У дома » Йога » Основни класове антигени. Съвременни методи за лабораторна диагностика на автоимунни заболявания Свързване на антиген с антиген-специфични антитела или Т-клетки

Основни класове антигени. Съвременни методи за лабораторна диагностика на автоимунни заболявания Свързване на антиген с антиген-специфични антитела или Т-клетки

1673 0

Няколко основни химични семейства могат да бъдат антигени.

Въглехидрати (полизахариди).Полизахаридите са имуногенни само когато са свързани с протеини-носители. Например, полизахаридите, които са част от по-сложни молекули (гликопротеини), ще предизвикат имунен отговор, някои от които са насочени директно към полизахаридния компонент на молекулата. Имунен отговор, представен главно от антитела, може да бъде индуциран срещу много видове полизахаридни молекули, като компоненти на микроорганизми и еукариотни клетки. Отличен пример за полизахаридна антигенност е имунният отговор, свързан с ABO кръвни групи. Полизахаридите в този случай са на повърхността на еритроцитите.
Липиди.Липидите рядко са имуногенни, но може да бъде предизвикан имунен отговор към тях, ако липидите са конюгирани с протеини носители. По този начин липидите могат да се разглеждат като хаптени. Отбелязани са също имунни отговори към гликолипиди и сфинголипиди.
Нуклеинова киселина.Нуклеиновите киселини са слаби имуногени сами по себе си, но стават имуногенни, когато се свържат с протеини носители. Нативната спирална ДНК обикновено не е имуногенна при животни. Въпреки това, в много случаи са отбелязани имунни отговори към нуклеинови киселини. Важен пример в клиничната медицина е появата на анти-ДНК антитела при пациенти със системен лупус еритематозус.
катерици.На практика всички протеини са имуногенни. Така най-често имунният отговор се развива към протеини. Освен това, колкото по-високо е нивото на протеинова сложност, толкова по-силен е имунният отговор към този протеин. Размерът и сложността на протеиновите молекули определят наличието на множество епитопи.

Свързване на антиген с антиген-специфични антитела или Т клетки

Свързване на антигени с антитела, взаимодействие на антиген с В и Т клетки и последващи събития. На този етап е важно да се подчертае само, че ковалентните връзки не участват в свързването на антигена към антитялото или Т-клетъчните рецептори. Нековалентното свързване може да включва електростатични взаимодействия, хидрофобни взаимодействия, водородни връзки и сили на Ван дер Ваалс.

Тъй като тези взаимодействащи сили са относително слаби, свързването между антигена и неговото комплементарно място на антигенния рецептор трябва да се осъществи в достатъчно голяма област, за да се обобщят всички възможни взаимодействия. Това състояние е в основата на изключителната специфичност на наблюдаваните имунологични взаимодействия.

Кръстосана реактивност

Тъй като макромолекулните антигени съдържат няколко епитопа, разделени един от друг, някои от тези молекули могат да бъдат променени, без да се променя напълно тяхната имуногенетична и антигенна структура. Това има важни последици при имунизиране срещу силно патогенни микроорганизми или изключително токсични съединения. Наистина не е разумно да се имунизира с патогенен токсин. Въпреки това е възможно да се унищожи биологичната активност на такъв токсин и различни други токсини (например бактериални токсини или змийски отрови), като същевременно се запази тяхната имуногенност.

Токсин, модифициран до такава степен, че вече не е токсичен, но все още запазва някои имунохимични характеристики, се нарича токсоид. По този начин можем да кажем, че токсоидът имунологично реагира кръстосано с токсина. Съответно, възможно е, чрез имунизиране на индивид с токсоид, да се предизвика имунен отговор към определени епитопи, които са запазени върху токсоида в същата форма, както върху токсина, тъй като те не са били унищожени по време на модификацията.

Въпреки че молекулите на токсина и токсоида се различават по много физикохимични и биологични характеристики, те са имунологично кръстосано реактивни. Достатъчен брой подобни епитопи позволява да се индуцира имунен отговор към токсоида и да се допринесе за ефективна защита срещу самия токсин. Имунологична реакция, при която имунни компоненти, независимо дали клетки или антитела, реагират с две молекули, които имат еднакви епитопи, но се различават по други начини, се нарича кръстосана реакция.

Когато две съединения са имунологично кръстосано реактивни, те споделят един или повече епитопи и имунен отговор към едно от съединенията ще разпознае един или повече от същите епитопи на другото съединение и ще го включи в реакцията. Друга форма на кръстосана реактивност възниква, когато антитела или клетки, специфични за един епитоп, се свързват, обикновено по-слабо, с друг епитоп, който не е напълно идентичен, но прилича на първия епитоп по структура.

Термините "хомоложен" и "хетероложен" се използват, за да покажат, че антигенът, използван за имунизация, е различен от този, срещу който произведените имунни компоненти ще реагират по-късно. Терминът "хомоложен" означава, че антигенът и имуногенът са еднакви.

Терминът "хетероложен" показва, че веществото, използвано за индуциране на имунния отговор, е различно от веществото, което по-късно се използва за реакция с продуктите на индуцирания отговор. В последния случай хетероложният антиген може или не може да реагира с имунни компоненти. Когато възникне реакция, може да се заключи, че хетероложните и хомоложните антигени проявяват имунологична кръстосана реактивност.

Въпреки че специфичността е основният критерий в имунологията, имунологичната кръстосана реактивност възниква на много нива. Това не означава, че ролята на имунологичната специфичност е намалена, а по-скоро показва, че съединения с кръстосана реактивност имат същите антигенни детерминанти.

В случаите на кръстосана реактивност антигенните детерминанти на кръстосано реагиращите вещества могат да имат идентични химични структури или да се състоят от идентични, но не идентични, физикохимични структури. В горния пример токсинът и съответният му токсоид представляват две молекули: токсинът е оригиналната молекула, а токсоидът е модифицирана, която е кръстосано реагираща с оригиналната (природна) молекула.

Има и други примери за имунологична кръстосана реактивност, при която две вещества, които я имат, не са свързани помежду си, освен че споделят един или повече епитопи, по-точно едно или повече места, които имат еднакви триизмерни характеристики. Тези вещества се класифицират като хетерофилни антигени. Например, антигени на човешка кръвна група А реагират с антисерум, приготвен срещу полизахарид (тип XIV) пневмококова капсула. По същия начин антигените на човешката кръвна група B реагират с антитела срещу определени щамове на Escherichia coli. В тези примери за кръстосана реактивност, микробните антигени се наричат хетерофилни антигени (по отношение на антигените на кръвната група).

Адюванти

За подобряване на имунния отговор към представения антиген често се използват различни добавки и ексципиенти. Адювант (от латински adjuvare - помагам) е вещество, което при смесване с имуноген засилва имунния отговор срещу този имуноген. Важно е да се прави разлика между носител на хаптен и адювант. Хаптенът става имуногенен след ковалентно конюгиране с носител; не може да бъде имуногенен, когато се смесва с адювант. По този начин адювантът засилва имунния отговор към имуногените. но не придава имуногенност на хаптените.

Адювантите се използват за засилване на имунния отговор към антигени повече от 70 години. В момента има нарастващ интерес към идентифицирането на нови адюванти за използване при ваксинация, тъй като много кандидати за ваксина не са достатъчно имуногенни. Това е особено важно за пептидните ваксини.

Механизмът на действие на адюванта включва: 1) увеличаване на биологичния и имунологичния полуживот на антигените на ваксината; 2) повишено производство на локални възпалителни цитокини; 3) подобряване на доставянето, обработката на антигени и тяхното представяне (представяне) от APC, особено от дендритни клетки. Емпирично е установено, че адювантите, съдържащи микробни компоненти (напр. екстракти от микобактерии), са най-добри. Патогенните компоненти карат макрофагите и дендритните клетки да експресират костимулиращи молекули и да секретират цитокини.

Наскоро беше показано, че такава индукция от микробни компоненти включва молекули, които разпознават структури на патогенни микроорганизми (напр. TLR 2), експресирани от тези клетки. По този начин, свързването на микробни компоненти с TLR дава на клетките сигнал за експресия на костимулиращи молекули и секретиране на цитокини.

Въпреки че много различни адюванти са тествани в експерименти с животни (Таблица 3.2) и в експерименти с хора, само един е започнал да се използва за рутинна ваксинация. В момента единствените адюванти, одобрени за използване в патентовани човешки ваксини в САЩ, са алуминиев хидрат и алуминиев фосфат.

като компонент неорганична солалуминиевият йон се свързва с протеини, причинявайки тяхното утаяване, което засилва възпалителния отговор, който неспецифично повишава имуногенността на антигена. След инжектиране утаеният антиген се освобождава от мястото на инжектиране по-бавно от нормалното. Освен това, ако размерът на антигена се увеличи в резултат на утаяване, това ще увеличи вероятността макромолекулата да бъде подложена на фагоцитоза.

Много адюванти се използват в експерименти с животни. Един от често използваните адюванти е Пълен адювант на Freund (FCA), състоящ се от убити Mycobacterium tuberculosis или M.Butyricum, суспендирани в масло. Впоследствие от тях се приготвя емулсия с воден разтворантиген. Емулсията вода в масло, съдържаща адювант и антиген, позволява антигенът да се освобождава бавно и постепенно, удължавайки излагането на имуногена на реципиента. Други микроорганизми, използвани като адюванти, са Bacillus Calmette-Guerin (BCG) (атенюиран от Mycobacterium), Corynebacterium parvum и Bordetella pertusis.

Всъщност много от тези адюванти използват способността на молекули, експресирани от микроби, да активират имунните клетки. Такива молекули включват липополизахариди (LPS), бактериална ДНК, съдържаща неметилирани CpG динуклеотидни повторения и бактериални протеини на топлинен шок. Много от тези микробни адюванти свързват рецептори, които разпознават патогенни структури като TLRs. Свързването на тези рецептори, експресирано от много видове клетки на вродената имунна система, насърчава стимулирането на адаптивен отговор от В и Т лимфоцитите. Например, дендритните клетки са важни APC, чрез които

Таблица 3.2. Известни адюванти и техния механизъм на действие действие на микробни адюванти. Те отговарят със секрецията на цитокини и експресията на костимулиращи молекули, които от своя страна стимулират активирането и диференциацията на антиген-специфичните Т клетки.

