan | metastatik prostat kanseri | epitelyum | ECACC | |
| Vero | "Vera Reno" / "Vero" ("gerçek") | afrika yeşil maymunu | böbrek epiteli | ECACC | ||
| WM39 | İnsan | deri | birincil melanom | |||
| WT-49 | İnsan | lenfoblastlar | ||||
| x63 | fare | melanom | ||||
| YAC-1 | fare | lenfoma | Hücre Hattı Veri Tabanı ECACC | |||
| YAR | İnsan | B lenfositleri | dönüştürülmüş EBV | İnsan İmmünolojisi |
hücre kültürleri
Hücre kültürü teknolojisi, canlı organizmaların dışında büyüyen hücrelerden oluşur.
Bitki hücre kültürleri
Bitki hücre kültürleri sadece transgenik bitkilerin yaratılmasında önemli bir adım değil, aynı zamanda çevresel olarak kabul edilebilir ve ekonomik olarak uygulanabilir porsuk ağacında bulunan ve Taxol (Taxol) adı verilen bir kemoterapi ilacı olarak üretilen paklitaksel (paklitaksel) gibi tedavi edici özelliklere sahip doğal ürünlerin kaynağı. Bitki hücre kültürleri ayrıca gıda endüstrisinde tat ve renk olarak kullanılan maddeleri üretmek için de kullanılır.
Böcek hücre kültürleri
Böcek hücre kültürlerinin incelenmesi ve uygulanması, zararlı böcekleri yok eden, ancak yararlı böceklerin yaşayabilirliğini etkilemeyen ve aynı zamanda insan vücudunda birikmeyen biyolojik maddelerin geliştirilmesi ve insanlar tarafından kullanılması olanaklarını genişletmektedir. çevre. Biyolojik haşere kontrol yöntemlerinin faydaları uzun süredir bilinmesine rağmen, bu tür biyolojik olarak aktif maddelerin ve böcekler ve mikroorganizmalar için patojenlerin endüstriyel miktarlarda üretilmesi çok zordur. Böcek hücre kültürlerinin kullanılması bu sorunu tamamen çözebilir. Ayrıca tıpkı bitki hücreleri gibi böcek hücreleri de ilaç sentezlemek için kullanılabilir. Bu perspektif şu anda aktif olarak araştırılmaktadır. Ayrıca böcek hücrelerinin VLP aşılarının (VLP - virüs benzeri parçacık - virüs benzeri parçacıklar) üretimi için kullanılması olasılığı bulaşıcı hastalıklar, örneğin SARS ve grip. Bu teknik, maliyetleri büyük ölçüde azaltabilir ve geleneksel tavuk yumurtası yöntemiyle ilişkili güvenlik endişelerini ortadan kaldırabilir.
memeli hücre kültürleri
Memeli hücre kültürleri, on yıldan fazla bir süredir besi hayvanı yetiştirme uzmanları tarafından kullanılan ana araçlardan biri olmuştur. Laboratuvar koşullarında üstün kalitede ineklerden elde edilen yumurtalar, ilgili boğaların spermatozoaları ile döllenir. Elde edilen embriyolar birkaç gün boyunca bir test tüpünde büyütülür ve ardından taşıyıcı anne ineklerin rahmine implante edilir. Aynı teknik, insan tüp bebek tedavisinin temelidir.
Şu anda, memeli hücre kültürlerinin kullanımı suni tohumlamanın çok ötesine geçmektedir. Memeli hücreleri, yeni ilaçların güvenliğini ve etkinliğini test etmek için hayvanların kullanımını tamamlayabilir ve belki de bir gün yerini alabilir. Ayrıca, tıpkı bitki ve böcek hücreleri gibi, memeli hücreleri de ilaçları, özellikle de genetiği değiştirilmiş mikroorganizmalar tarafından sentezlenemeyecek kadar karmaşık olan bazı hayvan proteinlerini sentezlemek için kullanılabilir. Örneğin monoklonal antikorlar, memeli hücre kültürleri tarafından sentezlenir.
Bilim adamları ayrıca aşı üretmek için memeli hücrelerini kullanmayı düşünüyorlar. 2005 yılında ABD Sağlık ve İnsani Hizmetler Departmanı Sanofi Pasteur'e 97 milyon dolarlık bir sözleşme verdi. Şirketin uzmanlarının görevi, grip aşılarının gelişimini hızlandırmak ve buna bağlı olarak insanlığın bir salgına karşı hazırlıklılığını artırmak için memeli hücrelerinin yetiştirilmesine yönelik yöntemler geliştirmektir.