Адювант	Състав	Механизъм на действие
Алуминиев хидроксид или фосфат (стипца)	Алуминиев хидроксиден гел
Алуминий с дипептид, изолиран от микобактерии	Хидратен алуминиев гел с мурамил дипептид
Алуминий с Bordetella pertusis	Смърч алуминиев хидрат с убита Bordetella pertusis	Повишено усвояване на APC антигени; забавяне на освобождаването на антигена; индуциране на костимулиращи молекули върху APC
Пълен адювант на Freund	Водно-маслена емулсия с убити микобактерии	Повишено усвояване на APC антигени; забавяне на освобождаването на антигена; индуциране на костимулиращи молекули върху APC
Непълен адювант на Freund	Водно-маслена емулсия	Повишено усвояване на APC антигени; забавено освобождаване на антиген
Имуностимулиращи комплекси	Отворени клетъчни структури, съдържащи холестерол и смес от сапонини	Освобождаване на антиген в цитозола; позволяват да се индуцират Т-клетъчни цитотоксични отговори

Р. Койко, Д. Съншайн, Е. Бенджамини

Имунен отговор на организма: определение, условия на развитие. Антигени: структура, свойства, класификация. Т-зависими и Т-независими антигени. Суперантигени.

имунен отговор- това е сложна многокомпонентна кооперативна реакция на ИС на организма, предизвикана от антиген и насочена към неговото елиминиране. Феноменът на имунния отговор е в основата на имунитета.

Имунният отговор зависи от: 1 Антиген - свойства, състав, молекулно тегло, доза, честота на контакт, продължителност на контакта; 2 Състояния на тялото - имунологична реактивност; 3 Условия на околната среда.

Имунният отговор се характеризира с: 1 Клоналност - има клонове на Т- и В-лимфоцити, които са специфични за определени епитопи (тяхната съвкупност се нарича детерминантна група); 2 Специфичност; 3 Разновидност на AT и TCR; 4 Образуване в клетки и молекули на ефектори и клетки на паметта 5 Специфични механизми действия са съвместими с неспецифични 6 Контролиране на генома 7 Разделяне на естествени и изкуствени;

Компоненти на имунния отговор: 1 Антигени; 2 Антиген-обработващи и антиген-представящи клетки (имакрофаги); 3 Антиген-разпознаващи клетки (В- и Т-лимфоцити и техните субпопулации), 4 Антиген-разпознаващи молекули (VCR, основни молекули на хистосъвместимия комплекс); 5 Цитокини - хемопоетични, растежни, регулаторни, рецепторни.

имунен отговор се развива в перифернаталимфоидни органи. В AI участват макрофаги, Т- и В-лимфоцити, фибробласти и ретикуларни клетки. Разграничете хуморален, клетъчен смесен имунен отговор, чието развитие протича на няколко етапа.

ГМО(образуване на антитела) - В основата на хуморалния имунен отговор е активирането на В-лимфоцитите и диференцирането им в плазмени клетки (плазмоцити), които синтезират антитела (имуноглобулини), специфични за антигена, предизвикал имунния отговор.

КИО- сложна кооперативна реакция на тялото, индуцирана от антигена и реализирана чрез Т-системата на имунитета в сътрудничество с APC, която завършва с образуването на антиген-специфични Т-лимфоцити, които изпълняват регулаторни и ефекторни функции. Задачи:развитие и регулиране на хуморалния и клетъчен отговор, елиминиране на антигена от тялото.

Макрофагиучастват както в естествен, така и в специфичен AI. Зрелите макрофаги имат AG рецептори (Fc), C3b рецептори, MHC антигени. В ранния стадий на IE макрофагите изпълняват функцията на представяне на AG - в резултат на фагоцитоза AG се разцепва и неговият епитоп се пренася към мембраната в комбинация с MHC2. В крайния стадий на IE макрофагът се активира от лимфокини.

В-лимфоцити- разпознават AH, участват в GMO, имат рецептори за миши еритроцити, Fc, C3b, за MHC AG. Те нямат специфични антиген-разпознаващи рецептори. Антиген-разпознаващият рецептор е имуноглобулинова молекула.

Т-лимфоцити- са разделени на четири основни субпопулации - Т-хелпери, Т-супресори, Т-убийци и Т-ефектори. Всички те имат рецептори за овчи еритроцити, за имуноглобулини, протеини от системата на комплемента (но нямат рецептори за C3b), за интерферони, за антигени, имат MHC1 и MHC2 антигени. Субпопулациите на Т-лимфоцитите са хетерогенни, така че Т-хелперите се разделят на две групи - Т-хелпери 1 и Т-хелпери 2. Първите са CIO активатори, а вторите са ГМО. Т-лимфоцитите осигуряват клетъчен, антивирусен, антибактериален имунитет, ХЗТ.

Антигени- генетично чужди вещества, които при въвеждане в организма са в състояние да стимулират имунния отговор (клетъчен отговор, образуване на антитела, алергия, толерантност) и да реагират специфично с образуваните антитела както in vivo, така и in vitro.

Структурни и функционални части на молекулата Ag:

1. Стабилизиращ (носител)- 97-99% от масата: макромолекули (протеини), клетки (всякакви), при изкуствени условия може да има корпускулярни частици. Свойства на носителя: високо молекулно тегло, сложна структура. Функция - индукция на имунния отговор.

2. Детерминантна група (епитоп):олигозахариди , олигопептиди , NH2 група . Свойства: ниско молекулно тегло , твърда структура , слаба метаболитна активност , чужд на тялото . Функция - специфичността на антителата и ефекторните Т-лимфоцити в имунния отговор.

Епитопи на AG:повърхностни, скрити (конформационни), Т-клетъчни (разпознават се TCR), В-клетъчни (разпознават се RCR). Епитопична плътносте числото в 1 Ag молекула.

AG свойства:

Имуногенността е способността да се индуцира AI в тялото.

Антигенността е способността за специфично взаимодействие.

Пълна(пълен) Ag има две свойства. Хаптен(непълен) – Ag, не е имуногенен.

Класификация:

1. По имуногенност: силен(прилага се голяма доза, но показателите за имунитет са ниски), слаб(причинява високи нива на имунитет в малки дози), суперантигени (Микробни антигени, взаимодействащи с MHC клас II APC и TKR молекули на Т-лимфоцити, извън антиген-свързващата празнина, т.е. не в активни центрове. Те се свързват, така да се каже, от страната на молекулите на MHC II и TCR. Те блокират възможен специфичен имунен отговор и причиняват поликлонално активиране на лимфоцити, освобождаване на цитокини и след това смърт на Т-лимфоцити със симптоми на имунодефицит).

2. По чуждост за тялото - носител на Ag: Хетеро- (ксено-) Ag (за хората това е Ag на бактерии, растения, вируси, животни), Хомо- (ало-) Ag е Ag на други индивиди от вида, Автоматично стареене:късни протеини (сперма, мляко), вещества на "бариерни" органи, собствени клетки с модифицирана повърхност, ембрионална тъкан.

3. В зависимост от вида на ИИ: имуногени, алергени, толерогени, трансплантация.

4. Според връзката на имунния отговор с тимуса: Т-зависими, Т-независими.

Антигени на микроорганизми. Антигенна структура на бактериите. Типични, видови, групови антигени. защитни антигени. Кръстосано реагиращи антигени, което означава.

Бактериални антигени:

Специфично за група (предлага се в различни видове от един и същи род или семейство)
Специфично за вида (при представители на един вид)
Типово специфичен (определяне на серологичен вариант в рамките на един вид)
Специфичен за щама
Стадиоспецифични
Кръстосано реактивни антигени (подобни, еднакви при хора и микроби)

По локализация:

OAS– соматични (LPS клетъчна стена)

N-Ag- камшичета (протеинов характер)

K-Ag– капсулни (PS, протеини, полипептиди)

Аг Пайли(фимбриален)

Цитоплазмен Ag(мембрана, процесор)

Екзотоксини(протеини)

Ектоензими

OAS- липополизахарид на клетъчната стена на грам-отрицателни бактерии. Състои се от полизахаридна верига и липид А. Полизахаридът е термостабилен, химически стабилен, слаба имуногенност. Липид А - съдържа глюкозамин и мастни киселини, има силен адювант, неспецифична имуностимулираща активност и токсичност. Като цяло LPS е ендотоксин. Вече в малки дози, той причинява треска поради активирането на макрофагите и освобождаването на IL1, TNF и други цитокини, дегранулация на дегранулоцити и агрегация на тромбоцитите.

H-AGе част от бактериалните флагели, основата му е белтъкът флагелин. Термолабилен.

К-АГе хетерогенна група от повърхностни, капсулни AG бактерии. Те са в капсула. Те съдържат главно киселинни полизахариди, които включват галактуронова, глюкуронова киселини.

Защитни антигени- за получаване на ваксини се използват епитопи на екзогенни антигени (микроби), антителата срещу които имат най-изразени защитни свойства, което предпазва тялото от повторна инфекция. Пречистените защитни антигени могат да бъдат "идеални" ваксини.

Кръстосано реактивни антигенни детерминантинамерени в MO и хора/животни. микроби различни видовеи при хората се срещат общи, сходни по структура АХ. Тези явления се наричат антигенна мимикрия. Често кръстосано реактивните антигени отразяват филогенетичната общност на тези представители, понякога те са резултат от случайно сходство в конформацията и зарядите - AG молекули. Например, Forsman's AG се открива в еритроцитите на овен, салмонела и морски свинчета. Хемолитичните стрептококи от група А съдържат кръстосано реагиращи антигени (по-специално М-протеин), които са общи с антигените на ендокарда и гломерулите на човешките бъбреци. Такива бактериални антигени предизвикват образуването на антитела, които реагират кръстосано с човешки клетки, което води до развитие на ревматизъм и постстрептококов гломерулонефрит. Причинителят на сифилиса има фосфолипиди, подобни по структура на тези, открити в сърцето на животните и хората. Следователно кардиолипиновият антиген на сърцето на животните се използва за откриване на антитела срещу спирохета при болни хора (реакция на Васерман).

ДЕПАРТАМЕНТ НА ЗДРАВЕОПАЗВАНЕТО НА АДМИНИСТРАЦИЯТА НА КРАСНОЯРСКИ КРАЙ

Регионален център за профилактика и борба със СПИН и други заразни болести

Катедра по клинични лабораторна диагностика FUV на Красноярската държавна медицинска академия

„ОДОБРЕНО“

Началник отдел Здравеопазване

Администрация на Красноярския край

Шнайдер И.А.

"______" __________ 1999г

СЪВРЕМЕННИ МЕТОДИ ЗА ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА АВТОИМУННИ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Красноярск - 1999г

Второ издание с промени и допълнения 2002 г

^ Олховски Игор Алексеевич -кандидат мед. науки, зав. лабораторен и диагностичен отдел на Регионалния център по СПИН, доцент на катедрата на KLD FUV KrasGMA;

Изюрова Олга Юриевна- Асистент на катедрата на KLD FUV KrasGMA.

Протопопова Наталия Борисовна- Асистент на катедра КЛД ФУВ КрасГМА;

^ Шевченко Наиля Минвалевна - кандидат биол. науки, зав. Отделението по СПИН и СПИН-маркерни инфекции на Областния център по СПИН;

______________________________________________________

Необходимостта от разработване на насоки за лабораторна диагностика на автоимунни заболявания (AID), особено в ранните стадии на заболяването, се определя от широкото разпространение на тази патология и незадоволителните методи на лечение.