Kültür Temelli Tedaviler yetişkin kök hücreler vücudun bazı dokularında bulunan (kemik iliği, yağ dokusu, beyin vb.) klinik uygulama. Araştırmacılar, kök hücrelerin vücut tarafından hasarlı dokuyu onarmak için kullanılabileceğini bulmuşlardır. Yetişkin hematopoietik kök hücreler uzun süredir nakil olarak kullanılmaktadır. kemik iliği. Her tür kan hücresinin olgunlaşma ve oluşum süreçlerini eski haline getirmek için gereklidirler. Bu tür hücreler, kordon kanından büyük miktarlarda elde edilebilir, ancak izolasyonları oldukça karmaşık bir süreçtir.
Araştırmacılar şu anda plasenta ve yağ dokusundan kök hücre izole etme yöntemleri üzerinde çalışıyorlar. Bir dizi uzman, hücresel yeniden programlama için yöntemlerin geliştirilmesiyle uğraşıyor - vücudun olgun hücrelerini, örneğin deri hücrelerini farklılaşmamış bir duruma geri döndürmek ve ardından bunların gerekli doku tipindeki hücrelere farklılaşmalarının uyarılması.
Embriyonik kök hücreleri
kullanım embriyonik kök hücreleri birçok hastalık için potansiyel bir tedavi yöntemi olarak da kabul edilmektedir. Adından da anlaşılacağı gibi embriyolardan, özellikle yumurtalardan gelişen, in vitro (tüp bebek kliniklerinde) döllenmiş ve donörlerin rızasıyla bilimsel kullanım için araştırmacılara bağışlanmış embriyolardan cenin hücreleri elde edilir. Blastosist'ler genellikle kullanılır - mikroskop altında birkaç yüz hücreden oluşan toplara benzeyen 4-5 günlük embriyolar.
İnsan embriyonik kök hücrelerinin izolasyonu için, blastokistin iç hücre kütlesi, hücrelerin aktif olarak bölünmeye başladığı, besin açısından zengin bir kültür ortamına aktarılır. Birkaç gün içinde hücreler kültür plakasının tüm yüzeyini kaplar. Bundan sonra, araştırmacılar bölünen hücreleri toplar, parçalara ayırır ve yeni plakalara yerleştirir. Hücrelerin yeni plakalara taşınması işlemine denir. yeniden tohumlama ve aylar boyunca birçok kez tekrarlanabilir. Hücre geçiş döngüsü denir geçit. Kültürde altı ay veya daha uzun süre farklılaşmadan var olan (yani, pluripotent kalan - vücudun herhangi bir dokusunun hücrelerine farklılaşma yeteneğine sahip) ve normal bir gen setini tutan embriyonik kök hücrelere denir. embriyonik kök hücre hattı.
Kültür plakasının iç yüzeyi genellikle, bölünmemesi için genetiği değiştirilmiş fare embriyolarından alınan deri hücreleriyle kaplanır. Bu hücreler, embriyonik hücrelerin yüzeye tutturulduğu bir besleyici tabaka - bir "besleyici substrat" oluşturur. Bilim adamları geliştirmeye çalışıyor mevcut yöntem ve fare hücrelerini kullanma ihtiyacını ortadan kaldırır, çünkü bunların varlığı her zaman alerjik reaksiyona neden olabilecek insan hücrelerinin kültürüne giren viral partiküller ve fare proteinleri riskini ortaya çıkarır.
Kök hücre tedavisinin ve doku mühendisliğinin maksimum değeri, terapötik kök hücreler ve bunlardan yetiştirilen dokuların genetik olarak alıcının hücreleriyle aynı olması durumunda elde edilebilir. Bu nedenle, hastanın kendisi kaynak değilse, kök hücreler, genetik materyallerini alıcının genleriyle değiştirerek değiştirilmeli ve ancak o zaman belirli bir tipteki hücrelere farklılaştırılmalıdır. Şu anda, genetik materyali değiştirme ve yeniden programlama prosedürü yalnızca embriyonik kök hücrelerle başarılı bir şekilde gerçekleştirilebilir.