Препоръките предоставят накратко данни за етиологията, основните връзки в патогенезата на AID и дават класификация на AID. Представени са накратко и данни за клиничните прояви на редица дифузни лезии на съединителната тъкан.

Основният акцент в препоръките е върху методите за серодиагностика на СПИН. Успешно съставените таблици ясно демонстрират предимствата на определянето на автоантитела към определени антигени за решаване на въпроси за проверка на диагнозата, прогнозиране на хода на заболяването и идентифициране на неговите клинични и имунологични подтипове. Някои методи за определяне на серологични маркери на AID са накратко и достъпни.

^ Професор в катедрата по клинична

имунология NMI,

ВЪВЕДЕНИЕ:

Автоимунните заболявания засягат 5-7% от населението на света, развиват се 3-10 пъти по-често при жените, отколкото при мъжете и се считат за най- обща каузахронична човешка патология. Има повече от 40 нозологични форми, които се класифицират като автоимунни заболявания на човека.

В момента проблемът с автоимунизацията се разглежда като общобиологичен, тясно свързан с проблеми като имунна недостатъчност и онкогенеза, а автоимунните процеси се разглеждат не само като патология, но и като важна връзка в хомеостатичните реакции на организма. Общопризнато е, че ролята на имунната система е не само да защитава организма от патогени на инфекциозни заболявания и противотуморна защита, но и да осигурява процеса на пролиферация и диференциация на различни тъкани и органи, елиминиране и използване на умиращи тъканни структури. .

AT съвременна литератураОбичайно е да се прави разлика между понятията "автоимунни процеси (автоимунизация)" и "автоимунни заболявания".

^ 1. АВТОИМУННИ ПРОЦЕСИ

Автоимунните процеси са процесите на имунната система, реагираща на нормални (непроменени) антигени на собствените си тъкани - автоантигени.

Редица автори смятат, че модифицираните антигени на собствените тъкани не трябва да се класифицират като истински автоантигени. Тяхната модификация може да е резултат от биологични, химични или физични фактори. Неправилно е да се класифицират като истински автоантигени също така интегрирани (например, поради интегрирането на вирусния и клетъчния геном) или комплексни антигени (поради комбинацията на екзо- или ендогенен хаптен с автоантиген). Тъй като модифицираните, интегрирани и сложни антигени всъщност са чужди на тялото. В същото време, при определени условия, те могат да станат отправна точка за патологични автоимунни промени в организма.

Известни фактини позволяват да разделим всички автоимунни процеси на хомеостатични (физиологични) и патологични (схема 1). Първата група няма патогенетично значение в развитието на хронично възпаление. Титрите на нормалните автоантитела срещу ДНК, цитоскелетни протеини, хормони, медиатори и техните рецептори се повишават по време на стрес, бременност, стареене и различни бактериални и вирусни инфекции. "Нормалните" автоантитела не предизвикват цитотоксични реакции и е вероятно да участват в изпълнението на регулаторни и "санитарни" функции.
^

Схема 1. Класификация на автоимунните процеси

	Автоимунни процеси

Ж хомеостатичен			Патологични

Санитарен	Регулаторен

			Автоимунни заболявания	Заболявания с автоимунни нарушения
	имунна система	Имуно-ендокринни

^ 2. ИНФОРМАЦИЯ ЗА ПАТОГЕНЕЗАТА:

Патологичните автоимунни процеси се развиват на базата на физиологични и не са принципно нови реакции. Очевидно неадекватни дейности на "санитарните" автоимунни процесипричинени от органно-неспецифични заболявания като SLE, полимиозит, първична билиарна цироза и др., както и вторични автоимунни лезии при изгаряне, постинфарктен синдром и др. Изпадналите извън контрол регулаторни автоимунни процеси очевидно водят до развитие на органоспецифични автоимунни заболявания: автоимунна хемоцитопения, ендокринопатии и др.

Основните видове автоимунни процеси могат да бъдат свързани с:

отговор към автоантигени, към които няма естествен толеранс (слаба експресия, недостъпност за лимфоцити или липса на тяхното представяне от Ja+ A-клетки;
заобикаляне на съществуващата самопоносимост чрез сътрудничество на Т-хелпери, реагиращи на "чужди", с В-клетки, реагиращи на автоантигени;
истинско премахване на толерантността към собствените антигени

Развитието на патологични автоимунни реакции може да се дължи на следните механизми на увреждане:

Комплемент-зависима цитолиза;
Индуциране на антитяло-зависима клетъчна цитотоксичност;
Взаимодействие с клетъчни рецептори за естествени лиганди (активиране или блокиране на действието на ендогенни регулатори);
Промени във функционалната активност на клетките на различни органи и тъкани;
Индуциране на апоптоза (програмирана клетъчна смърт);
Имунокомплексни реакции (нарушен клирънс и отлагане на комплекси в тъканите, предимно в съдовете на микроциркулацията).

Много автоимунни заболявания се характеризират с редуващи се реакции на свръхчувствителност. незабавен типв острата фаза до реакция на свръхчувствителност от забавен тип във фазата на ремисия. Характеристика на автоимунните лезии е честото образуване лимфоидни фоликулив прицелните органи.

Съществуват редица концепции за механизма на развитие на патологични автоимунни процеси, при които на преден план излизат промени или в прицелните клетки (органи), или първични промени в самата имунна система.

Привържениците на първата група концепции придават голямо значение на прекомерното повишаване на концентрацията на автоантигени, циркулиращи в кръвта и разположени върху клетъчните мембрани, както и демаскирането на вътреклетъчни антигени. Смята се, че важна роля играе загубата на толерантност към антигени на "отвъд бариерните" тъкани: антигени на миелина на нервната система, предната камера на окото и др. Значителна роля в патогенезата на системния лупус еритематозус (СЛЕ) се отдава на нарушенията в елиминирането на автоантигените и използването на имунни комплекси от макрофагалната система. Обсъжда се ролята на нарушенията в експресията на автоантигените на клетъчната мембрана в патогенезата на автоимунните заболявания. щитовидната жлеза, захарен диабет тип 1, първична билиарна цироза. Целевите клетки при тези заболявания носят антигени от клас II на HLA системата върху мембраната, тяхната експресия се увеличава под въздействието на вируси и следователно тези клетки са в състояние да представят антигена без участието на макрофаги. Все повече потвърждение намира концепцията за кръстосано реагиращи антигени (таблица 1).
^

Таблица 1. Кръстосано реактивни антигени

Хетероантигени	Автоантигени	Клинични проявления
- хемолитичен стрептокок група А	Субсарколема на кардиомиоцитите	ревматизъм
- хемолитичен стрептокок А 12	бъбречен гломерул	Гломерулонефрит
Антигени на Escherichia coli O14, O86 и др.	Чревен епител, антигени на ЦНС	Неспецифичен улцерозен колит
Антигени на Yersinia enterocolitica Антигени Ldu Пневмония	Епител на щитовидната жлеза Скелетен мускулен ацетилхолинов рецептор	миастения гробове
Менингококови антигени от група В Mycoplasma pneumoniae Антигени на Trypanosoma cruze	антигени на ЦНС	Енцефалит
Животинска мозъчна тъкан	антигени на ЦНС	Постваксинален енцефалит

Редица патогенни микроорганизми, като микоплазми, хемолитични стрептококи, стафилококи, някои вируси са в състояние да отделят така наречените суперантигени - имуногенни протеини, които могат да се свързват без предварително улавяне от макрофагите с HLA 1 или 2 молекули от клас и да стимулират "забранените" автореактивни клонове на Т-лимфоцити.

Дисфункцията на самата имунна система, със свръхреакция към авто- и кръстосано реагиращи антигени, се отдава на не по-малко значение. Изключително място принадлежи на концепцията на F. Burnet, която възлага ключова роля на лимфоцитните мутации с нарушение на елиминирането на възникващи автоагресивни клонове. Понастоящем автоимунните заболявания се разглеждат не като хиперфункция на имунната система, а като нейна дисфункция, свързана с липса на регулаторни механизми, т.е. като вид имунен дефицит. Генетично обусловеният висок и нисък имунен отговор към определени антигени има значение. При нисък отговор към един антиген и висок отговор към други се създават условия за персистиране на микроорганизми в тъканите, появата на сложни и модифицирани антигени и изчерпване на супресорните механизми.

Имунокомпетентните клетки могат да станат мишена за вирусна атака. Резултатът е нарушение на тяхната функционална активност, цитотоксичен ефект или поликлонално активиране на лимфоцити (например: при заразяване с вируса на Epstein-Barr), което води до нарушение на имунорегулацията и появата на излишък от автоантитела.

Значението се придава на нарушенията в системата на регулаторните Т-лимфоцити, по-специално на абсолютния или относителен дефицит на Т-супресори. В този случай причината за дисфункция на системата на регулаторните Т-лимфоцити може да бъде вродени или придобити нарушения на тимуса.

^ 3. АВТОИМУННИ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Като автоимунни заболявания се определят заболявания, в патогенезата на които водеща роля имат патологичните автоимунни процеси. Най-общо развитието на автоимунните заболявания включва три основни групи фактори: предразполагащи, иницииращи и допринасящи (табл. 2).

Сред предразполагащите фактори основно значение имат генетичните особености (табл. 3). С изключение на анкилозиращия спондилит и свързаните с него състояния, свързани с носителството на HLA-B27, всички други автоимунни заболявания са свързани с определени хаплотипове HLA клас 2 или молекули на основния комплекс на хистосъвместимост клас 3.
^

Таблица 2. Патогенеза на автоимунни заболявания

И така, 80-90% от пациентите с ревматоиден артрит са носители на HLA - DR1 или един от вариантите на HLA DR4 (DW4, DW14, DW15). Дефект в гена, който контролира синтеза на C4 компонента на комплемента, се открива при 50-80% от пациентите със SLE.

Таблица 3. Ролята на генетичните фактори в развитието на автоимунни заболявания.

Фактор	механизъм на предразположение
Основни гени на комплекса за хистосъвместимост	Селективно свързване на автоантитела; експанзия на автореактивни Т клетки; дефекти в Т-клетките, участващи в антиинфекциозния имунитет
Гени Т-клетъчни рецептори	Увеличаване на броя на автореактивните Т клетки; намалена способност за контролиране на инфекцията
Гени, кодиращи антигенна обработка	Недостатъчна експресия на молекули, които предотвратяват периферната анергия; нарушена обработка на собствените антигени
Гени на комплемента	Нарушено изчистване на имунни комплекси
Гени, свързани със секса	имунни ефектиполови хормони
Цитокинови гени	Имунни ефекти на цитокините

^ 4. КЛАСИФИКАЦИЯ НА АВТОИМУННИТЕ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Класификацията на автоимунните заболявания все още е много труден и противоречив проблем. Повечето автори разделят автоимунните заболявания в зависимост от естеството на автоантигена, механизмите на автоимунизация, степента на доказателства за неговата роля в патогенезата на заболяването. Обичайно е да се прави разлика между заболявания, чиято автоимунна природа е извън съмнение: SLE, ревматоиден артрит, автоимунна хемоцитопения, ендокринопатии, коагулопатия, редица заболявания на централната нервна система и очите и др.); най-вероятно (първична билиарна цироза, нодозен периартериит, склеродермия, полимиозит и др.); само предполагаеми (дислипопротеинемия, епилепсия, шизофрения, паркинсонизъм и др.). Особено се отличават заболяванията на рецепторите на антителата (тиреотоксикоза, захарен диабет тип 2, миастения гравис, множествена склероза и др.). Има автоимунни заболявания с автоимунизация като основен фактор на патогенезата (първични) и заболявания с вторични автоимунни нарушения. Основната работна класификация е разделянето на органоспецифични и органонеспецифични автоимунни заболявания. | Повече ▼ подробна класификация(цитирано от Shirinsky V.S., 1997) включва 5 класа: A - E (схема 2).

Достатъчно големи трудности възникват при диференциалната диагноза на ранните прояви на основните, така наречените "Големи колагенози" - системни заболявания на съединителната тъкан с участието на различни органи и системи в патологичния процес. Тези заболявания включват: системен лупус еритематозус, прогресивна системна склероза, ревматоиден артрит, синдром на Sjögren и група от смесени заболявания на съединителната тъкан.

^ Схема 2. Класификация на автоимунните заболявания.

Схема 2. Класификация на автоимунни заболявания (Shirinsky V.S., 1997).

КЛАС: А(първични автоимунни заболявания с и без генетична предразположеност)

„Органно-специфичен“ „Междинен“ „Органно-неспецифичен“ Автоимунно заболявания

кръв

тиреоидит на Хашимото пемфигус, пемфигоид системен лупус еритематозус автоимунен хемолитичен първичен микседем първична билиарна цироза ревматоиден артрит анемия

чернодробна тиреотоксикоза дерматомиозит автоимунна тромбоцитопения

атрофичен гастрит хроничен активен хепатит системна склеродермияавтоимунна неутропения

адреналит Синдром на Sjögren смесена болест грануломатоза на Wegener

някои форми на улцерозен колит на съединителната тъкан първично безплодие целиакия ентеропатия рецидивиращ полихондрит инсулинозависим синдром на Goodlascher

диабет тип 1

варианти на хиперлипопротеинемия

Миастения гравис

КЛАС: Б(вторични автоимунни заболявания с и без генетично предразположение)

Ревматизъм, болест на Шагас

Постинфарктни и посткардиотомични синдроми

Лекарствени автоимунни реакции

Анкилозиращ спондилит

Ендогенен увеит

Разширена кардиомиопатия

^ КЛАС: C(заболявания с генетични дефекти на комплемента)

Ангиоедем

Лупус-подобни синдроми

КЛАС: D(бавна вирусна инфекция)

Множествена склероза

Реакции след ваксинация

КЛАС: Е- комбинация от заболявания от класове A - D

^ 5. ОСНОВНИ СИСТЕМНИ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Системен лупус еритематозус

Системният лупус еритематозус (SLE) е мултисистемно заболяване, което възниква на фона на множество имунни нарушения - производството на автоантитела, хипергамаглобулинемия, патология на супресорните Т-лимфоцити, намаляване на съдържанието на серумните комплементарни протеини и повишаване на ниво на CEC, за които се смята, че играят основна роля в патогенезата на SLE.

С достатъчна степен на сигурност можем да говорим за нарушаване на функционирането на Fc-IgG и C3b-рецепторите, отговорни за фагоцитозата на CEC. В същото време не всички автоантитела и имунни комплекси, които се появяват в кръвта на пациенти със СЛЕ, са еквивалентни по отношение на патогенността. Някои автоантитела причиняват патологични симптоми поради тяхната антигенна специфичност (за повърхностни антигени на еритроцитите или фактори на кръвосъсирването). Действието на други се дължи на изотипа на имуноглобулина, способността за фиксиране на комплемента, тяхната авидност към тъканите и др.

Несъмнено е участието на половите хормони в патогенезата на СЛЕ. Естрогените засилват, а андрогените инхибират производството на автоантитела. При пациенти със СЛЕ се отбелязва повишено производство на 16-алфахидроксиестрон, което причинява продължителна естрогенна стимулация.

Клиничните прояви на заболяването зависят от това коя популация от автоантитела и CIC присъстват в този моментпри конкретен пациент кои органи, клетки или клетъчни продукти служат като мишени за тях, както и способността на пациента да коригира тези нарушения. Около 72% от пациентите преживяват повече от 10 години след началото на заболяването. Основните причини за инвалидност и смърт са инфекциозни усложнения и бъбречна недостатъчност.

Основните лабораторни критерии за диагностика и мониторинг са представени в таблица 4:

Диагностични изследвания за диагностика и оценка на тежестта на процеса

Тестове за наблюдение на заболяването

Специфични:

Анти dsDNA

Анти-Sm

Неспецифични

ANA (най-чувствителен)

СР50, С3, С4

Директен тест на Кумбс

Фалшива реакция на Васерман

Антикардиолипинови антитела

Антитромбоцитни антитела

Анти-лимфоцитни антитела

Антиневронни антитела

Хематокрит

Анализ на урината

Серумен кратинин

Протеини в острата фаза

Анти dsDNA титър

Нива на допълване

Хематокрит

Левкоцити в периферната кръв

Тромбоцити в периферната кръв

Анализ на урината (микроалбуминурия)

Серумен креатинин

* За всеки пациент въз основа на най-характерните клинични признацизаболяване, трябва да се създаде индивидуален набор от тестове, които да се използват като допълнителенкритерии за оценяване клинично протичанезаболявания.

Антителата срещу Sm антигена са силно специфични за SLE), но тяхното ниво не отразява тежестта на заболяването. В същото време лезиите на нервната система и лупусните психози са по-често свързани клинично с наличието на антитела срещу Sm, но в същото време е характерно относително запазване на бъбречната функция. Антитела срещу Sm се откриват при 25-30% (RIF метод) и 50-60% (ELISA метод) от пациентите. Отрицателните резултати от теста за SM антитела не изключват заболяване. Концентрацията на антитела срещу Sm антигена не се променя значително по време на терапията и следователно тяхното количествено наблюдение няма практическо значение. Наличието на антитела срещу Sm антигена е включено в критериите за SLE, приети от Американската ревматологична асоциация.

Нивото на антителата към естествената (двуверижна) ДНК, за разлика от антителата срещу Sm, отразява риска и тежестта на лупусния нефрит и се използва като критерий за ефективността на терапията със SLE. Допълнителен лабораторен критерий е намаляването на нивото на компонентите на комплемента С3 и С4, което също корелира с активността на лупусния нефрит.

Приблизително 80% от всички пациенти със СЛЕ имат антитела срещу хистони. Много често тези антитела се откриват при пациенти с лекарствено индуциран лупус еритематозус (PLE). В LC обаче няма антитела срещу естествената ДНК. Следователно, едновременното определяне на антитела срещу хистони и dsDNA позволява диференциална диагноза между SLE и LLE. В допълнение, антитела срещу хистони могат да бъдат открити при пациенти с първична билиарна цироза, ревматоиден артрит и склеродермия.

Прогресивна системна склероза (системна склеродермия)

PSS е мултисистемно разстройство, характеризиращо се с възпалителни, съдови и фиброзни променив кожата (склеродермия) и в различни вътрешни органи, особено в стомашно-чревния тракт, белите дробове, сърцето и бъбреците. Характерът на курса, степента на разпространение в тялото, тежестта на проявата на заболяването варират значително при различните пациенти. В някои случаи могат да се появят висцерални прояви без видими кожни прояви.

Етиологията на заболяването е неизвестна, ролята наследствени факторие двусмислен. Хората обикновено се разболяват на възраст 30 - 40 години, жените са 4 пъти по-често от мъжете.

PSS е придружен от нарушен хуморален и клетъчен имунитет. в кръвта на пациентите често се откриват хипергамаглобулинемия и антинуклеарни антитела, антитела към клетъчните мембрани на фибробластите и към колаген тип 1 и 4.

Клиничните прояви обикновено (при 90% от пациентите) започват с феномена на Рейно - епизодична вазоконстрикция на артериите и артериолите на пръстите на ръцете, краката, понякога кожата на лицето, което възниква в резултат на студ или емоционален стрес. Засегнатите участъци от кожата първо бледнеят, след това стават цианотични и след това се зачервяват. Прогнозата на заболяването се определя от засягане на миокарда, белодробна хипертония и бъбречна недостатъчност.

Съвместното съществуване на кожна калцификация, феномен на Рейно, хипокинезия на хранопровода, склеродактилия и телеангиектазия се нарича "КРЕСТ"- синдром и се оценява като относително доброкачествен вариант на PSS.

Лабораторните данни за PSS зависят от етапа и активността на патологичния процес, ESR често се повишава, хипергамаглобулинемия се отбелязва при 50% от пациентите, главно поради IgG, нисък титър на ревматоиден фактор се открива при 25%, ANA - при почти 96% от страдащите от ПСС. Специфични автоантитела: към ядрен рибонуклеопротеин (RNP), центромерни протеини и анти Scl-70. Въпреки това, най-специфичният анти-Scl-70- маркер се открива само в 20% от случаите на PSS. Антитела, които реагират с центромерната област на метафазните хромозоми, се откриват при повечето пациенти, съответстващи на групата на синдрома "CREST". Следователно, ако определянето на антитела срещу Scl-70 в PSS служи като лош прогностичен знак, тогава откриването на антицентромерни антитела, напротив, показва по-благоприятен ход на заболяването.

Ревматоиден артрит

Ревматоидният артрит (РА) е хронично полисистемно заболяване с неизвестна етиология, при което наред с различни. системни прояви, патогмоничен е персистиращият възпалителен синовит, симетрично засягащ периферните стави. Протичането на заболяването е силно променливо, обикновено с вълнообразен ход.

Няма специфични лабораторни тестове за диагностициране на RA. Въпреки това, ревматоидните фактори, които са IgG-реактивни автоантитела, се откриват при 60% от пациентите. Самите ревматоидни фактори могат да принадлежат към класовете: IgA, IgM или IgG. Честотата на откриване на ревматоидни фактори сред здрави индивиди достига 5% и нараства с възрастта. В допълнение, ревматоидният фактор може да присъства при много заболявания - SLE, синдром на Sjögren, хронично чернодробно заболяване, хепатит В, туберкулоза, сифилис и др. В тази връзка откриването на ревматоидни фактори не поставя диагноза, но има определена прогностична стойност, тъй като пациентите с висок титър (особено IgM и IgA) са склонни да имат по-тежък и прогресивен ход на заболяването. Еозинофилията при пациенти с RA показва тежестта на системните прояви. Почти всички пациенти имат повишаване на ESR, CRP, церулоплазмин, други протеини на острата фаза. Това обикновено корелира с активността на заболяването и показва прогресия на ставното увреждане.

Смесени заболявания на съединителната тъкан.

Смесена съединителнотъканна болест (MCTS) е синдром, характеризиращ се с променлива комбинация от клинични прояви, подобни на тези, наблюдавани при SLE, склеродермия, полимиозит и ревматоиден артрит във връзка с необичайно високи титри на циркулиращи автоантитела към ядрен рибонуклеопротеинов антиген (RNP). В този случай има липса или много нисък титър на антитела към други екстрахируеми ядрени антигени и към ДНК. В допълнение към анти-RNP има изразена поликлонална хипергамаглобулинемия, намаляване на компонентите на комплемента, дефект в супресорната връзка на Т-лимфоцитите, наличие на CIC, отлагане на имунни комплекси по протежение на мембраните на сарколемата и гломерулната основа мембрани, лимфоцитна и плазмоцитоцитна инфилтрация на много тъкани. Една от основните прояви на SBST е пролиферативната лезия на интимата и медиите. кръвоносни съдовекоето води до тяхното стесняване. Поражението на големи и малки съдове, доставящи жизненоважни органи, определя хода и прогнозата на това заболяване. Някои пациенти имат признаци на няколко автоимунни заболявания, но за разлика от пациентите с BSTS, няма антитела срещу RNP. В този случай, ако съществуващите признаци отговарят на няколко автоимунни заболявания наведнъж, се поставя диагноза „кръстосан синдром“, ако не, се поставя диагноза „недиференцирано заболяване на съединителната тъкан“.

Синдром на Sjögren

Синдромът на Sjögren (SS) или "сухият" синдром е имунологична патология, характеризираща се с прогресивно разрушаване на екзокринните жлези и придружена от различни автоимунни нарушения. Заболяването може да възникне самостоятелно (първичен СС) или в присъствието на други автоимунни аномалии (вторичен СС). В допълнение, SS се подразделя на жлезиста форма, когато клиничните прояви са ограничени до системата на екзокринните жлези, и екстрагландуларна форма, когато в патологичния процес участват и други тъкани.

Основните механизми на увреждане при SS са лимфоцитна инфилтрация и отлагане на имунен комплекс. Приблизително 10% от случаите на СС развиват лимфопролиферативен процес, наречен псевдолимфом. Някои пациенти по-късно развиват истински неходжкинов лимфом. Доста често има автоимунно увреждане на щитовидната жлеза като тиреоидит на Хашимото.

В допълнение към сухите лигавици (кератоконюнктивит, ксеростомия), пациентите със СС развиват васкулит, полиневропатия, интерстициална пневмония и гломерулонефрит. Като цяло, в сравнение с други колагенози, прогнозата за пациенти със СС може да се счита за доста благоприятна.

При лабораторни изследванияобърнете внимание на повишаването на нивото на CEC, левкопения, тромбоцитоза, ускорена ESR. Записва се положителна реакция към ANA. Автоантителата са представени главно от ревматоиден фактор, SSA (анти-Ro), SSB (анти-La). Повечето пациенти с най-тежки системни прояви са положителни за SSA. При бременни жени наличието на SSA значително повишава риска от раждане на бебета с нарушения на сърдечната проводимост.

Полимиозит и дерматомиозит

Дерматомиозитът е системно заболяване на съединителната тъкан, което засяга предимно кожата и мускулната тъкан. Различни кожни лезии с патогмоничен периорбитален оток с лилаво-лилав еритем се комбинират с миастеничен синдром, миокардна дистрофия, полиартрит и свързано възпаление на белите дробове (хиповентилация и аспирационен произход). Високата честота на комбинация от дерматомиозит със злокачествени тумори заслужава специално внимание. Полимиозит - системни възпалителни миопатии без значителни кожни лезии, представляващи група от заболявания, характеризиращи се с дифузно мускулно увреждане поради периваскуларна и интерстициална инфилтрация на мускулната тъкан от възпалителни клетки, главно левкоцити.

^ 6. АВТОАНТИТЕЛА КАТО СЕРОЛОГИЧНИ МАРКЕРИ НА СИСТЕМНИ КОЛАГЕНОЗИ.

За първи път прояви на специфичен LE-феномен са регистрирани през 1948 г. по време на инкубацията на серуми различни пациентисъс суспензия от левкоцити от нормални донори. Година по-късно беше идентифициран серумен имуноглобулин, който медиира антинуклеарната реакция, лежаща в основата на феномена LE. Откриването на LE-клетки доминира през 50-70 години като основна реакция за откриване на антинуклеарни антитела (ANA).

През 80-те години беше предложен индиректен имунофлуоресцентен метод за откриване на ANA, с тестване на серуми на пациенти върху тъканни срезове на бъбреците и черния дроб на заек (мишка) или върху култура от човешки ракови епителни клетки (Hep-2). Методът се е утвърдил като високочувствителен и специфичен, позволяващ да се регистрира едновременното наличие на автоантитела към почти 40 отделни ядрени антигена. Характеристиките на естеството на разпределението на специфичната луминесценция при отчитане на реакцията (хомогенна, петниста, периферна, свързана с нуклеолите или центромерите, наличието на цитоплазмени свързващи фокуси) позволяват в първото изследване да се определи основната антигенна специфичност на откритите автоантитела. Недостатъците на този метод включват относителна трудоемкост, зависимост от оптичните характеристики на луминесцентния микроскоп, както и проблеми със стандартизацията и контрола на качеството, свързани главно с използването на животински тъкани или клетъчни култури.

Едновременно с това е разработен методът за използване на твърдофазен ELISA както за откриване на целия комплекс от антинуклеарни автоантитела (ANA-скрининг), така и за откриване на отделни автоантитела към екстрахируеми ядрени антигени (ENA-скрининг и ENA-профил). Предимствата на метода са възможността за автоматизация и висока производителност. Чувствителността и специфичността са сравними с RNIF, въпреки че използването на рекомбинантни антигени в някои тестови системи може потенциално да причини фалшиво положителни резултати при тестване на серуми с висок титър на антибактериални антитела.

Други добре известни методи за идентифициране на автоантитела срещу ENA - гел имунодифузия, имуноелектрофореза, хемаглутинация, имунопреципитация и имуноблотинг все още не са широко използвани в клиничната лабораторна практика.

Списък на най-важните автоантитела към извличащи се ядрени антигени е представен в таблица 5:

Таблица 5. Основни серологични маркери на автоимунни заболявания

Антиген	оригинално име	молекулярна структура	функция	Диагностична стойност
см	Смит (име на пациента)	Комплекс, образуван от 9 протеина с 13 малки РНК молекули		Специфика за SLE Sm + и RNP + = висок риск от лупусен нефрит *Може да се открие при липса на dsDNA.
Sm/RNP комплекс	RNP - рибонуклеопротеинови частици	Нативен комплекс от Sm и RNP антигени	Разцепване на прекурсори на информационна РНК	SLE, синдром на Sjögren, склеродермия, полимиозит, SBSTc
U1RNP	основен антиген (68 rDa) на комплекса U1RNP	Винаги в двойка с РНК U1.	Разцепване на прекурсори на информационна РНК	* RNP + , Sm - = нисък риск от нефрит * високи кредити на фона на "нег" други ANA = SBSTk
Или Ро	Разтворимо (разтворимо) вещество (субстанция) А или протеин А на синдрома на Sjogren или Robert-антиген (име на пациента)	52 и 60 kD протеини, свързани с цитоплазмени РНК молекули	неизвестен	* Синдром на Sjögren и SLE * неонатален сърдечен блок поради трансплацентарен трансфер на антитела *SSA+, SSB - = висок риск от нефрит
Или Ла	Разтворимо (разтворимо) вещество (субстанция) B или протеин B Синдром на Sjögren или Lane антиген (име на пациента)	Фосфопротеини, свързани с полимераза III транскрипти	Хеликазен терминатор на транскрипция	* Синдром на Sjögren, SLE *SSA+, SSB+ = нискорисков нефрит
dsDNA	двойноверижна ДНК	Нативна двойноверижна ДНК без протеини	Носител на генетична информация	SCR, мониторинг на потока Засягане на ЦНС и бъбреците
Хистони	Хистони	Основни протеини, свързани с ДНК	Структурни елементи на хроматина	Лекарствен SLE
CENP-B	Протеинови (протеинови) центромери	Протеин кинетохор 80 kD	Място за закрепване на микрофиламенти	Склеродермия, CROSS-синдром
Джо л	Специфичен протеин на 1 пациент с миозит	Протеин 55kD, хистидин-тРНК синтетаза	tRNA свързване с хистидин	Полимиозитът е по-често срещан от дерматомиозита Свързан с интерстициална пневмония
PM-Scl-100	100 kD антиген на полимиозит-склеродермия (полиниозит-склеродермия)	Част от мултипротеинов комплекс, съдържащ поне 11 протеина	Синтез на рибозомален прекурсор	Полимиозит-склеродермо-CREST синдром
Scl-70	70 rL склеродермичен антиген	70 kD протеинов разграден продукт с маса 100 kD	Топоизомераза I ДНК денатурация (размотаване)	*Склеродермия и по-рядко CROSS-синдром

При диференциалната диагноза на големи колагенози се отдава значение на анализа на маркерите за автоимунни заболявания, открити както чрез имунофлуоресценция, така и чрез ELISA (Таблица 6).

Таблица 6

Вид патология	Резултати от имунологичното изследване	Клинична стойност
Вид патология	Вид на антителата и честота на тяхното появяване (%)
Системен лупус еритематозус	* ANA 95-99% * dsDNA 50-75% * Sm 30% * RNP 25-40% * SSA(Ro) 30-40% * SSB(La) 10-15% * антифосфолипидни антитела 30-50% * PCNA 2 -10% *анти-Ку (Ки) 10%	ANA и ENA - скрининг (откриване); Anti-nDNA и anti-Sm - маркери за мониторинг
Дискоиден лупус еритематозус	Нормална картина (обикновено нормални ANA титри)	LE лентите в проби от кожна биопсия (в EPIF) са силно специфични
Подостър кожен лупус еритематозус	* ANA 70% SSA (Ro) > 60%	анти-SS-A(Ro) са силно специфични
Лупус еритематозус при новородени	ANA 70% SS-A(Ro) 60% SS-B(La) 60%	Анти-SS-A(Ro) са силно специфични
"Лекарство" лупус еритематозус	ANA > 90% антитела срещу хистони > 90% ^ Други ANA и анти-ENA отсъстват	антихистоновите антитела са силно специфични в отсъствието на други ядрени антитела
Смесено заболяване на съединителната тъкан	ANA (тип петна) > 95% анти-RNP > 90%	Ценна диагностична информация се предоставя от естеството на оцветяване на ядрата в проби от кожна биопсия и при изследване на кръвен серум чрез индиректна имунофлуоресценция.
Синдром на Sjögren	ANA 55%. SS-A(Ro) 43-88% .SS-B(La) 14-60% ^ Наличието на ревматоиден фактор (RF)	Диагнозата се потвърждава от положителни серологични данни
склеродермия	ANA 85% (пъстър или нуклеоларен тип оцветяване) *антицентромерни антитела 70-90% ^ дифузна склероза : Анти-Scl -70 45% Акросклероза: Анти-Scl-70 15-20%	Антицентромерни антитела - маркер на CREST синдром Scl-70 - маркер за склеродермия ^ Диагностичната стойност на директната имунофлуоресценция на кожни биопсии е ниска.
Полимиозит дерматомиозит	^ Обща характеристика: ANA 80% Дерматомиозит: Анти-Jo-l 10% Полимиозит: Анти-Jo-l 30% SS-A(Ro) 55% анти-Ku(Ki) 10% (наблюдава се и при склеродермия)	Положителни резултати серологично изследванеможе да се използва за потвърждаване на диагнозата
Ревматоиден артрит	ANA ниски титри или липса на RF 90% RANA 70-90% (присъства в 95% от серуми без RF)	Резултатите от серологично изследване се използват за потвърждаване на диагнозата.

Определяне на ANA в реакцията на индиректна имунофлуоресценция

При типичен тест серумът на пациента се инкубира с антигенни субстрати (животински черен дроб или бъбречна тъкан, Hep-2 клетъчна култура), за да се постигне специфично свързване на антителата, присъстващи в серума, към клетъчните ядра. След измиване на несвързаните серумни протеини, субстратът се инкубира с антитела срещу човешки имуноглобулини. Тъй като въведените антитела са конюгирани с флуоресцентно вещество, при наличие на антитела срещу ядрени антигени в серума, полученият комплекс (ядрен антиген + антинуклеарни серумни антитела + антитела към човешки антитела + флуоресцентно вещество) може да бъде открит чрез флуоресцентна микроскопия. Естеството на сиянието - периферно, дифузно, петнисто и др. ви позволява да идентифицирате връзката със специфични вътрешноядрени структури, вижте Таблица 7:

Таблица 7. Оценка на резултатите от определянето на ANA в реакцията на индиректна имунофлуоресценция.

Природата на сиянието	Антигенна специфичност	Клинично значение
Периферен или маргинален	dsDNA, ламини. комплекси с ядрени пори	Първичен SLE
Хомогенна (дифузна)	dsDNA	Специфичност 20 - 40% при активен СЛЕ, засягане на ЦНС и бъбреците
Хомогенна (дифузна)	Хистони	Идиопатична СЛЕ - 50-70%, медикаментозно индуцирана СЛЕ - 95%, локална склеродермия
Петна: груби	U1-RNP	SCR 20%-40%: C 95%
	SM	SLE маркер 15%-30%
Тънък (пулверизиран)	SS-A(Ro)	SLE 24%-60%; неонатален лупус > 90%: Дефицит на комплемента (С2 и С4)/LE > 90%; Синдром на Шагрен 85%-95%
	SS-B (La)	SLE 9%-35%; Неонатален лупус 75%; Синдром на Sjögren 70%-85%
	ДНК полимераза	SCR 3%
	Ми-2	Дерматомиозит (DM) 15%-35%: Полимиозит (PM) 5%-9%
отделен	Протеинов центромер Включения, сходни по размер и брой	Ограничена склеродермия 60%-80%: дилузна склеродермия - 8%; Синдром на Рейно 25%; ^ PSS -КРЪС 50%-70%
отделен	NSP-1 (псевдо ASA) Включвания с различни размери и количества	Ревматични заболявания и хронични чернодробни заболявания
Вътрешноядрено сияние "Купаст" тип	фибриларин (U3RNP)	PSS 6% -8%; дилузна склеродермия - 5%: ^ КРЪСТ - 10%
пъстър	РНК полимераза 1	PSS 4% -20%; дилузна склеродермия -13%
Хомогенност: (нуклеоли/нуклеоплазма)
Слабо петна (нулеол) / вид на "мляно стъкло" на нуклеоплазмата	ДНК-топоизомераза 1 (Scl-70)	PSS 4% -20%; дилузна склеродермия -13%:
Силно хомогенно сияние на нуклеола / слабо хомогенно сияние на нуклеоплазма	PM-SCI	^ PM/PSS - 24%
Силен хомогенен блясък на ядрото и нуклеоплазмата	Ку	Склеродермия 1%-14%; PM/ScI 26%-55%; СЛЕ 1%-19%; Синдром на Sjogren - 20%
Петниста луминесценция на цитоплазмата	Jo-1 (хистидил тРНК синтетаза) PL-7 (треонил тРНК синтетаза) PL12 (аланил тРНК синтетаза)	^ PM 18%-36%; DM - 13%; PM/DM - 43% PM/DM - 3%

Определяне на ANA и ENA чрез твърдофазен ELISA

Тест система за ELISA ANA (UBI MAGIWELL) - за скрининг анализ за антинуклеарни антитела осигурява полуколичествено определяне на широк спектър от антитела към комплекса от различни клетъчни ядрени антигени, сорбирани в ямките: двуверижна и едноверижна ДНК, хистони , рибонуклеопротеини (RNP), SS-A, SS -B, Sm и др.

Отличителна чертасистеми ELISA ENA-скрининг и ENA-профил (CLARK LABORATORIES) е, че на повърхността на полистеролови ямки се адсорбират предварително силно пречистени отделни екстрахируеми ядрени антигени: SS-A, SS-B, Sm, Sm/RNP, Scl-70 и Jo -1 . При скрининговия вариант - всички 6 антигена заедно, при профилния вариант - всеки антиген в отделна ямка. По този начин обичайният диагностичен алгоритъм се състои в първичен анализ на серума на скрининговата система и повторен анализ на положителни серуми на тестовата система ENA - профил за откриване на антитела към специфични антигени. В случай на положителен тест на скрининговата система ANA и отрицателен резултат на тестовите системи ENA, е необходимо да се тества серумът на тестовите системи за изолирано определяне на антитела срещу ДНК, хистони и други антигени, които не присъстват в системите ENA.

В случай на установена диагноза и предварително идентифицирани автоантитела, за проследяване на ефективността на терапията се използват тестови системи за количествено определяне на титъра на антителата към отделните антигени.

Като алтернатива на системите за тестване на плаки могат да се използват ELISA тестове в епруветки от ROCHE и Sanofi.

Положителни резултати от серологично изследване за ANA и ENA могат да се наблюдават при 1-5% от здравите индивиди, особено при възрастните хора. Някои лекарства, като р-аминосалицилова киселина, фенитион, изониазид, хидразин, прокаинамид и някои други, могат да индуцират образуването на антинуклеарни антитела.

^ 7. АВТОАНТИТЕЛА В ДИАГНОСТИКАТА НА СИСТЕМНИЯ ВАСКУЛТИТ

Системният васкулит е група от заболявания, характеризиращи се с хронично възпалениеи разрушаване на стените на кръвоносните съдове. Етиологични факториизпълняващи задействаща роля включват: инфекциозни агенти, лекарства, туморна прогресия, циркулация на патологични протеини и CEC, автоантитела. Въпреки това, около половината от всички случаи на системен васкулит нямат очевидна етиологична причина и се считат за "идиопатични". Важно е да запомните, че някои васкулити с подобни клинични прояви могат да имат значително различна прогноза и да изискват различни терапевтични подходи.

Досега схемите за класификация на тази група заболявания не са окончателно разработени. Най-новите класификации се основават на калибъра на предимно засегнатите съдове и преобладаващия тип клетъчни елементи във фокуса на унищожаване: неутрофили, моноцити или лимфоцити. Вярно е, че това по-скоро отразява етапа на процеса, а не доминиращия патогенетичен процес.

Появата на възможността за определяне на автоантитела към неутрофилни цитоплазмени антигени ( ANCA) значително подобри диагностиката на тези заболявания. Има два подкласа човешки неутрофилни автоантитела: c-ANCA (цитоплазмени ANCA) и p-ANCA (перинуклеарни ANCA). Най-значими са антителата към ензимите на първичните гранули на неутрофилите: съответно протеиназа-3 (PR3) и миелопероксидаза (MPO). Определянето на ANCA спектъра (PR3, MPO) дава възможност за диференциална диагноза на грануломатоза на Wegener и микроскопичен полиартериит. Използването на ANCA като индикатор за активността на васкулита има определени предимства пред такива класически показатели като ESR и CRP, по-адекватно отразяващи степента на активност и ефективност на терапията и независимо от добавянето на инфекциозни усложнения.

Таблица 8. Диагностична значимост на откриването на различни антинеутрофилни (ANCA) антитела

Тип антитела	болест
Анти-MPO ANCA	Васкулит, микроскопичен полиангиит, Churg-Strauss, RA, SLE
Анти-PR3 ANCA	Грануломатоза на Wegener
Анти-BPI ANCA	Хронична инфекциозни заболявания, болест на Crohn, улцерозен колит
Анти-еластаза ANCA	Емфизем, RA, възпалителни ревматични заболявания
Анти-катепсин G ANCA	възпалителни ревматични заболявания, SLE, синдром на Sjögren, синдром на Felty
Анти-лизозим ANCA	ревматоиден васкулит, възпалителни процесив стомашно-чревния тракт, улцерозен колит
Антилактоферин ANCA	RA, улцерозен колит, първичен склерозиращ холангит

^ 8. ЛАБОРАТОРНА ДИАГНОСТИКА НА АНТИФОСФОЛИПИДЕН СИНДРОМ

Антифосфолипидните антитела са хетерогенна група от автоантитела срещу отрицателно заредени фосфолипиди. Те се откриват предимно в теста за антикардиолипинови антитела (ACA тест), дават фалшиво положителни реакции при биологични тестове за сифилис и при антикоагулантен тест за лупус. И трите теста откриват подобни, но не непременно идентични антитела. По този начин, за да се идентифицират антитела срещу фосфолипиди, понякога е необходимо да се използват всички изброени тестове.

От различни съществуващи методианализ за определяне на антитела към фосфолипиди, най-чувствителен е ензимно-свързаният имуносорбентен анализ за определяне на антитела към кардиолипин. Наличието на тези антитела при пациенти помага да се идентифицират пациенти с риск от венозни и/или артериална тромбозачесто придружени от тромбоцитопения.

Терминът антифосфолипиден синдром е предложен да се отнася до група заболявания, придружени от повишено количество автоантитела срещу фосфолипиди и се разделя на първични (които не са свързани със специфична автоимунна патология) и вторични, свързани със SLE или други автоимунни заболявания.

Антифосфолипиден синдром най-често се наблюдава при пациенти със системен лупус еритематозус или при пациенти с лупус-подобни разстройства, при които критериите за системен лупус еритематозус не са изпълнени. Високи нива на антитела срещу кардиолипин се наблюдават при тромбоза, загуба на плода, тромбоцитопения и някои други заболявания. Ниски нива на антикардиолипидни антитела са открити при различни клинични заболявания, които не са свързани с антифосфолипиден синдром. Следователно ниските нива на тези антитела са с ограничена диагностична стойност.

Антифосфолипидният синдром е по-ясно свързан с антитела срещу кардиолипиновите класове IgG и IgA, отколкото с антитела от клас IgM. Въпреки това, при лечението повечетонивото на lgM антителата се променя. Ниски нива на IgM антитела могат да се наблюдават и при други автоимунни заболявания като напр ревматоиден артрит, първичен синдром на Sjögren, индуциран от лекарства системен лупус, лаймска болест и сифилис.

Тестовата система ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA е удобен инструмент за предварителна идентификация на тези пациенти, чиято кръв съдържа ASA. Последващият анализ на положителни серуми с помощта на ImmuUsa ™ ACA-IgG, ImmuUsa ™ ACA-lgA, ImmuUsa ™ ACA "IgM комплекти ви позволява да определите индивидуалните изотипове на тези автоантитела.

Таблица 9 Синдроми, свързани с ASA

Синдром	% поява
Периодична венозна тромбоза	28-71
Чести спонтанни аборти	28- 64
Трансверзален миелит	50
Хемолитична анемия	38
Тромбоцитопения	27-33
Артериални оклузии	25 -31
Livedo Riticularis (мраморна кожа)	25
Белодробна хипертония	20 - 40
SLE	33-57

Проучванията показват, че при пациенти с антифосфолипиден синдром наличието на антитела не само към кардиолипин (ACA), но и към фосфатидилсерин е от голямо значение, последният може да бъде открит както заедно с ASA, така и отделно.

При SLE ASA също се свързват доста добре с фосфатидилсерин, докато някои инфекциозни заболявания, ASA са силно специфични за кардиолипина. В тази връзка е важно определянето на антитела срещу фосфатидилсерин отделно. диагностичен критерийвторичен антифосфолипиден синдром.

Показания за изследване за антифосфолипиден синдром:

тромбоза и васкулит при автоимунни заболявания (оценка на тежестта на състоянието, прогноза и проследяване на терапията)
чести аборти или вътрематочна смърт на плода (възможност за ефективна профилактика по време на нова бременност)
неясен неврологични прояви(хорея, мигрена, епилепсия могат да бъдат причинени от микротромбози)
повтаряща се тромбоцитопения с неизвестен произход (изясняване на диагнозата)
мраморна кожа

^ 9. СЕРОЛОГИЧНА ДИАГНОСТИКА НА АВТОИМУННИ ЕНДОКРИНОПАТИИ

някои ендокринни заболяванияпридружени от появата на автоантитела, които в някои случаи играят важна роля в тяхната патогенеза. Тези заболявания включват: инсулинозависим диабет тип 1, тиреоидит на Хашимото, болест на Грейвс, нодуларен тиреоидит, синдром на "кандидоза-ендокринопатия" и др.

Определяне на антитела към -клетките на Лангерхансовите острови на панкреаса.

Известно е, че ключовият момент в развитието на инсулинозависим захарен диабет тип 1 е феноменът на трансформация на -клетките от "собствени" в "несобствени" и активиране на тяхното автоимунно увреждане. При бавен ход на заболяването най-ранният признак на патология е появата на антитела срещу -клетките на Лангерхансовите острови на панкреаса и по-специално към мембранно свързаната декарбоксилаза на глутаминова киселина през периода, когато нивото на кръвната захар се понижава. все още не надвишава нормата и глюкозният толеранс остава нормален. Тъй като първите клинични прояви на диабет се появяват, когато са засегнати повече от 90% от всички клетки, синтезиращи инсулин, антителата могат да се появят много години (до 8 години) преди клиничната изява на заболяването. В същото време наличието на антитела към -клетките корелира с тяхното остатъчно количество и тъй като останалите -клетки умират, стимулът за автоимунен отговор намалява, титърът на автоантителата може значително да намалее до неоткриваеми стойности. Като правило, при изследване на хора с диабет тип 1, антителата към островните клетки се откриват в 50-80% от случаите. Честотата на поява на тези автоантитела при роднини (1-ва степен) на диабетици достига 2-5%. Известно е, че всяка година 11% от тази група хора развиват симптоми на диабет.

Определянето на антитела към -клетките на Лангерхансовите острови на панкреаса се извършва както чрез индиректна имунофлуоресценция, така и чрез твърдофазен ELISA. В първия случай като субстрат се използват участъци от панкреаса на маймуни, във втория пречистените антигени на островните клетки се адсорбират в ямките на плаката. Хемолизата, липемията и микробното замърсяване възпрепятстват анализа. Серумите, съдържащи висока концентрация на ANA, затрудняват определянето, особено при провеждане на RNIF.

Определяне на автоантитела срещу тиреоидни антигени

При заболявания на щитовидната жлеза е важно съдържанието на антитела срещу тиреоидната пероксидаза (Anti-TPO) и антитела срещу тиреоглобулин (Anti-TG) в серума на пациента. Тъй като нивата им се променят независимо един от друг, се препоръчва да се определят двата вида антитела едновременно.

TPO е антигенен компонент на тиреоидния микрозомален антиген и е слабо гликозилиран хем-съдържащ протеин, който играе важна роля в процеса на йодиране на тиреоглобулин и синтеза на тиреоидни хормони. Антитела срещу TPO присъстват в серума на пациенти с гуша и атрофичен тиреоидит или първична тиреотоксикоза. Най-високи концентрации са налице при пациенти с фиброзен или оксифилен вариант на гуша на Хашимото. Пациентите с болест на Грейвс (болест на Базедов) произвеждат и двата вида антитела, но в доста ниски концентрации. Високите концентрации на антитела срещу TG са типични за серумите на пациенти с хипотиреоидизъм, фиброзна гуша на Хашимото, миксидема. Антитироидните антитела са по-типични за автоимунни заболявания на щитовидната жлеза, в тези случаи титрите на автоантителата са по-високи.

Таблица 10. Честота (%) на антитироидни автоантитела

^ 10. СЕРОЛОГИЧНА ДИАГНОСТИКА НА АВТОИМУННИ ЧЕРНОДРОБНИ ЗАБОЛЯВАНИЯ

Според съвременната класификация на хроничния хепатит, автоимунният хепатит (АИХ) се определя като неразрешен, предимно перипортален хепатит с наличие на хипергамаглобулинемия и тъканни автоантитела, в повечето случаи регресиращи под въздействието на имуносупресивна терапия. Понастоящем групата на автоимунните чернодробни заболявания, наред с автоимунния хепатит, включва първична билиарна цироза (увреждане на малките жлъчни пътища с наличие на антимитохондриални антитела (AMA) ), автоимунен холангит (увреждане на малките канали при липса на AMA), първичен склерозиращ холангит (увреждане на големите жлъчни пътища).

Патогенезата на AIH не е добре разбрана. Известно е, че имунната система играе основна роля в развитието на етиологията на хроничния хепатит. Установено е, че серумните автоантитела често се откриват при хроничен хепатит от всякаква етиология (Таблица 11). За ANA, открита при AIH и други чернодробни заболявания, не беше възможно да се идентифицират специфични ядрени антигени и подтип ANA. Мишените за автоимунни процеси при хронични чернодробни заболявания с различна етиология (AIH, хепатит като част от автоимунен полиендокринен синдром тип 1, автоимунитет, индуциран от хепатотропни вируси, индуциран от лекарства хепатит) са фаза 1 ксенобиотични метаболитни ензими (цитохром Р-450) и фаза II (уридин дифосфат глюкуронозил трансфераза - UGT).

Таблица 11. Автоантитела, открити при различни етиологии на хроничен хепатит.

Етиология на хроничния хепатит	Откриваеми автоантитела
Вирусен хепатит В
Вирусен хепатит С	ANA, SMA, LKM-1, GOR
Вирусен хепатит D	LKM-3 (UGT)
AIH тип 1	ANA, SMA, анти-актинови антитела
AIH тип 2	ЛКМ-1
AIH тип 3	SLA
лекарствено индуциран хепатит	АНА, ЛКМ-1
криптогенен	Не

AIH тип 1(наличие на серумни ANA, SMA, антитела срещу актин) е 85% от всички с AIH. Наблюдава се предимно при жени (8:1). Засяга възрастни хора, характеризира се с по-редки екстрахепатални прояви и сравнително благоприятна прогноза. AIH - тип 2(наличие на серумен LKM-1) представлява не повече от 15% от всички случаи на AIH, сред които преобладават младите хора (от 2 до 14 години). Често придружен от системни прояви и лоша прогноза.

AIH- 3-ти тип(наличие на SLA) се развива по-често при млади жени (90%) и според някои автори е един от вариантите на тип 1 AIH.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По този начин съвременните възможности за серологично изследване на серума за наличие на специфични автоантитела предоставят на клинициста важен допълнителен инструмент за диференциална диагноза на автоимунни заболявания, определяне на прогнозата и проследяване на ефективността на терапията. В същото време, като се вземат предвид особеностите на автоимунните процеси, възможността за откриване на автоантитела при практически здрави индивиди и не винаги достатъчната специфичност на маркерите, при тълкуването трябва да се обърне специално внимание на факта, че резултатът от серологичния анализ определянето на автоантитела само по себе си не може да се счита за недвусмислено потвърждение или изключване на диагноза автоимунно заболяване. Само цялостен анализ на целия комплекс от лабораторни, амнестични и клинични данни може да направи възможно вземането на правилното решение.

^ СПИСЪК НА ИЗПОЛЗВАНАТА ЛИТЕРАТУРА

Ширински V.S. "Автоимунни заболявания: патогенеза, диагностика, принципи на лечение", Инструментариумза студенти и лекари, Новосибирск, 1997 г
Серов В.В., Зайратянц О.В. "Автоимунизация и автоимунни заболявания", Архив на патологията, 1992, т.54, стр. 5-11
Апросина З.Г., Серов В.В. „Автоимунен хепатит (история на изследването, съвременни аспекти)", Архив по патология, 1998, том 60, № 3, стр. 71-75.
Покровски В.И., Гордиенко С.П. "Имунология на инфекциозния процес", Ръководство за лекари, М., 1994 г
Протопопов Б.В. "Основни понятия на клиничната имунология", Ръководство за практикуващи лекари, Красноярск, 1995 г.
Виджай Камар, M.A. Яндерски "Изследване на антинуклеарни антитела", АНТИТЕЛА, 1995, 8/CLN, стр. 6, 8
Nakamura R.M., Tan E.M. „Последни постижения в лабораторните тестове и значението на автоантитела към ядрени антигени при системно ревматично заболяване“ Clin. Lab Med., 1986, 6, p. 41 - 53
McCarty G.A., Valencia D.W., Fritzler M.J. "Antnuclear Antibodies: Contemporary Techniques and Clinical Application to Connective Tisue Disease. In: Antinuclear Antibodies. Oxford Univ. Press, N.Y., 1984, p. 1 - 95.
Ензимен имуноанализ: комплекти и оборудване, BioChemMac Group of Companies, 2002.
Клинична имунология и алергология, изд. Практика, М., 2000
Т.С. де Араухо, Р.С. Кирснер "Васкулит", Рани 2001,13(3) стр.99-110.

Бактериални антигени:

Специфично за група (предлага се в различни видове от един и същи род или семейство)

Специфично за вида (при представители на един вид)

Типово специфичен (определяне на серологичен вариант в рамките на един вид)

Специфичен за щама

Стадиоспецифични

Кръстосано реактивни антигени (подобни, еднакви при хора и микроби)

По локализация:

OAS– соматични (LPS на клетъчната стена)

N-Ag- камшичета (протеинов характер)

K-Ag– капсулни (PS, протеини, полипептиди)

Аг Пайли(фимбриален)

Цитоплазмен Ag(мембрана, процесор)

Екзотоксини(протеини)

Ектоензими

H-AGе част от бактериалните флагели, основата му е белтъкът флагелин. Термолабилен.

Кръстосано реактивни антигенни детерминантинамерени в MO и хора/животни. В микробите от различни видове и при хората има общи, подобни по структура, AG. Тези явления се наричат антигенна мимикрия. Често кръстосано реактивните антигени отразяват филогенетичната общност на тези представители, понякога те са резултат от случайно сходство в конформацията и зарядите - AG молекули. Например, Forsman's AG се открива в еритроцитите на овен, салмонела и морски свинчета. Хемолитичните стрептококи от група А съдържат кръстосано реагиращи антигени (по-специално М-протеин), които са общи с антигените на ендокарда и гломерулите на човешките бъбреци. Такива бактериални антигени предизвикват образуването на антитела, които реагират кръстосано с човешки клетки, което води до развитие на ревматизъм и постстрептококов гломерулонефрит. Причинителят на сифилиса има фосфолипиди, подобни по структура на тези, открити в сърцето на животните и хората. Следователно кардиолипиновият антиген на сърцето на животните се използва за откриване на антитела срещу спирохета при болни хора (реакция на Васерман).

54. В-лимфоцити: развитие, маркери, антиген-специфичен В-клетъчен рецептор. Методи за определяне на броя и функционалната активност на В-лимфоцитите.

В-лимфоцитинаречени така, защото те се идентифицират за първи път при птиците в специален централен орган на имунитета, който се нарича "бурсата на Фабрициус" (bursa of Fabricius) и в който преминават етапа на съзряване. При животните този орган отсъства и ранните етапи на узряване на В-лимфоцитите преминават в RMC.

Те имат антиген-специфичен В-клетъчен рецептор (RCR) под формата на мембранно свързани молекули на антитела, както и редица повърхностни CD AG и рецептори. В-лимфоцитите могат да разпознаят нативния АГ в свободно състояние.

Особености:

съставляват 10-15% от кръвните лимфоцити и 20-25% от клетките на лимфните възли.

експресират върху повърхността на IgD(IgM), HLA II, CD19,20,21,22,40,80/86 и др.

Главна функция:

ГМО, производство на антитела с определена специфичност (Ig G, A, M)

представяне на антиген към Т-лимфоцити

развитие:

плурипотентни стволови клетки (CD34 и CD117)

про-В клетки (експресират AG и стволови клетки (CD34 и CD117) и В-лимфоцити - CD19 и CD22)

пре-В клетки (синтезът на IgM започва в цитоплазмата)

незрели В клетки (експресират IgM на повърхността)

2. Унищожават се клетки, носещи рецептори за autoAG.

3. Т-клетъчни зони на периферните лимфоидни органи:

клетките, които не са получили сигнал за оцеляване от Т клетките, се унищожават

4. Лимфни фоликули:

Зрели В клетки (експресират IgM и IgD, както и CD21, CD22 антигени).

5. Преди да се срещне с AH, зрелите В-лимфоцити постоянно циркулират в кръвта между RMC и вторичните лимфоидни органи. След среща с АГ, те се превръщат в плазмени клеткипроизвеждащи АТ (1 милион молекули/час) и клетки на паметта.

Антиген-разпознаващ В-клетъчен рецептор на В-лимфоцитиизграден от мембранна имуноглобулинова молекула (мономерен IgM или IgD) и две молекули CD79 (a и c). BcR има трансмембранни и интрацитоплазмени сегменти, които предават вътреклетъчни сигнали.

Методи за определяне на броя и функционалната активност на В-лимфоцитите.

Човешките В-лимфоцити са в състояние да свързват миши еритроцити и да образуват розетки с тях, както и да образуват розетки с еритроцити, сенсибилизирани молекули на антитела (IgG) и молекули C3b на фрагмента на системата на комплемента, който се използва в лабораторната практика. Тези свойства, заедно с експресията на CD 5 молекули, правят възможно идентифицирането на субпопулация от В-лимфоцити.

Изследване на броя и функционалното състояние на В-лимфоцитите В-клетките се откриват в периферната кръв чрез техния рецепторен апарат, а именно:

а) чрез наличието на рецептори за имуноглобулини и 3-тата фракция на комплемента- EAC розетна реакция; Реакцията на образуване на EAC розетка се провежда на 2 етапа: първи

пригответе реагент, състоящ се от говежди еритроцити, антитела към тях и комплемент, след което този образуван комплекс се добавя към човешки кръвни лимфоцити. Образува се розетка, която външно не се различава от Е-розетките, но методът на получаване показва идентифицирането на В-лимфоцитите.

б) чрез наличието на имуноглобулинови рецептори- реакция на имунофлуоресценция; ви позволява да откриете имуноглобулинови рецептори на повърхността на В-лимфоцита. За това се използват антиглобулинови серуми, маркирани с фосфор.

в) чрез наличието на рецептори за миши еритроцити- реакция на образуване на ME-розетка. Слинговата реакция с миши еритроцити се появява в резултат на смесването на последните с лимфоцити от периферната кръв.

Функционални характеристики на В-лимфоцитите и количеството имуноглобулини от различни класове. Най-често използваните метод на радиална имунодифузия в агар:разтопен агар се излива върху стъклена плака, съдържаща антитела към даден клас имуноглобулини. Ямките се избиват в агар, в който се въвеждат проби от изследваните серуми. В резултат на имунопреципитацията се образуват радиални ивици, чийто диаметър зависи от концентрацията на съответния имуноглобулин. - Определяне на антитела към автоантигени или към микроби от нормалната микрофлора.

Определяне на титъра на специфични антитела, произведени в човешкия организъм след имунизация с ваксини.

55. Хуморален имунен отговор: определение, етапи на развитие. Активиране, пролиферация и диференциация на клетки. елиминиране на антигена. Т-зависим и Т-независим отговор. Прояви на първичен и вторичен хуморален имунен отговор.

Етапи на ГМО:

Представяне на антиген (разпознаване, обработка и представяне на антиген).

Индуктивен етап (предаване на информация към съответния клонинг на В-лимфоцити, тяхната пролиферация и диференциация).

Ефекторен стадий (синтез на антитела и образуване на В-лимфоцити на паметта).

Т-независима активация на В-лимфоцити- директно стимулиране на В-лимфоцити без участието на Т-лимфоцити с Т-независими антигени.

Тези AG са LPS или полизахариди на микроби с линейно повтарящи се структури.

Свързвайки се с HCR, те или активират съответния клонинг на В-лимфоцити (пневмококови полизахариди) или предизвикват поликлонално активиране на В-лимфоцити (LPS на Грам-бактерии), които пролиферират, диференцират се в плазмени клетки, синтезиращи IgM.

В-лимфоцитите на паметта не се образуват.

Т-зависима активация на В-лимфоцити- осъществява се от Т-зависими антигени (протеини, бактерии) със задължително участие на Т-лимфоцити.

APC улавят антигена, обработват го до пептиди с ниско молекулно тегло и в комбинация с молекулата MHC II го представят на наивни Т-лимфоцити (Tx0), които взаимодействат с него с TCR рецептора и CD4 ко-рецептора.

Тх0 се активират, пролиферират и се превръщат в ефекторни клетки - Тх2.

HRC разпознава антигена и клетката го абсорбира. След обработка се образува и клас II МНС пептидно-молекулен комплекс, който В-лимфоцитите представят на Th2 хелперите.

В-Т-клетъчно взаимодействие: Th2 възприемат сигнала с помощта на TCR и CD4 корецептора. Въпреки това, за пълното активиране на Т-хелперите е необходима допълнителна стимулация (костимулация), която се извършва от молекули на междуклетъчно взаимодействие (CD40-CD40L, CD80/86-CD28 и др.). Тези процеси са важни и за активирането на В-лимфоцитите. При липса на костимулация настъпва апоптоза на Т-лимфоцитите.

Активираният Th2 произвежда IL-4, 5, 6, 10, под въздействието на които В-лимфоцитите пролиферират, превръщат се в бласти и след това в плазмени клетки, които синтезират антитела. Именно с участието на Tx2 цитокини е възможно да се превключат имуноглобулиновите гени на В-лимфоцитите, което осигурява синтеза на имуноглобулини. различникласове.

Някои от бластните клетки се превръщат в В-лимфоцити на паметта.Малка популация от клетки, образувана по време на хуморалния имунен отговор от активирани В-лимфоцити. Те оцеляват в състояние на функционален покой дълги години след елиминирането на антигена от тялото. Те носят "памет" за антигена под формата на антиген-специфични HRC (главно IgG).

Първичен имунен отговорсе развива при първото попадане на антигена в тялото след латентен период (2-3 дни). Първо се синтезира IgM (открива се след 2-3 дни), а след това IgG (пик на 10-14 дни, може да остане в нисък титър през целия живот). Успоредно с това има леко повишаване на нивото на IgA, IgE, IgD. Първичният имунен отговор отслабва 2-3 седмици след провокацията с антиген. След него остават клетки на паметта и следи от IgG антитела могат да се поддържат дълго време.

вторичен имунен отговорпоради В-клетките на паметта, стимулирането на синтеза на антитела се случва бързо (след 1-3 дни). Броят на антителата се увеличава рязко и незабавно се синтезират IgG, чиито титри са многократно по-високи, отколкото при първичния имунен отговор. Повишава се техният афинитет (афинитет) към антигена. На лигавиците нивото на секреторните IgA антитела се повишава значително. Нивото на IgM антитела не се променя значително поради отсъствието на В-клетки на паметта с IgM рецептор. Времето на разпадане на вторичния значително надвишава продължителността на запазване на антителата по време на първичния имунен отговор.

Дял: